Способ увеличения численности bacillus subtilis фотостимуляцией
Владельцы патента RU 2763791:
федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный университет" (RU)
Изобретение относится к биотехнологии. Способ увеличения численности Bacillus subtilis предусматривает приготовление питательной среды, содержащей пептон ферментативный, дрожжевой экстракт, натрий хлористый, сульфат аммония, мителеновый синий и дистиллированную воду в заданных количествах, и внесение бактерий Bacillus subtilis и культивирование при температуре 37°С в течение 24 ч под воздействием излучения зеленого цвета 510-550 нм. Изобретение позволяет увеличить численность бактерий Bacillus subtilis. 1 табл.
Уровень техники:
Известно, что воздействие индуцированным красным и инфракрасным излучением подавляет колониеобразующей способности бактерий Propionibacterium acnes в присутствии таких фотосенсибилизаторов, как метиленовый синий и индоцианин зеленый. Установлен дозозависимый эффект действия красного и инфракрасного излучения [1].
Также известно, что при воздействие индуцированным синим излучением уменьшается численность популяции Staphylococcus aureus, Escherichia coti, Candida albicans в присутствии наночастиц. Подавляющий эффект действия синего излучения на бактерии S. aureus не носил дозозависимого характера [2].
В доступной нам литературе сведений о фототстимуляции роста численности бактерий не найдено.
Целью настоящей работы - увеличение арсенала способов повышения численности бактерий Bacillus subtilis в процессе культивирования.
Задача - разработать способ увеличения численности бактерий Bacillus subtilis в процессе культивирования.
В качестве объекта исследования использовали штаммы: Bacillus subtilis В-12079, Bacillus subtilis В-2896, Bacillus subtilis В- 2895, Bacillus subtilis В-4828, Bacillus subtilis B-1323, Bacillus subtilis B-5449.
Сущность технического решения поясняется следующим.
Из спор готовили суспензию: в колбу Эрленмейера объемом 50 мл, содержащую жидкую питательную среду, которую готовят при следующем соотношении компонентов (г/л): пептон ферментативный - 15, дрожжевой экстракт - 5, натрий хлористый - 5, сульфат аммония - 1, метиленовый синий -1, остальное - дистиллированная вода. Значение рН 7,0-7,2. Стерилизация при 1,1 атм. в течение 40 мин.
Затем вносили 5 г сухих спор. Микроорганизмы выращивали в колбах с жидкой средой в шейкер-инкубаторе «Innova 44» при 250 об/мин (эксцентриситет 5 см) и температуре 37°С в течение 24 часов.
На стенки инкубаторы были закреплены светодиоды, красного (624-650 нм), синего (440-465 нм) и зеленого (510-550 нм) цветов. Культивировании происходило при воздействии, красного, синего и зеленого цветов и были использованы комбинации цветов: синий и зеленый, красный и зеленый, красный и синий и комбинация из трех цветов. Стекло инкубатора было закрыто фольгой и не пропускало свет из помещения.
Для выявления численности микроорганизмов использовали стандартный метод десятикратных разведений, с высевом в стерильных условиях в чашки Петри на агаризованную питательную среду, выше указного состава. После чего чашки с посевами инкубировали при температуре 37°С в течение 24 часов.
Для получения контроля проводилось культивирование в колбе, закрытой фольгой, которая исключала попадание световой волны. Все опыты были проведены в семикратной повторности.
Было выявлено, что при культивировании с красным светом и с комбинацией красного и зеленого численность бактерий достоверно не отличалась от контрольной пробы; при культивировании с синим светом, с комбинацией красного и синего и с комбинации трех цветов численность была достоверно ниже, чем в контроле; при воздействии комбинации синим и зеленым светом численности увеличилась не значительно; при воздействии зеленым светом наблюдаем самое высокое увеличилась численности микроорганизмов.
Таким образом, воздействие зеленым света (510-550 нм) в процессе культивирования на жидкой питательной среде способствует увеличению численности бактерий Bacillus subtilis.
Список литературы
1. Е.С. Тучина, В.В. Тучин, Г.Б. Альтшулер, И.В. Ярославский Фотолинамическогое воздействие красного (625 нм) и инфракрасного (805 нм) излучения на бактерии p. ACNES, обработанные фотосенсибилизаторами //' Известия Саратовского университета. 2008. Т. 8. С. 21-26.
2. Е.С. Тучина, Н.М. Абаева, В.В. Тучин Использование наночастиц TIO2 при фотодинамическом воздействии светодиодного синего (405 нм) излучения на микроорганизмы // Известия Саратовского университета. 2010. Т. 10. С. 50-53.
Способ увеличения численности Bacillus subtilis предусматривает приготовление питательной среды, содержащей пептон ферментативный – 15 г/л, дрожжевой экстракт – 5 г/л, натрий хлористый – 5 г/л, сульфат аммония - 1 г/л, метиленовый синий – 1 г/л, дистиллированную воду - остальное, внесение бактерий Bacillus subtilis и культивирование при 37°С в течение 24 ч под воздействием излучения зеленого цвета 510-550 нм.
