Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в



Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
Молекулы нуклеиновых кислот для уменьшения уровня мрнк papd5 или papd7 для лечения инфекционного гепатита в
C12N2310/11 - Микроорганизмы или ферменты; их композиции (биоциды, репелленты или аттрактанты или регуляторы роста растений, содержащие микроорганизмы, вирусы, микробные грибки, ферменты, агенты брожения или вещества, получаемые или экстрагируемые из микроорганизмов или из материала животного происхождения A01N 63/00; пищевые составы A21,A23; лекарственные препараты A61K; химические аспекты или использование материалов для бандажей, перевязочных средств, впитывающих подкладок или хирургических приспособлений A61L; удобрения C05); размножение, консервирование или сохранение микроорганизмов (консервирование живых тканей или органов людей или животных A01N 1/02); мутации или генная инженерия; питательные среды (среды для микробиологических испытаний C12Q)
C12N15/113 - Получение мутаций или генная инженерия; ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка; использование их хозяев (мутанты или микроорганизмы, полученные генной инженерией C12N 1/00,C12N 5/00,C12N 7/00; новые виды растений A01H; разведение растений из тканевых культур A01H 4/00; новые виды животных A01K 67/00; использование лекарственных препаратов, содержащих генетический материал, который включен в клетки живого организма, для лечения генетических заболеваний, для генной терапии A61K 48/00 пептиды вообще C07K)

Владельцы патента RU 2766360:

Ф. ХОФФМАНН-ЛЯ РОШ АГ (CH)

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен антисмысловой олигонуклеотид для ингибирования экспрессии PAPD5 и PAPD7. Также предложены конъюгированное соединение, содержащее указанный антисмысловой олигонуклеотид с присоединенной к нему конъюгатной группировкой, и фармацевтически приемлемые соли антисмыслового олигонуклеотида или конъюгированного соединения. Кроме того, изобретение относится к фармацевтической композиции, обладающей ингибиторной активностью в отношении PAPD5 и PAPD7, к применению антисмыслового олигонуклеотида и включающих его соединений в лечении и/или предупреждении инфекции HBV, в частности хронической инфекции HBV. Способность ингибировать экспрессию как PAPD5, так и PAPD7 одной молекулой антисмыслового олигонуклеотида обеспечивает преимущества в показателях продукции, простоты доставки в клетки-мишени, простоты фармакокинетики/фармакодинамики (PK/PD) и необходимой концентрации для достижения терапевтической пользы. 13 н. и 14 з.п. ф-лы, 18 ил., 43 табл., 18 пр.

 

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к молекулам нуклеиновых кислот, которые являются комплементарными как РАР-ассоциированному доменсодержащему 5 (PAPD5), так и РАР-ассоциированному доменсодержащему 7 (PAPD7), приводя к ингибированию экспрессии и PAPD5, и PAPD7, при использовании одного нуклеотида. Согласно данному изобретению также молекулы нуклеиновых кислот, специфичные в отношении PAPD5 или PAPD7, для применения в лечении и/или предупреждении инфекции HBV (вирус гепатита В), в частности, хронической инфекции HBV. Также настоящее изобретение включает фармацевтическую композицию для применения в лечении и/или предупреждении инфекции HBV.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Инфекция HBV остается большой проблемой для здоровья по всему миру, которая оценочно касается 350 миллионов хронических носителей. Приблизительно 25% носителей умирают от хронического гепатита, цирроза или рака печени. Вирус гепатита В является вторым самым значительным канцерогеном после табака, вызывая от 60% до 80% всех первичных раковых заболеваний печени. HBV является в 100 раз более заразным, чем ВИЧ (вирус иммунодефицита человека).

Вирус гепатита В (HBV) представляет собой оболочечный, частично двухцепочечный ДНК-вирус. Компактный геном HBV из 3,2 т.п.н. состоит из четырех перекрывающихся открытых рамок считывания (ORF), которые кодируют коровые, полимеразные (Pol), оболочечные и Х-белки. ORF Pol является самой длинной, a ORF оболочки располагается внутри нее, тогда как ORF X и кора перекрываются с ORF Pol. Жизненный цикл HBV имеет два главных события: 1) образование замкнутой кольцевой ДНК (зкДНК) из релаксированной кольцевой (РК ДНК) и 2) обратная транскрипция предгеномной РНК (пгРНК) с образованием РК ДНК. До инфекции клеток-хозяев геном HBV существует в пределах вириона в виде РК ДНК. Определили то, что вирионы HBV способны получать доступ в клетки-хозяева посредством неспецифичного связывания с отрицательно заряженными протеогликанами, присутствующими на поверхности человеческих гепатоцитов (Schulze, Hepatology, 46, (2007), 1759-68), и посредством специфичного связывания антигенов поверхности HBV (HBsAg) с гепатоцитарным рецептором на основе натрий-таурохолатного котранспортирующего полипептида (NTCP) (Yan, J Virol, 87, (2013), 7977-91). Все вирусные мРНК HBV являются кэппированными и полиаденилированными, и затем экспортируются в цитоплазму для трансляции. В цитоплазме инициируется сборка новых вирионов, и растущая пгРНК упаковывается с вирусной Pol таким образом, что может начинаться обратная транскрипция пгРНК до РК ДНК посредством одноцепочечного промежуточного продукта в виде ДНК.

Секреция противовирусных цитокинов в ответ на инфекцию HBV гепатоцитами и/или внутрипеченочными иммунными клетками играет центральную роль в клиренсе вируса инфицированной печенью. Однако хронически инфицированные пациенты демонстрируют только слабый иммунный ответ из-за разных стратегий избегания, принятых вирусом для противодействия системам распознавания клетки-хозяина и последующим противовирусным ответам.

Многие наблюдения показали то, что несколько вирусных белков HBV могли противодействовать исходному клеточному ответу хозяина, препятствуя системе сигнализации распознавания вируса и затем противовирусной активности интерферона (IFN). Полагают то, что среди них избыточная секреция пустых субвирусных частиц HBV (SVP, HBsAg) участвует в поддержании иммунотолерантного состояния, наблюдаемого у хронически инфицированных пациентов (СНВ). Стойкое воздействие HBsAg и других вирусных антигенов может приводить к HBV-специфичному устранению Т-клеток или к прогрессирующему функциональному ухудшению (Kondo, Journal of Immunology (1993), 150, 4659-4671; Kondo, Journal of Medical Virology (2004), 74, 425-433; Fisicaro, Gastroenterology, (2010), 138, 682-93). Кроме того, сообщали о том, что HBsAg подавляет функцию иммунных клеток, таких как моноциты, дендритные клетки (DC) и клетки-природные киллеры (NK) посредством прямого взаимодействия (Op den Brouw, Immunology, (2009b), 126, 280-9; Woltman, PLoS One, (2011), 6, e15324; Shi, J Viral Hepat. (2012), 19, e26-33; Kondo, ISRN Gasteroenterology, (2013), Article ID 935295).

Количественное измерение HBsAg является значимым биомаркером прогнозирования и ответа на лечение при хроническом гепатите В. Однако достижение потери HBsAg и сероковерсии редко наблюдается у хронически инфицированных пациентов, но остается одной из конечных целей терапии. Современной терапией, такой как нуклеоз(т)идные аналоги, являются молекулы, которые ингибируют синтез ДНК HBV, но не направлены на уменьшение уровня HBsAg. Нуклеоз(т)идные аналоги, даже при длительной терапии, демонстрируют лишь слабый клиренс HBsAg, сравнимый с клиренсом, наблюдаемым в природе (от 1% до 2%) (Janssen, Lancet, (2005), 365, 123-9; Marcellin, N. Engl. J. Med., (2004), 351, 1206-17; Buster, Hepatology, (2007), 46, 388-94). Недавно было показано то, что частично или полностью интегрированная ДНК вируса гепатита В является источником экспрессии HBsAg у хронически инфицированных индивидов (см. Wooddell et all 2017 Sci. Transl. Med. Vol 9, Issue 409, eaan0241).

е-Антиген вируса гепатита В (также именуемый антиген оболочки HBV или HBeAg) представляет собой вирусный белок, который секретируется клетками, инфицированными гепатитом В. HBeAg ассоциирован с хроническими инфекциями гепатитом В и используется в качестве маркера активного вирусного заболевания и степени зараженности пациента.

Функция предкора вируса гепатита В или HBeAg не полностью известна. Однако хорошо известно то, что HBeAg играет ключевую роль в стойкости вируса. Полагают то, что HBeAg стимулирует хроничность HBV посредством функционирования в качестве иммунорегулирующего белка. В частности, HBeAg представляет собой секретируемый вспомогательный белок, который, по-видимому, ослабляет иммунный ответ хозяина на внутриклеточный белок нуклеокапсида (Walsh, Virology, 2011, 411 (1): 132-141). HBeAg действует в качестве иммунотолеогена, способствующего стойкости HBV, и возможно функционирует во время внутриутробного развития, принимая во внимание то, что растворимый HBeAg проходит через плаценту (Walsh, Virology, 2011, 411 (1): 132-141). Кроме того, HBeAg осуществляет понижающую регуляцию: i) клеточных генов, контролирующих внутриклеточную сигнализацию; и ii) Toll-подобного рецептора 2 (TLR-2) для глушения врожденного иммунного ответа на вирусную инфекцию (Walsh, Virology, 2011, 411 (1): 132-141). В отсутствие HBeAg репликация HBV ассоциирована с повышающей регуляцией пути TLR2 (Walsh, Virology, 2011, 411 (1): 132-141). Соответственно, HBeAg имеет значительную роль в модулировании взаимодействий вирус/хозяин для влияния на иммунный ответ хозяина (Walsh, Virology, 2011, 411 (1): 132-141). Таким образом, уменьшение HBeAg в HBeAg-позитивной популяции пациентов может приводить к обращению HBV-специфичной иммунодисфункции (Milich, 1997, J. Viral. Hep.4: 48-59; Milich, 1998, J. Immunol. 160: 2013-2021). Кроме того, секретируемый HBeAg является значительно более эффективным, чем внутриклеточный коровый антиген гепатита (HBcAg) в вызове толерантности Т-клеток, и разделение толерантности Т-клеток между HBeAg и HBcAg, и клональная гетерогенность НВс/HBeAg-специфичной толерантности Т-клеток могут иметь значительные последствия для природной инфекции HBV и особенно для предкор-негативного хронического гепатита (Chen, 2005, Journal of Virology, 79: 3016-3027).

Соответственно, уменьшение секреции HBeAg, помимо секреции HBsAg, приводило бы к улучшенному ингибированию развития хронической инфекции HBV по сравнению с ингибированием секреции одного HBsAg. Кроме того, наивысшие показатели перехода острой инфекции в хроническую (больше 80%) были описаны в случаях передачи от матери к плоду и неонатальной передачи HBV от HBeAg-позитивных матерей (Liaw, Lancet, 2009, 373: 582-592; Liaw, Dig. Dis. Sci., 2010, 55: 2727-2734 и Hadziyannis, 2011, Journal of hepatology, 55: 183-191). Следовательно, уменьшение уровня HBeAg у будущей матери может не только уменьшать степень зараженности пациента, но также может ингибировать развитие хронической инфекции HBV ее ребенка.

Следовательно, при терапии HBV имеется неудовлетворенная медицинская потребность в ингибировании вирусной экспрессии, в частности, в ингибировании секреции HBsAg и HBeAg (Wieland, S. F. & F. V. Chisari. J Virol, (2005), 79, 9369-80; Kumar et al. J Virol, (2011), 85, 987-95; Woltman et al. PLoS One, (2011), 6, e15324; Op den Brouw et al. Immunology, (2009b), 126, 280-9).

В WO 2017/066712 была описана понижающая регуляция PAPD5 в связи с лечением и диагностикой заболеваний теломеров. С этой целью были описаны пять структур кшРНК (короткая шпилечная РНК).

В РСТ/ЕР2017/064980 раскрыто нацеливание на PAPD5 или PAPD7 молекулы нуклеиновой кислоты и комбинации таких молекул для лечения инфекций HBV.

ЦЕЛЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящем изобретении идентифицированы новые молекулы нуклеиновой кислоты, которые способны ингибировать экспрессию и PAPD5, и PAPD7 in vivo и in vitro. Способность ингибировать две нуклеиновые кислоты-мишени одной молекулой имеет отчетливые преимущества в показателях продукции, простоты доставки в клетки-мишени, простоты фармакокинетики/фармакодинамики (PK/PD) и необходимой концентрации для достижения терапевтической пользы. Кроме того, в настоящем изобретении показано то, что имеется корреляция между нокдауном PAPD5 и PAPD7 и ингибированием антигена HBV, таким как ингибирование HBsAg.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

Данные графические материалы показывают:

Фиг. 1: иллюстрирует типичные конъюгаты антисмысловых олигонуклеотидов, где олигонуклеотид либо представлен волнистой линией (А-Г), либо как «олигонуклеотид» (Д-3), либо как Т2 (И), и конъюгатные группировки, нацеленные на рецептор асиалогликопротеина, представляют собой группировки трехвалентного N-ацетилгалактозамина. Соединения A-D содержат дилизиновую разветвляющую молекулу, спейсер в виде PEG3 и три концевые GalNAc углеводные группировки. В соединении А и В олигонуклеотид непосредственно присоединяется к конъюгатной группировке, нацеленной на рецептор асиалогликопротеина, без линкера. В соединении С и D олигонуклеотид присоединяется к конъюгатной группировке, нацеленной на рецептор асиалогликопротеина, через С6 линкер. Соединения Е-I содержат имеющуюся в продаже разветвляющую молекулу-утроитель, спейсеры варьирующей длины и структуры, и три концевые GalNAc углеводные группировки.

Фиг. 2: структурная формула трехвалентного GalNAc кластера (GN2). GN2 является полезным в настоящем изобретении в качестве конъюгатной группировки. Волнистая линия иллюстрирует место конъюгирования кластера, например, к С6 аминолинкеру или непосредственно к олигонуклеотиду.

Фиг. 3: показывает корреляцию между нокдауном PAPD5 и PAPD7 в клетках HeLa из примера 1 со снижением уровня HBsAg в клетках dHepRG из примера 2.

Фиг. 4: структурная формула CMP ID NO: 20_12. Его фармацевтические соли включают одновалентные или двухвалентные катионы, такие как Na+, K+ и Са2+, или их смесь, ассоциированные с данным соединением.

Фиг. 5: структурная формула CMP ID NO: 20_13. Его фармацевтические соли включают одновалентные или двухвалентные катионы, такие как Na+, K+ и Са2+, или их смесь, ассоциированные с данным соединением.

Фиг. 6: структурная формула CMP ID NO: 20_14. Его фармацевтические соли включают одновалентные или двухвалентные катионы, такие как Na+, K+ и Са2+, или их смесь, ассоциированные с данным соединением.

Фиг.7: структурная формула CMP ID NO: 20_15. Его фармацевтические соли включают одновалентные или двухвалентные катионы, такие как Na+, K+ и Са2+, или их смесь, ассоциированные с данным соединением.

Фиг. 8: структурная формула CMP ID NO: 20_18. Его фармацевтические соли включают одновалентные или двухвалентные катионы, такие как Na+, K+ и Са2+, или их смесь, ассоциированные с данным соединением.

Фиг. 9: структурная формула CMP ID NO: 20_36. Его фармацевтические соли включают одновалентные или двухвалентные катионы, такие как Na+, K+ и Са2+, или их смесь, ассоциированные с данным соединением.

Фиг. 10: структурная формула CMP ID NO: 20_30. Его фармацевтические соли включают одновалентные или двухвалентные катионы, такие как Na+, K+ и Са2+, или их смесь, ассоциированные с данным соединением.

Фиг. 11: представление уменьшения уровня PAPD5 и PAPD7 in vitro, достигаемого с олигонуклеотидами, нацеленными на человеческие и мышиные транскрипты (таблица 5) в линии человеческих клеток HeLa (А) и в первичных мышиных гепатоцитах (РМН, Б).

Фиг. 12: структурная формула CMP ID NO: 20_20. Его фармацевтические соли включают одновалентные или двухвалентные катионы, такие как Na+, K+ и Са2+, или их смесь, ассоциированные с данным соединением.

Фиг. 13: структурная формула CMP ID NO: 20_21. Его фармацевтические соли включают одновалентные или двухвалентные катионы, такие как Na+, K+ и Са2+, или их смесь, ассоциированные с данным соединением.

Фиг. 14: структурная формула CMP ID NO: 21_2. Его фармацевтические соли включают одновалентные или двухвалентные катионы, такие как Na+, K+ и Са2+, или их смесь, ассоциированные с данным соединением.

Фиг. 15: структурная формула CMP ID NO: 20_22. Его фармацевтические соли включают одновалентные или двухвалентные катионы, такие как Na+, K+ и Са2+, или их смесь, ассоциированные с данным соединением.

Фиг. 16: структурная формула CMP ID NO: 21_33. Его фармацевтические соли включают одновалентные или двухвалентные катионы, такие как Na+, K+ и Са2+, или их смесь, ассоциированные с данным соединением.

Фиг. 17: структурная формула CMP ID NO: 21_34. Его фармацевтические соли включают одновалентные или двухвалентные катионы, такие как Na+, K+ и Са2+, или их смесь, ассоциированные с данным соединением.

Фиг. 18: влияние HBsAg и HBeAg с течением времени in vivo в мышиной модели AAV/HBV после одной обработки 10 мг/кг двух олигонуклеотидов: олигонуклеотида, нацеленного на PAPD5, и олигонуклеотида, нацеленного на PAPD7.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Определения

Молекула нуклеиновой кислоты

Термин «молекула нуклеиновой кислоты» или «терапевтическая молекула нуклеиновой кислоты» в том виде, в котором он используется в данном документе, определяется, как его обычно понимает специалист: как молекула, содержащая два или более чем два ковалентно связанных нуклеозида (т.е. нуклеотидная последовательность). Молекула(лы) нуклеиновой кислоты, на которые дается ссылка в способе по изобретению, обычно представляют собой терапевтические олигонуклеотиды меньше 50 нуклеотидов в длину. Молекулы нуклеиновой кислоты могут представлять собой или содержат антисмысловой олигонуклеотид или могут представлять собой другую олигомерную молекулу нуклеиновой кислоты, такую как РНК CRISPR (кластерные короткие палиндромные повторы, разделенные регулярными промежутками), миРНК, кшРНК, аптамер или рибозим. Молекулы нуклеиновой кислоты представляют собой композиции, которые обычно получают в лаборатории посредством твердофазного химического синтеза, с последующей очисткой. При ссылке на последовательность молекулы нуклеиновой кислоты, делается ссылка на последовательность или порядок группировок нуклеиновых оснований или их модификаций ковалентно связанных нуклеотидов или нуклеозидов. Молекула нуклеиновой кислоты по изобретению является искусственной, синтезируется химически и типично очищается или выделяется. Молекула нуклеиновой кислоты по изобретению может содержать один или более чем один модифицированный нуклеозид или нуклеотид.

В некоторых воплощениях молекула нуклеиновой кислоты по изобретению содержит или состоит из 12-50 нуклеотидов в длину, как, например, из 13-40, как, например, из 14-35, как, например, из 15-30, как, например, из 16-22, как, например, из 16-18 или 15-17 смежных нуклеотидов в длину.

В некоторых воплощениях молекула нуклеиновой кислоты или ее непрерывная нуклеотидная последовательность содержит или состоит из 22 или менее нуклеотидов, как, например, 20 или менее нуклеотидов, как, например, 18 или менее нуклеотидов, как, например, 14, 15, 16 или 17 нуклеотидов. Следует понимать то, что любой интервал, приведенный в данном документе, включает конечные точки интервала. Соответственно, если указано то, что молекула нуклеиновой кислоты включает от 10 до 30 нуклеотидов, включаются и 10, и 30 нуклеотидов.

В некоторых воплощениях непрерывная нуклеотидная последовательность содержит или состоит из 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 непрерывных нуклеотидов в длину.

Молекула(лы) нуклеиновой кислоты служит(жат) для модулирования экспрессии нуклеиновых кислот-мишеней у млекопитающего. В некоторых воплощениях молекулы нуклеиновых кислот, такие как миРНК, кшРНК и антисмысловые олигонуклеотиды, типично служат для ингибирования экспрессии нуклеиновой(вых) кислоты(лот)-мишени(ней).

В одном воплощении изобретения молекула нуклеиновой кислоты выбрана из агента РНКи (РНК-интерференция), такого как миРНК или кшРНК. В другом воплощении молекула нуклеиновой кислоты представляет собой одноцепочечный антисмысловой олигонуклеотид, такой как высокоаффинный модифицированный антисмысловой олигонуклеотид.

В некоторых воплощениях молекула нуклеиновой кислоты представляет собой молекулу фосфоротиоатной нуклеиновой кислоты. В некоторых воплощениях молекула нуклеиновой кислоты содержит фосфоротиоатные межнуклеозидные связи.

В некоторых воплощениях молекула нуклеиновой кислоты может быть конъюгирована с ненуклеозидными группировками (конъюгатными группировками).

Библиотеку молекул нуклеиновой кислоты следует понимать как набор вариантов молекул нуклеиновой кислоты. Цель библиотеки молекул нуклеиновой кислоты может варьировать. В некоторых воплощениях библиотека молекул нуклеиновой кислоты состоит из олигонуклеотидов с перекрывающейся последовательностью нуклеиновых оснований, нацеленных на общую область между нуклеиновыми кислотами-мишенями PAPD5 и PAPD7, с целью идентификации самой эффективной последовательности в пределах данной библиотеки молекул нуклеиновой кислоты. В некоторых воплощениях библиотека молекул нуклеиновой кислоты представляет собой библиотеку сконструированных вариантов молекулы нуклеиновой кислоты («потомство» молекул нуклеиновой кислоты) родительской или предковой молекулы нуклеиновой кислоты, где сконструированные варианты молекулы нуклеиновой кислоты сохраняют коровую последовательность нуклеиновых оснований родительской молекулы нуклеиновой кислоты.

Олигонуклеотид

Термин «олигонуклеотид» в том виде, в котором он используется в данном документе, определяется таким образом, как обычно понятно специалисту, как молекула, содержащая два или более чем два ковалентно связанных нуклеозида. Такие ковалентно связанные нуклеозиды также могут называться молекулами нуклеиновой кислоты или олигомерами. Олигонуклеотиды обычно получают в лаборатории посредством твердофазного химического синтеза с последующей очисткой. При ссылке на последовательность олигонуклеотида, делается ссылка на последовательность или порядок группировок нуклеиновых оснований или их модификаций ковалентно связанных нуклеотидов или нуклеозидов. Олигонуклеотид по изобретению является искусственным, синтезируется химически и типично очищается или выделяется. Олигонуклеотид по изобретению может содержать один или более чем один модифицированный нуклеозид или нуклеотид.

Антисмысловые олигонуклеотиды

Термин «антисмысловой олигонуклеотид» в том виде, в котором он используется в данном документе, определяется как олигонуклеотид, способный модулировать экспрессию гена-мишени посредством гибридизации с нуклеиновой кислотой-мишенью, в частности с непрерывной последовательностью на нуклеиновой кислоте-мишени. Антисмысловые олигонуклеотиды по существу не являются двухцепочечными и, следовательно, не являются миРНК или кшРНК. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению являются одноцепочечными. Термин «одноцепочечный» в общем понятен специалисту в данной области. Особенно понятно то, что одноцепочечные олигонуклеотиды по настоящему изобретению могут образовать шпильки или структуры внутримолекулярных дуплексов (дуплекс между двумя молекулами того же самого олигонуклеотида), при условии, что степень внутренней комплементарности или комплементарности самому себе составляет меньше, чем 50% по всей длине олигонуклеотида.

В одном воплощении данного изобретения антисмысловой олигонуклеотид представляет собой олигонуклеотид, рекрутирующий РНКазу Н. В отличие от молекул РНКи, антисмысловые олигонуклеотиды также действуют в ядре клетки. Для нацеливания последовательности пре-мРНК и антисмысловой олигонуклеотид являются предпочтительными, так как он действует в ядре клетки.

РНКи

В данном документе термин «молекула РНК-интерференции (РНКи)» относится к молекуле короткой двухцепочечной РНК, способной индуцировать РНК-зависимый сайленсинг гена посредством комплекса РНК-индуцированного сайленсинга (RISC) в цитоплазме клетки, где они взаимодействуют с каталитическим компонентом RISC - аргонавтом. Одним типом молекулы РНКи является малая интерферирующая РНК (миРНК), которая представляет собой двухцепочечную молекулу РНК, которая посредством комплементарного связывания с мРНК после транскрипции, приводит к их деградации и потере трансляции. Малая шпилечная РНК (мшРНК) представляет собой искусственную молекулу РНК со структурой шпильки, которая способна при экспрессии уменьшать уровень мРНК посредством дайсер (DICER) и комплекса сайленсинга, уменьшающего уровень мРНК (RISC). Молекулы РНКи могут быть сконструированы на основе последовательности РНК интересующего гена. Соответствующие РНКи могут быть затем синтезированы химически или посредством транскрипции in vitro, или экспрессированы от вектора или ПЦР-продукта.

Молекулы миРНК и кшРНК обычно имеют от 20 до 50 нуклеотидов в длину, как, например, от 25 до 35 нуклеотидов в длину, и они взаимодействуют с эндонуклеазой, известной как дайсер (Dicer), которая, как считается, подвергает процессингу дцРНК до малых интерферирующих РНК из 19-23 пар оснований с характерными 3' липкими концами из двух оснований, которые затем включаются в комплекс РНК-индуцированного сайленсинга (RISC). Эффективные удлиненные формы субстратов дайсер были описаны в US 8349809 и US 8513207, тем самым включенных посредством ссылки. При связывании с подходящей мРНК-мишенью одна или более чем одна эндонуклеаза в пределах RISC расщепляет мишень с индукцией сайленсинга. Агенты РНКи могут быть химически модифицированными с использованием модифицированных межнуклеозидных связей и высокоаффинных нуклеозидов, таких как нуклеозиды, модифицированные 2'-4' бициклической рибозой, включающие LNA и сЕТ.

Непрерывная нуклеотидная последовательность

Термин «непрерывная нуклеотидная последовательность» относится к области олигонуклеотида, которая является комплементарной нуклеиновой кислоте-мишени. Данный термин используется в данном документе взаимозаменяемо с термином «непрерывная последовательность нуклеиновых оснований» и термином «последовательность олигонуклеотидного мотива». В некоторых воплощениях все нуклеотиды данного олигонуклеотид а составляют непрерывную нуклеотидную последовательность. В некоторых воплощениях олигонуклеотид содержит непрерывную нуклеотидную последовательность и, возможно, может содержать дополнительный(ные) нуклеотид(ды), например, область нуклеотидного линкера, которая может использоваться для присоединения функциональной группы к непрерывной нуклеотидной последовательности. Область нуклеотидного линкера может быть или может не быть комплементарной нуклеиновой кислоте-мишени.

Нуклеотиды

Нуклеотиды представляют собой структурные элементы олигонуклеотидов и полинуклеотидов и для целей настоящего изобретения включают и встречающиеся в природе, и не встречающиеся в природе нуклеотиды. В природе нуклеотиды, такие как нуклеотиды ДНК и РНК, содержат группировку сахара рибозы, группировку нуклеинового основания и одну или более чем одну фосфатную группу (которая отсутствует в нуклеозидах). Нуклеозиды и нуклеотиды также могут взаимозаменяемо называться «звеньями» или «мономерами».

Модифицированный нуклеозид

Термин «модифицированный нуклеозид» или «модификация нуклеозида» в том виде, в котором он используется в данном документе, относится к нуклеозидам, модифицированным по сравнению с эквивалентным нуклеозидом ДНК или РНК посредством введения одной или более чем одной модификации сахарной группировки или группировки (нуклеинового) основания. В предпочтительном воплощении модифицированный нуклеозид содержит модифицированную сахарную группировку. Термин «модифицированный нуклеозид» также может использоваться в данном документе взаимозаменяемо с термином «аналог нуклеозида» или модифицированные «звенья», или модифицированные «мономеры». Нуклеозиды с немодифицированной сахарной группировкой ДНК или РНК называются в данном документе нуклеозидами ДНК или РНК. Нуклеозиды с модификациями в области основания нуклеозида ДНК или РНК все еще, в общем, называются ДНК или РНК, если они обеспечивают образование пар оснований по Уотсону-Крику.

Модифицированная межнуклеозидная связь

Термин «модифицированная межнуклеозидная связь» определяется так, как обычно понятно специалисту: как связи, отличные от фосфодиэфирных (РО) связей, которые ковалентно связывают вместе два нуклеозида. Нуклеотиды с модифицированными межнуклеозидными связями также называются «модифицированными нуклеотидами». В некоторых воплощениях модифицированная межнуклеозидная связь увеличивает устойчивость молекул нуклеиновых кислот по изобретению к нуклеазе по сравнению с фосфодиэфирной связью. Для олигонуклеотидов, встречающихся в природе, межнуклеозидная связь включает фосфатные группы, создающие фосфодиэфирную связь между соседними нуклеозидами. Модифицированные межнуклеозидные связи являются особенно полезными в стабилизации олигонуклеотидов, а также миРНК для применения in vivo, и они могут служить для защиты против нуклеазного расщепления в областях нуклеозидов ДНК или РНК в олигонуклеотиде или миРНК по изобретению, например, в пределах области гэпа гэпмерного олигонуклеотида, а также в областях модифицированных нуклеозидов.

В одном воплощении молекула нуклеиновой кислоты, например, антисмысловой олигонуклеотид, кшРНК или миРНК, содержит одну или более чем одну межнуклеозидную связь, модифицированную от природного фосфодиэфира до связи, которая, например, является более устойчивой к нуклеазной атаке. Устойчивость к нуклеазе можно определять посредством инкубирования олигонуклеотида в сыворотке крови или посредством применения анализа устойчивости к нуклеазе (например, фосфодиэстеразе яда змеи (SVPD)), которые оба хорошо известны в данной области. Межнуклеозидные связи, которые способны усиливать устойчивость олигонуклеотида к нуклеазе, называются нуклеазоустойчивыми межнуклеозидными связями. В некоторых воплощениях по меньшей мере 50% межнуклеозидных связей в антисмысловом олигонуклеотиде или в его непрерывной нуклеотидной последовательности являются модифицированными как, например, по меньшей мере 60%, как, например, по меньшей мере 70%, как, например, по меньшей мере 80% или как, например, по меньшей мере 90% межнуклеозидных связей в олигонуклеотиде или в его непрерывной нуклеотидной последовательности являются модифицированными. В некоторых воплощениях все межнуклеозидные связи олигонуклеотида или его непрерывной нуклеотидной последовательности являются модифицированными. Будет понятно то, что в некоторых воплощениях нуклеозиды, которые связывают олигонуклеотид по изобретению с ненуклеотидной функциональной группой, такой как конъюгат, могут содержать фосфодиэфир. В некоторых воплощениях все межнуклеозидные связи олигонуклеотида или его непрерывной нуклеотидной последовательности являются нуклеазоустойчивыми межнуклеозидными связями.

Модифицированные межнуклеозидные связи могут быть выбраны из группы, содержащей фосфоротиоат, дифосфоротиоат и боранофосфат. В некоторых воплощениях модифицированные межнуклеозидные связи, например, фосфоротиоатная, дифосфоротиоатная или боранофосфатная, являются совместимыми с рекрутированием олигонуклеотида по изобретению РНКазой Н.

В некоторых воплощениях межнуклеозидная связь, такая как фосфоротиоатная межнуклеозидная связь, содержит серу (S).

Фосфоротиоатная межнуклеозидная связь является особенно полезной из-за устойчивости к нуклеазе, полезной фармакокинетики и легкости получения. В некоторых воплощениях по меньшей мере 50% межнуклеозидных связей в олигонуклеотиде или его непрерывной нуклеотидной последовательности представляют собой фосфоротиоат, как, например, по меньшей мере 60%, как, например, по меньшей мере 70%, как, например, по меньшей мере 80% или как, например, по меньшей мере 90% межнуклеозидных связей в олигонуклеотиде или его непрерывной нуклеотидной последовательности представляют собой фосфоротиоат. В некоторых воплощениях все межнуклеозидные связи олигонуклеотида или его непрерывной нуклеотидной последовательности представляют собой фосфоротиоат. В некоторых воплощениях по меньшей мере одна из фосфоротиоатных межнуклеозидных связей является стереоопределенной, как, например, по меньшей мере 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, как, например, по меньшей мере 70%, как, например, по меньшей мере 75%, как, например, по меньшей мере 80% или как, например, по меньшей мере 90% межнуклеозидных связей олигонуклеотида являются стереоопределенными. Синтез стереоопределенных фосфоротиоатных связей описывается, например, в WO 2014/012081 и WO 2016/079181.

В некоторых воплощениях олигонуклеотид содержит одну или более чем одну нейтральную межнуклеозидную связь, в частности, межнуклеозидную связь, выбранную из фосфотриэфира, метилфосфоната, MMI, амида-3, формацеталя или тиоформацеталя.

Дополнительные межнуклеозидные связи раскрываются в WO 2009/124238 (включенной в данный документ посредством ссылки). В одном воплощении межнуклеозидная связь выбрана из линкеров, раскрытых в WO 2007/031091 (включенной в данный документ посредством ссылки). В частности, межнуклеозидная связь может быть выбрана из -O-Р(O)2-O-, -O-P(O,S)-O-, -O-P(S)2-О-, -S-P(O)2-O-, -S-P(O,S)-O-, -S-P(S)2-O-, -O-P(O)2-S-, -O-P(O,S)-S-, -S-P(O)2-S-, -O-PO(RH)-O-, 0-PO(OCH3)-0-, -O-PO(NRH)-O-, -O-PO(OCH2CH2S-R)-O-, -O-PO(BH3)-O-, -O-PO(NHRH)-O-, -O-P(O)2-NRH-, -NRH-P(O)2-O-, -NRH-CO-O-, -NRH-CO-NRH-, и/или межнуклеозидный линкер может быть выбран из группы, состоящей: -О-СО-О-, -О-CO-NRH-, -NRH-CO-CH2-, -O-CH2-CO-NRH-, -O-CH2-CH2-NRH-, -CO-NRH-CH2-, -CH2-NRHCO-, -O-CH2-CH2-S-, -S-CH2-CH2-O-, -S-CH2-CH2-S-, -CH2-SO2-CH2-, -CH2-CO-NRH-, -O-CH2-CH2-NRH-CO -, -CH2-NCH3-O-CH2-, где RH выбран из водорода и С1-4-алкила.

Нуклеазоустойчивые связи, такие как фосфотиоатные связи, являются особенно полезными в областях антисмысловых олигонуклеотидов, способных рекрутировать нуклеазу, при формировании дуплекса с нуклеиновой кислотой-мишенью, таких как область G для гэпмеров или область немодифицированных нуклеозидов хэдмеров (headmer) и тэйлмеров (tailmer). Однако, фосфоротиоатные связи также могут быть полезными в областях, не рекрутирующих нуклеазу, и/или в областях, усиливающих аффинность, таких как области F и F' для гэпмеров, или в области модифицированных нуклеозидов хэдмеров и тэйлмеров.

Каждая из сконструированных областей может, однако, содержать межнуклеозидные связи, отличные от фосфоротиоатных, такие как фосфодиэфирные связи, в частности, в областях, где модифицированные нуклеозиды, такие как LNA, защищают связь от нуклеазной деградации. Включение фосфодиэфирных связей, как, например, одной или двух связей, в частности между или рядом с модифицированными нуклеозидными звеньями (типично в областях, не рекрутирующих нуклеазу), может модифицировать биодоступность и/или биораспределение олигонуклеотида - см. WO 2008/113832, включенную в данный документ посредством ссылки.

В одном воплощении все межнуклеозидные связи в антисмысловом олигонуклеотиде представляют собой фосфоротиоатные и/или боранофосфатные связи. Предпочтительно все межнуклеозидные связи в олигонуклеотиде представляют собой фосфоротиоатные связи.

Стереослучайные фосфоротиоатные связи

Фосфоротиоатные связи представляют собой межнуклеозидные фосфатные связи, где один из не образующих мостик кислородов был заменен серой. Замена одного из не образующих мостик кислорода серой вводит хиральный центр, и, в силу этого, каждая фосфоротиоатная межнуклеозидная связь в пределах одного фосфоротиоатного олигонуклеотида будет находиться либо в S (Sp), либо в R (Rp) стереоизоформах. Такие межнуклеозидные связи называются «хиральными межнуклеозидными связями». В отличие от этого, фосфодиэфирные межнуклеозидные связи не являются хиральными, так как они имеют два неконцевых атома кислорода.

Обозначение хиральности стереоцентра определяется по стандартным правилам Кана-Ингольда-Прелога (правила приоритета CIP), впервые опубликованным в Cahn, R.S.; Ingold, С.K.; Prelog, V. (1966). "Specification of Molecular Chirality". Angewandte Chemie International Edition. 5 (4): 385-415. doi:10.1002/anie.196603851.

Во время стандартного синтеза олигонуклеотида стереоселективность связывания и следующее сульфирование не контролируются. По этой причине стереохимия каждой фосфоротиоатной межнуклеозидной связи является случайным образом Sp или Rp, и, в силу этого, фосфоротиоатный олигонуклеотид, полученный традиционным олигонуклеотидным синтезом, фактически может существовать в без малого 2X разных фосфоротиоатных диастереомерах, где X представляет собой число фосфоротиоатных межнуклеозидных связей. Такие олигонуклеотиды называются в данном документе стереослучайными фосфоротиоатными олигонуклеотидами и не содержат стереоопределенных межнуклеозидных связей. Стереослучайные фосфоротиоатные олигонуклеотиды, следовательно, представляют собой смеси индивидуальных диастереоизомеров, возникающих из-за нестереоопределенного синтеза. В этом контексте данная смесь определяется как вплоть до 2X разных фосфоротиоатных олигонуклеотидов.

Стереоопределенные межнуклеозидные связи

Стереоопределенная межнуклеозидная связь представляет собой межнуклеозидную связь, которая вводит хиральный центр в олигонуклеотид, который существует преимущественно в одной стереоизомерной форме - либо R, либо S в пределах популяции индивидуальных олигонуклеотидных молекул.

Следует понимать то, что способы стереоселективного синтеза олигонуклеотидов, используемые в данной области, типично дают по меньшей мере примерно 90% или по меньшей мере примерно 95% стереоселективности в каждом стереоцентре межнуклеозидной связи, и, в силу этого, вплоть до примерно 10%, как, например, примерно 5% олигонуклеотидных молекул могут иметь альтернативную стереоизомерную форму.

В некоторых воплощениях стереоселективность каждого стереоопределенного фосфоротиоатного стереоцентра составляет по меньшей мере примерно 90%. В некоторых воплощениях стереоселективность каждого стереоопределенного фосфоротиоатного стереоцентра составляет по меньшей мере примерно 95%.

Стереоопределенные фосфоротиоатные связи

Стереоопределенные фосфоротиоатные связи представляют собой фосфоротиоатные связи, которые были химически синтезированы либо в Rp, либо в Sp конфигурации в пределах популяции индивидуальных олигонуклеотидных молекул, как, например, по меньшей мере примерно 90% или по меньшей мере примерно 95% стереоселективности в каждом стереоцентре (либо Rp, либо Sp), и, в силу этого, вплоть до примерно 10%, как, например, вплоть до примерно 5% олигонуклеотидных молекул могут иметь альтернативную стереоизомерную форму.

Стереоконфигурации фосфоротиоатных межнуклеозидных связей представлены ниже

где 3' R группа представляет собой 3'-положение смежного нуклеозида (5'-нуклеозида), и 5' R группа представляет собой 5'-положение смежного нуклеозида (3'-нуклеозида).

В данном документе Rp межнуклеозидные связи также могут быть представлены как srP, и Sp межнуклеозидные связи могут быть представлены как ssP.

В некоторых воплощениях стереоселективность каждого стереоопределенного фосфоротиоатного стереоцентра составляет по меньшей мере примерно 97%. В некоторых воплощениях стереоселективность каждого стереоопределенного фосфоротиоатного стереоцентра составляет по меньшей мере примерно 98%. В некоторых воплощениях стереоселективность каждого стереоопределенного фосфоротиоатного стереоцентра составляет по меньшей мере примерно 99%.

В некоторых воплощениях стереоселективная межнуклеозидная связь находится в той же самой стереоизомерной форме у по меньшей мере 97%, как, например, по меньшей мере 98%, как, например, по меньшей мере 99% или (по существу) у всех олигонуклеотидных молекул, присутствующих в популяции олигонуклеотид ной молекулы.

Стереоселективность можно измерять в модельной системе, имеющей только ахиральный остов (т.е. фосфодиэфиры), возможно измерять стереоселективность каждого мономера, например, связыванием стереоопределенного мономера со следующей модельной системой "5' t-po-t-po-t-ро 3"'. Результат этого тогда даст: 5' DMTr-t-srp-t-po-t-po-t-po 3' или 5' DMTr-t-ssp-t-po-t-po-t-po 3', которые могут быть разделены с использованием ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография). Стереоселективность определяется посредством интегрирования УФ (ультрафиолетовый) сигнала от двух возможных соединений и приведением их отношения, например, 98:2, 99:1 или больше 99:1.

Будет понятно то, что % стереочистоты конкретного одного диастереоизомера (одной стереоопределенной олигонуклеотидной молекулы) будет функцией селективности связывания в отношении определенного стереоцентра в каждом межнуклеозидном положении и числа стереоопределенных межнуклеозидных связей, подлежащих введению. В качестве примера, если селективность связывания в каждом положении составляет 97%, тогда полученная в результате чистота стереоопределенного олигонуклеотида с 15 стереоопределенными межнуклеозидными связями будет составлять 0,9715, т.е. 63% желательного диастереоизомера по сравнению с 37% других диастереоизомеров. Чистота определенного диастереоизомера после синтеза может быть улучшена очисткой, например, посредством ВЭЖХ, как, например, ионообменной хроматографией или хроматографией с обращенной фазой.

В некоторых воплощениях стереоопределенный олигонуклеотид относится к популяции олигонуклеотида, где по меньшей мере примерно 40%, как, например, по меньшей мере примерно 50% популяции представляет собой желательный диастереоизомер.

Излагая альтернативным способом, в некоторых воплощениях стереоопределенный олигонуклеотид относится к популяции олигонуклеотидов, в которой по меньшей мере примерно 40%, как, например, по меньшей мере примерно 50% данной популяции состоит из желательного (специфического) мотива стереоопределенной межнуклеозидной связи (также именуемого стереоопределенным мотивом).

Для стереоопределенных олигонуклеотидов, которые содержат и стереослучайные, и стереоопределенные межнуклеозидные стереоцентры, чистота стереоопределенного олигонуклеотида определяется по отношению к % популяции олигонуклеотида, который сохраняет определенный(ные) стереоопределенный(ные) мотив(вы) межнуклеозидной связи, причем стереослучайные связи игнорируются при расчете.

Нуклеиновое основание

Термин «нуклеиновое основание» включает пуриновую (например, аденин и гуанин) и пиримидиновую (например, урацил, тимин и цитозин) группировку, присутствующую в нуклеозидах и нуклеотидах, которые образуют водородные связи при гибридизации нуклеиновых кислот. В контексте настоящего изобретения термин нуклеиновое основание также охватывает модифицированные нуклеиновые основания, которые могут отличаться от встречающихся в природе нуклеиновых оснований, но являются функциональными во время гибридизации нуклеиновых кислот. В данном контексте термин «нуклеиновое основание» относится и к встречающимся в природе нуклеиновым основаниям, таким как аденин, гуанин, цитозин, тимин, урацил, ксантин и гипоксантин, также как и к не встречающимся в природе вариантам. Такие варианты, например, описываются в Hirao et al (2012) Accounts of Chemical Research, том 45, страница 2055 и Bergstrom (2009) Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry Suppl. 37 1.4.1.

В некоторых воплощениях группировка нуклеинового основания модифицируется заменой пурина или пиримидина на модифицированный пурин или пиримидин, такой как замещенный пурин или замещенный пиримидин, как, например, нуклеиновое основание, выбранное из изоцитозина, псевдоизоцитозина, 5-метилцитозина, 5-тиозолоцитозина, 5-пропинилцитозина, 5-пропинилурацила, 5-бромурацил-5-тиазолоурацила, 2-тиоурацила, 2'-тиотимидина, инозина, диаминопурина, 6-аминопурина, 2-аминопурина, 2,6-диаминопурина и 2-хлор-6-аминопурина.

Группировки нуклеиновых оснований могут быть указаны буквенным кодом для каждого соответствующего нуклеинового основания, например, А, Т, G, С или U, где каждая буква возможно может включать модифицированные нуклеиновые основания с эквивалентной функцией. Например, в проиллюстрированных в качестве примеров олигонуклеотидах группировки нуклеиновых оснований выбраны из А, Т, G, С и 5-метилцитозина. Возможно для гэпмеров LNA можно использовать 5-метилцитозин нуклеозидов LNA.

Модифицированный олигонуклеотид

Термин «модифицированный олигонуклеотид» или «модифицированная молекула нуклеиновой кислоты» описывает олигонуклеотид или молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую один или более чем один нуклеозид с модифицированным сахаром и/или модифицированными межнуклеозидными связями. Термин «химерный» представляет собой термин, который использовали в литературе для описания олигонуклеотидов или молекул нуклеиновых кислот с модифицированными нуклеозидами, в частности, олигонуклеотидов гэпмера.

Стереоопределенный олигонуклеотид

Стереоопределенный олигонуклеотид представляет собой олигонуклеотид, в котором по меньшей мере одна из межнуклеозидных связей представляет собой стереоопределенную межнуклеозидную связь.

Стереоопределенный фосфоротиоатный олигонуклеотид представляет собой олигонуклеотид, в котором по меньшей мере одна из межнуклеозидных связей представляет собой стереоопределенную фосфоротиоатную межнуклеозидную связь.

Стереоопределенный межнуклеозидный мотив

Стереоопределенный межнуклеозидный мотив, также именуемый в данном документе стереоопределенным мотивом, относится к структуре стереоопределенных R и S межнуклеозидных связей в стереоопределенном олигонуклеотиде и записывается от 5' к 3'. Например, стереоопределенный олигонуклеотид

имеет стереоопределенный межнуклеозидный мотив RSSRRSRRSRSRSSS.

По отношению к подбиблиотекам стереоопределенных олигонуклеотидов они будут содержать общий стереоопределенный межнуклеозидный мотив на в иных отношениях стереослучайном фоне (возможно с одной или более чем одной нехиральной межнуклеозидной связью, например, фосфодиэфирными связями).

Например, олигонуклеотид

имеет стереоопределенный межнуклеозидный мотив XXXXRSSRXXXXXXX, с Х, представляющей собой стереослучайную фосфоротиоатную межнуклеозидную связь (показанную как подстрочный символ s в соединении). Будет отмечено то, что в данном примере первая 5' стереоопределенная межнуклеозидная связь представляет собой 5-ую межнуклеозидную связь с 5'-конца (между нуклеозидами в положении 4 и 5), и, в силу этого, приведенный выше мотив также называется мотив «RSSR» в положении 5 (межнуклеозидной связи).

При составлении стереоопределенного межнуклеозидного мотива (стереоопределенного мотива) на серии смежных стереоопределенных межнуклеозидных связей (например, расположенных между смежными нуклеозидами), он называется в данном документе непрерывным стереоопределенным межнуклеозидным мотивом (непрерывный стереоопределенный мотив). Следует понимать то, что непрерывный стереоопределенный мотив должен содержать две или более чем две смежные стереоопределенные межнуклеозидные связи.

В смеси подбиблиотек стереоопределенный межнуклеозидный мотив также может быть состоящим из прерывистых частей, т.е. стереоопределенные межнуклеозидные связи перемежаются с одной или более чем одной стереослучайной межнуклеозидной связью.

Например, соединение

имеет состоящий из изолированных частей мотив XSXXRSXXXXXXSRS.

Родительский олигонуклеотид

Родительский олигонуклеотид представляет собой олигонуклеотид, который имеет определенную последовательность нуклеиновых оснований (мотив последовательности). В способах по данному изобретению родительский олигонуклеотид типично представляет собой олигонуклеотид, который следует улучшать посредством применения способа по изобретению посредством создания одной или более чем одной библиотеки.

Типично в библиотеке могут варьировать модификации нуклеозидов (конструкторские библиотеки) при сохранении последовательности нуклеиновых оснований родителя и стереохимии (типично стереослучайной).

В альтернативной библиотеке может варьировать стереохимия родительского олигонуклеотида при сохранении последовательности нуклеиновых оснований (мотив последовательности) и картины модификаций нуклеозидов (конструкция). В такой библиотеке стереохимия одной или более чем одной (двух и более) межнуклеозидных связей является стереоопределенной и отличной от стереохимии родительского олигонуклеотида.

В некоторых воплощениях родительский олигонуклеотид представляет собой стереослучайный фосфоротиоатный олигонуклеотид. В некоторых воплощениях родительский олигонуклеотид представляет собой стереослучайный фосфоротиоатный олигонуклеотид-гэпмер.

В некоторых воплощениях родительский олигонуклеотид может представлять собой подбиблиотеку, которая содержит общий стереоопределенный мотив.

Стереоопределенные варианты (дочерние олигонуклеотиды)

Стереоопределенный вариант олигонуклеотида представляет собой олигонуклеотид, который сохраняет ту же самую последовательность и модификации нуклеозидов, что и родительский олигонуклеотид (т.е. такую же химию и конструкцию последовательности и модификаций нуклеозидов), но отличается в отношении одной или более чем одной стереоопределенной межнуклеозидной связи, как, например, одной или более чем одной стереоопределенной фосфоротиоатной межнуклеозидной связи (стереоопределенный фосфоротиоатный вариант).

Стереоопределенный вариант может представлять собой подбиблиотеку или может представлять собой полностью стереоопределенный олигонуклеотид.

Подбиблиотека стереоопределенных олигонуклеотидов

Олигонуклеотид, который содержит и стереослучайные, и стереоопределенные олигонуклеотиды, называется в данном документе подбиблиотекой. Подбиблиотеки представляют собой менее сложные смеси диастереоизомерной смеси полностью стереослучайного олигонуклеотида, таким образом, представляя поднабор всех возможных диастереоизомеров. Например, теоретически, полностью фосфоротиоатный стереослучайный 16-мер представляет собой смесь 215 диастереоизомеров (32768), тогда как подбиблиотека, где одна из фосфоротиоатных межнуклеозидных связей является стереоопределенной, будет иметь половину сложности библиотеки (16384 диастереоизомера), (2 стереоопределенных связи соответствуют 8192 диастереоизомерам; 3 стереоопределенных связи соответствуют 4096 диастереоизомерам; 4 стереоопределенных связи соответствуют 2048 диастереоизомерам; 5 стереоопределенных связей соответствуют 1024 диастереоизомерам), предполагая 100%-ную эффективность стереоселективного связывания.

Полностью стереоопределенные олигонуклеотиды

Полностью стереоопределенный олигонуклеотид представляет собой олигонуклеотид, в котором все хиральные межнуклеозидные связи, присутствующие в пределах олигонуклеотида, являются стереоопределенными. Полностью стереоопределенный фосфоротиоатный олигонуклеотид представляет собой олигонуклеотид, в котором все хиральные межнуклеозидные связи, присутствующие в пределах данного олигонуклеотида, являются стереоопределенными фосфоротиоатными межнуклеозидными связями.

Будет понятно то, что в некоторых воплощениях полностью стереоопределенный олигонуклеотид может содержать одну или более чем одну нехиральную межнуклеозидную связь, такую как фосфодиэфирная межнуклеозидная связь, например, фосфодиэфирные связи могут использоваться в пределах фланкирующих областей гэпмеров и/или при связывании концевых нуклеозидов, как, например, между короткими областями нуклеозидов ДНК (биорасщепляемый линкер), связывающих последовательность гэпмера и конъюгатной группы.

В некоторых воплощениях полностью стереоопределенного олигонуклеотида все межнуклеозидные связи, присутствующие в данном олигонуклеотиде или его непрерывной нуклеотидной области, таком как F-G-F' гэпмер, представляют собой стереоопределенные межнуклеозидные связи, такие как стереоопределенные фосфоротиоатные межнуклеозидные связи.

Комплементарность

Термин «комплементарность» описывает способность нуклеозидов/нуклеотидов к образованию пар оснований по Уотсону-Крику. Парами оснований по Уотсону-Крику являются гуанин (G)-цитозин (С) и аденин (А)-тимин (Т)/урацил (U). Будет понятно то, что олигонуклеотиды могут содержать нуклеозиды с модифицированными нуклеиновыми основаниями, например, 5-метилцитозин часто используется вместо цитозина, и термин «комплементарность», как таковой, охватывает образование пар оснований по Уотсону-Крику между немодифицированными и модифицированными нуклеиновыми основаниями (см., например, Hirao et al (2012) Accounts of Chemical Research, том 45, страница 2055 и Bergstrom (2009) Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry Suppl. 37 1.4.1).

Термин «% комплементарности» в том виде, в котором он используется в данном документе, относится к числу нуклеотидов непрерывной нуклеотидной последовательности в молекуле нуклеиновой кислоты (например, в олигонуклеотиде) в процентах, которые, в данном положении, являются комплементарными (т.е. образуют пары оснований по Уотсону-Крику) непрерывной нуклеотидной последовательности в данном положении отдельной молекулы нуклеиновой кислоты (например, нуклеиновой кислоты-мишени). Данная процентная доля рассчитывается подсчетом числа выровненных оснований, которые образуют пары между двумя последовательностями (при выравнивании с использованием последовательности-мишени 5'-3' и последовательности олигонуклеотида от 3' к 5'), деля на общее число нуклеотидов в олигонуклеотиде и умножая на 100. При таком сравнении нуклеиновое основание/нуклеотид, который не выравнивается (не образует пару оснований), называется несоответствием. Предпочтительно при расчете % комплементарности непрерывной нуклеотидной последовательности не допускаются вставки и делеции.

Термин «полностью комплементарный» относится к 100%-ной комплементарности.

Следующее представляет собой пример олигонуклеотида (SEQ ID NO: 12), который является полностью комплементарным области нуклеиновой кислоты-мишени.

Идентичность

Термин «идентичность» в том виде, в котором он используется в данном документе, относится к числу нуклеотидов в процентах непрерывной нуклеотидной последовательности в молекуле нуклеиновой кислоты (например, олигонуклеотиде), которые в данном положении являются идентичными (т.е. в их способности образовать пары оснований по Уотсону-Крику с комплементарным нуклеозидом) непрерывной нуклеотидной последовательности в данном положении отдельной молекулы нуклеиновой кислоты (например, нуклеиновой кислоты-мишени). Данная процентная доля рассчитывается путем подсчета числа выровненных оснований, которые являются идентичными между двумя последовательностями, деля на общее число нуклеотидов в олигонуклеотиде и умножая на 100. Процентная доля идентичности = (совпадения × 100) / длина выровненной области. Предпочтительно при расчете % идентичности непрерывной нуклеотидной последовательности не допускаются вставки и делеции.

Гибридизация

Термин «осуществление гибридизации» или «гибридизуется» в том виде, в котором он используется в данном документе, следует понимать как две нити нуклеиновой кислоты (например, олигонуклеотид и нуклеиновая кислота-мишень), образующие водородные связи между парами оснований на противоположных нитях, формируя, посредством этого, дуплекс. Аффинность связывания между двумя нитями нуклеиновой кислоты представляет собой силу гибридизации. Она часто описывается в показателях температуры плавления (Tm), определенной как температура, при которой половина олигонуклеотидов образует дуплекс с нуклеиновой кислотой-мишенью. При физиологических условиях Tm не является строго пропорциональной аффинности (Mergny and Lacroix, 2003, Oligonucleotides 13:515-537). Свободная энергия Гиббса в стандартном состоянии - ΔG° - является более точным представлением аффинности связывания и связана с константой диссоциации (Kd) реакции согласно уравнению ΔG°=-RTIn(Kd), где R представляет собой газовую постоянную, и Т представляет собой абсолютную температуру. Следовательно, очень низкая ΔG° реакции между олигонуклеотидом и нуклеиновой кислотой-мишенью отражает сильную гибридизацию между олигонуклеотидом и нуклеиновой кислотой-мишенью. ΔG° представляет собой энергию, связанную с реакцией, где концентрации в воде составляют 1 М, рН составляет 7, и температура составляет 37°С. Гибридизация олигонуклеотидов с нуклеиновой кислотой-мишенью представляет собой спонтанную реакцию, и для спонтанных реакций ΔG° меньше, чем ноль. ΔG° можно измерять экспериментально, например, посредством применения способа изотермической титрационной калориметрии (ITC), как описано в Hansen et al., 1965, Chem. Comm. 36-38 и Holdgate et al., 2005, Drug Discov Today. Специалисту будет известно то, что доступно имеющееся в продаже оборудование для измерений ΔG°. ΔG° также можно оценивать численно посредством применения модели ближайшего соседа, как описывается SantaLucia, 1998, Proc Natl Acad Sci USA. 95: 1460-1465, с использованием подходящим образом выведенных термодинамических параметров, описанных Sugimoto et al., 1995, Biochemistry 34:11211-11216 и McTigue et al., 2004, Biochemistry 43:5388-5405. Для того чтобы иметь возможность модулирования их намеченной нуклеиновой кислоты-мишени посредством гибридизации, олигонуклеотиды по настоящему изобретению гибридизуются с нуклеиновой кислотой-мишенью с оценочными значениями ΔG° меньше -41,8 кДж для олигонуклеотидов, которые имеют 10-30 нуклеотидов в длину. В некоторых воплощениях степень или сила гибридизации измеряется посредством свободной энергии Гиббса в стандартном состоянии - ΔG°. Олигонуклеотиды могут гибридизоваться с нуклеиновой кислотой-мишенью с оценочными значениями ΔG° меньше интервала -41,8 кДж, как, например, меньше -62,8 кДж, как, например, меньше -83,7 кДж и как, например, меньше -104,6 кДж для олигонуклеотидов, которые имеют 8-30 нуклеотидов в длину. В некоторых воплощениях олигонуклеотиды гибридизуются с нуклеиновой кислотой-мишенью с оценочным значением ΔG° от -41,8 до -251 кДж, как, например, от -50,2 до -167,4 кДж, как, например, от -62,8 до -125,5 кДж или от -66,9 до 113 кДж, как, например, от -75,3 до -104,6 кДж.

Нуклеиновая кислота-мишень

Согласно настоящему изобретению имеются две нуклеиновые кислоты-мишени, которые подлежат модуляции тем же самым олигонуклеотидом. Данные нуклеиновые кислоты-мишени представляет собой i) нуклеиновую кислоту, которая кодирует PAPD5 млекопитающего (нуклеиновая кислота 1), и ii) нуклеиновую кислоту, которая кодирует PAPD7 млекопитающего (нуклеиновая кислота 2). Данные нуклеиновые кислоты-мишени могут представлять собой, например, ген, РНК, мРНК и пре-мРНК, зрелую мРНК или последовательность кДНК. Подходящим образом, нуклеиновая кислота-мишень кодирует белок PAPD5 или PAPD7, в частности PAPD5 или PAPD7 млекопитающего, такой как PAPD5 или PAPD7 человека (см., например, Таблицы 1 и 2), в которых приводятся последовательности пре-мРНК для человеческого, обезьяньего и мышиного PAPD5 или PAPD7).

В некоторых воплощениях нуклеиновая кислота-мишень выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 3 и/или 5 или их встречающихся в природе вариантов (например, последовательностей, кодирующих PAPD5 млекопитающего).

В некоторых воплощениях нуклеиновая кислота-мишень выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 4 и/или 6, или 11, или их встречающихся в природе вариантов (например, последовательностей, кодирующих PAPD7 млекопитающего).

Прям. - прямая нить. Обр. - обратная нить. Геномные координаты дают последовательность пре-мРНК (геномная последовательность).

При использовании олигонуклеотида по изобретению в исследовании или диагностике нуклеиновая кислота-мишень может представлять собой кДНК или синтетическую нуклеиновую кислоту, происходящую из ДНК или РНК.

Для применения in vivo или in vitro олигонуклеотид по изобретению типично способен ингибировать экспрессию нуклеиновой кислоты-мишени PAPD5 или PAPD7 в клетке, которая экспрессирует нуклеиновую кислоту-мишень PAPD5 или PAPD7. Непрерывная последовательность нуклеиновых оснований олигонуклеотида по изобретению типично комплементарна консервативной области нуклеиновой кислоты-мишени PAPD5 или PAPD7 при измерении по длине олигонуклеотида, возможно, за исключением одного или двух несоответствий, и, возможно, исключая линкерные области на основе нуклеотидов, которые могут связывать олигонуклеотид с возможной функциональной группой, такой как конъюгат или другие некомплементарные концевые нуклеотиды (например, область D' или D''). Дополнительная информация по типичным нуклеиновым кислотам-мишеням приводится в Таблице 2.

Последовательность-мишень

Термин «последовательность-мишень» в том виде, в котором он используется в данном документе, относится к последовательности нуклеотидов, присутствующей в нуклеиновой кислоте-мишени, которая содержит последовательность нуклеиновых оснований, которая является комплементарной олигонуклеотиду или молекуле нуклеиновой кислоты по изобретению. В некоторых воплощениях последовательность-мишень состоит из области на нуклеиновой кислоте-мишени, которая является комплементарной непрерывной нуклеотидной последовательности олигонуклеотида по изобретению (т.е. подпоследовательности).

В настоящем изобретении последовательность-мишень присутствует в нуклеиновой кислоте-мишени и человеческого PAPD5, и человеческого PAPD7. Данная последовательность-мишень, следовательно, может называться биспецифичной последовательностью-мишенью, присутствующей в нуклеиновой кислоте-мишени и PAPD5, и PAPD7. В преимущественных воплощениях последовательность-мишень также присутствует у по меньшей мере одного дополнительного вида, как, например, PAPD5 и PAPD7 от яванского макака и/или PAPD5 и PAPD7 от мыши.

Олигонуклеотид или молекула нуклеиновой кислоты по изобретению содержит непрерывную нуклеотидную последовательность, которая является комплементарной или гибридизуется с областью на нуклеиновой кислоте-мишени, такой как последовательность-мишень, описанная в данном документе.

Последовательность нуклеиновой кислоты-мишени, которой является комплементарным или с которой гибридизуется олигонуклеотид, обычно содержит отрезок смежных нуклеиновых оснований из по меньшей мере 10 нуклеотидов. Непрерывная нуклеотидная последовательность содержит от 10 до 50 нуклеотидов, как, например, 12-30, как, например, 13-25, как, например, 14-20, как, например, 15-18 смежных нуклеотидов.

Вариант, встречающийся в природе

Термин «вариант, встречающийся в природе» относится к вариантам гена PAPD5 или PAPD7, или транскриптам, которые происходят из тех же самых генетических локусов, что и нуклеиновая кислота-мишень, но могут отличаться, например, за счет вырожденности генетического кода, вызывающей множественность кодонов, кодирующих ту же самую аминокислоту, или благодаря альтернативному сплайсингу пре-мРНК, или присутствию полиморфизмов, таких как однонуклеотидные полиморфизмы и аллельные варианты. На основе присутствия достаточно комплементарной последовательности к олигонуклеотиду, олигонуклеотид по изобретению, следовательно, может быть нацелен на нуклеиновую кислоту-мишень и ее встречающиеся в природе варианты.

В некоторых воплощениях встречающиеся в природе варианты имеют по меньшей мере 95%, как, например, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% гомологии с нуклеиновой кислотой-мишенью PAPD5 млекопитающего, такой как нуклеиновая кислота-мишень, выбранная из группы, состоящей из SEQ ID NO 1, 3 или 5. В некоторых воплощениях встречающиеся в природе варианты имеют по меньшей мере 99% гомологии с нуклеиновой кислотой-мишенью человеческого PAPD5 SEQ ID NO: 1. В некоторых воплощениях встречающимися в природе вариантами являются полиморфизмы, перечисленные в Таблице 3А.

В некоторых воплощениях встречающиеся в природе варианты имеют по меньшей мере 95%, как, например, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% гомологии с нуклеиновой кислотой-мишенью PAPD5 млекопитающего, такой как нуклеиновая кислота-мишень, выбранная из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2 или 4, или 6. В некоторых воплощениях встречающиеся в природе варианты имеют по меньшей мере 99% гомологии с нуклеиновой кислотой-мишенью человеческого PAPD7 SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях встречающимися в природе вариантами являются полиморфизмы, перечисленные в Таблице 3Б.

В гене PAPD5 или PAPD7 известны многочисленные однонуклеотидные полиморфизмы, например, однонуклеотидные полиморфизмы, раскрытые в Таблице 3А (исходной/эталонной последовательностью пре-мРНК человеческого PAPD5 является SEQ ID NO: 1) и Таблице 3Б (исходной/эталонной последовательностью пре-мРНК человеческого PAPD7 является SEQ ID NO: 2).

Модуляция экспрессии

Термин «модуляция экспрессии» в том виде, в котором он используется в данном документе, следует понимать как общий термин для способности молекул нуклеиновых кислот изменять количество PAPD5 или PAPD7 по сравнению с количеством PAPD5 или PAPD7 до введения молекулы нуклеиновой кислоты. В качестве альтернативы, модуляцию экспрессии можно определять посредством ссылки на контрольный эксперимент. Обычно понятно то, что контроль представляет собой индивида или клетку-мишень, обработанную композицией физиологического раствора, или индивида или клетку-мишень, обработанную ненацеленной молекулой нуклеиновой кислоты (имитация). Однако он также может представлять собой индивида, которого лечили стандартом лечения.

Одним типом модуляции является способность молекул нуклеиновых кислот, таких как антисмысловые олигонуклеотиды, ингибировать, осуществлять понижающую регуляцию, уменьшать, удалять, останавливать, предотвращать, ослаблять, снижать, устранять или прекращать экспрессию PAPD5 или PAPD7, например, посредством деградации мРНК или блокировки транскрипции.

Высокоаффинные модифицированные нуклеозиды

Высокоаффинный модифицированный нуклеозид представляет собой модифицированный нуклеотид, который, при включении в олигонуклеотид, увеличивает аффинность олигонуклеотида в отношении его комплементарной мишени, например, при измерении по температуре плавления (Tm). Высокоаффинный модифицированный нуклеозид по настоящему изобретению предпочтительно приводит к увеличению температуры плавления от +0,5 до +12°С, более предпочтительно - от +1,5 до +10°С, и наиболее предпочтительно - от +3 до +8°С на модифицированный нуклеозид. В данной области известны многочисленные высокоаффинные модифицированные нуклеозиды, и они включают, например, многие нуклеозиды, модифицированные 2' сахаром, такие как 2'-замещенные нуклеозиды, подобные Ome и МОЕ, а также 2'-4' мостиковые нуклеиновые кислоты, такие как запертые нуклеиновые кислоты (LNA) (см., например, Freier & Altmann; Nucl. Acid Res., 1997, 25, 4429-4443 и Uhlmann; Curr. Opinion in Drug Development, 2000, 3(2), 293-213).

Модификации сахара

Молекула нуклеиновой кислоты по изобретению может содержать один или более чем один нуклеозид, который имеет модифицированную сахарную группировку, т.е. модификацию сахарной группировки по сравнению с рибозной сахарной группировкой, находящейся в ДНК и РНК.

Были получены многочисленные нуклеозиды с модификацией рибозной сахарной группировки, главным образом, с целью улучшения определенных свойств молекул нуклеиновых кислот, таких как аффинность и/или нуклеазоустойчивость.

Такие модификации включают модификации, где модифицируется структура рибозного кольца, например, посредством замены на гексозное кольцо (HNA) или бициклическое кольцо, которое типично имеет бирадикальный мостик между углеродами С2 и С4 на рибозном кольце (LNA), или на несвязанное рибозное кольцо, у которого типично отсутствует связь между углеродами С2 и С3 (например, UNA). Другие нуклеозиды с модифицированным сахаром включают, например, бициклогексозные нуклеиновые кислоты (WO 2011/017521) или трициклические нуклеиновые кислоты (WO 2013/154798). Модифицированные нуклеозиды также включают нуклеозиды, где сахарная группировка заменяется на несахарную группировку, например, в случае пептидных нуклеиновых кислот (PNA) или морфолинонуклеиновых кислот.

Модификации сахаров также включают модификации, сделанные посредством изменения замещающих групп на рибозном кольце на группы, отличные от водорода или групп -ОН, находящихся в природе в нуклеозидах ДНК и РНК. Заместители, например, можно вводить в 2'-, 3'-, 4'- или 5'-положения.

2'-Модифицированные нуклеозиды

Нуклеозид, модифицированный 2'-сахаром, представляет собой нуклеозид, который имеет в положении 2' заместитель, отличный от Н или -ОН (2'-замещенный нуклеозид) или содержит 2'-связанный бирадикал, способный образовать мостик между 2' углеродом и вторым углеродом в рибозном кольце, как, например, нуклеозиды LNA (связанные 2'-4' бирадикальным мостиком).

В самом деле, было потрачено много внимания на разработку 2'-замещенных нуклеозидов, и обнаружили то, что многие 2'-замещенные нуклеозиды имеют полезные свойства при включении в олигонуклеотиды. Например, 2'-модифицированный сахар может обеспечивать повышенную аффинность связывания и/или повышенную нуклеазоустойчивость олигонуклеотида. Примерами 2'-замещенных модифицированных нуклеозидов являются 2'-O-алкил-РНК, 2'-O-метил-РНК, 2'-алкокси-РНК, 2'-O-метоксиэтил-РНК (МОЕ), 2'-амино-ДНК, 2'-фтор-РНК и 2'-F-ANA нуклеозид. Относительно дополнительных примеров, пожалуйста, см., например, Freier & Altmann; Nucl. Acid Res., 1997, 25, 4429-4443; Uhlmann; Curr. Opinion in Drug Development, 2000, 3(2), 293-213 и Deleavey and Damha, Chemistry and Biology 2012, 19, 937. Ниже приводятся иллюстрации некоторых 2'-замещенных модифицированных нуклеозидов.

В связи с настоящим изобретением 2' замещение не включает молекулы с 2' мостиком, подобные LNA.

Нуклеозиды запертых нуклеиновых кислот (LNA)

«Нуклеозид LNA» представляет собой нуклеозид, модифицированный 2'-сахаром, который содержит бирадикал, связывающий С2' и С4' рибозного сахарного кольца указанного нуклеозида (также именуемый «2'-4' мостик»), который ограничивает или запирает конформацию рибозного кольца. Данные нуклеозиды также называются в литературе мостиковой нуклеиновой кислотой или бициклической нуклеиновой кислотой (BNA). Запирание конформации рибозы ассоциировано с усиленной аффинностью гибридизации (стабилизация дуплекса) при включении LNA в олигонуклеотид для комплементарной молекулы РНК или ДНК. Это можно определять согласно установившейся практике посредством измерения температуры плавления дуплекса олигонуклеотид/комплемент.

В некоторых воплощениях нуклеозид(ды), модифицированный(ные) 2'-сахаром, или нуклеозид(ды) LNA олигомера по изобретению имеет(ют) общую структуру формулы I или II:

где W выбран из -О-, -S-, -N(Ra)-, -C(RaRb)-, таким образом, что в некоторых воплощениях -О-; В обозначает нуклеиновое основание или модифицированную группировку нуклеинового основания;

Z обозначает межнуклеозидную связь с соседним нуклеозидом или 5'-концевую группу;

Z* обозначает межнуклеозидную связь с соседним нуклеозидом или 3'-концевую группу;

X обозначает группу, выбранную из списка, состоящего из -C(RaRb)-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -О-, -Si(Ra)2-, -S-, -SO2-, -N(Ra)- и >C=Z.

В некоторых воплощениях X выбран из группы, состоящей из: -О-, -S-, NH-, NRaRb, -СН2-, CRaRb, -С(=СН2)- и -C(=CRaRb)-.

В некоторых воплощениях X представляет собой -О-.

Y обозначает группу, выбранную из группы, состоящей из -C(RaRb)-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -О-, -Si(Ra)2-, -S-, -SO2-, -N(Ra)- и >C=Z.

В некоторых воплощениях Y выбран из группы, состоящей из: -СН2-, -C(RaRb)-, -СН2СН2-, -C(RaRb)-C(RaRb)-, -СН2СН2СН2-, -C(RaRb)C(RaRb)C(RaRb)-, -C(Ra)=C(Rb)- и -C(Ra)=N-.

В некоторых воплощениях Y выбран из группы, состоящей из: -СН2-, -CHRa-, -СНСН3-, CRaRb-.

или -X-Y- совместно обозначают двухвалентную линкерную группу (также именуемую радикал), обозначающую совместно двухвалентную линкерную группу, состоящую из 1, 2, 3 или 4 групп/атомов, выбранных из группы, состоящей из -C(RaRb)-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -О-, -Si(Ra)2-, -S-, -SO2-, -N(Ra)- и >C=Z.

В некоторых воплощениях -X-Y- обозначает бирадикал, выбранный из групп, состоящих из: -Х-СН2-, -X-CRaRb-, -X-CHRa-, -Х-С(НСН3)-, -O-Y-, -O-CH2-, -S-СН2-, -NH-CH2-, -О-СНСН3-, -СН2-O-СН2, -О-СН(СН3СН3)-, -O-СН2-СН2-, ОСН2-СН2-СН2-, -O-СН2ОСН2-, -O-NCH2-, -С(=СН2)-СН2-, -NRa-CH2-, N-O-CH2, -S-CRaRb- и -S-CHRa-.

В некоторых воплощениях -X-Y- обозначает -O-СН2- или -O-СН(СН3)-,

где Z выбран из -О-, -S- и -N(Ra)-,

и Ra, и, при наличии Rb, каждый независимо выбран из водорода, возможно замещенного С1-6-алкила, возможно замещенного С2-6-алкенила, возможно замещенного С2-6-алкинила, гидрокси, возможно замещенного С1-6-алкокси, С2-6-алкоксиалкила, С2-6-алкенилокси, карбокси, С1-6-алкоксикарбонила, С1-6-алкилкарбонила, формила, арила, арилоксикарбонила, арилокси, арилкарбонила, гетероарила, гетероарилоксикарбонила, гетероарилокси, гетероарилкарбонила, амино, моно- и ди(С1-6-алкил)амино, карбамоила, моно- и ди(С1-6-алкил)-аминокарбонила, амино-С1-6-алкил-аминокарбонила, моно- и ди(С1-6-алкил)амино-С1-6-алкил-аминокарбонила, С1-6-алкил-карбониламино, карбамидо, С1-6-алканоилокси, сульфоно, С1-6-алкилсульфонилокси, нитро, азидо, сульфанила, С1-6-алкилтио, галогена, где арил и гетероарил возможно могут быть замещены, и где два геминальных заместителя Ra и Rb могут вместе обозначать возможно замещенный метилен (=СН2), где для всех хиральных центров асимметрические группы могут находиться либо в R, либо в S ориентации.

где R1, R2, R3, R5 и R5* независимо выбраны из группы, состоящей из: водорода, возможно замещенного С1-6-алкила, возможно замещенного С2-6-алкенила, возможно замещенного С2-6-алкинила, гидрокси, С1-6-алкокси, С2-6-алкоксиалкила, С2-6-алкенилокси, карбокси, С1-6-алкоксикарбонила, С1-6-алкилкарбонила, формила, арила, арилокси-карбонила, арилокси, арилкарбонила, гетероарила, гетероарилокси-карбонила, гетероарилокси, гетероарилкарбонила, амино, моно- и ди(С1-6-алкил)амино, карбамоила, моно- и ди(С1-6-алкил)-аминокарбонила, амино-С1-6-алкил-аминокарбонила, моно- и ди(С1-6-алкил)амино-С1-6-алкил-аминокарбонила, С1-6-алкил-карбониламино, карбамидо, С1-6-алканоилокси, сульфоно, С1-6-алкилсульфонилокси, нитро, азидо, сульфанила, С1-6-алкилтио, галогена, где арил и гетероарил возможно могут быть замещены, и где два геминальных заместителя могут вместе обозначать оксо, тиоксо, имино или возможно замещенный метилен.

В некоторых воплощениях R1, R2, R3, R5 и R5* независимо выбраны из С1-6-алкила, такого как метил, и водорода.

В некоторых воплощениях все R1, R2, R3, R5 и R5* представляют собой атомы водорода.

В некоторых воплощениях все R1, R2, R3 представляют собой атомы водорода, и либо R5, либо R5* также представляет собой атом водорода, а другой из R5 и R5* отличается от атома водорода, как, например, представляет собой С1-6-алкил, такой как метил.

В некоторых воплощениях Ra представляет собой либо атом водорода, либо метил. В некоторых воплощениях Rb, при наличии, представляет собой либо атом водорода, либо метил.

В некоторых воплощениях один или оба из Ra и Rb представляют собой атом водорода.

В некоторых воплощениях один из Ra и Rb представляет собой атом водорода, а другой отличается от атома водорода.

В некоторых воплощениях один из Ra и Rb представляет собой метил, а другой представляет собой атом водорода.

В некоторых воплощениях оба из Ra и Rb представляют собой метил.

В некоторых воплощениях бирадикал -X-Y- представляет собой -O-CH2-, W представляет собой О, и все R1, R2, R3, R5 и R5* представляют собой атомы водорода. Такие нуклеозиды LNA раскрыты в WO 99/014226, WO 00/66604, WO 98/039352 и WO 2004/046160, которые все включены тем самым посредством ссылки, и они включают то, что обычно известно как нуклеозиды бета-D-окси LNA и альфа-L-окси LNA.

В некоторых воплощениях бирадикал -X-Y- представляет собой -S-CH2-, W представляет собой О, и все из R1, R2, R3, R5 и R5* представляют собой атомы водорода. Такие нуклеозиды тио LNA раскрыты в WO 99/014226 и WO 2004/046160, которые включены тем самым посредством ссылки.

В некоторых воплощениях бирадикал -X-Y- представляет собой -NH-CH2-, W представляет собой О, и все из R1, R2, R3, R5 и R5* представляют собой атомы водорода. Такие нуклеозиды амино LNA раскрыты в WO 99/014226 и WO 2004/046160, которые тем самым включены посредством ссылки.

В некоторых воплощениях бирадикал -X-Y- представляет собой -O-СН2-СН2- или -О-СН2-СН2-СН2-, W представляет собой О, и все из R1, R2, R3, R5 и R5* представляют собой атомы водорода. Такие нуклеозиды LNA раскрыты в WO 00/047599 и Morita et al, Bioorganic & Med.Chem. Lett. 12 73-76, которые тем самым включены посредством ссылки, и включают то, что обычно известно как нуклеиновые кислоты, связанные 2'-O-4'С-этиленовым мостиком (ENA).

В некоторых воплощениях бирадикал -X-Y- представляет собой -O-CH2-, W представляет собой О, и все из R1, R2, R3 и один из R5 и R5* представляют собой атомы водорода, а другой из R5 и R5* отличается от атома водорода, как, например, С1-6алкил, такой как метил. Такие 5'-замещенные нуклеозиды LNA раскрыты в WO 2007/134181, которая тем самым включена посредством ссылки.

В некоторых воплощениях бирадикал -X-Y- представляет собой -O-CRaRb, где один или оба из Ra и Rb отличаются от атома водорода, как, например, метил, W представляет собой О, и все из R1, R2, R3 и один из R5 и R5* представляют собой атом водорода, а другой из R5 и R5* отличается от атома водорода, как, например, С1-6алкил, такой как метил. Такие бис-модифицированные нуклеозиды LNA раскрыты в WO 2010/077578, которая тем самым включена посредством ссылки.

В некоторых воплощениях бирадикал -X-Y- обозначает двухвалентную линкерную группу -O-СН(СН2ОСН3)- (2' О-метоксиэтилбициклическая нуклеиновая кислота - Seth at al., 2010, J. Org. Chem. Vol 75(5) pp. 1569-81). В некоторых воплощениях бирадикал -X-Y- обозначает двухвалентную линкерную группу -О-СН(СН2СН3) - (2'О-этилбициклическая нуклеиновая кислота - Seth at al., 2010, J. Org. Chem. Vol 75(5) pp. 1569-81). В некоторых воплощениях бирадикал -X-Y-представляет собой -O-CHRa, W представляет собой О, и все из R1, R2, R3, R5 и R5* представляют собой атомы водорода. Такие 6'-замещенные нуклеозиды LNA раскрыты в WO 10036698 и WO 07090071, которые обе тем самым включены посредством ссылки.

В некоторых воплощениях бирадикал -X-Y- представляет собой -О-СН(СН2ОСН3)-, W представляет собой О, и все из R1, R2, R3, R5 и R5* представляют собой атомы водорода. Такие нуклеозиды LNA также известны в данной области как циклические МОЕ (сМОЕ) и раскрыты в WO 07090071.

В некоторых воплощениях бирадикал -X-Y- обозначает двухвалентную линкерную группу -O-СН(СН3)- либо в R-, либо в S-конфигурации. В некоторых воплощениях бирадикал -X-Y- вместе обозначает двухвалентную линкерную группу -O-СН2-O-СН2- (Seth at al., 2010, J. Org. Chem). В некоторых воплощениях бирадикал -X-Y- представляет собой -O-CH(CH3)-, W представляет собой О, и все из R1, R2, R3, R5 и R5* представляют собой атомы водорода. Такие 6'-метилнуклеозиды LNA также известны в данной области как сЕТ нуклеозиды и могут представлять собой либо (S)cET, либо (R)cET стереоизомеры, как раскрыто в WO 07090071 (бета-D) и WO 2010/036698 (альфа-L), которые оба тем самым включены посредством ссылки).

В некоторых воплощениях бирадикал -X-Y- представляет собой -O-CRaRb-, в котором ни один из Ra или Rb не является атомом водорода, W представляет собой О, и все из R1, R2, R3, R5 и R5* представляют собой атомы водорода. В некоторых воплощениях и Ra, и Rb представляют собой метил. Такие 6'-двухзамещенные нуклеозиды LNA раскрыты в WO 2009006478, которая тем самым включена посредством ссылки.

В некоторых воплощениях бирадикал -X-Y- представляет собой -S-CHRa-, W представляет собой О, и все из R1, R2, R3, R5 и R5* представляют собой атомы водорода. Такие 6'-замещенные нуклеозиды тио LNA раскрыты в WO 11156202, которая тем самым включена посредством ссылки. В некоторых воплощениях 6'-замещенных тио LNA Ra представляет собой метил.

В некоторых воплощениях бирадикал -X-Y- представляет собой -С(=СН2)-C(RaRb)-, как, например, -С(=СН2)-СН2- или -С(=СН2)-СН(СН3)-, W представляет собой О, и все из R1, R2, R3, R5 и R5* представляют собой атомы водорода. Такие винилкарбо нуклеозиды LNA раскрыты в WO 08154401 и WO 09067647, которые обе тем самым включены посредством ссылки.

В некоторых воплощениях бирадикал -X-Y- представляет собой -N(-ORa)-, W представляет собой О, и все из R1, R2, R3, R5 и R5* представляют собой атомы водорода. В некоторых воплощениях Ra представляет собой С1-6алкил, такой как метил. Такие нуклеозиды LNA также известны как N-замещенные LNA и раскрываются в WO 2008/150729, которая тем самым включена посредством ссылки. В некоторых воплощениях бирадикал -X-Y- вместе обозначает двухвалентную линкерную группу -O-NRa-CH3- (Seth at al., 2010, J. Org. Chem). В некоторых воплощениях бирадикал -X-Y- представляет собой -N(Ra)-, W представляет собой О, и все из R1, R2, R3, R5 и R5* представляют собой атомы водорода. В некоторых воплощениях Ra представляет собой С1-6алкил, такой как метил.

В некоторых воплощениях один или оба из R5 и R5* представляют собой атом водорода, и, при замещении, другой из R5 и R5* представляет собой С1-6алкил, такой как метил. В таком воплощении все из R1, R2, R3 могут представлять собой атомы водорода, и бирадикал -X-Y- может быть выбран из -O-СН2- или -О-C(HCRa)-, такого как -О-С(НСН3)-.

В некоторых воплощениях бирадикал представляет собой -CRaRb-O-CRaRb-, такой как CH2-O-CH2-, W представляет собой О, и все из R1, R2, R3, R5 и R5* представляют собой атомы водорода. В некоторых воплощениях Ra представляет собой С1-6алкил, такой как метил. Такие нуклеозиды LNA также известны как конформационно ограниченные нуклеотиды (CRN) и раскрываются в WO 2013036868, которая тем самым включена посредством ссылки.

В некоторых воплощениях бирадикал представляет собой -O-CRaRb-O-CRaRb-, такой как O-CH2-O-CH2-, W представляет собой О, и все из R1, R2, R3, R5 и R5* представляют собой атомы водорода. В некоторых воплощениях Ra представляет собой С1-6алкил, такой как метил. Такие нуклеозиды LNA также известны как нуклеотиды СОС и раскрываются в Mitsuoka et al., Nucleic Acids Research 2009 37(4), 1225-1238, которая тем самым включена посредством ссылки.

Будет понятно то, что, если не определено, нуклеозиды LNA могут находиться в бета-D или альфа-L стереоизоформе.

Неограничивающие типичные нуклеозиды LNA раскрываются в WO 99/014226, WO 00/66604, WO 98/039352, WO 2004/046160, WO 00/047599, WO 2007/134181, WO 2010/077578, WO 2010/036698, WO 2007/090071, WO 2009/006478, WO 2011/156202, WO 2008/154401, WO 2009/067647, WO 2008/150729, Morita et al., Bioorganic & Med.Chem. Lett. 12, 73-76, Seth et al. J. Org. Chem. 2010, Vol 75(5) pp. 1569-81 и Mitsuoka et al., Nucleic Acids Research 2009, 37(4), 1225-1238.

Некоторые примеры нуклеозидов LNA представлены на Схеме 1.

Как проиллюстрировано в Примерах, в некоторых воплощениях изобретения нуклеозиды LNA в олигонуклеотидах представляют собой нуклеозиды бета-D-окси-LNA.

Деградация, опосредованная нуклеазой

Термин «деградация, опосредованная нуклеазой» относится к олигонуклеотиду, способному опосредовать деградацию комплементарной нуклеотидной последовательности при образовании дуплекса с такой последовательностью.

В некоторых воплощениях олигонуклеотид может функционировать посредством деградации нуклеиновой кислоты-мишени, опосредованной нуклеазой, где олигонуклеотиды по изобретению способны рекрутировать нуклеазу, в частности, эндонуклеазу, предпочтительно эндорибонуклеазу (РНКазу), такую как РНКаза Н. Примерами конструкций олигонуклеотидов, которые работают посредством механизмов, опосредованных нуклеазой, являются олигонуклеотиды, которые типично содержат область из по меньшей мере 5 или 6 последовательных нуклеозидов ДНК и фланкированы на одной стороне или на обеих сторонах нуклеозидами, увеличивающими аффинность, например, гэпмеры, хэдмеры и тэйлмеры.

Активность и рекрутирование РНКазы Н

Активность РНКазы Н антисмыслового олигонуклеотида относится к его способности при нахождении в дуплексе с комплементарной молекулой РНК рекрутировать РНКазу Н. В WO 01/23613 предложены способы in vitro для определения активности РНКазы Н, которые можно использовать для определения способности рекрутировать РНКазу Н. Типично олигонуклеотид считается способным рекрутировать РНКазу Н, если он, при предоставлении с комплементарной последовательностью нуклеиновой кислоты-мишени, имеет исходную скорость, измеренную в пмоль/л/мин, по меньшей мере 5%, как, например, по меньшей мере 10% или больше, чем 20% от исходной скорости, определенной при использовании олигонуклеотида, имеющего такую же последовательность оснований, что и тестируемый модифицированный олигонуклеотид, но содержащего только мономеры ДНК с фосфоротиоатными связями между всеми мономерами в олигонуклеотиде, и с использованием методологии, предложенной в Примерах 91-95 WO 01/23613 (включенной тем самым посредством ссылки). Для применения в определении активности РНКазы Н доступна рекомбинантная человеческая РНКаза Н1 от Lubio Science GmbH, Люцерна, Швейцария.

Гэпмер

Антисмысловой олигонуклеотид по изобретению или его непрерывная нуклеотидная последовательность может представлять собой гэпмер. Антисмысловые гэпмеры обычно используются для ингибирования нуклеиновой кислоты-мишени посредством деградации, опосредованной РНКазой Н. Гэпмерный олигонуклеотид, содержит по меньшей мере три отличные структурные области: 5'-фланг, гэп и 3'-фланг - F-G-F' в ориентации '5->3'. Область «гэп» (G) содержит отрезок смежных нуклеотидов ДНК, которые обеспечивают рекрутирование данным олигонуклеотидом РНКазы Н. Данная область гэп фланкирована 5' фланкирующей областью (F), содержащей один или более чем один нуклеозид с модифицированным сахаром, преимущественно высокоаффинные нуклеозиды с модифицированным сахаром, и 3' фланкирующей областью (F'), содержащей один или более чем один нуклеозид с модифицированным сахаром, преимущественно высокоаффинные нуклеозиды с модифицированным сахаром. Один или более чем один нуклеозид с модифицированным сахаром в области F и F' усиливает аффинность данного олигонуклеотида в отношении нуклеиновой кислоты-мишени (т.е. нуклеозиды с модифицированным сахаром, увеличивающие аффинность). В некоторых воплощениях один или более чем один нуклеозид с модифицированным сахаром в области F и F' представляет собой нуклеозид, модифицированный 2'-сахаром, как, например, высокоаффинные модификации 2'-сахаром, такие как выбранные независимо из LNA и 2'-МОЕ.

В конструкции гэпмера самые 5' и 3' нуклеозиды области гэп представляют собой нуклеозиды ДНК, и они располагаются смежно с нуклеозидом с модифицированным сахаром 5' (F) или 3' (F') области соответственно. Фланги могут дополнительно определяться наличием по меньшей мере одного нуклеозида с модифицированным сахаром на самом удаленном конце от области гэп, т.е. на 5'-конце 5'-фланга и на 3'-конце 3'-фланга.

Области F-G-F' образуют непрерывную нуклеотидную последовательность. Антисмысловые олигонуклеотиды по изобретению или их непрерывная нуклеотидная последовательность могут содержать гэпмерную область формулы F-G-F'.

Общая длина гэпмерной конструкции F-G-F' может составлять, например, от 12 до 32 нуклеозидов, как, например, от 13 до 24, как, например, от 14 до 22 нуклеозидов, как, например, от 14 до 17, как, например, от 16 до 18 нуклеозидов. В качестве примера, гэпмерный олигонуклеотид по настоящему изобретению может быть представлен следующими формулами:

F1-8-G5-16-F'1-8, как, например,

F1-8-G7-16-F'2-8

при условии, что общая длина гэпмерных областей F-G-F' составляет по меньшей мере 12, как, например, по меньшей мере 14 нуклеотидов в длину.

Области F, G и F' дополнительно определяются ниже и могут быть включены в формулу F-G-F'.

Гэпмер - гэп, область G

Область G (область гэп) гэпмера представляет собой область нуклеозидов, типично нуклеозидов ДНК, которая обеспечивает рекрутирование данным олигонуклеотидом РНКазы Н, такой как человеческая РНКаза Н1. РНКаза Н представляет собой клеточный фермент, который распознает дуплекс между ДНК и РНК и ферментативно расщепляет молекулу РНК. Подходящим образом, гэпмеры могут иметь область гэп (G) из по меньшей мере 5 или 6 смежных нуклеозидов ДНК, как, например, из 5-16 смежных нуклеозидов ДНК, как, например, из 6-15 смежных нуклеозидов ДНК, как, например, из 7-14 смежных нуклеозидов ДНК, как, например, из 8-12 смежных нуклеозидов ДНК, как, например, из 8-12 смежных нуклеозидов ДНК в длину. Область гэп, G, в некоторых воплощениях может состоять из 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 смежных нуклеозидов ДНК. Цитозин (С) ДНК в области гэп в некоторых случаях может быть метилирован, такие остатки либо аннотируются как 5-метил-цитозин (meC или с «е» вместо «с»). Метилирование цитозина ДНК в гэпе является полезным, если в гэпе присутствуют динуклеотиды cg для уменьшения потенциальной токсичности, причем ожидается, что данная модификация не имеет значимого влияния на эффективность олигонуклеотидов.

В некоторых воплощениях область гэп G может состоять из 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 смежных нуклеозидов ДНК, связанных фосфоротиоатом. В некоторых воплощениях все межнуклеозидные связи в гэпе представляют собой фосфоротиоатные связи.

В то время как традиционные гэпмеры имеют область гэп в виде ДНК, имеется множество примеров модифицированных нуклеозидов, которые обеспечивают рекрутирование РНКазы Н при их использовании в пределах области гэп. Модифицированные нуклеозиды, которые были описаны как способные рекрутировать РНКазу Н при включении в пределы области гэпа, включают, например, альфа-L-LNA, С4' алкилированную ДНК (как описано в РСТ/ЕР2009/050349 и Vester et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 18 (2008) 2296-2300, которые обе включены в данный документ посредством ссылки), нуклеозиды, полученные из арабинозы, подобные ANA и 2'F-ANA (Mangos et al. 2003 J. AM. CHEM. SOC. 125, 654-661), UNA (незапертая нуклеиновая кислота) (как описано в Fluiter et al., Mol. Biosyst., 2009, 10, 1039, включенной в данный документ посредством ссылки). UNA представляет собой незапертую нуклеиновую кислоту, типично где была удалена связь между С2 и С3 рибозы, образуя назаперный остаток «сахара». Модифицированные нуклеозиды, используемые в таких гэпмерах, могут представлять собой нуклеозиды, которые принимают 2' эндо (ДНК-подобную) структуру при введении в область гэп, т.е. имеют модификации, которые обеспечивают рекрутинг РНКазы Н). В некоторых воплощениях область ДНК гэпа (G), описанная в данном документе, возможно может содержать от 1 до 3 нуклеозидов с модифицированным сахаром, которые приобретают 2' эндо (ДНК-подобную) структуру при введении в область гэпа.

Область G - «олигонуклеотид с разорванным гэпом»

В качестве альтернативы, имеются многочисленные сообщения о вставке модифицированного нуклеозида, которая придает 3'-эндоконформацию области гэпа гэпмеров при сохранении некоторой активности РНКазы Н. Такие гэпмеры с областью гэп, содержащей один или более чем один 3'-эндомодифицированный нуклеозид, называются олигонуклеотидами «с разорванным гэпом» или гэпмерами «с разорванным гэпом», см., например, WO 2013/022984. Олигонуклеотиды с разорванным гэпом сохраняют в пределах области гэп достаточную область нуклеозидов ДНК для обеспечения рекрутирования РНКазы Н. Способность конструкции олигонуклеотида с разорванным гэпом рекрутировать РНКазу Н типично является специфичной для последовательности или даже специфичной для соединения - см. Rukov et al. 2015 Nucl. Acids Res. Vol. 43 pp. 8476-8487, в которой раскрыты «олигонуклеотиды с разорванным гэпом», которые рекрутируют РНКазу Н, что в некоторых случаях, обеспечивает более специфичное расщепление РНК-мишени. Модифицированные нуклеозиды, используемые в пределах области гэп олигонуклеотидов с разорванным гэпом, могут, например, представлять собой модифицированные нуклеозиды, которые придают 3' эндоконформацию, такие как 2'-O-метил (ОМе) или 2'-O-МОЕ (МОЕ) нуклеозиды или бета-D LNA нуклеозиды (мостик между С2' и С4' кольца сахара рибозы нуклеозида находится в бета-конформации), такие как бета-D-окси LNA или ScET нуклеозиды.

Как и с гэпмерами, содержащими область G, описанную выше, область гэп олигонуклеотидов с разорванным гэпом или гэпмеров с разорванным гэпом имеет нуклеозиды ДНК на 5'-конце гэпа (рядом с 3'-нуклеозидом области F) и нуклеозид ДНК на 3'-конце гэпа (рядом с 5'-нуклеозидом области F'). Гэпмеры, которые содержат разорванный гэп, типично сохраняют область из по меньшей мере 3 или 4 смежных нуклеозидов ДНК либо на 5'-конце, либо на 3'-конце области гэпа.

Типичные конструкции олигонуклеотидов с разорванным гэпом включают:

F1-8-[D3-4-E1-D3-4]-F'1-8

F1-8-[D1-4-E1-D3-4]-F'1-8

F1-8-[D3-4-E1-D1-4]-F'1-8

где область G находится в пределах скобок [Dn-Er- Dm], D представляет собой непрерывную последовательность нуклеозидов ДНК, Е представляет собой модифицированный нуклеозид (разрыватель гэпа или нуклеозид, разрывающий гэп), и F и F' представляют собой фланкирующие области, как определено в данном документе, и при условии, что общая длина областей гэпмера F-G-F' имеет по меньшей мере 12, как, например, 14 нуклеотидов в длину.

В некоторых воплощениях область G гэпмера с разорванным гэпом содержит по меньшей мере 6 нуклеозидов ДНК, как, например, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 нуклеозидов ДНК. Как описано выше, нуклеозиды ДНК могут быть смежными или возможно могут иметь вкрапления одного или более чем одного модифицированного нуклеозида, при условии, что область гэп G способна опосредовать рекрутирование РНКазы Н.

Гэпмер - фланкирующие области - F и F'

Область F располагается непосредственно рядом с 5' нуклеозидом ДНК области G. Самый 3' нуклеозид области F представляет собой нуклеозид с модифицированным сахаром, такой как высокоаффинный нуклеозид с модифицированным сахаром, например, 2'-замещенный нуклеозид, такой как нуклеозид МОЕ или нуклеозид LNA.

Область F' располагается непосредственно рядом с 3'-нуклеозидом ДНК области G. Самый 5' нуклеозид области F' представляет собой нуклеозид с модифицированным сахаром, такой как высокоаффинный нуклеозид с модифицированным сахаром, например, 2'-замещенный нуклеозид, такой как нуклеозид МОЕ или нуклеозид LNA.

Область F имеет 1-8 смежных нуклеотидов в длину, как, например, 1-6, как, например, 2-6, как, например, 3-4 смежных нуклеотида в длину. Преимущественно самый 5' нуклеозид области F представляет собой нуклеозид с модифицированным сахаром. В некоторых воплощениях два самых 5' нуклеозида области F представляют собой нуклеозиды с модифицированным сахаром. В некоторых воплощениях самый 5' нуклеозид области F представляет собой нуклеозид LNA. В некоторых воплощениях два самых 5' нуклеозида области F представляют собой нуклеозиды LNA. В некоторых воплощениях два самых 5' нуклеозида области F представляют собой 2'-замещенные нуклеозиды, такие как 3' нуклеозиды МОЕ. В некоторых воплощениях самый 5' нуклеозид области F представляет собой 2'-замещенный нуклеозид, такой как нуклеозид МОЕ.

Область F' имеет 2-8 смежных нуклеотидов в длину, как, например, 3-6, как, например, 4-5 смежных нуклеотидов в длину. Преимущественно самый 3' нуклеозид области F' представляет собой нуклеозид с модифицированным сахаром. В некоторых воплощениях два самых 3' нуклеозида области F' представляют собой нуклеозиды с модифицированным сахаром. В некоторых воплощениях два самых 3' нуклеозида области F' представляют собой нуклеозиды LNA. В некоторых воплощениях самый 3' нуклеозид области F' представляет собой нуклеозид LNA. В некоторых воплощениях два самых 3' нуклеозида области F' представляют собой 2'-замещенные нуклеозиды, такие как два 3' нуклеозида МОЕ. В некоторых воплощениях самый 3' нуклеозид области F' представляет собой 2'-замещенный нуклеозид, такой как нуклеозид МОЕ.

Следует отметить то, что когда длина области F или F' составляет один, она преимущественно представляет собой нуклеозид LNA.

В некоторых воплощениях область F и F' независимо состоит из или содержит непрерывную последовательность из нуклеозидов с модифицированным сахаром. В некоторых воплощениях нуклеозиды с модифицированным сахаром области F могут быть независимо выбраны из 2'-O-алкил-РНК звеньев, 2'-O-метил-РНК, 2'-амино-ДНК звеньев, 2'-фтор-ДНК звеньев, 2'-алкокси-РНК звеньев, МОЕ звеньев, LNA звеньев, звеньев арабинонуклеиновой кислоты (ANA) и звеньев 2'-фтор-ANA.

В некоторых воплощениях область F и F' независимо содержит и нуклеозиды LNA, и 2'-замещенные модифицированные нуклеозиды (конструкция со смешанными крыльями).

В некоторых воплощениях область F и F' состоит только из одного типа нуклеозида с модифицированным сахаром, такого как только МОЕ или только бета-D-окси LNA, или только ScET. Такие конструкции также называются однородными флангами или конструкцией однородного гэпмера.

В некоторых воплощениях все нуклеозиды области F или F', или F и F' представляют собой нуклеозиды LNA, такие как независимо выбранные из нуклеозидов бета-D-окси LNA, ENA или ScET. В некоторых воплощениях область F состоит из 1-5, как, например, из 2-4, как, например, из 3-4, как, например, из 1, 2, 3, 4 или 5 смежных нуклеозидов LNA. В некоторых воплощениях все нуклеозиды области F и F' представляют собой нуклеозиды бета-D-окси LNA.

В некоторых воплощениях все нуклеозиды области F или F', или F и F' представляют собой 2'-замещенные нуклеозиды, такие как нуклеозиды ОМе или МОЕ. В некоторых воплощениях область F состоит из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 смежных нуклеозидов ОМе или МОЕ. В некоторых воплощениях только одна из фланкирующих областей может состоять из 2'-замещенных нуклеозидов, таких как нуклеозиды ОМе или нуклеозиды МОЕ. В некоторых воплощениях именно 5' (F) фланкирующая область состоит из 2'-замещенных нуклеозидов, таких как нуклеозиды ОМе или МОЕ, тогда как 3' (F') фланкирующая область содержит по меньшей мере один нуклеозид LNA, такой как нуклеозиды бета-D-окси LNA или нуклеозиды сЕТ. В некоторых воплощениях именно 3' (F') фланкирующая область состоит из 2'-замещенных нуклеозидов, таких как нуклеозиды ОМе или МОЕ, тогда как 5' (F) фланкирующая область содержит по меньшей мере один нуклеозид LNA, как, например, нуклеозиды бета-D-окси LNA или нуклеозиды сЕТ.

В некоторых воплощениях все модифицированные нуклеозиды области F и F' представляют собой нуклеозиды LNA, как, например, независимо выбранные из нуклеозидов бета-D-окси LNA, ENA или ScET, где область F или F', или F и F' возможно может содержать нуклеозиды ДНК (фланг с чередованием, см. их определение для дополнительных подробностей).

В некоторых воплощениях самые 5' и самые 3' нуклеозиды области F и F' представляют собой нуклеозиды LNA, такие как нуклеозиды бета-D-окси LNA или нуклеозиды ScET.

В некоторых воплощениях межнуклеозидная связь между областью F и областью G представляет собой фосфоротиоатную межнуклеозидную связь. В некоторых воплощениях межнуклеозидная связь между областью F' и областью G представляет собой фосфоротиоатную межнуклеозидную связь. В некоторых воплощениях межнуклеозидные связи между нуклеозидами области F или F', F и F' представляют собой фосфоротиоатные межнуклеозидные связи.

Дополнительные конструкции гэпмеров раскрываются в WO 2004/046160, WO 2007/146511 и WO 2008/113832, включенных в данный документ посредством ссылки.

Гэпмер LNA

Гэпмер LNA представляет собой гэпмер, в котором одна или обе области F и F' содержат или состоят из нуклеозидов LNA. Бета-D-окси гэпмер представляет собой гэпмер, в котором одна или обе области F и F' содержат или состоят из бета-D-окси нуклеозидов LNA.

В некоторых воплощениях гэпмер LNA имеет формулу: [LNA]-1-5-[область G]-[LNA]1-5, где область G является такой, как определено в определении области G гэпмера.

В некоторых воплощениях LNA представляет собой бета-D-окси-LNA, и данный гэпмер имеет формулу:

F2-5 LNA, 0-2 ДНК-G7-11 ДНК-F'3-5 LNA, 0-2 ДНК

Гэпмеры МОЕ

Гэпмеры МОЕ представляют собой гэпмеры, в которых области F и F' состоят из нуклеозидов МОЕ. В некоторых воплощениях гэпмер МОЕ имеет конструкцию [МОЕ]1-8-[Область G]-[MOE]1-8, как, например, [МОЕ]2-7-[Область G]5-16-[МОЕ]2-7, как, например, [МОЕ]3-6-[Область G]-[MOE]3-6, где область G является такой, как определено в определении гэпмера. Гэпмеры МОЕ с конструкцией 5-10-5 (МОЕ-ДНК-МОЕ) широко использовали в данной области.

Гэпмер со смешанными крыльями

Гэпмер со смешанными крыльями представляет собой гэпмер LNA, в котором одна или обе области F и F' содержит 2'-замещенный нуклеозид, такой как 2'-замещенный нуклеозид, независимо выбранный из группы, состоящей из звеньев 2'-O-алкил-РНК, 2'-O-метил-РНК, звеньев 2'-амино-ДНК, звеньев 2'-фтор-ДНК, 2'-алкокси-РНК, звеньев МОЕ, звеньев арабинонуклеиновой кислоты (ANA) и звеньев 2'-фтор-ANA, таких как нуклеозиды МОЕ. В некоторых воплощениях, где по меньшей мере одна область F и F' или обе области F и F' содержат по меньшей мере один нуклеозид LNA, остальные нуклеозиды области F и F' независимо выбраны из группы, состоящей из МОЕ и LNA. В некоторых воплощениях, где по меньшей мере одна из областей F и F' или обе области F и F' содержат по меньшей мере два нуклеозида LNA, остальные нуклеозиды области F и F' независимо выбраны из группы, состоящей из МОЕ и LNA. В некоторых воплощениях со смешанными крыльями одна или обе области F и F' могут дополнительно содержать один или более чем один нуклеозид ДНК.

Конструкции гэпмеров со смешанными крыльями раскрываются в WO 2008/049085 и WO 2012/109395, которые обе включаются в данный документ посредством ссылки.

Гэпмеры с флангами с чередованием

Олигонуклеотиды с флангами с чередованием представляют собой LNA гэпмерные олигонуклеотиды, где по меньшей мере один из флангов (F или F') содержит ДНК, помимо нуклеозида(дов) LNA. В некоторых воплощениях по меньшей мере одна область F или F', или обе области F и F' содержат и нуклеозиды LNA, и нуклеозиды ДНК. В таких воплощениях фланкирующая область F или F', или и F, и F' содержит по меньшей мере три нуклеозида, где самые 5' и 3' нуклеозиды области F и/или F' представляют собой нуклеозиды LNA.

В некоторых воплощениях по меньшей мере одна область F или F', или и область F, и F' содержит и нуклеозиды LNA, и нуклеозиды ДНК. В таких воплощениях фланкирующая область F или F', или и F, и F' содержит по меньшей мере три нуклеозида, где самые 5' и 3' нуклеозиды области F или F' представляют собой нуклеозиды LNA, и. Фланкирующие области, которые содержат и нуклеозид LNA, и ДНК, называются флангами с чередованием, так как они содержат чередующийся мотив нуклеозидов LNA-ДНК-LNA. Гэпмеры LNA с флангами с чередованием раскрываются в WO 2016/127002.

Область фланга с чередованием может включать вплоть до 3 смежных нуклеозидов ДНК, как, например, 1-2 или 1 или 2, или 3 смежных нуклеозида ДНК.

Фланг с чередованием может быть аннотирован как серия целых чисел, представляющих число нуклеозидов LNA (L), с последующим числом нуклеозидов ДНК (D), например,

[L]1-3-[D]1-4-[L]1-3

[L]1-2-[D]1-2-[L]1-2-[D]1-2-[L]1-2

В конструкциях олигонуклеотидов они часто будут представлены числами, как, например, 2-2-1 представляет 5' [L]2-[D]2-[L] 3', и 1-1-1-1-1 представляет 5' [L]-[D]-[L]-[D]-[L] 3'. Длина фланга (области F и F') в олигонуклеотидах с флангами с чередованием может независимо составлять от 3 до 10 нуклеозидов, как, например, от 4 до 8, как, например, от 5 до 6 нуклеозидов, как, например, 4, 5, 6 или 7 модифицированных нуклеозидов. В некоторых воплощениях только один из флангов в гэпмерном олигонуклеотиде имеет чередование, тогда как другой составлен из нуклеотидов LNA. Может быть полезным иметь по меньшей мере два нуклеозида LNA на 3'-конце 3'-фланга (F') для придания дополнительной устойчивости к экзонуклеазе. Некоторыми примерами олигонуклеотидов с флангами с чередованием являются:

[L]1-5-[D]1-4-[L]1-3-[G]5-16-[L]2-6

[L]1-2-[D]1-2-[L]1-2-[D]1-2-[L]1-2-[G]5-16-[L]1-2-[D]1-3-[L]2-4

[L]1-5-[G]5-16-[L]-[D]-[L]-[D]-[L]2

при условии, что общая длина гэпмера составляет по меньшей мере 12, как, например, по меньшей мере 14 нуклеотидов в длину.

Область D' или D'' в олигонуклеотиде

Олигонуклеотид по изобретению в некоторых воплощениях может содержать или состоять из непрерывной нуклеотидной последовательности олигонуклеотида, которая является комплементарной нуклеиновой кислоте-мишени, как, например, гэпмер F-G-F' и дополнительные 5' и/или 3'-нуклеозиды. Дополнительные 5' и/или 3'-нуклеозиды могут быть или могут не быть полностью комплементарными нуклеиновой кислоте-мишени. Такие дополнительные 5' и/или 3'-нуклеозиды могут в данном документе называться область D' и D''.

Добавление области D' или D'' может использоваться с целью присоединения смежной нуклеотидной последовательности, такой как гэпмер, к конъюгатной группировке или другой функциональной группе. При использовании для присоединения смежной нуклеотидной последовательности с конъюгатной группировкой она может служить в качестве биорасщепляемого линкера. В качестве альтернативы, ее можно использовать для обеспечения защиты от экзонуклеаз или для легкости синтеза или изготовления.

Область D' и D'' может быть присоединена к 5'-концу области F или к 3'-концу области F', соответственно, с получением конструкций следующих формул D'-F-G-F', F-G-F'-D'' или D'-F-G-F'-D''. В данном случае F-G-F' представляет собой гэпмерную часть олигонуклеотида, и область D' или D'' составляет отдельную часть олигонуклеотида.

Область D' или D'' может независимо содержать или состоять из 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных нуклеотидов, которые могут быть комплементарными или некомплементарными нуклеиновой кислоте-мишени. Смежный с областью F или F' нуклеотид не является нуклеотидом с модифицированным сахаром, таким как ДНК или РНК, или их версии с модифицированным основанием. Область D' или D'' может служить в качестве нуклеазочувствительного биорасщепляемого линкера (см. определение линкеров). В некоторых воплощениях дополнительные 5'- и/или 3'-концевые нуклеотиды связываются фосфодиэфирными связями и представляют собой ДНК или РНК. Биорасщепляемые линкеры на основе нуклеотидов, подходящие для применения в качестве области D' или D'', раскрываются в WO 2014/076195, которая включает в качестве примера динуклеотид ДНК, связанный фосфодиэфиром. Применение биорасщепляемых линкеров в полиолигонуклеотидных конструкциях раскрывается в WO 2015/113922, где они используются для связывания многих антисмысловых конструкций (например, гэпмерных областей) в пределах одного олигонуклеотида.

В одном воплощении олигонуклеотид по изобретению содержит область D' и/или D'', помимо непрерывной нуклеотидной последовательности, которая составляет гэпмер.

В некоторых воплощениях олигонуклеотид по настоящему изобретению может быть представлен следующими формулами:

F-G-F'; в частности, F1-8-G5-16-F'2-8

D'-F-G-F', в частности, D'1-3-F1-8-G5-16-F'2-8

F-G-F'-D'', в частности, F1-8-G5-16-F'2-8-D''1-3

D'-F-G-F'-D'', в частности, D'1-3-F1-8-G5-16-F'2-8-D''1-3

В некоторых воплощениях межнуклеозидная связь, расположенная между областью D' и областью F, представляет собой фосфодиэфирную связь. В некоторых воплощениях межнуклеозидная связь, расположенная между областью F' и областью D'', представляет собой фосфодиэфирную связь.

Конъюгат

Термин «конъюгат» в том виде, в котором он используется в данном документе, относится к олигонуклеотиду, который ковалентно связан с ненуклеотидной группировкой (конъюгатная группировка или область С, или третья область).

Конъюгирование олигонуклеотида по изобретению с одной или более чем одной ненуклеотидной группировкой может улучшать фармакологию данного олигонуклеотида, например, посредством влияния на активность, клеточное распределение, клеточное поглощение или стабильность олигонуклеотида. В некоторых воплощениях конъюгатная группировка модифицирует или улучшает фармакокинетические свойства олигонуклеотида посредством улучшения распределения в клетке, биодоступности, метаболизма, выведения, проницаемости и/или поглощения олигонуклеотида клеткой. В частности, конъюгат может нацеливать олигонуклеотид в конкретный орган, ткань или тип клеток и, посредством этого, улучшать эффективность данного олигонуклеотида в этом органе, ткани или типе клеток. В то же самое время конъюгат может служить для уменьшения активности олигонуклеотида в типах клеток, тканях или органах, не являющихся мишенями, например, активность вне мишени или активность в типах клеток, тканях или органах, не являющихся мишенями.

В WO 93/07883 и WO 2013/033230 предложены подходящие конъюгатные группировки, которые тем самым являются включенными посредством ссылки. Дополнительными подходящими конъюгатными группировками являются группировки, способные к связыванию с рецептором асиалогликопротеина (ASGPR). В частности, подходящими для связывания с ASGPR являются трехвалентные N-ацетилгалактозаминные конъюгатные группировки, см., например, WO 2014/076196, WO 2014/207232 и WO 2014/179620 (включенные тем самым посредством ссылки). Такие конъюгаты служат для усиления поглощения олигонуклеотида в печень при уменьшении его присутствия в почках, увеличивая, посредством этого, отношение конъюгированного олигонуклеотида в печени/почках по сравнению с неконъюгированной версией того же самого олигонуклеотида.

В одном воплощении ненуклеотидная группировка (конъюгатная группировка) выбрана из группы, состоящей из углеводов, лигандов рецептора поверхности клетки, лекарственных веществ, гормонов, липофильных веществ, полимеров, белков, пептидов, токсинов (например, бактериальных токсинов), витаминов, вирусных белков (например, капсидов) или их комбинаций.

Линкеры конъюгатов

Связка или линкер представляет собой соединение между двумя атомами, которое связывает одну химическую группу или интересующий сегмент с другой химической группой или интересующим сегментом посредством одной или более чем одной ковалентной связи. Конъюгатные группировки могут присоединяться к олигонуклеотиду непосредственно или через связывающую группировку (например, линкер или связку). Линкеры служат для ковалентного присоединения одной области, например, конъюгатной группировки, к другой области, например, олигонуклеотиду (например, к концам области А или С).

В некоторых воплощениях изобретения конъюгат или конъюгат олигонуклеотида по изобретению возможно может содержать линкерную область, которая располагается между олигонуклеотидом и конъюгатной группировкой. В некоторых воплощениях линкер между конъюгатом и олигонуклеотидом является биорасщепляемым. Линкер и олигонуклеотид часто соединяются посредством фосфодиэфирной связи.

Биорасщепляемые линкеры (область В) содержат или состоят из физиологически лабильной связи, которая является расщепляемой при условиях, которые обычно встречаются или являются аналогичными условиям, которые встречаются в организме млекопитающего. Условия, при которых физиологически лабильные линкеры подвергаются химическому превращению (например, расщеплению), включают такие химические условия, как рН, температура, окислительные или восстановительные условия или агенты и концентрация соли, обнаруженные в или аналогичные условиям, встречающимся в клетках млекопитающих. Внутриклеточные условия у млекопитающих также включают присутствие ферментативной активности, обычно присутствующей в клетке млекопитающего, как, например, от протеолитических ферментов или гидролитических ферментов, или нуклеаз. В одном воплощении биорасщепляемый линкер чувствителен к расщеплению нуклеазой S1. В предпочтительном воплощении нуклеазочувствительный линкер содержит от 1 до 10 нуклеозидов, как, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 нуклеозидов, более предпочтительно - от 2 до 6 нуклеозидов, и наиболее предпочтительно - от 2 до 4 связанных нуклеозидов, содержащих по меньшей мере две последовательные фосфодиэфирные связи, как, например, по меньшей мере 3 или 4, или 5 последовательных фосфодиэфирных связей. Предпочтительно нуклеозидами являются нуклеозиды ДНК или РНК.

В одном воплощении линкер между олигонуклеотидом и конъюгатной группировкой представляет собой физиологически лабильный линкер, состоящий из 2-5 последовательных нуклеозидов, связанных фосфодиэфирными связями на 5'-или 3'-конце непрерывной нуклеотидной последовательности антисмыслового соединения. В некоторых воплощениях последовательные фосфодиэфирные связи представляют собой динуклеотид с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из АА, AT, AC, AG, ТА, ТТ, ТС, TG, СА, СТ, СС, CG, GA, GT, GC, или GG. В некоторых воплощениях последовательные фосфодиэфирные связи представляют собой тринуклеотид последовательности AAA, ААТ, AAC, AAG, АТА, АТТ, АТС, ATG, АСА, ACT, АСС, ACG, AGA, AGT, AGC, AGG, TAA, TAT, ТАС, TAG, ТТА, ТТТ, ТТС, TAG, ТСА, ТСТ, ТСС, TCG, TGA, TGT, TGC, TGG, САА, CAT, САС, CAG, СТА, CTG, СТС, СТТ, CCA, ССТ, ССС, CCG, CGA, CGT, CGC, CGG, GAA, GAT, GAC, CAG, GTA, GTT, GTC, GTG, GCA, GCT, GCC, GCG, GGA, GGT, GGC или GGG. В конкретных примерах в качестве биорасщепляемого линкера между непрерывной нуклеотидной последовательностью и конъюгатной группировкой использовали динуклеотид СА, связанный фосфодиэфиром, с тремя последовательными фосфодиэфирными связями. Биорасщепляемые линкеры, содержащие фосфодиэфир, более подробно описываются в WO 2014/076195 (включенной тем самым посредством ссылки). В конъюгатном соединении с биорасщепляемым линкером от олигонуклеотида отщепляется по меньшей мере примерно 50% конъюгатной группировки, как, например, отщепляется по меньшей мере примерно 60%, как, например, отщепляется по меньшей мере примерно 70%, как, например, отщепляется по меньшей мере примерно 80%, как, например, отщепляется по меньшей мере примерно 85%, как, например, отщепляется по меньшей мере примерно 90%, как, например, от расщепляемого олигонуклеотида отщепляется по меньшей мере примерно 95% конъюгатной группировки по сравнению со стандартом.

Конъюгаты также могут быть связаны с олигонуклеотидом через небиорасщепляемые линкеры, или в некоторых воплощениях конъюгат может содержать нерасщепляемый линкер, который ковалентно присоединяется к биорасщепляемому линкеру. Линкеры, которые не обязательно являются биорасщепляемыми, главным образом, служат для ковалентного присоединения конъюгатной группировки к олигонуклеотиду или биорасщепляемому линкеру и потенциально создают некоторое расстояние между конъюгатной группировкой и олигонуклеотидом. Некоторые типичные линкеры (область Y) включают 8-амино-3,6-диоксаоктановую кислоту (ADO), сукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-I-карбоксилат (SMCC), 6-аминогексановую кислоту (АНЕХ или AHA), 6-аминогексилокси, 4-аминомасляную кислоту, 4-аминоциклогексилкарбоновую кислоту, сукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-I-карбокси-(6-амидо-капроат) (LCSMCC), сукцинимидил-м-малеимидо-бензойлат (MBS), сукцинимидил-N-е-малеимидо-капройлат (EMCS), сукцинимидил-6-(бета-малеимидо-пропионамидо)гексаноат (SMPH), сукцинимидил-N-(а-малеимидоацетат) (AMAS), сукцинимидил-4-(п-малеимидофенил)бутират (SMPB), бета-аланин (бета-ALA), фенилглицин (PHG), 4-аминоциклогексановую кислоту (АСНС), бета-(циклопропил)аланин (бета-CYPR), аминодекановую кислоту (ADC), алилендиолы, полиэтиленгликоли, аминокислоты и тому подобное. Нерасщепляемые линкеры также могут содержать структуру цепи или олигомер из повторяющихся звеньев, таких как этиленгликоль, аминокислотные звенья или аминоалкильные группы. В некоторых воплощениях линкер (область Y) представляет собой аминоалкил, такой как С236аминоалкильная группа, включающая, например, С612аминоалкильные группы. В некоторых воплощениях линкер (область Y) представляет собой С6аминоалкильную группу (также именуемую С6 линкер). Линкерные группы конъюгата могут традиционно присоединяться к олигонуклеотиду посредством применения аминомодифицированного олигонуклеотида и активированной сложноэфирной группы на конъюгатной группе. Связывающая группа между аминоалкилом и олигонуклеотидом может, например, представлять собой фосфоротиоат или фосфодиэфир, или одну из других нуклеозидных связывающих групп, на которые дается ссылка в данном документе. Конъюгатное соединение по настоящему изобретению может состоять из следующих областей С-В-А (конъюгатная группировка-биорасщепляемый линкер-олигонуклеотид/непрерывная нуклеотидная последовательность) или C-Y-B-A (конъюгатная группировка-нерасщепляемый линкер-биорасщепляемый линкер-олигонуклеотид/непрерывная нуклеотидная последовательность).

Лечение

Термины «лечение», «осуществление лечения», «лечит» или тому подобные используются в данном документе для общего обозначения получения желательного фармакологического и/или физиологического эффекта. Данный эффект является терапевтическим в показателях частичного или полного излечения заболевания и/или вредного эффекта, приписываемого заболеванию. Термин «лечение» в том виде, в котором он используется в данном документе, охватывает любое лечение заболевания у субъекта и включает: (а) ингибирование заболевания, т.е. задержку его развития, подобную ингибированию увеличения уровня HBsAg и/или HBeAg; или (б) уменьшение интенсивности (т.е. облегчение) заболевания, т.е. вызов регрессии заболевания, подобно подавлению продукции HBsAg и/или HBeAg. Таким образом, соединение, которое уменьшает интенсивность и/или ингибирует инфекцию HBV, представляет собой соединение, которое лечит инфекцию HBV. Предпочтительно термин «лечение» в том виде, в котором он используется в данном документе, относится к медицинскому вмешательству в уже проявившееся расстройство, подобно лечению уже определенной и проявившейся инфекции HBV.

Предупреждение

В данном документе термин «осуществление предупреждения», «предупреждение» или «предупреждает» относится к профилактическому лечению, т.е. к мерам или процедуре, целью которой является предупреждение, а не излечение заболевания. Предупреждение означает то, что получается желательный фармакологический и/или физиологический эффект, который является профилактическим в показателях полного или частичного предупреждения заболевания или его симптома. Соответственно, фраза «предупреждение инфекции HBV» в данном документе включает предупреждение у субъекта появления инфекции HBV и предупреждение появления симптомов инфекции HBV. В настоящем изобретении, в частности, рассматривается предупреждение инфекции HBV у детей от матерей, инфицированных HBV.

Пациент

Для целей настоящего изобретения «субъект» (или «пациент») может представлять собой позвоночное. В контексте настоящего изобретения термин «субъект» включает и людей, и других животных, особенно млекопитающих, и другие организмы. Таким образом, предложенные в данном документе средства и способы являются применимыми и к терапии человека, и к ветеринарным применениям. Соответственно, описанный в данном документе субъект может быть животным, таким как мышь, крыса, хомяк, кролик, морская свинка, хорек, кошка, собака, курица, овца, виды крупного рогатого скота, лошадь, верблюд или примат. Предпочтительно субъект представляет собой млекопитающее. Более предпочтительно субъект представляет собой человека.

Инфекция HBV

Термин «инфекция вирусом гепатита В» или «инфекция HBV» является общеизвестным в данной области и относится к инфекционному заболеванию, которое вызвано вирусом гепатита В (HBV) и поражает печень. Инфекция HBV может быть острой или хронической инфекцией. Некоторые инфицированные люди не имеют симптомов во время исходной инфекции, и у некоторых развивается быстрое начало заболевания со рвотой, желтоватой кожей, утомляемостью, темной мочой и болью в области живота ("Hepatitis В Fact sheet № 204". who.int. Июль 2014 г. Скачанный 4 ноября 2014 г.). Данные симптомы часто длятся несколько недель и могут приводить к смерти. До начала симптомов может проходить от 30 до 180 суток. У 90% тех, кто инфицировался около момента рождения, развивается хроническая инфекция гепатитом В, тогда как она развивается у 10% инфицированных в возрасте старше пяти лет ("Hepatitis В FAQs for the Public - Transmission", U.S. Centers for Disease Control and Prevention (CDC), скачано 29.11.2011). У большинства с хроническим заболеванием нет симптомов; однако, в конечном счете, могут развиваться цирроз и рак печени (Chang, 2007, Semin Fetal Neonatal Med, 12: 160-167). Данные осложнения приводят к смерти 15-25% имеющих хроническое заболевание ("Hepatitis В Fact sheet № 204". who.int. July 2014, скачанный 4 ноября 2014 г.). В данном документе термин «инфекция HBV» включает острую и хроническую инфекцию гепатитом В. Термин «инфекция HBV» также включает бессимптомную стадию исходной инфекции, симптоматические стадии, а также бессимптомную хроническую стадию инфекции HBV.

Соединение

В данном документе термин «соединение» означает любую молекулу нуклеиновой кислоты, такую как молекулы РНКи или антисмысловые олигонуклеотиды согласно изобретению или любой конъюгат, содержащий такую молекулу нуклеиновой кислоты. Например, описанное в данном документе соединение может представлять собой молекулу нуклеиновой кислоты, нацеленную на PAPD5 или PAPD7, в частности, антисмысловой олигонуклеотид.

Композиция

Для описания соединения - молекулы нуклеиновой кислоты - также можно использовать термин «композиция». Композиция молекулы нуклеиновой кислоты содержит меньше, чем 20% примесей, предпочтительно меньше, чем 15% примесей или 10% примесей, более предпочтительно меньше, чем 9, 8, 7 или 6% примесей, наиболее предпочтительно меньше, чем 5% примесей. Данные примеси типично представляют собой молекулы нуклеиновых кислот, которые на один или два нуклеотида короче (n-1 или n-2), чем компонент в виде молекулы главной нуклеиновой кислоты.

Настоящее изобретение описывается далее со ссылкой на неограничивающие графические материалы и примеры.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

PAPD5 и PAPD7 представляют собой неканонические поли(А)-полимеразы, которые принадлежат к надсемейству нуклеотидилтрансфераз, подобных полимеразе β. В РСТ/ЕР2017/064981 PAPD5 и PAPD7 были идентифицированы как релевантные мишени для ингибирования инфекции HBV посредством ингибирования продукции поверхностного антигена HBV (HBsAg) и экспрессии РНК HBV во время инфекции HBV двумя маленькими молекулами, с последующим подтверждением с пулами соединений миРНК. В РСТ/ЕР2017/064980 были описаны антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные или на PAPD5, или на PAPD7, и они были объединены для достижения ингибирования in vitro инфекции HBV.

В настоящем изобретении были идентифицированы целевые последовательности из 12-22 нуклеотидов в длину, которые являются общими между мРНК человеческого PAPD5 и человеческого PAPD7, для того, чтобы иметь способность ингибировать обе мишени одной молекулой нуклеиновой кислоты. Имеется примерно 4500 общих сайтов-мишеней между пре-мРНК человеческого PAPD5 и человеческого PAPD7. В показателях получения фармацевтически премлемой молекулы необходимо принимать во внимание другие параметры, такие как число побочных целей, а также консерватизм по отношению к другим соединениям для обеспечения доказательства концепции in vivo, а также действенного фармакокинетического/фармакодинамического (PK/PD) моделирования.

Олигонуклеотиды по изобретению

В настоящем изобретении были идентифицированы новые антисмысловые олигонуклеотиды, которые способны ингибировать экспрессию и PAPD5, и PAPD7 in vitro и in vivo. Данные олигонуклеотиды являются комплементарными одному из трех сайтов-мишеней от 16 до 22 нуклеотидов в длину, которые присутствуют и в человеческом PAPD5, и в человеческом PAPD7.

Ингибирование достигается гибридизацией антисмыслового олигонуклеотида с нуклеиновой кислотой-мишенью, кодирующей PAPD5, и нуклеиновой кислотой-мишенью, кодирующей PAPD7. Понятно то, что та же самая молекула не должна одновременно гибридизоваться с двумя мишенями для того, чтобы быть эффективной.

Нуклеиновая кислота-мишень 1 может представлять собой последовательность PAPD5 млекопитающего, такую как последовательность, выбранная из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 3 и 5.

Нуклеиновая кислота-мишень 2 может представлять собой последовательность PAPD7 млекопитающего, такую как последовательность, выбранная из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 4 и 6.

В некоторых воплощениях антисмысловой олигонуклеотид по изобретению способен модулировать экспрессию мишени 1 и мишени 2 посредством их ингибирования или понижающей регуляции. Предпочтительно такая модуляция дает ингибирование экспрессии по меньшей мере на 50% по сравнению с нормальным уровнем экспрессии мишеней, более предпочтительно по меньшей мере 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% ингибирования по сравнению с нормальным уровнем экспрессии мишеней. В некоторых воплощениях олигонуклеотиды по изобретению способны ингибировать уровни экспрессии мРНК PAPD5 и PAPD7 по меньшей мере на 65-98%, как, например, на 70-95% in vitro с использованием клеток HeLa, причем данный интервал уменьшения уровня мишени является полезным в показателях отбора олигонуклеотидов с хорошей корреляцией с уменьшением уровня антигена HBV, как, например, уменьшения уровня HBsAg и/или HBeAg. В некоторых воплощениях соединения по изобретению могут иметь способность ингибировать уровни экспрессии белка PAPD5 и PAPD7 по меньшей мере на 50% in vitro с использованием клеток HeLa. В данном документе в разделе Материалы и методы и в Примерах приводятся анализы, которые можно использовать для измерения ингибирования РНК-мишени в клетках HeLa. Модуляция мишени запускается гибридизацией между непрерывной нуклеотидной последовательностью, такой как область гэпмера, олигонуклеотида и нуклеиновых кислот-мишеней. В некоторых воплощениях олигонуклеотид по изобретению содержит несоответствия между олигонуклеотидом или непрерывной нуклеотидной последовательностью и одной или обеими нуклеиновыми кислотами-мишенями. Несмотря на несоответствия, гибридизация с нуклеиновой кислотой-мишенью все еще может быть достаточной для демонстрации желательной модуляции экспрессии PAPD5 и PAPD7. Пониженная аффинность связывания, возникающая из-за несоответствий, преимущественно может компенсироваться увеличенной длиной олигонуклеотида и/или увеличенным числом модифицированных нуклеозидов, способных увеличивать аффинность связывания с мишенью в пределах олигонуклеотидной последовательности. Преимущественно олигонуклеотиды по настоящему изобретению содержат модифицированные нуклеозиды, способные увеличивать аффинность связывания, такие как нуклеозиды, модифицированные 2'-сахаром, включая LNA.

Один аспект настоящего изобретения относится к антисмысловому олигонуклеотиду из 12-32 нуклеотидов в длину, который содержит непрерывную нуклеотидную последовательность из 12-22 нуклеотидов в длину, которая способна ингибировать экспрессию и PAPD5, и PAPD7. В некоторых воплощениях данный олигонуклеотид содержит непрерывную последовательность, которая является по меньшей мере на 90% комплементарной, как, например, по меньшей мере на 91%, как, например, по меньшей мере на 92%, как, например, по меньшей мере на 93%, как, например, по меньшей мере на 94%, как, например, по меньшей мере на 95%, как, например, по меньшей мере на 96%, как, например, по меньшей мере на 97%, как, например, по меньшей мере на 98% или на 100% комплементарной нуклеиновым кислотам-мишеням SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2 или их природным вариантам.

В одном воплощении антисмысловой олигонуклеотид по изобретению или его непрерывная нуклеотидная последовательность является полностью комплементарной (100%-ная комплементарность) области нуклеиновых кислот-мишеней или в некоторых воплощениях может содержать одно или два несоответствия между олигонуклеотидом и нуклеиновыми кислотами-мишенями.

В некоторых воплощениях антисмысловой олигонуклеотид содержит непрерывную нуклеотидную последовательность из 12-22 нуклеотидов в длину с по меньшей мере 93%-ной комплементарностью, как, например, полной (или 100%-ной) комплементарностью с областью нуклеиновой кислоты-мишени, присутствующей в SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2.

В некоторых воплощениях антисмысловой олигонуклеотид или непрерывная нуклеотидная последовательность по изобретению по меньшей мере на 93% комплементарна, как, например, полностью (или на 100%) комплементарна нуклеиновой кислоте-мишени SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4.

В некоторых воплощениях антисмысловой олигонуклеотид или непрерывная нуклеотидная последовательность по изобретению по меньшей мере на 93% комплементарна, как, например, полностью (или на 100%) комплементарна нуклеиновой кислоте-мишени SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6.

В некоторых воплощениях антисмысловой олигонуклеотид или непрерывная нуклеотидная последовательность является на 100% комплементарной положению 64669-69429 на SEQ ID NO: 1 и положению 29514-29530 на SEQ ID NO: 2.

В некоторых воплощениях антисмысловой олигонуклеотид или непрерывная нуклеотидная последовательность является на 100% комплементарной положению 64670-69685 на SEQ ID NO: 1 и положению 29515-29530 на SEQ ID NO: 2.

В некоторых воплощениях антисмысловой олигонуклеотид или непрерывная нуклеотидная последовательность является на 100% комплементарной положению 69414-69429 на SEQ ID NO: 1 и положению 30731-30746 на SEQ ID NO: 2.

В некоторых воплощениях антисмысловой олигонуклеотид или непрерывная нуклеотидная последовательность является на 100% комплементарной положению 759-781 на SEQ ID NO: 1 и положению 1032-1054 на SEQ ID NO: 2.

В некоторых воплощениях антисмысловой олигонуклеотид по изобретению содержит или состоит из 12-32 нуклеотидов в длину, как, например, от 14 до 25, как, например, от 15 до 22, как, например, от 16 до 20 смежных нуклеотидов в длину.

В некоторых воплощениях непрерывная нуклеотидная последовательность антисмыслового олигонуклеотида, которая является комплементарной нуклеиновым кислотам-мишеням, содержит или состоит из 12-22, как, например, из 14-20, как, например, из 16-20, как, например, из 15-18, как, например, из 16-18, как, например, из 16-17 смежных нуклеотидов в длину.

В некоторых воплощениях антисмысловой олигонуклеотид или его непрерывная нуклеотидная последовательность содержит или состоит из 22 или менее нуклеотидов, как, например, из 20 или менее нуклеотидов, как, например, из 17 или менее нуклеотидов. Следует понимать то, что любой интервал, приведенный в данном документе, включает конечные точки данного интервала. Соответственно, если говорится, что олигонуклеотид включает от 12 до 32 нуклеотидов, включаются и 12, и 32 нуклеотида.

В некоторых воплощениях антисмысловой олигонуклеотид или непрерывная нуклеотидная последовательность содержит или состоит из 12-32 нуклеотидов в длину с по меньшей мере 93%-ой идентичностью, предпочтительно 100%-ной идентичностью с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 7-16.

В некоторых воплощениях антисмысловой олигонуклеотид или непрерывная нуклеотидная последовательность содержит или состоит из 12-32 нуклеотидов в длину с по меньшей мере 93%-ой идентичностью, предпочтительно 100%-ной идентичностью с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 17-19.

В некоторых воплощениях антисмысловой олигонуклеотид или непрерывная нуклеотидная последовательность содержит или состоит из 12-32 нуклеотидов в длину с по меньшей мере 93%-ой идентичностью, предпочтительно 100%-ной идентичностью с последовательностью SEQ ID NO: 17 или 18.

В некоторых воплощениях антисмысловой олигонуклеотид или непрерывная нуклеотидная последовательность содержит или состоит из 12-32 нуклеотидов в длину с по меньшей мере 93%-ой идентичностью, предпочтительно 100%-ной идентичностью с последовательностью SEQ ID NO: 19.

В другом аспекте данное изобретение относится к молекулам миРНК, где антисмысловая нить имеет по меньшей мере 93%-ную идентичность, предпочтительно 100%-ную идентичность с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 17-19.

В другом аспекте данное изобретение относится к молекулам кшРНК, где область данной молекулы имеет по меньшей мере 93%-ную идентичность, предпочтительно 100%-ную идентичность с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 17-19.

Понятно то, что непрерывные последовательности нуклеиновых оснований (мотив последовательности) могут быть модифицированы, например, для увеличения нуклеазоустойчивости и/или аффинности связывания с нуклеиновой кислотой-мишенью.

Картина, с которой высокоаффинные модифицированные нуклеотиды включаются в олигонуклеотидную последовательность, обычно называется конструкцией олигонуклеотида.

Олигонуклеотиды по изобретению конструируются с модифицированными нуклеозидами и нуклеозидами ДНК. Преимущественно используются высокоаффинные модифицированные нуклеозиды.

В одном воплощении данный олигонуклеотид содержит по меньшей мере 1 модифицированный нуклеозид, как, например, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15 или по меньшей мере 16 модифицированных нуклеозидов. В одном воплощении данный олигонуклеотид содержит от 1 до 10 модифицированных нуклеозидов, как, например, от 2 до 9 модифицированных нуклеозидов, как, например, от 3 до 8 модифицированных нуклеозидов, как, например, от 4 до 7 модифицированных нуклеозидов, как, например, 6 или 7 модифицированных нуклеозидов. Подходящие модификации описываются в разделе «Определения» под «модифицированным нуклеозидом», «высокоаффинными модифицированными нуклеозидами», «модификациями сахаров», «модификациями 2'-сахаром» и «запертыми нуклеиновыми кислотами (LNA)».

В одном воплощении данный олигонуклеотид содержит один или более чем один нуклеозид с модифицированным сахаром, как, например, нуклеозиды, модифицированные 2'-сахаром. Предпочтительно олигонуклеотид по изобретению содержит один или более чем один нуклеозид, модифицированный 2'-сахаром, независимо выбранный из группы, состоящей из 2'-O-алкил-РНК, 2'-O-метил-РНК, 2'-алкокси-РНК, 2'-O-метоксиэтил-РНК, 2'-амино-ДНК, 2'-фтор-ДНК, арабинонуклеиновой кислоты (ANA), 2'-фтор-ANA и нуклеозидов LNA. Полезно, если один или более чем один модифицированный нуклеозид представляет собой запертую нуклеиновую кислоту (LNA). Часто используемыми нуклеозидами LNA являются окси-LNA или сЕТ.

В другом воплощении олигонуклеотид содержит по меньшей мере одну модифицированную межнуклеозидную связь. Подходящие межнуклеозидные модификации описываются в разделе «Определения» под заголовком «Модифицированная межнуклеозидная связь». Полезным является если по меньшей мере 75%, как, например, все межнуклеозидные связи в пределах непрерывной нуклеотидной последовательности представляют собой фосфоротиоатные или боранофосфатные межнуклеозидные связи. В некоторых воплощениях все межнуклеотидные связи в непрерывной последовательности олигонуклеотида представляют собой фосфоротиоатные связи.

В некоторых воплощениях олигонуклеотид по изобретению содержит по меньшей мере один нуклеозид LNA, как, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 нуклеозидов LNA, как, например, от 2 до 6 нуклеозидов LNA, как, например, от 3 до 7 нуклеозидов LNA, от 4 до 8 нуклеозидов LNA или 3, 4, 5, 6, 7 или 8 нуклеозидов LNA. В некоторых воплощениях по меньшей мере 75% модифицированных нуклеозидов в олигонуклеотиде представляют собой нуклеозиды LNA, как, например, 80%, как, например, 85%, как, например, 90% модифицированных нуклеозидов представляют собой нуклеозиды LNA. В еще одном другом воплощении все модифицированные нуклеозиды в олигонуклеотиде представляют собой нуклеозиды LNA. В другом воплощении олигонуклеотид может содержать и бета-D-окси-LNA, и один или более чем один из следующих нуклеозидов LNA: тио-LNA, амино-LNA, окси-LNA, ScET и/или ENA либо в бета-D, либо в альфа-L конфигурациях, либо их комбинации. В другом воплощении все цитозиновые звенья LNA представляют собой 5-метил-цитозин. Для нуклеазоустойчивости олигонуклеотида или непрерывной нуклеотидной последовательности полезно иметь по меньшей мере 1 нуклеозид LNA на 5'-конце и по меньшей мере 2 нуклеозида LNA на 3'-конце нуклеотидной последовательности.

В одном воплощении данного изобретения олигонуклеотид по изобретению способен рекрутировать РНКазу Н.

В настоящем изобретении полезной структурной конструкцией является гэпмерная конструкция, как описано в разделе «Определения», например, под заголовком «Гэпмер», «LNA гэпмер», «МОЕ гэпмер» и «Гэпмер со смешанными крыльями», «Гэпмер с флангами с чередованием». Конструкция гэпмера включает гэпмеры с однородными флангами, с флангами в виде смешанных крыльев, с флангами с чередованием и конструкции с разорванным гэпом. В настоящем изобретении полезно, если олигонуклеотид по изобретению представляет собой гэпмер с конструкцией F-G-F'. Помимо конструкций F-G-F', описанных в разделах определений, одна конструкция может представлять собой конструкцию, где области крыльев F и F' независимо содержат 1-8 нуклеозидов, модифицированных 2'-сахаром, и G представляет собой область гэпа от 5 до 16 нуклеозидов, которая способна рекрутировать РНКазу Н.

В некоторых воплощениях гэпмер представляет собой гэпер LNA с однородными флангами или с флангами с чередованием.

В некоторых воплощениях данного изобретения гэпмер LNA выбран из следующих конструкций с однородными флангами: 2-11-3, 2-11-4, 2-12-2, 2-12-3, 2-13-2, 2-9-6, 3-10-3, 3-10-4, 3-11-2, 3-11-3, 3-12-2, 3-9-4, 4-10-2, 4-10-3, 4-11-2, 4-7-5, 4-8-4, 4-9-3, 5-10-2, 5-6-5, 5-7-4, 5-7-5, 5-8-3, 5-8-4, 5-9-2 или 6-9-2.

В некоторых воплощениях данного изобретения гэпмер LNA выбран из следующих конструкций с флангами с чередованием: 4-7-1-1-3, 4-9-1-1-2, 1-1-3-7-1-1-2, 1-1-3-9-2, 2-1-1-9-2, 2-1-1-9-3.

В Таблице 5 и 7 (раздел Материалы и Методы) перечислены предпочтительные конструкции каждого мотива последовательности.

Во всех случаях конструкция F-G-F' может дополнительно включать область D' и/или D'', как описано в разделе «Определения» под заголовком «Область D' или D в олигонуклеотиде». В некоторых воплощениях олигонуклеотид по изобретению имеет 1, 2 или 3 нуклеозидных звена, связанных фосфодиэфиром, таких как звенья ДНК, на 5'- или 3'-конце гэпмерной области. В некоторых воплощениях олигонуклеотид по изобретению состоит из двух 5'-нуклеозидов ДНК, связанных фосфодиэфиром, с последующей гэпмерной областью F-G-F', как определено в разделе «Определения». Помимо конструкций D'-F-G-F'-D'', описанных в разделах определений, одной конструкцией может быть антисмысловой олигонуклеотид, в котором а) область F составляет от 1 до 6 нуклеотидов в длину и состоит из 2-5 идентичных нуклеозидов LNA, таких как бета-D-окси LNA или сЕТ, и 0-3 нуклеозидов ДНК; и б) область F' составляет от 2 до 6 нуклеотидов в длину и состоит из 2-5 идентичных нуклеозидов LNA, таких как бета-D-окси LNA или сЕТ, и 0-3 нуклеозидов ДНК; в) область G состоит из 5-11, как, например, 7-10 нуклеотидов ДНК, и г) возможно область D' состоит из 1-3 нуклеозидов ДНК, связанных фосфодиэфиром. Олигонуклеотиды, которые содержат звенья ДНК, связанные фосфодиэфиром, на 5'- и 3'-конце, подходят для конъюгирования и могут дополнительно содержать конъюгатную группировку, как описано в данном документе. Для доставки в печень особенно полезными в качестве конъюгатных группировок являются группировки, нацеленные на ASGPR, см. раздел «Конъюгат» ниже относительно дополнительных подробностей.

Для определенных воплощений изобретения олигонуклеотид выбирают из группы олигонуклеотидных соединений с CMP ID NO (идентификационный номер соединения): от 7_1 до 7_83 (см. олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 5) или их фармацевтически приемлемых солей.

Для определенных воплощений изобретения олигонуклеотид выбирают из группы олигонуклеотидных соединений с CMP ID NO: от 8_1 до 8_81 (см. олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 5) или их фармацевтически приемлемых солей.

Для определенных воплощений изобретения олигонуклеотид выбирают из группы олигонуклеотидных соединений с CMP ID NO: от 9_1 до 9_12 (см. олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 5) или их фармацевтически приемлемых солей.

Для определенных воплощений изобретения олигонуклеотид выбирают из группы олигонуклеотидных соединений с CMP ID NO: от 10_1 до 10_18 (см. олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 5) или их фармацевтически приемлемых солей.

Для определенных воплощений изобретения олигонуклеотид выбирают из группы олигонуклеотидных соединений с CMP ID NO: от 11_1 до 11_26 (см. олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 5) или их фармацевтически приемлемых солей.

Для определенных воплощений изобретения олигонуклеотид выбирают из группы олигонуклеотидных соединений с CMP ID NO: от 12_1 до 12_15 (см. олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 5) или их фармацевтически приемлемых солей.

Для определенных воплощений изобретения олигонуклеотид выбирают из группы олигонуклеотидных соединений с CMP ID NO: от 13_1 до 13_2 (см. олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 5).

Для определенных воплощений изобретения олигонуклеотид выбирают из группы олигонуклеотидных соединений с CMP ID NO: от 14_1 до 14_13 (см. олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 5) или их фармацевтически приемлемых солей.

Для определенных воплощений изобретения олигонуклеотид выбирают из группы олигонуклеотидных соединений с CMP ID NO: от 15_1 до 15_21 (см. олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 5) или их фармацевтически приемлемых солей.

Для определенных воплощений изобретения олигонуклеотид выбирают из группы олигонуклеотидных соединений с CMP ID NO: от 16_1 до 16_5 (см. олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 5).

Для определенных воплощений изобретения олигонуклеотид выбирают из группы олигонуклеотидных соединений с CMP ID NO: от 17_1 до 17_183 (см. олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 7) или их фармацевтически приемлемых солей.

Для определенных воплощений изобретения олигонуклеотид выбирают из группы олигонуклеотидных соединений с CMP ID NO: от 18_1 до 18_31 или от 18_250 до 18_361 (см. олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 7) или их фармацевтически приемлемых солей.

Для определенных воплощений изобретения олигонуклеотид выбирают из группы олигонуклеотидных соединений с CMP ID NO: от 18_32 до 18_249 или от 18_362 до 18_610 (см. олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 7) или их фармацевтически приемлемых солей.

Для определенных воплощений изобретения олигонуклеотид выбирают из группы олигонуклеотидных соединений с CMP ID NO: от 19_1 до 19_22 (см. олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 7) или их фармацевтически приемлемых солей.

В одном воплощении данного изобретения олигонуклеотид выбран из группы олигонуклеотида с CMP ID NO: 18_1, 18_5, 18_10, 18_15, 18_18, 18_19, 18_24, 18_27, 18_30, 18_346, 18_347, 18_357, 17_10, 17_137 и 17_139.

В одном воплощении данного изобретения олигонуклеотид выбран из группы олигонуклеотида с CMP ID NO: 18_1, 18_15, 18_30, 17_10, 17_137 и 17_139.

В другом воплощении данного изобретения олигонуклеотид может содержать по меньшей мере одну стереоопределенную межнуклеозидную связь, такую как стереоопределенная фосфоротиоатная межнуклеозидная связь.

Ключевым преимуществом получения стереоопределенных олигонуклеотидных вариантов является способность увеличивать разнообразие по мотиву последовательности и выбирать стереоопределенные олигонуклеотиды, включающие подбиблиотеки стереоопределенных олигонуклеотидов, которые имеют улучшенные медицинские химические свойства по сравнению с родительским олигонуклеотидом.

В некоторых воплощениях улучшенное медицинское химическое свойство (или улучшенные свойства) выбрано из одного или более чем одного из повышенной мощности, повышенной удельной активности, повышенного поглощения клетками, повышенной эффективности, измененного биораспределения, пониженных эффектов вне мишени, улучшенного различения несоответствий, пониженной токсичности, пониженной иммуногенности, измененного связывания с сывороточным белком, улучшенной продолжительности действия и стабильности. Улучшение одного или более чем одного свойства оценивается по сравнению с родительским олигонуклеотидом, таким как стереослучайный родительский олигонуклеотид.

В некоторых воплощениях улучшенным свойством может быть способность олигонуклеотида модулировать экспрессию мишени, как, например, посредством улучшенного взаимодействия с клеточным аппаратом, участвующим в модуляции экспрессии мишени, в качестве примера, повышенная активность РНКазы Н, улучшенная активность модуляции сплайсинга или улучшенное ингибирование микроРНК.

В некоторых воплощениях улучшенным свойством является специфичность РНКазы Н, аллельное различение РНКазы Н (т.е. различение между однонуклеотидными полиморфизмами (SNP)) и/или активность РНКазы Н. В некоторых воплощениях улучшенное свойство отличается от специфичности РНКазы Н, аллельного различения РНКазы Н и/или активности РНКазы Н. В некоторых воплощениях улучшенным свойством является улучшенное внутриклеточное поглощение. В некоторых воплощениях улучшенным свойством является пониженная токсичность, такая как цитотоксичность или гепатотоксичность.

Стереоопределенный олигонуклеотид, который демонстрирует одно или более чем одно улучшенное свойство по сравнению с родительским олигонуклеотидом или другими стереоопределенными олигонуклеотидами, называется улучшенным фосфоротиоатным вариантом.

В одном воплощении изобретения данный олигонуклеотид выбран из группы олигонуклеотида с соединением с CMP ID NO: 18_223, 18_36, 18_196, 18_188, 18_243.

В другом аспекте данного изобретения молекулы нуклеиновой кислоты, такие как антисмысловой олигонуклеотид, по изобретению могут быть непосредственно нацелены на печень посредством ковалентного присоединения к ним конъюгатной группировки, способной к связыванию с рецептором асиалогликопротеина (ASGPr), таким как рецептор двухвалентного или трехвалентного кластера GalNAc.

Конъюгаты

Поскольку инфекция HBV, главным образом, поражает гепатоциты в печени, полезно конъюгировать антисмысловые олигонуклеотиды по изобретению с конъюгатной группировкой, которая будет усиливать доставку олигонуклеотида в печень, по сравнению с неконъюгированным олигонуклеотидом. В одном воплощении группировки доставки в печень выбраны из группировок, содержащих холестерин или другие липиды, или конъюгатных группировок, способных к связыванию с рецептором асиалогликопротеина (ASGPR).

В некоторых воплощениях согласно данному изобретению предложен конъюгат, содержащий антисмысловой олигонуклеотид по изобретению, ковалентно присоединенный к конъюгатной группировке.

Конъюгатная группировка рецептора асиалогликопротеина (ASGPR) содержит одну или более чем одну углеводную группировку, способную к связыванию с рецептором асиалогликопротеина (группировки, нацеленные ASGPR) с равной или большей аффинностью, чем аффинность галактозы. Были исследованы аффинности многочисленных производных галактозы в отношении рецептора асиалогликопротеина (см., например, Jobst, S.T. and Drickamer, K. JB.C. 1996, 271, 6686), или они легко определяются с использованием типичных в данной области способов.

В одном воплощении конъюгатная группировка содержит по меньшей мере одну группировку, нацеленную на рецептор асиалогликопротеина, выбранную из группы, состоящей из галактозы, галактозамина, N-формил-галактозамина, N-ацтил-галактозамина, N-пропионил-галактозамина, N-н-бутаноил-галактозамина и N-изобутаноил-галактозамина. Преимущественно группировка, нацеленная на рецептор асиалогликопротеина, представляет собой N-ацетилгалактозамин (GalNAc).

Для получения конъюгатной группировки ASGPR, группировки, нацеленные на ASGPR (преимущественно GalNAc) могут быть присоединены к остову конъюгата. Обычно группировки, нацеленные на ASGPR, могут находиться на том же самом конце каркаса. В одном воплощении конъюгатная группировка состоит из двух-четырех концевых группировок GalNAc, связанных со спейсером, который связывает каждую группировку GalNAc с разветвляющей молекулой, которая может быть конъюгирована с антисмысловым олигонуклеотидом.

В другом воплощении конъюгатная группировка является одновалентной, двухвалентной, трехвалентной или четырехвалентной по отношению к группировкам, нацеленным на рецептор асиалогликопротеина. Преимущественно группировка, нацеленная на рецептор асиалогликопротеина, содержит группировки N-ацетилгалактозамина (GalNAc).

Остов, нацеленный на ASPGR, который составляет конъюгатную группировку, может быть, например, получен связыванием группировки GalNAc со спейсером через его С-I углерод. Предпочтительным спейсером является гибкий гидрофильный спейсер (патент США 5885968; Biessen et al. J. Med. Chern. 1995 Vol. 39 p. 1538-1546). Предпочтительным гибким гидрофильным спейсером является спейсер на основе PEG (полиэтиленгликоль). Предпочтительный спейсер на основе PEG представляет собой спейсер PEG3. Точкой ветвления может быть любая маленькая молекула, которая обеспечивает присоединение двух-трех группировок GalNAc или других группировок, нацеленных на рецептор асиалогликопротеина, и дополнительно обеспечивает присоединение точки ветвления к олигонуклеотиду, причем такие конструкции называются кластеры GalNAc или конъюгатные группировки на основе GalNAc. Типичной группой точки ветвления является дилизин. Молекула дилизина содержит три аминогруппы, посредством которых могут быть присоединениы три группировки GalNAc или другие группировки, нацеленные на рецептор асиалогликопротеина, и карбоксильную реакционноспособную группу, посредством которой дилизин может быть присоединен к олигомеру. В Khorev, et al 2008 Bioorg. Med. Chem. Vol 16, pp. 5216 также описывается синтез подходящей трехвалентной разветвляющей группировки. Другими имеющимися в продаже разветвляющими группировками являются 1,3-бис-[5-(4,4'-диметокситритилокси)пентиламидо]пропил-2-[(2-цианоэтил)-(N,N-диизопропил)]фосфорамидит (каталожный номер Glen Research: 10-1920-хх); трис-2,2,2-[3-(4,4'-диметокситритилокси)пропилоксиметил]этил-[(2-цианоэтил)-(N,N-диизопропил)]-фосфорамидит (каталожный номер Glen Research: 10-1922-хх); трис-2,2,2-[3-(4,4'-диметокситритилокси)пропилоксиметил]метиленоксипропил-[(2-цианоэтил)-(N,N-диизопропил)]-фосфорамидит и 1-[5-(4,4'-диметокси-тритилокси)пентиламидо]-3-[5-флуоренометокси-карбонил-окси-пентиламидо]-пропил-2-[(2-цианоэтил)-(N,N-диизопропил)]-фосфорамидит (каталожный номер Glen Research: 10-1925-хх).

Другие конъюгатные группировки на основе GalNAc могут включать, например, группировки, описанные в WO 2014/179620 и WO 2016/055601 и РСТ/ЕР2017/059080 (включенные в данный документ посредством ссылки), а также маленькие пептиды с присоединенными группировками GalNAc, такие как Tyr-Glu-Glu-(аминогексил-GalNAc)3 (YEE(ahGalNAc)3; гликотрипептид, который связывается с рецептором асиалогликопротеина на гепатоцитах, см, например, Duff, et al., Methods Enzymol, 2000, 313, 297); галактозные кластеры на основе лизина (например, L3G4; Biessen, et al., Cardovasc. Med., 1999, 214) и галактозные кластеры на основе холана (например, мотив распознавания углевода для рецептора асиалогликопротеина).

Конъюгатная группировка ASGPR, в частности, трехвалентная конъюгатная группировка GalNAc, может быть присоединена к 3'- или 5'-концу олигонуклеотида с использованием способов, известных в данной области. В одном воплощении конъюгатная группировка ASGPR связывается с 5'-концом олигонуклеотида.

Между конъюгатной группировкой (такой как разветвляющая молекула) и олигонуклеотидом может быть вставлен один или более чем один линкер. Полезно иметь биорасщепляемый линкер между конъюгатной группировкой и антисмысловым олигонуклеотидом, возможно, в комбинации с нерасщепляемым линкером, таким как С6 линкер. Линкер(ры) может(гут) быть выбран(ны) из линкеров, описанных в разделе «Определения» под подзаголовком «Линкеры конъюгатов», в частности, полезными являются линкеры биорасщепляемой области D' или D''.

В одном воплощении конъюгатная группировка представляет собой трехвалентный N-ацетилгалактозамин (GalNAc), такой как показанный на Фиг. 1, в частности, как показано на Фиг. 1Г.

В одном воплощении данного изобретения конъюгированное соединение выбрано из группы соединений в Таблице 9 в разделе Материалы и методы.

В одном воплощении данного изобретения конъюгированное соединение представляет собой CMP ID NO: 20_12.

В одном воплощении данного изобретения конъюгированное соединение представляет собой CMP ID NO: 20_13.

В одном воплощении данного изобретения конъюгированное соединение представляет собой CMP ID NO: 20_14.

В одном воплощении данного изобретения конъюгированное соединение представляет собой CMP ID NO: 20_15.

В одном воплощении данного изобретения конъюгированное соединение представляет собой CMP ID NO: 20_16.

В одном воплощении данного изобретения конъюгированное соединение представляет собой CMP ID NO: 20_18.

В одном воплощении данного изобретения конъюгированное соединение представляет собой СМР ID NO: 20_20.

В одном воплощении данного изобретения конъюгированное соединение представляет собой СМР ID NO: 20_21.

В одном воплощении данного изобретения конъюгированное соединение представляет собой СМР ID NO: 20_22.

В одном воплощении данного изобретения конъюгированное соединение представляет собой СМР ID NO: 20_30.

В одном воплощении данного изобретения конъюгированное соединение представляет собой СМР ID NO: 20_35.

В одном воплощении данного изобретения конъюгированное соединение представляет собой СМР ID NO: 20_36.

В одном воплощении данного изобретения конъюгированное соединение представляет собой СМР ID NO: 21_2.

В одном воплощении данного изобретения конъюгированное соединение представляет собой СМР ID NO: 21_33.

В одном воплощении данного изобретения конъюгированное соединение представляет собой СМР ID NO: 21_34.

Способ изготовления

В другом аспекте согласно данному изобретению предложены способы изготовления антисмысловых олигонуклеотидов по изобретению, включающие осуществление взаимодействия нуклеозидных звеньев и образование, посредством этого, ковалентно связанных смежных нуклеотидных звеньев, содержащихся в олигонуклеотиде. Предпочтительно в данном способе используется фосфорамидитная химия (см, например, Caruthers et al, 1987, Methods in Enzymology vol. 154, страницы 287-313). В другом воплощении данный способ дополнительно включает осуществление взаимодействия непрерывной нуклеотидной последовательности с конъюгирующей группировкой (лигандом) для ковалентного присоединения конъюгатной группировки к олигонуклеотиду. В другом аспекте предложен способ для изготовления композиции по изобретению, включающий смешиванием олигонуклеотида или конъюгированного олигонуклеотида по изобретению с фармацевтически приемлемым разбавителем, растворителем, носителем, солью и/или адъювантом.

Фармацевтические композиции

В другом аспекте согласно данному изобретению предложены фармацевтические композиции, содержащие антисмысловые олигонуклеотиды и/или конъюгированные соединения по изобретению или их соли и фармацевтически приемлемый разбавитель, носитель, соль и/или адъювант. Типичную фармацевтическую композицию получают смешиванием антисмыспового олигонуклеотида или конъюгированного соединения по изобретению и разбавителя, носителя или эксципиента.

Фармацевтически приемлемый разбавитель включает фосфатно-солевой буферный раствор (PBS). В некоторых воплощениях фармацевтически приемлемый разбавитель представляет собой стерильный фосфатно-солевой буферный раствор. В некоторых воплощениях олигонуклеотид используется в фармацевтически приемлемом разбавителе в концентрации 50-300 мкм в растворе.

Для молекул нуклеиновой кислоты, антисмысловых олигонуклеотидов и конъюгированного соединения эти подходящие препараты находятся в Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 17th ed., 1985. Относительно краткого обзора способов доставки лекарственных средств см., например, Langer (Science 249:1527-1533, 1990). В WO 2007/031091 предложены другие подходящие и предпочтительные примеры фармацевтически приемлемых разбавителей, носителей и адъювантов (включенных тем самым посредством ссылки). Подходящие дозировки, препараты, пути введения, композиции, лекарственные формы, комбинации с другими терапевтическими средствами, препараты пролекарств также предложены в WO 2007/031091.

Соединения согласно настоящему изобретению могут существовать в виде их фармацевтически приемлемых солей. Термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к традиционным солям присоединения кислоты или солям присоединения основания, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства соединений по настоящему изобретению и образуются из подходящих нетоксичных органических или неорганических кислот, или органических или неорганических оснований. Соли присоединения кислоты включают, например, соли, полученные из неорганических кислот, таких как соляная кислота, бромистоводородная кислота, йодистоводородная кислота, серная кислота, сульфаминовая кислота, фосфорная кислота и азотная кислота, и соли, полученные из органических кислот, таких как п-толуолсульфоновая кислота, салициловая кислота, метансульфоновая кислота, щавелевая кислота, янтарная кислота, лимонная кислота, яблочная кислота, молочная кислота, фумаровая кислота и тому подобные. Соли присоединения основания включают соли, полученные из аммония, калия, натрия и четвертичных гидроксидов аммония, таких как, например, гидроксид тетраметиламмония. Химическая модификация фармацевтического соединения до соли является хорошо известной методикой для химиков в области фармацевтики для того, чтобы получать улучшенные физическую и химическую стабильность, гигроскопичность, текучесть и растворимость соединений. Она, например, описывается в Bastin, Organic Process Research & Development 2000, 4, 427-435 или в Ansel, In: Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 6th ed. (1995), страницы 196 и 1456-1457. Например, фармацевтически приемлемой солью соединений, предложенных в данном документе, могут быть натриевая соль или калиевая соль.

Применения

Олигонуклеотиды по изобретению могут использоваться в качестве исследовательских реактивов, например, для диагностики, терапевтических применений и профилактики.

В исследовании такие олигонуклеотиды могут быть использованы для специфичной модуляции синтеза белка PAPD5 и PAPD7 в клетках (например, в культурах клеток in vitro) и экспериментальных животных, облегчая, посредством этого, функциональный анализ мишени или оценку его пользы в качестве мишени для терапевтического вмешательства. Типично модуляция мишени достигается посредством деградации или ингибирования мРНК, продуцирующей белок, предупреждая, посредством этого, образование белка, или посредством деградации или ингибирования модулятора гена или мРНК, продуцирующей белок.

При применении олигонуклеотида по изобретению в исследовании или диагностике нуклеиновая кислота-мишень может представлять собой кДНК или синтетическую нуклеиновую кислоту, полученную из ДНК или РНК.

Также настоящим изобретением охватывается способ in vivo или in vitro модуляции экспрессии PAPD5 и PAPD7 в клетке-мишени, которая экспрессирует PAPD5 и PAPD7, причем указанный способ включает введение в указанную клетку антисмыслового олигонуклеотида, конъюгированного соединения или фармацевтической композиции по изобретению в эффективном количестве.

В некоторых воплощениях клетка-мишень представляет собой клетку млекопитающего, в частности, человеческую клетку. Клетка-мишень может представлять собой культуру клеток in vitro или клетку in vivo, образующую часть ткани у млекопитающего. В предпочтительных воплощениях клетка-мишень присутствует в печени. Данная клетка-мишень может представлять собой гепатоцит.

Один аспект настоящего изобретения относится к антисмысловым олигонуклеотидам, конъюгированным соединениям или фармацевтическим композициям по изобретению для применения в качестве лекарственного средства.

В одном аспекте изобретения антисмысловой олигонуклеотид, конъюгированное соединение или фармацевтическая композиция по изобретению способна ингибировать размножение HBV. В частности, антисмысповой олигонуклеотид способен влиять на один или более чем один из следующих параметров: i) уменьшать экспрессию вирусной РНК; ii) уменьшать продукцию вирусной ДНК (ДНК HBV), возникающей от вирусной РНК (РНК HBV), iii) уменьшать продукцию новых вирусных частиц (частиц HBV); iv) уменьшать продукцию антигенов HBV, в частности, HBsAg и/или HBeAg.

Например, антисмысловой олигонуклеотид, который ингибирует размножение HBV, может уменьшать: i) экспрессию вирусной РНК (РНК HBV) по меньшей мере на 40%, как, например, на 50%, 60%, 70%, 80% или 90% по сравнению с контролями; ii) продукцию вирусной ДНК (ДНК HBV) по меньшей мере на 40%, как, например, на 50%, 60%, 70%, 80% или 90% по сравнению с контролями; iii) продукцию новых вирусных частиц (частиц HBV) по меньшей мере на 40%, как, например, на 50%, 60%, 70%, 80% или 90% по сравнению с контролями; или iv) продукцию и/или секрецию HBsAg и/или HBeAg по меньшей мере на 50%, как, например, по меньшей мере на 60%, 70%, 80%, 90% или даже вплоть до полного истощения одного или обоих антигенов по сравнению с контролями. Контролями могут быть необработанные клетки или животные, или клетки или животные, обработанные подходящим контролем.

Ингибирование размножения HBV можно измерять in vitro с использованием инфицированных HBV клеток dHepaRG или клеток ASGPR-dHepaRG, или in vivo для олигонуклеотидов, комплементарных мышиному PAPD5 и PAPD7 с использованием мышиной модели AAV/HBV, как описано в разделе Материалы и методы. Ингибирование секреции HBsAg и/или HBeAg можно измерять посредством ELISA (твердофазный иммуноферментный анализ), например, с использованием набора CLIA (иммунохемилюминисцентный) ELISA (Autobio Diagnostic) согласно инструкциям изготовителей. Ингибирование продукции внутриклеточной мРНК HBV можно измерять посредством ПЦР (полимеразная цепная реакция) в реальном времени, например, как описано в разделе Материалы и методы. Другими способами оценки того, ингибирует ли опытное соединение размножение HBV, являются измерение секреции ДНК HBV посредством кПЦР-ОТ (количественная полимеразная цепная реакция, сопряженная с обратной транскрипцией), например, как описано в WO 2015/173208 или как описано в разделе Материалы и методы; норзерн-блоттинг; гибридизация in situ или иммунофлуоресценция.

Из-за уменьшения секреции HBsAg антисмысловые олигонуклеотиды, конъюгированные соединения или фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно использовать для ингибирования развития или в лечении инфекции HBV. В частности, из-за ингибирования секреции НВеАд, антисмысловые олигонуклеотиды, конъюгированные соединения или фармацевтические композиции по настоящему изобретению более эффективно ингибируют развитие или лечат хроническую инфекцию HBV по сравнению с соединением, которое уменьшает только секрецию HBsAg. Кроме того, уменьшение уровня НВеАд у будущей матери также может ингибировать развитие хронической инфекции HBV ее ребенка. Таким образом, из-за уменьшения секреции НВеАд антисмысповые олигонуклеотиды, конъюгированные соединения или фармацевтические композиции по настоящему изобретению ингибируют развитие хронической инфекции HBV (как, например, развитие хронической инфекции HBV у потомства инфицированной HBV матери) и уменьшают заразность человека, инфицированного HBV.

Соответственно, один аспект настоящего изобретения относится к применению антисмысловых олигонуклеотидов, конъюгированных соединений или фармацевтических композиций по изобретению для уменьшения секреции HBsAg и НВеАд у индивида, инфицированного HBV. Полезно, если антисмысловые олигонуклеотиды, конъюгированные соединения или фармацевтические композиции по изобретению способны уменьшать экспрессию HBsAg от ДНК HBV, встроенной в геном хозяина.

Другой аспект изобретения относится к применению антисмысловых олигонуклеотидов, конъюгированных соединений или фармацевтических композиций по изобретению для ингибирования развития или лечения хронической инфекции HBV.

Другой аспект данного изобретения относится к применению антисмысповых олигонуклеотидов, конъюгированных соединений или фармацевтических композиций по изобретению для уменьшения заразности человека, инфицированного HBV. В конкретном аспекте данного изобретения антисмысповые олигонуклеотиды, конъюгированные соединения или фармацевтические композиции по изобретению ингибируют развитие хронической инфекции HBV у потомства матери, инфицированной HBV. Эта мать предпочтительно является НВеАд позитивной.

Субъектом, подлежащим лечению антисмысловыми олигонуклеотидами, конъюгированными соединениями или фармацевтическими композициями по изобретению (или который получает профилактически антисмысловые олигонуклеотиды, конъюгированные соединения или фармацевтические композиции по настоящему изобретению), предпочтительно является человек, более предпочтительно человеческий пациент, который является HBsAg позитивным и/или НВеАд позитивным, даже более предпочтительно человеческий пациент, который является HBsAg позитивным и НВеАд позитивным. Указанный человеческий пациент может представлять собой будущую мать, например, будущую мать, которая является HBsAg позитивной и/или НВеАд позитивной, более предпочтительно будущую мать, которая является НВеАд позитивной и HBsAg позитивной.

Соответственно, настоящее изобретение относится к способу лечения и/или предупреждения инфекции HBV, где данный способ включает введение эффективного количества антисмысловых олигонуклеотидов, конъюгированных соединений или фармацевтических композиций по изобретению.

Согласно данному изобретению также предложено применение молекулы нуклеиновой кислоты, антисмыслового олигонуклеотида, конъюгированного соединения или фармацевтической композиции по изобретению для изготовления лекарственного средства, в частности, лекарственного средства для применения в лечении или предупреждении инфекции HBV или хронической инфекции HBV, или в уменьшении заразности человека, инфицированного HBV. В предпочтительных воплощениях данное лекарственное средство изготовляют в лекарственной форме для подкожного введения.

Согласно данному изобретению также предложено применение молекулы нуклеиновой кислоты, антисмыслового олигонуклеотида, конъюгированного соединения, фармацевтической композиции по изобретению для изготовления лекарственного средства, где данное лекарственное средство находится в лекарственной форме для внутривенного введения.

Молекулу нуклеиновой кислоты, антисмысповой олигонуклеотид или фармацевтическую композицию по изобретению можно использовать в комбинированной терапии. Например, молекулу нуклеиновой кислоты, антисмысповой олигонуклеотид или фармацевтическую композицию по изобретению можно объединять с другими агентами против HBV, такими как интерферон альфа-2b, интерферон альфа-2а и интерферон альфакон-1 (пэгилированный и непэгилированный), рибавирин, ламивудин (3ТС), энтекавир, тенофовир, телбивудин (LdT), адефовир или другие появляющиеся средства против HBV, такие как ингибитор репликации РНК HBV, ингибитор секреции HBsAg, ингибитор капсида HBV, антисмысповой олигомер (например, как описано в WO 2012/145697 и WO 2014/179629), миРНК (например, описанная WO 2005/014806, WO 2012/024170, WO 2012/2055362, WO 2013/003520, WO 2013/159109, WO 2017/027350 и W02017/015175), терапевтическая вакцина против HBV, профилактическая вакцина против HBV, терапия антителами против HBV (моноклональными или поликлональными) или агонистами TLR (Толл-подобный рецептор) 2, 3, 7, 8 или 9 для лечения и/или профилактики HBV.

Введение

Антисмысловые олигонуклеотиды, конъюгированные соединения или фармацевтическую композицию по изобретению готовят, дозируют и вводят способом, согласующимся с надлежащей медицинской практикой. Факторы для рассмотрения в данном контексте включают конкретное млекопитающее, которое лечат, клиническое состояние индивидуального пациента, место доставки агента, способ введения, схему введения, возраст и пол пациентов и другие факторы, известные практикующим врачам. В данном документе «эффективное количество» (также известное как «(терапевтически) эффективная доза») означает количество соединения, которое будет вызывать биологический или медицинский ответ субъекта, который пытается получить доктор или другой клиницист.«Эффективное количество» антисмыслового олигонуклеотида, конъюгированного соединения или фармацевтической композиции по изобретению будет управляться такими соображениями и представляет собой минимальное количество, необходимое для ингибирования HBsAg и/или HBeAg. Например, такое количество может быть меньше количества, которое является токсичным для клеток реципиента или для млекопитающего в целом.

В некоторых воплощениях олигонуклеотид, конъюгат олигонуклеотида или фармацевтическая композиция по изобретению вводится в дозе 0,1-15 мг/кг, как, например, 0,2-10 мг/кг, как, например, 0,25-5 мг/кг. Введение может осуществляться один раз в неделю, каждую 2-ую неделю, каждую третью неделю или даже один раз в месяц.

Молекулы нуклеиновой кислоты или фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут вводиться местно (как, например, на кожу, посредством ингаляции, в глаза или в уши), энтерально (как, например, перорально или через желудочно-кишечный тракт) или парентерально (как, например, внутривенно, подкожно, внутримышечно, в мозг, в желудочки мозга или интратекально).

В предпочтительном воплощении молекула нуклеиновой кислоты, антисмысловой олигонуклеотид, конъюгированные соединения или фармацевтические композиции по настоящему изобретению вводятся посредством парентерального пути, включающего внутривенную, внутриартериальную, подкожную, внутрибрюшинную или внутримышечную инъекцию или инфузию. В одном воплощении активный олигонуклеотид или конъюгат олигонуклеотид а вводится внутривенно. С соединениями, конъюгированными с GalNAc, может быть полезным подкожное введение для того, чтобы откладывать насыщение рецептора ASGP.

Комбинированные терапии

В некоторых воплощениях олигонуклеотид, конъюгат олигонуклеотида или фармацевтическая композиция по изобретению предназначена для комбинированного лечения с другим терапевтическим средством. Данное терапевтическое средство, например, может представлять собой стандарт оказания медицинской помощи для заболеваний или расстройств, описанных выше.

В качестве примера, олигомер или конъюгат олигомера по настоящему изобретению можно использовать в комбинации с другими активными средствами, такими как противовирусные средства на основе олигонуклеотидов, как, например, противовирусные средства на основе специфичных в отношении последовательности олигонуклеотидов, действующие либо посредством антисмысловых олигонуклеотидов (включая другие олигомеры LNA), миРНК (как, например, ARC520), аптамеров, морфолинов или любого другого противовирусного способа действия, зависимого от нуклеотидной последовательности.

В качестве другого примера, олигомер или конъюгат олигомера по настоящему изобретению можно использовать в комбинации с другими активными средствами, такими как иммуностимулирующие противовирусные соединения, такие как интерферон (например, пэгилированный интерферон альфа), агонисты TLR7 (например, GS-9620) или терапевтические вакцины.

В качестве другого примера, олигомер или конъюгат олигомера по настоящему изобретению можно использовать в комбинации с другими активными средствами, такими как маленькие молекулы, с противовирусной активностью. Эти другие активные средства могли бы представлять собой, например, нуклеозидные/нуклеотидные ингибиторы (например, энтекавир или тенофовира дизопроксила фумарат), ингибиторы инкапсидации, ингибиторы поступления (например, мирклудекс В).

В некоторых воплощениях дополнительное терапевтическое средство может представлять собой средство против HBV, средство против вируса гепатита С (HCV), химиотерапевтическое средство, антибиотик, анальгетик, нестероидное противовоспалительное средство (NSAID), противогрибковое средство, антипаразитарное средство, средство против диареи или иммунодепрессант.

В конкретных родственных воплощениях дополнительное средство против HBV может представлять собой интерферон альфа-2b, интерферон альфа-2а и интерферон альфакон-1 (пэгилированный и непэгилированный), рибавирин; ингибитор репликации РНК HBV; второй антисмысловой олигомер; терапевтическую вакцину против HBV; профилактическую вакцину против HBV; ламивудин (3ТС); энтекавир (ETV); тенофовира диизопроксила фумарат (TDF); телбивудин (LdT); адефовир или терапевтическое антитело против HBV (моноклональное или поликлональное).

В других конкретных родственных воплощениях дополнительное средство против HCV может представлять собой интерферон альфа-2b, интерферон альфа-2а и интерферон альфакон-1 (пэгилированный и непэгилированный); рибавирин; пегасис; ингибитор репликации РНК HCV (например, серии VP50406 ViroPharma); антисмысповое средство против HCV; терапевтическую вакцину против HCV; ингибитор протеазы HCV; ингибитор хеликазы HCV или терапию моноклональным или поликлональным антителом против HCV.

Воплощения изобретения

Следующие воплощения настоящего изобретения можно использовать в комбинации с любыми другими воплощениями, описанными в данном документе.

1. Молекула нуклеиновой кислоты из 12-32 нуклеотидов в длину, которая содержит непрерывную нуклеотидную последовательность из 12-22 нуклеотидов в длину, которая способна ингибировать экспрессию и PAPD5, и PAPD7.

2. Молекула нуклеиновой кислоты по воплощению 1, в которой непрерывная нуклеотидная последовательность является по меньшей мере на 93% комплементарной нуклеиновой кислоте-мишени SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2.

3. Молекула нуклеиновой кислоты по воплощению 1 или 2, в которой непрерывная нуклеотидная последовательность является по меньшей мере на 100% комплементарной нуклеиновой кислоте-мишени SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2.

4. Молекула нуклеиновой кислоты по воплощению 1 или 3, в которой непрерывная нуклеотидная последовательность является комплементарной нуклеиновой кислоте-мишени SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4.

5. Молекула нуклеиновой кислоты по воплощению 1 или 3, в которой непрерывная нуклеотидная последовательность является комплементарной нуклеиновой кислоте-мишени SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6.

6. Молекула нуклеиновой кислоты по воплощению 1-3 или 5, где данная молекула нуклеиновой кислоты является комплементарной положению 759-781 на SEQ ID NO: 1 и положению 1032-1054 на SEQ ID NO: 2.

7. Молекула нуклеиновой кислоты по воплощению 1-4, где данная молекула нуклеиновой кислоты является комплементарной положению 64669-69429 на SEQ ID NO: 1 и положению 29514-29530 на SEQ ID NO: 2.

8. Молекула нуклеиновой кислоты по воплощению 1-4, где данная молекула нуклеиновой кислоты является комплементарной положению 64414-69429 на SEQ ID NO: 1 и положению 30731-30746 на SEQ ID NO: 2.

9. Молекула нуклеиновой кислоты по воплощению 1-8, способная гибридизоваться с нуклеиновой кислотой-мишенью SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2 с ΔG° меньше -62,8 кДж.

10. Молекула нуклеиновой кислоты по воплощению 2-9, где нуклеиновая кислота-мишень представляет собой РНК.

11. Молекула нуклеиновой кислоты по воплощению 10, где РНК представляет собой пре-мРНК.

12. Молекула нуклеиновой кислоты по воплощению 1-11, где данная молекула нуклеиновой кислоты выбрана из антисмыслового олигонуклеотида, миРНК или кшРНК.

13. Молекула нуклеиновой кислоты по воплощению 1-11, где данная молекула нуклеиновой кислоты представляет собой одноцепочечный антисмысловой олигонуклеотид.

14. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12 или 13, где непрерывная нуклеотидная последовательность содержит или состоит из по меньшей мере 14 смежных нуклеотидов, в частности, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 смежных нуклеотидов.

15. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12 или 13, где непрерывная нуклеотидная последовательность содержит или состоит из 14-20 нуклеотидов.

16. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 15, где непрерывная нуклеотидная последовательность содержит или состоит из 16-18 нуклеотидов.

17. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 1-16, где данный олигонуклеотид содержит или состоит из 14-25 нуклеотидов в длину.

18. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 17, где данный антисмысловой олигонуклеотид содержит или состоит из 15-22 нуклеотидов в длину.

19. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 17 или 18, где данный антисмысловой олигонуклеотид содержит или состоит из 16-20 нуклеотидов в длину.

20. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12-19, в котором непрерывная нуклеотидная последовательность содержит или состоит из последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 7, 8, 9, 10, 11,12,13,14,15,16,17,18 и 19.

21. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12-20, в котором непрерывная нуклеотидная последовательность содержит или состоит из последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 7, 8, 9, 10, 11,12,13,14,15 или 16.

22. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12-20, в котором непрерывная нуклеотидная последовательность содержит или состоит из последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 17 или SEQ ID NO: 18.

23. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12-20, в котором непрерывная нуклеотидная последовательность содержит или состоит из SEQ ID NO: 19.

24. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12-23, в котором непрерывная нуклеотидная последовательность имеет от нуля до трех несоответствий по сравнению с нуклеиновыми кислотами-мишенями, которым она комплементарна.

25. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 24, в котором непрерывная нуклеотидная последовательность имеет одно несоответствие по сравнению с нуклеиновыми кислотами-мишенями.

26. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 24, в котором непрерывная нуклеотидная последовательность имеет два несоответствия по сравнению с нуклеиновыми кислотами-мишенями.

27. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 24, в котором непрерывная нуклеотидная последовательность является полностью комплементарной последовательностям обеих нуклеиновых кислот-мишеней.

28. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12-27, содержащий один или более чем один модифицированный нуклеозид.

29. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 28, в котором один или более чем один модифицированный нуклеозид представляет собой высокоаффинные модифицированные нуклеозиды.

30. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 28 или 29, в котором один или более чем один модифицированный нуклеозид представляет собой нуклеозид, модифицированный 2'-сахаром.

31. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 30, в котором один или более чем один нуклеозид, модифицированный 2'-сахаром, независимо выбран из группы, состоящей из нуклеозидов 2'-O-алкил-РНК, 2'-O-метил-РНК, 2'-алкокси-РНК, 2'-O-метоксиэтил-РНК, 2'-амино-ДНК, 2'-фтор-ДНК, 2'-фтор-ANA и LNA.

32. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 28-31, в котором один или более чем один модифицированный нуклеозид представляет собой нуклеозид LNA.

33. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 32, в котором модифицированный нуклеозид LNA выбран из окси-LNA, амино-LNA, тио-LNA, сЕТ и ENA.

34. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 32 или 33, в котором модифицированный нуклеозид LNA представляет собой окси-LNA с последующим 2'-4' мостиком -O-СН2-.

35. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 34, в котором окси-LNA представляет собой бета-D-окси-LNA.

36. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 32 или 33, в котором модифицированный нуклеозид LNA представляет собой сЕТ со следующим 2'-4' мостиком -О-СН(СН3)-.

37. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 36, в котором сЕТ представляет собой (S)cET, т.е. 6'(S)метил-бета-D-окси-LNA.

38. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 32 или 33, в котором LNA представляет собой ENA со следующим 2'-4' мостиком -O-СН2-СН2-.

39. Антисмысловой олигонуклеотид по любому из воплощений 12-33, где данный антисмысловой олигонуклеотид содержит по меньшей мере одну модифицированную межнуклеозидную связь.

40. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 39, в котором модифицированная межнуклеозидная связь является нуклеазоустойчивой.

41. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 39 или 40, в котором по меньшей мере 75% межнуклеозидных связей в пределах непрерывной нуклеотидной последовательности представляют собой фосфоротиоатные межнуклеозидные связи или боранофосфатные межнуклеозидные связи.

42. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 39 или 40, в котором все межнуклеозидные связи в пределах непрерывной нуклеотидной последовательности представляют собой фосфоротиоатные межнуклеозидные связи.

43. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 41 или 42, в котором по меньшей мере одна фосфоротиоатная межнуклеозидная связь является стереоопределенной.

44. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12-43, где данный антисмысловой олигонуклеотид способен рекрутировать РНКазу Н.

45. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 44, где данный антисмысловой олигонуклеотид или непрерывная нуклеотидная последовательность представляет собой гэпмер.

46. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 45, где гэпмер имеет формулу 5'-F-G-F'-3', где области крыльев F и F' независимо содержат или состоят из 1-7 нуклеозидов, модифицированных 2'-сахаром, согласно воплощениям 31-38, и G представляет собой область от 5 до 16 нуклеозидов, которые способны рекрутировать РНКазу Н.

47. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 46, в котором каждое крыло (F и F') отличается наличием по меньшей мере одного нуклеозида, модифицированного 2'-сахаром, на 5'-конце и 3'-конце крыла, и область G имеет по меньшей мере один нуклеозид ДНК, смежный с областями крыльев (например, на 5'- и 3'-конце области G).

48. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 46 или 47, в котором все нуклеозиды, модифицированные 2'-сахаром, в области F и F' представляют собой идентичные нуклеозиды LNA.

49. Олигонуклеотид по воплощению 46-48, в котором:

а. область F имеет от 1 до 6 нуклеотидов в длину и состоит из 1-5 идентичных нуклеозидов LNA и 0-3 нуклеозидов ДНК; и

б. область F' имеет от 2 до 6 нуклеотидов в длину и состоит из 2-5 идентичных нуклеозидов LNA и 0-3 нуклеозидов ДНК; и

в. область G имеет от 5 до 11 нуклеотидов, которые способны рекрутировать РНКазу Н, и

г. возможно область D' с 1-3 нуклеозидами ДНК, связанными фосфодиэфирами, располагается на 5'-конце области F.

50. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 47, в котором область F и F' состоит из идентичных нуклеозидов LNA.

51. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 46-48, в котором все нуклеозиды, модифицированные 2'-сахаром, в области F и F' представляют собой нуклеозиды окси-LNA.

52. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 46 или 47, в котором по меньшей мере одна из областей F или F' дополнительно содержит по меньшей мере один 2'-замещенный модифицированный нуклеозид, независимо выбранный из группы, состоящей из 2'-O-алкил-РНК, 2'-O-метил-РНК, 2'-алкокси-РНК, 2'-O-метоксиэтил-РНК, 2'-амино-ДНК и 2'-фтор-ДНК.

53. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 46-52, в котором рекрутирующие РНКазу Н нуклеозиды в области G независимо выбраны из ДНК, альфа-L-LNA, С4'-алкилированной ДНК, ANA и 2' F-ANA и UNA.

54. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 53, в котором нуклеозиды в области G представляют собой нуклеозиды ДНК и/или альфа-L-LNA.

55. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 46 или 53, или 54, в котором область G состоит из по меньшей мере 75% нуклеозидов ДНК.

56. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 55, где все нуклеозиды в области G представляют собой нуклеозиды ДНК.

57. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12-55, где данный антисмысловой олигонуклеотид выбран из СМР ID NO: от 7_1 до 7_83, или его фармацевтически приемлемые соли.

58. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12-55, где данный антисмысловой олигонуклеотид выбран из СМР ID NO: от 8_1 до 8_81, или его фармацевтически приемлемые соли.

59. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12-55, где данный антисмысловой олигонуклеотид выбран из СМР ID NO: от 9_1 до 9_12, или его фармацевтически приемлемые соли.

60. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12-55, где данный антисмысловой олигонуклеотид выбран из СМР ID NO: от 10_1 до 10_18, или его фармацевтически приемлемые соли.

61. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12-55, где данный антисмысловой олигонуклеотид выбран из СМР ID NO: от 11_1 до 11_26, или его фармацевтически приемлемые соли.

62. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12-55, где данный антисмысловой олигонуклеотид выбран из СМР ID NO: от 12_1 до 12_15, или его фармацевтически приемлемые соли.

63. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12-55, где данный антисмысловой олигонуклеотид выбран из СМР ID NO: от 13_1 до 13_2, или его фармацевтически приемлемые соли.

64. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12-55, где данный антисмысловой олигонуклеотид выбран из СМР ID NO: от 14_1 до 14_13, или его фармацевтически приемлемые соли.

65. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12-55, где данный антисмысловой олигонуклеотид выбран из СМР ID NO: от 15_1 до 15_21, или его фармацевтически приемлемые соли.

66. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12-55, где данный антисмысловой олигонуклеотид выбран из СМР ID NO: от 16_1 до 16_5, или его фармацевтически приемлемые соли.

67. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12-55, где данный антисмысловой олигонуклеотид выбран из СМР ID NO: от 17_1 до 17_183, или его фармацевтически приемлемые соли.

68. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12-55, где данный антисмысловой олигонуклеотид выбран из СМР ID NO: от 18_1 до 18_31, или от 18_250 до 18_361, или его фармацевтически приемлемые соли.

69. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 68, где данный антисмысловой олигонуклеотид выбран из СМР ID NO: 18_1, 18_5, 18_10, 18_15, 18_18, 18_19, 18_24, 18_27, 18_30, 18_346, 18_347, 18_357, 17_10, 17_137 и 17_139, или его фармацевтически приемлемые соли.

70. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 69, где данный антисмысловой олигонуклеотид выбран из СМР ID NO: 18_1, 18_15, 18_27, 18_30, 17_10, 17_137 и 17_139.

71. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12-55, где данный антисмысловой олигонуклеотид выбран из СМР ID NO: от 18_32 до 18_249 или от 18_362 до 18_610, или его фармацевтически приемлемые соли.

72. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 71, где данный антисмысловой олигонуклеотид выбран из СМР ID NO: 18_223, 18_36, 18_196, 18_188 и 18_243.

73. Антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12-55, где данный антисмысловой олигонуклеотид выбран из СМР ID NO: от 19_1 до 19_22, или его фармацевтически приемлемые соли.

74. Конъюгированное соединение, содержащее молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-11 или антисмыловой олигонуклеотид по любому из пп. 12-57 и по меньшей мере одну конъюгатную группировку, ковалентно присоединенную к указанному антисмысловому олигонуклеотиду.

75. Конъюгированное соединение по воплощению 74, в котором конъюгатная группировка выбрана из углеводов, лигандов рецептора поверхности клетки, лекарственных веществ, гормонов, липофильных веществ, полимеров, белков, пептидов, токсинов, витаминов, вирусных белков или их комбинаций.

76. Конъюгированное соединение по воплощению 74 или 75, в котором конъюгатная группировка способна связываться с рецептором асиалогликопротеина.

77. Конъюгированное соединение по воплощению 76, в котором конъюгатная группировка содержит по меньшей мере одну группировку, нацеленную на рецептор асиалогликопротеина, выбранную из группы, состоящей из галактозы, галактозамина, N-формил-галактозамина, N-ацтил-галактозамина, N-пропионил-галактозамина, N-н-бутаноил-галактозамина и N-изобутаноил-галактозамина.

78. Конъюгированное соединение по воплощению 77, где группировка, нацеленная на рецептор асиалогликопротеина, представляет собой N-ацтилгалактозамин (GalNAc).

79. Конъюгированное соединение по воплощению 77 или 78, где конъюгатная группировка является одновалентной, двухвалентной, трехвалентной или четырехвалентной по отношению к группировкам, нацеленным на рецептор асиалогликопротеина.

80. Конъюгированное соединение по воплощению 79, в котором конъюгатная группировка состоит из двух-четырех концевых группировок GalNAc и спейсера, связывающего каждую группировку GalNAc с разветвляющей молекулой, которая может быть конъюгирована с антисмысловым соединением.

81. Конъюгированное соединение по воплощению 80, где спейсер представляет собой PEG спейсер.

82. Конъюгированное соединение по воплощению 76-81, где конъюгатная группировка представляет собой трехвалентную группировку N-ацетилгалактозамина (GalNAc).

83. Конъюгированное соединение по воплощению 76-82, где конъюгатная группировка выбрана из одной из трехвалентных группировок GalNAc на Фиг. 1.

84. Конъюгированное соединение по воплощению 83, где конъюгатная группировка представляет собой трехвалентную группировку GalNAc на Фиг. 1Г.

85. Конъюгированное соединение по воплощению 74-84, содержащее линкер, который располагается между молекулой нуклеиновой кислоты или антисмысловым олигонуклеотидом и конъюгатной группировкой.

86. Конъюгированное соединение по воплощению 85, в котором линкер является физиологически лабильным линкером.

87. Конъюгированное соединение по воплощению 86, в котором физиологически лабильный линкер является нуклеазочувствительным линкером.

88. Конъюгат олигонуклеотида по воплощению 86 или 87, в котором физиологически лабильный линкер состоит из 2-5 последовательных фосфодиэфирных связей.

89. Конъюгированное соединение по воплощению 86-88, в котором антисмысловой олигонуклеотид имеет формулу D'-F-G-F' или F-G-F'-Dʺ, где F, F' и G являются такими, как определено в воплощениях 46-56, и D' или Dʺ содержит 1, 2 или 3 нуклеозида ДНК с фосфодиэфирными межнуклеозидными связями.

90. Конъюгат олигонуклеотида по воплощению 88 или 89, где по меньшей мере две последовательные фосфодиэфирные межнуклеозидные связи ассоциированы с динуклеотидом СА.

91. Конъюгированное соединение по воплощению 76-90, которое демонстрирует улучшенное клеточное распределение между печенью относительно почки или улучшенное клеточное поглощение конъюгированного соединения в печень по сравнению с неконъюгированной молекулой нуклеиновой кислоты или антисмысловым олигонуклеотидом.

92. Конъюгированное соединение по воплощению 76-91, где данное конъюгированное соединение выбрано из группы, состоящей из СРМ ID NO 20_12, 20_13, 20_14, 20_15, 20_16, 20_18, 20_20, 20_21, 20_22, 20_30, 20_35, 20_36, 21_2, 21_33 и 21_34.

93. Фармацевтическая композиция, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по любому из воплощений 1-11, антисмысловой олигонуклеотид по воплощению 12-73, конъюгированное соединение по воплощению 74-92 или их приемлемые соли и фармацевтически приемлемый разбавитель, носитель, соль и/или адъювант.

94. Способ изготовления антисмыслового олигонуклеотида по воплощению 12-73, включающий осуществление взаимодействия нуклеотидных звеньев, образуя, посредством этого, ковалентно связанные смежные нуклеотидные звенья, содержащиеся в данном антисмысловом олигонуклеотиде.

95. Способ по воплощению 94, дополнительно включающий осуществление взаимодействия непрерывной нуклеотидной последовательности с ненуклеотидной конъюгатной группировкой, как описано в любом из пп. 76-84.

96. Способ изготовления композиции по воплощению 93, включающий смешивание антисмыслового олигонуклеотида с фармацевтически приемлемым разбавителем, носителем, солью и/или адъювантом.

97. Способ in vivo или in vitro модулирования экспрессии PAPD5 и PAPD7 в клетке-мишени, которая экспрессирует PAPD5 и PAPD7, причем указанный способ включает введение в указанную клетку молекулы нуклеиновой кислоты по любому из воплощений 1-11, антисмыслового олигонуклеотида по любому из воплощений 12-73 или конъюгированного соединения по любому из воплощений 74-92, или фармацевтической композиции по воплощению 93 в эффективном количестве.

98. Способ по воплощениям 97, в котором экспрессия PAPD5 и PAPD7 уменьшается по меньшей мере на 30% или по меньшей мере на 40%, или по меньшей мере на 50%, или по меньшей мере на 60%, или по меньшей мере на 70%, или по меньшей мере на 80%, или по меньшей мере на 90%, или по меньшей мере на 95% в клетке-мишени по сравнению с уровнем без какой-либо обработки.

99. Способ лечения или предупреждения заболевания, включающий введение терапевтически или профилактически эффективного количества молекулы нуклеиновой кислоты по любому из воплощений 1-11, антисмыслового олигонуклеотида по любому из воплощений 12-73 или конъюгированного соединения по любому из воплощений 74-92, или фармацевтической композиции по воплощению 93 субъекту, страдающему от или чувствительному к заболеванию.

100. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из воплощений 1-11, антисмысловой олигонуклеотид по любому из воплощений 12-57 или конъюгированное соединение по любому из воплощений 74-92, или фармацевтическая композиция по воплощению 93 для применения в качестве лекарственного средства для лечения или предупреждения заболевания у субъекта.

101. Применение молекулы нуклеиновой кислоты по любому из воплощений 1-11, антисмыслового олигонуклеотида по любому из воплощений 12-73 или конъюгированного соединения по любому из воплощений 74-92 для получения лекарственного средства для лечения или предупреждения заболевания у субъекта.

102. Способ, молекула нуклеиновой кислоты или применение по воплощениям 99-101, где заболевание представляет собой инфекцию HBV или хроническую инфекцию HBV.

103. Способ, молекула нуклеиновой кислоты или применение по воплощению 102, где уменьшается секреция HBsAg и/или HbeAg, и/или внутриклеточной мРНК HBV, и/или ДНК HBV.

104. Способ, молекула нуклеиновой кислоты или применение по воплощениям 102 или 103, где уровень HBsAg уменьшается по меньшей мере на 30%, или по меньшей мере на 40%, или по меньшей мере на 50%, или по меньшей мере на 60%, или по меньшей мере на 70%, или по меньшей мере на 80%, или по меньшей мере на 90%, или по меньшей мере на 95% по сравнению с уровнем без какой-либо обработки.

105. Способ, антисмысловой олигонуклеотид или применение по воплощениям 99-104, где субъект представляет собой млекопитающее.

106. Способ, антисмысловой олигонуклеотид или применение по воплощению 105, где млекопитающее представляет собой человека.

Данные примеры иллюстрируют изобретение.

Материал и методы

Последовательности олигонуклеотидных мотивов и олигонуклеотидные соединения

Таблица 4: список последовательностей олигонуклеотидных мотивов, нацеленных на человеческие и мышиные транскрипты

Последовательности показаны по SEQ ID NO, мотиву последовательности и положению, на которое они нацелены на человеческом транскрипте PAPD5 (SEQ ID NO: 1) и человеческом транскрипте PAPD7 (SEQ ID NO: 2).

Мотивы последовательностей представляют непрерывные последовательности нуклеиновых оснований, присутствующие в олигонуклеотиде.

Таблица 5: Списки конструкций олигонуклеотидов и специфических антисмысловых олигонуклеотидных соединений

Соединения показаны по СМР ID NO и на основе мотива последовательности в Таблице 4.

Конструкции относятся к конструкции гэпмера: F-G-F'. В классической конструкции гэпмера, например, 3-10-3, все нуклеотиды во флангах (F и F') состоят из одинакового нуклеозида, модифицированного 2'-сахаром, например, LNA, сЕТ и МОЕ, и отрезка ДНК в середине, образующего гэп (G). В гэпмерах с конструкцией с флангами с чередованием фланги олигонуклеотида аннотируются как серия целых чисел, представляющих число нуклеозидов, модифицированных 2'-сахаром (М), с последующим числом нуклеозидов ДНК (D). Например, фланг с мотивом 2-2-1 представляет собой 5' [M]2-[D]2-[M] 3', и мотив 1-1-1-1-1 представляет собой 5' [М]-[D]-[M]-[D]-[M] 3'. Оба фланга имеют нуклеозид, модифицированный 2'-сахаром, на 5'- и 3'-конце. Область гэпа (G), которая составлена из ряда нуклеозидов ДНК (типично от 5 до 16), располагается между флангами.

Заголовок «Олигонуклеотидное соединение» в таблице представляет специфические конструкции мотива последовательности. Заглавные буквы представляют бета-О-окси нуклеозиды LNA, строчные буквы представляют нуклеозиды ДНК, все С LNA представляют собой 5-метилцитозин, и 5-метилцитозин ДНК представлен «е», все межнуклеозидные связи представляют собой фосфоротиоатные межнуклеозидные связи.

Таблица 6: список последовательностей олигонуклеотидных мотивов, нацеленных на последовательности человека и яванского макака

Последовательности показаны по SEQ ID NO, мотиву последовательности (последовательности нуклеиновых оснований) и положению, на которое они нацелены на человеческом транскрипте PAPD5 (SEQ ID NO: 1) и человеческом транскрипте PAPD7 (SEQ ID NO: 2).

Мотивы последовательностей представляют собой непрерывную последовательность нуклеиновых оснований, присутствующую в олигонуклеотиде.

Таблица 7: списки конструкций олигонуклеотидов и специфических антисмысловых олигонуклеотидных соединений

Соединения показаны по СМР ID NO и на основе мотива последовательности в Таблице 6.

Конструкции относятся к конструкции гэпмера: F-G-F'. В классической конструкции гэпмера, например, 3-10-3, все нуклеотиды во флангах (F и F') состоят из одинакового нуклеозида, модифицированного 2'-сахаром, например, LNA, сЕТ и МОЕ, а отрезок ДНК в середине образует гэп (G). В гэпмерах с конструкциями с флангами с чередованием фланги олигонуклеотида аннотируются как серия целых чисел, представляющих число нуклеозидов, модифицированных 2'-сахаром (М), с последующим числом нуклеозидов ДНК (D). Например, фланг с мотивом 2-2-1 представляет собой 5' [M]2-[D]2-[M] 3' и мотив 1-1-1-1-1 представляет собой 5' [М]-[D]-[M]-[D]-[M] 3'. Оба фланга имеют нуклеозид, модифицированный 2'-сахаром, на 5'- и 3'-конце. Область гэпа (G), которая составлена из ряда нуклеозидов ДНК (типично от 5 до 16), располагается между флангами.

Заголовок «Олигонуклеотидное соединение» в таблице представляет специфические конструкции мотива последовательности. Заглавные буквы представляют бета-D-окси нуклеозиды LNA, строчные буквы представляют нуклеозиды ДНК, все С LNA представляют собой 5-метилцитозин, и 5-метилцитозин ДНК представлен «е», все межнуклеозидные связи представляют собой фосфоротиоатные межнуклеозидные связи.

Таблица 8: список стереоопределенных вариантов

Родительское Олигонуклеотидное соединение показано с его мотивом последовательности и конструкцией. Мотив стереоопределения межнуклеозидных связей родительского соединения показан под последовательностью и конструкцией и отражает полностью стереослучайный фосфоротиоатный гэпмер. Стереоопределенные варианты родительского олигонуклеотида перечислены по СМР ID NO и стереоопределенным мотивам под родительским соединением. Данная таблица содержит три родительских соединения СМР ID NO: 18_1, 18_347 и 18 12.

В связи с СМР родительского олигонуклеотида: заглавные буквы представляют бета-D-окси нуклеозиды LNA, строчные буквы представляют нуклеозиды ДНК, все С LNA представляют собой 5-метилцитозин, все межнуклеозидные связи представляют собой фосфоротиоатные межнуклеозидные связи.

В связи со стереоопределением/стереоопределенными мотивами: X представляет стереослучайную фосфоротиоатную межнуклеозидную связь, R представляет одну стереоизомерную форму, и S представляет другую стереоизомерную форму, как определено в описании, Н представляет атом водорода на 3'-конце олигонуклеотида. Первая буква (X, R или S) в стереоопределенном мотиве соответствует межнуклеозидной связи между нуклеозидом 1 и 2 с 5'-конца олигонуклеотида.

С6 представляет аминоалкильную группу с 6 углеродами, заглавные буквы представляют бета-D-окси нуклеозиды LNA, строчные буквы представляют нуклеозиды ДНК, все С LNA представляют собой 5-метилцитозин, подстрочный символ о представляет фосфодиэфирную межнуклеозидную связь, и, если не указано иначе, другие межнуклеозидные связи представляют собой фосфоротиоатные межнуклеозидные связи.

GN2 представляет трехвалентный GalNAc кластер, показанный на Фиг. 2, С6 представляет аминоалкильную группу с 6 углеродами, заглавные буквы представляют бета-D-окси нуклеозиды LNA, строчные буквы представляют нуклеозиды ДНК, все С LNA представляют собой 5-метилцитозин, подстрочный символ о представляет фосфодиэфирную межнуклеозидную связь, и, если не указано иное, межнуклеозидные связи представляют собой фосфоротиоатные межнуклеозидные связи. Химические рисунки, представляющие некоторые из молекул, показаны на Фиг. 4-17.

Мышиные модели AAV/HBV

В мышиной модели AAV/HBV мышей инфицируют рекомбинантным аденосателлитным вирусом (AAV), несущим геном HBV (AAV/HBV), что поддерживает стабильную виремию и антигенимию в течение больше, чем 30 недель (Dan Yang, et al. 2014 Cellular & Molecular Immunology 11, 71-78).

Самцов мышей C57BL/6 (в возрасте 4-6 недель), не содержащих специфических патогенов, приобретают в SLAC (Shanghai Laboratory Animal Center of Chinese Academy of Sciences) и содержат в виварии в индивидуально вентилируемых клетках. Следуют руководствам по уходу за животными и применению животных, как указано WuXi IACUC (Институциональный комитет по уходу за животными и применению животных, WUXI IACUC, номер протокола R20131126-Mouse). Мышам давали акклиматизироваться к новым условиях в течение 3 суток, и группировали их согласно схеме эксперимента.

Рекомбинантный AAV-HBV разводят в PBS (фосфатно-солевой буферный раствор), 200 мкл на инъекцию. Данный рекомбинантный вирус несет 1,3 копии генома HBV (геном D, серотип ayw).

В сутки 0 всем мышам инъецируют через хвостовую вену 200 мкл AAV/HBV (1×1011 генома вектора). На сутки 23 до дозы (23 сутки после инъекции AAV-HBV) животных распределяли в группы на основе сывороточных уровней маркеров HBV и массы тела. Каждую группу (вплоть до 5/клетку) содержали в поликарбонатных клетках с подстилкой из стержней кукурузных початков. Распределяли низкие, средние и высокие значения титра HBV, обеспечивая то, что средние значения для группы были аналогичными среди групп. Группы животных можно обрабатывать олигонуклеотидами, которые могут быть неконъюгированными или конъюгированными с GalNAc. Все отборы сыворотки (0,1 мл крови/мышь) осуществляли посредством ретроорбитального отбора крови после анестезии животных ингаляцией изофлурана.

Линии клеток HeLa

Линию клеток HeLa приобретали в Европейской коллекции аутентичных клеточных культур (ЕСАСС, #93021013) и поддерживали, как рекомендовано поставщиком, в увлажненном инкубаторе при 37°С с 5% CO2. Для анализов 2500 клеток/лунку высевали в 96-многолуночный планшет в минимальную питательную среду Игла (Sigma, М2279) с 10% фетальной телячей сыворотки (FBS), 2 мМ глутамином AQ, 1% NEAA, 25 мкг/мл гентамицина.

Культура дифференцированных клеток HepaRG (без инфекции HBV)

Клетки HepaRG (Biopredics International, Rennes, Франция, Кат. № HPR101) культивировали при 37°С в увлажненной атмосфере с 5% CO2 в полной ростовой среде HepaRG, состоящей из среды Уильяма Е (Sigma W4128), добавки в ростовую среду (Biopredics, Кат. № ADD710) и 1% (об./об.) GlutaMAX-l (Gibco #32551) в течение 2 недель.

Для инициации дифференциации клетки выращивали в полной ростовой среде HepaRG в течение 2 недель, пока они не становились полностью конфлюентными. Половину данной среды заменяли на среду для дифференциации HepaRG, состоящую из среды Уильяма Е (Sigma W4128), добавки в ростовую среду (Biopredics, Кат. № ADD710) и 1% (об./об.) GlutaMAX-l (Gibco #32551), конечная концентрация DMSO составляла 0,9% (об./об.)). Через 3 суток среду полностью заменяли полной средой для дифференциации (конечная концентрация DMSO 1,8% (об./об.)), в которой клетки поддерживали в течение приблизительно 2 недель с обновлением среды для дифференциации каждые 7 суток. Дифференцированные клетки HepaRG (dHepaRG) демонстрировали гепатоцитоподобные островки клеток, окруженные монослоем билиарно-подобных клеток. До обработки соединением клетки dHepaRG высевали в 96-луночные планшеты, покрытые коллагеном I (Corning BioCoat REF354407), в количестве 80000 клеток на лунку в 100 мкл полной среды для дифференциации. Клеткам давали восстанавливать их дифференцированный фенотип в 96-луночных планшетах в течение приблизительно 1 недели после посева на чашки до обработки олигонуклеотидом. РНК выделяли через 6 суток после обработки.

Клетки dHepaRG, инфицированные HBV

Клетки HepaRG (Biopredics International, Rennes, Франция, Кат. № HPR101) культивировали при 37°С в увлажненной атмосфере с 5% CO2 в полной ростовой среде HepaRG, состоящей из среды Уильяма Е (GIBCO), добавки в ростовую среду (Biopredics, Кат. № ADD710) и 1% (об./об.) GlutaMAX-l (Gibco #32551) и 1× пенициллина/стрептомицина (Gibco, №15140) в течение 2 недель.

Для инициации дифференциации добавляли в ростовую среду на конфлюентные клетки 0,9% (об./об.) DMSO (Sigma-Aldrich, D2650). Через одну неделю среду заменяли полной средой для дифференциации (ростовая среда HepaRG, дополненная 1,8% (об./об.) DMSO), в которой клетки поддерживали в течение приблизительно 4 недель с обновлением среды для дифференциации каждые 7 суток. Дифференцированные клетки HepaRG (dHepaRG) демонстрировали гепатоцитоподобные островки клеток, окруженные монослоем билиарно-подобных клеток.

До инфекции HBV и обработки соединением клетки dHepaRG высевали в 96-луночные планшеты, покрытые коллагеном I (Gibco, кат. № А11428-03), в количестве 60000 клеток на лунку в 100 мкл полной среды для дифференциации. Клеткам давали восстанавливать их дифференцированный фенотип в 96-луночных планшетах в течение приблизительно 1 недели после посева на чашки до инфекции HBV.

Клетки dHepaRG инфицировали частицами HBV при MOI (множественность заражения) 30. Частицы HBV продуцировались из клеток HepG2.2.15, продуцирующих HBV (Sells et al 1987 Proc Natl Acad Sci USA 84, 1005-1009). Условия культивирования, дифференциация и инфицирование HBV dHepaRG были описаны ранее (Hantz, 2009, J. Gen. Virol., 2009, 90: 127-135). Вкратце, добавляли полную среду для дифференциации (120 мкл/лунку) (ростовая среда HepaRG, состоящая из среды Уильяма Е (GIBCO), добавки в ростовую среду (Biopredics, Кат. № ADD711C) и 1% (об./об.) GlutaMAX-l (Gibco #32551) и 1× пенициллина/стрептомицина (Gibco, #15140), дополненную 1,8% (об./об.) DMSO), содержащую 4% PEG-8000 (полиэтиленгликоль-8000) и маточный раствор вируса (от 20 до 30 GE/клетку). Через одни сутки после инфицирования клетки четыре раза промывали фосфатно-солевым буферным раствором, и заменяли среду (полная среда для дифференциации) на сутки 4 и сутки 7 на протяжении эксперимента.

ASGPR-dHepaRG, инфицированные HBV

Из линии клеток HepaRG (Biopredics International, Rennes, Франция, кат. № HRP101) получали линию клеток, стабильно сверхэкспрессирующую человеческий ASGPR1 и ASGPR2, с использованием лентивирусного способа. Пролиферирующие клетки HepaRG трансдуцировали при MOI 300 лентивирусом, продуцированным по требованию Sirion biotech (CLV-CMV-ASGPR1-T2a_ASGPR2-IRES-Puro), кодирующим человеческий ASGPR1 и 2 под контролем промотора CMV (цитомегаловирус) и гена устойчивости к пуромицину. Трансдуцированные клетки отбирали в течение 11 суток с использованием 1 мкг/мл пуромицина и затем поддерживали при той же самой концентрации антибиотика для обеспечения стабильной экспрессии трансгенов. Сверхэкспресию ASGPR1/2 подтверждали и на уровне мРНК посредством кПЦР-ОТ (количественная полимеразная цепная реакция, сопряженная с обратной транскрипцией (ASGPR1: в 8560 раз по сравнению с нетрансдуцированными, ASGPR2: в 2389 раз по сравнению с нетрансдуцированными), и на уровне белка посредством анализа проточной цитометрией. Дифференцированные клетки называются клетки ASGPR-dHepaRG.

Клетки ASGPR-dHepaRG дифференцировались с использованием 1,8% DMSO в течение по меньшей мере 2 недель до инфекции. Инфекцию HBV осуществляли так же, как и для клеток dHepaRG, описанных выше.

Первичные мышиные гепатоциты (РМН)

Первичные мышиные гепатоциты выделяли из печени мышей C57BL/6J, анестезированных пентобарбиталом, после протокола 2-этапной перфузии согласно литературе (Berry and Friend, 1969, J. Cell Biol; Paterna et al., 1998, Toxicol. Appl. Pharmacol.). Первая стадия представляла собой 5 мин с использованием HBSS плюс 15 мМ HEPES плюс 0,4 мМ EGTA, с последующими 12 мин HBSS плюс 20 мМ NaHCO3 плюс 0,04% BSA (Sigma #А7979) плюс 4 мМ CaCL2 (Sigma #21115) плюс 0,2 мг/мл коллагеназы типа 2 (Worthington #4176). Гепатоциты захватывали в 5 мл холодной среды Уильямса Е (WME) (Sigma #W1878, дополненной 1х пенициллином/стрептомицином/глутамином, 10% (об./об.) FBS (АТСС #30-2030)) на льду.

Неочищенную суспензию клеток фильтровали через 70 мкм клеточное сито с последующим 40 мкм клеточным ситом (Falcon #352350 и #352340), дополняли до 25 мл WME и центрифугировали при комнатной температуре в течение 5 мин при 50 g для осаждения гепатоцитов. Супернатант удаляли, и гепатоциты ресуспендировали в 25 мл WME. После добавления 25 мл 90%-ного раствора перколла (Sigma #Р4937; рН равен 8,5-9,5) и центрифугирования в течение 10 мин при 25°, 50 g, удаляли супернатант и плавающие клетки. Для удаления остающегося перколла осадок вновь ресуспендировали в 50 мл среды WME, центрифугировали 3 мин, 25°С при 50 д, и отбрасывали супернатант. Клеточный осадок ресуспендировали в 20 мл WME, определяли число и жизнеспособность клеток (Invitrogen, Cellcount) и разводили до 250000 клеток/мл. 25000 клеток/лунку высевали на 96-луночные планшеты, покрытые коллагеном (коллаген I от PD Biocoat #356407), и инкубировали при 37°С, 5% CO2. Через 3-4 ч клетки промывали WME для удаления неприкрепившихся клеток, и среду заменяли. Через 24 ч после посева добавляли олигонуклеотиды в желательной концентрации, и клетки инкубировали при 37°С, 5% CO2 в течение 72 часов. После выделения РНК (Qiagen, RNeasy 96) следовала одноэтапная кПЦР-ОТ (Quanta Bioscience, qScript XLT ToughMix для 1-этапной кПЦР-ОТ) с использованием анализов TaqMan для генов-мишеней (PAPD5 : Mm01244121_m1 FAM-MGB, PAPD7 : Mm01349513_m1 FAM-MGB) и гена домашнего хозяйства (GusB Mm_01197698_m1, VIC-MGB) согласно протоколам изготовителя.

Анализ природной инфекции первичных человеческих гепатоцитов (РНН)

Первичные человеческие гепатоциты (РНН), выделенные способом перфузии с коллагеназой из химерных мышей uPA/SCID с гуманизированной печенью, приобретали у PhoenixBio (Хиросима, Япония). Клетки высаживали на 96-луночные планшеты, покрытые коллагеном типа I, в концентрации 7×104 клеток на лунку, в культуральные среды, предоставленные Phoenix Bio (см. Ishida et al 2015 Am J Pathol. Vol 185, стр. 1275-1285 относительно дополнительных подробностей). Генотип D HBV получали из супернатанта культуры клеток HepG2.2.15 и концентрировали с использованием осаждения с PEG. РНН инфицировали в среде для РНН, содержащей 4% PEG 8000, при MOI 10 в течение 20 ч при 37°С перед промывкой клеток PBS 4 раза. Через 1 сутки после инфекции к клеткам доставляли олигонуклеотид в конечном объеме 125 мкл среды для РНН. Клетки повторно обрабатывали в сутки 4 и 7 после инфекции. В сутки 11 после инфекции отбирали супернатанты и клетки. Уровни HBsAg и HBeAg в супернатантах оценивали с использованием анализа CLIA ELISA (см. раздел Материалы и методы; измерения антигена HBV). мРНК выделяли из клеток с использованием робота MagNA Pure и набора 96 для большого объема клеточной РНК MagNA Pure (Roche, #05467535001) согласно протоколу изготовителя. Относительные уровни экспрессии мРНК PAPD5 и PAPD7 анализировали с использованием ПЦР в реальном времени, как описано в разделе Материалы и методы.

Измерения антигенов HBV

Для оценки влияния на экспрессию и секрецию антигенов HBV супернатанты отбирали в сутки 11. Параметры размножения HBV - уровни HBsAg и HBeAg - измеряли с использованием наборов для CLIA ELISA (Autobio Diagnostic # CL0310-2, # CL0312-2), согласно протоколу изготовителя. Вкратце, 25 мкл супернатанта на лунку переносили в соответствующий планшет для микротитрования, покрытый антителом, и добавляли 25 мкл реактива на основе конъюгата фермента. Планшет инкубировали в течение 60 мин на шейкере при комнатной температуре перед промывкой лунок пять раз промывочным буфером с использованием автоматического промывателя. В каждую лунку добавляли 25 мкл субстрата А и Б. Планшеты инкубировали на шейкере в течение 10 мин при комнатной температуре перед измерением люминисценции с использованием ридера люминисценции Envision (Perkin Elmer).

ПЦР в реальном времени внутриклеточной мРНК HBV из клеток, инфицированных HBV

мРНК HBV количественно измеряли в технических двойных повторностях посредством кПЦР с использованием QuantStudio 12К Flex (Applied Biosystems), одноэтапного набора TaqMan RNA-to-CT (Applied Biosystems, #4392938), эндогенного контроля - человеческого ACTB (Applied Biosystems, #4310881E). Реактивы Taqman использовали совместно со следующими имеющимися в продаже праймерами от ThermoFisher Sceintific (HBV Pa03453406_s1, ACTB 4310881E). Экспрессию мРНК анализировали с использованием способа порога сравнительного цикла 2-ΔΔCt с нормированием к контрольному гену АСТВ и к клеткам, обработанным PBS.

ПЦР в реальном времени для экспрессии мРНК PAPD5 и PAPD7

кПЦР проводили на РНК, выделенной из обработанных клеток или образцов гомогенизированной ткани. После денатурации дуплекса PHK/LNA (90°С, 40 с) проводили ПЦР в реальном времени с использованием одноэтапного протокола (одноэтапная кПЦР-ОТ qScript™ XLT ToughMix®, Low ROX™ от Quanta Bioscience, #95134-500) в дуплексной постановке со следующими анализами с праймерами TaqMan (ThermoFisher Scientific):

PAPD5 (Hs00223727_m1, FAM-MGB)

PAPD7 (Hs00173159_m1, FAM-MGB),

ген домашнего хозяйства GUSB (Hu_4326320E, VIC-MGB), следуя рекомендациям поставщика.

Титр вирусных частиц количественного измерения ДНК HBV

Выделение ДНК HBV проводится с использованием набора для вирусов QIAamp UltraSens (Qiagen, #53704) согласно протоколу изготовителя со следующими оптимизациями. 30 мкл и 3 мкл образца вируса разводят в 1 мл PBS перед добавлением буфера АС. Стадия первого центрифугирования проводится в течение 45 мин на полной скорости и при 4°С.ДНК HBV количественно измеряется в двойных повторностях посредством кПЦР с использованием QuantStudio 12К Flex (Applied Biosystems), мастер-микса для экспрессии генов TaqMan (Applied Biosystems, #4369016) и премикса праймеров 1:1:0,5, показанного в Таблице 9 выше, и зонда, разведенного до 100 мкМ. кПЦР проводится с использованием следующих установок: инкубация UDG (2 мин, 50°С), активация фермента (10 мин, 95°С) и кПЦР (40 циклов по 15 с, 95°С для денатурации и 1 мин, 60°С для отжига и достройки). Расчет эквивалентов геномов основывается на стандартной кривой, полученной от разведений плазмиды с генотипом D HBV с известными концентрациями.

Титр частиц HBV можно определять с использованием праймера, специфичного в отношении кора HBV (Integrated DNA Technologies) (Таблица 11) в кПЦР на выделенной внутриклеточной мРНК из обработанных клеток.

Синтез олигонуклеотидов

Синтез олигонуклеотидов, в общем, известен в данной области. Ниже приводится протокол, который можно применять. Олигонуклеотиды по настоящему изобретению возможно были получены слегка отличающимися способами в показателях использованных прибора, подложки и концентраций.

Олигонуклеотиды синтезируются на уридиновых универсальных подложках с использованием фосфорамидитного подхода на Oligomaker 48 в 1 мкмольном масштабе. В конце синтеза олигонуклеотиды отщепляются от твердой подложки с использованием водного аммония в течение 5-16 часов при 60°С.Олигонуклеотиды очищают посредством ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография) с обращенной фазой (ВЭЖХ-ОФ) или посредством экстракций твердой фазы и характеризуют посредством СВЭЖХ (сверхвысокоэффективная жидкостная хроматография), а молекулярная масса дополнительно подтверждается посредством МС-ЭРИ (масс-спектрометрия с электрораспылительной ионизацией).

Удлинение олигонуклеотида:

Связывание β-цианоэтилфосфорамидитов (ДНК-А(Bz), ДНК-G(ibu), ДНК-C(Bz), ДНК-Т, LNA-5-метил-C(Bz), LNA-A(Bz), LNA-G(dmf) или LNA-T) проводится с использованием раствора 0,1 М амидита, защищенного 5'-O-DMT, в ацетонитриле и DCI (4,5-дицианоимидазол) в ацетонитриле (0,25 М) в качестве активатора. Для конечного цикла можно использовать фосфорамидит с желательными модификациями, например, С6 линкер для присоединения конъюгатной группы или конъюгатную группу, как таковую. Тиолирование для введения фосфоротиоатных связей проводится с использованием ксантангидрида (0,01 М в ацетонитриле / пиридине 9:1). Фосфодиэфирные связи могут вводиться с использованием 0,02 М йода в THF (тетрагидрофуран) / пиридине / воде 7:2:1. Остальными реактивами являются реактивы, типично используемые для синтеза олигонуклеотидов.

Для конъюгирования после твердофазного синтеза в последнем цикле твердофазного синтеза можно использовать имеющийся в продаже С6 аминолинкер-фосфорамидит, и после снятия защиты и отщепления от твердой подложки выделяется аминосвязанный олигонуклеотид со снятой защитой. Конъюгаты вводятся посредством активации функциональной группы с использованием стандартных способов синтеза.

Очистка посредством ВЭЖХ-ОФ:

Неочищенные соединения очищают посредством препаративной ВЭЖХ-ОФ на колонке Phenomenex Jupiter С18 10 мкм 150×10 мм. В качестве буферов используют 0,1 М ацетат аммония, рН 8, при скорости тока 5 мл/мин. Отобранные фракции лиофилизируют с получением очищенного соединения, типично в виде белого твердого вещества.

Сокращения:

DCI: 4,5-дицианоимидазол

DCM: дихлорметан

DMF: диметилформамид

DMT: 4,4'-диметокситритил

THF: тетрагидрофуран

Bz: бензоил

Ibu: изобутирил

ВЭЖХ-ОФ: высокоэффективная жидкостная хроматография с обращенной фазой.

Анализ Тт:

Дуплексы олигонуклеотида и РНК-мишени (связанной фосфатом - РО) разводят до 3 мМ в 500 мл воды, не содержащей РНКазы, и смешивают с 500 мл 2× Тт-буфера (200 мМ NaCl, 0,2 мМ EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота), 20 мМ фосфат Na, рН 7,0). Данный раствор нагревают до 95°С в течение 3 мин и затем дают осуществляться отжигу при комнатной температуре в течение 30 мин. Температуры плавления дуплекса (Тт) измеряют на спектрофотометре Lambda 40, работающем в ультрафиолетовой/видимой области, оснащенном программатором температуры Пелетье РТР6, используя программу РЕ Templab (Perkin Elmer). Температура повышается от 20°С до 95°С и затем снижается до 25°С, с записью поглощения при 260 нм. Для оценки Тт дуплекса используются первая производная и локальные максимумы как плавления, так и отжига.

Пример 1: скрининг эффективности in vitro антисмысловых олигонуклеотидов, нацеленных на PAPD5 и PAPD7 (биспецифичных), в клетках HeLa

Скрининг олигонуклеотидов осуществляли с использованием 16-18-мерных гэпмеров, нацеленных на SEQ ID NO: 17, 18 и 19. Анализ эффективности осуществляли в эксперименте in vitro в клетках HeLa, экспресирующих и PAPD5, и PAPD7.

Клетки HeLa культивировали, как описано в разделе Материалы и методы. Клетки инкубировали в течение 24 часов до добавления олигонуклеотидов, растворенных в PBS. Конечная концентрация олигонуклеотидов составляла 5 и 25 мкМ, конечный объем культуры составлял 100 мкл/лунку. Клетки отбирали через 3 суток после добавления олигонуклеотидных соединений, и РНК экстрагировали с использованием набора для очистки РНК PureLink Pro 96 (Ambion) согласно инструкциям изготовителя. Уровни мРНК PAPD5 и PAPD7 анализировали посредством ПЦР в реальном времени, как описано в разделе Материалы и методы.

Относительные уровни экспрессии мРНК PAPD5 и мРНК PAPD7 показаны в Таблице 12 в виде % относительно среднего контрольных образцов (клетки, обработанные PBS), т.е. чем меньше значение, чем больше ингибирование.

Пример 2: ЕС50 и эффективность in vitro в клетках HepaRG, инфицированных HBV

Все олигонуклеотиды из Примера 1 тестировали на их эффект на параметры размножения HBV в клетках dHepaRG, инфицированных HBV.

В целях сравнения антисмысловые олигонуклеотиды по изобретению прямо сравнивали с антисмысловыми олигонуклеотидами, нацеленными на мРНК HBV. Олигонуклеотиды, нацеленные на HBV, показаны в Таблице 13.

Клетки dHepaRG, инфицированные HBV (описанные в разделе Материалы и методы, клетки dHepaRG, инфицированные HBV), культивировали в 96-луночных планшетах. В одни сутки после инфекции HBV олигонуклеотиды добавляли к клеткам в трехкратных серийных разведениях (20,00; 6,67; 2,22; 0,74; 0,25; 0,08; 0,03; 0,01 мкМ олигонуклеотида) с использованием поглощения без помощи (гимноз). Всего анализировали 49 олигонуклеотидов. Данный эксперимент проводили в тройной повторности с PBS в качестве контролей. Обработку олигонуклеотидом повторяли в сутки 4 и 7.

В сутки 11 после инфекции отбирали супернатанты и клетки.

Уровни HBsAg и HBeAg в супернатантах оценивали с использованием анализа CLIA ELISA (см. Материалы и методы, измерения антигенов HBV).

ЕС50, макс. KD (эффективность) параметров размножения HBV HBsAg и HBeAg рассчитывали с использованием R-функции drm() из пакета drc (v3.0-1), четырехпараметрическую log-логистическую функцию аппроксимировали к экспрессии интересующего гена как функцию концентрации олигонуклеотида с получением значения ЕС50 и максимального нокдауна. Результаты демонстрируются в Таблице 14 и представляют собой % от среднего контрольных образцов (PBS контроль и неинфицированные (NIF) с расчетом следующим образом: [(опытное значение - среднее PBS)/ (среднее NIF - среднее PBS)]*100)).

Из этих данных можно видеть то, что значительное число соединений имеют хорошее влияние на HBsAg и HBeAg. Соединения с олигонуклеотидным мотивом SEQ ID NO: 17 и 18, по-видимому, являются более эффективными, чем соединения, которые были сделаны с мотивом SEQ ID NO: 19.

На Фиг. 3 также можно видеть то, что для олигонуклеотидов, которые уменьшают PAPD5 и PAPD7 в клетках HeLa более, чем на 70%, имеется высокая корреляция в отношении способности данных олигонуклеотидов уменьшать HBsAg в клетках dHepaRG, инфицированных HBsAg.

Пример 3: скрининг эффективности in vitro антисмысловых олигонуклеотидов, нацеленных на PAPD5 и PAPD7, в клетках HeLa

Получали дополнительную библиотеку из 298 олигонуклеотидов, увеличивающую разнообразие олигонуклеотидных мотивов SEQ ID NO: 17, 18 и 19 с использованием разных конструкций. Анализ эффективности проводили в эксперименте in vitro, как описано в Примере 1, за исключением того, что скрининг проводили только при 5 мкМ.

Относительные уровни экспрессии мРНК PAPD5 и мРНК PAPD7 показаны в Таблице 15 как % от средних контрольных образцов (клетки, обработанные PBS), т.е. чем меньше значение, тем больше ингибирование.

Из этих данных можно видеть то, что конструкции LNA-гэпмера на основе мотива последовательности с SEQ ID NO: 19 имеют очень слабый (от 0 до 10%) нокдаун PAPD5 и PAPD7.

Пример 4: ЕС50 и эффективность in vitro отобранных антисмысловых олигонуклеотидов в клетках HeLa

ЕС50 и эффективность (KD) лучше всего работающих олигонуклеотидов из Примера 1 и 3 определяли с использованием того же самого анализа со следующими концентрациями олигонуклеотидов: 50; 15,81; 5,00; 1,58; 0,50; 0,16; 0,05 и 0,016 мкМ.

ЕС50, макс. KD (эффективность) экспрессии мРНК PAPD5 и PAPD7 рассчитывали с использованием R-функции drm() из пакета drc (v3.0-1), четырехпараметрическую log-логистическую функцию аппроксимировали к экспрессии интересующего гена как функцию концентрации олигонуклеотида с получением значения ЕС50 и максимального нокдауна. Результаты демонстрируются в Таблице 16.

Пример 5: влияние in vitro на клетки ASGPR-dHepaRG, инфицированные HBV, с использованием отобранных антисмысловых олигонуклеотидов, нацеленных на PAPD5 и PAPD7

Набор олигонуклеотидов, подвергнутых скринингу в Примере 3, подвергали скринингу в ASGPR-dHepaRG по существу с использованием анализа из Примера 2 со следующими изменениями. Скрининг проводили в ASGPR-dHepaRG, инфицированных HBV, при следующих концентрациях: 20; 6,67 и 2,22 мкМ олигонуклеотида и со сравнительными молекулами в Таблице 17.

Для сравнительных целей анализировали комбинации олигонуклеотида с одиночным нацеливанием на PAPD5 и олигонуклеотида с одиночным нацеливанием на PAPD7 в Таблице 17 совместно с олигонуклеотидами по изобретению.

Уменьшение уровней HBsAg и HBeAg показано в Таблице 18 и 19, чем больше значение, тем меньше ингибирование.

Из этих данных можно видеть, что лучше всего работающие биспецифичные к PAPD5/PAPD7 олигонуклеотиды имеют лучшее влияние в показателях уменьшения уровня HBsAg и HBeAg с половиной концентрации олигонуклеотида (20 мкМ) по сравнению с комбинированными обработками (2×20 мкМ).

Пример 6. Скрининг эффективности in vitro стереоопределенных антисмысловых олигонуклеотидов, нацеленных на PAPD5 и PAPD7, в клетках HeLa

Для даже большего увеличения разнообразия вокруг мотивов последовательностей SEQ ID NO: 18 получали библиотеку стереоопределенных олигонуклеотидов на основе стереослучайного родительского соединения с СМР ID NO 18_1.

Анализ эффективности проводили в эксперименте in vitro, как описано в Примере 1, за исключением того, что скрининг проводили в концентрации 1 мкМ, а некоторых - 5 мкМ.

Относительные уровни экспрессии мРНК PAPD5 и мРНК PAPD7 показаны в Таблице 20 в виде % от родительского олигонуклеотида, т.е. чем больше значение, тем лучше ингибирование.

Пример 7: ЕС50 и эффективность in vitro отобранных стереоопределенных антисмысловых олигонуклеотидов в клетках HeLa

ЕС50 и эффективность (KD) лучше всего работающих олигонуклеотидов из Примера 6 определяли с использованием того же самого анализа со следующими концентрациями олигонуклеотидов: 33; 10,44; 3,33; 1,044; 0,33; 0,104; 0,033 и 0,01 мкМ.

ЕС50, макс. KD (эффективность) экспрессии мРНК PAPD5 и PAPD7 рассчитывали с использованием R-функции drm() из пакета drc (v3.0-1), четырехпараметрическую log-логистическую функцию аппроксимировали к экспрессии интересующего гена как функцию концентрации олигонуклеотида с получением значения ЕС50 и максимального нокдауна. Результаты демонстрируются в Таблице 21.

Из этих данных можно видеть то, что улучшения ЕС50 и эффективности в отношении нокдауна PAPD5 и PAPD7 могут достигаться и со стереоопределенными подбиблиотеками и с полностью стереоопределенными соединениями.

Пример 8: эффект in vitro на клетки ASGPR-dHepaRG, инфицированные HBV, с использованием отобранных стереоопределенных антисмысловых олигонуклеотидов, нацеленных на PAPD5 и PAPD7

Набор самых эффективных олигонуклеотидов из Примера 6 анализировали на их влияние на параметры размножения HBV в клетках dHepaRG-ASGPR, инфицированных HBV.

Данный эксперимент проводили, как описано в Примере 5.

Уменьшение уровней HBsAg и HBeAg показано в Таблице 22 и 23, чем больше значение, тем больше ингибирование.

Пример 9: влияние in vitro на клетки ASGPR-dHepaRG, инфицированные HBV, с использованием отобранных конъюгированных с GalNAc антисмысловых олигонуклеотидов, нацеленных на PAPD5 и PAPD7

Набор самых эффективных олигонуклеотидов из Примера 1 конъюгировали с конъюгатной группировкой GalNAc и анализировали на их влияние на параметры размножения HBV в клетках ASGPR-dHepaRG, инфицированных HBV.

Оценку ЕС50 и эффективности (KD) на HBsAg и HBeAg олигонуклеотидов, конъюгированных с GalNAc, проводили, как описано в Примере 2, с использованием клеток ASGPR-dHepaRG, инфицированных HBV, и без сравнительных олигонуклеотидов. Результаты показаны в Таблице 24.

Помимо методики в Примере 2, отобранные клетки один раз промывали в PBS, лизировали в лизирующем буфере MagNA Pure (Roche #05467535001) и хранили при -80°С. РНК выделяли с использованием MagNA Pure «набора 96 для большого объема клеточной РНК» (Roche #05467535001), и уровни экспрессии мРНК PAPD5 и PAPD7 определяли, как описано в разделе Материалы и методы, ПЦР в реальном времени для PAPD5 и PAPD7. ЕС50 и эффективность (KD) рассчитывали с использованием R-функции drm() из пакета drc (v3.0-1), четырехпараметрическую log-логистическую функцию аппроксимировали к экспрессии интересующего гена как функцию концентрации олигонуклеотида с получением значения ЕС50 и максимального нокдауна. Результаты демонстрируются в Таблице 24А.

Из этих данных можно видеть то, что посредством конъюгирования группировки GalNAc с олигонуклеотидом значения ЕС50 улучшаются по меньшей мере в 40 раз (заметьте, что значения в настоящей таблице приводятся в нМ, тогда как в Таблице 14 - в мкМ). Например, уменьшение HBsAg соединением 20_15 (конъюгированным с GalNAc) улучшалось в 176 раз по сравнению с соединением 18_05 (голая версия 20_15).

Из этих данных можно видеть то, что большинство отобранных олигонуклеотидов, конъюгированных с GalNAc, нацеленных на PAPD5 и PAPD7 способны уменьшать уровни мРНКдо менее, чем 10%.

Пример 10: скрининг эффективности in vitro антисмысловых олигонуклеотидов, нацеленных на PAPD5 и PAPD7, в клетках dHepaRG

Олигонуклеотиды, подвергнутые скринингу на нокдаун PAPD5 и PAPD7 в клетках HeLa (Пример 1 и 3), подвергали скринингу в клетках dHepaRG для демонстрации эффективного нокдауна в линии клеток печени.

Клетки dHepaRG культивировали, как описано в разделе Материалы и методы. Использовали следующие концентрации олигонуклеотидов: 50; 15,81; 5,00; 1,58; 0,50; 0,16; 0,05 и 0,016 мкМ в конечном объеме культуры 100 мкл/лунку. Клетки отбирали через 6 суток после добавления олигонуклеотидных соединений, и РНК экстрагировали с использованием набора для очистки РНК PureLink Pro 96 (Ambion) согласно инструкциям изготовителя.

Уровни мРНК PAPD5 и PAPD7 анализировали посредсвом ПЦР в реальном времени, как описано в разделе Материалы и методы. ЕС50, макс. KD (эффективность) экспрессии мРНК PAPD5 и PAPD7 рассчитывали с использованием R-функции drm() из пакета drc (v3.0-1), четырехпараметрическую log-логистическую функцию аппроксимировали к экспрессии интересующего гена как функцию концентрации олигонуклеотида с получением значения ЕС50 и максимального нокдауна.

Результаты демонстрируются в Таблице 25.

Из этих данных можно видеть то, что эффективное уменьшение уровня мишени также может достигаться в линии клеток, происходящей из гепатоцитов.

Пример 11: скрининг эффективности in vitro стереоопределенных олигонуклеотидов, нацеленных на PAPD5 и PAPD7, в клетках dHepaRG

Стереоопределенные олигонуклеотиды, подвергнутые скринингу на нокдаун PAPD5 и PAPD7 в клетках HeLa (Пример 7), подвергали скринингу в клетках dHepaRG для демонстрации эффективного нокдауна в линии клеток печени.

Скрининг проводили, как описано в Примере 10, со следующими концентрациями олигонуклеотидов: 33; 10,44; 3,33; 1,044; 0,33; 0,104; 0,033 и 0,01 мкМ.

Уровни мРНК PAPD5 и PAPD7 анализировали ПЦР в реальном времени, как описано в разделе Материалы и методы. ЕС50, макс. KD (эффективность) экспрессии мРНК PAPD5 и PAPD7 рассчитывали с использованием R-функции drm() из пакета drc (v3.0-1), четырехпараметрическую log-логистическую функцию аппроксимировали к экспрессии интересующего гена как функцию концентрации олигонуклеотида с получением значения ЕС50 и максимального нокдауна.

Результаты демонстрируются в Таблице 26.

Из этих данных можно видеть, что стереоопределенные олигонуклеотиды также являются эффективными в уменьшении уровня мишени в линии клеток, происходящих из гепатоцитов.

Пример 12: влияние in vitro на клетки ASGPR-dHepaRG, инфицированные HBV, с использованием отобранных конъюгированных с GalNAc антисмысловых олигонуклеотидов, нацеленных на PAPD5 и PAPD7

Набор самых эффективных олигонуклеотидов из Примера 5 конъюгировали с конъюгатной группировкой GalNAc и анализировали на их влияние на параметры размножения HBV в клетках ASGPR-dHepaRG, инфицированных HBV.

Для сравнительных целей антисмысловые олигонуклеотиды по изобретению сравнивали с конъюгированными с GalNAc версиями олигонуклеотидов, нацеленных на HBV, показанными в Таблице 13, причем конъюгированные с GalNAc версии показаны в Таблице 13А.

Оценку на HBsAg и HBeAg ЕС50 и эффективности (KD) олигонуклеотидов, конъюгированных с GalNAc, проводили, как описано в Примере 2, с использованием клеток ASGPR-dHepaRG, инфицированных HBV. Результаты показаны в Таблице 27.

Помимо методики в Примере 2, отобранные клетки один раз промывали в PBS, лизировали в лизирующем буфере MagNA Pure (Roche #05467535001) и хранили при -80°С. РНК выделяли с использованием MagNA Pure «набора 96 для большого объема клеточной РНК» (Roche #05467535001), и уровни экспрессии мРНК PAPD5 и PAPD7 определяли, как описано в разделе Материалы и методы, ПЦР в реальном времени для PAPD5 и PAPD7. ЕС50 и эффективность (KD) рассчитывали с использованием R-функции drm() из пакета drc (v3.0-1), четырехпараметрическую log-логистическую функцию аппроксимировали к экспрессии интересующего гена как функцию концентрации олигонуклеотида с получением значения ЕС50 и максимального нокдауна. Результаты демонстрируются в Таблице 27А.

Соединения, показанные в таблице, имеют фосфодиэфирные связи в динуклеотиде са, с последующим С6 линкером, как показано в Таблице 10.

Inf - ЕС50 не мог быть рассчитан из-за отсутствия ответа на дозу.

Как и ожидалось, две молекулы, нацеленные на HBV, имели очень незначительное влияние на PAPD5 и PAPD7, их эффекты на HBsAg и HBeAg, следовательно, не связаны с их способностью уменьшать уровень PAPD5 или PAPD7. Остальные анализируемые соединения демонстрируют уменьшение уровня мишени менее 85% и значения ЕС50 меньше 0,09 мкМ, что хорошо коррелирует с видимыми влияниями на HBsAg и HBeAg в Таблице 27.

Пример 13: влияние in vitro на клетки РНН, инфицированные HBV, с использованием отобранных антисмысловых олигонуклеотидов, конъюгированных с GalNAc, нацеленных на PAPD5 и PAPD7

Набор олигонуклеотидов, конъюгированных с GalNAc, дополнительно тестировали в первичных человеческих гепатоцитах, инфицированных HBV (см. раздел Материалы и методы; анализ природной инфекции РНН), для иллюстрации эффективности в системе in vitro с природной экспрессией ASGPR. Используемыми концентрациями олигонуклеотидов были трехкратные серийные разведения (20,00; 6,67; 2,22; 0,74; 0,25; 0,08; 0,03; 0,01 мкМ олигонуклеотида).

ЕС50, макс. KD (эффективность) параметров размножения HBV HBsAg и HBeAg рассчитывали с использованием R-функции drm() из пакета drc (v3.0-1), четырехпараметрическую log-логистическую функцию аппроксимировали к экспрессии интересующего гена как функцию концентрации олигонуклеотида с получением значения ЕС50 и максимального снижения. Результаты демонстрируются в Таблице 28.

ЕС50, макс. KD (эффективность) экспрессии мРНК PAPD5 и PAPD7 рассчитывали с использованием того же самого алгоритма. Результаты показаны в Таблице 28А.

Соединения, показанные в таблице, имеют фосфодиэфирные связи в динуклеотиде са, с последующим С6 линкером, как это показано в Таблице 10.

Из этих данных можно видеть, что отобранные олигонуклеотиды, конъюгированные с GalNAc, нацеленные на PAPD5 и PAPD7, способны уменьшать секрецию антигена HBV в инфицированных первичных человеческих гепатоцитах.

Из этих данных можно видеть, что отобранные конъюгированные с GalNAc олигонуклеотиды, нацеленные на PAPD5 и PAPD7, способны уменьшать уровни их мишеней до 11% или менее, за исключением соединения 20_17, которое, по-видимому, имеет очень слабое влияние на мРНК PAPD5 при сохранении влияния на мРНК PAPD7.

Пример 14: скрининг на эффективность in vitro антисмысловых олигонуклеотидов, нацеленных на человеческий и мышиный PAPD5 и PAPD7 (биспецифичных), в клетках HeLa и клетках РМН

Скрининг олигонуклеотидов проводили с использованием гэпмерных олигонуклеотидов, нацеленных на человеческие и мышиные транскрипты PAPD5 и PAPD7 (Таблица 5), в линии человеческих клеток HeLa и в первичных мышиных гепатоцитах (РМН).

Скрининг в клетках HeLa проводили, как описано в Примере 1, с концентрацией 25 мкМ.

Скрининг в клетках РМН проводили, как описано в разделе «Материалы и методы» под заголовком «Первичные мышиные гепатоциты» с использованием 5 мкМ олигонуклеотида.

На Фиг. 11 показаны результаты скрининга, каждая точка представляет соединение из Таблицы 5 и его способность уменьшать уровень мРНК PAPD7 (ордината) и мРНК PAPD5 (абсцисса). В клетках HeLa (человеческих) имеется хорошая корреляция между уменьшением уровня мРНК PAPD5 и PAPD7, тогда как в клетках РМН (мышиных), по-видимому, уменьшение мРНК PAPD7 не является очень эффективным по сравнению с уменьшением мРНК PAPD5.

Возможным объяснением умеренного ингибирования мРНК PAPD7 в мышиных гепатоцитах является то, что первичный подвергнутый сплайсингу транскрипт мРНК PAPD7, экспрессируемый в первичных мышиных гепатоцитах, имеет сайт начала транскрипции ниже от сайта связывания данного олигонуклеотида. Это не было идентифицировано, пока не осуществили секвенирование всего транскриптома методом дробовика (РНКсек) на первичных мышиных гепатоцитах.

Пример 15: влияние in vitro на клетки ASGPR-dHepaRG, инфицированные HBV, с использованием отобранных олигонуклеотидов, конъюгированных с GalNAc, нацеленных на PAPD5 и PAPD7

Дополнительный набор олигонуклеотидов из Примера 2 и 5 конъюгировали с конъюгатной группировкой GalNAc и тестировали на их влияние на параметры размножения HBV в клетках ASGPR-dHepaRG, инфицированных HBV.

Оценку ЕС50 и эффективности (KD) на HBsAg и HBeAg олигонуклеотидов, конъюгированных с GalNAc, проводили, как описано в Примере 2, с использованием клеток ASGPR-dHepaRG, инфицированных HBV. Результаты показаны в Таблице 29.

Помимо методики в Примере 2, отобранные клетки один раз промывали в PBS и лизировали в лизирующем буфере MagNA Pure (Roche #05467535001) и хранили при -80°С. РНК выделяли с использованием MagNA Pure «набора 96 для большого объема клеточной РНК» (Roche #05467535001), и уровни экспрессии мРНК PAPD5 и PAPD7 определяли, как описано в разделе Материалы и методы, ПЦР в реальном времени для PAPD5 и PAPD7. ЕС50 и эффективность (KD) рассчитывали с использованием R-функции drm() из пакета drc (v3.0-1), четырехпараметрическую log-логистическую функцию аппроксимировали к экспрессии интересующего гена как функцию концентрации олигонуклеотида с получением значения ЕС50 и максимального нокдауна. Результаты демонстрируются в Таблице 29А.

Пример 16: влияние на экспрессию HBsAg от интегрированной в хромосому ДНК HBV с использованием отобранных биспецифичных олигонуклеотидов, нацеленных на PAPD5 и PAPD7

В настоящем эксперименте проанализировали, был ли способен набор олигонуклеотидов против PADP5/7, конъюгированных с GalNAc, с хорошей активностью в отношении PADP5 и PADP7 уменьшать уровень антигена HBs и экспрессию мРНК из линии клеток человеческой печеночно-клеточной карциномы Нер3В, которые секретируют антиген HBs от интегрированной в хромосому ДНК HBV.

Клетки Нер3В (Knowles et al. 1980. Science 209 pp. 497-499) приобретали в АТСС (Американская коллекция типовых культур) (АТСС НВ-8064) и культивировали в минимальной питательной среде Игла (ЕМЕМ), дополненной 10% FBS (фетальная телячья сыворотка). Клетки высаживали на 96-луночные планшеты, покрытые коллагеном, в концентрации 1,5 х 105 клеток на лунку и культивировали при 37°С в увлажненной атмосфере с 5% CO2. Через одни сутки после посева клеток к клеткам добавляли олигонуклеотид с использованием концентраций, начинающихся с 20 мкМ, и с их трехкратными серийными разведениями (20,00; 6,67; 2,22; 0,74; 0,25; 0,08; 0,03; 0,01 мкМ олигонуклеотида). Обработку повторяли с заменой среды в сутки 4 и сутки 7. В сутки 11 супернатанты отбирали для измерения HBsAg (проведенного, как описано в разделе Материалы и методы под заголовком «Измерения антигенов HBV»), и клетки один раз промывали PBS, в каждую лунку добавляли 200 мкл лизирующего буфера MagNA Pure, и плашеты хранили при -80°С для экстракции РНК.

Внутриклеточную мРНК выделяли из лизированных клеток Нер3В с использованием робота MagNA Pure и набора 96 для большого объема клеточной РНК MagNA Pure (Roche, #05467535001) согласно протоколу изготовителя. мРНК PAPD5 и PAPD7 количественно измеряли в двойной технической повторности посредством отдельных кПЦР-ОТ с использованием QuantStudio 12К Flex (Applied Biosystems), 1-этапного набора RNA-to-CT TaqMan (Applied Biosystems, #4392938), эндогенного контроля в виде человеческого АСТВ (Applied Biosystems, #4310881Е), праймеров и реактивов для мРНК PAPD5 и PAPD7 Taqman (Life Technologies, ID анализа Hs00900790_m1 (PAPD5) и Hs00173159_m1 (PAPD7) и сделанного на заказ анализа с ID APMFW4G (Small HBs)). кПЦР проводили с использованием следующих установок: инкубация UDG (15 мин, 48°С), активация фермента (10 мин, 95°С) и кПЦР (40 циклов по 15 с, 95°С для денатурации и 1 мин при 60°С для отжига и удлинения).

ЕС50 и макс. KD (макс, эффективность в % от солевого раствора) уменьшений HBsAg, мРНК HBs, PAPD5 и PAPD7 рассчитывали с использованием нелинейной аппроксимации GraphPad Prism 7.02. Результаты демонстрируются в Таблице 30 и 31.

Из этих данных можно видеть то, что 4 из 7 протестированных олигонуклеотидов способны уменьшать экспрессию мРНК HBsAg и HBs от интегрированного фрагмента HBs до менее чем 55% от контроля в виде физиологического раствора.

Пример 17: эффект отобранного биспецифичного нацеленного на PAPD5 и PAPD7 олигонуклеотида у приматов, не являющихся человеком

Ингибирование экспрессии мРНК PAPD5 и PAPD7 в печени яванских макаков количественно измеряли посредством секвенирования РНК. Животных обрабатывали один раз в неделю либо физиологическим раствором, либо 1, 3 или 10 мг/кг/неделю CMP ID NO 20_12 в течение 4 недель (6 животных на группу, 5 общих доз в сутки 1, 8, 15, 22 и 29) и умерщвляли в сутки 29 (через 4 недели после дозирования). Параллельно животных обрабатывали один раз в неделю либо физиологическим раствором, либо 10 мг/кг/неделю CMP ID NO 20_12), вновь в течение 4 недель, всего в 5 дозах, но с 4-недельным периодом восстановления и умерщвляли в сутки 56 (4 недели дозирования плюс 4 недели восстановления).

Образцы печени отбирали в RNA-Later (Qiagen, кат. 76104) в пределах 20 мин после обескровливания. Приблизительно 10 мг ткани лизировали в 800 микролитрах лизирующего буфера Magna Pure (Roche) с использованием Tissue Lyser II (Qiagen). 350 микролитровые аликвоты лизатов затем переносили в 96-глубоколуночный планшет Magna Pure и автоматически обрабатывали. РНК количественно измеряли посредством абсорбционной спектроскопии (Nanodrop, ThermoFischer), и целостность РНК (согласно числу целостности РНК - RIN) контролировали посредством микроструйного электрофореза с капиллярным блоком с использованием биоанализатора Agilent 2100 с наночипами RNA 6000 (Agilent, кат. 5067-1511).

Для создания штрихкодированных библиотек кДНК использовали 400 нг аликвот общей РНК в качестве ввода для набора для общей нитевой РНК TruSeq™ (Illumina, кат. 20020598) в сочетании с набором для удаления рРНК Ribo-Zero™ Gold (Illumina, кат. MRZG12324). Распределение размера библиотек оценивали посредством электрофореза с использованием высокочувствительного набора для ДНК от Agilent (кат. 5067-4627). Библиотеки количественно измеряли с использованием набора для количественного измерения библиотек кПЦР-ОТ КАРА (Kapa Biosystems, кат. КК4824). Библиотеки объединяли в эквимолярных концентрациях и разводили до 11 пМ перед загрузкой на проточную ячейку секвенатора Illumina HiSeq 4000 следующим образом. Библиотеки удлиняли с использованием набора HiSeq РЕ Rapid Cluster v2 (Illumina, кат. PE-402-4002). Проточные ячейки, несущие амплифицированные кластеры, секвенировали с использованием парно-концевых считываемых фрагментов (50 пар оснований) с набором TruSeq Rapid SBS - HS (Illumina, кат. FC-402-4001). Анализ изображений в реальном времени и распознавание оснований осуществляли с использованием программы HiSeq Sequencing Control (HCS). Для получения файлов FASTQ считываемых пар последовательности использовали программу CASAVA в версии 1.8.

Наименьшим полученным размером библиотеки было 17 миллионов пар считываемых фрагментов, а наибольшим было 114 миллионов пар считываемых фрагментов. В среднем имелось 50 миллионов пар считываемых фрагментов на образец, и медиана составляла 47 миллионов пар считываемых фрагментов на образец. Пары считываемых фрагментов каждой библиотеки выравнивали с транскриптами яванского макака из базы данных RefSeq/NCBI с использованием прораммы GSNAP для получения грубых подсчетов на уровне генов. Их нормировали к соответствующему размеру библиотеки (для сравнений между образцами), и для каждого транскрипта данные дополнительно нормировали к соответстующей длине транскрипта (для сравнений между транскриптами). Для всех образцов это генерировало экспрессию на уровне транскриптов в нормированных единицах RPKM (считываемые фрагменты на т.п.о. транскрипта на миллион картированных считываемых фрагментов). Значения для PAPD5 и PAPD7 у обработанных животных нормировали к животным, обработанным физиологическим раствором, результаты в соответствующий момент времени демонстрируются в Таблице 32.

По отношению к соответствующей группе контроля, обработанного носителем, данные результаты показывают понижающую регуляцию мРНК PAPD5 и PAPD7 в печени как в главной группе животных, так и у животных в группе восстановления, при всех протестированных уровнях дозы CMP ID NO 20_12. Понижающая регуляция мРНК PAPD5 оказывалась насыщающей в печени со значением около 80% при 3 и 10 мг/кг. Понижающая регуляция мРНК PAPD7 была дозозависимой, достигающей 66%-ного снижения уровня мРНК при 10 мг/кг. У животных в группе восстановления, которым дозировали 10 мг/кг/неделю, понижающая регуляция мРНК PAPD5 составляла 78%. Для мРНК PAPD7 понижающая регуляция достигала 55%. Последние данные показывают то, что ингибирование мРНК PAPD5 и PAPD7 сохранялось в печени в течение по меньшей мере 4 недель после последней дозы.

Пример 18: влияние на HBsAg и HBeAg у мышей, инфицированных HBV, после введения олигонуклеотидов, нацеленных на PAPD5 и PAPD7

Настоящее исследование было проведено для демонстрации влияния in vivo на параметры размножения HBV при уменьшении уровня транскриптов PAPD5 и PAPD7 в мышиной модели AAV/HBV.

В Примере 14 и на Фиг. 11Б показано то, что нацеливание и на PAPD5, и на PAPD7 в мышиной линии клеток с использованием одного олигонуклеотида было затруднительным. В настоящем исследовании, следовательно, использовали комбинацию двух олигонуклеотидов: олигонуклеотида, нацеленного на мышиный PAPD5 (CMP ID NO: 22_1), и олигонуклеотида, нацеленного на мышиный PAPD7 (CMP ID NO: 22_1), перечисленных в Таблице 33.

GN2 представляет трехвалентный кластер GalNAc, показанный на Фиг. 2, С6 представляет аминоалкильную группу с 6 углеродами, заглавные буквы представляют бета-D-окси нуклеозиды LNA, строчные буквы представляют нуклеозиды ДНК, все С LNA представляют собой 5-метилцитозин, подстрочный символ о представляет собой фосфодиэфирную межнуклеозидную связь и, если не указано иное, межнуклеозидные связи представляют собой фосфоротиоатные межнуклеозидные связи.

Использовали мышиную модель AAV/HBV, описанную в разделе Материалы и методы. Мышам (3 на группу) подкожно дозировали одну дозу 10 мг/кг каждого из соединений 22_1 и 23_1 (две отдельные инъекции с интервалом 6 часов) или 5 мл/кг физиологического раствора (контроль) в сутки 0. HBsAg и HBeAg в сыворотке измеряли каждые 3 суток с использованием спосбов, описанных в разделе «Материалы и методы». Для измерения нокдауна мишени две промежуточные группы мышей умерщвляли в сутки 3 и сутки 14, а остальных мышей умерщвляли в сутки 27. После скарификации их печени удаляли после перфузии PBS. Перфузируемую печень нарезали на меньшие кусочки и прямо замораживали.

мРНК выделяли из замороженных кусочков печени посредством их добавления в 2 мл пробирки, содержащие керамические шарики и 1 мл лизирующего буфера MagNA Pure (Roche #05467535001). Кусочки печени гомогенизировали с использованием TissueLyser (Qiagen). РНК выделяли из гомогенатов ткани с использованием MagNA Pure «Набора 96 для большого объема клеточной РНК» (Roche #05467535001). Лизаты можно хранить при -80°С. мРНК PAPD5 и PAPD7 измеряли по существу с использованием кПЦР, как описано в разделе Материалы и методы, со следующим изменением в анализе с праймерами TaqMan, который проводили со следующими двумя анализами (ThermoFisher Scientific):

GUSB и ТВР представляют собой гены домашнего хозяйства, используемые для нормирования мРНК PAPD5 и PAPD7, измеренной с использованием анализа с праймерами, указанного после гена домашнего хозяйства.

Результаты демонстрируются в Таблице 34, 35 и 36 ниже. Данные в Таблице 34, кроме того, представлены на Фиг. 18А и Б.

Данные показывают то, что нацеливание на PAPD5 и PAPD7 в мышиной модели AAV/HBV с одной обработкой приводило к поддерживаемому снижению на 2 log HBsAg вплоть до 27 суток после обработки.

Что касается HBsAg, нацеливание на PAPD5 и PAPD7 приводит к снижению уровней HBeAg в сыворотке, хотя и не к такому значительному, как для HBsAg.

Из этих данных можно видеть то, что олигонуклеотиды, нацеленные на PAPD5 и PAPD7, приводят к уменьшению уровней мРНК PAPD5 и PAPD7, соответственно, и хорошо переносятся в мышиной модели AAV/HBV.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Ф. Хоффман-Ла Рош АГ

<120> МОЛЕКУЛЫ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ ДЛЯ УМЕНЬШЕНИЯ УРОВНЯ мРНК PAPD5 И PAPD7

ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННОГО ГЕПАТИТА B

<130> P34468-WO

<160> 34

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 82393

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 1

acaacgcgct ccctgcgggg cgggcggcaa cctccatgcg gcctcgtcca cgctcagcac 60

cggggaagcc gaggcggaga agccgcgcgc gcctcagaag ctcccggacg cccaggtacg 120

tgggagcact ccacagatgg cgcaagtacg gttgggccag gcggttgcgg ccccgtcgcg 180

ccgcggcctc tgtgacgcac ggcgaggcct cccgggctgc tgcgcggcgc agcgggggcg 240

gggcgagcgc gtgagggcgg ggcggtgggg ggggggggcg gagcgagagg ggcggagccg 300

gcagaggccc cgccccgggg ccggaggagc gaggacgcta cggagcaggc gcgtctcgct 360

gccgccgctg ccgccgccgc cgctcgctct tctgtggagc cgccgccgcc gccgccgcca 420

tttgcacggg gaccccagtg acaggggctc ggcggagggg cggaggggcg gagggagggg 480

gggagggccc gcggagcccc cgagggcggg agcgacgccg ccggcgccgg ccgggctccc 540

tgcgcgaccg cgccgcccgc ggcgggcccc gagcagcagc agcagcagca gcggcagcag 600

cggcagcagc agcagcagcc gaggccgggc gtgcgcctga ggcggcggcg gcggcggccc 660

tgcgggcggc cgggaggggc gggggcagcg gccgccgccg tttgatggat ccgaggatcg 720

cctggtttca gccagagcag ctcggaccgt ccaacagtct gtggatgcag atctgggaga 780

cgacccaggg gctgaggaac ctctacttca accaccactg tcacagcagc ggcggcgcga 840

gcggcggcgg cggcagcagc agcagcagca gcacggccac cggcgggagc ggcagcagca 900

ccggcagccc cggcggcgcg gcctcggccc cggccccggc cccggccggc atgtatcgct 960

ccggggagcg cctgctgggc agccacgcgc tgcccgcgga gcagcgggac ttcctgcccc 1020

tagagacgac caacaacaac aacaaccacc accagcccgg ggcctgggcc cgccgggcgg 1080

gctcctcggc gtcctcgcct ccctcggcgt cctcgtcccc gcacccttcg gccgccgtcc 1140

ccgccgccga tccagccgat tcggcctcgg gcagcagcaa caagaggaag cgcgacaaca 1200

aggccagcac gtatggactc aactacagcc tgctgcagcc cagcggaggg cgggccgcgg 1260

ggggcggccg agcagacggc ggcggggtcg tgtacagcgg gaccccgtgg aaacggagga 1320

actacaacca gggagtcgtg gggtgagtgc tggctctgcg gcccgatggc ctggccggtg 1380

cgaatgcgca gccgggcaca cgcccacaga ggggggttgt gagggtctag gagcggccac 1440

ccccacggcc tgccttcgct gctgttgcac gggggtgctg ctggccatcc ccaacccccc 1500

agtcgttcac acctttcccc aagcctcctt agccgtccac accctccgtc tcctgtcctc 1560

ccttagtcgt ccacaccttc ctcccctccc tcttaaccgt ccacaccttc cccaggcccc 1620

cccctttatc cattcactct cctcccatcc cccttagtta aacacatcta cccttgacca 1680

ccaccccgcc tccagccctc cacacctttt tccccatcat cacaactcaa gatgagaccg 1740

cttagcacgg gcctatcatt cattccctga gaacattggt gtgtgagtgt tttttgatgg 1800

tgcaggaccc ggaggtgctt tccttgccaa gaatagaaac atccagaatg ctcctcccca 1860

tcccccaatc ccagacagca attatgtcag ccctgtaagg cattgcctgc tcttgaccct 1920

ttggcccatc tttttatttt taaaaaattc ccatgtcaca gatgccctgt ctatgcagag 1980

ggtggcgtgg gatgggtgac cactaagttt aggctggtga aggtggtgag cccttctgag 2040

gccctgatag aactttccag gagttcatgg tccgcggctc cagcttctca ctgtaaagtt 2100

gtcatcctgg cagaggcagc caatgctttt cattctaggg ggtagagatt tatgctaatg 2160

agtgaatatt gcaccactag tgactttctg tttaaagttc agctcttaga aaatggaatc 2220

ttacctgacc cctagtgaat tatgtacata agcagggaat gtttccaact agatctccct 2280

tcagaagagt ccctgtgctg gaataggtca ctgaatctta tttgttttgt aaaacaaagc 2340

ttttgggtct cgtgggtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtagctt 2400

gagtatggag aaccggcttt caaattgctt ttcatttttc aggttgtgtt ttacattgag 2460

ggctttagca tgcaaatgaa attaccaatt agtaatccca tgtgaacctt ttcctggatt 2520

tattcattca gatctgccct gctttggctg agagagagag ttctgtgtac ctttttgaag 2580

gtctggataa aatgagttgg tgggttccat ctgcttccag tgggctggtg tctgctctat 2640

gctactatta caactcctac cttttgtgga aaatgcagtc aagcgttcta ggactggtgc 2700

tgtggtacat gtcaaacctg ccctcacatt ccagaaaggg aaccctttta gggttgagtc 2760

ctctgttgct aagcttcaag ggtgctctcc atggtcatca cgttttatta aaggcttgtg 2820

gttccatcct gttagcattt ccaagtctac gcgtaaacct gtggtttagt gacaagcaaa 2880

ttgatgttga gggtttctgg tagtttcatt tcacaggagt aagctccagt taggtaatca 2940

ctgtcaacga aaaccttgaa gttccttaat tgcattttac tgaagcctct ttgcatgtgt 3000

ctagcaaaag atataagtcc aagatgctta tttttttttt gataaattag aaattgtcct 3060

ctcctctact tgctatttaa tgcagaagat actctaaaag gttcatattt atacttagaa 3120

gcaagatgtt cttgttcctg attcaaatat attgccctca aagggattag gagaggaatt 3180

ttcatttccc ggagggatta ctgtttaaaa actggttgta aacctcttta aaaactgctt 3240

atcacttcac cagattttcc attcttttgc ctcctccctt agaggatgtc agcagttaat 3300

ttttttttta aattaaaaaa agttcaattc tgagacctcc tagtttcaaa aaatacatta 3360

aacaattccc aagagtgtta agagtgtctg ggtgcttaga aattcttgct ttgattcatg 3420

tattctgatt tttttttttt ttttgagacg gagtttcgct cttgttgccc aggctggagt 3480

gcagtggctc gatctcagct caccgcaacc tctgcctccc aggttcaagc gattctgctg 3540

cctcagcctc ccgagtagct gggattacag gcgcttgcca ccacgcctgg ctaatttttt 3600

atttttagta gagacggggt ttcttcatgt tggtcaggct ggtctcgaac tcctgacctc 3660

aggtgatctg cccgtcttgg cctcccaaag gactgggatt acaggcatga gccaccgtgc 3720

ccggcctcat tatcctgatt tctttttttt cttttgagac tgggtctcac tctgctgcct 3780

aggctggagt ggagtgacgt gatcatagct cactgtatcc tctaactctt gggctcaagt 3840

gatcctcctg ccttagcttc ctggagtagc tgggactaca ggcacatgtc accacacctg 3900

cctaattttt ttatttttac tttttgtaga gatggggcct ccatttgttg cctaggctgg 3960

tcttcaaccg gcctcaagca gtcctcccac cttggcctca cagagtgctg ggattatagg 4020

catgagccac cattctcgcc agtatcctta tttcttaact ttagaaagtt tttctatttt 4080

taatataggt atttaaaaaa atctgaattc agagtgcacc tcgatgttat gctgttctga 4140

gattaaatat actaaaactg ttaccattgt tttctgaatt cttaagatgt gactgatagt 4200

tagctaatag gttaacacat tgtggtggtt cttggcctct gaactgatag tccagatggg 4260

gagaggagac cagaaagcat gtgaaaatgg actagaacca tgggacagct atatagtctc 4320

tcgcagctgt cttttgtgtt ctctgcttcc accaaattgg ttgatttatt tagaatgctg 4380

acctcttgca ttgcctaagt ccttgatgtt tttggtttct cctctgaact ctcaaaggta 4440

ctcacttcat gctcttggta tagcccactt atgtttaact ttccttttat tatgtgttcc 4500

ctcttacaca tgacatggac atttctttaa tatgtagagt aagatattgg atttcatcct 4560

aaagtcttca aaataaaact cttgagctca tcatctcaga cttcttcatg tacccacaga 4620

ccagggattt tgtttgcttt ttaaaacatt tttttatttt gtgttttatt atttttaaat 4680

tttaatttaa ttttatggag acagggtctc gctctgttgc ccaggctgga gtgcagtggt 4740

gtgatctcgg ctcactgcag cctttgcctg ggctcaagcc atccacatgc cttggcctcc 4800

cagtgtgctg ggattacagg tgtgagccac tgtgcctggc ctaaatttat ttttttaatt 4860

ttttttgaga cagggtcttg ctctgtcgct caggctggag tgcagtgtca taatcatggg 4920

tcacagcagc cttggcctcc caggctgaag tgaacttccc acctcagcct cctgagtagt 4980

tgggactaca ggcgagtgcc accatgcctg gctcattttg gttttttttg taaagatggg 5040

gtcttgtcat gttgcccatg aaggtctcca actcctggtc caagtgatcc tcccgcctcc 5100

gcctagcaaa atgttgggat tacaggtgtg agccaccatg cctggcctta tttatttatt 5160

taattatgaa tgaatgaatg aattaatgag agggagtctt gctctcttgc ccaggctgga 5220

gtgtggtggc acaatcttgg cccactgcaa cctccgtctc ccaggttcga gcaattctcc 5280

tgcctcagcc tcccgagtaa ctgggattac aggcgcccgc caccatgccc aggtaatttt 5340

tgtattttta gtagagatgg ggtctcacca tgttggccag actggtttcg aacttctgac 5400

ctcaagtgat ctgcccacct tggcttccca aagtgtcagg attacaggca tgagccacca 5460

tgcctggcct ggccttttat gttttaagtt gcttccactg attctcttgg gctttgctcc 5520

cctccagaac tggccatggt ttaggatgct gtccacctgc tgctgcttgt ccatgaaaac 5580

gagccataaa cccttttctt ttgaaagact taattgttta tcactatgga gaaagagggg 5640

atggcaagaa gtagcaaata cagggaattt gcagaacttg gtcttgagcc ctgggtccag 5700

aaacttcttc tggaaggtgc ttggtgtttg tccaagctca tgataggttt ctgttggctg 5760

tactgccaga tctgtagatg cttttttaag gcttggatga cttgttcaaa acaatgtttt 5820

ggagtacaaa tttggctgtg gggacatcaa gaccttgttg ggaaacttgg gtttaaggta 5880

caatttctta aactaggatg gtgggaatgg ggatgtgaag ggagaatgaa tgtgagaggt 5940

attacagggt aaggatggag atgattcaga ttccttaagt ggatttaata atcacactgt 6000

agctttgaac ttgagtgact ggggaaatat ttgtggtgtt tttggaaata agggccagaa 6060

ggactattgg tttgggtaag aagatagtag ggggatgtat aggtggacct gctagtgggg 6120

agctgagatt tggagggctg agatgtagtg ctcttcactg ccgtagggca gtatcctctt 6180

gtatgtgcca tcctctagtg cccattgttc atcatgtcat agtaagccca agatgttcat 6240

gccttttttc agcactgcat tagggcttat atctgcttct ctttctctct ctctctcgct 6300

ctcgctccct ccctctctct ctctttctgt tttttttttt tttttagacg gagtttcact 6360

tgtgttgccc aggttggagt gcagtggcgc gatcttggct cattgcaacc tctgactccc 6420

gggttcaagc aattctcctg cctcagcctc ccaagtagct gggattacag gcatgtgcca 6480

ccatgcctaa ttttgtatct ttagtagaga tggggtttct ccatgttggt caggctggtg 6540

tcaaactccc aacatcaggt gatctacctg cctcggccgc ccaaagtgct gggattacag 6600

gcatgagcca ccgcgcccgg cctctctctg cttatttcta cacagtgtta ccaatgagat 6660

tggtgttact gctgggctcc aaagcaatca gacagattaa agtagattga atatgaaaga 6720

atttagaggc ctttttccaa gtgatttgtg ctctatttaa tttctgtgca tttgcagata 6780

tagcccacag taattcttag tgaactagaa ccttcaggtt attgaatttt actgatttgg 6840

gtactgacat gcgcttttaa gaagacatta ggttttctat agtgtagatt gtacactaac 6900

aatataattc atatttaaga atgtctcaaa atttagtata ctgtgttcaa ctaacttaac 6960

tttctttgtt ttttttgttt tgttttgttt ttgttttttg agacggagtc ttgctatgcc 7020

acccaggctg gagtgcagtg gcgtgatctt ggcttactgc aacttcaaca ctcctgggtt 7080

caagtgattt tcctgcctca gcctcctgag tagctgggat tacaggcacc cgccaccaca 7140

ccggctaatt tttgtatttt tagtagagac ggggtttcgc cgtgttggcc aggctggtct 7200

tggactcctg actcaaatga tctgcctgcc ttggcctccc acagtgctag gattacagac 7260

atgagccact gcgcccggcc gctaacttaa ctttcattcc acaacttcca tcttttatcc 7320

aaaatctgtg atcattgaat actgtcacca ttaatcattg gcatttcagt gtttggactt 7380

tttttttccc ccttcgtctt tgtggactct tttttaacac tcataaagtt ttaactattg 7440

aaaagcaaag gaaacggtga gtgacttttt ggagtctgtc tacccagtgg tcacacaaaa 7500

ggcttactac attacaggaa agataggatg ggaaagggat actagaaaat tctaagtcag 7560

gaacgggggt gtgtattaga aaaattctga tcctggcatg ccagatggcc ttacatctca 7620

atttcttccg tgaaattcct gccaacaaat catagtgtta gaagtacaga agggtccatg 7680

ggaacagaat ttaagggctc cgttggtgat acggaactga tcagatggtt ctcacttgtt 7740

ctcagataac ctgtatactg aatatcacag gaagggtata gacgtcatgg cagtggttag 7800

atattcttgc acctgctgaa gctgagaaaa ttaaagtaat tttttttcct gtggaaagta 7860

gaaaatcaag cttttgtatg atttcacaca gctttctatt ctctcttttg ttgactctgt 7920

taagagtaac atttagtggt ggaaactatt tcaggatcac acccacaaca ctagagactg 7980

tattaatcac ttacacacac ataggtatag agtaatcttg aaggggctgt aggccaaaga 8040

taatgctttt ttgaagaatt agagactagt taccagcacc tggtatttgc tgtttcctac 8100

agagctgact ggacagccta gagtctgctg aggaattcag aggatggcca gtagaatgtt 8160

ctttccaccc cagaatattt ggtagggact cagctgctgt ggaatgccaa aaaggctttg 8220

agtttgtttc actattctta agattacacg taattgtttt tttgtaagag attatatata 8280

ttcaagttga ggatggcttt gagttagact ttccttaatt tggaatcaca cagcagatga 8340

tacatttatt tccatctgat aagttacttg atgatgtaaa aagacatttg agttaaagat 8400

ttttgggaaa aaagctgaat gttgagccat ttatgttgtg tactggttcc ctattcactt 8460

ggacaatttt aagtcttaaa acaatcttaa ccatgtgcac aagagatttc acatagtatt 8520

tggtaattaa attaaggaat tctagctcaa gtcatgcttt ttgctgaaat agttgtatat 8580

atttagtgcg gaaacctgtg ttttcaaatt aatgtaataa aagtttcaat aaaatggaag 8640

cctttattac cgtgtttcaa atgctatgct aaaccttttc catttgttat tatattaacc 8700

tcctcataca tagccctact aattttttta ctttctattt tgaaataatt acagatttat 8760

aggaagttgt gaaaaatagt acagagccca tgttcccttc accaagtttc acctaatggt 8820

agtagctcac ataacgataa tttaatgtca agaaccagga aattgtcatc gttgcaatcc 8880

ataagccttt tttagatttc accagtttca catgtatttg tgtgtgtgtg tatatatata 8940

attgtatgca attttatcat gtgtagatct ggatagccac tgtaacagtc tatagttcta 9000

tatacagagc tactccatca cctcagggct ccctatgcta ccactttata gccgcacgca 9060

cccttccagc aaccactaat ctgtttgcat ctctgtaatt ttgccatttt gagaatgtta 9120

tataaatgga atcatacaga atgtaacttt ggcttttttt cttttaccat acttcctttg 9180

agagccatcc aaattgctgc atgtatcagt agttcatttc tttttactat tgagtagtag 9240

tccatagtat ggctgaacca cacaatttgt ttaaccattt acttattgaa ggacatacca 9300

gaagggtggt ttccagtttt ttggctattg caaataaagc tgctataaac attcatgtat 9360

ataaatattt ttatgtgaat ataaagtttt cattttgggg gaataaatgc ccaaatgttt 9420

ggattgtatg gtaagtgcat gtttggtttt tagagaaact gctgaactat ttattttcta 9480

gaatgactat atcctcttat attcctatca acaatatatg agatatccag tttctctgca 9540

tccttgctag catttagtgt taccactttt ttatttgagc ggttctaata tgtgtagtga 9600

tagcctgttt tgccttatat taatcaataa aaatagcctc atctaatctt aacttttttt 9660

attttaaaac atcttggcag tattgaactt tctcaatgaa aaatctctaa aattgtgact 9720

tgaaaggctt taattttcca gtttttcttt ggttttactc ttagcagtaa cattttaact 9780

tttttttgtc tttgaagtaa ttttcagtgt ttcctttaca tgttgctttt tcttagaaac 9840

tagttactag catgaagtag atctttagcc tcgttttcta aaaacataaa aaagtaaaac 9900

tgtggggttt atttcaaaat tgagagtcct gtcttttcat atgaggatat tttatagtct 9960

gttggcttgg ctatatttta gggagtaaac ctgtggttag tggtttgttg ttggtggtgg 10020

taaagttttc ttacagtatt tttatacctg aataatacct ttagactcta tagaatagat 10080

acttgatctt caaatctatc ctagaataaa ttgttttatc taaacagctt tgtgacctga 10140

gaattgggac ttagtccctt agttttccct tactggccct ttgtagtcac tgttttgatt 10200

ttgtgaaagt aacttaactc ttagcactgt caggtattgt acattcctgc caaagcaaga 10260

ataagaatac ataggattgt gttttaattc tataattagg tgacttttgg ctaatttcca 10320

ggaacttgga cttaataaag tactagtgat aagtttggaa attttagtgt ccttgttctt 10380

tgaagttatt caccctttac tttcttgttt gtttggggtg tttatactac tgtccctaaa 10440

tatagctgaa ataaaggaag aaaaataacc cctgtaatat cactaccagg atataatttc 10500

tttttttttt ttttttttga gatggagtct cgctctgtcg cccaccatct cggctcactg 10560

caagctctgc ctcctgggtt cacgccattc tcctgcctca tcctcccgag tagctgggac 10620

tacaggcgcc cgccaccaca cccggcttat tttttgtatt tttagtagag acggggtttc 10680

actgtgttag ccaggatggt cttgatctcc tgatcttgtg atccacctgc ctcggcctcc 10740

caaagtactg ggattacagg catgagccac cgcgcccggc ctgatataat ttctgttaac 10800

agtttgatgt aaatattttt tgacttttta gtgtttttat atatatatat attttatgtt 10860

tttcttttat caatacgcac tcttactgtg ggaataattt taatgttttt aaagagttgg 10920

gttttatttg tttattttat tttatagaaa tggggtctcg ccgggtgcga tggctcacgc 10980

ctgtaatccc agtactttgg gaggccaagg caggagcatc acctgaggtc gggagttcga 11040

gaccagcctg accaacatgg ataaaccgcc tctctactaa aaatacaaaa ttagccgggc 11100

gtggtggcac gtgcctgtaa ttccagctac ttgggaggct gaggcaggag aatcacttga 11160

acccggccgg tggaggttgc agtgagcaaa gattgtgcca ttgcactcca tcctgggcag 11220

caagagtgaa acttcatctc aaaaaaaata aaaaataaaa aagaaagaaa gaaagaaatg 11280

ggatctcacc attttggctg gttttgaact tgtggtctca agcagtcttc ctacctcagc 11340

atcccaaagt attgggatta caggtgtgag cccatcctgt ttgttgttgt tcttttgttg 11400

ttgttgtttt tagatgaagt ctccctctgt cacccaggct ggagtgcagt ggcgctatct 11460

tggctcactg caagccccgc cacccaagtt caagcaattt tctgcctcag cctcccgagt 11520

agctgggatt acaggcgccc accaccatac ctggctaatt tttgtatttt tagtggagac 11580

gaggtttcac catattggcc aggctagtct tgagctcctg acctcgtgat ccacctgcct 11640

cggcctccca aagtgctggg attacaggtg tgagccactg cgcctggcct gttgttgttt 11700

aaataaaaga aatttattct cttacagtcg aggccagaac ttagaactgg ttttcaatct 11760

aaattttttt tcttctttgg gagaagggca tcagaatatt gtggatatac ttttttgact 11820

taaaaaaaaa ggttttactg ggctgggcat ggtggctcac ctgggattaa ctgcctgtaa 11880

ccttggcact ttgggaggct gaggcaggtg gatcgcttga gtccaggagt tcaagagcag 11940

cttgggtgac atggtgaaac tccgtctcta ccaaaaaaaa aaaattagcc aggcatggtg 12000

atggcgtgcc cttgaagtcc cagctacttg ggaggcttag ctgggaggat cgcttgagac 12060

caagaggcag aggttgcagt gagctaagtt catgccactg cactccagcc tgggtgacag 12120

agcgagacct cgtctgaaaa attttttttt ttttttacta atatgacaaa catcttttca 12180

tttcaaatat atttctatac catttttaat atctcattgc ctttagaatg accttgtatt 12240

catagtacat atgtatgtga tattccattt atttattttt tttcttttgt ctttttttgg 12300

ttatattcca ttgatttaat gtaccttaat ttatcttacc aatttcttgt tgaccatttt 12360

gtttccagtc ttttgttttt ttaccagaca tggattaagc tgagcctttg ccccagacga 12420

cattatttct tttttatcag caaaatatgc gtgtaatgaa attagaatta aaaggcaaaa 12480

aaggttatcc tttatttttc tacttatttt tattgagata gtaattcaca taccataaat 12540

ttaacccttt taaagtgtac agttcagtgg ttttcatata ttagaaggtt gtacaaccat 12600

cgcaactaat tccagaacat tttcatcacc ccagaaagaa actctgaacc cattatcact 12660

ccccactccc tcacacaccc taaccctggc agtcacatat agactctctg tctctgtgga 12720

tttgtttact ctggaccttt catataagtg gaatcataac agtttgtggc cttttgtgct 12780

tggcttctca aacttatctg tttccaaagg ttatctgtgt cgtagcatgt gtcagtactt 12840

cattcctttt tatggctgaa tattttattg catgtatatg ccacattttg tttatccatt 12900

cacctgtaga aggacattta ggttgtttcc attttttggc tgttatgaat attactgctg 12960

tagacgttca tgtacaagtt tttatgtgaa cgtgttttca tttttcttgg gtatatactt 13020

aagtgaggaa ttcctgggtc ttaagttaac tctctgttta acattttgag gaactgccaa 13080

attatttttt aaagtggctg tgacatttta tattctacca gcagtgaatg aaatttccaa 13140

tttctccaca tacttgacag cacttttttt tttttttttt tttgaggtga agtcttgctt 13200

tattgcccag gctggagtgc agtagcatga tcttggctca ctgcaacctc cacctcccag 13260

gttcaagcaa ttcttgtatc tctcagcctc ccgagtagct gggattacag gcgcatgtca 13320

ccatgcctgg ctaatttttg tattttttat agagacaggg ttttgccatg ttggtcaggc 13380

tggtcttgaa ctcctgattt caagtgatcc acctgcctta gcctcccaga gttctgggat 13440

tacaggcgtg agccactgca cccagtctgc actttcttta ttatctgtct tctttattat 13500

agccaatcta gtgggtatga agtaagtgtg tcatttgtga ttttgattgt tagtggtgac 13560

taaaaatgtt gaatatcttt acatgagctt gttggccatg tgcacatctt tgttggagaa 13620

atatctattc aaatcttttg actattttaa aattgggtta tttatctttt tattgttgag 13680

ctataggagt tctttatttt attttactga gacagggtct tgctctgtca cctaggctgg 13740

agtgtagtga tgccatcttg actcactgca acctctgccc ccaccccagg ctcaagtgat 13800

cctcccacct cagtcagcat cccacagctg ggaccacagg cgcatgccac catgcctggc 13860

taattttttt tttttttttt tttttgtatt ttagtataga cagagtctca ccttattgcc 13920

caggctggtc tcaaactcct gagctgaagc aatccgccca tctcagcttc ccaaagtgct 13980

ggaattagag gcatgagcca ctgtgcctgg cctattttat tttaaagatg aggcctcact 14040

ttgtcaccca ggttggagtg cagtggcgtg atcatagttc actgccattt tgccctcctg 14100

ggctcaaaca gtactcacga ctcatcttcc tgagtagcta ggactgcagg catgtcgcta 14160

gcatgcccag ctaaaacagt tctttatatt ctagatcggg gtgtccaatc ttttgacttc 14220

cctgggccac attagaagaa gaagaattgt cttgggccac acataaaata cactaacagt 14280

aatgacagct gatgagctaa aaaaagaatt accaaaacat ctcataatgt tttaagaaag 14340

tttacaagtt tatgttgggc cacattcaaa gccatcgtgg gcctctggcc gtgggttgga 14400

tgagcttgtt ctaaatgcta gacccttatc agatggatgg tttgtagata tttatcgcat 14460

gctgtgggtt tttttttttt actttctttt aggttttttt ttttcttaaa taattaaact 14520

gattaaaagc tttaatcttt tcattttctt gataatgtct tttaaagcac aaagttttgt 14580

ttcaatgatg tctaatttgt ctattttttt ttctttggtt gcttgtcata cgtaagaaac 14640

tgttgctaaa tccagaatgc tgaagattta cttgtgaact ttgtttcctt ctatgagttt 14700

tatagtttta gctcttgtat ttaggtcttt gatacatttt gaggtttttt tgttgttgtt 14760

gagacagtct tgctctgtcg cccaggctgg agtgcagtgg tgtgatcttg gcttactgca 14820

ccctctgcct cctcggttca agcaattctc atgcttcagc acccgagtag ctcggattac 14880

aggcgtgcac caccaagcct ggctaatttt tgtattttta gtaaagaggg ggcttcacca 14940

tgtttgtcag gttggtcttg aactcctggg ctcaagcaat cctctcatct cggcctcccc 15000

aagtgctggg attacaggca tgagccacca cgcccagcct gttttgagtt catttttaaa 15060

atatggtgtg aggtagaggt cccatttcat tcctttgcct gtgggtatcc agttgtccca 15120

gaaccatttg ttgaaatgac tcttgtttcc tcattgagca atgtcgtgag accctatctc 15180

cataaaaaat aattaaaaaa aaaaaagaat gcagaaggaa acagttttgc caattttgta 15240

gtatttactg acaatttgca tatgtcttta cattctttag ctatttattt ttcttttgaa 15300

ttactgcctt tgttcatttt tcttttggag ttgtttgtct ttttcttatt aatttgtaag 15360

agattttgca aatatataca atttcttttc tctttttttt gagatggagt tttgctcttc 15420

ttgcccaggc tggagtgcag tggcatgatc ttggcttact gcagcctctg cctcctggtt 15480

tcaagagatt cttctgcctc agcttcctga gtagctggga ttacaggtgc ccaccaccac 15540

acccagctaa tttttttttt ttttttttgt atttttagta gagactcggt ttcatcatgt 15600

tggccagact ggtctcaaac tcctcacctc agttgatcca cccaccttgg cctcccaaag 15660

tgctgggatt acagttgtga gccaccgtgc ctggacctcc cacattattt tgaaacaaat 15720

tccatatcac ataatttctt ttttttgaga cagagtctcg ctctgtcacc caggctggaa 15780

tgctgtggcg tgacctgtgc ttactgtacc ttctgcctcc taggttcaag cgattctcct 15840

gcctcagtct cctgagtagc tgggattaca ggcacgcacc accacacctg gctagttttt 15900

gtatttttag tagagatggg gtttcaacat gttggccagg ctggtcttga actcctggcc 15960

tcaggtggtc cgtccacttc ggcctcccaa agtgctggga ttacaggctt gagccactgc 16020

acccagccaa tatcatataa tttcatataa atagttcttt gtgtatcttt agataaggac 16080

ttaaaagaag gcataatcgt aacaccatta ttaataccta aaagaagtga gcaataaata 16140

attcatttgc cgtatcaaat atccaatgtt catatttcct ccattgtccc ataataattt 16200

ttaaaagttt gctcaaatca aaatccaaac aagattattt caaagcattg tttgaggtac 16260

attttaaatc ttaatttata gatttctctg ctgtctcttt tcccccatat ttatttgttg 16320

aagaaaccaa gcgttgtttc ctgtggactt tcctactctc tggattttgc tggttatatt 16380

cctctggtat cagtttacta tgatcccttt ttcccctgta ttttctgtaa atttgtaact 16440

agatctagag atttgtttag attttgtggg tttttttttt tttttttttt ttttttgcaa 16500

aaatgcatca taaatggtgg tgtgtacatc tctcagaaga cacatatctt aatgtctttt 16560

tgtggtatta gttattaatg attactgcct atatttatta attcattatt tggattgtaa 16620

gtttatgata gtctcttgat gctttttctg ttgttagctg gaatgcttct aaaaggagaa 16680

ggctttcctc ttcaagctac ttggttgtct tgagggtttg cttcttatag ggaaagcagg 16740

ctaagggtga aaaaggaaat agtttctaac tgggtctgtt aatgagctgt caccccaggc 16800

aaagagaagc aaggcaggtc acaggaaagt gaagtgggct tgggatgatt ggtgccccat 16860

gcgtgcatgc atgaagggaa gttaatcctc cctgtagtga actctactgg gcttttggtc 16920

agtagccaag actgtcaagg aagacctttg tcagaagcca tacctggcct ttgcttttag 16980

ctgttggtag ctgaaggaaa ccagaacaga cctatgacct gtgaacttct gctcagtaga 17040

caaagttctc tcagcctaaa ttcagtaagc aggagtaaga tgcttgcttt cccttgaagt 17100

gaaacgtgaa ttatatgttt cttcaacttg tgctaatatt cttttttttt ttgagatgga 17160

gtctcacact gtctcccagg ctggagtgca gtggtgcaat ctccgctcac tgcaacctca 17220

gcctcccgag tagctgggat tacaggcgcc tgccaccacg cctggctaat tttttgtatt 17280

tttagcagag atggggtttc actatgttgg ccaggctgga cttgaactcc tgacctcacg 17340

atctgcctgc ctcggtctcc caaagtgctg ggattacagg cgtgagccac cacacctggg 17400

caacttgtgc taatattctt aaccttcatg tgaatcattc ctgccctcag gctagcataa 17460

cccatacagc cttccttata ggaagatttc ctactgggag tgaatttgtc cagtgattcc 17520

cccaagatat cccccaatca aatattttaa aagtcatcat ttacatgtaa aaactatgta 17580

acaagcatgg tagcagcagc gttaaagaaa tggcagtatg gcccctgtaa gggaaggctc 17640

cagaagatga gccgcactca gcctctaggt cacagctacc ttaggagttt gcagttgttc 17700

ctggggaagt cagtagacaa agctatctct caggcctggg caagataggg attttttttt 17760

tttctttgag atggagtctc accctgtcat ccaggctgga gtgcagcagc atgatctcgg 17820

ttcaccacaa cctccacctc ctgggttcaa gtgattttac tgcctcagcc tcctgagtag 17880

ctgggactac aggtgcgggc catcatgcct ggctcatttt tgtattttta gtagagatgg 17940

ggtttcacca tgttggctag gctagtctca aactcctgac ctcaggtgat ccacctgcct 18000

cccagagtgc tgggattata ggcatgagcc actgtgccca gtgttttttt ttttttaatt 18060

gtagtgacag gatctcactt tgtttcctgg gctattccca aactccaggc ctcaagccgt 18120

cctcctacct tagcctccca gagtgctggg gttacaggtt tgacccactg tgcctagtct 18180

cagaattcat gtttttaaaa gtcactctgt gccaggctca tgcctgtaat cctaatactt 18240

tgggaggctg aggcaggagg gttgcttgag cccaggagtt tgagaccagc ctggaaacca 18300

tagcaaaatc ctaactctac aaaaaataca aaaaatagcc aggtgtggtg gcatgcacct 18360

gtagtcccgg ttacttggga ggctgaagtg caaggatcgc ttgagcctag gaagttgagg 18420

ctgcagtgag ctgtgatcat gccactgcac aacagcctgg gcaacagagt gagaagtaac 18480

tctggctgtg gtggggaaag tggattagtg gagaatggaa gctgggaaac atggtggttc 18540

ttgctaagtc agtatcaagg gatcacagat gagggggcta tttcgtccta ataagggcct 18600

tggtctccca gatagtcatg gatttttcta tttagaagct ccttctcagt ttttcttgcc 18660

caaggcatat acggttgata tttgtacaac acaggctgga tctgtatggg tccacttata 18720

tgtggatttt ttttcaacca aacttggatt aaaaatatag ttgtaggcca ggcacagtga 18780

cttatgcctg taagcctagc actttgggag cccaaggcag gcggatcagc tgaggtcagg 18840

agtttgagac cagcctggcc aatgtggtga aaccatgtgc ctactaaaaa tacaaaaaat 18900

agctgggtgt ggtggtgtgc acttgtaatc ccagctactc aggaggctga agccagagaa 18960

ttgcttgaac ccgggaggtg gaggttgcag tgagctaacg cagcagaggt tgcagtgagc 19020

taacgcagca gaggttgcag tgagccaacg gggtggaggt tgcagtgagc caagattgca 19080

ccaccacact ctagcctgtg tgacagagca agactctgtc tcaaaaataa ataaataaaa 19140

atacagtgta ggccaggtat agtggctcat gcctataatc ccagaacttt gagaggccaa 19200

ggcaggcaga tcagttgaag ccaggagttt gagaccaacc tggctaacat ggtagaaccc 19260

cacctctact aaacagaagt acagaaatta accaggcata ggtggtgcat gcctgtaatc 19320

ccagctgctt gctaaactga ggcaggagaa ttgggaggca gaggttgcag tgagctacga 19380

ttgtgccact ggactccaga ctgggtgaca gagcgagact ctgtctccaa gagaaaaaaa 19440

aaaattgtac ttacaggaca tgaaacccac ctgtacggtg tgctgactgg gagactggag 19500

tatgcatagt tcttggtaaa caaggggatt cctgaaacca atcccctgag tatatggagg 19560

gttgactata tattttaata gaatttatta cttttttttt tttttttagc agttttaggt 19620

ttatggaaaa attgagcagg agtacatagt ttctctatct ccctcacatt tccccattac 19680

tagcatcttg aaatagtgtg gtacatttgt tacaactgaa gagccaaata ttgatacatt 19740

actgttaact aaggtccgta atttacttta gagttcactc ttggtgttgc agtttctatg 19800

agtgttggca aatatatcat gacatgtatc tagcattata gtatcatatt gagtagtttc 19860

actgccctaa aaatcccctt tgttccacct tttcatccct ccatctacct gaacccctga 19920

taaccactga tccttttaca gtctctatag ttttaccttt tacagaatgt catatagttg 19980

gaatcataca gattggcttc tttccatgtt ccttcctggc ttgatagctc ttttcttttt 20040

tttgagatgg agtctcgctc tcgcccaggc tggagtgcag tggcgcaatc ttggctcact 20100

gcaaactctc cgcctcctgg gttcaagcaa ttctcctgtc tcagcctccc aagtagcttg 20160

gactacaggc gcatacctcc cctgcctggc taatgtttgt atttttggta aaggtggggt 20220

tttaccatat tggtcaggct ggtctcaaac acctgtcctc aggtgatcca cccacctcgg 20280

cctcccaaag tgctgggatt acaggcgtga gccaccctgc cctgccagct cttttttttg 20340

tactgctgaa taatactcca ttgtataggt gtatgagttt atctattcac cttctgaagg 20400

acattttggt tgctcctaag ttttggcaat tatgcatgaa gttactataa acatctgtgt 20460

gtaggttttt gtgtggtcat gtttttagct catttggata aataccaagg agcacgattg 20520

ttggatcgta tggtaagagt atgtttagtt ttgtaagaaa ctgccaaact gtctttcagg 20580

gtgactgtac cattttgcat tcccaccagc aatgaatcaa gttcctgtcg ctccacatcc 20640

tcgttagcat ttggtgttgt cagtgttttg gcttttcacc attctaatag atatgtagtg 20700

atatcttgtc ttactttgca gttctctaat gacgtatgat gttgagcatc ttttcatctg 20760

cttatttgtt gttgttgttg ttgtgttgtt cattgaaatg gaatctcgct ctattgccca 20820

ggctggagtg caatggtaca atcttggctc actgcaacct ctgcctcctg ggttcaagtg 20880

attctcctgc ctcagctccc caggtagctg ggattacagg cgcccgccac catgcccggc 20940

tagtttttgt atttttagta gagacaggat ttcaccatgt tggccaggct ggtcttgaac 21000

tcctgacctt aggtgatctg cccgcctcgg cctcccaaag tgctgggatt acaggcgtga 21060

gccactgcgc ctggctttca tctgcttatt tgatatgtgt atatgttatt tggcaaagta 21120

tctgttctga tcttttgccc attttttaat cagattgttc ttttattgct tctggggttc 21180

tttttgtttg ctttttttga gacagagtct tgctctgtcg cccagtctgg aatgcagtgg 21240

catgatctca gctcactgcg acctctgctt cctgggttca agtgattctt gtgccttagc 21300

ctcccaaata gctgggatta caagcatgtg ccactgcacc tggctaattt ttgtatttat 21360

agtagggaca gggttttgcc atgttggcca ggctggtctt ggactcctgg tcttcagtga 21420

tccacccacc tttgcctccc aaagtaatga gattacaggc gtgagccacc atgcccggct 21480

tattgttaag ttttaagagt tctttgtata tgtgtatttt ttgattcttt taaaattaat 21540

acttaataaa ataattgtac atatttatgg gatgcatgtg atattttgat acatgcatac 21600

aatgtggatc aaatcaaggt aattagagta ttacctcaaa catttgtcat ttctttatgt 21660

tgggaacatt tcaaaatgtc tagctatttt gaaatataca ataaattatt atctataagt 21720

cacctcattg tgctgtcaaa cattagaact tattctttct acctggcttt atttttttta 21780

ccccttaacc aaccattctt catcagctcc ccgtctcccc tactcttttt tttttttttt 21840

ttttttgata cggagtcgct ctgttaccca ggctagagta cagtggcaca atctcgactc 21900

actgcagctt ccgcctccca ggtttaagca attctctgcc tcagcctccc gagtagctgg 21960

gattacaggc gaatgctacc acacccgact aatttttata tttttagtag agatggggtt 22020

tcaccatctt agccagactg gtcttgaact cttgacctcc tgatccaccc gcctcagcct 22080

cccaaagtgc cgggattaca ggggtgagcc accatgcctg gcccctctta ctcttttctt 22140

agcctctggt atctatcatt ctactctcta cttctatgag atcaactttt ttttagctcc 22200

cacatatgag taagaacatg taatatttct ctttctgggt ctggcttctt tgtatatttt 22260

ggataataag tcttttatta gatacgtgtt ttgcaaatat tttttccgag tccgtgactt 22320

atcttttcat tctcttaaat agtgtctttt gcagagcaca cattatacat tttagtgcag 22380

tccagtttac caattctttc tttgatggat tttgcttttg gtattgtgtc tagaaagtct 22440

tcgccaaacc acagtcatct agagttcccc ttatattatc ttacaggagt tttatagttt 22500

ttgttttaca tttaggtctg tgatctattt taagttaatt tttatgtgaa agatataaga 22560

tctatgtctg gattctctct ttttttgaga tggagtctcg ctttgtcgcc aggctgaagt 22620

gcagtggcgc gatctcggct cactgcaacc tctgactccc tggttcaagg gattctcctg 22680

cctcagcctc ccgagtagca catgacacca cgcccagcta atttttgtat tttgagtaga 22740

gacggggttg caccatgttg gccaggatgg tcttgatctc ttgacctcgt gatccgcccg 22800

cctcagcctc ccaaagtgct gagattacag gcatgagcca ccacgtccgg ccagtttttt 22860

tgttttattt atttatttat ttgaaacagg gtcttgttct gttgcccagg ctgcagtata 22920

gtgacaccat caaggcttcg ttgcagcctt gacctcctag ggtcaagtta tcttcttgct 22980

tcagcctcct gagtagctgg gactacaggt gagcaccact ctgaccaggt actttttaaa 23040

tttattttag agacagggtt ttaccatgtt gcccaggctg gtcttgaact cctgggctga 23100

aatgcccctc ctaccttggc ctcccaaagt gttgggatta cagacatgag gcactcagcc 23160

cagccaatat aattcttttt tttttttttg agacagtctt actctgttgc ccaggctgga 23220

gtgcagtggc atgatcacag ctcactgcaa cctctgcctc ctggactcaa gctgtcctcc 23280

cacctcagcc tcccaagcag ctgggattat gggtgcccat gaccacaccc agctaagttt 23340

ttaaattttt ttagagattg aatctttctt tttctcagcc tggtctcaaa ctcctgagct 23400

catatgatct gcccgcctcc gtctcccaaa gtgctgcgat tacaggcatg aaccactacg 23460

cccagcctac aatttatttg taatccaagt tttattgaaa aaaaaatcca catataagtg 23520

gacatatgta gatccaacct gtgttgttcc agtgtcaacc atatatacca ataattcttt 23580

tttttttttt tttttttttt tttttttgag atggagtctt gctctgtcgc ccaggctgga 23640

gtgcagcggt gcaatctcat ctcactgcaa cctctgcctc ccgggttcaa gtaattctcc 23700

tgcctcagcc tcctgagcag ctgggactac aggcatgcac caccacgccc agataatttt 23760

tgtattttta gtagagatgg ggtttcacca tattggccag gctggtctca aactcctgac 23820

ctcaagtgat ccacccgcct tggcctccca aagtgttggg attacaggag tgagccactg 23880

tgcctggcct ataattcttt acgtatattg ttagattcag tttgctagta ttttatttag 23940

catttgtgta tctgtgttca tgagaggtat tgttctgtag ttttctttgg tttcttttct 24000

gtctggttta gggtaatgct ggcctcatag aataggttag gaaatatttc ctctgcttct 24060

gtttctgaaa gagaattgag gtaatatcta tttttttttt tttgagatgg aatcttgctc 24120

tgtcgcctag gctggagtgt agtggcgcaa tcttggttca ctgcaacctc tgcctcccag 24180

gttcaagtga ttctcctgcc tcagtctcct gagtagctag aattacaggc atgcaccacc 24240

atgcctggct aatttttgta tttttagtag agatggggtt tcactatgtg ggccaggctg 24300

gtcttgaact tctgatctca ggtgatccac ctgtcttgtc ctcccaatgt gctgggatta 24360

caggcgtgag tcactgtgcc tggcccgaga taatatctaa tttaacagtt tggtagaatt 24420

caccagtgaa cccatctggg cctggtgcct tttgctttag aaggttattg attattgatt 24480

caatttcctt aatagataaa ggtgcattga gattgtcttt tcttcttggg taagttttaa 24540

tacattgtgt ctttcaagaa attgttccat ttcatctagg ttatcaaatt tgtgggatta 24600

gagtccttca taatatttct ttgttttgct tttggtgtcc ataggttcag aagtgatggc 24660

cctttttcat tttttctatt agtaatttgt gtctttgccc ttttttttct ttgttaatct 24720

ggctagaagc ttatcaattt tgttgatctt ttcaaagaac cagtttttgg tttcactgat 24780

ttttctctat taattttgtt ttcaatttaa ttgatttctg ctctaattgg ttttcttctg 24840

ctcactttgg atttaatttt ttttagtttt tctagaaaac taagttttta agtgaaaact 24900

gagattattg atttttagat cttttttcta atgtttacag ttaacactgt acaatttcct 24960

gtaagcactg ctttctctat atcttacaaa ttttgatgtc atattttcat tttcatttag 25020

ttagaaatat ctcttgagac ttctttgacc catctgttat ttagaagtgt attgtttaat 25080

ctccaagtat gtattttggg atttttctgg ctatctttct gctgttgatt tctagtttaa 25140

ttacatgtgg tctgagagca taccttgtat gctttctatt cttttcaatt tgttaaggtg 25200

ctctttgtgg ctcaaggtgg tctacttttt tttttttttt ttttttaaag aaaagctggc 25260

caggtgcagt ggcttatgcc tgtactccag cactttggga ggcgtaagtg ggaggatcac 25320

ttgaggtcag gagtttgaga ccagcctggg caacatatag agacttcact tgcacaacaa 25380

atttttaaaa tattagttgg gtatggtggc atatacctgt atatggctga agtgggagga 25440

ttgcttgagc cctggaggtt gaggctacat gagccatgat cgcaccactg tactccagcc 25500

tgggcaacag agtgaaattt tgttctctct tgaaaagaaa aaaaaagttg atgacataaa 25560

gttcattcat cttttttgta tgtgacttca aaataactac tgatggttaa aaaaaaaatc 25620

agaatgatgc aacccaagtg tccatcaatg gatgaataga taatatgtgg tgtatgaata 25680

caatgggcta ctattattca gcctttaaaa ataagaaaat gctgacactg ctgtaacatg 25740

gatgaacgtt cagatcatta tgctaaatga gaaaagccag acacaaaagg acaaatattg 25800

catgattgca cttatatgag gtatctggaa tataagagtc atagaaacag taattcagta 25860

attagaataa tgcttgccag ggcctgtggg gaggagggaa tgaggaattc atgtttaatg 25920

ggtacagagt ttcatttgga aaagattaaa aagttatgga ggtggatggt ggtgaggatt 25980

gcacaacagt gtgaatgtac ttaataccac tgaactgtac acctaaaaat gattaaaatg 26040

gtacatttta tgttacatat gttttacaac aatttttaca gatggaaaaa aattataaaa 26100

aacatcagga tggtgttgac agtgaaaagg ttaaagagtt actttaaaaa tttactttat 26160

tccagccggg tgcggtggct cacacctgta atcccagcac tttgggagac cgaggcgggt 26220

ggatcacctg aggtcaggag tttgagacca gcctgaccaa catggagaaa ccccgtctct 26280

actaaaaata caaaattagc caggtgtggt ggcgcatgcc tgtaatccca gctacttggg 26340

aggctgaggc aggagaatcg cttgaacccg ggtggtggag gttgcagtga gccgagatct 26400

tgccattgca ctccagcctg ggcaacaaag cgcaactccg tctcaaaaga aaattttttt 26460

tttttacttt atcccaaatg tttatattta ctttggggct tatgtgacca gtttaatttt 26520

catttgtaat tgacttgata gaacacacta atgttcagtt aagatttctt atggtgtggt 26580

gaggagtagg atttttatgt aaataagccc aaaattgtat atatgaggtt aatctgatat 26640

ttgcagaaga tattcatgca ttactgtaag gaccactctg cttattcatt tgaccgattt 26700

gttacaacat ggttagaaat catcaaggtg tttgagatca aaggatcttc agaggtgatt 26760

tactccaatc cttttttaaa aaattaataa cttgagcctc agagaagtta agtgacatta 26820

ccaagttctg ctgttagtat agtgacttta tctttacctg aatccagggt ttcttagccc 26880

tagtctgtaa tgtgtcctag tgtgcctcta gaatctggtc ctgtcagccc aagtctgtta 26940

aatcaaataa aaccagggct tggtgcttca ccttgtcttc tgccataccg ttgggtttcc 27000

tgtggaccat gcagataatg atgatgggct cagtgggctt gatagtgata actcctaaag 27060

cagctccttc taagtgcggt tctcaatctg aggaagttaa aaaaaaaatt agtgactaga 27120

acccacttct caggtactct gataaaatac atttgtaggg gagtgatagt tttcactttc 27180

tttttttctt tttctttttt ttttgagatg gcgtctcgct cttttgccca ggctggagtg 27240

caatggtgcg atctcagctt actgcaacct ctgcctccca gtttcaagtg attcttctgc 27300

cttagcttcc tgagtagctg agattacagg tgtgtgccac catgcctggc taatttttgt 27360

atttttatta gagacgggat ttcaccatgg ttggtcaggt tggtctcgaa ctcctaacct 27420

tgtgatctgc ctgcctcagc ctcccagagt gctgggatta caggcatgag ccactgtgcc 27480

cagccttcac atattttttg aaataatagg ccagttgcgg tggttcatgc ctgtaatctc 27540

acactttggg aggccgaggt gggcagatca cttgaggcca ggagttcaag gccaccctgg 27600

ccaacatggc gaaaccctgt ttctactaaa aatacaaaaa aattagccgg gtatgatggc 27660

atgtgcctgt ggtcccagct actctggaag ttgaggcatg agaatcgctt taacttagga 27720

ggtggaggtt gcagtgaggc aagatcgtgc ccctgcactc cagcctgggt gacagagcga 27780

gactccatct caaaaaaaaa aaaaaaaatc gtatgcagta aaggttgaaa actgctgccc 27840

aaaggcgcta ttaaactata ggttcccaaa cctggccaat tgtcaaaatc cctcaagaag 27900

gggcagtggg gtctaaggga ccccattgct gtagaggaga ttagtagtcc aagagtgaga 27960

tgaactgttg gaagtcctca aacttccaaa ctattaaaat agaatagttt tgcttcctta 28020

aaatagaata gttttcttcc tcactgattt ttctgtattg attagaacca taacaagtga 28080

attaaacaac tacaaaatag ttatgtgggc cacagacatt attgtaatga agtgaagttt 28140

ggctcaggcc ttgtaacaca attgcttttt ggattaaaag taaaaatatt aaattgtgaa 28200

attatgtgta agttttaaaa aattggtctt gtacaaaagt gttgggtttt tctttgtttt 28260

taactggatt tgtttttaag caagacagaa tatttatatt gttggagagt cacaaaggag 28320

gtgtgtttgt ggatttaaat gtggagacag tgtgccttga aatgcccttt atcagtctga 28380

ttcaagccac ctgcaatcat ggatttgaac tttttttttt ttttcccctg agatagggtt 28440

gcctaggctg gggtgcagtg gtgtgatctt ggctcactgc aacctctggc tcagcctctt 28500

ggagtacctg ggactatagg cacacaacat catatccagc tattgtattt tttttttttt 28560

ttttttttat agagacagag tttcaccatg ttgtccaggc tggtcttgaa ctcctgagct 28620

caagcaactc acctgcctcg gccttccaga gtgctgagat tataggtgtg agccaccatg 28680

cccagccttc actttattta aaaaccatag tttttaaaag ccacattcct actgatgaac 28740

acagaggttg tttccagtgt tttcatttgc agggctgtag tgattgtttt tgcacatgcc 28800

tctttatgta catgtgctgt gtcttctggg acagagagtg gacattttaa gtgttttatt 28860

ggtcctgcta aattgtcttt cagccaaact gctgcagagg tgatggagat gaggtgggta 28920

ctcaggagaa ttatgctcag tgcttgtgtg ctagtcactg acctggaaac attttattaa 28980

aaatgctaga ttaggttagt gatgtaaata ccaggtgata gtaaccagaa taattgtgtc 29040

aaaacatcaa gaatcatcaa gagatgccag gcatggtggc tcatgcctgt aatctcagcc 29100

ctttagtagg aggccgaggt gggcagattg cttgagctca ggagttcaag accagcctag 29160

gcaacatggt gaaaccctgt ctctaccaaa aatacaaaaa tttgctggat gcagtggtac 29220

gtgcatgtgg tcccagctac tcagtaggct gaggcgggag gatcgcttga gcctgggagg 29280

cagaggttgc agtgagccaa gactacacta cagcccgggc aacagagtga aaccctgcca 29340

taaaaaaagg agaaaaagaa tcatcaagag aaaacttaat ttgatgtgct ctgcgttttc 29400

tttggtgctt catgtcagtg ttagaaacta taggttgtat atttattaat ttttctccta 29460

catttgttca acttgactaa aatattaact ccaaatgcct agaatttcaa aatacctctt 29520

cgttataaag tatcaactat ttcttagtcc ccttaagctg atagtattgt gtcattgtaa 29580

aagatccctt gtgaaaaata atttttgtca acatgaaagg tcttaatgtg tctcctagtt 29640

tacattttac atggtctttt ccatgtattt atatagttga catatatagc tttttttgta 29700

aatacacttt cctatgtgaa catgccaagg tttacttaag cattctctta ttcttggaca 29760

tctaaattgc ttcttatttt ctattgtaaa taaagtgcta gaagcttctt tcctgaaaag 29820

ttatttactt ttcacctagt atttccatct gtgttcctca aaataagatt gctgagattc 29880

atgtatgttg ccagaaagat tgtgaggttt aacagtgaat gaggaaaact tttaacactc 29940

aaggtctacc aagtacagca agttttattt tacctttttt tttttttttt tttttttttt 30000

tttttgagtt aggccaagtt gcctaggctg ggctcaagca atccttctgc ctcagcctcc 30060

ggagtagctg ggattatagg tgtgcagcac cacacccggc tttcttgtat ttttttttta 30120

tttttattta tttatttatt tttgagatgg agtttcactc ttgtcaccca ggctggagtg 30180

caatggccca atctcgactc accgcaacct ctgcctccca ggttcaagcg attcttctgc 30240

ctcagcctcc caagtagctg ggattacagg catgtgccac cacacccggc taatttttct 30300

atttttagta gagacggggt tcctccatgt tggtcaggct ggtctcaaac tcccgacctc 30360

aggtgatcca cccacctgag cctcccaaag tgctgggatt acaggtgtga gccaccgtgc 30420

ctggctgctt tcttgtattt tatcttgctg tagcggttgt gggatttttg cctggtgtgt 30480

tcattggagt gtgtgtgtgt gttttgagat gtatgactgt gttggttgtg ttgtcatact 30540

ttgaaggttc attaatgtgc tggtctttct atttttcttg ttatacttag tcacttaaaa 30600

accctttttt tttttttttt ggaattctta tttttacagt actttgaatt cctgttttat 30660

taatcacctt cttatctgaa agtgaagtaa tagtgtactt ggcaccattg aattagaaaa 30720

ttgtgtgtcc ttggccagaa gatcacatac acaggaactc gataagttga gagatttagc 30780

cgtttcagaa atgggcattt gtgtcttcca gtggagaagc atctgcaaaa gaattgggca 30840

gatttggcca ggcgcggtag ctcatgcctg taatcccagc actttgggag gccgaggtgg 30900

gcagatcacc tgaggtcagg agtttgagac cagcctggcc aacatggtga aaccccgtct 30960

ctactaaaaa tacaaaatta gccaggcgtg gtggctaacc catttaaagt gggtgaatta 31020

tatcttttat gttttaatgt attcctagag ttgtgcaacc atcaccagaa taagttgtag 31080

aacattttca tcaacccaaa aagaaacttt gtattcatta gtcgttcctc ctcatttctc 31140

ccctaacctc ccagcactag gcaaccatca gaatactttt tgtctccacg gatttgactg 31200

ttttggacat ttcatattaa tggaatgcac aatacagtag tataatacat taattttgga 31260

aggccaaaat taatggcttt tgatgtctgc cttttttcac ttagaataat gtcttccagg 31320

tccatctgtg ttatagcatg tatcattact ttatccttta tgtggctggg taatattcca 31380

ttgtatggtt ataccatgtt ttgtttatct attcatcagt tgatggacat ttaggttgtt 31440

ttccattgac tattaagagt aatgctgccg gccgggcgcg gtggctcacg cctgtaatcc 31500

cagcactttg ggaggctgag gcgggtggat acgagggtca ggagatcgag accatcctgg 31560

ctaacacggt gaaaccccgt ctctactaaa aaacaaaaaa ttagccgggc gtggtggcgg 31620

gcgcctatag tcccagctac gcaggaggct gaggcaggag aatggcgtaa acccgggagg 31680

cggagctggc agtgagccga gatggcgcca ctgcactcca gcctgggcga cagagcgaga 31740

ctccatctca aaaagaaaaa aaaaagagaa taatgctgcc atcatgcttg agggtttttt 31800

tttattttgt tttgttttgt ttgtgggggg agcggagggc acagtctcac tctgttacgc 31860

aggctggagt gtagtaggct tactgcagcc tcctccgccc cctggttcta gtgattcttg 31920

tgcctcaggc tcctgagtat catgctgcaa tttttgtgtg agcatacatt tttcatttct 31980

cttgggtcaa tatctaggag tatccccact tttggttctg agtgttaatt gagcctgttg 32040

tgttctcaca ttccctgtac ttagatggaa atagtgcttt gcctaaaaag aaaataaaag 32100

acctgattgt gcaggcgagt gagaaagaga gagaggcgct agggttattt ccaccctgat 32160

actctttggg tagtcttggt atgactagca aagaagcaag ctccaagttg tagtttgctt 32220

ccaagtttct ggcttctgtg ggaatttctg catctaagta atgacaattt tcagttactt 32280

gcagtaagta aattatcaac caatcttact gtgtattact agcctagtag gaatttactt 32340

gtatatcgag aggaatgctg cagctttcac cttacttcta atggggatta atgcttactt 32400

aacttgcagt tttggaggca agtacaaagt acaggaccaa ttatggtcat gaagtgagag 32460

agaagtctgg ctagtgaatg gtgattggca actccagttg actgttcatg gcatcttaga 32520

tctgtgagga gggaggaggg aaggaaagtt caagctggtc tttatggtaa gttctggaac 32580

atttccctgt gtcaatgggt catctgttca ttcactgtgt aaaatggttg agggaagttt 32640

taatttacat gcttccttat tgtgtaaacc tttgattttt agtgatttca gagtttgttt 32700

ttataattac ttaacacgtg aagaggatgc agagtaacgt atcgaagctc tggttacctt 32760

ccactgggat ttgacacatt tgatttcctt tattccctcc ttccttccct tcctccctct 32820

ctcttttctt aaggaatgca actactcaga ttcacctgca cacccttggc atacctctca 32880

ctccccctta cccccacttc ctcagaggtg acctgtcctc agaggcaaat gtgtgccctt 32940

tccatccgta cttttatgct ctcatctatg tttacatcta ttagtacact attgtctgta 33000

tttttaaaca ttacataaat ggtgtaattt ttacttttaa ttctgtagtg gtgtttctca 33060

aattaagttc tgcacaaaac atttttatag atatccagtg ttagcttaac gtttttctta 33120

ttgtggtaaa atatacataa gataaaattt accattttag ccatttttaa gtttacaagt 33180

cagtggcatt aagtacattc acagtgttgt ataaccatca ccattgtcca ttgccagaac 33240

ttttcatcat cctaaacaga aactctgtac tcattaaaca atagtttatc actccttccc 33300

tgcaactaga tgctggcaat caccattcta ctttctatct ctatcaattt gcctcttcca 33360

tctaagtgga atcctacata tttgtcgctt tgtttctggc ttttttttct tcttgtgatg 33420

ctttgtttta attatgttcc tggctttcat catctagcag gctgattcca aggtttgtcc 33480

atgtggtagc ttgtatcact ttaatgtttt tagagatagt taatattaca ttgtttatat 33540

ataccacatt ttgttttttc attcaacctt gatggacatt tgaattgttt ccccctttac 33600

ctgttgtgaa taatgctgcc gtgaacattg ataaccaaat atttgtttga atctctgatt 33660

tcagttcttt tggttccata cctaggagtg gaattgctgg atcatatgat aattctatgt 33720

ttaactcttt gagggatggc cagacttttc caccatagct aaatcatttt accttcccac 33780

aagcaaagtt caagggctcc agtctctccc cataaggtcc tttgcacttt tttttttgag 33840

acggaatctc actctgttgc ccaggctgga gaacagtggc accatcttgc ctgacctcaa 33900

gtggcacctg ccttggcctc ccaaagtgct aggattgtag gcgtgggcca ctgcactctg 33960

ccaatttttt aatttttatt ttcatttatt tttctttttt taatttttaa tttttttatt 34020

ttttgaaggg ataaggtctc actttgttgc ccaggctggt cttgaactcc tggcttcaag 34080

caatcctcct acctcggctt ctcagagtgc tgagattata ggtgtaagcc cctgcacatg 34140

gcctttactc tcttgatagt gtcctttgat gcacaaaagc tttcaatttt gatgaagttt 34200

attttttatc ttgttacctg tacatttggt gtcatatatc taagagacca ttgccaaatg 34260

cagtgtcatg aagctttccc tcagtgtttt ctttctgcag ttttatgatt ttagctccta 34320

agtttaggtc tttgatccat tttgagttaa tttttgtata cagtttgaga gtcacacttg 34380

aggctctggg cgcagtggct cacgcctgta atcccactac ttggggaggc cgaggcggat 34440

ggatcacctg aggtcaggag tttgagacca gcctggccaa catgccgaaa ccctgtctct 34500

actaaaaata caaaaattag ccaggcatgg tgatgcatac ctgtggtccc agctacttgg 34560

gaggctgagg caggagaatt gcttgaacac aggaggcgga ggttgcagtg agccgagatt 34620

gtgccactgc actccagcct gggcgacaga gcgagactcc atcgtgcggg gtggggggta 34680

aaagtcaaac ttgagtcttt tgcctgtgga tatccagttt tcccatcact atttgttgaa 34740

aagactatcc tttctcaact gtgaatggtc ttggtaccct agctgaagtt atttttatta 34800

ttatgttact taggaatgca cataaggcct ggcacggtgg ctcatgcttg taattgcagc 34860

actttgagag gtcaaggtgg gaggattcct tgagccgagg agtttgagac cagcctgggc 34920

aatatagcag caagacccca tctctatatt ttaaaaaaag aagaaaaaaa aacctctgat 34980

gcataaaata tttaaacttg tatgcattct tttctttctt tattttttaa aaattgagac 35040

agcagcttac tctgttgtcc aggctggtct tgaactcctg ggctcaagca gttcctctca 35100

ccttggcctg cagtgctgag atgacaggtg tgaaccacta cacctggcct gcttacagat 35160

tataaaaaga aaataagttt acaagttaaa gacagataaa atgacaaaat cagtaaaatt 35220

aaaattactt ttatggagcc gatgatgttt attccagttg ctcctctcat tgtgaatatg 35280

gtattgttgc tgtggcagat ttggaggccg tggcagattt ggaggctttg gcaatggctt 35340

ctgttacctt gccatgaggt aactcagttc cctcatcact tttctctgag aactataaaa 35400

ccttggaggg gtgccttctg cccttcgctt ggcatgtata ttatgcaggg atcaggtctt 35460

actccgttct tgattgttag tacaaattag ttaaaattgt attgtttggc cttagcctga 35520

tggtaaacac aacagcacac gtgggctgtg aaatctctgg gcagctctgt gtttctaggg 35580

aagcatctcg atgatccaga acaggcttat actaatgttt tagtgtaatt ttgaaatgaa 35640

aacacagcat ttaaaaattc ttatagagaa tgtatagacc ttgagaagtg ttagcagacc 35700

cagtttacga catgtctcaa tattatgaaa cattgcttta ttccctatcc tgcttgtaca 35760

tttaattttt tcatccagtt ttaaacaact tgggtactgt ggcctgtgcc tgtattccca 35820

gctactaggg aggctgaggc aggaggattg cttgagcaca ggactttgag ggctgtagtg 35880

agctgtgatt gtgcctgtga atagccattg tgctccagcc tgggcaacat agcaagaccc 35940

tgataccttg ggtttttaaa aaacaaaaca agatacatgc tgacatttct ggtttggcag 36000

gcagagcttg ttctgctccc caccctccct tttcccatag taaccattta taggacatct 36060

cactgttgtc tactctgtgt tgcctctgct tccctgcgtg gtagatctag gaatcttagg 36120

atttcttagt tttagctggt gatccgtatc tttttcttaa ttccattgta acttcagctt 36180

ttcttattgc ttgtaggaag gctgtttcca ttgaatacaa acaaaataaa agcttttatt 36240

cttaatctta gagataggat gtttgtattt aaaaataatt gtgctgtcaa aattctgtca 36300

agttggcttt taccacatta gtttttttta atgtggttta tatgaccctg gagtaccttg 36360

tcttctcact gttaaattct caactgagtt gtccctattt aaagtgtgag actgtgccag 36420

tttgatttta aaatattgca agtgcgttat ggcaagataa aactgcaaag aaagaacctt 36480

catgtccctt tgattataaa tgcttttggc acttgtttct actttttcct aatgtttttt 36540

gaggaaagaa cctccaactc tccagacagg tctgggggca aatgactaaa acatgaactg 36600

aggccctggg ctgtctctgt gaggatatcc cctctattct ctctgaaatg tcccagcatg 36660

tggtgcattt cttgttagtg tggactcctc tgtatataac acatcttatt tatcttctgt 36720

gcataacatg aagtagtgcc ctaatgcaat tccaggatgt aattcagcat ttctataaaa 36780

atacagtgtt tttctacatt tgcatcaaaa aataaccaga taattatatt tattaagaaa 36840

atagcatttt tggctgggtg tggtagctca cgtaatccca gcactttggg aggccgaggc 36900

aggcagatca cttgaggtca ggagtgaggc aggcagatca cttgagatca ggagttcgag 36960

accagcctgg ccaacatggt gaaaccccat ctctactaaa aatgcaaaat tagcctggcg 37020

tagtggtgca tgcctgtaat cctagctact caggagactg aggcaggaga atcacttgaa 37080

cttgggaagg ggagattgca gtgagctgag attgtgccac tgcactccag cctaggcaac 37140

agagtgagac tctgtttcaa aaaaaaaaaa aaaaaacaaa gaaaagaaaa gaaagaaaga 37200

aatgtatttt tggtatttgt tttcacaaac tagagcattt atgtgaaata acattgctag 37260

tattgatatt ataccatagt ataatactta gttcttcagc gatgtatctc tgctgatcag 37320

ctacatgata tctacttgag ctgttggatt ttttttaaga acagtgcatt tttgaatgct 37380

tttgaaaaat tgtagtaaaa tacataaaac aacatttacc ttgtaagcat tttaattggt 37440

acaattcagt gacattaagt acagtcccag tttagtgcaa ccactgttac tgtctagttt 37500

cagaacgttt ttgccccaga tggatactct gtacctgttg aacattcagt cctcatggcc 37560

caataatctt tatgtctgta tagatttgcc tattctgcat attttatata aatggaatca 37620

tgtcttttgt gtctggcttc ttttacctag catagtattt tcaaggttca tccatgttgc 37680

agcatgtttc aatactttgt tcctttttat gtccattgta tggatatgcc acatttcgtt 37740

aatgacaatt cttttgggta gctacatttt aaaacattat agtagaatac atatagcata 37800

caatttacta tcttaaccat ttaagcctgc agttcagtgg cattaaatac attcacgtta 37860

ctgtgcaatt atcaccacca tctgtttgca gaaacttttc atctcctcca tttgaaactc 37920

tgtatacatt aaacatgaac tctcccttct ccccttcctc cagccctggc agccaccgtt 37980

ctacattttt atctttctga cagagatttt actactctag gtacctcaca taagtgaaat 38040

caaccagtat ttatcctttt gtgaccagct tatttcatta gcttaatgtc ctcaaggttc 38100

atccatgttg tagcatatgt caacatgact ttccttttaa ggttgaataa tattccattg 38160

tatgtatatg tcacaatttg tttctccatt tatccatcac tggacatttg ggttgctttt 38220

acctatcggc tgtcttgaat catgttgcta tagctgtaca agtatctatt tgagtttctg 38280

ctatcaattc tttaagtata tgcccagaag tggaattgct ggatcatatg gtaattccgt 38340

gtctggtttt ttttttgagg aagtgccatg ctgttttcca cacagctgta ccattgtaca 38400

ttccccccag caatgtacga gggctctgat ttcttcacat ccttgctaac acttagtatt 38460

ttttttgata gaatagccat cctaatggct acttttaaag tatgtttaac attatttatt 38520

tatttttaat tttttttgta gagatggcat cttactgtgt tgcccaggct ggtcatgaac 38580

tcctgggctc aagcagtcct cctgcttcag cctcccaaag tgttcggatt ataggcgtga 38640

gccaccatgc ccagcccaaa tttaaatata taactaaaca catagcagct aacaccaagc 38700

ctttaaaaat atcattaata ggccaggcgc agtggctcat gcctgtaatc ccagcacttt 38760

gggaggccga ggcgggcaga tcacctgagg tcgcgagttc gagaccagcc tgaccaacat 38820

ggagaaaccc tgtctctact aaaaatacaa aattagccgg gcatggtggc acatgcctgt 38880

aatcccagct actggggagg ctgaggcagg agaatcactt gaacctggga ggcggaggtt 38940

gcggtgagtc gagatcgcac cattgccctc cagcctgggc aacaagagca aaactccatc 39000

tcaaaaaaac aaacaaacaa acaaaatata tatatcatta ataggccggg catggtgtct 39060

cacgcttgta atcccagtgc tttgagaggc cgaggtgggc agatcactgg ggtcaggagt 39120

tcgataccag cctgggcaac atggtgaaac cctgtctctg ctaaaaatac aaaaattagc 39180

cacgcatggt ggtaagcacc tgtaatccca gctactcagg aggctgaggc tggagaatgc 39240

ttggacctgg gaggtggagg ctacagtgag ctgagatcac actccagcct gggtgacaga 39300

gcaagactct gtctcaaaaa aaaaaaaaaa aatcattaat aaatgtgatc ttttttcttc 39360

ctatacaaca agttgtcaag caagtatgac cttcttaatt gaccctttga catgaactgg 39420

gatgagatcg tggaggatgt tgaggagaca gttgttacca tagtgcactt ctaaaaactt 39480

taattctata gatttcttta aaattttttt taaaattatt atgagtacac aataggtgca 39540

tctatagatt tcattaccct caaataaatg tacaaggcaa tgcagagaaa tgcacagtgt 39600

aacttggtag acttgaccta tcaagttact gttgaatata ttatggagcc tgtgtattac 39660

caggggcagc agacttttcc tgtaaagata gttgttttca gctttgttga atctgtggtc 39720

tctgtcttaa ctacaactga gaaagccatt gacaatatat agatgaatgt acatgactat 39780

tctaataaaa ctgtgtacac tgtaatttga attgcacata attttcatgt gtctcctgta 39840

taattcttct tttgacttct tttcaaccat taaaaaatgt aaaaacaggc caggcgtggt 39900

ggctcatgct tgtaatccca gcactttggg aggctgggtg gattgctgga gcccaggagc 39960

ttgagatcag cctgagcaat gtgatgaaac cctgtctcta caaaaaatta gctgggcatg 40020

gtgttatgtg cctgtggtcc cagctacttg ggaggctgag gtaggaggat tgcctgaacc 40080

cgaggaagtc aaggctacag tggtttgtgc cactgcactc tagcctaggt gacagagtga 40140

gaccctgtct cagtgaatga atgaatacat tattagcttg tggactatac aaaaatcaga 40200

ggctggaggt gagctgggta tggccattgg gtgtggtttg ctgacttctg gtagagagga 40260

attaggagat gttaaaggtg gtggaactgt cagatacttg cattctttta gaaatacttt 40320

ggagttagct ttttggttca ggcaaaggac caaagggtta ggagagtcag gccggtaaag 40380

aggagtggtg ggcccatagc agcagttcct ggagtttttt tttttttttt ttttttgtga 40440

gacggagttt tgctctgtcg cccaggctgg agtgcagtgg cacgatctcg gctcactgca 40500

acctctgcct cctgggctca agcaattctc ctgcctcagc ctcccgagta gctgggacta 40560

caggtgccca ccgccacgcc cggccaattt ttttctattt ttagtagaga tgggatttca 40620

ccgtgtttgc taggatggtc tcgatctcct gacctcgtga tccacctgcc tcggcctccc 40680

aaagtgttgg gattacaggt gtgagtcacc gcgcctggcc aggtcctgga gtctttaaga 40740

ggaggtttgt ctgatggttg gttggacaaa agcctgggca tgttgtcacc ttccataagt 40800

gtttgtggga atgtaggtaa tgaggaggag taaaggattc ctgaaggatg aggaggaggg 40860

ctggtggctg ccataggaag tgatcactgt tttggcagac ctgtcttaga gtaatgaccg 40920

tcatactctc tcattgccct tgtgaactca tgaaatccca tggctgctaa agctgaaggt 40980

caagtgggga cttcccggcc actgggctta gcaccccaca gagctgtgga gtgggcatta 41040

atgtcccttt tttatagatg cggagactga gaatgaggac tgttggtaac ttttgaaagg 41100

gcactcagct agaaaagtct gagccaggat ttcaagtccc atggctttac ctctgtggtc 41160

ctaatatttg gtgtgttcaa gtgagatctg tttttttcct atttcatttt gattattgat 41220

tttcataaat ttttttctct tttgagatag tatcttctct ctcttttctt ttttctgttc 41280

tttctttctc ttttctttct tttttttttt ttctctgaga cggagtcttg ctctgtcgcc 41340

caggctggag tgcaatggtg caatctcagt tcactgcaac ctctgcctct cgggttcaag 41400

cgattctccc atctcagcct cctgagttgc tgagattaca ggcacctgcc atcttgcctg 41460

gctagttttt gtatttttgt agagacgggg tttcatcacg ttggccaggc tggtcttgaa 41520

cttctgacct caggcgatcc acccgcctct gcctcccaaa gcgctgtgat tatatgcatg 41580

agccaccatg cctggccatt atttctttct ttctttcttt ttcttttttt caggttcatt 41640

gaatttgctt tgagacaggg tcttgctctg ttgcccaggc tgaagcgcag tggtgcagtc 41700

atggctcact ggagcatcaa tttcctgggc tcaagcgata cttgcacttc agcacccctc 41760

cacccccacc cgctcctttc ccccacagta gctggaacta caggcgctag ccaccgtgct 41820

tggctaattt tttttttttt tttttttttg agacggagtc tcgctctgtc acccaggctg 41880

gagtgcagtg gcgcgatctc ggctcactgc aagctctgcc tcccaggttc acatcattct 41940

cctgcctcag cctcccaagt agctgggact acaggcgccc gccaccatgc ccggctaatt 42000

ttttgtattt tttagtagag acggggtttc accgtgttag ccaggatggt ctcgatctcc 42060

tgaccttgtg atccgcctgc ctcggcctcc caaagtgctg ggattacagg catgagccac 42120

tgcacccggc ctggctaatt tttaaatttt tttttgtaga ctgcccaggc ttgtttaatt 42180

gattttctat gtgatcttag ggaaatcgat tatttcccat aaacattttt ttaattagaa 42240

gttaaattct gcctagtttg attcacagga ttattgtgga tgactgaaac agagaatagg 42300

taagagcttc tttgaaaaat atgaggtacc atacagaagt tagatgcttt gtcctggtga 42360

taccccctcc aaagcacagc taaggaaatg tggaaggcac tcttatctca tcatatagct 42420

ttgaaagcct agcattgaaa gtacgaactt gattcttttg gagaaatcct ttggctctca 42480

gtgagtttac tttctattaa tgactgtgtt aagcggaatg aaaactgaaa gaggaaaggg 42540

gaggaagtca gaattaagca ggaagagtga gcccatagca gagtccagat ttagacccca 42600

agctacttgg aatgatactg gacaattatg ggtgtgttta atgatggtcc tgagtcatga 42660

aaacaaaagg aggctttaaa ttatgtctgg cttagtgtac agcatatttt tgtcattatt 42720

caagttttag catgtaaaga ggaaagtgtg cagtacttat gcatatcatt ttcattaatg 42780

aaactaaatg aggcctcttt aaaattatca gtgttcacag tatcttccaa aagacatgta 42840

aatgtataaa ggtataaaaa atatacatat aaattttaca attttgtgag ctatatagta 42900

gatctcttat tttgtccata ggtcttaaag atcttatact gtattcagga ataaagataa 42960

cttcagtggg aggcctttac agggctaatg agtaagcatt attttgataa agttctgtgt 43020

tgtctacaat agatatagta gaaatactct tggaatggta atcatcccag gccctgcttt 43080

ggagcggaag aaatagtcaa tgtagaactt tacagtatat tgtacacaga tgtgcctgct 43140

aataacttct gtagacagca aagtttaaga gaaattaggt ggtaaatgca acatatgtat 43200

ctaaataaat ttggtctgag ggatttgata agatgaaaca gtacatagtc cagaaaattt 43260

ttatactcaa agaattatag aaaatatctg aaatgttttc agttttgtgc atatccagaa 43320

aatgtcatcc tgtgatctgc tggttggcag cccaatggca gtattagatg tattgttttt 43380

attttgtttt gtttgctatt tatttggtta agagagttac ctaattagga gtgtgaaaaa 43440

aaagatttat tatagtagtg ggcttttgtt tgacttaaaa catttttgtt gttaccacag 43500

tatgagtgcc ttgtttgtga aatttgttta ccgggaagcc atatacttag agtagctttt 43560

agtttatcat tatcatcatc atcatcatca tcatcatcat catcatcatc tccttcatca 43620

tgaaaggaag aagctaccaa tgttgcttta ttctgcaaaa aatacaatag atgcttgttg 43680

aaagtatgga gtgaaatctt aaatatgtct gttaaaaaga gtacaactgg ccaggggtag 43740

tgcctcatgc ctgtaatccc agcactttgg gaggccaagg cgggcagatc gcttgagcca 43800

ggagtttgag accagcctgg gcaacatggt gaaatcctgt ctctacaaaa aaaaaaaaaa 43860

tagacaaaaa ttagctgggt gtgatggcat gcagctgtag tcccagctac agtggggctg 43920

aggcaggggg attgcttgag cccaggaagt aaaggctgca gtgagctatg gttgtgccac 43980

tgcattccag tgtgggtaac agaacgaaac cctgtctcaa aaaaaaaaaa atagtacaac 44040

tttaagcagg atgtgggcac atgcctgtag tctcagctac ttgggaggct aagtcaggag 44100

agtcacttga gcccaggagc ttgatgctgc agtgagatgt gattgtgcca ctgccttcca 44160

gcctggggat gatagcaaga ccccatctct aaaaaaaaaa caaaaaacaa aaaaaaaaca 44220

gagtacaaca acctttggta aacttggaat ataaaggtgt ttccttaacc tgttaaagag 44280

ctgataaaga gtggtacttt caaaccagta cacattatgt gaaacactag agacacttcc 44340

catttgttaa aagaaaaacc ttagccaaat taaatttaag ttttttttgg agacagagtc 44400

ttgctttgtc acccaggctg gagtgcagtg gtgcaagcac agctcactgc aacctccgcc 44460

ttctgggttc aagtgatttt cctgcctcag cctcctgcgt agctgggact acaggtgtgc 44520

accaccacgc ctgggtgatt tttgtatttt ttgtagacat ggggttttgc catgttgccc 44580

agtctggtct tgaactcctg ggctcaagca atctgcctgc ctgggcctct gaaagtgctg 44640

ggattacagg cgtgagccac catgccattt aatggtttaa ttgagcaaag aatgatttgc 44700

aaattgggca gcctcccgag ccagagtagg ttcagagact ccagcacagc catgtcgtgg 44760

aaaaagattt atgaatggaa agaggaaagt gatgtaccga aaacggaagt gaggtacaga 44820

aacagccgga ttggttacag ctctgaattt gccttatttg aacacaagtt gaggtttgta 44880

cagttggcca cctttgattg gccaaaactc ggtgattggc acaagagcag gttatagtct 44940

gtttacatct ccattttggt tatagttcat tatggacaga aaaacctgta ggtcaaactt 45000

aaaatatgta aggagacagt tttaggctaa acttgattta acacattaaa tccgtaacaa 45060

gacaggatgc ctgccctcac catgttattt gatcttattt tagtaattct agccaatgta 45120

gtagggcaag aaaactgcct gcttggctac aaaataaaca cacaaaagtc agtatctgta 45180

atatgtgaca gaaaatataa ttaaaaaaaa aaaaaaaagc cgggcacagt ggcccatgac 45240

tgtaatccta gcactttggg aggccaacgt gggtggatct cttgagctca ggagttcaag 45300

accatcctag gcaacatggc aaaaccccgt ctctacaaaa aatacaaaaa aattagccac 45360

gtgtggtggt gagctcctat agtcccagct actttggagg ctgaggttgg aggatcattt 45420

gaacctgaga agcacaggtt atagtgagct gagatcacgc cactgcactc cagcctgggt 45480

gacaaagtga gactctgtct aaaaaaaaaa aaaaaagaag aaaaggaaag gaaagtaaaa 45540

gaaaaaataa tttcacttac tagagcatca aatccctaag ataatttaga gcaaagccag 45600

aaaagtgaag aaaatataaa aatctttaca gtgggttgca ttttaaaaaa aaacttgaag 45660

atatcagatc aactcactaa tgtattaatt aatataattt aaattaaaat cccactgatt 45720

tttttgtggg gagggtggga gagtcatttg ttaaaatgat tctaaagagc atctggaaga 45780

ataagcaggc aagaatagcc aagaacattt tgaaaactaa agatgagttt ggaagacgat 45840

tggttttgta ctgtcaacta cttatagatt ttacatgaat tttaaagggt aatctgagcc 45900

ctcgaataga cagaaatagc catagatctg aaagaacact taagacctga tccagctatc 45960

catgagagta tatataatca aagtctttgt gtgtgaatca ggagtctttc aggtgcaagg 46020

taaataaact cataattgct tacgcaaagg tggtatttgc tttagtgact ccagagaaag 46080

ctcaagtgcc tatctctccc ctgactttga ttctttttgg ggttggctcc attctctcct 46140

gttgctaatg gcttcctttg tgcagccaga ggaaaggagg tgtggttttt tgatacttcc 46200

aggcttctat ttttatagct tgagatcaaa gagggaagtg accttcctta gagtcagtgt 46260

gtaaagtcct aaggaagata ccacgtgggg tgctggggcc atgtgcccat ccctggccca 46320

tgaccatggg gatgctacac taactggggg ccacgcatgg ctgttcctgc cctgaactgc 46380

cagctggctt tgcagtgcag cctcaccaga atcacatgga atagtaggga tatgaattgt 46440

ttcccaaaga aagtgtgtgg ggtggtagaa ttactagtgg gggagtaagg ggacaggcca 46500

ttgggcatac tggagcagca tttactcagt cattgagaaa aggatggaac attcaataaa 46560

gggtgctgga cacatttgtg ctctaaaaat tttgtgtttc acctattaat ttatccctcc 46620

ccttagcccc tggcaaacac tgatctgttt actgtctcca tagttttgcc tttcccagaa 46680

tgtcacaccc ttggaatcat acagcatgta accttttcag attggcttct tttacgtagt 46740

aatatgcatt taggattcct tcatgccttt tcctggattg atagctcatt tctttttagt 46800

cctgaataat attccattct atggatatac cacaattgat ccattcacct actgaaggtc 46860

attttgattg cttccaagtt ttgataattt aaaaaatttt ttaagacagg gtgtcattgt 46920

gttttccata ctggtctcct gaacacctgg gctgatgtga acccctctcc tcagcctcct 46980

gggtaactgg gattacagct atacaccact gtgcccagtg tgacaattat gaataaggct 47040

gctgtaaact tctgtgtagg tttttttgtg tgtggacatt ggttttcagt tcattatggt 47100

aaataccaag gagtgcagtt gctggattgt atggtaaaag tatgtttagt ttgctaagga 47160

actgccagct gggtgtggtg gctcatgcct gtaatcctag cataatggga ggctgagaca 47220

ggaggatccc ttgaagccag gagttcgaga ctagcctggg caacatagtg agacctcatc 47280

tctacaaaaa atttaaaaat tagctgggcg tggtcttatg tgcctatagt cctaactgct 47340

tgggagactg aggtgggagg atcacttgag cccaggagct ggaggtggca gtaaactgtg 47400

atcataccac tgcactgctg cctgggtgac aaagcaagac cctgacttaa aaaaaaaaag 47460

agaaaagaaa aaaagatgag tcagagggta aggaagcaaa aataagtaaa taaataaata 47520

gaagagaaaa gaaaaaagaa aaaactgtct ttcaaagtgg ctgcgccatt ttgcattcct 47580

accagcaatg aatgagagtc tgttgttgca catcctcacc agcatttggt gttgtcagtg 47640

ttctggattt tgaatattct attaggtata taatgctgtc tcacttgttt taatcaatga 47700

tatatgacat tgagcatctt tttaatatgt ttacttctca tctatgtatc ttctttagtg 47760

aggcctttgt ttaggtcttc tgcccatttt aaaaaatggg ttcattttct tattgttgaa 47820

tatcatgagt tctttgtcta ttttgaatac ctgccttttg ctttattttt gtgtttttta 47880

tttttttttt ttattgagac aagttctcac tctgttgccc aggctagagt gcagtggcat 47940

gaacatggct cactgcagcc tcaacttctc ccagcctcaa gcaatcctct tgcctcagcc 48000

ttccgagtag ctgggactat aggcacacac caccatgccc tgctaattta aaagagtttt 48060

tttttgtaga ggtgggatct cgccatgtta cccaggtggt cttgaactcc tggcctcagg 48120

caatcttcca gccctcagcc tcccaaagtg ctgattatag gcctgagcca cttagcctag 48180

ctcagaattt attttttatt tgttaatttt gaaaaaatat aggacctcat aaaagtcagt 48240

ctacatttgt acacattatg tttttggtga atatgtaaat ggattctttg tgaatcaatt 48300

tggttttgtt tttttgcttt taaaaatacc agccctgggc tggatgcggt ggctcacgcc 48360

tgtaatccta gcactttggg aggctgaggc aggtggatct cctgaggtca ggagtttgag 48420

accagcctgg ccaacatggt gaaacgctgt ctctactaaa aatacaaaaa ttagctgggc 48480

gtggtggcgc atgtcagtaa tcccagctac ttaggaggct gaggcatgag aatcgattga 48540

acctgggagg cagaggttgc agtgagccga gatcgcgcca ctgcactcca accttggcga 48600

tagagcaaga ctctgtctca agaaaaaaaa aaatgccagc agtggctggc tgaggtggct 48660

cacacctata atcccagcac tttgggaagc caaggcaggt agatctcttg tggtcaggag 48720

ttcaagacca gcctggcgaa catggcgaaa ccccatctct accaaaaata caaaaattag 48780

ctggatgtgg tagtgcgcac ctgtaatttc agctgctggg gaggctgaga catgagaatc 48840

acttggaccc tggaggcaga ggttggagtg agccactgta ttccagcctg ggtgaaagag 48900

ggatactcta tttaaaaaaa aaaaaaaaaa aagcgggctg gatacagtgg tgcacacctg 48960

taaccctagc actttgggag gctgaggtgc tcagattgct tgagctcagg agtttgagac 49020

cagcctagac aacatagtga gacatcgtcc ctaaagaaaa aaaaaaaata ccagcactta 49080

gccaaaagat ttcaacagtg cagaaaaaga aagttgtgat atcttttctc caaattagtc 49140

ttgttttcag tttcattatc caagtaacca ctactaatag ttaaaacatt tgaaatacgt 49200

gtgggagctt gtcctattta atataaatta tttattgagc aaataatcac cactagtatg 49260

ttttggatac tggaattttc atatgtagga gtccttgaat gtaaggtgcc cctttggtag 49320

ttctgtgctt cttttacctg tactgtaaca tagggaaaga tgttacaaat ggttgtattt 49380

ttaacagagc agtatctatt cttaaacacc agcccttcca ctaaaggtaa acaacaaatg 49440

aatacataaa tgaagttttg gtattgggat tatgtgggtt aaacacatcc atatttcatt 49500

attaatattt aagaatataa caaacttttt attggcattt ggaccttgta gctaaggaaa 49560

gattaaactt tgtttatttg tgctttgttt tttttcttca ctcagatatt tgaggatttc 49620

ccatttgagg aatacattta ttaatcaagc tttagtttca agatccttga tcttagggaa 49680

taccatcaac cgttcttctt taagcttcct aactttgccc aaatttggtt agaactactc 49740

aagagtagtt tgggtaattc agaaatttta ttggaagggg aaagaatttt tgacccaaat 49800

tagataaagc aactcttggg taatgatttc ttttcttgtt ctctctttat aatcaattga 49860

aagtagtagt aaggctgggt ggcaaaagaa agaggcctgg ggagaatcgc gtggttttca 49920

ttatctcttt tcatagcagc aaagtgggaa gggaccaaga ggaaatcaac tgaaaaacca 49980

tccttctgaa acattggcct aaaaaactgt agtccagaaa ttgagtgcaa ctggcagtgg 50040

catttaaaag gaatgctcta atttctagga aagcaggcac gagtacctct taaaagaaga 50100

aaaaaatgaa aactgtaatt taggacacat agacgagtat ccattccctg tacttttact 50160

ctcatgtcct aaccaaggaa gggttgccat agcaaatatg gcattcctta gccatgattc 50220

actgttgtaa atgcctgcag cattcataaa agtaagatat atgggctctt ctttttcctt 50280

ttaaatcttt atttctgtat ttaaatctgt atgtcatcat ctgtattttc tctcttgttt 50340

tttttaaatc ttgggagatg gtacaaatta tttaggggag ggaatgagtt tcttgtccac 50400

aaatagagga gagagagggc tttttgtctt tctgctttgg aactggagag cttcctattt 50460

aggcatggcc tttttcaagt gaccttgtat tgttatcagt actgtagaag gtaggcacgt 50520

tgtgtaaact ttaaaattga aagccattag gcattccact tgtaaacctt ggctttttaa 50580

agaaaattac atgttcattg tgaatatttt cttatcgacc tatctctgtg cacatgcaga 50640

cttcctttgc ctacattctg aaaggtgtaa ttgccttctt taaggacagc ggacatctat 50700

agttcttggg tcaaattgtc ctccttctgg ttttgtcagt tctcagccac actgtgtgag 50760

catccatttt cttggattct ggttcggagc tcattttaag gaacatcatg tcccttttga 50820

gactctgtgg acattggggt gggtagatgt ccccctgtga acagaaggtc cctccctaag 50880

gaggtgcttc tctgtgttga gtcctgcatc tgggcacaca gagcccgaag caggaagagt 50940

tgagtctgaa tagggaggcc tgtaagcctg actgctctgc cacgggtagg cctggtctgc 51000

catgctccag gagcccccag gaggctctga agtcattctg cctctgggaa ttttacagag 51060

gagctaatat ttgagctgag tgagaaggtg attcttgaaa aagcaaggcg tgccctggtc 51120

cagttctgtg gggctgtcgt agaagagggc tcggaagctc ttgggagtga ggctagaaag 51180

gtaggcagtg ttaccataag gaggttggaa gtgacacaga taggctaagg aaggggactt 51240

cagtaatcat gcagcaatgg cctggaaaag ggagaggctc atagtaggga gaccagtttg 51300

gaggctgcca tagtgttcta ctgagagaga aaaagacttg aactcagagc acggtcaggg 51360

aaggtggagg ggcagggtct gatttggaag tgttttgttt tttggttttg ggaacaagga 51420

tttggaaacc tcttggctcc gtagatgaag aaaggtgaac caaggaagac tgaagtttcc 51480

actcaaggaa acagtaactc agggaagaaa acacaggagt aggaataggt ttaagagaat 51540

gacaagcagt tgtgttttgg acttgtttag ttcgaggtga catctttgta gggatgtcta 51600

gctggtagct gcaagtatag gaggaggctg gatgtgtgca tgagtttctt ggtaaagatc 51660

catctgcagt ctcctgaaga tgtcacccag attgccctgc catcacccca gggccttgag 51720

tcactcgctt ctcttggtgt ctaggcaggc ttgaagaaaa tcaaacagta caaaatcatg 51780

caaattcaga cctctattcc accccagagg aaagtcctgc tagcagtttt tgtgtattct 51840

tccagaaatt tgccttgcaa cgcgtttgag tatataaata atcccagaaa ggatgggcca 51900

gacactagca gaaactcacc acacacactg cactgggcat gcagaaactt tgcaaaatgt 51960

actggtgtgt gctgtcactg cattcctggg tttggaggtc ttctgtgtcc ccagctgtca 52020

gtattgccca caggctgacc actgagctcc ttccacagcc ggcccatatc accctctttc 52080

gaagtgtgtc tgcaaggcta gattattaga gtaatttaag tgtttctgct ttgtgttttc 52140

tttaatgaat ttttttatga tgaagttctt gttttaaaaa tatacagtgg taattaacat 52200

gtatgcattt ttcttaaaat gaccccccca gtccctcttc ggatgtgatc actgttaaca 52260

gtatcgtata tagaccctgt tctgtgtggg gcgggcagag ggctggttag tgggtggaac 52320

atgcatactc acaaccatat ttttcacatg ggaaaatata aaggtgacaa caaatctcct 52380

ggactataat ctcatcaagc agacaataat ctctgtttca aaagtggaca aatacatgct 52440

gattttttaa aaaaaattat aatagtacag aaagatacaa aaataagtta aagtcttcct 52500

aactctcctg cctgtgccct ccactgggca aaagtccctg tccctaaggt aatatctgtt 52560

aacagttctc cttccagaaa acttgcaatg caaataggaa cattttgtgt gtctgcctct 52620

gtgtgtatgt gtttacatgt cttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 52680

tttttttttt tgagacagag tcttgctctg ttatccaggc tggagtgcag tggcatgatc 52740

tcagcttgct gtgatctctg cctcctgggt tcaagtgatt ctcatgcctc agcctcccga 52800

gtagctggaa ttacaggcgc ctgccaccac acccagctaa tttttgtatt tttagtagag 52860

atggggtttc gccatgttgg ccaggctggt ctgaaactcc tgacatcaag tgatctaccc 52920

gcctcagcct cccaaagtgc tgggattaca ggtgtgagcc actgcttctg cccctgcaca 52980

tgtctaacgc acacaaaaga gattctgctg aacacatttt ttatgctttt tctttccaat 53040

ttaacatatt tgacatcttt atcagcttat atagctttat ttttttaaga ggttattggc 53100

tataaaggga aagtgcttta tgggtgcttc tgttgttatt taattggatc ctgttgatgg 53160

acattgatat catttctaaa ttttttagta tcctaattaa tcctgtggtg agcatcctta 53220

tacagatatc cttgttccct catgaaaata tttctggagg atggaaagaa gggaaatttt 53280

aaaaattatt tgtgtaaaca ttatcgtttg ttagtagaat gacctcagga gagattgtag 53340

taatttatac ttccccacat gcatatgaat gccttttcaa tatattgttt caaaattgga 53400

tatcatgaac cttaagagat aaatatatat gtatgtattt tttttttttt tttttttttg 53460

gtgggggcat gtcctgttat tgacagtttg ttttggtgga gggatgtcct gttattgaca 53520

gttatcgaat agaactttgt cagttccttc atgtaaggga tgaatttggt aataaaacag 53580

gtctgacttc agttatggaa ctgggaaagc tggaccttga tgtggaggtg ggctcagaca 53640

tgctgtgtct gggcaggtat ctcttgggaa gcagtgtcat ccctgaacag aaacatggat 53700

gagccgcagg ggacggtgct gagcagaggg gctggccgtg ggtcatctgc ctcccttggc 53760

ctagaaggca caagggagct ttccaccttg cctttggttt tgagaatgca gaagctacta 53820

agcaactcac agtgtgccca gggtggtcca gctgaaggat gcgaaatggt tcttcctttt 53880

ccagccaaag atcttgaacc tcccacccca tgacaagcat tataaaattc acataatttt 53940

gataggctgg attccttttc tgtagcagat ctttcctcag aacagaagtt tgtttttttt 54000

ttttaaccta aattacctgt gagttttatt ttttaaatat ggaatctgtt ttttggacac 54060

ctccttgtca tattaaatgt tctgttatta attttgagat tttaatgtaa attttacccc 54120

agcaaattaa ttttgtttct cttgctctct cttttttttt ttttggcatc ctttcccgtt 54180

gtatagtggt gctcatttta tcatactgct tttatatgac ttttcttttg tgaacaggga 54240

tcttgttcac ttttcctttt ttaaaaattt ttttattttt ttgagacgga gtcttgctct 54300

gttgcccagg ctggagaaca gaggcacaat ctcagcccac tgcaagtttt gtcttccggg 54360

ctcaagcgat tctcccacct tagcctcttg agtagctggg attacaggcg tgcaccatca 54420

cgcctggcta atttttttgt atttttgtag agatggggtt tcactatgtc atccaggctg 54480

gtctcgaact cctggactca agcgatccac ccgcctcagc ctcacaaaat gctagggtta 54540

caggcgtgag ccactgtgcc cgagccactt ttccttttaa cataaaaaca ttgatatcct 54600

agagagggca ctgtattttg ggtacataca ggttcagatc acggaagagt tgtattctat 54660

actttttttc atcattctta gttcagtatg atgtatttta taatttcata tgagaaactg 54720

taacaatggg catgtgtcat ccagcaatac ctactcataa atcatattaa attttgatcc 54780

aaacatggga gaaactgaag ttttctctgt gtacttggat gctttcagag gcataaaatt 54840

atattaccat gtgaaagcaa gcctacaaaa ttcctcaggt ggtccactct gccactcaaa 54900

tgagagccag acttacagtg cacactctac aaacggactt ccagctcgtc agggtatttt 54960

aagtgcctga atatgcaagg cactgtgcca gtaaaattac tcagtcctga ggatagagcc 55020

tgttagaatt attttaaaat ctgtacttga agtttatttc ctcagtattc caagatattt 55080

tatctggttg ttctctgagt atttcacacg tagctagtta catataggtg agatggtgat 55140

gcttgtgcct ggtgtggatg agaaactgag cctggcagac ccgagattgg atttcctctt 55200

ctgactttgc aagtgtggct ttgctttaat aatagccctc ctctttttct gtattcctct 55260

tttctccttc cagtgtggca aatatgcatc aatcaaaata caataacctg tggaaccatt 55320

ttttctaaaa taggaaggtg gtgccatggg ctattgattg ttgagggtag tcttcagagc 55380

ctgtcttata aatctataat aattcccccc aaattaatgt gctagttaga accctagaat 55440

tgcagcactg aaagtgaatt ttagaatctt ttccaacttt ttaccaagct cagaaagccc 55500

ttttattgga cctttgtttg cctcatggtc atctggtttc tttatgctgg tagtaacagg 55560

aaccttacta acctacaagg tgacccagtc catcctgggc agctgtgatc attggaaagc 55620

tctgaatcat tcatctggaa gctgcctgtg gcagaatagt acagaacata tgcattgcac 55680

acactacaaa actgctttaa ataagtgttc cttttcattg ttagatggaa gtgacccagg 55740

gcaaggatca tgttttatga gccagttttc tcctagtgcc ttgaacatag gcacttggta 55800

gtgtttagag aatgaattgt cttttttttt tttgagacaa agtctcactc cattgcccag 55860

gctggattgc agtggcacgg tgtcagctca ctgcagcctc cacctcccaa gttgaagtga 55920

tttttgtgcc tcatcctccc gaggagctgg aattacaggc atgcgccacc acacccagct 55980

aatttttata tttttagtag agatggggtt ttgcgtgttg gccagatggt ctccaactcc 56040

tggcctcagg cgatctgcct gcctcagcct cccaaagtgc tgggattaca ggcgtgagcc 56100

actgcgcctg gccagagaat gaattcttaa taagtttctt atgacttcag attgactggc 56160

agttgtgcta aatatttttt gcctttattt gaattagaaa attcgtaagg gggccttgag 56220

agtagatgca gtcacattta ggagattttt cccccccatt ggttaaaatg cagtttttct 56280

atggatctgc tttagaacta caaataaact ccgatcactc acagcagact acgcaatgag 56340

ataagaagca gtccatttgt tctgtcgttt attcatggcc ctcatctttg ccagccaacc 56400

tgtgcagaag agcacagcaa agcataagct tcctaacagc tattcccatt cagctgctgt 56460

cttcaagaag cagaagggtt tagataacct tagagaacat aatcaaacct gggaaactca 56520

aatcaaaaca aaacttcgaa acggaagttg aaggtcctga ggtacccaga ggcatagcaa 56580

ggaaaacgtc cccactggga tatcttctgg attcacctac agacctctct ggagttttaa 56640

gatccacgtt ttatgacata ttgcatagca aacaggccga acgctgttgt aaatcatcct 56700

ctacgaaagg cccaggtttt gaaactgaag gcctgaaaag gctcctgctt accagctgtg 56760

tgctgtacct gacacactga agcctgagag tgccagtcac ctgtcagagg gaacacagct 56820

gccctcaggc agaacctgag tctagaactc aaggtttttg actcttaggc taaaaataaa 56880

aaatcagaag gaggaactat ggattgctta atcagtcaca ttttcacttt ctaaggtttc 56940

ttgtagcaaa agttatagtc tttggggatt gggatgtaga cacttttttt tccttcccta 57000

aaacaatttt tggcctgcca gtttttcgag cttcctgctc tggaccctga agttgccatg 57060

cagttgcaga catgctcctc cttcaaggct ctgttaagct gtggctgccc ttccttacca 57120

ctgctgtgcc ccaggccaaa ccccctgccc ctccttcccc taaggcactt tgcacctgtt 57180

gctccgagcc ttctggtcta tcccagttgg tagagtccct gtgcttacct ctgtggctca 57240

gtcctcgtgg gtggtcagtg ctctagggaa ggtgagctga ccacttcact ttcccttccc 57300

agccatagct cttcacagcc tcaccaactt agaaaggaat gctgcttttc tctctgtccc 57360

ccgtcctgac tatgttcaag tcattgctca gcccagtgag tttgtccttt cttccagacc 57420

agtagttttc ccccagtccc tcaggcttca gcccttgaag gcatccttag ccccccacca 57480

ccatgatagt caggcgctgc gcctatccgc agggtgtggg tatgtgtgtg tcttttgttt 57540

ctggagccca ttcctttcct tccaccagcc tctaggcctt catccaatcc ttttgcaact 57600

cagtgattca tgacttttcc ctgcatccag tctagtctct ttgctggtcc attgtttcca 57660

tagttgccag tttaatcttc ttaaaatgct gcatttttga agtcagtctc ttttggtccc 57720

tctcagaaac atttaaatag ctatctgttg ccacaggggg aaagcttgaa cctcttagcc 57780

agtcattcag agcctgccct ctgctggggc ctgctttcct ctacagatgc ttctcccact 57840

ctgcctgcca cagcccttgt agctggctga ttgccctgta cctcgcaggc tctggaagtc 57900

ttcagctcct tcatggagcc tttgccagcc attcttttca agactttgct gttgttcact 57960

gcctgatttg ttcatttgac acttaattca ctgagcaaac attatgaaag atgtactgtt 58020

tgctactgtg aggaatggat ccccaagaga taagagggtc agtccctact gccaggaaac 58080

ttgcctgtgt cacctgggtt cagtatcttg tgtctattag atcagaagtg gaaaggcaga 58140

ggccagcccg tatgcttgtt ttattttatt taaatcacca gcaccccagc aagtgttttg 58200

cacaggaaat ttctcattat ttaattattt tgggtttttt gattaaattc tgtacattcc 58260

cattttagct tatcttgagt tataacatta aaattaaggt agtcatcagc tgaattataa 58320

gacttaatta gataagatta tttaagatag tgatttctca ttagattggc cctgttcata 58380

ttaacttttc tgtttttttc ttcagtctgc atgaagaaat cagtgatttt tatgaataca 58440

tgtctccaag acctgaggag gagaagatgc ggatggaggt ggtgaacagg atcgagagtg 58500

taattaagga gctctggccc agcgctgacg tgagtccctt cctgggtagc ttatgcttcg 58560

gacagtcctt gtccacgggc tagaagccta tctgctggta tctcatgcta gtcctcacat 58620

gcaagtagaa gtgctctgta gagttgtggt ctaattaaat tttaaaggca aacaattttc 58680

tgcagtcttt agaattgagg cttcctaact attttcattg gattggatga ctaacaacta 58740

tttttttttt gtagtgctaa tagcaactac taaaggcaag ctatccttag aaattattag 58800

tgtaaagaga agaaagacaa atcaaacctc attgttgtag tggtctgtta ttggatatga 58860

tatatcaaaa cctcattact acttagttcc agcctgccag ggtaaacatt atataattgt 58920

ttacagctaa atgaaaatgt caagtaagaa cttttgtcac ttgaagttca tttcctttgg 58980

ctaatgcacg cataagtctt ttcttatttc tttcctgaaa ttgccatttt tcatctctct 59040

cagaccagct aattgccttt tagacagctc ccagtcagtg aacaaaatga ttactcagga 59100

tttcttcttg gcttatttgt cgtttttgtt actggtacta agtcttttgt tttttgtttt 59160

tgagatgggg tctcactctg ttgctgaggc tggagtgcaa tagtgcgatc acgacttact 59220

gcagcctcga tttcctgggc tcaggtgatc cacctcagca tcccgagtag ctgggactgc 59280

aggtgcacgc caccacactt agctaatttt tgtatttttt tgtagagact gagtctcact 59340

atgttgccca ggttggtctt gaactcctgg gttcaagcaa tgtgcccgcc ttggcctccc 59400

aaagtgctag gattacaggt gtgagccacc acacttggcc tgttactggt actaagttaa 59460

tacgtcactt tttagggcac tttgagggcc tgttctacaa ttttgtgtat gcaaagaagt 59520

acacaaaata atactaataa aatccattac tttgtgtttg tagcttttct tcaggcactg 59580

tcctgggtgg tggtgggaag ctagggaagg tttttttcca attggcaaaa caaagaagtt 59640

tcattgtatg taaaacttgc aagtatatga cagtatgtat atgacactgt aggtaaaggg 59700

aaaaggcaag ggtactaatg ttttatgagc aatgaccata catcgcattc tttctcctat 59760

gtgatccaaa tcagtggttc tcagctagtg gctattttgt tctccagggg gcatttggca 59820

atgtccgaga catatttgat tgtcctgact gggtacgcac tgctagtacc tagtgggtag 59880

aggccatgga tgccatcagc cattctatga tgaacagtat aggcccttac aacaaagaat 59940

tatccacccc caaatgccaa tgttgagaag ccgtgatcta acttaaccct tatctttctt 60000

aggtggaggt tgattatcta tctatctctt tctctccagc cagccaggca gccatcatct 60060

gtctacctac agatgaggaa catgagcttg tggttaggtt cccaggtcca tctcgcctca 60120

gaggttgaac tggtttcact gtttatcatt tttttccccc gagatggagt ctcgctctgt 60180

cgcccaggct ggagtgcagt gacatgatct cagctcactg cagcctttgc ctcccaggtt 60240

caagaaattt tcctgtctca gcctcccaag tagctggggt tcaggcgccc gtcaccacac 60300

ctggctgatt tttgtaattt tagtagaggt gggatttcat catgttggcc aggctggtct 60360

tgaactcctg acatcaggtg acccacctgc cttggcctcc caaagtgctg ggattacagg 60420

cgtgagccac tgtgcccggc ctatcctttt tttattacaa ttacctgcat acatatttct 60480

gcctgagttc caccgttctc catgggttga gatggaatgc atcccagttt tatgccacag 60540

catgatgtta cctgatgttc tttgtggaat tgacctaaag gccctcactt gccctacagt 60600

taaagtagtc tgatcccaat ttagtaatct attcgaagac tcctgcttag agaacaaaaa 60660

tgaaggattt gtgattgtgt ctctggataa tgagggaaca ttagtgatct gaactgcttc 60720

tgaaagtttc ctgtggttgg ctttctgtat ccacaggtac cacacctcca tattaaacca 60780

acaatggatt gaaaatattc agaaaaaact ataaaaataa caatgtacca ataaaaacaa 60840

tacaaattat tttaaaaata cagtataaca actatttagg tagcatttac atcatacttg 60900

gtattatagg tattataagt aatctaaaga tgatgtaaag tacatgggag gactagcata 60960

ggttgcatgc aaatactcta ccattttata gcagggactc aagcatcttc agattttggc 61020

atggtgggac tggaaccaat ctcctgccga taccaaggga caactgtatt ttggtctatg 61080

tgtttcatat tgaaccagat aagtttaaat tatattcaga atgtctgctt gtgaaacaga 61140

atccccgctt catgaagctt ggggttagaa aaaaatgctc ttgtcatacc aaaaagtacc 61200

agtagagggt agcaaaaact gacatttctc catatcttgg tgactcaata tgataacaac 61260

ttctgataac tcaatataat aacaacttct ttttctgttt caggtccaga tatttggaag 61320

ttttaaaact ggactttatt tacctactag gttagtacac tcatgaatct ttcaaaggac 61380

ttttcttaga gtgtattcat tttggctgtc aaatttgtaa ggagtagaaa caaaacaaat 61440

ttataaaaca aaatggggct gggcatggtg gctcatgcct gtaatcctag cacttcggga 61500

ggccaaggag ggtggatcat ttgaggtcag gagttcaaga ccagcctggc caacatggta 61560

aaaccccatc tctactagaa atacaagaat tagccaggcg tagcagtgcg cacctgtaat 61620

cccagctact caggaggctg aggcaggaga attgcttgaa cccgggaggt gaaggttgca 61680

gtgagccgag atcgcgccac tgcactccag cctgggcgac agagcaagac tctgtctcaa 61740

aaaataagta agtaaataaa taaaggattt accagcattt aatttgattt accttgaagt 61800

agaatatcac ttcacatcat cttaccaaga catagatggt acagagagat ggaaaaggga 61860

tcatgttgca atggaatcaa ttagttacta attttagaaa ttgactgcct ggcagagtat 61920

tgctcagtcc cataacttaa cccactgaca cagatgttaa tgtagtatca tgataaaatg 61980

tctgattata tatcctcttg aatgtgagtt cccgctgtct tgctcactca ctcttacact 62040

caccctcgct ttcaaattaa gaactcattc tactagttat ggctccagca tcctgatcca 62100

gaaattcagg gtacagatct cttctctgag aaagatcttg gcctttcagg actgttgttc 62160

agtttcagtc ttctcaaatg agacctcttg tgacgcacag ccttggaggc tctcttttgg 62220

gaaatgataa tgtttctcca aagggtgaat acttgctctc taagaattga aattgtttga 62280

acattccatc atggttatta ttattattac cttaaatttt aatctctcca gaataaagtc 62340

agcatcatgt ttttccattt gagcttgatt tggtatactt taccccaact taaagtgtgc 62400

tgaagtggat ggaccctggc aatttccgtt cttctcatag atgcccttgg cctgcaaaag 62460

tcataaaata ctcaacttcg agttaatatt tcttatttag gttgtcagca tcagtaaaac 62520

atgaaaaatc acctttctta aaaaatttaa ttaaatttta tgaataggta gtacattcac 62580

atagttcaca tttggaaaag gcacaaaaat caatacaggg aaaagtctca gtcccacctc 62640

tgccccctgg ttctccttgg aacagccgct tttaccagtt tctcacatat cctttcagag 62700

atatctgtgc atataaaagg acatgtgtgt atattaacac aaatggtagc atgctggata 62760

cctgttctgc atccagctta aagcacttca taatatttct gagttgcaat taatctcatc 62820

cggataggaa aatcattatg tctagtacca caagcgttta ttaaagaaaa tacatgaagt 62880

gctttttgtt tttttttctt tgaggtttta cttctttcaa aatcacccta tttcctgagg 62940

cctgaattct gtgaaatgac tgagaggagg agtttgttaa aatcaacaac tactatttcc 63000

cttctccaca aaaccattat caccaacaca tttagtcttc gttggccagg gtgggaaata 63060

ggttttaatt gtactaatga agtctataag catgagtgtc agttaaaaca agtttccaac 63120

ttcttccgac cctcttgtat atgtattctg tgttcagtga catcgaccta gtggtgtttg 63180

ggaagtggga gaacctaccc ctctggactc tggaagaagc tcttcggaaa cacaaagtcg 63240

cagatgagga ttcggtgaaa gttttagaca aagcaactgt aagttctgca gcatttcata 63300

ttaaaatcct tagttattta cctatgaaac ttgaattaaa attaaagttt ggtgagcaca 63360

gttgcattgc aagtgagtga ttctttcatt ttgttaatgt caccgtgctt gcacataaaa 63420

agttttctgg ttgtccacac tggagtgtga ccatacaatc tcggctcact acaacctgtg 63480

cctcctcggc tcaagtgatc cttctacctc agcctcttgg ggagctgtac tacaaacaca 63540

acctgccatg cctggctaat tttgttgtat tttttgtaga gacggggttt caccgtgtta 63600

cccagactga tctccaactc ctgggctcaa gtgatccacc cacctctgcc tcccaaaatg 63660

ctgggattac aggcgtgagc cactgcacct ggtctgcatt tcttttcaca gcagcaaaat 63720

atgcaatttt attatacaca gtactcactg tagagatttt tgtttgtttt attcattttt 63780

tttagagaga tacagtctca ctatgttgcc caggctggtc tctaactcct ggactcaagt 63840

gatcctccca cctcagcctt atgtgtatct gggactaagg cgcaccctac cacgccctgc 63900

ttatttaaaa aatttttttt tgtagagata gggtctccct gtgttgccca agttaggcca 63960

ttttttgaaa agaactgctg atagctcatg taaataatcc tgtcagcttt ttagaataat 64020

ttttatattt tatcttgtca ggttgttttt tgggctattt gcaaaactga ccagtaatgc 64080

aagtgggttg tagtgtacac cttaagaatc cagcaatttt cttattagaa acagtttgat 64140

gatacaaaac atttaatacc tggcattcct agttcttcat cttatactca gaaagtgttc 64200

tccaaattat tgaggaaggt ttttgttcat tttaaaatta tcattataac tatatgtcaa 64260

ctaataaatg agatgatggg catattaatt tatttaactg tagtaatcac ttcagtatgt 64320

atatcaagat aagtatatca aaacatgtac accttaaata taaacaataa aaataaataa 64380

taaaaaattg gacaccaaac aaaattctcg gttgatagaa attatactgt aatatactgt 64440

atgggaccca gtgctaaata tgcagcatat agtatttgta gcagaccagg tttactgggg 64500

tgtgccatat ttagaatact cagtgttctt atgctctcat gagatgatgg agacctcatg 64560

tctagtaggc ttccatcccc tgattttatc atttaatctg gttaaagcat ttacatttta 64620

cctttcttct ctttataggt acctattatt aaattaacag attcttttac tgaagtgaaa 64680

gttgatatca gctttaatgt acagaatggc gtgagagcag ctgacctcat caaagatttt 64740

accaaggtca gagaatttag cgtttataca acaaaactat tagaaacgta attttaagat 64800

tctgttgtgg tggtgttcta atatttttat atgcatgttg ctgtctctct ctctctcttt 64860

taaatagagc tagggtctca ctctgtcacc taggctggag tgcagtggct ggatcatggc 64920

ccgctgcagc ctcaaactcc tgggttcaag tggtcatctc acctcagcct cccaagtagc 64980

tgggactaca gacgtgagcc actacacctg gctatttttt gtattttttt ttttttttta 65040

gtgttggggt ctcgctgtgt tggccaggct ggtctcttaa ctcctggcct tagcctccca 65100

aagcactggg attacaggca tgagccacca tgctcagcct gcaccttact tttgtatgca 65160

acggttttgc tttctttgaa tctgcttgta atgatcagtg attaacttat aatgtgacct 65220

caagtaagaa ttaaaagttg agaaagcttt tgaagaaatt gtctgctcta gatccttcct 65280

tgtagagaca gaagagatgg aattctacta cacagttgat tccatctgtt tttaaccttc 65340

aggagttcag attaagaacc tttcctttaa cccatttccc atatgcccca agaatactgt 65400

gcgggcagtg agctgcactt tttttttttc ttttttcgag gcagagtctc tctctgtcac 65460

ccgggctgga gtgcagtggc acgatcttgg ttcactgcca cctccgcctc ccgggttcaa 65520

gcaattcttc tgcctcagtc tcatgagtac ctgggactcg tgcctgggac gagtaccagg 65580

cacctgccac catgcctggc taatttttgt atttttatta gagatggggt ttcaccatat 65640

tggccaggct ggtctcgaac tcctgacctt gtgatccgcc tacctcggcc tcccaaagtg 65700

cccggattac aggcgtgagc caccgtgccc agctgtactt ttttttttcc taaacaggaa 65760

ataggttaag agttttaaga gccttttcta gatttcaatc cctaaattac ctttaaggtg 65820

tttcctacag gcttccttac ttctgttttg aaattattta agtttatttc tattctgttt 65880

tcttccaaga tagagaataa tttgtcacca tcatctgtgg aacattttac atacttaggt 65940

agttgtcagc tttctcacct ctaacctaag ccattaactc ctttggcttc tgttagaata 66000

ttcacaattt tttttttctg tagcagctct aaagtttcta tttcttcttt tttgtttttt 66060

aagaaaaaaa tgttaactac ttgatgttac aagcattatc atcttgcata aatgtatgga 66120

agacagaaaa gcagaaaaat aaaagaaaga ttatccataa tcgcactata ttgggggtgt 66180

gtgtgtgtgt gtctgtctaa tattttcttt ttctggaaaa aacttttaaa aattgaaatt 66240

catatgcatg ataacattca tcagtataaa gagacagtgt aaagtgagtc acccttacac 66300

catagatact tagatcattt ttacagaatt tctcattgcc aattattgtt ttttgcgttg 66360

cttttttatg ttctttaaaa ttataagcaa aaggagtagc acattataca cacattgtct 66420

tataacttca taaaaactta atgttttgga ggtttcttcc atattagcac atacaggctt 66480

gctttattct ttttgttggt tacacaggca gtagtctttt ataaggctgt gactgcttga 66540

tttagcagtt cttcagtatt gttccagttt tcttttgcta ttagaaaaag ggattgatga 66600

atatacttcc atacatgcat cttgctttac acatgcaaaa tgtttgtaga aagattccca 66660

aaagcaaaat tttgaggtcg aagggtatat ccagataaaa ttctgttgga tatttcccta 66720

attatttatt ctttcatatt ctcattttct ctctctccct cccccttttc ttctccctcc 66780

ccctcttcct ctatccctcc ctttcccttt tctctctttt tctttccctc ccttttcttt 66840

tctcttttct cttcttcctt tttcttcctt cccctttccc ttttccttcc ttctgcttcc 66900

tttttttcct ttctttcatt ttttgacacc gagtctcact ctgttaccca ggctagagcg 66960

cagtgatcat ggctcactgc agcctcggct tcttgggctc aagtgatcct cccaccttgg 67020

cctgagtatc tgggatcaca ggcttgccca ccacacctgg ctaacttttt ttttaatttt 67080

tttttttttg agatggagtc tcactctgtt gcccaggctg gagtgcagtg gcgcgatctt 67140

ggctcactgc aacctccgtc tcccaggttc aagcgattct cctgccttag cctcctgagt 67200

agctgggatt agaggcgcac accaccacgc tcagctaatt tttgtatttg tagtagagat 67260

gtggttgcac catgttggcc agggtggtct caaaccctga cctcaggtga tccgccctcc 67320

tcagcctccc gcagtgctgg gattacaggc gtgagccact gagcccggcc acttttttat 67380

tttatttttt aagtagagat gaggtcttgc tatgtggcca cttttttttt tctttttttt 67440

taagtagaga taaggtcttg ctatgttgcc caagctgttc ttaaactcct gggctcaagc 67500

agtcctcctt ccttgacctc ccaaagtgtt gggattacag gcatgaacca ccacacctga 67560

cccctaattg ttctttgaaa gggaactgta tctagactga cttaaccacc atgttttgtt 67620

ttgttttttg agacagagtc ttgctctgtc actcaggctg gagtgcaatg gtgcgatcat 67680

ggctcattgt accctccgcc tcctgagttc aaacgattct tgtgcctcag cctccagaat 67740

agctgggact acatatgtgt gccaccacgc tgggctaatt tttgtatttt tagtagagat 67800

ggggtttctc catgttggcc aggctggtct tgaactcctg acctcaagag atccacccgc 67860

ctcagcctcc cagagtgctg ggattacaga tatgagccac cgtgcccagc ccacaatgtt 67920

taaaaatact tatttctcca tatttttgtt ctttcctatg cttgcttagt ttgatacaat 67980

ttgcaaaagt ataagctttt ttttcttttt tatagaagcc atgcgtgttc attgtaggac 68040

atctagaaaa cagagataag agtaaagaaa aaaaaatgga aatcaccggc caggtgctat 68100

gtttcacacc tgtaatccca acactttggg aggcccagac aggcagatca tttgagctta 68160

ggagttcaag accagcccgg gcaatgtggt gaaaccctgt ctctacaaaa atacaaaaat 68220

tagctgggca tggtgggctg aggtcggagg atcacttgag cccaggagct ggagattgca 68280

atgagccaag attgtgctac tgtactccag cctgggtgac agaatgaggg ggaaaaaaat 68340

ggaaatcact agtaatttta ccaccctaag taataatagc tgttaagact tctttgaaga 68400

tgttgtgcct gctttgtttc cctccgtggc cccagcctat ggcatggttt acagaggagt 68460

gaatgaatat gtgcacagca aaaggtggac tcattctgta catacttgcc cactcaggtg 68520

ttctctcggg tagccctgcc tcattccctg tgaagcgtgg aagggagggg tggtctgtgt 68580

gtagtcatca gcccatgtgc aagtcagcag gcaggactct tgtttgcccc agggctgtgg 68640

cagaataatc taaaggtcgc tagtctacag tggtacatca ccaagaaaag tgattcttaa 68700

aaatctcact gatttagtgc tttaagatgt tggttacttt gtccttgtac tctttctatt 68760

ctctgtttac aaatgaatat tagagggtca tggtcacaaa tgagcatcat cagttacatg 68820

ctgttagtgt ttctatccta tagcaagtac tttttttttt ttttgagatg gagtcttgct 68880

ctgtcaccca ggctggggtg caatggcacg atctcgcctc actacatcct ctgcctcccg 68940

ggttcaagtg attctcctgc ctcagcctcc caagtagctg ggattacagg ctcccaccac 69000

cactcctggc tattttttgt atttttagta gagataggcg tttcaccatg ttggccaggc 69060

tggtctcgaa ctcctgacct caggtgatct gcccgccttg gtctcccaaa gtgctaggat 69120

tacaggcatg agccaccatg cccagccctg tagcaagtac ttagatacta ttattcattt 69180

gtacatgtct tacaatttaa gtataagggg agaaccattc attacctata gtttactttt 69240

ttttaatagc ttactcttaa aatagaaaat taagtatgtt gtatatctct accaaatttt 69300

ataatgtaag gaccaattta tgcccctctt aatgcttaga tctgttgctg atacaggaat 69360

tcattgaaaa tacaattttc tttttcagaa atatcctgta ttgccatact tggttttagt 69420

attgaaacaa ttcctattgc agagggacct taatgaagta tttacaggtg gaattggttc 69480

ttatagtctc tttttaatgg cagtcagttt ccttcaggta agtcatatgg gtatagcatg 69540

ctagtgcaca ctaaaagcaa aagtgatcaa tcagctggga aacattttgg aaaaaatcga 69600

aatcaacctg taattgcatt gctttccttg attacttaac ggcttttccc tttaaactgg 69660

gtacatttta tcatttagca aatatgtatt tttaaattcc tatgaaagaa tatttttggt 69720

tttaaatccc atacattcta gtatttttga gacttttcac tgcaaatttt aacatgcaaa 69780

atgtacggcc tggtttccat aagcataaat agtataaatg ccaacaataa gaatgtcttc 69840

taagcagcta aatcttgtaa gtttagttgg aattgagacc agctatttgg gtaagcgaat 69900

tagagtctta gtattgtaag tgggtatgtt tatgtggcac agggttgcca actgcctgag 69960

tctattcgtg agtcagaacg actttgctga tgtgttgggc caagccagcc ctggttggca 70020

gcctggtgca gccgtaaaat tcagccttac aaacagtctc ccgccattcc cgcaccatgg 70080

gactttagtg ttgtgtgtaa caacagtata acctgctgtt agcccattat caactgactg 70140

ctatgctaaa ccaaaattat aataatattg cttgtagaag ttagaatata atttattccc 70200

cctctccttg ataatttagc aaaaatccaa tataatttct tcttttctgc ttttagttac 70260

atcccaggga agatgcttgc atccccaata caaactatgg tgttctctta atagaatttt 70320

ttgaattata tggacgacac ttcaattatt taaagactgg catccggata aaggatggtg 70380

gttcatatgt ggccaaagat gaagtacaga aaaatatgct agatggctac aggccatcaa 70440

tgctttatat cgaagatcct ttacaaccag gtattgaaat taggtaaatt tgtgggcatt 70500

caaagagagg gcactgtcag tcaccttatt atactttaaa ttctctttag atgaaaaatg 70560

aaggaacaac ttctaattgt tattcttttt tcatcgaaat atttcatgag caaacatact 70620

aaaataaaca gacacagaca atagaaaaac accttggaga cttccagata agtagggagt 70680

agaatctgtt taaccctaaa agcatagtag aaaaggcatt cacttatttg gatgggttca 70740

tgtttggtgg ctgtttctcc ttcttgggtc cttattgcct tgattacaac caattgtcag 70800

caattaatga ggctttaatg agatgattct gaagtcctga gaggcagcaa gcatagtaat 70860

atatctttga attcatgagc agaagggtgc aaggagacaa tgtattttct ttttgaattt 70920

ctcctttcct gtttgatttt gcatgtctct ttgtgctttt tccagcttca tgtgggcttg 70980

aaagtaagca gaaagtaaat tccttccatg cttttctgaa gttctgtttg cttgcttgtg 71040

tcctgatttt tgtgagcaat attttttctt gatataattg taaaatagat tctgcgttat 71100

tggacttcag tggaagtgct tttagtcatt tgctttaatg tgtaaacttt gaaaatgagt 71160

aaggaaaggg ggtgaagaga tagagtagtt gcctaggaac cattttctgg cttattgagc 71220

tgccttataa acattaatag ttctatgtgt ttattcattg aggaaacatt acattgattg 71280

ggagcctgct ctgttcaaaa gtattgggcc aaaggacacg aagacttttc agcaagacga 71340

tccttgcttt ttaggggctc ataatttaga gtgagaaata gatatatagc taatataaac 71400

ccaaaaaata tagaagtatt tctgatgtaa cttggggttt cactcttagg agtgaacagg 71460

gcactatttc ttttgtttgc ataactgttt atgtatggaa tgggataatt cttgatgggc 71520

cagaatacat tccggcaact gatacaccat aatgaagtac caactgcatg attcacatat 71580

tcagagactg gggagctttg gggacagctc acagctcagc ttccaggcac aactctggtg 71640

ggataactat ggcccttgct ctcctggaag agagtcatca acatttagtg catattaagc 71700

acagtcaggc ttactatgtt acgtatattt cttttaaagg taacgatgtt ggaaggagtt 71760

catatggggc catgcaagtg aagcaggcct ttgattatgc ctacgttgtt ttgagtcatg 71820

ctgtatcacc aatagcaaag tactatccca acaatgaaac agaaaggtaa aagttcatct 71880

ataaccagcc cattgtgtca aaattagttg tggcttctta tcttcaaatt aatgttattc 71940

cctccctctc cctttctttt taaacacatg cagcatacta ggtagaataa ttagagtaac 72000

agatgaagtt gccacatata gagattggat atcaaagcag tggggcttga agaatagacc 72060

tgagccttca tgcaatggta agatattttc cttggtcgat tgactgagta ttagaggctt 72120

ttctgtgttg tgtgcgttta atgggaagaa acgttttcca atcttttgcc actctttcag 72180

gaaatggtgt taccttgata gtagatactc agcagttaga taaatgtaat aataatctat 72240

ctgaagaaaa tgaagccctt ggaaaatgta gaagtaaaac ctcggaatct cttagtaaac 72300

actcttcaaa ctcttcatca ggtccagtgt cgtcctcttc tgccacacag tccagctcta 72360

gtgatgtagt aagtatgaaa gcctcggctc ttctgaactc agatgcatgc acgttctctt 72420

gctggggtta acactgtctc gaaggctaag gctacttcct ttgcttacat gttactggga 72480

tattttaata actttcatgc ttgtacattt tctcaacatt ttgttatgaa aaagttcaag 72540

catatagtaa aagtgaacaa attttagtga gcattcatgt actcaccagt agattctgct 72600

attaaccttt tacttgctta tgtcatacct gtctatccat cactctatcc attaattcat 72660

cttattcttt gatccatttc aaagtagatt acagacatca gttcccctag agtactgtag 72720

cttgtgcatc cttgtagcca gactccagta tttgtttatt gttttttcct tttttttttt 72780

tttgagacgg gatctccctc tgtcacccag gctggagtgc agtggtatga tctcggctca 72840

ctgcaacctc cgcctcccat gttcaaacga ttctcctgcc tcaacctcct gagtagctgg 72900

gattacaggt gcgtaccacc atacccagct aattttttgt atttttagta gagacggggt 72960

ttcaccatgt tggtcaggct ggtcctgaac tcctgatctt gtgatccacc cgcctcaacc 73020

tcctaaattg ctgggattac aggcatgagc caccacacct ggcctttaac gtttttcttt 73080

tcttttcttt tctttttttt gagacggagt cttgctctgt cacccaggct ggaatgtaat 73140

ggcatgatct tcactcacct caaccttcgc ctcctgggtt caagcgattc tcctgcctca 73200

gcctcctgag tatctaggat tacaggcatg tgccaccaca cccagctaat tttttgtatt 73260

tttagtagag atggggtttc accatgttgg ccaggctggt ctcgaattcc tgacctcaag 73320

agatccaccc gcctcagcct cccaaagtgc tgggattaca ggcgtgagcc cagctgttat 73380

gactttttaa caccatagtt agttttgcct gtttcagaat ttcatacaaa tggaaccaca 73440

tagaatatag tcttgtgtaa ggcttctttc actcaatttt ttttcagctt tctggttgaa 73500

ttttttgttg ttgttgtttt gttttgtttt ttgagacgga gtctcgctct gtcgcccagg 73560

ctggagtgca gtggcgcgat cttggctcac tgcaagctcc gcctcccggg ttcatgccat 73620

tctgcctcag cctcccaagt agctgggact acaggtgccc gccaccacac ccggctaatt 73680

ttttgtattt ttagtagagc cagggtttca ccgtggtctt gatcgcctga cctcatgatc 73740

cgactgcctc ggcctcccaa agtgctggga ttacaggcgt gagccaccac gcctggccaa 73800

attttttttt agttgagata tagttaacat aaaattcagc attaaaaatg tacaattcag 73860

tggtttttag aacatattca caatgttgtg cagccatctc cagtaattct agaacatttc 73920

catcacccca agaagaaacc ctgcatttag cagtagtttc ttctaattct tccttccctc 73980

ccttaacctc tggtaacctc taatctactt tctctttcta tcctgataga attttttttg 74040

ttcccccatc ctgatagaat ttatgtgtca attataatgt aagttacctt ttaaaatcaa 74100

agtgaatttg tagtgtactg atttgagatc taaagcaggc ttacctgttt gagtttaact 74160

ttattaagtg taggacatga aaagtaatct aaatattgta tgttgttgat gatgaccatg 74220

tgtcaatatg gaatcataaa tcctcctgtg cagaatctcc ctgtgtgctt ttttggttcc 74280

tagagcagta tgctttggag gacagaagcc aagctagatg tcacagacac agggagatgg 74340

agtgttgggg actgagagaa tgtgactctg acatgctggg tagagtgcca gggccagggt 74400

ggagacctgc agagagacgt agcattgtca tggcccatgc agcccagaaa taggtggagc 74460

tcagcccact gtcgcgggaa gtccaccccc acccacacca gtatgtttgg ttagaatgat 74520

cactgatttg tcatcacaga ctctcagaga ttgaacccct taaacccatc atcttgtgtc 74580

tggctgaagc cagggactag gacctaggtt cctcactctt taccatactc tttcattttc 74640

tataaataaa aaaacaaata aacttagacc tctgtgagct ccttcaaggt cagatgtggg 74700

cagtggattt aacaatgaac agaagctctc tgataaaatc agtcatttta aatgtttgga 74760

ggaaaattta aacaaacagt taattttttg tgtgcttctt ttaactccca aatgtttaaa 74820

tttagtccag agagtacttt aaccaaaatt gtttttcttt ctgaatattg agtatctaaa 74880

ttactaatat gtcacattat aactcacgtg acttgtgtta ggattccgat gcaacaccat 74940

gcaaaacccc gaaacagctg ctttgccgtc cgtccactgg gaaccgagta gggtcgcaag 75000

atgtatcctt ggagtcctct caggcagttg ggaaaatgca aagcacccaa accactaaca 75060

catccaacag caccaacaaa tctcaggtgt gtggaacgtg ggtttttaat tgttagtatt 75120

tgatacaaaa tatttagaat ttcccacatg taaataatat gcagcatggg tttgaagaaa 75180

acgctagatt gaagaacaaa cttattttat tctaagaggt tccaacacat gacagtgctt 75240

ctaggaacag gatgtcctaa ggatccttgt gagacaccat tgtaacataa atctcttcag 75300

gaatctattg actggtcctt ataagatgtt ccagccaaac taccatataa aaagtgtctc 75360

agttgtacat gaaataagct ggcatgaagg ttttgtgagg cctcatggca gtgtgcatat 75420

ctgggaataa tgtatccttt tctaatattt taatgttcaa taccttgttg ctggtgttga 75480

aatgatcagc tggctgtcag gcgtggtcag ttgattaaca ttagcttgga cttaaaaggc 75540

cacagagata ctctagttta agtttttttg ttgcctagaa ttgtcattaa ctgagtaatg 75600

actcagagtg aggggaggaa gccattgata tggggctctg gcctaaggct gggtcactcc 75660

tcactatagc tgggaacctg ggaataggcc tcttggctgt aaccttgtgt ctgatttgac 75720

tcactgagtt cactttacct acgcggcctt agccatgtat gccagacaca gacttatcac 75780

aaaataccag ttcaagtgac agggttgaca gaagggactg aggtcacgag aaagccacag 75840

gccatgagta gcaggaaggg agtagccacc tgtgctgacc caaacctacc agtgtgcctg 75900

tcatgcccaa gagcctcttc ccgctctgtc acttatgatg tggtgtttgg gttggtaagt 75960

ttcttaagaa aacctttgca tcccacacac tgttaagaag gcgggcgagt ggtctatgct 76020

tttcattatt tccattaaaa taaagtaagg gttttagagc taaaaagaac ccctgtaaca 76080

gctttttctg cccactagat aagtcagtga tcagtaaggt aacaatctag ccagcatatt 76140

cctagttttg aaagcttccc caaatccagg tgtttgagaa cactctgctt ttctgcaata 76200

ctgatgtctt tgtggtcgtt ttctgtttct gcagcatgga tcagcaaggc tctttcgttc 76260

ttccagcaaa ggcttccaag gtacaactca aacaagccat ggttccttga tgacaaacaa 76320

acaacatcaa ggcaaatcca ataatcagta ttaccatggc aaaaagagga aacacaagag 76380

ggacgcgccc ctctcagacc tctgtagata gtcagcgctg cgcggtggac tgtcttctct 76440

gtgcaatgat ctcatgctca ggacagttgc gcagggactc ctgggagata ttcaggagcc 76500

tcacactgtt cagacgttga cttagcaact gcgttttttc ccagctcgcc acagaatgga 76560

tcatgaagac tgacaactgc aaaaaaaaca aaacaaaaca aaaaaaaaag caagcaaaaa 76620

agagggaaaa aaaaggctgc ttatttgata agtcatatgc tacaacaggg tcattttaag 76680

atttaaagct tgaatgtaaa ataaatatat ttctcattgg ctttatgcag agttataggg 76740

aatagtattc agtgttggta gggtgataga aacaaaaaac agtatcagag gatgaggtgg 76800

ggaaggaaaa caaaggtatc tgataggaag tccagattcc aaaggggaaa gtgatctgtg 76860

catgtttttt ttttaaatat ttttgcatat atttaccatt ttattgtgtg tatatataga 76920

agaccatata ggagattgat atttgtaata gtggatttgt taataatact ttttacataa 76980

cattactgtt taaattgtaa acagattttt tctcaggatt agtttgaaaa ataatctaaa 77040

ttgtcatctt aacatccata tatagggaag tgattagttc tattactcaa tttgtttttc 77100

tcagcattga aatgacttaa tagaaccctt gtgtcctgct gcaaaaattt ttcctctcta 77160

aagaaaaggt ttatggtggc aaatgatgtt tattttattt tgtaaaaaaa aaaaaatgta 77220

ctatgtactt ttgtgtaaac actgaaaaat ctctggtcat ctccgagaat taacttgcaa 77280

ctgttttcta tagtgctgtc gtcttgggca atgggcaatt acatgacttt gtgtttgctt 77340

cctttgcagt cttttttttt tccccccatt tcttcctaat aggaaaaaaa aaaaaaaaaa 77400

ggtcacccat gtctggtctc attcctgttg cagtgaaact tcgagttcca cagactttgc 77460

atgctggctt ctctaaccct gtgtgctgcg tgtgcctgtt tctcatctct tattcttttt 77520

aaaattcatg cttaactact gtgggagaat aactgtaaac agctttaatt aaatcatact 77580

tataaaaaac tattttctta tattccactc tatgcttttg gtattgttga tctttacaaa 77640

ttaaatggtc tttgataatg gatctatttt gtattgcctt attaagacca aatacttctt 77700

gtcatcccat tctttatcct cttctttcat ggaattgtta tcgttaatta aaactttttt 77760

aaacattggc ttgtttcaat catactgtaa attttggttg tagtcagctt tgagtgcaat 77820

gagatgtata attctgttat cattacctgt tgagtttgaa actcagttgg gaatatttaa 77880

tataatagaa tgtaagtgac atttctgaaa atgctttctt tcagggtgaa agctcttatg 77940

tttagcatca atgtgtatgg ctctgttaaa tgcagccatt tctgagacga gattctttta 78000

tatatatata catataaagt actattggct tttaggagtt tcttttatat acatttatga 78060

aatactgaag accaatcaga ccattaatgg acacttagtg taacttttta taaagaaaat 78120

aatgctaaag taagaccaaa actgatgtca tcactgaaat taacaatttt caatatgttc 78180

atattttaat tcacaatgga aaaatgtgtt ccaaaactgg aaactcatag tactcgtgta 78240

aactgtggaa gatttcaaat gtgatgttat tttgacaatg ttttaaattt tagagtcaca 78300

ttttattctg atcagaattt ttattgagat gttgagcttt tgtttttgaa actagtttgt 78360

cataacattg tgcataatca cagtatttat tttctaggac aattgtgaat gtgtagactt 78420

atgtttactg ctaagggaac aattatttat aaaataatat taaatccagt attagctgcc 78480

tatttcagac acttaatact tgcagagatc tatgttacat ttaccacact gaagtttttt 78540

ttgttgtttt ttgtttgttt ttaaagaatc accctcattg ttgaaagtaa atgtactctt 78600

agggtgcgaa tattagtgtt ccaataagca tgtgattata ttaaggtggt ggtagcggga 78660

agataattct gattccattg ggaatcttag gttttcgtaa atttattggg aaaatagttt 78720

ttcctgtact gctgaagttt ctttttggta aacagtatct ttctaaaaga aaaaagcatg 78780

aaggagaaat tgaggtgtgt atacatttcc tcaaatgacc agcattgtat tcgtgaatac 78840

tgtgtatctt gcagtgaaca gtgtggaagc tgttcatttt tcaatctgaa gtaaaatact 78900

ttcaagaact tttagtttgc ctgctcattt gttttataca tttcatctat ttgactccta 78960

tcttatttct tttttgagtt ttaatacttc ctatattttg tgaatatatc agaaatgtgt 79020

catttatata ttagagtcca ttcatatcca tgaatcataa ccttcctttg ctaatacttg 79080

ttgaatggga ttttacaaat tctccctcac tctggtgaca tttctcaggc agtcatgtat 79140

gtgtacctgg ccattagaaa tattaatatt taaagactgt tttttagagg agctgatggg 79200

ttggtgaggt gtcagcacaa aatcttactg gttatgtttt gatgataaaa gtatatccat 79260

tttttccctc cagctttaag gtgactgtga aggtgcctgg ttttgaatgt ctttgtttgg 79320

tttggagatg tcgcactcag ttttcaaatc tagcttggat ctgtaggacc tatgtttttt 79380

acaagtaatt gccctccagt cttcaacagt tgattctgtt ttatttttat cctgttttga 79440

gtgtacttta cctttacttg cattttgagc ctcattaata tttaggttat ttgatttggc 79500

tccagatatt cctagatctg cacagggcaa aacatgggct atagggtgag catttttaat 79560

tgtctttttc tgctggaacc ttatatctct ccatgtgttt tctgctcctt ccctccccca 79620

tgaaatggta agtgtgactt gtgtttgcct gaacctgtgg actagtgttt ggggtttctg 79680

gaaacactag agggtcagaa aagagtaatg accaccgtga cgtgcaggat tctcttgctg 79740

tgacatgttc attgcaaagc cctctccagt gactaggagg tgtagttatt aaggttgatc 79800

tgttagaaat caccattatt aggtattagt ggtagatgtt gctgatactt ttattggtca 79860

tgactacatc tcagttttac tttaatattg atctatagtt tgatcagttc cttgaattct 79920

aatatgttga tttctcagtg tttctgtcac taaccaagaa tgtttctagg cagttggttg 79980

cttcacagtc aaaactaaat ggtaaactat caaaaataca ttcccaattt tgctgtgata 80040

aatattgaaa tgttaaaatt aatgaacaga agaatttatt cttacccatc tattcttgtt 80100

ctcctagttc attaaacttt cagttattgg aaaggcacat tctcaaagta ttttatgagc 80160

aaaatattct ataaatgcgt ctaacaaacc taattgaata taaaagttat atttagtagt 80220

tactgttgat agtaattttc atcagggtca tagttcatct agtaaaatat ttagagaatg 80280

atgttaacat tccagcatta aagtgggaac aaagatttat atatgaaatt ccttaaaaga 80340

gttcatcttg ccttggtttc tgaccctcaa gactctagct acctgccatc ttgtcaaaac 80400

atttgtgggt agaataagtg ttaaagatca aattttaata tgcttctcga tatttaacat 80460

agctaagaag ccagatttta ctgtagaagt tatttacatg atttgaaaac ttgacctaac 80520

tggaagcctt tttctcagtc atcttgttct aagccatctt gacttcacac ccttagcgac 80580

ttttcttttt tttttggtca aagataatga gctaaatata tatagacgtt gaatgttgac 80640

aaaattatta accagaaaaa ttgcttataa aggctgctga tctatttgat acctagaatt 80700

aaatatttga ggacagtttt tagttaataa actgctaatg tttattttac tgtctctcag 80760

gtttttggtt tttttaaaaa aaatgtgttt ggcctttaca ttttctactt aagtgtgtac 80820

tttattgagt ttaaccttgt ctgtagccta gtagcctgaa agaaaaggag acagaaccag 80880

agagatggat gtagtgcatt ccctttggtt attacacatt tgtggtagct cctggattta 80940

ctgagagata ttttagctat gtcaataaga acagctaatg atgtggaaat caggtgttct 81000

cttgtgtatt tcagtgaaca tttttattag tagttgcata tcatctctag ttccacattt 81060

taacttaacg tctttgtggc ttcaccactg agctaccttt cactacacca gcttctgtgt 81120

ggcctggtaa catggaaggt ctctcctaag gacagtctgg acgtattttg ggggaatgtt 81180

atttatctta aagatgccta gaaacaaaac gcatatagta ccagtgagaa actatgaagt 81240

aaacaagttg ctcaggccgg gcatggtggc tcacgcctgt aatcccagca ctttgggagg 81300

ccgaagcggg aggatggctt gaggctggga gtttgagacc ttcatctctt aaaaaaacaa 81360

acaaaaacct gaatggtgag gtgtggtgga attgggtagg ggagggaaag gaggacttgg 81420

aaaagcattc tccaaagcca gcaacttggt gaagttcagt acttgcctct tagaggttag 81480

gccatgcctt tcaaagagag tgaaatgatg ggttatcagc cacattcttg gagttaatat 81540

ttttcttcat ctttcagttt gggttctgtg ctattcatag ttcttcccta agaccatttc 81600

attattacct tttatattta gttgcaattt attataatat gttgttttgt ccctgaactt 81660

aatctcctaa ttttaagatc ctctctgatt tttgcatatt gaaacttaca gaagtcactt 81720

taaaaaagtc ttttgaaagt cctacaatcc taaaataaat cacaagcttg tttgttagac 81780

gtgtcaagag tctccagtct ttactactaa aaagcagcac tgccttaaca cacattgtta 81840

tgggtgaaaa gtgagggacg accagtgtag tttctggata taaagtgtga aggactgttg 81900

agttaaacat ttttagtgga atatacatag ataacgtgta tttagaaact ttggtgaagc 81960

cagtatttgt ttttagtaac ctttttatgt atttccttct ttgattagca ttgtcttcag 82020

tgttaagaaa tgtggactcc tgtgaggtgc tggaggtttg aatcatcttg aaaactttcc 82080

aatcttgtct agttaccact gcagagacac taaggaattt accagaaaaa gatatttgat 82140

acaagtgatt taagaaatct caacatttcc tgaggccgta tcactgggca accagtgatg 82200

aaaactatga atgaattgca cacctggaag attttttaag ctaatgacag tttcttcaaa 82260

gatgtcaatt atttgccttg gaaattttat aaattgcatt tctatgcaca tcggcctcta 82320

gtgcttacca ctcggtttat tattcataat ctgcaattca ataaaggctt tgtgttttca 82380

tttatcttca aaa 82393

<210> 2

<211> 44042

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 2

ccacgctgcc ctgcgcacgc gcagcgcggc tcaggcggca gcccggtgac accggcccta 60

gcgcgcatgt ctgcacgccg gggtctgcgc gccgcggcgg gccgagggcg gcgtgcgggc 120

cttccagccg ctgcctattc cacccaacgc cggcctagtc agtaatggct caacgccacc 180

gcctctccct ccagcccctc ccagtcgcgt agcttctgac gccgtcctca ccccgcccgc 240

ggccgacggg gccccaacgc gcaggcgcgg taaccacggc ggcagtgtct agtgaggatt 300

tgaaatcggt cgcgcgtgcg caccggcgac acggcccggc gaccgaggcc gcgcttcctc 360

ctgccgcccc cgtccccgcc ccctcccccg cccctcattg gagcggacgc ggcggcggcc 420

ccctccttcc cccgcgctgt cgccgccgag agtgtctttt caccgccgcc gccgccgccg 480

ccgcaggagc gccgagccag cggcgcgagc gtgactgagg gctagccgca cgggcggcgg 540

cgcctcccgc gggtccttca gccgctcggc gcctgggccc gccccctcgg ccccgccgcc 600

cgcccttctc cgatggcctc tccccgcggc ccgagtggaa cgccgccgcc gccgcggccc 660

ccgcgcccgc cccgcgccgc gtgaagcggg agcccggaga ccgcagccgc ccgctgggac 720

gcgccaagcg ccggagccgc ccgccgcggc ctgccggggc ccatcaccgc cgccgccgcc 780

ccacgccgga gcccgacggg agcgcggcta gagcaggagg ccggggctcg gcccgcccgc 840

cgccgccgcc gccgccgccg ccaccggccc aggcccgtcc gtccgtccgt gcgcgcgcgg 900

ccgggcctcg gggcgcggcg ggggcggggc cgcgtcgggg cgggcgggcg cgcgggcccc 960

gcgggggcgg cgcgtggatg gatccgcgcg tggcctggat ccagcccgag cagaaggggc 1020

cggccaatgc cctgtggatg cagatctggg agacctcgca gggcgtgggc cgcggcggct 1080

cgggcttcgc gtcctatttc tgcctcaact cgccggcgct ggacacggcg gccgcggcgg 1140

gggcggccgg gcggggcagt ggcggcctgg gccccgcgct gcccgccgcg tcgcccccgc 1200

cgcccggccc caccgcgccc gccgcgctgc cccccgcgct gctgacggcg ctggggcccg 1260

cggccgaggg cgcgcggcgc ttgcacaagt cgccgtcgct gtcgtcctcg tcgtcgtcct 1320

cctcgtccaa cgcggagtcg ggcaccgaga gccccggctg ctcgtcgtcg tcctccagca 1380

gcgcctcgct gggccggccg ggcggcggcc gcggcggcgc cttcttcaac ttcgccgacg 1440

gcgcgcccag cgcccctggc acagccaacg ggcaccccgg gccgcgcggc cccgcgcccg 1500

ccggctcccc gtcgcagcac cagttccacc cgggtcgccg gaaacgcgag aacaaggcca 1560

gcacctacgg cctcaactac ctgctgtccg gcagccgcgc ggccgctctc agcggagggg 1620

gcggccccgg ggcccaggcg ccgcggcccg gcaccccgtg gaagagccgc gcgtacagcc 1680

cgggcatcca ggggtgagtg cgcggggagg ccgcgggggc gggggcgggg cccatggtcc 1740

tggccggcgc ccgcggtgca gacacccgtc ccaggcgccc gggcttttgg aggatggatg 1800

ttgaaggcta aggccaaggc ccgactctgc actgaaagtt ttttttttaa acatcagact 1860

catttatcgt ggagtgactt gcccagatcc tacaagtaac agtccaagaa aaggggctgc 1920

tgggtaggac ctgcaggtat ttgtcttttt tactcttgag attggaacgg gaaatcgact 1980

ctctacccct ccaccccgcc tccgggcaag tgaggaaccc cttgtcaaag tggggcgtag 2040

ataagtgtgg agtttcacgt aagttaagtt gcagaataat ttagcattgc caggaactcg 2100

aatcacgtcg aaggtaaata ttaacctttt taatttcatt ttttaaaaaa atttaactgt 2160

caacttagag gtgattcatt ttttgggggg tgttgtgtcc tttaattttg tgctgcaatt 2220

accataagca tcgcctatgg tttataaaca ttggcttaat tcaaagaaaa aaccagattt 2280

gtcatatatg tctattcttt ggaaggtgcc atttttattt taaatatttc tacatccgcc 2340

tagagggaat tagaggctct acttaaattt agtgcactta cagacggcaa ggaatgaaac 2400

gaaaggtggt gtgtgtttcg gggttggaat tgtcccaggt gaggctgttc aggtgtgatg 2460

ctgttgacgc agcccctttg ccattttggg cttttctgag cgtctggaag caatttatgt 2520

gtaggttgta tgtcagtatt ttaagactta aatgataatt tttccttgca caatttttcc 2580

ccccaattta aaaaacaatt aaggatttgc tggggtatga gggttgttgc atgcagtaga 2640

gtcctacaaa taaccacaat tgctaggtgt tgggagttct tatagtaaac ttttgcttgt 2700

aactcttttt ctcatttgaa gtatgttggg aaacacgagt tgatacttct ttaaagcgtg 2760

tgatacactg taatagctgc atgttctgta acttatttca cctggcttgg gctacaagcg 2820

ataccttcta aatttcccga agtgtaaaca tgcagtgcag acgccggcag gagcgcagac 2880

tcctcttctc tccctccagt tcttacctgt agaactttct gagagcaggt ggttgggagc 2940

agtttcttct tgatgaatag caatatatac ctaagggctc gcttggggag gacctttagg 3000

tttccagcct gttatgtaac tggaatggac tccgtttctc ttagcactag aaaaaacagg 3060

aagacacgtg gtctctgcca gtcttgggtt gtacctctgc tcttagaaag tggtagcgca 3120

tcaggtccca tgcacctcac ttgggctccc cgagctgttt cctccaggta actctagtca 3180

ggctcagtag gtggtgttgc ttttgttagt gaatgagccc actaggatca ggtgctgtgc 3240

taggatctgg ggatctgggg cagggacggc atgggagaca cagtctcatg atcttgaccc 3300

accctgaaac ctgcctgcaa gtgccccctg cctagagcac aagagtaccc tgctcagttg 3360

tgcaggtccc ctctcacgct cttcgtcacc cacgtccagt ctctcatcac atgctgttcg 3420

tttggccctt ttaatctctc cacacctcat cctccctcat gcaggctctt gttacttctg 3480

tggagattgc tcaagcagcc ggaggtgcct ttgatgcact ctggtcctgc ttgagtcctt 3540

tcccatcaca ggtaatgggg caatcttctc tgccagcagg tctggtcaga ttccccttca 3600

ccctgtgatg tcacctcccc catctccaat cccccacatt aaagactaaa gcctaaaact 3660

cagcaacacc tccagggctc tgctgctcag atgcccctag gtcctggctc ctggccccac 3720

cccttgccaa cccgttagaa cctagctgta aggcagtatg gtgtagggca tgagagggct 3780

ctgaagccca ccaggaggtc tggtttgata ctgcagtcat gctcttggaa ctttcctttt 3840

cccctttgct ggagacctct ccttgcctgt ctctgggtgg tgtgtaccat gcctccagta 3900

tggccttggg tgcatccgct tcctgccgtc tctgcccaaa ggggcctgtg aggaccacct 3960

gctctgtgcc cagaagggca cggtgacctc tgcttgggct gctattccag ctactctttc 4020

agaagcaaac ctaagctgtg gtagagttgg gcctgtggct agaggaggta aggtcccccc 4080

tgtgatcatt tccacatggc ctgttggtcc tatataaact aacctttttg tatcaataaa 4140

tagttctgtc tagaacttgc ttctggccat cagcttaccc agagtgttga gaaaggccac 4200

caaaaagtct ttcggttgtg gcttagctaa ggaaataact gagttttaaa ggctcacctg 4260

ggctggccaa tagtaaagga ccttgttgct gagaagctgc ttggggttgt gatatagtcc 4320

caggacatgc acttctgaaa atgcagtgtg tattcctcat gggaggatga gcctgctgtg 4380

gagcattggc tgaacccagt tgggtctttg cctggtagcc catgtggcaa ccctcactgt 4440

ttgtcctttt ctggggagga gttttctgcc cttggacact ttgcctggtg gcttggcctt 4500

gtgagactgc cagtctgcct tctgcttcaa gtaggatgaa gaaaaagcag gtgaaagagg 4560

acagggattg gtgcaagaac cttcagagga gaggaggtga aatgcttctt ttggctctgg 4620

ttcttgaatc attgtttgat tgaaatctca agcctttgtt ttgggagtgg tgtgcttagc 4680

gtgagctgtg ctatctacct gggcttctga cctagagatg ttgggcaggt gtttggacag 4740

gccctgggcc ctttgcatcc cagcctctgg ctgctgtcac ttgcaagtgc tctcatcccc 4800

tgacccagca gggctttggg ctgttgttac tttgtcatgg tcgttctagc agctttggaa 4860

acctcttcag gttaagagtc ttgcataagt gagagtggga gcatggccct cagatatttg 4920

gccacatcct tactggtgtg ttacagagac ccaggaagaa tgtagttgaa cgaggacaca 4980

tgcaggtgtc ccgggccctg aacagcttct attcagagtt tggcctttcg aaggctgtgc 5040

catctcaggt gtgcctgcag tgtgcagcag gtgtatgcag cttcctcttt gcaggtttct 5100

tggtatttaa tctcatcctt taatatcttc tattaactca aaggaaattc tgttcttagt 5160

ttgaagtctg agagagaccg acgactgtcg gcataggaca tggtcagcca tgccccgcaa 5220

ggcgtctggt gagagtcgtt tccaacttgg tgcatgtttt tctcaattct ttcttgcgaa 5280

ggagtcacag cttggaggcg caaccaggat cccccctctc cctctagcct gacctcactg 5340

acataaagta gagcaggtgt gacctgtccg gaacatcctt gtgatgctca gcagggcctg 5400

ctgcagagca cgggaggcat cactctaggg gcctttccct cccatacttt cctgtgagtg 5460

tccaggatgc atgagagagg ttgttgtgag acctgcctta aagggtggcg gtggcacgtg 5520

tggaccttgc tttctgagtt tcactctccg agtcccagag gtataagctt gtgaagagaa 5580

gcgtgtatgt atgatcacac taagcagata cttgctcctg cactgttgga ggaggaagag 5640

gagttaattt catcaattaa ctcttccaac actccttcca tttagtaata gcatcacttg 5700

ttcctgtctt ttgttccatg gccaagctcc acaaggtgaa attgaaaatc gagtgcaaga 5760

cactggctgt gctggagttg aggaaagttt tgctggagac ctgcttgcac catatgtctg 5820

gtcactgata gatgaggact ggccaggtca ggacagctga cacttggaga aggggctgcc 5880

caggagggca tgacagactc tggaaaagga gggtcggagt attaaactgg ctgggaatga 5940

gaggcctcca atcttttcgc aggaaaaaaa aaaaaaggct taatgctcgt gctgtggaag 6000

tcagaatgga gcaaagtggg ttctgtctgt cttgctgctg tgagcgtgtg atggaacaac 6060

agtgtcattt gctttttctc agaaatattt aatgcatgtt tgtgacataa tttttcaaag 6120

taattttaag taaatatttt aaagtaaaaa gttctaagat ttgtgtctca aggtaaagtc 6180

tcaaacgttc tttggtcact atttaatatg agattttgtc ctcattttaa atggattcat 6240

gtaagcgtcc tgtggaagaa gagttaatag ttatccttgg aaaataagaa ctttttatgc 6300

ctcagttagg tcatatggtt taggatctga ttttgtagtt gtggagtaaa ggttaagaaa 6360

aaaaaacagc aaaccttgat attcaaattc agaaacttga tttttgagga tgcaaccaga 6420

atttggacta aaggtacaga ggggtggcag agtcagacca cccagacttg cagaagattg 6480

aagaagccgc agtgctgcca tgaagaggcc ctttctagga ggtgtggctg gcttgtcagt 6540

gctttgtctt ctctgcagtg aattggatgg caagcctcgc cctcttcgaa agctgccact 6600

ctgaacctgc cttgagaagc acctcaggga gggcaggcag gtggtctcag tcagcgctga 6660

caggtgtcca agttacctga cctgttggga acatgtgcct gagtgaggtg gccaggatgc 6720

cttttctccc aacactgggg atgcacactc gtcagcatcc tatttttgag atttctatgt 6780

tgtggtagtt ctctgttgct gtgtagcaaa ttaacataaa ctcagaggct tagaagaaca 6840

ctcacttatg gtcttaagga ttttgtgtgt cagatcaggg atggcggggc tgggttctct 6900

gcttaggctt ttgcaaggct gaagtcaagg tgttggccag ctgtgttctc agctggcact 6960

cagggtcctc ttaccagcac attcctgtta ttgtcagaat tcagttcctt gcaggatgga 7020

agtccttgat tgcttgctag ctgccagcag gggaattggg tagggcgctg tcagcttctt 7080

aaggccacct gcattccatc tgcaaagcaa ggtactttga atttctctga tgttttccgc 7140

cagctggagg aagccccctg tttctatggg cttgtgttat tgagtcaggc tcctgcagat 7200

aacctgccta cctgaaggtc atgtagtagt acaacatgat catggtgtga taacctcatc 7260

agagccacag gttccaagga gtagggtgta ggaccttgag gggaggaggt tcttctgtgg 7320

gtagacttcc cctggcatag aatccgttga tgagcaggtt gtggttcttc ttgtccaaca 7380

cttttcccct gactggactc cagcccatcg caatgactct tgcagattgc cagttccgtc 7440

ctctggcttg gtggttacta ctgaactcag gcagccacta taaccaggag aacctttctg 7500

tgctgcactc agatgaacat tctttaaaat atgtcattta agaaaagttt gcaggactac 7560

tcgggaggca gaggcaggag aatcctttga actggagagt tggaggttgc agtgagccga 7620

gatcgcacca cagcactcta gcctggtgac agagcgagac tctgtctcaa aataaataaa 7680

taaataaata aataaataaa taaataaata aataaaagtt tgcaggaaag ccgtgtgaat 7740

atatgaaaat acagtgattg aaaagtcctg ttcacgaggt gtcctgcatt ggctagttta 7800

ggaaaggggt ctttcctatg caggtggggg ttgatgactt acccaagagt cacctctgga 7860

acccagttct cttaagttga tagcagtcta tctttgcttt gcagaagatg tggggaacac 7920

ttgtcctgca agcccaggtt cgtagcaatg ttggcttccc cagaaccttg gcttcagagc 7980

actgtgcctc ctttaggagg cacaagaaaa ctcccacacg gttcttccct ctgtcccttc 8040

ctgagccccc tgagtgtttg gctcttgtgg agttgctgct attactaagt tgatcccact 8100

gccctcctga gtctcctcag ggaaggaggg gctgtattgt agcccgcatt cttagtgcca 8160

agcacacggt agccactaag taagtatctc ccaagaaaga agagcaggag gaggatctgc 8220

caactcagga gagcaggtgg gggatggcaa gtcttcggag tattcataaa ccaaatgcta 8280

agggaaactt ttgttgtttg tcttagaatt ttaaaaaata aagtctgttg cagtttatct 8340

gctttccttc ctggagagtg gctaaactag tgttctgttt tacaatgtag aatgcaaaag 8400

cagaaaacat tcaagaaaat tctatactgt atttgaaaaa catcaccatt tagttttaac 8460

tgctctttgt ttcttattat aaaaattaat acctaactat gaaaagttag aaagcctgga 8520

gaagtatgga ggtgagttgt ccaccattgg gccactagag agtgccctat gagcctgtcc 8580

ctggtgtcct ggactctggt ggtgtgcact gcatttgctg gcagtgagcc agggggtggg 8640

ccacatctgg gcccgggcgg ggtggatctc tgcagaagtt tatccatctc ttggctgaca 8700

gggtgggcga gatgggagca gctctgaggg tccctgttgg cagagaatgt ctttgattat 8760

caacaacatg cctttttgtt gtgggcttgt gatccttttc tttcctaaat cagctgccgt 8820

gcataaccag ttaggctctc ctgtggcttc agattggagt tagtttccca agtgctagga 8880

tgtgggtgtt aggtgatttc tgtctttccg tttgaaagag atttcagatc attgtaacat 8940

ttctggaatc ctgtcgatct gaaggaatgg ctaggatgta gtagtttaag ggaaatgaaa 9000

agtcgaatgt attttgatgt ttctgcatca gacctgctcg gtggagtcca tttctcagct 9060

tcgggagcca cgtgcttggc tcttgagagc ctagctccat cagcccatgt cacacactca 9120

caggtctggc tttagctggt ttcgccatgg tttctaactt gagcctcagt ttccccccct 9180

gtgaagcaga gcctgtggca cccacctcag agagtacatg aaagacttgg aagcactctg 9240

tgagttgtca tgcgagagat taaaaaggcc accgctgccc ttttctcctc tctttaagga 9300

aattgaaacc aaaaattaag tccttcttgc cagctggaca ggaaaagcct ttttcttggt 9360

ttttgaaaat acaacttcca ctttcagacc aaagtgaaaa ctgctaaaga ctgaatattc 9420

tgagtcttgg gagtgggggg ctagaggggt gttgtgaatt gaaagatacc tttctatttt 9480

taaaacattt taacaatgcc ttaatgatga ataatgtctg ttctagtttt gcatttgtta 9540

gttttttttt tttttttttt ttaactgttc tgaaggtaca tcagcactgt tctacagctt 9600

taaataagaa tctcatctcc ccagaggcaa gggtactctt gatgtatttg ctcagggctg 9660

tatgtgctgc tccgtgtaac tcatttaaag ttggttaagg tttttttatt tcttgcacat 9720

agtagaagga gtggatgaag tgttttctga actctttgca gcttctaaca tagtgttctg 9780

tgtatagtga aggaaaacaa aattaagggc cagggaacat taagtaggca actagaacag 9840

cactgtccag tagaacttcc tgtggagatg gaataattct atttttgcac taatacagta 9900

gccactggcc atatgtgact tttgagcact tgaaatgtga caaatgcaac tgaggagctg 9960

aattttaatt ttatttactt ttaattaaaa tttaaatggc catgtattta gacagctctg 10020

aactgcagta actttaggct ctatttgaaa cagtgtttga ttcagtaact gttgctgaaa 10080

taaattgaaa ctcatacaac agtaaaagct gtgttactca gcaagttatc actgtgaaag 10140

ctctagaaat tgtttgagtt tccaatgcaa atccttttca aaaagccgct gttttaatag 10200

cacatgaagc ataaaatagg ttcatagcag agcgcagcac agagcaacat ggagcaactg 10260

ttatgacctg gagtgtctcc agtccagcat gcaggtgata ggtctcagca tttttgcacg 10320

caggttaatg atggtgcaga cggtcacttc cttctctcaa cagtcttcct ggtcacgagc 10380

accattgtgg ctcgtgtgtg gggctctttt ggcttagctc tctgcacgag tttgctcctt 10440

tagttcccag agctgaccct tgaaatgagt gatattactc ctgttttgta gacagaaaac 10500

tgaagccttg acagtctgac gtgacctggc aagaggtgct gcagttggaa atgtgaattc 10560

acggctgaca tctgggcact ttactcctaa cagtgttcag tgaacaagac gtcgctaaca 10620

tgcgggggat ggaacctagc aactcattct acaaacatgg ttcaaatatg ttggtgcagg 10680

gccttttgct ttgttttcct aaagagatta gattcagatg tggtggggtg ctttgacagc 10740

caccgcagga caaagttgat agctgtgggg ttgcggagtg ttgaggattt catagggaag 10800

ccagtcctgc gcagtagtac gctcaggttc gtgctttctt gaggtgttcc agaactggcc 10860

tggagggagg ctgcagtgtg gaagcgggat ttctgtcacc tggagtattc ttagaagttg 10920

cattctatga agagtggagc atctgatgag ctgtttactc gctgtttcat ctgacggcag 10980

ttgaaagaca aggcaggact ggcagcgcag ctgcctcagt cagcactgct gcactggggg 11040

cttgacctgc agtctcgcaa tcctggacta taactcattt tgaagagaga aaaattaagc 11100

attaagtgat tcaagcgtct tgcccaaggc gctactagaa aataaaggca ctggtgccca 11160

gatgcaggtc tgcatggtat gcaagcctgg gcttcttccc acctccccca cagagagggc 11220

actggtatgt tggagtgaag agccacgcaa gacctctgtg aatgggcaga gatgggccag 11280

tgacgcaaca cagtaaagtg tattttggtt ataggcatcg tctctaaact tatgtaaaac 11340

attattaaaa aatggaagga caacgatgaa atgatggcca aaaatataga aaaggatacc 11400

ttgcatgtcc tgtgaaatgc aaaggaattc taaagtgtca ttatgagtta cctcatggaa 11460

gaaagcaaaa ggtgaatcta tctagagttt gtggttctga ctcacaagag actgatgttc 11520

atgctgaagg acgagtgtga caggtggaag gatagagcac cgagaccaca ctctaaaggg 11580

taggaatcta tgggaactat tcagggagat gaaagcatgg aatgaactga agcttgcaga 11640

ctcgttgagt aaaaagcgcg ttttaggatt ggttttagaa taaaataaca aggcctgtgg 11700

ttggggaaga tgacttgctg ttcacagagc ctcccttaat aggtggggac ctcagctttt 11760

cctctgctgc catcaggtga gtggtgtaca gtcctagcca cagtagtaat caccactggc 11820

ctgactgagc cctcaccctt tatacagtgt ctcctgccac cctcctggga gaggctgttc 11880

tcggcacagc tggcctgggg tcacacagct ggtaggtgta aagcaggcat tggagtccag 11940

gtagtctcac tccgtagcct gtctctttag ccactggaaa tgtagagcaa agcgagaatt 12000

gtccaaagag ataagctaat aaagaggaaa acaggctggg tgcaatggct cacgcctgta 12060

atcccagcac tttgggaggc caaggagggc ggatcacaag ttcaggagat cgagaccatc 12120

ctggctaaca cagtaaaacc ccatctctac taaaaataca aaaaattatc cgggcgtgat 12180

ggcacgcacc tgtagtccca gctacttggg aggctgaggc aggagaatct cttgaatcca 12240

ggaggcggag gttgcagtga gccgagatca cactactgca ctccagcctg cgtgacagag 12300

cgagactccg tctcaaaaaa agaaaaaaaa aagaaaacaa ttatgctgag ttccagagaa 12360

gtgatgtctg tcttctcagg agagatgccg atgctgtctg agggcctgcc cagtctccac 12420

atgattcaga gactccagag atggacagct agtgccctga ttttcccaag aggattctga 12480

gggtgacttc tgtcaaccaa acaggaggac ctggtgctgt catcaccagt tgtagagagg 12540

ctgcggacca cctgctgtgt gtgccatctt acactgccat ttgctgattg cttcaaagct 12600

agaggttgtt tctaagagtg cttcgtgcta actaactaaa acataatgac attgtttttg 12660

taaaactgat ccgtggtttg ttttttaaag cagaaagctc taaagtcact cagtcccacc 12720

acccagaagc acaagcaggt ggctgccact gtaggacctc tctctctagg ctcgtgtaga 12780

tggacacatg gattggtcag tagaaatact tttattaaaa gtcttatctt tacataaatt 12840

tgccaaatta ttaattttgc ttgaaaggga aaggtgtcca acttcagttg gaaatactag 12900

tttctaagag atactgctga gactaagagc ataaaacatg atgaaaacct taagtggcta 12960

agtgcagcaa cgtcagagta aaagctttga tgaagtcttg gtttgcttgg gctgtgtagg 13020

ttggaggctc agcctttgtt tctccctcct ctggtgccca gtggtggtgt ttgtgtccgt 13080

gaattttcaa cctctgtagt ttgtttgtag ttatgaccac tgttgcaccg aacccttacc 13140

gagggccagg ccctgtgcta agcacttgcc agtgtggatt tattaagtct tcatgacagc 13200

accatgtagg gggagctgcg tccctgtgtt gtacttggga cgcgatctga cctcaggcac 13260

ttcaggctcc tgaagggtct gcagtctcgt ctctgcctgg gaaaccacga tttgcagcat 13320

attccacaga cctcatgctc atcatcagga ggcttcccgg gactgctgcc tgagatttct 13380

aagttcctaa tgtggttcat gcttctggtg agtttctttg aggcgacgcc ccctgcgttg 13440

cctctggtca gctcagtcct gtggtcctgc agggcatcct acagtgtcct ctgtctgtga 13500

cttgtgccgt gccaccttga cctggcatcc actgtcctct accgcgtttg cagataggag 13560

ccactgttgg tgcctttttg tcgtgtgtgt tgaatggtca gggtcccaaa tagctgattg 13620

ggagcactct ccttgaatct gccatgtgcc tgggtctcag gtgactgggc ccctccttgc 13680

ttcagaaccc acgtgcgttg cctgtcctct ctggcttgga gggttgtgtg gaatcagagg 13740

tgagacccag tccccaggga tgggcagttg cctttgattg cccagctgtc ctcagcgccc 13800

tccctcctgc gcccaactgc tgtctcagtt gcttgcttga ggatccggat atagactgag 13860

gtcggcctta gcgtggcggg gggttttctc ttgagtcttg gatactttgt taccggtccc 13920

atcttcctgt gggtgggagt gtctgtcttg cttggcccag cctcccagag accttagctc 13980

tcttagtaca tgggctctgc ctaccttgat ccccagctca ccaccctagt gcagttgctt 14040

cttcgctctt gttccactcc ttgtcgccat ccaccctgtg ctttctcgat gtgtccttac 14100

tcggtgtttc tgtggagcag ggcatcctgg gcttcctttc tgatccctgg ctcctgtgat 14160

cttccgtgct gggctccctc ttcccttccc ttttccactg tgttgccctc acacagctgg 14220

catgccatgg atgtcgctca cccaagccct tcctaatgtt gctcaccaaa acccctccca 14280

ccttgcccct gggaccttct ccccttccag gctgcatgca ggccgagggc ctggcgtctc 14340

agcaggaggc agtggggcct ttgctggcac ctgggctctg catcctgacc ttctgagggc 14400

ttggtccttt aggtccatct tgaatctcct ccaggcttcg gactctctgc tctgtagctg 14460

gcccatggag acgggtacac tcaggcctgg tcttagactc cgctgcttgg gctgtgctgg 14520

tgcctttggt gccctcttag tccatcccac ctgggggccc tgtcctgctg tccattgtgc 14580

cagagtgctg tccccttgtc tttccgtaac tggctgctcg ttacctttcc catctcagcc 14640

tcagtaccag ccacttggta tcagggaggc tctccctgac caacctaaag ttcacagccg 14700

tggttgccag tttaaatttc tgcatagcaa ctttttggtt tattttggct acttatcttc 14760

cccatcatgc cccctgtccc tcccatataa actcagtgag agtaggggcc acatctcatc 14820

atcctgccca cagctctgct gtctgtatca gccagggtat gctgtgcaga ggctcacggt 14880

aaatagctgc agaccacgaa tcccatctgc ttgctgtgct ttaatattgg cttacatctt 14940

tggatccagt gagttctttt ctctgtctcc ctctctctca ctcgctcata cttactttgt 15000

gtaattggtg atttccagcc ttttgtatag tcctttctcg aatagttgtt ttctgtcatc 15060

ttggcggggg cctcaagggg ttgactgtac ggagggcagg ggctgcagag ctgcagctgc 15120

tgcctggggt ctcacggcgc ccgtgaggtg taggcaggtg ctttgcctct gagctgtctg 15180

tagaatgggg tgacggcggt ttcatcagac tcagtgaagc atgtcataca gtgagtgtct 15240

ggtcacagca ggaagatggt gaatgtcagc taatgagtat tcatcaccaa tgaatagtaa 15300

cagttttttt tactaaggct atgtaatgta gcctcagaat tccactcagc acagccccct 15360

ggcagcggtg cctctgagag ctggcatgat ggagagagcc tggttggcct tactggtgtg 15420

gttggggcac ttgggagaac gccttcctca caaagctcat ctggagggtt ttcggacttg 15480

taggatagct ttttcagggg ccttgccttt ggcagggcag ggacgtgtac tgctgcagtc 15540

tagggtatgg gataactttc taaaccagac ccagaacttc atggccgcag gggcctttta 15600

gccatgcggg gctaggagct gacacagcgt cagcagcatg agggcctgtg gtgctgggcg 15660

gcagagccca gagggagccc ctgctggtgt gactttagtg taaaggctgg gggataccag 15720

attcttacag aagacttaag acgggcacag tgatgtctgc tctttgaccc ttgcagtatg 15780

aattagtaaa actgaaatta ttacatttcc tttattagga ttataaaagc aatgatgact 15840

tattgaagaa aatttggaaa atacagaaac tacctataat ttttccattg ttaacatttg 15900

agcatatttc ttgtcacttt taatggtgct ttaaatatgt agcaaatgta tcatttcgta 15960

ttttaaaaaa atgctaggta agcatttcct cctgtcctta aaaagctctt ttaaacaact 16020

ttaaaatatt gtatagatag atgtacacaa ttttctgaat aattggagtt atatttacat 16080

cttttcactc tttaggaaag gactggcctg tttctgtgtt gggttccttc ctgagtgtgg 16140

cttccagctc agtggctcag acttcaagat gaagacttca gtcctggttg tgtatggtct 16200

tgggccagtt accatatgtc taatgaatac ttagttttgt catctacaaa atgaaaatag 16260

taatatttgc ctcaaagact attatttggg aggatctagt gcaaatgtta gtaatgtgga 16320

tattgtgtag tgtcccagga tattaatgtt tttagcctct tggcttttat tctgtattgt 16380

tgccccaaaa gatgatgctc acttatcttt catccagtgt aaggatatct ggaaagacaa 16440

cagaaagtat agctgttttc atttcaaaag tgatcagctg cttgagctag caagcaaggc 16500

ttgcactagc ttccaggcgc agtcacgcag tttcacagca ggcgcggttc cctcggagca 16560

cccagagctg ccctgcggta gtcagcagtt gtgctgtggc tgcactgcca ggctgggtgg 16620

caggtggatc ggagccagca gatgtggctc aggaagtgcc ttcttggcct ctccttaatc 16680

tctttcagag tctgtgggcc cttgattgca ctgtgggttg tttcagactc cagtattagg 16740

agactgaacc ccttggtggt ttttttgtgt gtgtgtgctg agctgggttg aggacatgtt 16800

aagcaggtgg ggtgcctccc ctgggtttgc tccgggtggt acctgtggtg tggggtggtt 16860

ctgagtagtt ctggccccac tgctggagta tctgcccact cagtttgtga gatggcaggg 16920

cttcatcctg gtctggtgcc tcattttctt ctttagcagt gggcttagaa ccaatgcaga 16980

ttcccaagtt aagtattttt tctgtagctt aattattaca ggcttctggt acctaagccc 17040

tttcttactt tctgttctga ggggaagaga agataatgtt gtttctccgc ccccccccgg 17100

agtggcccca ggaccttgca tggcatttgc agcatttgca gcgtgcttgg gtttgcttta 17160

ctagggtgaa agtgttgcac cccccagcac ccacaaaggc acctctgctc acactccggt 17220

gaggttctga ctggccctgg gacatcacct gctccaggat cctatgtggc tcatcccagg 17280

agagatgtgg gagggaaggg gaaaaaaggc ttacatttgc tgagtggaat tcatgtagat 17340

ctgagttccg cattgattcc taagctgcag agcccttatg ccttggctgt tttgtgaatg 17400

ttagtcggtc ttaacctttt tcaccgagtt agcattggct gtctcaggag gctcacagct 17460

cctgctcctc ctccagggga gtgcgccctc ctcctctgtc ggtagctgtc aggtgcccct 17520

ttcctctgca gcagactgtc ctgggtcctt gcctggcctt ccccttacac gtgagcctgc 17580

agcttcattc acagcccctg tgtagaaaga taggcacatc gataggtccc tccctgccca 17640

gagtgggcgg aactgaggca ggcactaaaa gcagctgact ggcagcccta gaaacatgaa 17700

gggtttcatt tatagtttca gtccttttcc ttctttcgag ccttaattta aaaaaaaaaa 17760

aaaaaaaagc cttgaagtcc tgcttctgag ttttctaatt tgtgcaggta ttagttgcct 17820

tgtaacataa tcaaaaataa ataaaaatga tttataatta gcttattaac tgtatcagta 17880

aatggatact ttaaagagga tcattgatcc ctcaaaatag aagcaatgca gtcattccct 17940

cattatgctt tacttgtgat ttgcttacaa cccactcttc ctagttaaag ttaaatatta 18000

atccagaccc tatcagtgcg atgtagtagt gtctgaatca gttgttgttt tggtgtaatc 18060

gtatcaaagc atgttataaa atctacaaaa ttgcagggtt aactccaaat attttcacta 18120

aggtattgtt tttttgggca aaaatgcata gtgaacattg tggagctgaa gtgagggaac 18180

ttcgatttct gagaaaccac tagttttaag ggttttgaag gaagagttgg aggaggagag 18240

gaagagaata aattcacagt taatgagttt ccagtatttt ctgtcgcatt ttacgttgta 18300

atggaaaaga ctgggaactg aactcacatg cagtttgtca aatcactttt tccctagaat 18360

tcaggattga tgagattaac ggggtgttaa aggtaaactg aggcacataa ttaacatgga 18420

cagaactgta gacctgagtg ttgagagttg ggaaatttca gtgagttggg aagactggaa 18480

gcacctgttc ttcagagtgc aggtcctcat attcagtggg tttaaggtgc tgaaactttt 18540

tttttttttt tgagatgggg tcttgcactg ttgcccagac tagagtgcag tggtgtaatc 18600

accactcact gtagcttcga atcctgggct gtcagcctat cctcccacat cagcctcctg 18660

actagctgga ctgcaggcct gggccaaaac tcctggcttg aaacttcttg taaccagatt 18720

ggaggaggag ggcatgttca ttttcgtgac gtttcctttc ccttaaacat ccagtgaaat 18780

ctgacctttg accatcactt tgcttaaaag aagctactgg atttaaagtc taggagaatg 18840

tcctagacaa gcccatagta tgttcctgta tgttccccac ccagagacct gcgttatgaa 18900

gtgtttggtg tgcttcttcc agccccactg ttctttctaa agtgttttat tttacatacg 18960

ctgtcctggc ttctgggcta tgacctttgc cttttttgcc ctttagttcc tttgcccttt 19020

acctactgca gtgcagctgc ctgtccttgg gttgactaca aagaagtcac ctttgaacaa 19080

cttagaaatt gtgacttttg gggaaggcag ggcagagcct tggggctgag atgggggagg 19140

agccagctct gccctgggag agatacaaag cgcctgcctg ggtgaggcag tgcacgggtg 19200

ggcttgcttc acctctttgg ccccagcttc aaaaccagcc agtcctccct ggctttggct 19260

ttaattcaca tttacaagct tgaaaaccag ttaatcccat tagctcagct tctaaagctg 19320

aaaatcgtcc cctaaatggg tcacctgttg tcatcaatag ctttattagc tatggaataa 19380

tatagttttg ttctctaact gtaggatcct tcttttgctc ttaaaatagc tcagtaagtt 19440

gggtctcata aatacataca gcaagcatat accagatact aaaatacaaa aacattgctg 19500

atcttgcttt tcagtactaa aagcagaaaa tcgggaattt actaaattga gaagtcagtc 19560

attacctttc gatgggtttg gactcttgca aggcagtgat tgtaaacgag agtgatcttt 19620

tgttgttttt caatgaactt tattctctaa tttttagtaa agcacactag gaaataatgc 19680

ttcagaattc tgttttcgag tagtttcctg actaaaataa aaattcacta aaaaaaacct 19740

ctgctgtcac catttccttt tttcttaaga taactaggaa atgaatcatt aagagtttgc 19800

tccgtggcaa tggatcggga agctgaccct gctctctgtg gggctggagc cttgctaatg 19860

tcccaggatt tcacttcaca gagacaagca tcagaggctt gcttcattta tagatcctac 19920

ttcttttcta caccacagcc aactcaaaat ggtgacagaa tctaagacga ggctagaagt 19980

caccacggag cagttggaag ctctgcttcc ggttctgggg gcagtgttcc tggcgttgtg 20040

tcctttggcc ccacctcagt ttgtccgttt agctcctcag ctgagaatga gatgtgtatc 20100

atataggagt ttcctgggcc actcacagcc ccaagctgga gagtgccagc ctaatgtgtc 20160

aggagtaggg ggtgaggcca gagggctgtg tgccaactcc tccctaagaa gcctcctggg 20220

aaagccctcc caggcacttc ccaggtctca ctggccgcct gaggctgcag gggaggatgg 20280

tcaggccgcc tcttggctgg cactgcttcc cggcgtgccg ccagcctttc tcatggggag 20340

gggaatgatg gcatgcctgg ggggcagcag ggccccaggg ctgcctaggg ctctcactgt 20400

gtcctcctgg ttctgagatg ccacctttgt gatccactgt agagggattt attctattat 20460

gatcaatgca tagaaatttc ttcgatttgg agactgaaca ctagtgagca gaactgaaat 20520

tgagctttaa aagatattga tgacgggtct gtggatagga gactttagtg tggtttttat 20580

gcagacgtcc tgccagctgt aaattccctg gaggtttggt atgtgagaac ataagactaa 20640

acttatttct attttgttga ggagaaatga ttaaaacttt tcattgatgt acttctgtgg 20700

cagacttttt ggagaattga accagcgggc atattcagta tttgaagtca tagatgagta 20760

aaggaggtat gttgtagttt gcgctggcgg cgtggcctgt ggtcggcagg gcttatctgt 20820

gaaggtatgt gcacagcttc ctaaggcagt gaaaagtcct ggcagtgtta gtattgaatg 20880

agataatcca aaaaatgtaa aaatgtttac atttttaaag ggatagttgg cgatttaaat 20940

ggtttctgct aacaaatcaa attattcatt gcagaggtaa aatattttca gaatgttaat 21000

tttagatgtc gtagagagtg tacatcagca atgacaaggt cagcaaaata tcttagcaaa 21060

acttgattga ttgattccat gcacaggcaa gcgctgttct gggcaccgga gacggagcag 21120

tgcgctgttg cgtccatcca cagatggcct ccagagtcat gcggttgcag ggaggccgaa 21180

gggccaggga ggccgctggg tgggcacggc tgggcggtgc cctcacgtgg gttttgttgg 21240

gctactctta ctgtgcactt tttctcagtt tggtcagtgt tccgccttgc tgcctggccc 21300

ccaaccctcg ccctctgagg gcctcacaaa gagccaagca gaaggcaggc tgggggcttt 21360

tcaggccagc ccagaggatg taatgatgat ggttggcact gtcccacggc cgccaccagt 21420

ctcacactgc ctcgtgggca gtcctggagt cgtgcggcac cttgctggtc cctgctctcc 21480

ttgaagaagg gccagtgggg cacttcgcca gagccttctt gtctgactcc gtcatccaag 21540

aggcatggat ggccgggccc ccggcagttt ccattctatt ctgagaaggc aaaacaaaat 21600

tattcctgtc tcttattatc taatatttgt tacagcagtt gctcactttt aggtgcattt 21660

tattacagat ttcagacagg tgtggttatt agtgcagctt actgtttgga cacaatgcca 21720

aggtcaggag gacagtgttc ccctgagcac cacttctgct aggagcatgg gcaggccatg 21780

cctcgccatt aatctctcct gatttagggg aggaatacca ggccaccccc tcttctccct 21840

gtgcaaggga acagacattt gacaaaaacg gatgccatgt tacgctgatt ttgtgtgtct 21900

aaggcagact gcagcaggtg ttatctccgt gctcttcctt tcctggagtg ttgagcatct 21960

cttgatagta ggggatgccc ctgagggtgg tgaatgtggc tgcacaggtc ctgaaagcta 22020

tttgatgttg ccgttacttc aggtagaact taaagttgac agtacattct actctgcagg 22080

tggaaatgtg gagtgccatt ttgacaaatt ggaatgccct gtttacaata tgctttaatg 22140

agttaaatct gggggatgtg gatagaattt tagtatccta gctttggcat tcttccatga 22200

ctttgggcca attatttaat aattccaagc ctgcatcttt gttagaatct ctaaatttct 22260

ctactcctgt tattatcctc agaacaggac tgtgaggtgc agtaggccac atggtgtagt 22320

ggtttaggtg gacagacttg ccagtgctgt tctcatggat agcctaggac tgtccctagc 22380

tctctgcagt gacagtgata gtgactggtg aaggtgaagg gatccaccca gacgttcttc 22440

ctgatggaga gaggctggcc tgtggctctt ccctggggtg gatgttaacc tgctaacgtg 22500

acatatctag tcctgcttac attactaagt ggtaggaaat tttaggtaac acctcagact 22560

ttaaagtggc ctactgagct ggtagaaaag tgtgtagttg gtgctcagta attgttgaaa 22620

agatagaagc tttacttcaa agctcttgta gtttgatcag tttggaaaaa atattttaat 22680

gttgggctct gttaacagct ggactggtgg ctgtctgaat tgggaccatg cttggggtga 22740

ggttttttct tacttttttt tttttttttg gtgagacaga gtcttgctct gtcgcccagg 22800

ctggagtaca gtggtgcaat ctcggcccac tgcagcctct gcctcctggg ttcaagcgat 22860

tctcctgcct cagttttctg agtagctggg actacaagca tgtgccacca cgcctggcta 22920

atttttttct atttttagca gagatggggt ttcaccattt tagtcaggat ggtcttgatc 22980

tcctgaactt gtgatccatc cacctcagcc tcccaaagtg ctgggattac aggcgtgagc 23040

caccgcatct ggccacatat ttttttaaat taaatgtgat acataaaatt aggctgcagg 23100

catggcctga tttgcaggtg cttcatgagc aagcgtgcac agcatttatt tgctgctcct 23160

ggagtctctc gtgtgtgctt gtagcctagc cttaagccct ctgtggacgg cttggaatgc 23220

gtactccaaa tgactctttt ggcggggtgg gaagtggcaa tactttaggt gactgacagt 23280

tgaaattaac cttacacaag agccaaactg taggctgatg cagggccact cacctttgta 23340

ctcacccctg gcaggtcctg taagaggtgc tacttgcttc cactttgcca gctgttcgtt 23400

ggccctgttt tgtcttctgc tgtttgcctt atttatgaaa cagaatggaa acaggcgagt 23460

ttgatttgtt ataattccta ggagtcatag aatggaagca ggtgagtttg atttgttata 23520

attcctagga ttggataatt tgccttcccc tctctccatc tttaattaat cccttaaagg 23580

aaaagaggac gacagcactt ttcctgcagt catctgtgta ggcctcagcc ttaactcatg 23640

acataggctg gtgccactgg ccacagggct gacctcagct cttggagccc atggggtgac 23700

aggagatcag cacctttgag gtggcggcgt gaggcgtctt ccaggccttg ctcatggtgc 23760

ttgaaaacac tgctttagag ctttgttaag agagagaggc cctacttact cctgtcccac 23820

aggcatttgg gtgttgacct ccttgttggc ctcttaagga gagaatactt gagtattgaa 23880

ttcgatcagc ttttctgcct ccagggaccc tgtttctctc tgctgagact gtggcggatg 23940

aaaccaggat ttagtggatg gtcaccaggt agcttgggca gacctgggcc gcggggcccc 24000

tgaggactca tacgtctttt tcctgttcac atgttccttc cccacacctt ggcccattct 24060

cagtccctcc catgctcctt agcgtgaggc actcagggag gtgcccatgg ggccttgggg 24120

cctgtgctgg agctggttcc cagcctcaga agtgtgccta actgtgccac attcattgga 24180

aagctgcttt cacacttcct ggatggaatt ctctcatttt ttcaatataa agtcactgag 24240

atgatttttt tggagaagtc tttaaaggcc agttatacat ttattgatac ttggtattga 24300

caaagttcag ttgtttagtg ttgctaagtc atactgtgta agtttgttga gcacagagtt 24360

ttcattttat actttcagag gagaaatgaa actgaatttc gtggccagaa atatgtttga 24420

gcgtcatcct gatgtaagaa cagaacagaa aatgtggtga catttcattg taactctagt 24480

atgttttctt ttttgtccat tagactacat gaggaaataa ttgactttta taacttcatg 24540

tccccttgtc ctgaagaagc agctatgaga agagaggtgg tgaaacggat cgaaactgtg 24600

gtgaaagacc tttggccgac ggctgatgtg agtatgttct ttggagttct gtgtcgcacg 24660

tcacgtgcga gtaaatttaa ataccctgtg atgatgatgt gtcggctaga tccacacaga 24720

ccttttctcg ttggcccgag gcagcagttc tccaagtgtg ctttgagaag gcctccgttg 24780

cctggaatgc atggcccccg gcgcacctgc acctgctgtc ttagacacct gcggtggccg 24840

cacatcttcg tgatgctggc gcgcactcaa gtgcgaagac catcggctga gggatttgtt 24900

gggttttttt tttttttttt tggaaggggg agaatggtgt gattgtttct cttaagttca 24960

ccttaaaatt tagaaatttc accctgtcac ccacccctgc ttccccacca ccacacatag 25020

tagcatataa tgtgctcatt tttgtaaaac ttggaagtgt tccctcatca cacaccactc 25080

ttgcagtgaa ggaacaagtg ttttttgaca tgtggagtgg ggccttctgg aatgcttggt 25140

gcaggtggcg tgaagcctgc ccctggccgg ctctattcag cagccttccc tactgctgac 25200

tgggctcagt ggaccagcag ggctggccgt gccccagctg tgaggggcat gtgtgctctt 25260

ggtgggcaag ggcaacccag ttttctgcgc ctcttttaaa atgatacaga tttttggctt 25320

taaacttcag agtcctagga caaagccctg ccccagtgcc ttagctgtgg gtttaagaag 25380

aggttgaagg gtttgaagct agctctgaaa agtcctcagc tttgaagggt tatagggtga 25440

ggacaaaact tgtttcacct cttaattttg agtttttaaa cattcctttt ttgggcatgt 25500

ctttaactta aagggaattt tctggttgat tgttatacgg tcccctccat cagtttccaa 25560

ggtagtttta ttttttaccc aagggtatag tgagggcttt cttttagtaa gaaataatgg 25620

tagtgtgact gcttggtttg tggtatacat tttaaggcaa ccactctttc tttcaggtac 25680

agatatttgg cagctttagt acaggtcttt atcttccaac taggtgagta ccagactgca 25740

tggcatgggc tagtgggggg ctgggatggt gtctatgcaa tattaagggc tacaaataga 25800

ttctttgtaa ttgagtctaa ggcgagaaat gccagctaaa ggaaaagact gtggttacag 25860

agggaaattg gcagaaagat ttaatttagt gttatgatga attcattgct ttgcattttt 25920

cctctcacac ttaatttgtt ggggtgcaaa aatgcttcat gctggaaata tgaagaagac 25980

aggtgggagg actgtgggaa gtaaacgcaa tagaagacat tctgctgata ttttaggaca 26040

tgtgtttgaa aaattgatct tatgttttga tgaagattca agcaaaattc tctttaaata 26100

gtattttcta agtattttta cctgatagga aaatgtcaaa caagtttgca ttctaaaata 26160

caaactagta ttttctcatt aaggattctt gatagccaaa taaatttcct gtgcactgtc 26220

tcattaaaag cttaccttct attaacccac tgctagttag catttggagg ccgaagaggc 26280

tataatctca ggatttgggg gttgacatta gcagggccag tgggtaattg aacaggtttg 26340

ggtatccagg aatctctggg tccgcaggag tgatccagcg taggcagtgc cggagtaggt 26400

gctgggagag cggggcctca gcctggtttg ggggcaggca ttttcatttg aatcccctca 26460

catacctagt gctgttggga gaatgattta accttcttgc tttccatctt atgctacaaa 26520

tatggaagtc ttcccttaag ttcagcgagg acttgctgta gttcatgaac tgcacttcac 26580

ctccttaggg gccataggct agtgggattg tgtcttggcc tttgtgggag acacaggcac 26640

atgtgccttg gtgcttatcc tccccacacg agtgtgtagg ctgtggcgag gggagcagtg 26700

gctgacgtgc gttttcttct gtcagcgaca tagacctggt ggtcttcggg aaatgggagc 26760

gtcctccttt acagctgctg gagcaagccc tgcggaagca caacgtggct gagccgtgtt 26820

ccatcaaagt ccttgacaag gctacggtga gtgcctggct ttggcccctc tgaccgggca 26880

ggagccttgt cacatcccag gtggtcacag gatacgcctg cgtcacgagc ttgtggtatt 26940

ttacacagtt attggctaca gttttgaaga ttaatctgct tctggtatag acatgtgttt 27000

tatgtttttg tttcatagtc gtgatcacca actgagaaca tgtttagtga cagtctgaac 27060

ttttgggact tgtgagccca ttaaactgtt cttggaatga aaatatatga ttgtgtctac 27120

ttgtgttagg atgaatagga aaggagagtc atctgaaacc ggacactgac attcaggtgc 27180

tgcccattat ggagagtgtg gctcaatgat taaaccatgg tttttatgat taccatttgc 27240

tatgttatgt taaagaggaa caacttagct gttcctttcg tggttccaaa aaatatacat 27300

atatgaaaag ccttttatct ttgggggaag tttgaagatg agactgtttc tggtgtgtac 27360

ttgctaaggt ttatgtcagt tcaagattat aagcccccca gggactatga ggtacttgcc 27420

tgttgtatga cagttcttag ctcacctgtg cgaccggcta gcatttcatt tttaaatttg 27480

tgtgtcaact tgtgtgtgat tcacatcctt atagtgttta gcagaatgta agttaaggca 27540

ggagcttcct cctgcctgtg tggtgatagg ggagggggca ttcacatgtt tctcattgtc 27600

aggtgctttt gattgaggct gggggcaagt tttaaaacat gatatatgca ctgaaaagtg 27660

cacatgtacc aggtgcacct cttggtgaga gttaacgaag tgcacatgct catgtcactg 27720

tcatgtggac cagagcgagc aggcagcacc agaggttccc tccaggccca ggttccagaa 27780

ggggctgttg gctcttctca ttagcacgag acaagccctg gccggccact ttctcaaatg 27840

cttacgggcc ttattgcact tagctctccc agccactctc atcagcagat gctgttgctg 27900

ttcacatttt acaggtgagg aaactgagat gcggagaggt gaggtcatta gcccaaggtg 27960

ggtcagcggc atagtccagg ccgctgttgt ctgctgctcc tctgtgtgtg ccaaggggca 28020

gcggggaggt gggtgggaat cctgaccagg cgaccacctt tggagtagag gaactaaggc 28080

gcggctgtcc tgaggccaca cagtaggttg agcagttaca gtaactgctt agtcccagtg 28140

acctcgttac tgtcgcatat tggctactaa gtatcttttc ctctgttacc tgagggccag 28200

tgtagactgt agggagagcc tggagcctgc cactgctcat ttctggggag cactgtgcag 28260

ccggccagtc atgggcacaa gagacccagg gcgagggctg agtttaaggt gaaatcttgt 28320

ctatttggaa caacaaccca aaactgtgtt acagtgttaa ctcctcacct ccaggatttg 28380

gggttcctgc cgtgagtgag tgtgtgcaag agtagggcag gagagtgcca ggagtgattg 28440

tgggaaggag tctatgagat ggaaaggaag ctgcttccta aactgtgggt gtcagggagg 28500

catagccatt gagtgttggc ttcttccaaa gcagtttctg atgagttctt tgggaaagta 28560

tttctttctc tgccttctta agaacatact ggcctcaggg cttaccctgc ctggtggtcg 28620

cagtggtgtc caggtgactc tggccccact ggcatgtcct cacacgctga gtccttggtt 28680

ggttgccctc aagtgtagac attaaagccc agaataggtg tgtactgaat gcactgtccc 28740

tacgttgcct atcactggca tttgaacttt tcgttagaca ctgattgttt tggttaaagg 28800

aattcctttt tttaatcctt caaggctgaa ggaaacaaaa cattgccttt tcttctggaa 28860

gaattcagtt ttactggtgg ggtggagggt ggggcatgag tgtggtctgg acagttgctc 28920

aggcagattt tgaatgccat tcggtgacag ttcttgttgg tgagaatatt tctaaaatag 28980

ccttttattt gctgaatttt ttaggggaaa aattttttta gtaaagttgt cttaaagagt 29040

gaaaacccaa agtagagaaa caatatcagt ataacataca atttaaaaaa tggcttcgaa 29100

gttacattaa atgatttcaa aaattctgcc aaataaaagt ctggggccaa gcacctctct 29160

ccatcccagc acatagggtg ggcgtggcag agactaactc ctgttccctg ttggctccct 29220

cccctcacgt ctctttgatg cttggtcacc tctggtgctg atccagggct acaggggctg 29280

ggcagaatgt gggtcctgct gtgaggggct ggggcctggg agtcgtcctg ggttcaggga 29340

ctactgatgc tgacagtgtt ctctgacccc ctttcattac taagaaaaaa caccaaacct 29400

ctgtacagct ttggcagcat tttgatgcct ggctgtggag agtcctgcat gttaaagcag 29460

tttttaaaat gaaatcttta caggtaccaa taataaagct cacagatcag gagactgaag 29520

tgaaagttga catcagcttt aacatggaga cgggcgtccg ggcagcggag ttcatcaaga 29580

attacatgaa ggtactgtgc ttggtgaccc agcgcggcga gagtgcagga ctggagtgct 29640

tgtgcttggt ggcatcctac gatgtttaca gctgtcagct gcacacacaa gtctttcgta 29700

acacagacta cacttacatt atttctccta caatattatt tctagagata ctttgaaatt 29760

acatagctgt ttttaaaatt tgcttttcct gagtaaccat tttataaagt tgacaattat 29820

tttagagagc tttgttaaaa tgttctttct agttattaca gactttgctt ctagctcagt 29880

gtgcctcatt cgcaggtttt acccaggtgg aagttgataa atcatgaggt gccttaaata 29940

tactcacttt gggaggtctc agtgcctgag gatgggcaga gagacttggt tgagctgaca 30000

tgtttgggac tctgaccatg tgcctggtct taaacgggtg gtcatgacct cctgttacag 30060

tagaggccgt gcagtcctta gcaggggcag acgcacctcc gggtggtcgt gacctcctgt 30120

tgcagtagag gctgttgcaa tccttagcag gggcaaatcc acccctgcaa tctggtccca 30180

tcttgttcca ttttcaaggg ccttgctctt caggttcccc cttccccctt gtcatctggt 30240

ctgagggagc atgtccaccc caagcgcaac acgaacagca gcagccaggc tttccctccc 30300

tcctgccatc tcctgccgct ctgccttcct tgccagcctc actctgctct cctgctccgg 30360

aggcccccac tgtcctcatg gcctgtgtag caagcacata aacactccag tgaacgcgct 30420

ggtctcttcc tgagttcctt tgtgcctgtg gactcgtcat ggtaggggtg cacccctgct 30480

gagtcgtaac ccagggagag ctccacagtc tcgattttca caagcccctc aggaaattaa 30540

ttcttagcgt cccccaacca aagtttgaga cttaatgact gagagccttc agatgggcaa 30600

gaggatcgag gaaactttcc tttctgtctt gtgtgatttg ctatgtgaaa tctctttgaa 30660

agtatggtaa ttactcagta aatctttttc ttttggaatt tacagaaata ttcattgctg 30720

ccttacttga ttttagtatt gaaacagttc cttctgcaga gggacctgaa tgaagttttt 30780

acaggtggaa ttagctcata cagcctaatt ttaatggcca ttagctttct acaggtatgt 30840

atgctttctt gagactgttt ctgttgagac atgtgtaaga gtagactctt ccaaccagtt 30900

gcctagtggg ttccagcagc ctttgctctc cttttactgt attgtttcaa tttggtagag 30960

gctgatttct gattcttaca atcaaaccct cttgattaat gcacctttct ggatgctcat 31020

tttgtactgg gtgtaactgt tggtgcaggg gtgcccgtct ggttctgtga gtccagtgca 31080

catcagtcca agctcaggga attctctgta ttcagaaatg tccatttcat ggtaaacaat 31140

aaacatttct tggtgcttgt ctgtgattta tattgaaaaa aatttgtctc agaataaagt 31200

tgagtaccac atatgagaaa aggatttaca agagagcttt ctcagactga tgaaacatca 31260

ttattttgtc ttaaattata tgtggtcctt attttgctga gtaacatgga aaatctatca 31320

atagaaaacc tacgtgtttt aaaaagtatt gttaaatgct gtgatgtatt gataaactgt 31380

aattatactt tttaaacata taaaatcatc tctaattgga acagtaatta ttccgtttat 31440

attttcttga gtgaagaatt ctgtccttta caaaatcttg cctatataat ttagccgcac 31500

ggctgtattt ctccagtgtt taccattaat ttggtctttg tgattgtgct gagattaccg 31560

aatctgtcca tgatttggta atgttctcac tgtcatgaat gctatgatag tagaatcact 31620

gggtaactac ctgtgatgat cgcagcttcc ttggtctgtc tctgccaaga tgctttaaaa 31680

gtagtgaaaa tggaattcca tgtctgtttt cttacagttc tagtcacact gtcctgtctt 31740

cactttcccc tctgagatgt ggcccttata tatagccttt cttccatagt ttttggacat 31800

tattttgaat taaacatggg cctctgttct ttactgatat actcctgact tgcactattt 31860

tcatggcctt gtagtaacaa cagctactta atactttgat catgcatgtg ccatgtgcca 31920

ggcctgggtc cagggcctcc tccaccccct cagggggtcc tttcagtgat cctgtgaccc 31980

cacaggaggc caccacagca tgagtgggat tcctgtgttc actgccacat ccctgtgcct 32040

tgtccagtgc ccagagcttg tcctgcctca gcggtgtgac tgtggcagca tctgagtttc 32100

ttgactaagt gaggggagga ggcccaccct ggcaccggcc aggctcttgg atatgtgatt 32160

ttggctaaaa gacaaggaat aaggaaggga ataaaggtca ggccagaatc ggaatcctcc 32220

tcttgtgtgg tggaaatatg cagagaactc cggaattctt ctgaacccta aaaacatttg 32280

tatgctttct agctgcagct cctcctggca ctctgtgtta taaatagttt caagcaccgt 32340

gcttctctga gggctttctc tcatgtgccc tcgtccatcc ctttcgagtt ggcactgtcc 32400

gatagaattc tgtgatggtg atggccactt ctgcatggtc cggcaagggg cagggcgcca 32460

catgtggcta ctgagtattg cagtgtggct ggtgagagca acaagctgga tttttaatta 32520

atttgtttta attcatttaa atagacatgt gggcaatgca ggtctggaca gctgagaatt 32580

atgaccctca ggaggtgtgg tggacagtgg tttacttccg aacaagccca gtgcctgctt 32640

ttgaagacga tatggcactg aactgagagt ggtgctcatc tgtgtgacaa gcaggatgga 32700

agcttgctat aaatattgtg atataatgct aatgaccttt acacagctaa aatcaatcct 32760

ttcacttttc cggttttatg tgatactgcc atactagtca gtctaacact gacccctgtt 32820

ggttgtgctt cagcataacg aaattaggat gacgagaatc tgaaattaca tctaccatcc 32880

aggtgactaa gttatgcaga atatagtcca acttatttgc ccatatttgg ttaatcagat 32940

atctgtgttt gcaggaagtt tgctgtatgg attaccaatt tcaaaaatca aactacacta 33000

aaattcagat gagtccgttg tgttcctttt gaacactcct cgttgaagag gctgctgttc 33060

aggcttcctc gtggtgctgg tgagtgagcg agtgccactc actggtattg ccttgaagag 33120

gctgctggac agcagacttc gtcgcgtgct attttcttta gaacatgcca tgaatccata 33180

caaattgtgg gtgcattgct tttacagttg catccaagaa ttgatgcccg gagagctgat 33240

gaaaaccttg gaatgcttct tgtagaattt tttgaactct atgggagaaa ttttaattac 33300

ttgaaaaccg gtattagaat caaagaagga ggtgcctata tcgccaaaga ggagatcatg 33360

aaagccatga ccagcgggta cagaccgtcg atgctgtgca ttgaggaccc cctgctgcca 33420

ggtaagggcg ccctgatctc cactgctgag agctgggcca gcctcgggga cgtgctggtg 33480

acagggcctg tgttggggct ctgagagccc cgggcagttc atttgctctt gatgcaggtt 33540

tctcttatac taaccagtta ataatcacac tttgagaaat ccttatttaa tgcttctaat 33600

taacttttgt ctttctaact gtttacattc tataataaag aagaattaag gaaaatcttt 33660

tctttttctg attattgaag tataacatat ccaccctaaa ccatttgttt ctctgaagta 33720

tgtaatatag aaaaaccatg gatgccataa tcccctttta tttggacatg tatttctcca 33780

ctttttccct atatggatat taatgtttat tattgttatc ttgttgaaca catcccacaa 33840

cgcaaacacg tttgtcactt ggcttttgac ttaacgctta cccttgaccc tttcctatgt 33900

gtgtaggttg tgttttgtcg tgaggattgc cgcattgaag agtctaaggc tgggctagag 33960

gtttcccggt tttattccca ttggcgtatt caggggtatt tatgtcctca ttcctttggt 34020

gacagtcttt taaaatcttt gccaatctga taaaaccatg tgttaacgct tttaaattta 34080

tatttcttta atgattagtg gggttaaaca cattgctatt tatgaattcc acaaattttg 34140

attgagcgtc tgttaggtga gataccattc ttactgttgg tgataaaatc gttggcggac 34200

gggtgacaga acaggtggtg gagagcccag ctccaggcgc gtgtccctgg gccttctcct 34260

ctgtgtggct ctgtgtgctg tccgcccggt tgctggctgc cctcctctgc tgtgtgcaag 34320

gcctgtgtgt gtcggggaag cctttcttgt cacacatgtc atactttttc caatttgttt 34380

tttgcatttg tattttttta ttcagctcct atacatttaa aaaaacacct cagatttaat 34440

ggttgttttt gttttatggc ttctgggatg tgagctttat ttatttccta aagatcgtct 34500

caaggaaaac acattggctg atgtgttttg ttgttgttta tagatggcat gatttgtgca 34560

ggctcttgag tggttttctt ggtagcacgg tatggcagtg tatcatccat ttttgtccgt 34620

tggatgagtc acattggaga cattggcatt gtcttcaagt gtctgctgaa atgtactcaa 34680

aaaacaaaga cccacataat cgttgagtta taatataaat ctagaaaaga taaaactcca 34740

gtacttagaa catatatcct ttaaaagaaa tccacactta acctgattgt gaagaatgag 34800

ttgtttgtag attaaaatta gaaacagtgc ttttcttatg aaaattaagc ttctcctgac 34860

tggcttcctt ggtgactgct gtgacagatt cctttgattt gctgtcccag ttttccacac 34920

gtgagaattc acattccatt ctaaaggatt tacttcctgt aggttccatt agcgttgact 34980

gagttgtgat gcacttgggg tgagctgccc ttctacctgc cctgttgggg cactgtgagg 35040

cctcctgatt gtcagatcag cgatcacagt gggtcggtgc tgctggtctg cacaatggta 35100

gtctttggct tcctcatgtt tctgccacct ggagaggtgg ctttttgtgg gctgtcactc 35160

cgtctgtgaa tggcagccgc ctccgtgagg tgggccatga gcacaggggc actgatgatg 35220

cagaccagtc ctctcggcac tcacagactg tgccctgtgc atggtgattg acagggcctt 35280

tgccagtgcc aagtgccacc cgtgcccatt gtgttcgcct gtctgggctt tgctggtagg 35340

gtctggaaga gtttcagtgg tgagggcctg cttcagagtc acttgtatga gaagatccaa 35400

aacatgtgga cgatggtgtg catgtgggga gggtctgaca tagccttttt gctgcaggga 35460

atgacgttgg ccggagctcc tatggcgcca tgcaggtgaa gcaggtcttc gattatgcct 35520

acatagtgct cagccatgct gtgtcaccgc tggccaggtc ctatccaaac agagacgccg 35580

aaaggtaatg ggttgtgtgt ctgcgtctgg gctcagcgtg cctgtgggat ggtacttatc 35640

cctttcctgt gtcatttacc tccatgaaat ttatgaaggg atgttctgcc gtatttcagt 35700

agaatctaga tatgttggtg aaggaaggcc ttctaggaat atgggatggc tgtgtgggat 35760

tcatccatgg ttgagagttg aaaatttctt tcttggagat ttgacatttt cttcagggtc 35820

ttttgttttg gggaggtgat ttctggcttt taaaattcag tccctaccat cttctcttat 35880

gtacactcgt cccttgttct acattttggg gcatttttac agtcccaaaa tgtagtcaga 35940

agtatttact tctcacccag atcattctgt ggtagtggaa agggtggtat ttgaaggggt 36000

gggagatgag ataggaatgg gaaggaagag taacgtggtc gtcaagagtg gaattcgaaa 36060

cagtttgata gatctgttct gtggtggatg atggaataaa caggtttcga ggcctggctc 36120

agcagccgct gcaggtgctg gtggtgctgg agctctgtgt gttcctgagc cgctgtctgc 36180

tcggtgtttt caggcggagc tctgggcccc atgtagggca ctcgtctcgg taccgtctcc 36240

attctcgtcc gtgcagtggg aagtgaaatg tcagcactgt atgatcatcg tgggtgggaa 36300

ggccccgctc ccctacttgg agctgcattt cacagtggtc ttctgtaggt agatgtactg 36360

cgatcccagg gtatgcttga gctgaatcat taaaagtcag agatatttgt caacgtattt 36420

tagctccttt cctactgtcc ttcacctagc gagatgatct gttaggggta taaggtagct 36480

gttcgagagg ggttctcagc tccctgacac ctgttgtact ctgttgatct ccaacaatgt 36540

ccctttgcag tactttagga agaatcatca aagtaactca ggaggtgatt gactaccgga 36600

ggtggatcaa agagaagtgg ggcagcaaag cccacccgtc gccaggcatg ggtgagagat 36660

taattcattt gtgttcatcc taaccactgg ctggcatgtt catgcagaag tgtctctatt 36720

cctttgtggt aaattggtca aattaagaaa atagctagtt tttctgatga gcattaatta 36780

agaagacaat aagatctaga gcagcactgt ccagtagaag caatataatg catgccacac 36840

atagaatttc aaagtttcta ggctgtgtca aatgtgaaaa gaaacaggtg aaataatttt 36900

gatagatttt attccactca agtcaaaata ttaacatttc aacatgtaat caacataaaa 36960

ataattaaga tattttatag ctgtttcttg tactgtctga aatccggtgt gtatttattc 37020

gtacttatag tacatcctaa ttaggatgct aaattttcgt aaaaaatact tgatctatat 37080

ttagatttta gaaagttcac agttgaagat gatttgcata cccaagttat tacaaacatg 37140

tttaatgttt tccaacaact aattgaatgt aatttttaaa attaaattag gcaaaaccta 37200

atgttgggtt tgttagtcac attagcagcg ttcccggctc agcagagccc gtgactgatg 37260

ctgccggggc ggctccacgc cgcagttctc aggagttatt aaccaaggct ttttccctcc 37320

acagacagca ggatcaagat caaagagcga atagccacat gcaatgggga gcagacgcag 37380

aaccgagagc ccgagtctcc ctatggccag cgcttgactt tgtcgctgtc cagcccccag 37440

ctcctgtctt caggctcctc ggcctcttct gtgtcttcac tttctgggag tgacgttgta 37500

agtgccctcc cctcctccgt gtgtctgttg gacagtttgt gtctctggta aatgtccata 37560

gccgcgagct taaaatctcc cccttggttt tgctcaggtt ttgtttcctt gtatgtgtgt 37620

ggaggtgggt ggggggcagc cccgtgatgt gggcaccagg cttcctttcc cctgccgtga 37680

accttcagaa cctgtctgtg cgactcatgc ggctgtcgag ggcagtaatc ctctaaatgg 37740

ttgaactaca gtggacttcc ttgagtagtt tttaaaaatt tatttgaaga ttaaaaaaaa 37800

aattaaatcc aagtatctct tctgtatttc ctttaacatt ctttttcagt tgtgatgaaa 37860

ttacttgaag gaagcctggg taggtttggg ctgcctgttc agaagttaga cttaatttga 37920

ataacctttc atagccagcc tggatgcagg cgtttctttt catagcttta aggaagtagt 37980

agtgcacctt tgtggtacag ctgtcctttt tgttttttgt accgggttca aggattcaga 38040

cacaccgccc tgcacaacgc ccagtgttta ccagttcagt ctgcaagcgc cagctcctct 38100

catggccggc ttacccaccg ccttgccaat gcccagtggc aaacctcagc ccaccacttc 38160

cagaacactg atcatgacaa ccaacaatca ggtacgtggc cctctggcac ccttcccgct 38220

ggtggcccct gggaacagca tccgagctgt gatatgcact agaggagatt gatggtcctt 38280

tgaattagaa gagtaacttt ttgagtattt ggccattggt gtgttgttct aggaaatcct 38340

ctcttttttg tggtgttgag gtcccccatg tatagtttca gcagcgagga cactgtggtt 38400

cttgagtgct gccgtggctt ttcacggggg ccaggttgac tgccttcctg caagtttcct 38460

cactgcccca gcatgagact gctgtcgagg gtcatcttga gagagcgact cagtcacgac 38520

ccacttagct gggcgccaag ccgtgccaga cacttgtccc tacttcctct cagaatctca 38580

atgaaagttt taatgtgaac ttattagact tttttcatgt ttgaaattag gcataatttc 38640

taaggctttt tctgttggaa tatactgttt ttaaaattta gataaaatta gaaatctaaa 38700

ggataatttt ataaatacta aattttgtat ctacttgcga ttatacatca cttgaatatg 38760

tgtgggtata aaacccaaca tgttaattga cttaaaacca ttttctgaaa tgtggggtat 38820

aatttgagca taaagctatg taggtacatg caaaagtgtt ttgactcatt tcttggagtt 38880

ttgcactctg ctctggggaa gacattctca caggatccac cgtgattctg gcggagcttc 38940

tgggatgctg gctctgtaat gacccacaga gctgatgagc agagccatgg cccagccgga 39000

caccgtaacg tgtctaattg cagcataagt gtaaaattca ggggcaatta tttacactct 39060

taaaatgaat tataccacag ataaacttgg tcgccttttt atggtcatca cagtggccct 39120

gacgtcctgg ccatgtgtca caaaggtgtt tgttttaacc acccacaagc cttggggccc 39180

ttgagagccc agtgcggctg ctgagctaca gagccacact ctgcggctgc ttgtgtggtt 39240

cgagtgtgaa gtccagggac gctgagggtt tataggtttt tatctaagaa gactcttggc 39300

cacagtcaat ctccagaggt tgttggggta aatgcacggg atgccaagat gcaaccaggt 39360

cagtattgca agtctgagaa aaggggttct cgttagcgca cttctgctgc tgacagtaac 39420

gggtgatgct gacatagaag cagcctggga cctggacagc aggcaaggaa ggaactgcca 39480

gccgtcccac ggcctctcag gccaccagtt gggccagcct tgggctgtga cccctgagtt 39540

cagcgtgtga gtagggggtt caccacgggg gtgacggttg ttcttctgat gactctaatg 39600

tcttgatcgt ttgatcttca atgagtttca aactttatga cttggattac tgggcatact 39660

ttatatgcca gttgctgttt tagaatacga agtatttcca attcaaagca caatattgtt 39720

aggtaatagt aaaacagact gctctatgga gcccacatgc aactgtgcca tttatcagct 39780

gccctttggt ggtgctgagc ttagaagccg gatggttttc ctctgattgc tttggtaccc 39840

atggccgtct ctcattttgt tcctagacca ggtttactat acctccaccg accctagggg 39900

ttgctcctgt tccttgcaga caagctggtg tagaaggaac tgcgtctttg aaagccgtcc 39960

accacatgtc ttccccggcc attccctcag cgtcccccaa cccgctctcg agccctcatc 40020

tgtatcataa ggtatagctc tgtcctggtg cattcaccta cctgttcaag ctgccatgtg 40080

agaggcggtg ctaaatgttt tctcctccag agagaattcc agagagatca tttgaaaacg 40140

gaatttgctt tgttgtcatt cagcctgttt gcttgtcttt ccaaacaaaa cttaaaaaag 40200

ttaaattatt ttaagatgta atatatagtt taattggttg ccacaaacat ctcttaattc 40260

ctctgttgaa ctgattagca taaaactgaa gtttgaaata aggctcaaaa tgaagacttt 40320

tcccatttac ataattcatt tatatgctaa ataccttggt tttcaagaag caaatgataa 40380

aaccaagagc agatcttgcc atgatgtccc gtgtatgctg ctgtcattcc cacgttgcct 40440

gatccccgcc tggggcagga gcaagcgtca gggctggcag agctgtgtgc tgggcctcag 40500

cagggccctg gcatgcgtgc ccttgtggct cctctcaagt ccagctgtgt gcatggagga 40560

aacaggtcac gttaagtctc tatattcttg aagtacctga atgattggga gagccatggc 40620

gaggatcttc caggtcagcc cccgtcgtgt gtgatgttcc ttgggctctg cggatgctcg 40680

gtgctttcat cggtgtccac acctctttat tccgctcctc ctttgcttgt ctaatcctat 40740

tttgccagta agttttttat tcttgaggct ttgttggccc tgtgttgtat gatgattgtt 40800

tttaggagtt aagtaataga acatttcctc ttggatttat ccatccccga tagacacatt 40860

cagggtgaaa gaacaacttc gcacaccggc ctcttctttg cattttggct ttgctttccc 40920

agtctcctcc tgctgttttt cttgctctga gactttcctg aagccggcgt gtgttccctc 40980

tcagtctgct tggccgcgac tttgcagtgc agggaatgtg ctttgggtgt agcccaagca 41040

caggctgctg catgctggga tcgacaggct gctgagggcg agagcgccag gtcctggcac 41100

gtgtgacttg cttggttctt tctagaaggt cacagctggg ggaagaacat gacagggacc 41160

ttcttacttc tgtttttttg gagacagaat ctcactccat cacccaggct ggagtgcagt 41220

ggtgtgatct cagctcactg caacctccgc ctcccgggtt caagcaattc ttgtgcctca 41280

gcttcttgag tagctggaat tacaggtgtg tgccaccaca cccagccaat ttttgtattt 41340

ttagtagaga cggggtttca ccatgttggt caggctggtc tcaagctcct gacctcaagt 41400

gacatgcctg cctcggcctc ccaaagtggt ggaattacag gtgcaagcca ttggcacctg 41460

gctagggacc ttcttatttc tatggataag tggaacaagt tagaagtgag gttctgctga 41520

atttgtgtgg tttgatcctg gtacatggtt cttgccttta gtcattcacg gaatgggaag 41580

aatgcttttc tctcagatgg aggagttggg aagtcccaga gggcaggtgt ccatccctgc 41640

tctctatgta acatcacgtc ggtgcttagt gtggtcactg cccgaggacg tgggcattgt 41700

gcctgctgtc tggctccaac actgctgtct ctctctttct ccagcagcac aacggcatga 41760

aactgtccat gaagggctct cacggccaca cccaaggcgg cggctacagc tctgtgggta 41820

gcggaggtgt gcggccccct gtgggcaaca ggggacacca ccagtataac cgcaccggct 41880

ggaggaggaa aaaacacaca cacacacggg acagtctgcc cgtgagcctc agcagataat 41940

ggctcctggc tgcgtcagcc tcccccaccc ctctgcagac tgccccgcgg cctcggccac 42000

cggcagggga accgagacca gcaccccgca cgtcagccgg gctcgcggca cgcccgccgc 42060

tgatcactct gcatgtttct tcgtgtggtg gtcgcgtcca tcttcaagaa cagctcgttg 42120

tgctcatctg tgaagcctta ttaaacgtgg acgttgtttt ctgccttccc aggattcttc 42180

cttcagtgct gaggcaggtc gggctcagga actgcaggga cgtgaacatg cgcttgcggt 42240

ttgaggtagc cgtgtctgtt ccttcgcggt ttgctatttt catttcctgt tcgtcaaagc 42300

agcagaggag atcaaacccc gttcgtgtgt ctttcctcca cggataagct tgggaggtca 42360

ttgttttact gccctcacat tttgtttgaa atttcagaac tgtttttcta tgtaaatatt 42420

gaaaacttat gatttgtgca ataactcaga tattttttat ttaatttcct attttcacat 42480

aagttatatt taagggagga gggaattttt tttaaacaag cttaggtcct ttcccgagct 42540

gcattttcta agttgggtca tcgtgtcggc tggttgtctg acgagcatcg ttacaaacac 42600

catgatgagg ggtttggggt tttattttga tgtcttttct tttggtcgga agtgagtgaa 42660

ggagccaggt cgccctgaag gttttccaaa gggcttggct ccagagccac ctggcagact 42720

gcccgtggcc ctgctgtcgg gccccaggcc gttgtcctgc tctgaccaca gagttttaat 42780

gttttggttt tcacttcttt taaactggac aacaaatcca gcatttcaag tgccagaagt 42840

ataactttct aaggagagaa gggttgtcac attataaaat ctttaggaaa atgtgaactg 42900

gaaaacgctt cggtcagttt tagtgacata gcctgtgatg atgggtctgg tgactattat 42960

tgcggaccgt ggtacccagt tttaggaatg tggagaaagg aattctgttg attccgttga 43020

ggaatctgta gcgtatgcat tcgttctgtt aagagcaaat ctaggagaag tgcttcagct 43080

gcccagtgcg ccgtggggag tgttttaacg gatcgtgtcg caggagagca cagcccagcg 43140

ttggggccgg gaccgctggc gcccgacgtc ggaagcatac aggtatacta tgcaagtgta 43200

ttctgccaca acaaccactg tctttgttac ctttttttga acaagaatat atccatcctg 43260

cctaaccctg agtttttgga gcaccacagt tgtcctggga gttggttgca tcttgtaggc 43320

catctgactt cctgttttta aaacgggggt ctggtcttgc taaacactac aggtaggttg 43380

gtctttgaag tccactagtg gagaatgtca agacaagata cttattacca tgacatctga 43440

tgcatgtgca gcagtgggga gttctagatt gatctctgaa tgtgatcgac gcccagcaag 43500

gacaagcttt aaaatgtctg cggtctgccc ttttgaagca ggactggctc actctgtcat 43560

tgggagctgt cagctgcgac tgcaggttct ctaggaggca ttccagaata gagtagcaca 43620

ctgtgtctgc agttctcgat gaccgaaagt tatcaaaaat atttaaaata tttaaattgt 43680

gaacctattg ataaagaata tttataaaaa ctgatctgta ggcctgtact aatctctacg 43740

cattagcaat attgactgta aacccacatt aaggaaacca ctacgggtct ggcagtgcgt 43800

gtcccgtggg gtgtgcattt taaaactcga ttcatagaca caggtaccat gttccatttc 43860

cgtcatggtg aagcaaatga attggcctgg ctaccactgt ggtcgcgtgc tacaggtttg 43920

acaaaaagat atcatgtttc gatttttttg tgtgtggaca acaatatgga agctaaaatt 43980

gacatatttt tatgtaaagt ttttctattc tttgattttt aataaacttt ggaaaccagt 44040

tt 44042

<210> 3

<211> 86750

<212> ДНК

<213> macaca fascicularis

<220>

<221> misc_feature

<222> (23430)..(24809)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<220>

<221> misc_feature

<222> (70678)..(70758)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<220>

<221> misc_feature

<222> (71318)..(71417)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 3

ggcggcgcgg cctcggcccc ggccccggcc ccggccccgg ccggcatgta ccgctccggg 60

gagcgcctgc tgggcagcca cgcgctgccc gcggagcagc gggacttcct gcccctagag 120

acgaccaaca acaacaacaa ccaccaccag cccggggcct gggcccgccg ggcgggctcc 180

tcggcgtcct cgtccccctc ggcgtcctcg tccccgcacc cttcggccgc cgtgcccgcc 240

gccgatcccg ccgactcggc ctcaggcagc agcaacaaga ggaagcgcga caacaaggcc 300

agcacgtatg gactcaacta cagcctgctg cagcccagcg gagggcgggc cgcggggggc 360

ggccgagcag acggcggcgg ggtcgtgtac agcggtaccc cgtggaaacg gaggaactac 420

aaccagggag tcgtggggtg agtgctggcc ctgcggcccg atggcctggc cggtgcgaaa 480

gcgcagccga gcacacgccc acagtggggg gttgtgaggg tctgggagcg gccaccccca 540

cggcctgcct ttgcttctgg tgcacggggg tgctgctggc catccccacc cccctagtcg 600

tccacacctt tccccagcct ccttaaccgt ccccaccctc cgctctcctg tcctccctta 660

gtcgtccaca ccttcctccc ctccctctta accgtccaca ccttccccag gtcccccctt 720

tatccattca ctctcctccc atccccctta gtcaaacaca tctacccctg accaccaccc 780

cgcctccagc cctccacacc tttttccccg tcatcacaac tcaagatgag accgcttaac 840

acgggcatat cattcattcc ctgagaacat tggtgtgtga gtgttttttg atggtgcagg 900

acccggaggt gctttccttg ccaagaatag aaacatccag aatgctcctc cccctccccc 960

agtcccagac agcaatcatg tcagccctgt aaggcattgc ctgctcttga ccctttggcc 1020

aatcttttta ttttttaaaa attcgcatat cacagatgcc ctgtctgtgg agagggtggc 1080

gtgggatggg tgaccgctaa gtttaggctg gcgaaggtgg tgagctcttc tgaggccctg 1140

atagaacttt ccaggagttc atggtccgcg gctccagctt ctcactgtaa agttgtcatc 1200

ctggcagagg cagccaatgc ttttcattct agggggtaga gatttatgct aatgagtgaa 1260

tattgcacca ctagtgactg tttaaagttc agctgttaga aaatggaatc ttacctgacc 1320

cctagtgaat tatgtacata agcagggaat gtttccagct agatcaccct tcagaagagt 1380

ccctgtgttg gaataggtta ctgagtctta tttgttttgc aaaacaaagc ttttggtctc 1440

gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtagct tgagtatgga 1500

gaacgggctt tcaaattgct tttcattttt caggttctgt tttacactga gggctttggc 1560

atgcaaatga aattaccaat tagtaatctc atgtgaacct tttcctggat ttattcattc 1620

agatctgtcc tgctttggct gagagagaga gttctgtgta cctttttgaa ggtctggata 1680

aaatgagttg gtgggttcca tctgcttcca gtgggctggt gtctgctcta tgctactatt 1740

acaactccta ccttttgtgg aaaatgcagt caagcgtttt aggactggtg ctgtggtaca 1800

tgtcaaacct gccctcacat tccagaaagg gaaccctttt agggttgagt cctctgttgc 1860

taagcttcaa gggcgctctc catggtcatc acgttttatt aaaggcttgt ggttccatcc 1920

tgttagcatt tccaagtcta agcgtaaacc tgtggtttag tgacaagcaa attgatgttg 1980

agggtttctg gtagtttcat ttcacaggag taagctccag ttaagtaatc actgtcaacg 2040

aaaaccttga agttccttaa ttgcatttta ttgaagcctc cttgcatgtg tctagcaaaa 2100

gatataagtc caagatgctt attttttttt gataaattag aaattgtcct ttcctctgct 2160

tgctatttaa tgcagaagat actctaaaag gttcatattt gtacctagta gaagcaagat 2220

gttcttgttc ctaattcaaa tatattgccc tcaaagggat taggagagga attttcattt 2280

cccagaggga ttactgtttt aaaactgatt gtaaacctct ttaaaaactg cttatcactt 2340

caccagtttt tccattcttt tgcctcctcc cttagaggat gtcagcagtt aattttttaa 2400

aaaaaaaatt gaaaaaagaa tttcaattct gagtcctcct agtttcaaaa aatacgttaa 2460

acaattccca ggagtgttaa gagtgtcggg gtgcttagaa attcttgctt tgattcatgt 2520

atcctgattt cttttttttt tttttttttt tgagatgaag tttcactctt gttgcccagg 2580

gtggagtgca gtagcacaat ctcagctcgc cacaacctct gcctcccagg ttcaagcgat 2640

tctgctacct cagcctcctg agtagctggg attacaggtg cttgccacca tgcctggcta 2700

cttttttatt tgtagtagag acggggtttc tccatgttgg tcaggctggt ctcgaactcc 2760

cgatctcagg tgatctgccc gccttggcct cccagagtac tgggattata ggcatgagcc 2820

accgtgcccg gcctcattat cctgatttct tttttttttt tttttttttt tttttttttt 2880

tttttgagac tgggtctcac tctgctgcct aggctggagt ggagtgatgt gatcatagct 2940

catggtatcc tctaactctt aggctcaagt gatcctcctg cctcagcttc ctggagtacg 3000

tgggactaca ggcacatgtc accacacctg cctaattttt ttatttttac tttttgtaga 3060

gatggggcct ccatttgttg cccgggctgg tcttcaactg gcctcaagca ctcctcctgc 3120

cttggcctca cagagtactg ggattatagg catgagccac cattcttgcc agtgtcctta 3180

tttcttaagg aagtttttct gtttttgata caggtatttc aaaatatctg aattcagagt 3240

gcacctcgat gttttgctgt tctgagattt aatatactaa aactattacc attgttgtct 3300

gaattcttaa gatgtgactg atagttagct aataggttaa cacgttgtgt tggttcttgg 3360

cctctgaact gatagtccag atagggagag gacaccagaa agcatgtgaa aaatggacta 3420

gaactatgga acagctatat agtctctcac agctgtcttt tgtgttctct gcttcaacca 3480

aactggttga cttatttaga attctgacct cttgcattgc ctaagtcctt gatgtttttg 3540

gtttcttctc tgaactctca aaggtactca cttcatgctc ttggtatagc ccacttatgt 3600

ttaactttcc ttttattatg tcttccctct tacacatgac atggacattt cttttaatat 3660

gtagagtaag atattggatt tcatctaaag tcttcaaaat aaaactcttg ggctcaccat 3720

ctcagacttc ttcatgtatt tacagaccag ggattttgtc tgctttttaa aaaaatttta 3780

tattttttat tatttttaaa ttttaattta attttatgga gacagggtct cgctctcttg 3840

cccaggctgg agtgcagtgg tgtgatcttg actcactgca acctttgcct gggctcaacc 3900

catccacatg ccttggcctc ccagagtgct gggattacag gtgtgagcca ctgtgcctgg 3960

cctaaattta tttttttaat tttttttgag acagggtctt gctctgtcac tcaggctgga 4020

gtgcagtggc atgatcatgg gtctcagcag ccttggcctc ccaagctgaa gtgatcttcc 4080

cacctcagcc tcctgagtag ttgggattac aggtgagtac caccacgcct ggctcatttt 4140

ggtatttttt gtaaagatgg ggtcttgcca tgttgcccat gcaggtctcc aactcctggc 4200

ccaagtgatc ctcccacctc accctcgcaa aatgttggga ttacaggtgt gagccactgt 4260

gcctggcctt atgtatttat ttaattatga atgaatgaat gagagggagt cttgctctct 4320

cgcccaggct ggagtgcggt ggcacaatct tggctcactg caacctctgc ctcccaggtt 4380

caagcagttc tcctgcctca gcctcccgag taactgggat tataggcgcc tgccaccatg 4440

cccagctaat ttttgtattt ttagtggaga tggggtctca ctatgttggc cacactggtt 4500

ttgaacttct gacctgccca cctcggcttc ttaaagtgtc aggattacag gcatgagcca 4560

ccgcgcctgg cctggccttt tatgttttaa gttgcttcca ctgattctct ttcttgggct 4620

ttgctgccct ccagaactgg ctatggtgta ggatgctgtc cacctgctgc tgcttgtcca 4680

tgaaaacgag ccataaaccc ttttatttgg aaagacttag ttgttgatcg ctatggagaa 4740

agaggggatg gcaagaagta gcaactacag agaatttgca gaacttggtc ttgagccctg 4800

ggtccagaaa cttcttgtgg aaggtgcttg gtgtttgtcc aagctcatga ggataggttt 4860

ctgttggctg tactgccaga tctgtagatg cttttttaag gcttggatga cttgttcaaa 4920

acaacgtttt ggagtacaaa tttggcttgg ggacatcaag accttgttgg gaaacttggg 4980

tttaagatat aatttcttaa actaggatgg tgggaatggg gatgtgaagg gagaatgaat 5040

gtgagaggca ttacagggta aggatggaga ggattcagat tccttaagtg gatttaataa 5100

tcacactgta gctttgaact tcagtgactg gggaaatgtt tgtggtgttt ttggaaataa 5160

gggccagaag gactattggt ttggggaaga agatagtagg gggatatata ggtagacccg 5220

ctagtggggt gctgagattt ggagggcaga gatgtagtgc tcttcactgc tgtagggcag 5280

tatcgtcctg tatgtgccat cctctagtgc ccttttttca ccatattgta gtaagcccga 5340

gatgttcatt cctttcttca gtactgcatt aaggcttatc tctgcttgtt tctttgtttc 5400

tgtgtttttt tttttttttt aagatggagt tttgcttttg gtgcccaggt tggagtgcaa 5460

tggcgcgatc ttggctcacc gcaacctctg cctcccggtt tcaagcgatt cccctgcctc 5520

agcctcccac gtagctggga ttacgggcat gcgccaccat gcccgactaa ttttgtatct 5580

ttggtagaga tggggtttct ccttgttggt caggctggtc tcaaactcct gacatcaggt 5640

gatctacccg cctcggccgc ccaaagtgct gggattacag gcatgagcca ccacgcccgg 5700

cctatctctg cttatttctg cacagtatta tcagtgagat tggtgttact gctgggctcc 5760

aaagcaatca gacatagtaa agtagattga atatgaaata atttagaggc cttgttccaa 5820

gtgatttgtg ctttgtttaa tttctgtgca tttgtaaata tagcccacag taattcttag 5880

tgaactggaa ccttcaggtt attgcatttt actgatttgg gtactgaaat gtgcttttaa 5940

gaagacatta ggttttctat agtgtagatt gtacactaac aatataattc atatttaaga 6000

atgtctcaaa atttagtatg ctgtgttcag ctaacttaac tttatttgtt tttttgtttt 6060

gttttgtttt tttctttgag atggagtctt gctgtgccac ccaggctgga gtgcagtggc 6120

atgatcttgg ctcactgcaa cttcaacact cctgggttca agtgattctc ctgcctcagc 6180

ctcctgagta gctgggatta caggcacccg ccaccacacc agctaatttt tgtattttta 6240

gtagagatgg agttttgcca cgttggccag gctggtctcg gactcctgag tcaaatgatc 6300

tgcccgcctt ggcctcccac agggctagga ttacagacat gagccactgc gcccggccac 6360

taacttaact ttcattccac aacttccatc ttttatccaa aatctgtgat cagtgaacac 6420

tgtcaccatt aaccattgac atttcagtgt ttggactttt ttttttcttt tccccctttg 6480

tctttgtgga ctctttttta acactcataa agttttaact attgaaaagc acaaagaaac 6540

agtgagtgac tttttggaat ttgtttaccc agtgttcaca taaaaggctt actacattac 6600

aggaaagata ggatgagaaa gggatactag aaaattctaa gtcagggacg ggggtgtgta 6660

ttagaaaaat tctgatcctg gcatgccaga tggccttaca tctcaacttc ttctgtgaaa 6720

ttcctgccaa caaatcatag tgttggaagt acagaagggt ccatgggaac agaatttaag 6780

ggctcccttg gtgatactga actgatcaga tggttctcac ttgttctcag ataacctgca 6840

tactgaatat cacaggaagg gtatagacat catggctatg gttagatatt cttgcacctg 6900

ctgaagctga gaaaattaaa gtcatttttt tttctgtgga aagtagaaaa tcaagctttt 6960

atatgatttc acacagcttt ctattctctc ttctgttgac tctgttaaga gtaacattta 7020

gtggtggaaa ctatttcagg atcacaccca caacactaga gactgtatta atcactcaca 7080

cacacatagg tatagagtaa tcttgaaggg gctgtaggcc agagataatg cttttttgaa 7140

gaattagaga ctagttacca gcacctggta tttgctgttt cctacagacc tgactggaca 7200

gcttagagtc tgctgaggaa ttcagaggat ggccagtaga atgttctttc taccccagag 7260

tatttggtag ggactcagct gctatggaat gccaaaaagg ctttaagttt ctttcactat 7320

tcttaagatt acatgtaatt gtttttttgt aagagattat atatattcaa attgaggatg 7380

gctttgagct agacttttcc ttaatttgga accacacagc agatgataca tttatttcca 7440

tctgataagt tacttgatga tgtaaaagac atttgagtta aagatttttg ggaaaaaagc 7500

tgaatgttga gccatttatg ttgtgtactg gttccctatt cacttagaca attttaagtc 7560

tgaaaacaat cttatcatat gcacaagaga tttcatgtag tatttggtaa ttaagttgag 7620

gaattctagc tcaagtcatg ctttttgctg aaataggtgt atatatttag tgcaaaaacc 7680

tgtgttttca aaaaaaatta atgtaataaa agtttcaaca aaatggaagc ctttataacc 7740

atgtttcaaa tgctatacta aaccttttcc atttgttatt atattaacct cctcatacat 7800

agccctacta tttttttttt tttttacttt ctattttgaa ataattgtag atttatggga 7860

agttgtgaaa aatagtacag agcccatgtt cccttcacca agtttcacct ggtggtgata 7920

gctcacataa ctatagttta atgtcaagaa ccaggaaatt gtcattgtta caatccataa 7980

ggctttttta gatttcacca gtttcacatg tatttgtgtg tatgtgtgta tataatagta 8040

tgcaatttta tcatgtgtag atctgggtag ccactctaac agtctatagt tctatataca 8100

gaactactcc atcacctcag ggctccccat gctaccgctt tgtagccgca tgcacccttc 8160

caacaaccac taatctgttc tgcatctctg taattttgcc attttgagaa tgttatataa 8220

atggaatcat acagaatgta actttggctt ttttctttta ccataattcc tttgagagcc 8280

atccaaattg ctgcatgcat cagtagttca tttcttttta ctattgagta gtagtccata 8340

gtatggctga accacacaat ttgtttaacc atttacttgt tgaaggacat accagaaggg 8400

tggtttccag ttttttgact attacagata aagctgctat aaacattcat gtatataaat 8460

atttttatat gaattaaagt tttcattttg ggggaataaa tgcccaaatg tttggatcat 8520

ctggtaaatg catgtttggt ttttagagaa actgctgaac tatttatttt ctagaatgac 8580

tatatcctct tgtattccta tcaacaacgt atgagatatc cagtttctct gcatccttgc 8640

tagcatttag tgttaccatt tttttatttg agcggttcta atatgtgtag taatagcctg 8700

ttttgcgtta tattaatcaa taaaaatagc ctcatctaat tttaactttt taattttaaa 8760

atatcttggt ggtattgaac tttctcagtg agaaatatct aaaattgtga cttgaaaggc 8820

tttaattttc aagtttttct ttggttttac tcttagcagt aacattttaa ttttttttgt 8880

ctttgaagta attttcagtg tttcctttac atgttgcttt ttcttagaaa ctagttatta 8940

gcatgaagta gatctttagt ctcgttttct aaaaacataa aaaagtaaaa ctgcgggatt 9000

tatttcaaaa ttgagagtct tgtcttttca tatgaggata ttttatagtc tgttggcttg 9060

gctatatttt agggagtaaa cctgtggcta gtggtttgtt ggtgatggtg gtggtaaagt 9120

tttcttacag aatttttatt ttttttttta ttttttattt tttatttatt tatttttttt 9180

gagacggagt ctcgctctgt cacccaggct ggagtgcagt ggccggatct cagctcactg 9240

caagctccgc ctcccgggtt catgccattc tcctgcctca gcctcccgag tagctgggac 9300

tacaggcgcc tgccacctcg cccggctaag tttttgtatt tttagtagag acggggtttc 9360

actgtgttac ccaggatggt ctcgatctcc tgacctcgtg atccgcccgt ctcagcctcc 9420

caaagtgctg ggattacagg cttgagccac cgcgcccggc caagaatttt tatacctgaa 9480

tgataccttt agactctata gaatagatac ttgatttcaa atctatccta gaataaattg 9540

tttcatctaa acagctttgt gacctgagaa ttgggactta gtgccttagt tttcccttac 9600

tggccctttg tagtcactgt tttgatttag tcaaagtaac ctaactctta gcactgtcag 9660

gtattgtaca ttcctgccaa agcaagaata ataatacata ggattgtgtt ttaattctat 9720

aattaggtga cttagctaat ttccaggaac ttggacttaa tacagtacta gtgataaggc 9780

ttgaaatttt agtgcctttg ttctttgaag ttattcaccc tttagtttcg tgtttgtttg 9840

gggtgtttat accactgtcc ctaaatatag ctgaaataac ggaggaaaac ccctgtaatg 9900

tcactagcag gatataattt ctgttaatag tttgatgtaa atattttttg actttttaat 9960

ttttttatat atatatatat tttctttcat caatatggac tcttactgtg agcataattt 10020

taatgtcttt aaagagttgg gttttgttta tttgtttatt ttattttata gaaatgggat 10080

ctcactgggt gcggtggctc acgcctgtaa tcccagtact ttgggaggcc aaggcaggcg 10140

catcacctca ggtcagtgag gttggtcacc agcctgacca acatggagaa accccgtctc 10200

taccaaaaac acaaaattag ctggacgtgg tgacatgcgc ctgtaattcc agctacttgg 10260

gagcctgagg caggagaatc acttgaaccc aggaggtgga ggttgcggtg agtcaagatt 10320

gcaccattgc attccagcct gggcaacaag agtgaaactt tgtctcaaaa aaaaaaaaaa 10380

aaaaagaaag aaagaaagaa agaaagaaat ggggtctcac cattttgatg ggttttgaac 10440

ttgtggtctc aagcagtctt cccacttcag catcccaaag tattgggatt acaggtgtga 10500

gcccatcctg gttttttgtt gttgtcgttg tttgcttgtt ttttgtttgc caccgtaccc 10560

ggctaatttt tgtattttta gtagagacag ggtttcacca tattggccag gctggtcttg 10620

agctcctcac ctcgtgatct tcccacctcg gcctcccaaa gtgctgggat tacaggcgtg 10680

agccactgtg cccagcctat tgttgtttaa ataaaagaat gttgtttaaa taaaataaat 10740

ttattctctt atagtctgga ggccagaact tagaactggt tttcagtcta attttttttt 10800

tcttctttgg gagaagggca tcagaatatt gtgaatatac ttttttgact aaaaaaagtt 10860

ttctctgggc atggtggctc acctggaatt gcctgtaatc ctggtacttt ggaggaggct 10920

gaggcaggtg gatcgcttga gtccaggagt tggagagcag cttgggtgac atggtgaaac 10980

ccagtctcta ccaaaaaaaa aaaaaaaaat tagccaggca tgatggtggc gtgcccttgt 11040

agtcccagct acttgggagg cttagctggg aggatcactt gagaccaaga ggcagaggtt 11100

gcagtgagct aaattcatac cactgcactc cagcctggat gacagagcaa gacctcgtct 11160

gaaaaaaaaa tttttttttt tactagcatg acaaacatct tttcatttca aatatatttc 11220

tttttttttt tttttttgag acggagtctc gctctgtcgc ccaggctgga gtgcagtggc 11280

cggatctcgg ctcactagtt ttttgtattt tttagtagag acggggtttc accgtgttag 11340

ccaggatggt ctcgatctcc tgacctcgtg atccgcccac ctcggcctcc caaagtgctg 11400

ggattacagg cttgagccac cgcgcccggc ctcatttcaa atatatttct ataccatttt 11460

taatatctca ttgcctttag aatgaccttg tattcatagt acatatgtat gtgatattcg 11520

atttatttat ttttcgtttg tcttattttt ggttatattc cattgattta atgtaccata 11580

atttatctta ccaatttctt gctgaccatt ttgtttccag tcttttgttt ttttatcaga 11640

catggattaa gctgaggctt tgtcccagac aacattattt cttttttatc agcaaaatat 11700

gcatgtaatg aaattaaaat taaaaggcaa aaaacgttat cctttatttt cttcttattt 11760

ttgttgagat aataattcac ataccataaa tttaaccctt ttaaagtgta caattcagtg 11820

gttttgtata ttagaaggtt gtaccatcac aactaattcc agaacagttt caagaaactc 11880

tgaacccatt atcactcccc actccctcac acgccctaat cctggcagcc acatagagac 11940

tgtctgtctc tgtgtatttg tctattctgg acctttcata taagtggaat cataacaatt 12000

tgtggccttt tgtgcttggc ttctcaaact tagcacaatg tttgcaaagg ttatctgtgt 12060

cgtagcatgt gtcatacttc attccttttt gtgactgaat attttattgc atatatatgt 12120

cacattttgt ttatccattc acctgtagaa ggatttttag gttgtttcca ttttttagct 12180

gttatgaata ttactgctgt agacgttcat gtacaagttt ttatgtgaat gtgttttcat 12240

ttttcttggg tatatactta ggtaagaaat tctgggtctt atgttaactc tctgtttaac 12300

attttgagga actgtcaact tgttttttaa agtggctgtg acattttata ttctaccagc 12360

agtgaattaa atttccaatt tctccacata cttgacagca ttttttgttt tgtttttttt 12420

tttgttttgt tttttttgag acgaagtctc gctttatcgc ccaggctgga gtgcagtcgc 12480

acgatcttgg ctcactgcaa cctccgcctc ctgggttcaa gtgattcttg tgcctctcag 12540

cctcccaagt agctgagatt acaggcacgt gtcaccacac ctggctaatt tttgtatttt 12600

tttttttttt tgagacggag tctcactctg tcgcccaggc tagagtgcag tggcatgatc 12660

tcaggtcact gcaagctccg cctcccggga tcacaccatt ctcctgcctc agcctcccga 12720

gtagctggga ctacaggcgc ccgccaccac cccgggttaa ttttttttat atatttttag 12780

tagagacggg attttaccgt gttagccagg atggtctcga tctcctgacc tcgtgatctg 12840

cctgccttgg cctcccaaag tgctgggatt acaggcgtga gccactgtac ccggcctaat 12900

ttttgtattt ttttttagag acaggatttt gccatgttgg tcaggctggt cttgaactac 12960

tgacttcaag tgatccacct gccttagcct cccaaagtgc tgggattata ggcgtgagcc 13020

actgtgcccg gcctacactt tttaaattat ctgtcttctt tattatagcc aacctagtga 13080

gtatgaagta agtgtctcat ttgtgatttt gattgttagt ggtgactaac aatattgaat 13140

atctttacat gagcttgttg gccatgtaca catctttgga gaaatatcta ttcaaatctt 13200

ttgaccattt taaaattggg ttatttatct ttttattgtt gagctatagg agttctattt 13260

tattttattt tattttattt tattttattt tactgagaca gggtcttgct ttgtcaccca 13320

ggctggagtg tagtgatgcc atcttgactc actgcagcct ctgcccccac cccaggctca 13380

agcaatcctc ccacctcagc atcccacagc tgggaccaca ggcgcatgcc actgtgcctg 13440

gctaattttt ttttttttgt attttagtat agacggagcc tcaccatatt gcccaggctg 13500

gtctcaaact actaagctga agcagtctgc ccatctcagc ttcccaaagt gctggaatta 13560

gaggcatgag ccactgtgcc tggtctattt tatttttaag atgagacttt actttgtcac 13620

ccaggttgga gtgcagtagc atgatcatag ttcactgcca ttttgccctc ctgggctcaa 13680

atgatcctcc cggcttatct tactgagtag gtaggactgc aggcatgtcg ctaccacgcc 13740

cagctaaaag agttctttat attctagatc ggggtatcca atcttttgac ttccatgggc 13800

cacattggaa gaaaaattgt cttgggccac acataaaata cactaacagt aatgacagct 13860

gatgagctaa aaaagaatta ccaaaaaatc tcataatgtt ataagaaagt ttacaagttt 13920

gtgttgggcc acattcaaag ccatcgtggg cctcatggct gtgggttgga tgagcttgtt 13980

ctaaatgcta gacccttatc agatggatgg tttgtagcta tttatctcat gctgtggatt 14040

ttttttactt tctttttttt cttttaggtt tttttttctt aaataattca actgattata 14100

agctttaatc gttttgtttt cttgatagtg tcttttaaag cacaaagttt tatttcgatg 14160

gtgtctaatt tgtctgcttt ttctttggtt gcttgtcata tgtaagaaac tgttgctaaa 14220

tccagaatgc tgaagattta cttgtgaact ttgtttcctt ctatgtgttt tatagtttta 14280

gctcttacat ttaggtcttt gatcattttg ggggtttttt tttttttttt tttttttttt 14340

gacagagtcc tgttctgtat cccaggctgg agtgcagtgg tgtgatcttg gctcactgca 14400

ccctctgcct cctcggttca agcaattctc atgcttcagc acccgagtag ctgggattac 14460

aggcatgtac caccaagcct ggctaagttt tgcattttta gtaaagagag agtttcacca 14520

tgtttgtcag gctggtctcg aactcctggg ctcaagcagt cctctaacct tgacctctgc 14580

aagtgctagg attacagggt gtgagctacc gcgcccagtc catttggagt tcatttttaa 14640

aatacggtgt gaggtagagg tcccatttca ttcctttgcc tgtgggtatc cagttgtccc 14700

agaaccattt gttgaaaaga ctgttgtttc tccattgagc aatgttgtga ggccctatct 14760

ccataaaaaa aaaaaaaaaa aaaaagaatg cagaaggaag cagtttttgc caattttgta 14820

gtatttactg acaatttgca tatatctgta cattctttag ctatttattt ttcttttgag 14880

ttattgcctt tgttcatttt tcttttggag gtgtttgtct ttttcttatt aatttgtaag 14940

agattttgca aatgtataca atttcttttt tttttttttt tttttttttt tttgagacgg 15000

agtctcgctc tgtcacccag gctggagtgc agtggcgcaa tctcggctca ctgcaagctc 15060

cgcctcctgg gttcacgcca ttctccggcc tcagcctccc gagtagctgg gactacaggc 15120

gcccgcccct gcgcccggct aattttttct atttttagta gagacggggt ttcaccatgg 15180

tctcgatctc ctgaccttgt gatccgccca cctcggcctc ccaaagtgct gggattacag 15240

gcgtgagcca ccacgcccgg ctaatttctt ttcttgtttg ttttgagata gagttttgct 15300

cttgttgcct aggctggagt gcaatggcat gaccttggct cactgcagcc tctgcctcct 15360

ggtttcaaga gattctcctg cctcgacctt ccgagtagct gggattacag gtgcccacca 15420

ccacacccag ctaatttttt tttttttttt tttttgtatt tttagtagag attcgtttca 15480

tcatgttggc caggctggtc tcaaactcct cacctcaggc gatccaccca ctttggcctc 15540

ccaaagtgct ggaattacag gtgtgagcca ccgtgcctgg acctcccacc ttattttgaa 15600

acaaatttct ttcttttttt ttcttctttt tttgttttga gaccaagtct cgctctgtca 15660

cccaggctgg agtgcagtgg catgatctgt gcttgctgta ccttctgcct cccaggttca 15720

agtgattctc ctgcctcagt ctcctgagta gctgggattg caggcatgta ccaccacacc 15780

tggctaattt ttatattttt agtagagacg gggtttcaac atgttggcca ggctggtctt 15840

gaactcctgg cctcaggtga tccacccgct ttggcctccc aaagtgctgg gattacagac 15900

ttgagccatt gcgcctggcc agtatcacat aatttcatat aaatatttct ttgtgtatct 15960

ttagataagg acttaaaaga aggcataatc ataacaccat tattaatacc taaaagaaat 16020

gaataataaa taattcattt gttgtatcaa atatccaatg ttcatatttc ctcaattgtc 16080

ccataataat ttttaaaagt ttgcttaaat caaaatcgaa acaagattct ttcattgcta 16140

ttgtttgaga tacatttgaa atcttaattt atagatttct ctgccatttc ttttccccca 16200

tatttatttg ttgaagaaat caagtgttgt ttcctatgga ctttcttact atctggattt 16260

tgctggttat attcttctgg cgtcagttta ctatgatccc ttttcccctg tattttctat 16320

aaatttgtaa ttaggtctag agatttgtta agattttgtg gtgttttttt tttttttttt 16380

ccaaaaatgc atcataaatg gtggtgtgta gatatcgcag aagacacgta tcttaatgtc 16440

tttttgtggt attagtagtt attaatgatt actacctata tttattaatt cattatttgg 16500

actataagtt tataatattc tcattctctt gatccttttt ctgttgttag ctgtaatgct 16560

tctaaaagga gaaacctttc ctcttcaagc tacttggttg tcttaagggt tcacttctaa 16620

tagggaaaac gggctaaggg tgaaaaagga aatagttttt aactgaatct gttaatgagc 16680

tgtcacccca ggcaaagaga agcaaggcag gccctaggaa actgaagtgg gtttgggatg 16740

attggtgccc catgcgtgca tgcatgaagg gaagttaatc ctccctgtag tgaactctac 16800

ttggcttttt gtcagtggcc aggactgtca aggaagacct ttgtccaaag tcatacctgg 16860

cctttgcttt tagctcttgg tagctgaagg aaaccaaaac agacctatga cctgcaaact 16920

tctgcttagt agacaaagtt ctcacagcct caattcagta agcaggagta agatgcttgc 16980

tttcccttga agtgaaatgt gaattacatg tttcttcaac ttgtgctaat attctctttt 17040

ttaatattta tttatttatt tatttattga gatggagtct cacactgtcg ccgaggctgg 17100

agtgcagtgg tgcaatctcc gctcactgca acctcagtct cccgagtagc tgggattaca 17160

ggtgcctgcc atcatgcccg gctaattttt tgtattttta gtagagatgg ggtttcacta 17220

tgttggccag gctggaattg aactcctgac ttcgtgatct gcctgcctca gtctcccaaa 17280

gtgctgggat tacaggcgtg agccaccaca cccgggcaac ttgtgctaat attcttaaca 17340

gggtgtgaat cattcctgcc ctcaggctaa cataacccat acagccttcc ttataggaag 17400

atttcctact gggagtgaat ttgtccagtg attcccccaa aatgtccccc aatcaaatat 17460

tttaaaactc agcatttaca tgtaaaaact aacaagcatg gtagcagcag tataaagaaa 17520

cagcagtatg gcccttgtaa gggaaggctc cggaagatga gctgcactca gcctctaggt 17580

cacagctacc ttaggagttt gcagtagttc ctggggaagt cagtagacag gccatctctc 17640

aggcctgggc aagataggga cttttttttt tttttctttt gagatagagt ctcaccctgt 17700

cgtccaggct gaagtgcagt ggcatgatct cggttcacca caacctccac ctcctgggtt 17760

caagtgattc tcctgcctca gcctcctgag tagctgggac tacaggcgcg gacaaccatg 17820

cctggcccat ttttgtagag atggggtttc atcatgttgg ccaagctggt ctcaaactcc 17880

tgacctcagg tgatccaccc ccctcccaaa gtgctgggat tacaggcatg agccactatg 17940

cccagtgttg tttttttttt ttttgaattg tagtgatagg atctcacttt gtttgatggg 18000

ctattcccaa actccaggcc tcaagccgtc ctcccgcctt ggcctcccag aatgctgggg 18060

ttacaggttt gacccactgt gcctggtccc agaattcatg tttttaaaag tcactctgtg 18120

ccaggctcat gcctgtaatc ctaatacttt gggaggctga agcaggagga ttgcttgagc 18180

ccgggagttt gagaccagcc tggacaacat agcaaaaccc taactctaca aaaatacaaa 18240

aactagccag gtgtggtggc atgtgcctgt agtcccggtt gctttggagg ctgaagtgga 18300

aagatcgctt gagtctagga agttgaggtt tcagtgagct gtgattgtgc ctgggcaaca 18360

gagtgagaaa agtcactctg attgtggtgg ggaaagtgga ttaatggaga atggaagctg 18420

ggaaacatgg tggttcttgc taagtcagta tcaagggttc acagatgagg gggctgtttc 18480

ttcctagtaa gggccttggc caaatagtca tggatctttc tctttggaag aagctcctca 18540

atttttcttc cccaaggcat atatggttga tgcttgaaca acacaggctg ggtctgtatg 18600

ggttcactta tatgtggatt ttttttcaac caaacttgga ttaaaaatat agttgtaggc 18660

cagggtcagt gactcatgcc tgtaagccta gcactttggg agcccaaggc aggtggatca 18720

cctgaggtcg ggagtttgag acgagcctgg ccaacatagt gaaaccatgt gcctactaaa 18780

aatacaaaaa atagctgggc ttggtggcgt gcgcttgtaa tcccagctac tcaggaggct 18840

gcagctggag aattgcttga acctgggagg tggaggttgc agtgagccaa cggggtggag 18900

gttgcagtga gctgagattg caccaccaca ctctagcctg tgtgacagag caagactctg 18960

tctcaaaaat aaataaataa aaatacagtg taggccaggt acagtggctc atgcctataa 19020

tcccagaact ttgagaggcc aaggcaggca gatcagttga agccaggagt ttaagaccaa 19080

tctggctaac atggtagaac cccacttcta ctaaacagaa gtacagaaat taaccaggca 19140

tggtggtaca cgcctgtaat cccagctact tgctaaactg aggcaggaga attgtaatcc 19200

cagctgcttg ggaagcttga ggcaggggaa ttgggaggcg gaggttacag tgagctgtga 19260

tggtgccact ggactccaga ctgggtgaca gagcgagact ctctctccaa gagaaaaaaa 19320

aaaaattgta tttacaggac atgaaacctg cctgtatgat gtgctgactg ggagactaga 19380

gtatgcacag attttggtaa acaaggggat tcctgaaacc aatcccctga gtatatggag 19440

gattgactat atattttaat agaatttatt tattattatt tttagcagtt ttaggtttgt 19500

ggaaaaattg agcaggagta catagtttct ctctctccct cacatttccc cgttactaac 19560

gtcttgaaat agtgtggtac atttgttaaa actgaagagc caagtattga tacatcactg 19620

ttaaccaagg tccatagttt agagttcatt cttggtgttg ccgtttctat gagtgttggc 19680

aaatatataa tgacatgtat ctaccattat agtatcatat tgagtagttt cactgcccta 19740

aaaatccccc tcgttctacc ttttcatccc tccctctatc tacctgaacc cctggcatcc 19800

attgatcctt ttactgtctc catagtttta ccttttacag aatgtcaaat agttggaatc 19860

atatagattg gcttctttcc atgttccttc tggcttgata gctcttttct tttctttttt 19920

tttgagacag agtctcgctc tcgcccaggc tggagtgcag tggtgcaatc tcagctcact 19980

gcaaactctc tgcctcctgg gttcaagcaa ttctcctgtc tcagcctccc aagtagcttg 20040

gactacaggt gcctacctcc ctgcctggct aatgtttgta tttttggtag agacggggtt 20100

ttaccatatt ggtcaggctg gtctcaaact cctgtcttca ggtgatccac ccacctcagc 20160

ctcccaaagt gctgcgatta caggtgtgag ccaccctgcc ctgccagctc ttttctctgt 20220

actgctgact aatactctat tgtataggtg tatgagttta ttcaccttct gaaggacatt 20280

ttggttgctc ctaagttttg gcaattatgc atgaagttac tataaacgtc tgtgtgtagg 20340

tttttgtgtg gtcatgtttt tagctcattt ggataaacac caaggagcac gattgctgga 20400

ttgtatggta agagtatgtt tagttctgta agaaactgcc aaactgtctt tcagggtgac 20460

tgtaccattt tacattccca ccagcaatga atgaagttcc tgtcgctcca catcctcgtt 20520

agcatttggt gttgtcagtg ttttggcttt tcaccattct aatagatgtg tagtgatatc 20580

ttgttttagt ttgcaattct ctagtgatgt atgatgttga gcatcttttc atctgcttat 20640

ttgttgttgt tgttgttgtt gttttttatt gagatggagt ctcgctctat tgcccaggct 20700

ggagtgcagt ggtacaatct tggctcactg caacctctgc ctcccgggtt caagtgattc 20760

tcctgcctca gctccccaag gagctgggtt tacaggcgcc cgccgccatg cccagctaat 20820

ttttgtattt ttagtagaga tggggtttca ccatgttgcc caggctggtc ttgaacttct 20880

gacctcgtga tctgcctgag ctcaagcaat ccgcctgcct cagcctcaca aagtgctggg 20940

tttacaggcg tgagccaccg cgccctgtct tcatctgctt atttgatatg tgtatatgtt 21000

atttggtgga gtgtctgttc tgatcttttg cccattttaa aatcagattg ttttattgtt 21060

tctgcggttc ttttagtttg tttttttgag acaaactctc gctctgtcac ccagtctgga 21120

gtgcagtggc gtgatctcag ctcattgcga cctctgcttc ctgggttcaa gcgattctcg 21180

tgcgttagcc tcccaaatag ctgggattac aagcatgtgc cactgcacct ggctaatttt 21240

tgtatttata gtagggacag ggttttgcca tgctggccag gctggtcttg gactcctggc 21300

cttcagtgat ccacccactt ttgcctccca aagtaatgag attacaggtg tgagccacta 21360

tgcccggctt attgttaagt tttaagagtt ctttgtatgt gtgtattttt tgtgattctt 21420

ttaaagttaa tgcttaataa aataattgta catatttatg ggatgcatgt gatattttga 21480

tacatgcata caatgtggat caaatcaagg taattagagt atcacctcaa acatttttca 21540

tttctttatg ttggaaacat ttcaaatctt ctagctattt tgaaatatat agtaaattat 21600

taactataag tcacctcatt gtgctatcaa acattagaac ttattctttc tacctgactt 21660

tatttttttt acccattaac caaccattct tcatcagctc cccatctccc ctactctttt 21720

tttttttttg agatggagtc gctctgtcac ccaggcggga gtgcagtggc gcgatctggg 21780

ctcactgcaa cttccgcctc ccgggtttaa gcagttctct gcctcagcct cctgagtagc 21840

tgggattaca ggcgaatgcc accatacctg gctaattttt gtatttttag tagagatggg 21900

gtttcaccat cttgtccagg ctggtcttga actcctgacc tcctgatcac ctgcttcggc 21960

ctcccgaagt gctgggatta caggggtgag ccaccacgcc tggcccctct tactctttgc 22020

ttagcctccg atatctatca ttctattctc tacttctatg agatcaactt tttttttagc 22080

tcccacatat gagtaagaca tgtaatattc ctctttccgt gtctgatttc tttgtatatt 22140

ttggataata gtcttttatt agatacgtgt tttgcaaata ttttttccca gtccctgact 22200

tatcttttca ttctcttaag tagtgtcttt tgcagagcac acattttaca ttttagcaca 22260

gtccagttta ccaattcctt ctttcatgga ttttgctttt ggtattgtgt ctaaaaagtc 22320

tttgccaaac cacagtcagc tagagttccc cttaccttac aggattttta agtttttgtt 22380

ttacatttat gtctgtgatt cattttaagt taacttttat gtgaaagatg taagatctat 22440

gtctggaatt tctctttttt tttgagatgc agtctcgctc tgtcgccagg ctagagtgca 22500

gtggcgtgtg atctcggctc actgcaacct ctgactccct ggttcaaatg attctcctgc 22560

ctcagcctcc tgagtagcac acgccaccat gcccagctaa gttttgtttt ttagtagaga 22620

cgggatttca ccatgttgac ctggatggtc ttgatctcct gacctcgtga tccgcccgcc 22680

tcagcctccc aaagtgctgg gattacaggc atgagccacc acgccctgcc gggcttaacc 22740

atttttaagt gtacagttca gtagtgttaa gcacattcac attgcaaaca atctctacaa 22800

gtttttcaaa aaaactgaaa aacttgcaaa actgaaactt tatacccact aagtggtaac 22860

tccccattct agtggttacc ctagcccctg gtaaccacca ttctcctttc tgtttctatg 22920

aatttgacta ctctgggaac cttagataag ggaaatcata cagttcttgt ttttttgtgg 22980

ctagcttctt tcacagcatg atgtctaagg ttcatcccca tagtaccatg tgatcctaat 23040

gtttttaaac ctccacagca acactttcaa gttagatttc acattttaca ggtgagaaaa 23100

tggagactca aaaagaaaaa gcaattgtcc ataggtagtg tcatgggttg acactagctt 23160

tgaaggttgg tccccacctc caaagacatg cccaagtccc aagtcccagt accgtgaatg 23220

tggtgttatg tggaaatagg tctttgcaga tgtaattaag ttatggatct cgatatgaaa 23280

tcttcctgag tttggggtgg actctaaatt ttacgactga tgtcctcata agagaaggga 23340

gggggaggtc aggcgcagtg gctcacacct gtaatcccag cactttggga ggctgaggcg 23400

ggcagatcac ctgaggtcgg gagtttgagn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 23460

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 23520

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 23580

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 23640

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 23700

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 23760

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 23820

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 23880

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 23940

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 24000

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 24060

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 24120

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 24180

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 24240

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 24300

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 24360

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 24420

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 24480

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 24540

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 24600

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 24660

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 24720

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 24780

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnng atggagtctt gctctgtcac ccaggctgga 24840

gtgcagtggt gcaatctcat ctcactgcaa cctccacctc ctgggttcaa gcgattcttc 24900

tccctcagcc tcctgagcag ctggagctac aggcatgcgc caccacgctc agctaatttt 24960

tgtatttttt gtagagatgg agtttcacca tattggccag gctggtctca aactcctgac 25020

ctcaagtgat ccacccacct tggcctccct aagtgttggg attacatcca tgagccgctg 25080

cgcccggcct ataattcttt atgtacattg ttagattcag tttgctagta ttttatttag 25140

catttgtctg tgttcatgag aggtattgtt ctgtagtttt ctttggtttc ttttctgtct 25200

agtttagggt aatgctggcc tcatagaata ggttaggaag tacttcctct gcttctgttt 25260

ctgaaagaga attgagataa tatctttttt tttgagatgg aatcttgctc tgtcatctag 25320

gctggagtat agtggtgcca tcttggctca ctgcaacctc tgcctcccag gttcaagtgc 25380

ttctcctgcc tcagtctcct gagtaggtgg aattacaggc atgcaccacc atgcctggct 25440

aatttttgta tttttagtag agatggggtt tcactgtgtg ggccaggctg gccttgaact 25500

tctgatctca ggtgatccgc ctgccttgtc ctcccaatgt gctaggatta caggcatgag 25560

tcactgcgcc tggcctgaga taatatctaa aacagtttgg tagaattcac cagtgaaccc 25620

atctgggcct ggtgcctttt gctttagaag attattgatt attgattcaa tttccttaat 25680

agataaaggt acattgagat tgtcttttct tcttgggtaa gttttaatac attgtgtctt 25740

tcaagaaatt gttccatttc atctaggtta tcaaatttgt ggattagagt ccttcataat 25800

atttctttgt tttgcttttg atgtccacag gtttagaagt gatggccctt tttcattttt 25860

tctattagca atttgtgtct ttgccttttt tttttctttc ttaatctggc tagaagctta 25920

tcaattttgt tgatcttttc aaagaaccag tttttggttt cactgatttt tctctgttaa 25980

ttttgttttc agtttaattg atttctgttg taattggttt tcttctgctc actttggatt 26040

tttttttagt tttcctagaa aactaagttt ttaagtgaaa actgagatta ttgattttta 26100

gatctttttt gtaatgttta tagttaatgc tatacaattt cctgtaagca ctgctttctc 26160

tgtatcttac aaattttgat aagtcatatt ttcattttca tttagttaga catatctctt 26220

gagacttctt tgatccatct gttatttaga agtgtggtgt ttaatctcca agtatgtatt 26280

ttgggatttt ctggctatct ttctgctatt gatttctagt ttaattacat gtggtcttag 26340

agcatacctt gtttgctttc tattcttttc aatttgttaa ggtgttcttt gtggctcaga 26400

agttggtcta cttttttttt tttttttttt tttttaaaga aaaactggct agatgcagtg 26460

gcttatgcct gtactcccag cactttggga ggcctaaatg ggaggatcac ttgaggtcag 26520

gagtttgaga ccagcctggg caaaattttt aaaagattag ttgggtatgg tggcatatac 26580

ctgtgtatgg ctgaagtggg aggattgctt gagccctgga ggttgagact acattgaact 26640

atgatcacat cactgtactt cagcctgggc aacagagtga aactttgttc tctcttgaaa 26700

agaaaaaaat agttgatgac ataaagttca ttcatctttt ttgtatgtga cttcaaaata 26760

actactgatg gttaaaaaaa aaatcagaat gatgcagccc aagtgtccat caatggatga 26820

atagataaac aatatgtggt gtgtgaatac aatggactac tattattcag ccttaaaaaa 26880

taagaaaatt ctgacactgc tgtaacatgg atgaaccttc agctcgttat gctaaatgaa 26940

aaaaaccaga cgcaaaagga caaatattgc atgattgcac ttatatgagg tgtctggagt 27000

ataaaagtca tagaaacagt aattcaataa ttagaataat gattgccagg ggctctgggg 27060

aggagggaat gaggaattca tgtttaatgc atacagagtt tcatttggaa aagattaaaa 27120

agttacggag gtggatggtg gtgagggttg cacaacagtg tgaatgtact taataccact 27180

gaattgtaca cttaaaaatg attaaaatgg tacattttat gttacatata ttttacaaca 27240

acttttacag atggaaaaaa tttattaaaa aacatcagga tggtgttgac agtgaaaagg 27300

ttaaagagtt actttaaaaa tttactttat tccggccagg tgccgtgact cacacctgta 27360

atcccagcat tttgggaggc cgaggtggac agatcacctg aggtcgggag ttcgagacca 27420

gcctgaccaa catggagaaa ccccatctct actaaaaata caaaattagc cgggcgtggt 27480

ggtgcatgcc tgcagtccca gctactcggg aggctgaggc aggagaattg cttgaactcg 27540

agtggcggag gttgcagtga gccaagatct cgccattaca ctccagcctg ggcaacaaga 27600

gcgcaactcc atctcaaaaa aaaaaatttt ttttaatttt attccaaata tttatattta 27660

ctttggggct tatgtgacca gtttaatttt catttgtaat tgacttgata gaatacacta 27720

tgttcagtta agattcctta tggtgtgatg aggaatagga attttatgta agtaagccca 27780

aaattgtatc agattaatct gatatttgca gaagatattc atgcattaat gtaaggacca 27840

ctctgcttat tcatttgact gatttgtagc aacatggtta gaaatcatca aggtgtttga 27900

gatcaaagga tcatcagagg tcatttactc taatcctttc tttaaaaaat taataacttg 27960

agcctcagag aagttaaatg atattaccaa gttctgctgt tagtatagtg actttatctt 28020

tacctgaagc cagggcttct tagccctagt ctgtaatgtg tcctagtatg cctgtggaat 28080

ctggtcctat cagcccaagt ctgttaaatc aaataaaacc agggcttggt gcttcacctt 28140

gtcttctacc ataccactgg gtttcctgtg gaccatgcag ataacgatga tgggctcagt 28200

tggcttgata gtgataactc ctaaagcagc tgcttctaag tgtggttctc aatctgagga 28260

agttaaaaaa aattttagtg actagaaccc acttctcagc tactcttact aaataaatct 28320

gtaggggagt gatagttttc aatttttttt tttttttttt tttttttgag atggagtctc 28380

actctgttgc ccaggctgga gtgcaatggt gcgatctcag ctccctgcaa cctctgcctc 28440

ccagcctcaa gcgattcttc tgcctcaacc tcctgagtag ctgggattac aggtgcgtgc 28500

caccatgcct ggctaatttt tgtattttta gtagagatgg ggtttcaccg tgttggtcag 28560

gctggtctcg agctcctaac cttgtgatct gcctgcctca gcctcccaaa gtgctgggat 28620

tacaggcatg agccactgcg cccggccttc acatattttt tgaaataata ggccagttgc 28680

ggtggttcgt gcctgtaatc tcagcacttt gggaggccga ggtgggtggg tcacttgagg 28740

ccaagaattc aaggccactc tggccaacgt ggtgaaaccc tgtttctact gaaaatacaa 28800

aaaattagcc gggtatgatg gcatgtgctt gtggtcccag ctactctgga agctgaagcg 28860

tgagaatcgc tttaacttag gaggcagagg ttgcagtgag gcgagattgc gcccctgcgc 28920

tccagcctgg gtgacagagc aagactccat ctcatttaaa aaaaaaaaaa aaaaatcata 28980

ggcagtaaag gttgagaact gctgcccaaa ggacctatta aactatagat tcccaaacct 29040

ggccaattat caaaatccct caagaagggg caatggggtc taagggaccc cactggaaga 29100

gattagtagt ccaagagtga gatgaactgt tggaagtcct cagacttcca aactattaga 29160

atagttttgc ttcctcaaaa tagagtagtt ttgcttcctc actaattttt ctgtattgat 29220

tagaaccgta acaagtgaat taaacaacta caaaatagtt atgtgggcaa cagacattat 29280

tgtaatgaag tgaagtttgg ctcaggcctt ggaacacaat tgcgttttgg attaaaagta 29340

aaaatattta ttaaatcatg tgagattatg tgtaagtttt aaaaaattgg tcttatacaa 29400

aagtgttggg ggtttttttt tttttttttg gctgaatttg tttttaagca agacagaata 29460

tttatattgt tggagagtca cagaggaggt gtgtttgtgg atttaaatgt ggagacagtg 29520

tgccttgagt gccctttatc agtctgattc gagccactga taatcatgga tttgaactac 29580

cgccccccac cccctgcgcc tagatagggt ctccctctgt tgcctaggct gcggtgcagt 29640

ggtgggatct cggctcgctg caacctctgg cttagcctct tggagtagct gggactacag 29700

gcacacaaca ccatacccag ctattgtttt ttttgtttgt tttctttgtt tttttttttt 29760

tttttttttt atagagacag ggtttcacca tgttgctcag gctggtcttg aactcctgag 29820

ctcaagcaac ccacctgtct cggccttcca gagtgctggg attacaaggc ctgagctacc 29880

atgcccagct ttcacttcat ttaaaaacca tagtttttaa aatccacagt cctactgacg 29940

aacacagagg ttgtttccag tgttttcatt tgcagtattg cagtgattgt ttttgcacat 30000

gcctccttat gcacatgtgc tgtggcttct gggacagaga atggacatat taagtgtttt 30060

attgatcctg ctaaattgtc cttcagccaa actgctgcag aggtgataga gatgaggtgg 30120

gtactcagga gaattgtgcc cagtgcttgt gtgctggttg ctgacctgga aacattttat 30180

taaaaatgct cgattaggtt agtgatgtaa agatgattac caggtgatag taaccagaat 30240

aattgtgtca aaacatcaag aattatcaag agatgccagg catggtggct cacgcctgta 30300

atcgcagcac tttaggaggc caaggtgggc agattgcttg agctcaggag ttcaagacca 30360

gcctgggcaa catggtgaaa ccctgtctct accaaaaata caaaaatttg ctggatgcag 30420

tggtatgtgc atgtggtctc agctattcag taggctgaga cgggatgatc acttgagcct 30480

ggaaggcaga ggttgcagtg agccgagaca atactgcagc ccgggcaaca gagtgaaacc 30540

ctgccttaaa aaaaaaagag aaaaagaatc atcaagagaa aacttaattt gatgtgttct 30600

gtgttttctt tggtgcttcc tgtcagtgtt agaaactgta ggttatatat ttaataattt 30660

ttctcctgta tttgttcaac ttgactataa aatattaact ccaaatgcct agaatttcaa 30720

aacacctctt cattataaag tatcagctat ttctgagtcc ccttaagctc atagtattgt 30780

gtcattgtaa aagatctgtt gtgaaaaata atttttgtca acatgaaagg tcttaatgtg 30840

tctcccagtt tacattttac atggtctttt ccgtgtattt ttatagttga catatatagc 30900

tttttttgta aatatacttt cctatatgaa catgccaagg tttacttaag cattctctta 30960

ttcttggaca tctaaattgc ttcttatttt ctattgtaaa taaagtgcta gaagcttcct 31020

tcctgaaaag ttatttactg ttcagctagt atttccatct gtgttcctca aaataagatt 31080

actgagattc atgtatgttg ccagaaagat tgtgaggttt aacagtgaat gaggaaaact 31140

tttaacactt aaggtctctc aagtacagca agttttatca ttttactttt tttttgagat 31200

aaggtcttgc taagttgcct aggccagtct caaactgctg ggctcaagca atccttctgc 31260

ttcagactcc ggagtagctg ggattatagg tgtgcagcac cacacccggc tttcttgtat 31320

tattattatt attatttatt tatttatttt tgaggtggag tttcactctt gtcacccagg 31380

ctgtagtgca atgacccgat gtcggctcac tgcagcctcc atctcccagg ttcaaatgat 31440

tctcctgcct cagcctccca agtagctggg attataggca tgcgccacca cacccaccta 31500

atttttctat ttttagtaga gacagggttc ctccatgttg gtcaggctgg tctcgaactc 31560

ccgacctcaa gtgatatacc cgcctgagcc tcccaaagtg ctgggattac aggtgtgtgc 31620

caccgcgcct gtccgctttc ttgtattatt tttatcttgc tgtagtggtt gtaggatttt 31680

tgcctggtgt gttcattgga gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt 31740

gtgttttgag atgtatgact gtgttggttg tgttgtcatg ctttgaaggt tcattcatgt 31800

gctcatctat ttttctcatt atacttagtc acttaaaaac ctcttttatt tggatttcta 31860

atttttacag ttcctgtttt attaatcacc ttcttatctg aaagtgaagt attgaattag 31920

aaatttgtgt gtccctgatc agaagatcac gtacacagga acaagataag ttgagggatt 31980

tagcagttcc agaaatgggc atttgtgtct tccagtggag aagcatctgc aaaagaattg 32040

tgcagatttg gccgggcacg gtagctcatg cctgtaatcc cagcactttg ggaggccgag 32100

gcgggcagat cacctgacgt caggagtttg agaccagcct ggccaacatg gtgaaacccc 32160

gtctccacta aaaatacaaa attagccagg cgtggtggcg ggcgcctgta atcccagctg 32220

cttgggagga tgaggcagga aaatcacttg aacccatgat gcggtggttg cagtgagcca 32280

agatcgcacc attgcacacc attgcactcc agcctgggca acagagtgag actccatctc 32340

aaaagaaaaa aaaaaaaaat catgcagatc tatttaactt tccataaagt gagacagaac 32400

tccgtaagtt agggtaaatt taaggacatg taatgtgctc attatgttat taggaaatta 32460

atggtgaaaa gggtgttttg gcctcgtgtg gcttcttgaa gatgacctgt gaaaacagca 32520

aggcctggaa gggaactgaa ttgggcagat gcagatttgt ggactctagt gaactatgga 32580

gaaacaatta ggactccagg atgagatctt cttaggttgg tgcagaagta attacagttt 32640

tggactgtga attttaaatc attataacta ggcttaaaca catctttatt aatcaaaata 32700

ggaaccatta cagtcaacac attttcacca acaagaaata agtttgtttc ttcctgcagc 32760

acaaaaatcc gtgcttcagg attcaacaaa ctgttggaaa gcattttctg catcctgctg 32820

gttgtggaaa tgttttccct gcaaaaagtt gttgagatgc ttcaagaagt ggtagttggt 32880

tggcaagagg tcagatgagt atggtgaatg aagcaaaatt ttgtagccca attcattcaa 32940

cttttgaaac gttgtgtgac gtgaggccaa acgttgtcat ggagaagaat tgggcccttt 33000

ctgttgacca atgccggctg caggtgtagc agtttccgga gcatctcatt gatttgctaa 33060

gcatacttct cagaggtaat ggttttgcca ggattcagaa agccgtactg gatcagacca 33120

gcagcagacc agcagcagac caccaaacag tgaccatgac cttttttttt tttggtgcaa 33180

atttggcttt gggaagtgtt ttagagctgc ttcttggtcc agccactgaa ctggtcatcg 33240

ccagttgttg tataaaatct actttttgtc gcacatcaca atccaattga gaaatggttc 33300

gttgttgtgt agaataagag aagacaacac ttcaaagtga tgattttttt ttttaaattt 33360

ttgctcagct cctgaggcac ctacttttca agctttaaat aagtagtgac cctgggattc 33420

ctagatccct tgtgggtcct gatgtaatgt ggtctgcaga tgttttcagt attcataaag 33480

gtgaacaatt tgcctgttaa ctaaaatatg aagttgtgtt ttgggtttgt gtgggtcatc 33540

cattatcata acgtctgagt cttcttttta ttgacttaga gtcttccagt cctcttattt 33600

tgcttggtgg tagcatgtac aagatagaag tttaggcaca ataatctatt cagtggctgt 33660

aatagcagct tgtcctgcct ggtttttttt gtttttgttt ttttgtaata gcattgagga 33720

gatataattc acccatttaa agcaggtgaa ttatatattt tatgttttaa tgtattccta 33780

gagttgtgca accatcacca gagtaagtta tagaacattt tcatcaaccc aaaaagaaac 33840

tttgttttca ttaatcgttc ctcctcattt ctcccctaaa ctcccagcac taggcaacca 33900

tcagaatact ttttgtctcc acagatttga ctgttttgga catttcatat taatggaatg 33960

tacgatacag tagtataata cattaatttt ggaaggccaa agttaatggc cttcgatgtc 34020

tccctttttt cacttagagt aatgtcttcc aggtccatct gtgttgtagc ctgtatcatt 34080

actttatcct ttatgtggct gagtaatatt ccattgtatg gttgtaccat gttttgttta 34140

ttcatcagct gatggacatt taggttgttt tccattgact attaagaata atgctgccat 34200

catgcttgag tttttttttt tttattttag gggtgggtgg tgggcagagg gcacagtctc 34260

gctctgttac gcaggctggc gtgcagtggt gcgatctcgg ctcaccgcag cctcctctac 34320

cccctgggtt ctagtgattc ttgtgcctca ggctcctgag tattatgctg cagtttttat 34380

gcgagcatac attttcagtt cttttgggtc aatatctagg agtatcccca cttttggatc 34440

tgagtgttaa ttgagcctgt tgtgttctca cattccctgt acttacatgg aaatagtgct 34500

ttgcctaaaa agaaaaacaa aagacctaat tgcgcaggcg agtgagagag aaagagagag 34560

agagagaaag agagagagag agagagagag agagagagag agagacacgc tagggttatt 34620

tccaccctga tactctttgt gtagtcttgg tatgactagc aaagaagcaa gctccaagtt 34680

gtaatttgct tccaagtttc tggcttctgt gggaatttct gcatcttagt aatgacaatt 34740

ttcagttact tgcagtaagt aaattatcag ccagtcttac tctgtattac tagtctagga 34800

ggagtttact tgtatattga gagaaatgct gcagctttta ccttacttct aatggggatt 34860

aatgcttact taacttaccg tttcggaggc aaataaaaag tgtaggacca attatggtct 34920

tgaagtgaga gagaagtctg gctagtgaat ggtgattggc aactccagtt gactgttcat 34980

ggcatcttag atctgtgagg agagaggagg gaaggaaagt tcaagctggt ctttatggta 35040

agttctggaa catttccctg tgtcagtggg tcatctgttc attcactgtg taaaatggct 35100

gaggaaagtt ttcattttca tacttcttca ttgtgtaaac ctttgatttt tagtgatttc 35160

agagtttgtt tttataatta tttaaacatg tgaagaggat acagagtaac atatcgaacc 35220

tctggttatc ttccactggg atttgacata tttgagttcc ttttcttcct tcttccttcc 35280

ctccctccct ctctcttttc ttaaggaatg caactactca gattcacctg cataccgttg 35340

gcatacctct cacttcctca gaggtgacca gtcctcagag caaatgtgtg ccctttccat 35400

ccgcgctttt atgctctcat ctatgtttac atctattagt acactattgt ctatattttt 35460

aaacattaca taaatggtgt aatttttact tttaattctg tagtggtatt tctcaaatta 35520

agttctgcat aaaacatttt tatagatatc cagtgttagc ttaacgtttt tcttattgtg 35580

gtaaaatata cataagataa aatttaccat ttttgccatt tttaagtata caagtcagca 35640

gcattaagta cattcacagt gtagtataac catcaccatt gtccattgct ggaacttttc 35700

ctcatcctaa acagaaactc tatactcatt aaacaatagt ttatcactcc ttccctgcaa 35760

ctagatgctg gcagtcacca ttctactttc tgtctctatc aatttgcctg ttccatctaa 35820

gtggaatcct acatatttgt cgctttgttt ctggcttttt ttttcttctt gtgatgcttt 35880

gttttaatta tgtttctggc tttcttcatc tagcaggctg attccaaggt tcgtccatgt 35940

ggtagcttgt atcactttaa ttcttttaga gataattaat attatgttgt ctgtatatgc 36000

cacattttgt tttttcattc aaccttgatg gacatttgga ttgtttcccc cctttaacta 36060

ttgtgaataa tactgctatg aacattgatg gccaaatatt tgtttgaatc tctgatttca 36120

gttcttttgg ttctatacct aggagtggaa ttgctggatc atatgataat tctatgttta 36180

actctttgag ggatggccag acttttccac catagctaaa tcattttacc ttcccacaag 36240

caaagttcaa gggctctagt ctctccccat catgtccttt gcactttttt tttttttttt 36300

ttgaggcaga gtctcactct gttgcccagg ctggagagta gtggcacgat ctttcctgac 36360

ctcaagtggc ccctgctttg gcctcccaaa gtgctaggat tataggtgtg ggccactgca 36420

ctctgccaat ttttaaattt taattttcat ttatttttcg ttttttcatt tttagttttt 36480

tttatttttt gaagggataa ggtctcattt tgttgcccag gctggtcttg aactcctgac 36540

ttcaagcaat cctcctacct cggcctctca gagtgctgag attgtaggtg taagcccctg 36600

cacctggcct ttactctctt gatagtgtcc tttgatgcac aaaagctttc aattttgatg 36660

aagtctattt tttctcttgt tacctgtaca tttggtgtca tatatctaag agaccattgc 36720

caaatgcaat gtcgtgaagc tttccctcag tgttttcttt ccatagtttt atgattttag 36780

ctcctaagtt taggtctttg atccattttg agttaatttt tgtatacagt ttaagagtca 36840

gacttgagac tctgggcgca gtggctcact tctgtaatcc cagtactttg ggaggccgag 36900

gtgggtggat cacctgaggt caggagtttg agaccagcct ggccaacatg ccaaaacccc 36960

gtctctagta aaaatacaat aattagccag gcatggtgat gcatacctgt ggtcccagct 37020

actcgggagg ctgggcagga gaatcgcttg aacccgggag gtggtggttg cagtgagctg 37080

agattgtgcc actgcactct agcctgggcg acaaaagcga gtctccatct ggggaaaaaa 37140

caaaaaaaaa gtcaaacttg agtcttttgc ctatggatat ccagttttcc catcactatt 37200

tgttgaaaag actatccttt ctcaactgtg aatggtcttg gtatcctagc tgaagttatt 37260

tttattacta tgttacttag gaatgcacat aaggccgggc acagtggctc atgcttgtaa 37320

ttgcagcact ttaggaggtc aaggtgggag gattccctga gccgaggagt ttgagaccag 37380

cctgggcaat atagcagcaa gaccccatct ctatatttta aaaaaagaag aagaaaaaaa 37440

aaacccactc tgacacataa ttatttaaac ttgtatgcat tcttttcttt ctttattttt 37500

aaaaaattga gatagcagct tactctgttg cccaggctgg tctcgaactc ctgggctcaa 37560

gcagttcctc ttaccttggc ctgaagtgct gagatgacag gtgtgagcca ctacatctgg 37620

cctgcttaca gattataaaa agaaaataag tttacaaatt aaagacagat aaaatgacag 37680

aatcagtaaa attaaaattt cttttatgga gctgatgatg tttatcccaa ttggtcctct 37740

cattgtgaat atggtattgt tgctgtggca gatttggagg ctttggcaat ggcttctatt 37800

accttgccat gaggtaactc agttccctca ttacttttct ctgagaactg taaaaccttg 37860

gaggggtgcc ctctgccctt cgcttggcat gtgtattatg cggggatcag gtcttactct 37920

gttcttgatt gttagtacaa acgagttaaa atcctgttgt ttggccttag cctgatggta 37980

aacacaacag cacacatggg ctgtgaaatc cctgggcagc tctgtgtttc tagggaagca 38040

tctcgatgat ccagaacagg cttatactga tgttttagtg taattttgaa atgaaaacac 38100

tgcatttaaa aaattctcat agagaatgta tagacctgga gaagtgttag cagacccagt 38160

ttaagacatg tctcaatatt acggaacatt gctttattcc ctgtcctgct tgtacattta 38220

attttttcac ccacttttaa acaacttggg tactgtggcc tgtgcctgta ttcccagcta 38280

ctagggaggc tgaggcagga agattgcttg agcacaggac ttcgagggct atagtgagct 38340

gtgtttgtgc ctgtgaatag ccattgtgct ccagcctggg caacatagca agaccctgat 38400

accctgggtt tttaaaaaac aaaacaagat acatgctgac atttctagtt tggcaggcag 38460

agcttgttct gctccccacc ctcccttttc ctatagtaac catttatagg acatctcact 38520

gttgtctact ctgtgttgcc tctgcttccc tacgtggtag atctaggaat cttaggattt 38580

cttagtttta gctggtgatc catatatttt tcttaattcc attgtaactt cagcttttct 38640

tattgcttgt aagaaggctg tttccattga atacaaacaa aataaaagct tttatttgta 38700

atcttagaga taggatgttt gtatttaaaa ataattgtgc tgtcaaaatt ctgtcaagtt 38760

ggcttctacc atattagttt tttttttttt ttatgtgatt tatatgaccc tggagtacct 38820

tgtcttctca ctgttaaatt ctcaactgag ttgtccctat ttaaagtgtg agactgtgcc 38880

agtttgattt taaaatattg caagtgcgtt atggcaagat aaagctgcaa agaaagaacc 38940

ttcatgttcc tttgattata aatgcttttg gcacttgttt ctactggaag ataacttttt 39000

cctgatgtgt ttttgaggaa agaacctcca acgctctaga caggtctggg ggcaaatgac 39060

taaaacatca actgaggccc tgggctgtct ccatgaggat atcccctcta ttgtctctga 39120

aatgtcccag catgtggtgc atttcttgtt agtgtggact cctctgtata taacacccat 39180

tatttatgtt ctgtgcataa catgaaatag tgccctaatg caattccagg atgtaattca 39240

acatttctat aaaaatacaa tgtttttgta catttgcatc aaacaataac cagataatta 39300

tatttgttaa gaaaatagta tttttggctg ggtttgatag ctcacgtaat cccagcactt 39360

tgggaggctg aggcgggtgg atcacttgag gtcaggagtt caagaccagc ctggccaaca 39420

tggtgaaacc ccatctctac taaaaatgca aaattagcca ggcatagtgg tgcatgcctg 39480

taatcctggc tgctcaggag actgaggcag gagaattgct tgaactcagg aaggggagat 39540

tgcagtgagc tgagattgtg ccactgctct gtagcctagg caacagagtg agactctgtt 39600

tcaaaaaaaa gaaaaaagaa agaaagaaag aaaatagtat ttttggtatt tgttttcaca 39660

aactagagca tttatgtgaa ataacattgc tagtattgat attataccat agtataatac 39720

ttagttcttc aaatgatgta tctctgctga tcagctacat gatatctacg tgagttgttg 39780

cgtgtttttt ctcttttttt aaagagcagt gcatttttga atgcttttga aaaattgcag 39840

taaaatacat aaacgtaaca tttaccttgt aaccatttta attggtacaa ttcagtgaca 39900

ttaagtacag tcccagtgtt gtgcaaccac tgttactgtc tagtttcaga atgttttagc 39960

tccaaatggg taccctgtac ctgttgaaca ttcagtccta gtggcccaat aatcttcttt 40020

atgtctgtat agatttgcct gttctgcatg ttttatataa atggaatcat gtcttttttg 40080

tctggcttct tttacttagc atagtatttt caaggttcat ctacgttgca gcatgtttca 40140

atacttcgtt cctttttatg tccattatga atataccaca tttcgttaat gacagttctt 40200

tggggtagct acattttaaa acattatagt aaaatacaca tggcatacga tttactatct 40260

taaccacgta agcctgcagt tcagtggcat taaatacatt cacattattg tacaattatc 40320

accaccatct gtttccagaa atttttcatc tcctccaatt gaaactctgt atacattaaa 40380

catgaactct ccattctccc cttcctccag cccttagcag ccaccattct acatttctat 40440

ctttctgaca gattttacta ctctaggtac ctgacataag ttaaatcaac cagtatttat 40500

ccttttgtga ccagcttatt tcattagctt aatgtcctca agattcatcc atgttgtagc 40560

atatatcaga attactttcc ttttaaggtt gaataatatt ccattgtatg tatatgtcac 40620

aattcgtttc tccatttatc catcactgga catttgggtt gcttccacgt atcgcctatc 40680

ttgagtcatg ttgctatagc tgtacgagta tctatttgag tccccgctat caattctttg 40740

agtatatgcc cagaagtgga attgctggat catatggtaa ttccgtgtct ggtgtttttg 40800

aggaactgcc atgctgtttt ccacacagct gtatcattat atgttccctc cggcaatgta 40860

tgagggctct aagttcttca catctttgct aacacttagt attttttttt ttatggaata 40920

gccatcctaa tggctacttt aaaaatatat ttaactttat ttatttattt ttaaattttt 40980

ttatagagat gccatcttac tatgttgccc aggctggtca tgaactcctg ggctcaagca 41040

atcctcctgc ctcagcctcc caaagtgttc agattacagg aatgagccac catgcccagc 41100

ccaaatttaa atatgtaact aaacacatag cagctaacac caagccttta aaaatatcat 41160

taataggctg ggtgcagtgg ctcatgcctg taatcccagc actttgggag gccgaggtgg 41220

gcagatcacc tgaggttggg agttcaagac cagcctgacc aacatggaga aaccctgtct 41280

ctactactaa aagtacaaaa ttagctgggc atggtggcac atgcctgtaa tcccagctac 41340

tagggaggct gaggcaggag aattgcttga acctgggagg cagaggttgt ggtgagccga 41400

gattgcgcca ttgcactcta gcctgggcaa caagagcaaa actccatctc gcaaaataaa 41460

tatctgtatc tatatctata tatcgaactt cttaccccag tgatccaccc acctcggcct 41520

cccaaagcac tggaattaca ggcatgagcc accacacccg gcctattaat tatatatgca 41580

cctataatcc caactactcg ggaagctgag gctggagagt ggcttgaacc tgggaggtgg 41640

aggctacagt gagctgagct cacactccag cctgggtgac agagcaagac tctgtctcag 41700

aaaaaaaagt cattaataaa tgtgatcttt ttttttcctg tacaagttgt caaggaagta 41760

tgaccttctt aattgaccct ttgacatgaa ctgggatgag atcgtggagg atgttgagga 41820

gacagttgtt accatagtgc gcttctaaaa actaattcta tagatttctt tacaaaaatt 41880

tgtttaaatt attatgagta cacaataggt gcatctatag atttcattac cctcaaataa 41940

atgtacaagg caatgcagag aaatacatag tgtaacttgg tagacttgac ctatcaagtt 42000

actcttgaat atgttatgaa gcctgtgtat tactgggggc agcaaacttc tcctgttatg 42060

atagttgttt tcagctttgt tgaatctgtg gtctctgtct taactacaac tgagaaagca 42120

gccatcgaca atatgtagat gaatgtacat gactctattg taataaaact gtgtacactg 42180

taatttgaat tgcacataat tttcatgtgt cccctgtata attcttcttt tgacttcttt 42240

tcaaccatta aaaaatgtaa aaacaggcat ggtggctcat gcttgtaatc ccagcacttt 42300

gggaggctgg gtggattgct tgagcccagg agcttgagat cagctttagc aatgtgacga 42360

aaccctgtct ctacaaaaaa ttagctgggc atggtggcat gtgcctgtgg tcgcacctac 42420

tcgggaggct gaggtgggag gattgcctga gcccgagaaa gtcaaggcta cagtgatttg 42480

tgccactgca ctctagccta ggtgacagag tgagaccctg tctcagtgaa tgaatgaata 42540

cattattagc ttgtggacta tacaaaaatt agaggctgga ggtgagctgg gtatggccat 42600

tgggcatggt ttactgacct ctggtagaga ggaattagta tatgttaaag gtggtggaac 42660

tgtctgatac ttgcgttctt ttagaaatac tttggagtta gctttttggt tcaggcaaag 42720

gaccaaagag ttaggagagt caggctggta aagaggagtg gtgggcccat agcaacaggt 42780

cctggagtct ttaagaggag gtgtgtctca tgtgacattg gttggttgga caaaagcctg 42840

gcatgttgtc accttccata ataagtgttt gtgggaatgt aggtaatgag aaggaggagt 42900

aaagggttcc tgaaggatga ggaggagggc tggtggctgc cataggaagt gatcaccatt 42960

ttggcggacc tgtcttagag taatgaccat catactctct cactccttgt gaactcatga 43020

agtcccatgg ctgctaaagc taaaggtcaa gtggggactt ctctgggcac tgggcttggc 43080

accccacaga gctgtggagt gggcattaat gtccctgtta tatagatgca gagactgaga 43140

atgaggactg ttggtaactt ttgagagggc actcagctag aaaagtctga gccaggatgt 43200

caagtcccat ggctttacct ctgtggtcct aatggttggt gtgttcaagt gagatccgtt 43260

ttttcatatt tggttttgat tattgatttt catgcatttt ttttcttttt tgagttagta 43320

tattctctct cttttctttt tttcttttct ttctttcttt ctttctttct ttctttttct 43380

ttctttcttt ctttctttct ttctttcttt ctttctttct ttctttcttt cttttctttc 43440

ttttctttct tttctttctt tctttttttt tttttttttt gtgagacaga atctcgctct 43500

gtcacccaga ctggagtgtg cagtggtaca atctcagttc actgcaacct ccacctctcg 43560

ggttcaagtg attctcccat ctcagcctcc gaagttgctg agattacagg cacctgccat 43620

catgcctggc tagtttttat atttttgtag agacagggtt tcaccgcgtt ggccaggctg 43680

gtcttgaact cctgacctca ggtgaaccac ctgcctctgc ctcccaaagt gctgtgattt 43740

ataggcatga gccactgtgc ctagccagta tttttttctt tctttctttt tctttttttc 43800

aggttcattg aatttgcttt gagacaggat cttgctctgt tgcgcaggct gaagcacagt 43860

ggtgcaatca tggctcactg gagcctcaat ttcctgggct caagcaatcc ttgcacctca 43920

gcacccctcc acccccacct actcctttcc cccaccagta gctggaacta caggcgccag 43980

ctaccgtgct tggctaattt tttaaatgtt tttatagact gggtttccct atgctgccca 44040

ggcttattaa ttgattttct gtgtgatctt agggaaatcg attatttccc ataaacattt 44100

tttaaattag aagttaaatt ctgcctagtt tgcctcacat gattattgtg gatgactgaa 44160

tcagagaaga ggtaagagct ctttgaaaaa tatgaagtac catacagaag ttagatgctt 44220

tgtcctggtg agacccctcc aaagcacagc taaggaagtg tggaaggcac tcttatcaca 44280

tcatatagct ttgaaagcct agcattgaaa gtatgaactt gattcttttg gagaaatcct 44340

ttggctctca gtgagtttac tttctattaa tgactatatt aagcggaatg gaaactgaaa 44400

gaggaaagag gaggaagtca gaattaaata ggaagagtaa gcccatagca gagtccagat 44460

ttagacccca agctacttgg aatgatactg gacaattatg ggtgtgttta atgattgccc 44520

tgagtcatga aaacaaaagg aggctttaaa ttatgtctgg cttagtaata tagcatattt 44580

tatcattatt caagttttag catgtaaaga ggaaaagtgt gcagtactta cacataccat 44640

tttctattag cgaaactaaa tgaggccgct ttaaaattat cagtgttcac agtatcttcc 44700

aaaagacatg taaatgtata aatgtataaa aaatatacat ataaatttta cagtttggtg 44760

agctatatag tagatctctt attttgtcca taggtcgtaa agatcttata ctgtatttag 44820

gaacaaatat aacttaagtg ggagtccttt acagggctaa taagtaagca ttattttgat 44880

aaagtgctgt gttgtctaca ctaggtatag tagaaatact cttggaatag taatcatccc 44940

aggccctact ttggagtgga agaaatagtc aatgtagaac tttatagtac attgtacgta 45000

gatgtgcctg ctaataactt ctgtagacag caaagtttaa gagaaattag gtggtaaata 45060

caacatatgt atctaaataa atttggtctg agagatttga taagatgaaa cagtacatag 45120

tccagaaaat ttttatactc aaagaattgt agaaaatatc ttaaatgttt tcagttttgt 45180

gtatatccag agaatatcat cctgtaatct gctggttggc aacccaatgg cagtattaga 45240

tgtatgtttt tattttgttt cgtttgctat ttgtttggtt aagagagtta cctaattagg 45300

agtgtggaaa aaaaaaaaag atttattata gtagtgggct tttgtttgac ttcagacatt 45360

tttgttgtta caacaatatt agtgtcttgt ttgtgaaatt tgtttaccgg gaagccaaat 45420

acttagaata acttttagtt tatcattatc atcatcatca tcatcatcat ctccatcatg 45480

aaaggaagaa gctaccaatg ttgctttatt ctgcaaacaa tataatagat gcttgttgaa 45540

agtatggagt gaaatcttaa atatatctgt taaaaagagt acaactggcc aggtgtggtg 45600

cctcatgcct gtaatccaag cactttggga ggccaaggcg ggcgaattgc ttgagccagg 45660

agtttgagac cagcctgggc aacatagtga aaccctgtct ctacaaaaaa aatagacaaa 45720

aattagctgg gtgtgatggc atacacctgt agtcccagct acagtggggc tgaggcaggg 45780

ggtattgcat gagcccagga agtaaaggct gcagtgagct atggtcgtgc cactgcactc 45840

cagtgtgggt aacagaatga gaccctgtct caaaaaaaaa aaaaaaatag tacaacttta 45900

agcaggatgt gggtacatga ctgtagtctc agctacttgg gaggctaagg caagagggtt 45960

acttgagccc agaagcttga tgctgcagtg agatgtgatt gtgccactgc cctccagcct 46020

ggggaccata gaaagatccc atctcttaaa gaaaaaaaaa acagagtaca acaactttgg 46080

taaacttgga atataaagat atttccttaa cctattaaag agctgataaa gagtggtact 46140

ttcaaaccag tacacattat gtgaaacact agaggcactt cccatttgtt aaaagaaaaa 46200

ccttagccaa attaaattta agttttgttt tttttttttt tgtttttttg tttttttgtt 46260

tcttgagaca gagtcttgct ttgtcaccca ggctggagtg cagtggtgca agcacagctc 46320

actgcaacct ccgccttctg ggttcaagtg attttcttgc ctcagcctcc tgagtagttg 46380

ggactacagg tgtgcaccac cacgcctggc taatttttgt attttttgta gacacgtggt 46440

tttgccatgt tgcccaggct ggtcttgaac tcctgggctc aaggaatctg cctgcctggg 46500

cctctgaaag tgctgggatt acagatgtga gccactatgc catttaacgg tttaattgag 46560

caaagaatga tttgcaaatt gggcagcctc ccgagccaga gtaggttcag agagactcca 46620

gcacagccat gtggtggaag aagatttatg gatggaaaaa ggaaagtgat gtatagaaaa 46680

gagaagtgag gtacagaaac agccggattg gttacagctc agaatttgcc tttttagaac 46740

acaagtagag gtttgaacag ttggccacct ttgattggcc aaaacccggt gattggcaca 46800

agagcaggtt ccagtctctt tacatctcca tttaggttat agttcactat ggatggaaaa 46860

acctgtagat caaacttaaa atacgtaagg agacagtttt aggctaaact tgatttaaca 46920

cattaaatcc ataacaagac aggatgcctg ccctcaccat gttatttgat cttattttag 46980

taattctagc caatgtagta gggcaagaaa actgcctgct tggttacaaa ataaacatgc 47040

aaaagtcaat atttgtaata tgtgacagaa aatataattt aaaaaagaag aagccgggca 47100

cggtggcccg tggctgtaat cctagcactt tgggaggcca acacaggtgg atctcttgaa 47160

ctcaggagtt caagaccatc ctaggcaaca tggaaaaccc cgtctccaca aaaaaattag 47220

ccaggtgcgg tggtgcgcgc ctgtagttcc agctgctttg gaggctgagg ttggaggatt 47280

gtttgagcct aggaagcaca ggttgtagtg agctgagatc atgccactgc actccagcct 47340

gggtgacaaa gtaagactct atctaaaaaa aaaaaaaaga aagaaagaaa aggaaagaaa 47400

aagaaaaaag aatttcactt actagagcat caaatcccta agataattta gaacaaagcc 47460

agaaaagtga agaaaataca aaaatcttta cagtgagttg cataaaaaaa aacaacttga 47520

agatgtcaga tcaactcatt aatgtgttga ttaatgtaat taaaatccca ctgttttttt 47580

tgtggggagg gtgggagagt cacttgttaa aatgattcta aagagcatct ggaagaataa 47640

acaggcaaga atagccaaga acattttgaa aactaaagat gagtttggaa gacgattggt 47700

tttgtactat caactactta tagattttac atgaatttta aagggtaatc tgagtcctcg 47760

aatagacaga aatagccata gatctgaaag aacacttaag acctgatcta gctatccgtg 47820

agagtatgta taatcaaagt ctttgtgtgt gaatcaggag tctttcaggt gcaaggtaaa 47880

taagctcata attgcttaag caaaggtggt atttgcttta gtgactccag agaaagctca 47940

agtgcctgtc tccccctgac tttgattctt tttggggttg gctccattct ctcctgttgc 48000

taatggcttc ctttgtgcag ccagaggaaa ggaggtgtgg ttttttgata cttccagtct 48060

tctattttta tagcttgaga tcaaagaggg aagtgacctt ccttagagtc agtgtgtaaa 48120

gtcctaagga agataccacg tggggtgctg gggccatgtg cccatccctg gcccatgacg 48180

atggggatgc tacactaact gggggccacc catggctgtt cctgccttga actgccaact 48240

ggctttgcag tgcagcttca ccagaatcac atggaatagt agggatagga attgtttccc 48300

aaagagagtg tgtggggtgg taaaattact agtgggggag taaggggaca ggccattggg 48360

cagactggag cagcatttac ttactcagtc attgagaaaa ggatggaaca ttcaataaag 48420

ggtgctggac acagtttgtg ctctaaaaat tttgtgtttc acctattaat ttatccctcc 48480

ccttagcccc tggcaaacac tggtctgttt actgtctcca tagttttgcc tttcccagaa 48540

cgtcatgccc ttggaatcat acagcaggta accttttcca gttggcttct tttatctagt 48600

aatgtgcatt taagattcct tcatgtcttt tcctggattg ataacccatt tctttttagt 48660

cctgaataat attccattgt atggttgtac cacagttgat ccattcacct actgaaggtc 48720

attttggctg cttccaagtt ttgataattt gaaaaaaaaa ttttgagaca gggtgtgatt 48780

gtgtttaaga tactggtctc ctgaacaact gagctcacgt gaacccctct cctcagcctc 48840

ctgggtaact gggattacag ctatacacca ccgtgcccag tgtgacaatt atgaataaag 48900

ctgctataaa cttctatgta ggtttttttg tgtttggaca ttggttttca gttcattatg 48960

gtgaatacca aggagtgcaa ttgctggatt atatggtaaa agtatgttta gtttgctaag 49020

aaactgccag ctgggtgtgg tggctcacgc ctgtaatcct agcataatgg gaggctgaga 49080

caggaggatc ccttgaagcc aggagtttga gactagcctg ggcaacatag tgagacctca 49140

tctctacaga aaatttaaaa attagctggt cgtggtctta tgtgtctata gtcctaactg 49200

cttgggaaac tgaggtggga ggatcacttg agcccaggag ctggaggtgg cagtaaactg 49260

tgatcatacc actgcactgc agcctgggtg acaaagcaag accctgactt taaaaaaaaa 49320

aaaaaaaaaa aatgagtcag agggtaagga agcaaaaata agtaaataaa taaatagaag 49380

ataaaagaaa aatctatctt tcaaagtggc cgtgccattt tgcattccta ccagcaatga 49440

atgagagtct ctgttgttgc acatcctcac cagcatttgg tggtgtcagt gttctggatt 49500

ttgaatattc tattaagtat ataatgctgt ctcacttgtt ttaatttcca attctttagt 49560

gatgtatgtc attaagcgtc tttttaatat gtttacttat catatatgta tcttctttag 49620

tgaggccttt gtttaggtct tctgcccatt tttaaaaatg ggtttatttt cttattgttg 49680

aatagtatga gttctttgtc tattttgaat acttgtcttt tgctttattt ttgtgttttt 49740

tttttatttt tatctttttg agacaagttc tcactctgtt gcccaggctg gagtgcagtg 49800

gcatgaacat ggctcactgc agcctcaact tcttccaggc tcaagcaatc ctcttgcctc 49860

agccttccga gtagctggga ccataggcgc acaccaccac accctgctaa tttgaaaaaa 49920

ttttttgcag aggcggggtc tcaccatatt acccaggctg gtcttgaact cctggcctca 49980

gtcaatcttc cagccctcag cctcccaaag tgctgattat aggcctgagc cacttagcct 50040

agcccagaat ttattttttt atttcttagt tttgaaaaaa tataggacct cataaaagtc 50100

agtctagatt tgtacacatt atgtttttgg tgtatatgta aatggattct ttgtgaatca 50160

atttggtttt gtttttttgc ttttaaaaat accagcactg ggctgggtgc tgttgctcat 50220

acctgtaatc ccagcacttt gggaggctga ggcaggtgga tcacctgagg tcaggagttt 50280

gagatcagcc tggccgacat ggtgaaacgc tgtctctact aaaaatacaa aaattagctg 50340

ggcgtggtgg cacatgtcag taatcccagc tactcaggag gctgaggcag gagaattgat 50400

tgaacttggg aggcggaggt tgcagtgctc caagattgcg ccactgcact ccagccttgg 50460

cgatagagca agactttgtc tcaaaaaaaa aaaaaaagaa aaaaaccgca gcagtggctg 50520

gccaaggtgg ctcacacctg taatcccagc actttgggag gccaaggcag gtagatctct 50580

tgcggtcagg aattcaagac cagcctagcg aacatggcga aaccccatct ctaccaaaaa 50640

tactaaaatt agccagatgt ggtagtgcac acctgtaatt ccagctgcct gggagactga 50700

ggcatgagaa tcacttgaac cctggaggca gaggttggag tgagccactg tattccagcc 50760

tgggtgacag agggagactc tatttaaaaa aaaaagaaaa aaaaggctgg atacagtggt 50820

gcacgcctgt aaccccagca ctttgggagg ctgaggtgct cagattgctt gagctcagga 50880

gtttgagacc agcctggaca acatagtgag acatcatctc ttaaaaaaaa aaaaaaatac 50940

ctgcacttgg tcaaaagatt tcaacagtgc agaaaaagaa agttgctata tcttttctcc 51000

aaattagtct tgtttctagt ttcattatcc aaataatcac tactaatagt taaaacattt 51060

taaatacaca ttgggagttt gtcctattta atataaatta tttattgagc aaataatcac 51120

tgctagtata ttttggatac tggaattttc atatgtaggg gtccttgaat gtaaggtgcc 51180

cctttggtag ttctgtgctt cttttacctg tactgtaaca tagggaaaga tgttacaaat 51240

ggttagtatc tattcttaaa caccagccct tccactaaag gtaaacaaca aataaatata 51300

taaatgaagt tttggtattg ggattacacg ggttaaacac atccatattt cattattaat 51360

atttaagaat ataacaaact tcttattggc atttggacct tgtagctagg gaaagattaa 51420

gctttgttta tttgtgcttt gttttttttc ttcactcaga tatttgaggg tttcccattt 51480

gaggaataca tttattaatc aagctttagt tgcaagatat ttgatcttag agaataccat 51540

caaccattct tctttaagct tcctaacttt acccaaatgt ggttggatct actcaagagt 51600

agtttgggta gttcagaaat tttattggaa ggggaaataa tttttgaccc aaatttgata 51660

aagcaactct tgagtaatga tttcttttct tgttctctct ttataatcag ttgaaagtag 51720

tagtaaggct gggtggcaaa agaaagaggc ctggggagaa tcgggtggtt ttcattatct 51780

cttttcatag cagctaagtg ggaagggacc aagaggaaat caactgaaaa accatccttc 51840

tgaaacattg gcctaaaaaa gtgtagtcca gaaattgagt gcaactggca gtggcattta 51900

aaaggaatgc tctaatttct aggaaagcag gcacgagtac ctcttaaaag aagaaaaaaa 51960

tgaaaactgt aatttaggac acacagacga gtatccattc cctgtacttt tttactctcg 52020

tgtcctaacc aaggaagggt taccatagca aatatggcat tccttagcca tgattcactg 52080

ttgtaaatgc ctgcagcatt cataaaagta agatatatgg gctctttctt tttccttttg 52140

aatccgtatt tctgtattta aatctgtatg tcaacatctg tattttctgt ctctcttgtt 52200

tttttaaatc ttgggagatg gtacaaatta tttaggggag tgaataagtt tcttgtctac 52260

aaatagagga gagagaaggc tttttgtctt tctgctttgg aactggagag cttcctattt 52320

aggcacggcc tttttcaagt gaccttgtat tgttatcagt actgtagaag gtaggcacat 52380

tgtacagact ttaaaatgta aagcttttag gcattccact tgtaaacctt ggctttttaa 52440

agaaaattac atgttcattg tgaatatttt cttatcgccc tatctctgtg cacatgcaga 52500

cttcctttgg ctacattctg aaaggtgtaa ttgtcttctt taaggacagt ggacatctat 52560

agttcttagg tcaaattgtc ctccttctgg ttttgtcagt tctcagccac actgtgtgag 52620

catccatttt cttggatcct ggtttggagc tcattttaag gaacatcacg tcccttttga 52680

gactatgtgg acatcagggt gggtagatgt tcccctgtga acagaaggtt cctccctaag 52740

gaggtgcttc tctgtgttga gtcttgcatc tgggcacaca gagcccaaag caggaagagt 52800

tgagtctgaa tagggaggcc tgtaagcctc actgctctgc cacggctagg cctggttggc 52860

catgctctag gagccctcag gaggctctga agtgattctg cctctgggaa ttttacagag 52920

gagctaatat ttgagatctc caaagctgag tgagagggtg attcttgaaa aggcaaggca 52980

tgcctcggtc cagttctgtg gggctgtcat agaagagggc tcggaagctc ttgtaagtga 53040

ggctggaaag gtaggcagtg ttaccataag gaggatggaa atgacacaga taggctaagg 53100

aaggggacct ctgtaatcat gcagcgatgg cctagaaaag ggacaggctc atggcaggga 53160

gaccagtttg gaggctgcca cagtgttcta ctgagagaga aaaagaatta aactcaaagc 53220

acggtcaggg aaggtggagg ggcaggatct gatttggaag tgttttgttt tttggtttcg 53280

ggtacaagga tttggaaacc tcttgactcc gtagatgaaa gaatatgaac caaggaagac 53340

tgaagtttcc actcagggaa gaaaacacag gagtaggaat cgatttaaga gaatggcagg 53400

cagttgtgtt ttgaacttgt ttagtgtgag gtgacatctt tgtagggatg tctagctggt 53460

agctgcaagt acaggaggct agatgtgtgc atgagtttct tggtaaagat ccatctgcag 53520

tctcctgaag atgtcactca gattgcactg ccatcacccc agggcccaag agaagacact 53580

cgcttctctt ggtgtctagg cgggtttgaa aaaaatcaaa cagtacaaaa tcatgcaaat 53640

tcagacctct actccacccc agaggaaagt cctgctagca gtttttgtgt attcttccag 53700

aaatctgcct tgcaacatgt ttgagtatat aaataatccc agaaaggatg ggccagacac 53760

tagcagaaac tcaccacaca cactgcgctg ggcatgcaga aacttcgcga aatatactgg 53820

tgtgtgctgt cactgcattc ctggatttgg gggtcttctg tgtccccagg tatcagtatt 53880

gcccacaggc tgaccactga gctccttcca cagccgactc acgtcaccct ctttcgaagt 53940

gtgtctgcaa agctagatta ttagattgtt tctgctttgt gttttcttta atgaattttt 54000

taatgatgaa gttcttgttt taaaaatata cagtggtaat taacatgtat gcatttttct 54060

taaaatgacc cccccagtcc ctcttcagat gtaatcactg ttaacagtat cgtatataga 54120

ccctgttctg tgtggggtgg gcagagggcc ggttagcggg tggaacatgc atactcacaa 54180

ccatattttt cacatgggaa aatataaagg tgacaacaaa tctcctggtc tgtaatctca 54240

tcaagcagac aataatcact atttgaaaag cggacaaata catgctgatt tttaaaaaaa 54300

attatagtag tacagaaaga tacaaaaaaa aaacaaagtt aaagtcttcc taactctcct 54360

gcctgtaccc tccactgggc aaaagtccct gtccctaagg taatatctgt tgacagttct 54420

ccttgcaata cagataggag catgttgtgt atctgcctct gtgtgtatgt gtttacatgt 54480

cttttttttt tttttttttt tgagacggag tcttgctctg tcatccaggc tggagtgcag 54540

tggcgtgatt tcagcatgct gtgacctccg cctcccgggt tcaagtgatt ctcatgcctc 54600

agcctcccga gtagctggga ttacaggcaa ccaccaccac acccagctaa tttttgtatt 54660

ttttgtagag atggggtttc accatgttgg ccaggctggt ctgaagctcc tgacgtcaag 54720

taatccaccc gcctcagcct cccaaagtgc tgggattaca ggcatgagcc acaactcctg 54780

cccctgcaca tgtctaacgc acacaaaggg gattctgctg aacacatttt tttgtgcttt 54840

ttctttccaa cttaacatat ttgacatctt tatcagctta tatagcttta cttcattctt 54900

ttaaagaggt tattggctat aaagagaaag tcagagaaag tcagtcaatg ggtgcttcta 54960

tgattattta attagatcct gttgatggac attgatacaa tttctaaatt ttttagtatc 55020

ctaaataatc ctgtggtaaa catccttata cagatgtcct tgttcgctca tgaaaatatt 55080

tctggaggat ggtgagaagg gaaattttaa aaattattta tataaacatt atcatttgtt 55140

agtagaatga cctcgggaga ggttgtagta atttatgctt ccccacatgc atatgaacgc 55200

cttttcaata tattgtttca aaattggata tcatgaacct aaagatatat atatatgtat 55260

gtattttttt tttttttttg ggggtggggg gatgtcctgt tattttcagt tatcgaatag 55320

aactttgtta gttccttcat gtaaggatga agttggtaat tattattttt tttgtgtgtg 55380

tgtgttactt tctttttttt tttttttgaa gttggtaatt aaagggatct gacttcagtt 55440

atggaactgg gaaaacagga ccttgatgtg gaggtgggct tagacatgct atgtctgggc 55500

aggtatctct tgggaagcag tgtcacccct gaacagaagc atggatgagc cgcaggggac 55560

ggtgctgagc agaggggctg gccgtgggtc atctgcggct gttgacctgg aaggcacaag 55620

ggagttttcc acctttcctt tggttttgag agtgcagaag ctactaagca actcacaacg 55680

tgcccagggt ggtggtccaa ctgaaggatg tgaaacggtt cttcctttcc cagccaaaga 55740

acttgaacct cccaccctgt gacaagcatt ataaaattca cataattttg ataggctgga 55800

ttccctttct gtagcagatc tttcctcaga acagaagtgg ttttttgttt tttggttttt 55860

ttttaaccta aattacctgt gagttttatt ttttaaatat ggaatatgtt ttttggacac 55920

ctccttgtca tattaaatgt tgttattaaa tttgagattt taatataaat tttaccccag 55980

caaattaatt ttgtttctct tactctcttg tttttggcat cttttcccgt tatatagtgg 56040

tgctcatgtc atcatattgc tcttatgtga cttttccttt gtgaacaggg atcttgttca 56100

cttttccttt tttaactttt tttttgtttt ttcgagacgg agtcttgctc tgttgcccag 56160

gctggagaac agaggcacag tctcagccca ctgcaacctt tgtctcccgg gctcaagcga 56220

ttctcccacc ttagcctctt gagtagctgg gattacaggc atgcaccatc acgcctggct 56280

aattttttgt atttttgtag agatggggtt tcaccatgtc atcgaggctg gtctcgaact 56340

cctggactca agcgatccac ctgcctcagc ctcccaaaat gctagggtta caggcatgag 56400

ccactatgcc tgagtcactt ttccttttaa cataaaaaca ctggtatcct agagagggca 56460

ctatattttg ggtacatatg agttcagatc acagaagagt tgtattctat acttcttttt 56520

tcatcattct tacttcagta tgatgtattt tataatttta tatgagaaac tataacactg 56580

ggcatgtgtc atcaagcagt acctactcat aaatcatatt aaattttgat ccaaacatgg 56640

gacaaactga agttttctct gtgtacttga atgctttcag aggcataaaa ttatattacc 56700

atgtgaaagc aagcctacaa aattcctcag gcgtccactc tgccactcaa atgagagcca 56760

gacttacagt gcacactcta caaacaaact tccagcccgt cagggtattt taagtgcctg 56820

aatatgcaag gcactgtgcc agtaaaatta ctcagtccca aggatagagc ctgttagaat 56880

tattttaaaa tctgtacttg aagtttattt cctcagtgtt ccaagatatt ttatctggtt 56940

gttctctgag tatttcacat gtagctagtt acatataggt gagatagtga tgcttgtgcc 57000

tggtgtggat gagaaactga gcctggcaga cctgagattg gatttccttt tctgactttg 57060

caagtgtggc ttggctttaa tagccctcct ctttttccgt attcctcttt cccccttcca 57120

ttttgcaaat atgcatcaat caaaatacaa attgattgca aatatgtgtc aatcaaattg 57180

tattgtattt tgattgtgca catatgcact gatagttaca catatgcatc aatcaaaata 57240

caataacctg tggaaccatt tttttctgaa ataggaaggt ggtgccatgg gctattgatt 57300

gttgaaggta gtcttcagag cttgtcttac aaatctataa taattttccc ccaaattaat 57360

gtgctagtta gaacactaga ttgcatcact gaaagtgaat tttagaatct tttccaactt 57420

tttaccaagt tcagaaaacc gttttattgg acctttattt gcctcatggt catctggttt 57480

ctttatgctg ataatgacag ggaccttact aacctacaag gcaacccagt ccatcctggg 57540

cagctatgat cattggaaag ctctgaatca ttcatctgga agctgcctat ggcagaatag 57600

tgcagaacat atgcattgca ctatgttcta caaaactaca ttaaataagt gttccttttc 57660

attgttagat ggaagtgacc cagggcaagg atcatgtttg atgagccagt tttctcctag 57720

tgccttgaac ataggcactt ggtaatgttt aaagaatgaa ttcttttttt ttggagacaa 57780

aatctcactc caccacccag gctggagtgc agtggcacgg tgtcagctca ctgcaacctc 57840

tacctcccaa gttcaagtga tttttgtgcc tcagcctcct aaggaactgg aattacaggc 57900

atacgccacc acgcccagct aatttttata tttttagtag agaaggggtt tcgccatgtt 57960

ggccagatgg tctccaactc ctggcctcag gcagtctgcc tgcctcagcc tcccaaagtg 58020

ctgggattac aggcatgagc catttgcctg gccagagaat gaattcttaa tcagtttctt 58080

atgacttcat attgactgac agttgtgcta aatacttttt gcctttattt gaattagaaa 58140

atttgtaagg gggccttcag aatagatgca gtcacattta ggagttttct tccccccatt 58200

agttaaaatg cagtttttct atggatctgt tttagaacta cgaataaact ctgatcagtc 58260

actgcagact acgcagtaag ataagaagca gtccatttgt tctgtcgttt attcatggcc 58320

ctcatctttg ccagctgact tgtgcagaag agcacagcaa actgtaagct tcctaacagc 58380

tattcccatt cagctgctgt cttcaagaag cagaagagga tagatagacc ttagagaaca 58440

taatcaaacc tgggaaactc aaatcaaaac aaaacacaac ttcaaaacag aagttgaagg 58500

tcctgaaggt acccagaggc atagcaagga aaatggcccc actgggatat cttttggatt 58560

cacctacaga cctctctgga gttttaagat ccactttttg tgacatattg catagcaaac 58620

aggccgaacg ctgttgtaaa tcatcctctg cgaaaggccc aggttttgaa actgaaggcc 58680

tgaaaaggct cctgcttacc agctgtgtgc tgtacctgac acactgaagc ctgagagtgc 58740

cagtcacctg tcagagggaa cacagctgcc ctcaggcaga acctgagtct agaactcaag 58800

gtttttgact cttaggctaa aaataaaaaa tcagaaggag gaactatgga ttgcttaatc 58860

agtcacattt tcactttcca gagtttcttg tagcacaagt tatagccttt ggggattagg 58920

atgtaaacac ttttttttcc ttccctaaag cgatttttgg tctgtcagtt tttccagctt 58980

cctgctctgg gccctgaagg tgccacacag ttgcaggcat gctcctactt caaggctctg 59040

ttaagctgtg gctgcccttc cttcccactg ctgtgcccca ggccaacccc tctgcccctt 59100

ccttcccctg aggcgctttg cacctgttgc tccgagcctc ctggtctatc ccagttagta 59160

gagtccctgt gcttacctcc gtggctcagt cctcatgggt ggtcagtgct ctagggaagg 59220

tgagctgacc tcttcacttt cccttcccag ccatttatag ctcttcatag cctcaccaac 59280

ttagaaaggg atgctgcttt tctctctgtc ccccatcctg actacattca agtcattgct 59340

cagcccagtg agtttgtcct ttcttccaga ccagtagttt tcccccaggc cctcaggctt 59400

cagcccttga aggcatcctt agcccccccc ccacactatg atagccaggc gctgtgcctg 59460

gccatggggt gtgggtatgt gtgtgtgttt tgtttctgga gcccattcct ttccttccac 59520

catcttctag gccttcatcc aatcctcctg caacttgatt catgactttt ccctgcatct 59580

agtctagtct ctttgctggt ctgttgtttg catagttgcc agtttaatct tcttaaaatg 59640

ctgcattttt gaagtcagtc tctctctagt ccctgtcaga aacatttaaa tagctctgtt 59700

gccacagggg gaaagcttga acctcttagc cagtcagtca ttcagagcct gccctctact 59760

ggggcctgct ttcctctcca gatgcttctc ccactctgcc tgccacagcc cttgtagctg 59820

gctgattgcc ctgtacctcg caggctctgg aagtcttcag ctccttcatg gagcctttgt 59880

ctaccagcca ttcttttcaa gactttgctg ttgttcactg cctgatttgt tcatttgaca 59940

cttaattcac tgagcaaaca ttatgaaaga tgtactgttt gctactgtga ggaatggatc 60000

cccaagaggt aagagggtca gtccctactg ccaggaaatt tgcctggatt cagtatcttc 60060

ttgtgtctat tagatcagaa gtggaaaggc agaggccagg ctgtatgctt tttaaatttt 60120

attttatttt atttaaatca ccagcacctc agcaagtgtt ttgcacagga aatttcttaa 60180

tgttatttaa ttattttggt ttttttgatt aaattctgta cattcccatt ttagcttatc 60240

ttgagttata acattaaaat taaggtagtc atcaactgaa ttataagacc taattaaata 60300

agattattta agatagtgat ttctcattag attggcccta ttcatattaa cttttctgct 60360

tttttcttca gtctgcatga agaaatcagt gatttttatg aatacatgtc tccaagacct 60420

gaggaagaga agatgcggat ggaggtggtg aacaggatcg agagtgtaat taaggagctc 60480

tggcccagcg ctgacgtgag tcccttcctg ggtagcctat gcttgggaca gtccttgtcc 60540

acgggccaga ggcctatctg ctagtatctc atgctagtcc tcacatgcaa gtagaagtgc 60600

actgtagagt tgtggtctaa ttaaatttta aaggcaaaga attttctgca gtctttagaa 60660

tttgaggctt actaattatt ttcattggat tggatgacta acaacctttt tttttttttt 60720

tttgtagtgc taatagcaac tactaaaggc aagctattgt tagaaattat tagtgtaaag 60780

agaagaaaga caaatcaaac ctcattgttg tagtggtctg ttattggata tgatatatca 60840

aaacctcatt actacttagt tccagcctgc cagagtaaac attatataat tgtttacagc 60900

tgaatgaaaa tgtcaagtac gaaattttgt cacttgtggc taatgcaggc ataagtcttt 60960

tcttatttct ttcctgaaat tgccattttc atctctctca gaccagctaa ttgcctttta 61020

gacagctccc agtcagtgaa caaaatgatt gcttgggatt tcttcttggc ttatttgttg 61080

tttttgttac tggtaccaag tcttttgttt tttttttttt ttttttttga gataggggtc 61140

tcactctgtt gctgaggctg gagtgcagta gtgcgatcac gactcattgc agccttgatt 61200

tcctgggctc aagtgatcca tctcagcatc ccgagtagct gggaccgcag gtgcacgtca 61260

ccacacctag ctgattttcg tatttttttg tagagactga gtctcactgt gttgcccagg 61320

ctggtcttga actcctgggc tcaagcagtc tgcccgcctt ggcctcccaa agtgctagga 61380

ttataggcgt gagccaccac acttggcctg ttactggtac taagttaata cttcactttt 61440

tagggcactt tgagggcctg ttttatgatt ttgtgtatgc aaagaagtaa caaaataata 61500

gaatccatta ctttgtgttc tgtaactttt ctttaggcac tgtcctgggt ggtgtttttg 61560

tccaattggc aaaacaagga agtttcactg tatgtaaaac ttgcatgtat atgacagtat 61620

atatatgacg ctgtaggtaa agggaaaagg ggaggatact aatattttat gaacagtgac 61680

catatgtcac attctttctc ctatgtgatc caaatcagtg gttcttagct ggtggttatt 61740

ttgctctcca ggggggcgtt tggcaatgtc cgagacattt ttgattgtcc tggctgggta 61800

tgcactgcta gtacctagtg ggtagaggcc atggatgccg ccagccattc tgtgatgagc 61860

agtataggcc cttacaacaa agaattatcc actcccaaat gccaatgttg agaagccctg 61920

gtctaattta acccttatct ttcttaggtg gaggttgact ctctctctct ctctctctcc 61980

agccagccag ccagccatca tctgtctacc tacagatgag gaacatgagc ttgtggttag 62040

gttcccaggt ccatctcgcc tcagaggttg aacttgtttc actgtttatc cttttccccc 62100

gccctgagat ggagtcttgc tctgttgccc aggctggagt gcagtgacac agtgacatga 62160

tctcagctca ctgcagcctc tgcctcccag gttcaagcaa ttctcctgtc tcagcctcct 62220

gagtagctgg gattacaggt acccgtcacc acacctggct gatttttgtg tttttagtag 62280

agatggggtt tcatcatgtt ggccaggctg gtcgtgaact cctgacctca ggtgatccac 62340

ctgcctcggc ctcccaaagt gctgggatta aaggcgtgag ccactgtgcc cggcctatcc 62400

ttttttatta caattacctg catacgtatt tctgcctgag ttcccctgtt ctccatgggt 62460

tgaggtggaa tgcatcccag ttttatgcca cagcacgatg ttataaaatg atggtgcctg 62520

gtgttctctg tggaattgac ctgaaggccc acacttgccc tacagttagt ctgatcccaa 62580

tttagtaatc tattcgaaga ctcctgctca gagaacaaaa attaaggatt tgtgattgtg 62640

tctctggata atgagggaac attattgatc tgaactactt ctggaagttt cctgtggttg 62700

gctttctgta tccttaagta ccatacctcc atattaaacc aacagtggat tgaaaatatt 62760

cagaaaaaaa ctattaaaat aacaatgcac taataaaaac aatacaaatt atttttaaaa 62820

tatagtataa tgactattta gatagcattt acattgtact aggtattata agtaatctaa 62880

agatgatgta aagtatatgg gaggactcgc atagttatat gcaaatactc caccatttta 62940

tagcagtgac tcgaacatct tcagattttg gcatagtggg actggaacca gtctcctgcc 63000

gataccaagg gacaactgta ttttggtctc tgtgtttcat atttgaacca ggtaagttga 63060

aattatattc agaatgtctg cttgtgaaac agaatgccca cttcatgaag aatggggtta 63120

gaaaaaaaaa tactcttgtc atactgaaaa gtaccagtag agggtagcaa aaactgacat 63180

ttctccatat cttggtgact ttatctgata cctcaatata ataacttctt tttctgtttc 63240

aggtccagat atttggaagt tttaaaactg gactatattt acctactagg ttagtacact 63300

catgaatctt ttaaaggact gtaccttttc ctagagtgta ttcgttttgg ctgtcaaatt 63360

tgtaaggagt agaaacaaaa caaatttata aaacaaaaat gggactgggc atggtggctc 63420

acgcctgtaa tcctagcaat tcaggaggcc gaggagggcg gatcacttga agtcaggagt 63480

tcaagaccag cctggccaac atggtgaaac tccatctcta ctaaaaatac aagaattagc 63540

tgggtgtagc ggcacgcgcc tataatccca gctactccgg aggttgaggc aggagaattg 63600

cttaaactcg ggaggtggag gttgcagtga gctgagattg tactccaggc tgggcaacag 63660

agcgagactc tgtctcaaaa aaataaataa ataaaaataa aaaataaaaa agtaaaggat 63720

ttaccagcat ttaatttgat ttaccttgaa gtagaatatc acttcacatc tccaagacgt 63780

agatggtaca gagagatgga aaagggatca tgttgcagtg gaatcagtta gttactaatt 63840

ttagaaattg actacctggc agagtattgc tcagtcccat aacttaaccc actgacacag 63900

atgttaatgt agtctcatga taaaatgtct gattgtatat cctctagaat gtgagttccc 63960

actgtctcac tcactcactc actctctctc tcactctcac tttcaaatta agaactcatt 64020

ctactagtta tggctccagc atcctgatcc agaaattcag gtacagatct cttctctgag 64080

aaagatcttg gcctttcagg actcttgttc agtttcagtc ttctcaaatg agacctctct 64140

tgatgcacag ccttggaggc tttcttttgg aaatgatgtt tctctgaagg gtgaatactt 64200

gctctctaag aattgaaatt gtttgaacat tccgtcatgg ttattactat tattacttaa 64260

tctctccaga ataaagtcag cgtcatgttt ttccatttga gcttgatttg gtacacttta 64320

gcccaactta aagtgtgctg aagtgggtgg accctggcaa tttccattct tcccatagat 64380

gtccttggcc tgcaaaagtc ataaaatact caacttcgag ttcatatttc ttacttaggt 64440

tctcagcctc agtaaaacat gaaaaatcac tctttcttaa aaaatttaat taaattttat 64500

gaataggtag tacattcaca tagttcacat ttggaaaagg cacaaaaatc aatacaggga 64560

aaagtctcag tcccacctct gccccctggt tctccgtgga acagccactt gtttttttgt 64620

tttgttttgt tttgtttttg agatggagtc tggctctgtc gcccaggctg gagtgcagtg 64680

gcgcgatctc ggctcactgc aagctccgcc tcccgggttc acggcgttct cctgcctcag 64740

cctcctgagt agctgggact acaggcgcct gccattgtgc ccggctaatt tttttgtatt 64800

ttttagtaga gatagggttt caccgtgtta gccaggatgg tctcaatttc ctgacctcgt 64860

gatctgccca cctcggcctc ccaaagcgct gggattacag gtgtgagcca ccacgcccag 64920

ccagaacagc cacttttacc agtttctcac atatcctttc agagatacct gtgcatataa 64980

aaggacatgt gtgtgtatta acacaaatgg tagcatgctg gatacttgtt ctgcatccag 65040

tttaaagtac ttcataatat ttctgagttg caattaatct catccagata ggaaaatcat 65100

tatgtctagt accggaagcc tttattaagg aaaggacgtt aagtgccttt tttttttttc 65160

tttttttttt ttttgaggtt ttacttcttt caaaattacc ctatttcctg agacctgaat 65220

tctgtgaaat gactgggagg aggagtttgt taaaatcaac aactactatt tcccctctcc 65280

acaaaaccat tatcactaac acatttagtc tttgttggcc agggtggaaa ataggtttta 65340

attgtactaa tgaagtctgt aagcatgagt gtcagttaaa acaagtttcc agcttcttca 65400

gaccctcttg tatatgtatt ctgtgttcag tgacatcgac ctagtggtgt ttgggaagtg 65460

ggagaaccta cccctctgga ctctggaaga agctcttcgg aaacacaaag tcgcagatga 65520

ggattcggtg aaagttttag acaaagcaac tgtaagttct gcagcatttc atattaaacc 65580

ttggttattt acctatgaaa cttgaattaa aattaaagtt tggtgagcac agttacattg 65640

caagtgagtg attctttcat tttgttaatg tcaccgtgct tgcacataaa aagttttctg 65700

gttgtccacg ctggattgtg accacacaat cttgggtcac tgcaacctgt acctcctcgg 65760

ctcaagtgat ccttctactt cagcatctcg aggagctgga ctacagacac agcctgccat 65820

gcctggctaa tttttttgta aattttgtag agacggggtt tcaccgtgtt gcccagactg 65880

atctccaact cctgggttca agtgatccac ccacctctgc ctcccaaagt gctgggatta 65940

caggtgtgag cctctgcacc tggcctgcat ttcttttaac aacagcagaa tacccaattt 66000

tatcacacac agtactcact gtagagatgt ttgttttatt catttgcatt attatttttt 66060

ttttgagaca gagtcttgct ctgtcaccca ggctggagtg catggcgcga tctcggctca 66120

ctgcaagctc cgcctcccgg gttcacacca ttctcctgcc tcagcctcct gagtagctgg 66180

gactacaggc gcctgccacc actcccggct catgttttgt atttttaata gagacggggt 66240

ttcactgtgt taggcaggat ggtctcaatc tcctgacctc gtaagccgcc ccgcctcagc 66300

ctcccaaagt gctgggatta caggcgtgag ccactgcgcc cagcaatatt ttattcattt 66360

ttttagagag agatacagtc tcactatgtt gcccaggctg ttccctaact cctggactca 66420

agtgatcccc ccacctcagc cttatgtgta gctgggacta caggctcacc ctaccacgcc 66480

ttgtttattt aaaaaaaaat tttttttgta gagatagggt ctccctgtgt tgcccaagtt 66540

ggagcatttt ttgaaaagaa ctcctgatag ctcatgtaaa taatcatgtc agtttttgag 66600

aataattttt atatcttatc ttgtcaggtc gctttttggg ctatttgcaa aactgaccag 66660

taatgcaagg gggttgtagt gtatacctta agaatccagc aattttcttt tttttttttt 66720

tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttgagacgg agtctcgctc 66780

tgtcgcccgg gctggagtgc agtggccgga tctcggctca ctgcaagctc cgcctcccgg 66840

gttcacgcca ttctcctgcc tcagcctccc gagtagctgg gactacaggc gcccgccacc 66900

tcgcccggct agttttttgt atttttttag tagagacggg gtttcaccgt gttagccagg 66960

atggtcttga tctcctgacc tcgtgatccg cccgtctcgg cctcccaaag tgctgggatt 67020

acaggcgtga gccactgcgc ccagcaatat tttattcatt ttcttagaga gagatacagt 67080

ctcactatgt tgcccaggct gttccctaac tcctggactc aagtgatccc cccacctcag 67140

ccttatgtgt agctgggact acaggctcac cctaccacgc cttgtttatt taaaaaaaaa 67200

ttttttttgt agagataggg tctccctgtg ttgcccaagt tggagcattt tttgaaaaga 67260

actcctgata gctcatgtaa ataatcatgt cagtttttga gaataatttt tatatcttat 67320

cttgtcaggt tgctttttgg gctatttgca aaactgacca gtaatgcgag ggggttgtag 67380

tgtatacctt aagaatccag caattttctt attagaaaca gtttgatgat acaaaacatt 67440

taatacctag tattcattgt tcttcatctt atactcagaa agtgttctcc aaagtattga 67500

ggaaggtttt tgttagataa tttaaaaatt attataacta tatgtcaact aataaacgag 67560

atgatgggca tattaattta cttaactgtg gtaatcactt cagtatgtat atcaagataa 67620

gtatatcaaa acatgtatgc cttaaatata aacaataaaa ataaataatc aaaaattgga 67680

caccaaacaa aattctcaat ttatagaaat tacaaaatat attgtatggg gcccaatgct 67740

aaatatgcaa catgatattt gtagcagtcc agggttactg gggtgtgcca tatttagaat 67800

actcagtgtt cttatgctcg catgagatga tggagacctc atgtctagta accctccatc 67860

ccctgatttt gtcatttaat ctggttaaag catttacatt ttacctttct tctctttata 67920

ggtacctatt attaaactaa cagattcttt tactgaagtg aaagttgata tcagctttaa 67980

tgtacagaat ggcgtgagag cagctgacct catcaaagat tttaccaagg tcagagaatt 68040

tagtgtttat acaataaaac tattagaaac gtaattttaa gattctgttg tggtggtggt 68100

ctaatatttt tatatgcgtg ttgctgacaa acacctctct ctctctctct ctctttctct 68160

ctttttaaaa tggagctagg gtctcactct gtcacctaag ctggagttca gtggctggat 68220

catgacccac tacagcctca aactcctggg ttcaagtgat catctcacct cagcctccca 68280

agtagctggg actacaggcg tgagccacta cacctggctt tttttttttt tttttttttt 68340

tgagacggag tcttgctctg tcacccaggc tggagtgcag tggccggatc tcagctcact 68400

gcaagctccg cctcccgggt ttacgccgtt ctcctgcctc agcctcccga gtagctggga 68460

ctacaggcgc ccgccacctc gcccggctag tttttttgta ttttttagta gagacggggt 68520

ttcaccgtgt tagccaggat cgtctcttga tctcctggcc tcgtgatccg cccgtctcgg 68580

cctcccaaag tgctgggatt acaggcttga gccactgcgc ccagcctttt tttttttttt 68640

ttttaagtgt tggggatctc gctgtgttgg ccaggctggt ctctaactcc tagcctcaag 68700

caatcctcct gcctcagcct cccaaagcac tgggattata ggcatgagcc accatgctca 68760

gcctgcacct tacttttgta tgcaatggtt ttgctttctt tgaatctgct tgtaatgatc 68820

agtgattaac ttataatgtg acctcaagta agaattaaaa gttgagaaag cttttgaaga 68880

aattgtctgc tctagatcct tccttgtaga gacagaagag atggaattct gctacacagt 68940

tgattccatc tgtttttaac cttcaggagt tcagattaag aacctttcct ttaacccatt 69000

tcctgtttgc cccaagaata ctgcgtgggc agtgagctgc actttctttt ttttcttttt 69060

ttgaggcaga gtctcgctct gtcacccagg ctggagtgca gtggtgcgat cttggttcac 69120

tgccacctcc acctcccagg ttcaagcaat tcttctgcct cgatctcaca agtacctggg 69180

actacaggca cccgccgcca tgcctggcta atttttgtat ttttagtaga gatggggttt 69240

caccgtattg gccaggctgg tcctgaactc ctgaccttgc aatctgctca cctcagcctc 69300

ccaaactgct gggattacag gcgtgagcca ccgtgcccgg ctgtactttt ttttttctaa 69360

acgggaaata ggttaagagt tttaagagca ttttctagat ttcaatccct aaattacctt 69420

taaggtgttt cctacaggct tccttacttc tattttgaaa tgatttaagt ttatttctat 69480

tctattttct tccaagatag agaagaattt gtcaccatta tctgtggaac attttacata 69540

cttagatagt tgtcagcttt ctcctctcta acctaaacca ttaactcctt tggcttctgt 69600

tagaatattc acaatttttt tttctcaagc agctctaaag tttctatttc ttctttgttt 69660

tttaagaaaa aatgttaact acttgatgtt gcaagcatta tcatcttgca taaatatatg 69720

gaagacagaa aagcagaaaa ttaaagaaat attatccata atctcactat attgggtgtg 69780

tgtatgtgtg tgtgcatgtg cgcctgtcta atatttttct ggaaaaaagc ttttaaaaat 69840

tgaaattcgt atgcatgata acattcatca gtatgaagag atggtgtaaa gtgagtcacc 69900

cttacaccat agatacttag atcattttta tagaatttct cattgccagt tattattttt 69960

tgtgttgctt ttttatgttc tttaaaatta taagcaaagg agtagcacat tgtacacaca 70020

ttgtctcata cctttgtaaa aacttaatgt tttggaggtt tcttccatat tgacgcatag 70080

aggcttgctt tattcttttt gttggttaca caggcagtag tcttttgtaa gactgtggct 70140

gcttgattta gcagttcttc agtgttgttc cagtttttct tttgctgtta gaaaaaggga 70200

ttgacgaata tacttccatg catgcatctt gctttacacg tgcaaaatgt ttgtaggaag 70260

agtcccagaa gcaaaatttt gaggtcgaag ggtatatcca ggtaaaactg cgttagatat 70320

ttccctaatt atttattctt tcacattctc attttctctc tctccctccc ccttttcttc 70380

tccctctccc tatccctctc tctcttcctc tgtccctccc tttctctttt ctctcttttt 70440

ctttcccttc ctcttctttt cttttctttt ctccttttct tccttcccct ttcccttttc 70500

cttccttctt ccttttcttc ctttctttca ttttttgaca ccgggtctca ctctggtacc 70560

caggctagag tgcagtgatc atggctcact gcagcctcag cctcttgggc tcaagtgatc 70620

ctcccacctt agcatgagta tctgggatca caggcgggcc taccacacct ggctaccnnn 70680

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 70740

nnnnnnnnnn nnnnnnnntt tttttttttt tttttttaat ggagtctcac tctgttgccc 70800

aggctagata gagtgcaggg gcgtgatctc ggctcactgc aacctccgcc tcctgggttc 70860

aagcgatttt cctgcctcat cctcctgagt agttgggatt acaggtgctc accaccacgc 70920

tcagctaatt tttgtatttt tagtagagat gtagtttcat catgttggcc agggtggtct 70980

caaacgccga cctcaggtga tccgccctcc tcagcctctc gaagtgctgg gattataggc 71040

gtgagccacc aagcccggcc actttttttt ttttcaaagt agagatgagg tcttgctatg 71100

tggccccccc cttttttttt tccttttttt taaatagaga tgaggtcttg ctatgttgcc 71160

caggctgttc ttaaactcct gggctcaagc agtcctcctt gcttgacctc ccaaaatgtt 71220

gggattacag gcatgagcca ccaaacctga ccccttattg ttctttggaa gggaactgta 71280

tctagactga cttaactaca atgttttttt tttttttnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 71340

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 71400

nnnnnnnnnn nnnnnnntga gacagagtct tgctctgtca ctcaggctgg agtgcagtgg 71460

tgcgatcttg gctcattgta ccctccacct cccgagttca aatgattctt gtgcctcagc 71520

ctctagaata gctggatcta catacgtgtg ccaccacgcc cggctaattt ttgtattttt 71580

agtagagatg gggtttttcc atgttggcca ggctggtctc gaactcccta cctcaagtga 71640

tctgcccacc tcggcctccc aaagtgctga gattacaggc gtgagccacc atgcccagcc 71700

cacaatgttt aaaaatactt acttctccat atttttgttc tttcctatgc ttgcttagtt 71760

tgatacaatt tgcaaaagta taagcttttt tttttttttc ttttttatag aagccatgcg 71820

tgttcactgt aggacatcta gaaaacagag ataagagtaa agaaaaaaat agaaatcact 71880

ggccaggtgc tatggttcac acctgtaatc ccaacacttt gggaggccca ggcaggcaga 71940

tcacttgagc tcaggagttc aagaccagtg gtaaaaccct gtctctacaa aaatacaaaa 72000

attagctggg tgtcgtgggc tgaggtggga gaatcacttg agcccaggag ctggagattg 72060

cagtgagcca agattgtgct actgtactcc agcctgggtg acagagtgag ggggagaaaa 72120

atggaaataa ctagtaattt taccacccta agtaataata gctgttaaga cttctttgaa 72180

gatgttgtgc ctgctttgtt ttcctcagtg gcctcagcct atggcatggc ttacagagag 72240

gagtgaatga atatgtgcac agcaaaaggt ggactcattc tgtacatact tgtccgttca 72300

ggtgttctct aggatagccc tgcctcattc cctgtaaagc atggaaggga ggggtggtct 72360

gtttgtagtc atcagcccat gtgtaagtca gcaggccgga ttcttgtttg ccccaggact 72420

gtggcagaat aatctaaagg tccctagtct acagtggcgc gccaccaaga aaagtgattc 72480

ttaaaaatct cactgattta gtgctttaag atgttggtga ctttgtcctt gtactctttc 72540

tattatctgt ttacaaatga atattagagg gtcatggtca caaatgagca tcatcagtta 72600

catgctgttt gtgtttctat cctatagcaa gtactctttt tttttttttt ttttttgaga 72660

tggattcttg ctctgtcgcc caggctggag tgcaatggca cgatctcgcc tcactacatc 72720

ctctgcctcc cgggttcaag tgattctcct gcctcagcct cccaagtagc tgggattaca 72780

ggctcctgcc accactcctg gctgtttttt gtatttttag tagacacagg gtttcatcat 72840

gttggccagg ctggtctctg actcctgacc tcaggtaatc tgcctgcctt ggtctcccaa 72900

agtgctggga ttacaggcat gagccaccat gcccagccct gtagcaaata cttagatgct 72960

attattcctg tgtacatgtc ttacatttta gatataaggg gagaaccatt cattacctat 73020

agtttacttt tttttaatag cttactctta gaatggaaaa ttaagtatgt tgtatatcgc 73080

taccaaattt tataatgtaa ggaccaattt atgcccctct taatgcttag atctgttgct 73140

gatacaggaa ttcattgaaa atacaatttt ctttttcaga aatatcctgt attgccatac 73200

ttggttttag tattgaaaca attcctattg cagagggacc ttaatgaagt atttacaggt 73260

ggaattggtt cttatagtct ctttttaatg gcagtcagtt tccttcaggt aagtcatatg 73320

ggtataccat gctagtgcac actaaaagca aaagtgatca atcagctggg aaacattttg 73380

gaaaaaatca aaatcaacct gtaattgcat tgctttcctt gattccttac ggtttttccc 73440

tttaaactgg gtacattttt atcatttagc aaatacatat ttttaaattc ctgtgaaaga 73500

atatttttgg ttttaaatcc catatattct agtatttttg agacttttca ctgcaaattt 73560

taacatgcag aatgtacggc ctggtttcca taagcgtaaa tagtataagt gccagcaata 73620

agaatgtctt ctaagcagct aaatcttgta agtttagttg gaattgagat ttgctatttg 73680

gatgagcaaa ttcgagtctt agtattgtaa atgggtgtgt ttatgtggcg cagggttgcc 73740

aactgcctga gtctattcgt gagtcagaac gactttgctg atgtcttggg ccaagccagc 73800

cctggtcggc agcctggtgc acctgtaaaa ttcagcctta caaacagtct cccaccattc 73860

ccgcaccatg ggactttagt gttgtgtgta acagcggtat aggctgctgt tatcccatta 73920

tcaattgact gctatgctaa accaaaatta taataatatt gcttgtagaa gttagaatat 73980

aatttattcc ccctctcctt gataatttag caaaaatcca atataatttc ttcttttctg 74040

cttttagtta catcccaggg aagatgcttg catccccaat acaaactatg gtgttctctt 74100

aatagaattt tttgaattat atggacgaca cttcaattat ttaaagactg gcatccggat 74160

aaaggatggt ggttcatatg tggccaaaga tgaagtacag aaaaatatgc tagatggcta 74220

caggccatca atgctttata tcgaagatcc tttacaacca ggtattgaaa ttaggtaaat 74280

ttttgggcat tcaaagagag ggcactgtca gtcaccttat tatactttaa attctcttta 74340

gatgaaaaat gaaggaacaa cttctaattg ttactctttt ttcatcaaaa tatttcatga 74400

gcaaacatac taaaataaac agacacagac aatagaaaaa caccttggag acttccagat 74460

aagtagggag tagaatctgt ttaaccctaa aagcatagta gaaaaggcat tacttatttg 74520

gatggattca tgtttggtgg ctgcttctcc tttttcttgg gtccttattg ccttgattat 74580

aaccagttgt cagcaattaa tgaggcttta atgagatgat tctgaagtcc ttagaggcag 74640

caagcacagt aatatatctt tgaattcatg agcagaagga tgcaaggaga caatgtattt 74700

tctttttgaa tttctccttt cctctttgat tttgcatgtc tctttgtgct ttttccagct 74760

tcgtgtgggc ttgaaagtaa gcagaaagta aattccttcc atgctttttt gaagttctgt 74820

ttgcttgctt gtgtcctgat ttttctgagc aatatttttt cttgatataa ttgtaaaata 74880

tttagattca gcgttgttgg acttcagtgg aagtgctttt agtcatttgc tttaatgtgt 74940

aaactttgaa aatgagtaag gaaagggagt gaaaagatac agtagttgcc taggaaccat 75000

ttctggctta ttgagctgcc ttataaacat taatagttct atgtgtttat tcactgagaa 75060

aacattacat tgattgggag cctgctgtgt tcaaaagcat tgggccaaag gacacgaaga 75120

cttttcagca agatgatcct tgctttttag gggctcataa tttagagtga taaatagata 75180

tatagctaat ataaacccca aaaatataga agtatttcta atgtaacttg gggtttcact 75240

cttaggagtg aacagggcgc tatttctttt gtttgcataa ctgtttatgt atggaatggg 75300

atagttcttg atgggccaga atacatttcg acaactgata caccataatg aagtaccaac 75360

tgcatgatgc acatattcag agactgggga gctttgggaa cagctcacag ctcagcttcc 75420

aggcacaact ctggtgggat agctatggcc cttgctctcc tggaagaggg tcgtcaacat 75480

ttagtgcaca ttaagcacag tcaagcttac tatgttacct atatttcttt taaaggtaat 75540

gatgttggaa ggagttcata tggggccatg caagtgaagc aggcctttga ttatgcctac 75600

gttgttttga gtcatgctgt atcaccaata gcaaagtact atcccaacaa tgaaacagaa 75660

aggtaaaagt tcatgtgtaa ccagcccatt gtgtcaaaat tggttgtggc ttcttatctt 75720

caaattaatg ttattccctc cctctccctt tctttttaaa cacgtgcagc atactaggta 75780

gaataattag agtaacagat gaagtcgcca catacagaga ttggatatca aagcagtggg 75840

gcttgaagaa tagacctgag ccttcatgca atggtaagat attttccttg gtcgattgac 75900

tgagtattag aggcttttct gtgttgtgtg cgtttaatgg gaagaaacgt tttccaatct 75960

tttgccactc tttcaggaaa tggtgttacc ttgatagtag atactcagca gttagataaa 76020

tgtaataata atctatctga agaaaatgaa gcccttggaa aatgtagaag taaaacctcg 76080

gaatctctta gtaaacactc ttcaaactct tcatcaggtc cagtgtcgtc ctcttctgcc 76140

acacagtcca gctctagcga tgtagtaagt atgatagcct cagcccttct gaactcagac 76200

gcatgcacgt tctcttgctg gggttaacgc tgtcttgaag gctaaggcta cttcctttgc 76260

ttacatttta ctgggatatt ttaataactt ccatgcttgt actttttctc aacattttat 76320

tatgaaaaat ttcaagcata cagcaaaagt gaacaaattt tagtgagcat tcatgtactc 76380

accaatagat tctgccatta accttttact tgcttatctc atacctgtct atccatcact 76440

ctatccatta attcatctta ttctttgatc tatttcaaag tagattacag acatcagttc 76500

ccctagagta ctgtagcttg tgcatccttg tagccagact ccaatatttg tttattgttt 76560

tttccctttt ttttcttttg agacggggtc tccctctgtc gcccaggctg gagtgcagtg 76620

gtatgatctc agctcactgc aacctccgcc tcccatgttc aaacgattct cctgtctcag 76680

cctcctgggt agctgggatt acaggcgcct gctaccacac aggactaatt tttttgtatt 76740

tttagtagag acggggttta accttgttgg ccaggctggt ctcaaactcc tgaactcaag 76800

tgatccacct gccaccctcc caaagtgctg ggattacagg cgtgagccac cgtgcccagc 76860

ctattttttc cttttgatat gaaattgaca tataaggaaa tcttaattgt acatttacta 76920

aatttttttt tttaatttcc ctaattgttt tactttcagg gtctaggtta cttgctcata 76980

tgttcactaa attttatcaa atacatacat acacatgtat agcccaaaat cctaataagg 77040

tacaaatatt accgtcaacc caaagagcaa gctcatgatt ctttcatcaa tccctaaccc 77100

caccctcaga gggaaccact gttacgattt tttttttttt ttttgagatg gagtctcgcc 77160

ctgtcgccaa ggctggagtg cagtggtgtg atcttggctc actgcagcct ctgcctcccg 77220

ggttcaagcg attctcctgc ctcagcctcc tgagtagctg ggattacagg tgcacaccac 77280

cgtgcctggc taattttttt tatttttagt agagacgggg tttcactatg ttggtcaggc 77340

tggtcttgaa ctcctgatct cgtgatccac ccgcctcaac ctcctaagtt gctgggatta 77400

caagcatgag ccaccccacc tggcctttaa catttttctt tctttctttt tttttttttt 77460

tttgagacgg agtcttgctg tgtcacccag gctggaatgt aatggcatga tcttcgctca 77520

ccacaagctc cacctcctgg gttcaagcaa ttctcctgcc tcagcctcct gagtatctga 77580

gattacaggc acgtgccacc acaccgagct aattttttct atttttagta gagatggggt 77640

ttcaccatgt tggccaggct ggtcgcgagc tcctgacctt gtgatctgcc caccttggcc 77700

tcccaaagtg ctgggattac aggtgtgagc ccagctgtta tgactttttg acaccatagt 77760

tagttttgcc tgtttcagaa tttcatatat atggaaccac atagaatata cttttgtgta 77820

aggcttcttt cactcaattt ttttcagctt cctggttgaa ttttgtttgt ttttttgttt 77880

tttttgtttt ttgagacgga gtctcgctct gttgcccagg ctggagtgca gtggcgtgat 77940

cttggcccac tgcaagctcc accacccggg ttcccgccat tctcctgtct cagcctcccg 78000

agtagctggg actacaggtg cccgccaccg cacctggcta attttttgta tttttagtag 78060

agacggggtt tcaccatgat ctcgatctcc tgacctcgtg atccacccgc ctaggcctcc 78120

caaagtgctg ggattagagg tgtgagccac tgtacccagc caaatttttt ttaattgagg 78180

tataattaac ataaaattca gcattaaaaa tgtacaattc agtggttttt agaacatatt 78240

cacaatgttg tgcagccgtc tccagtaatt ctagaacatt tccatacccc aagaagaaac 78300

cctgcattta gtagtagttt ctcctaattc ttccttccct cccttatcct ctggtaattt 78360

ctaatctact ttctctttct accctgatag aatttttttt cttcccccat cctgatagaa 78420

tttatgtgtc aattataacg taagttacct tttaaaatca aggttaattt gtagtttact 78480

gatttgatat ctaaagcagg cttacctgtt tgattttaac tttattaagt gtaggtcatg 78540

aaaagtaatc taaatattgt atgttgttga tgaccgtgtg tcaatatgga atcataaatc 78600

ctcctgtgca aaatctcccc gtgtgccttt ttggttccta gagcagtatg ctctggagga 78660

cagaatgcca agctagatgt cacagacaca gggagatgga gtcttgggaa gtgagagact 78720

gcgactctga gatactgggt aaagtgccag ggccagggtg gagacctgca gagagacgta 78780

gcattgtcat ggcccaagca gcccagaaac aggtggggct cagcccactg tcgctgggaa 78840

gtctgcaccc acccacacca gtatgtttgg ttggaatgat cattgatttg tcattacaga 78900

caaatgacat cttgtgtctg gctgaagcca gggactagga cctaggttcc tcactcttta 78960

ccatactctt tcattttcta taaataaaaa aacaaataaa ctcagacctc tgtgagctcc 79020

ttcaaggtaa gatgtgggca gtggatttaa caatgaacag aagctctctg ataaaatcag 79080

tcactttaaa tgtttagagg aaaatttaaa caaacaatta attttgtaaa ttcctcagtg 79140

tgcttctttt aactcccaaa tgtttaaatt tagtctagag agtactttaa ccaaaattgt 79200

ttttctttct gaatattgag tatctaaatt actaatatgt cacattataa ctcatgtgac 79260

ttgtgttagg attccgatgc aacaccatgc aaaaccccga aacagctgct ttgccgtccg 79320

tccactggga accgagtagg gtcgcaagat gtatccctgg agtcctctca ggcagttggc 79380

aaaatgcaaa atacccaaac cactaacaca tccaacagca ccaacaaatc tcaggtatgt 79440

ggaacgtggg tttttaattg ttagtgtttg atacaaaata tttagagttt cctacatgtg 79500

aataatatgc agcatgggtt tgaagaaaac gctagattga agaacaaact tactttattc 79560

taagagattc caacacatga cagtgcttct aggaacagga tgtcctaagg atctttgtga 79620

gacaccattg taacataaac ctcttcagaa atctattgac tggtccttat aagatgttcc 79680

agccaaacta ccatataaaa aatgtttcaa ttgtacatga aataagctgg catgaaggtg 79740

ttgtgaggcc tcatggcagt gtgcatgtct gggaataatg tatccttttc taatatttta 79800

atgttcaata gcttgttgcc cgtgttgaaa tgatcagctg gctgtcaggc atggtcagtt 79860

gattaacatt agcctggact taaaaggcca cagagatact ctagtttaag tttttttgtt 79920

gcctagaatt gtcattaact gagtaatgac tcagagtgag gggaggaagc cattgatatg 79980

gggctctggc ctgaggctgg gtcactccta actataactg ggaacctggg aagaggcctc 80040

ttggctgtta ccttgtgtct gatttgactc actgagttca ttttacctcc gtggctttta 80100

gccatgtatg ccagacacag actcaaaata ccagttcaag tgacagggtt gacagaaggg 80160

actggggtca tgagaaagcc acaggccatg aatagcagga agggagcggc cacctgtgct 80220

gaccccaacc tacccgtgtg cctgtcatgt ccaagagcct cttcccgcta tgtgacttat 80280

gatgtggtat ttgggttggt aggtttctta agaaaacctt tacatcccac acacactgtt 80340

aagaaggtaa gcgagtggtc tatgcttttc aatatttcca ttaaaataaa gtaagggttt 80400

cagagctaaa aagagttaac ccctgtaaca gctttttctg cccactagat aagtcagtgg 80460

tcagtaaggt aactctctag ccagcatatt cctagttttg aaagctgccc caaatccaga 80520

tgcttttctg caatactgat gtctttgtgg tcgttttctg tttctgcagc atggatcagc 80580

aaggctcttt cgttcttcca gcaaaggctt ccaaggtaca actcaaacaa gccatggttc 80640

cttgatgaca aacaaacaac atcaaggcaa atccaataat cagtattacc atggcaaaaa 80700

gaggaaacac aagagggacg cgcccctctc agacctctgt agatagtcgg cgctgcgcgg 80760

tggactgtct tctctgtgca atgatctcat gctcaggaca gttgcgcagg gactcctggg 80820

agacattcag gagcctcaca ctgttcagac gttgatttag caactgcgtt ttttcccagc 80880

tcgccacaga atggatcatg aagactgaca actgcaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 80940

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa agggggaaaa aaaggctgct tatttgataa gtcatatgct 81000

acaacagggt cattttaaga tttaaagctt gaatgtaaaa taaatatatt tctcattggc 81060

tttatgcaga gttataggga atagtattca gtgttggtag ggtgatagaa acaatatcag 81120

aggatggggt ggggaaggaa aacaaaggta tctgatagga agtccagatt ccaaagggga 81180

aagtgatctg tgcatgtttt gttttttttt tttttaatat ttttgcatat atttaccatt 81240

ttattgtgtg tatgtataga agaccatata ggaaattgat atttgtaata gtggatttgt 81300

taataatact ttttacataa cattactgtt taaattgtaa acagattttt tctcaggatt 81360

agtttgaaaa ataatctaaa ttgtcatctt aacatccata tatagggaag tgattagttc 81420

tattactcaa tttgtttttc tcagcattga aatgacttaa tagaaccctt gtgtcctgct 81480

gcaaaaattt ctcctctcta aagaaaaggt ttatggtggc aaatgatgtt tattttattt 81540

tgtaaaaaaa aaaaaaaaaa aaatactatg tactttgtgt aaacactgaa aaatctctgg 81600

tcatctctga gaattaactt gcaactgttt tctatagtgc tgtcgtcttg ggcaatgggc 81660

aattacatga ctttgtgttt gctgcctttg cagtcttttt ttttcccccc catttcttcc 81720

taataggaaa aaaaaccccc aaaaaacaaa accaaaaaaa aaaacggcca cccatgtctg 81780

gtctcattcc tgttgcagtg aaacttcgag ttccacagac tttgcatgct ggcttctcta 81840

accctgtgtg ctgcgtgtgc ctgtttctca tctcttattc tttttaaaat tcatgcttaa 81900

ctactgtggg agaataactg taaacagctt taattaaatc atacttataa aaaactattt 81960

tcttatattc cactttatgc ttttggtatt gttgatcttt ccaaattaaa tggtctttga 82020

taatggatct attttgtatt gccttattaa gaccaaatac ttcttgtcat cccattcttt 82080

atcctcttct ttcatggaat tgttatcatt aattaaaact tttttaagca ttggcttgtt 82140

tcaatcatac tgtaaatttt ggttgtagtc agctttgagt gcaatgagat gtataattct 82200

gttatcatta cctgttgagt ttgaaactca gttgggaata tttaatataa tagaatgtaa 82260

gtgacatttc tgaaaatgct ttctttcagg gtgaaagctc ttatgtttag catcagtgtg 82320

tatggctctg ttaaatacag ccatttctga gacaagattc ttttatatat atatacatat 82380

aaagtactat tggcttttag gagtttcttt tatatacatt tatgaaatac tgaagaccaa 82440

tcagaccatt aatggacact tagtgtaact ttttataaag aaaataatgc taaagtaaga 82500

ccaaaactga tgtcatcact gaaattaaca attttcaata tgttcatatt ttaattcaca 82560

atggaaaaat gtgttccgaa actggaaact catagtactc gtgtaaactg tggaagattt 82620

taaatgtgat gttattttga caatgtttta aatttttgag tcacattctg atcagaattt 82680

ttatcgagat gttgagcttt tgtttttgaa actagtttgt cataacattg tgcataatca 82740

cagtatttat tttctaggac aattgtgaat gtgtagactt atgtttactg ctaagggaac 82800

aattatttat aaaataatat taaatccagt attagctgcc tatttcagac acttaatact 82860

tgcagagatc tatgttacat ttaccacact gaagtttttt ttgttgtttt ttgtttgttt 82920

gtttttaaag aatcaccctc attgttgaaa gtaaatgtac tcttagggtg cgaatattag 82980

tgttccaata agcatgtgat tatattaagg tggtggtagc gggaagataa tcttgattcc 83040

attgggaatc ttaggttttc gtaaatttat tgggaaaata gtttttcctg tactgctgaa 83100

gtttcttttt ggtaaacagt atctttctaa aagaaaaaag catgaaggag aaattgaggt 83160

gtgtatacat ttcctcaaat gaccagcatt gtattcgtga atactgtgta tcttgcagtg 83220

aacagtgtgg aagctgttca tttttcaatc tgaagtaaaa tactttcaat aacttttagt 83280

ttgcctgctc atttgtttta tacatttcat ctctctattt gactcctatc ttacttcttt 83340

tttgagtttt aatactttct ataaagattt tgtgaatata tcagaaatgt gtcatttata 83400

tattatagtc cattcatatc catgaatcat aaccttcctt tgctaatact tgtagaatgg 83460

gattttacaa attctgcctc actctggtga catttctctg gcagtcatgt atgtgtacct 83520

ggccattaga aatattaata tttaaatact gttttttaga ggtgctgatg ggttggtgag 83580

gtgtcagcac aaaatcttat gggttatgtt ttatgataaa agtatatcca ttttttccct 83640

ccagctttaa ggtgactgtg aaggtgcctg gttttgaacg tctttgtttg gtttggagat 83700

gttgcactca gttttcaaat ctagcttgga tctgtaggac ctatgttttt tataagtaat 83760

tgccctccag tcttcaacag ttgattctgt tatatttttg gcctgttttg agtgtacttt 83820

acttgcattt tgagccttat taatatttag cttatttgat ttggctccag tattcctaga 83880

tgaaatctgc acagggcaaa acatgggcaa tagggtgagc atttttaatt gtctttttcc 83940

actggaacct tatatatctc catgtgtttt ctgctcattc cctcccccat gaaatggtaa 84000

gtgtacttgt gtttgcctga acctatggac tagtgtttgg ggtttctgga aacactagag 84060

ggtcagaaaa gagtaataac cacgtgaagt gcaggattct cttgctgtga cgtgttcgtt 84120

gcaaagccct ctccagcgac tgggaggtgt agttgttaag gttgatctgt tagaaatcac 84180

cattatgagg tattagtggt aaatgttgct gatattttta ttggtcatga ctacatctca 84240

gttttacttt aatattgatc tatagtttga tcagttcctt gaattctaac atgttgattt 84300

ctcaatgttt ctgtcactaa ccaagaatgt ttctagacag ttggttgctt cacagtcaaa 84360

attaaatggt aaactatcaa aaagacattc ccaattttgc tgtgataaat attgaaacat 84420

taaaattaat gaacagaaga atttattctt acccatctat tcttcttctc ctagttcatt 84480

acactttttc agttactgga aaggcacatt ctctaagtat ttggtgagca aaatattcta 84540

taaatgcctc taacaaacct aattgaatat aaaagttaca tttagtagtt actgttgata 84600

gtaattttca tcagggtcat agttcatcta gtaaaatatt tagagaatga cgttaacatt 84660

ccagcattaa agtgggaaca aagatttgta tgtgaaattc cttgaaagag ttcatcttgc 84720

cttggtttct gaccctcaag actagctacc tgccatcttg tcagaacatt tgtgggtaga 84780

ataagtgtta aagatcaaat tttaatgtgc tccttgatat ttaacatagc taagaagcca 84840

gattttactg cagaagttat ttacatgatt tgaaaactcg acctaactgg aagccttttt 84900

ctcagtcatc ttgttctgag ccatcttgac ttcacaccat tagcaacttt tctttttttt 84960

tggtcaaaga taatgagcta aatatatgta gatattgaat gttgacaaaa ttattaacca 85020

gaaaaattgc ttataaagtc tgctgatcta tttgatatct agaattaaat atttgaggac 85080

agtttttagt tagtaaactg ctaatgttta ttttactgtc tctcaggttt ttggtttttt 85140

aaaaaaaatg tttggccttt acattttcta tttaagtgtg tactttattg agtttaacct 85200

tgtccatagc ctagtagcct gaaagaaaag gaggcggaac cagagagatg gatgtagtgc 85260

attcactttg gttattataa atttgtggta gctcctggat ttactgagag atattttagt 85320

tatgtcaata agaacagcta atgatgtgga aatcaggtgt tctcttgtgt atttcagtga 85380

acgtttttat tagtatttgc atatcatctc tagttctacg ttttaactta acgtccttgt 85440

ggcttcacca ctgaggtacc tttcactaca ccagcttctg tgtggcctgg taacatggaa 85500

ggtctctcct aaggacagtc tggacatatt ttgggggaat gttatttatc ttaaagatgc 85560

ctagaaacaa cgcatatagt accagtgaga aagtatgaag taaacaagtt gctcaggctg 85620

ggcatggtgg ctcacgcctg taatcccagc actttgggag gctgcagtgg gaggattgct 85680

tgaggccagg agttcaagac ctttgtctct taaaaacaaa caaaaacctg aatggtgagg 85740

tggggtagaa ttgggtaggg gagggaaagg gggacttgga aaagcattcc ccaaagccag 85800

tgacttggtg aagttcagta cttgcctctt agaagttagc ccatgccttt caaagagagt 85860

gaaatgatgg gttatcagcc acattcttgg agttaatatg tttcttcatc tttcaatttg 85920

gattctgtgc tattcatagc tcttccctaa gaccatttca ttattacctc ttatatttag 85980

ttgcaattta tcataatatg ttgttttgtc cctaaactta atctcctaat tttaagatcc 86040

tctctgattt ttgcatattg aaatttgcag aagtcacttt taagaagtct tttgaaagtc 86100

ttgcaatcct aaaataaatc aagcttgttt gttagaagtg tcatgagtct ccagtcttta 86160

ctattaaaaa gcagccctgc cttaacgcac attgttatgg gtgacaagtg acggacaaca 86220

agtgtagttt ctggatataa agagtgaagg actattgggt taaacatttt tagtggaata 86280

tacatagata tgtatattta gaaactttgg tgaagccagt atttgttttt aataaccttt 86340

tcatttattt ccttctttga ttagcattgt cttctgtgtt aagaaatgtg gactcctgtg 86400

aggtgctgga ggtttgaatc atcttgaaaa ctttccagtc ttgtctagtt accactgcag 86460

agacactaag gaatttacca gaaaaagata tttgatacaa atgatttaag aaatctcaac 86520

atttcctgag gccatatcac tgggcaacca gtgatgaaaa ctatgaatga attgcacacc 86580

tggaagattt tttaagctaa cgacagtttc ttcaaagatg tcaattattt gccttggaaa 86640

ttttataaat tgcatttcta tgcacatctg cccctagtgc ttaccacttg gtttattatt 86700

cataatctgc aattcaataa aggctttgtg ctttcattta tcttcaaaac 86750

<210> 4

<211> 49960

<212> ДНК

<213> Macaca fascicularis

<400> 4

aactacctgc tgtccggcag ccgcgcggct gctctcagcg gagggggcgg ccccggggcc 60

caggcgccgc ggcccggcac cccgtggaag agccgcgcgt acagccccgg catccagggg 120

tgagtgcacg gggcggccgc gggggcgggg gcggggacca tggtcctggc cggcgcccgc 180

gttgcagaca ccggttacag gcgcccgggc ttcttttgga ggatgcatgt tgaaggccaa 240

ggcccgactc tgctctgaaa gttttttttg tttttttttt ttcttgctaa tatgaaactc 300

ctttataatg gagtgacttg cccagatcct gcaagtaaca atgcaagaaa ggggctgctg 360

aataggacct gtaggtattt gtctttttta ctcttgagac tggaaaggga aatcgactct 420

ccccctgcac cccgcctccg ggcaagtgag gaaccccttg ttaaagtggg gcgtagataa 480

gtgtggagtt tcattaagtt aagttgcaga ataatttagc attaccagga actcagatca 540

cgtcgaaggt aaatattaac cgtttttatt tcatttaaaa caaaaattta actgtcaatt 600

tagaggtgat tcattggggg gggttgtgtg ctttaatttc gtgctgcagt taacataagc 660

atagtatata catattggct taattcaaag aaaaaaacag atatgtcata tatatctgtt 720

ctttggaaga tgccattatt attttaaata cttccacatc cgcctggagg gaattagagg 780

ctctacttat atttagtgca cctacagacg gcaaggaatg aaagcaaagg tggtgtgtgt 840

ggggttggaa ttgccccagg tgaggctgtt caggtgtgat gctgttgacg cagctctttg 900

gccattttgg gcttttctga gcgtctggaa ataatttatg tgtgggttgt atgtcagtat 960

tttaagactt aaacgataaa ttttccttgc acgatttttt tccccccaat ttaaaaaaga 1020

aggatttgcc ggggtatgag ggttgttaca tgcagtagag tcctacgaat aaccacaatt 1080

gctaggcgtt gggagttgtt acagtgcact ttttcttgta actctgtttc tcatgtgaag 1140

tatgttggga aacagagttg atacttcttt aaagcgtgtg atacactgta atagccgcat 1200

gttgtgtaac ttttttcacc tggcttgggc tacaagtgat gccttctaaa ttccctgaag 1260

gtgtaaacat gcattgcaga cactggcggg agggcagact cctctccctc cagttcttac 1320

ctgtagaact ttctgagagc aggtggttgg aagcggtttc ttcttgatgt atagtaatgt 1380

atacctcagg gctcgcttgg gaggaccttt aggtttccag cctgttatgg aactggcatg 1440

ggctctttct agtgtctctt agcactagaa aaaacagaca cgtcgtctct gcaagtcttg 1500

ggttgtacct ctgctcttag cggtagcgca tcaggcccca cgcatctcac ttggactccc 1560

caagctgttt cctcctggta actagtaagc ctcagtaggt cgtgttgctt ttgttagtga 1620

atgagcccac tagggtcagg tgctgtgttg ggatctgggg atctggtgca gagacgatat 1680

ggagacaatc tcatgatctt gacccaccct gaaacctgcc tacaagtgcc ccctgcctag 1740

agcacaagag taccctgctc agttgtgcag gtcccctctc acgctcttcg tcacccacgc 1800

ccaatcaatc atcagatgct gttcgtttgg cccttttaat ctctccacac ctcatcctca 1860

ggcagtctct tgttacctct gtggagatcg ctcaagcagc cggaggtgcc ttcgatgcac 1920

tctcgtcctg cttgagtcct ttcccatcac tgctaatggg gtgatcttct ctgccggcag 1980

gtctggtcag gttccccttc accctctgat gtcacctcct ccatctccaa tcccccacat 2040

taaagtctaa agcctaaaac tcagcaacac ctccagggtt ctgctactca gatgaccctg 2100

ggtcctggcc cctggcccca cgccccaccc cttgccaacc tgttagaacc cagctgtaag 2160

gcagtatggt gtagggcata agagagggct ctgaagcccg tcaggaggtc tggtttgatg 2220

ctacagtcat gctcttggaa ccttcctttt cacctttgct ggagacctct ccttgcctgt 2280

ctccaggtgg cgtgtaccat gcctccagta tggccctggt gcatccactt cctgctgtct 2340

ctgcccaaag gggcccgtga ggactacctg ctatgagcct agaagggcac gttgacctct 2400

gcttgggctg ctactcaagc tgctctttca gaagtaaacc taagcggtgg tagagttggg 2460

cctatgacta gaggaggtaa ggtcccccca gtgatcattt ccacatggcc cgttggtcct 2520

acatgaacta accttttcgt gtcaagaaat agttccgtct agaactttct tctggccatc 2580

agcttaccca gagtgttgag aaaggccacc aaaaagtctt tcagttgtgc cttagagaag 2640

gaaataactg agttttaaag gcacacctga gctgaccaat agtaaaggat cttgttgctg 2700

ggaagctgct tggggttgtg atatagtccc aggacgtgca cttctgaaaa tgcagtgtgc 2760

gttcctcatg ggaggatgag cctgctgcgg agcactggct gaacccagtt gggtctttgc 2820

ctggtagccc atgtggcaac ccgcactatt tgtccttttc tggggaggag ttttctgtcc 2880

ttggacactt tgcctggtgg cttggccttg tgagactgcc agtctgcctt ctgctcaagt 2940

aggatgaaga aaaagcaggt gaaagaggac agggattggt gcaagaacct tcagaggaga 3000

ggaggtgaaa tgctcctttt gactctggtt cttactccat tgtttgattg aaatcccaag 3060

cctttgtttt gggaatggtg tgcttagcgt gaactctgct gttgacctgg gcttctgacc 3120

ttgagatgtt gggcaggtgt gtggacaggc cctgggcccg ttgcatccca gcctctggct 3180

gctgttactt gcacgtgctc tcatgccctg acccagcagg gctttgagct gttgttactt 3240

tgccatggtc attctagcag ctttggaaac ctctccaggt taaaagtctt gcgtaagtga 3300

gagtgggagc atggccttca gatatttggc cacatccttc ctggtgtgtt acagagaccc 3360

aggaagagtg tagttgaacg aagacatgtg caggtgtccc gggccttgaa cagcttctat 3420

tcagagtttg gccttgcgaa ggctgtgcca tctcaggtgt gcctgcagtg tgcagcaggt 3480

gtttgcagct tcctctctgc aggtttcttg atatttaatt tcatctttta atatcttctg 3540

ttaactcaaa ggaaattctt agtttgacgt atgagagaga ctgaccactg tcagcatagg 3600

acatggtcag ccgtatctca caaggcccct ggtgagagtc gtttccaact tggtgcatgt 3660

ttttttcgat tctttcttgc aaaggagtca gagcttggag gcgcaaccag gatcccctcc 3720

tctccctcta gcctggcctc actgacataa agtagagcag gtgtgacctg tctggaacgt 3780

ccttgtgatg ctcagcaggg cctgctgcag agcacgggag gcatcactct aggggccttt 3840

ccctcccata ccttcctgtg agtgtccagg atacatagaa aggctgtcgt gagacctgcc 3900

gtaaaggatg gcggtggcac gtgtggacct tgctttctga gtttcactgt ctgagtccca 3960

gaggtataag cttgtggaga gaagtgtaca tgatcacact aagcagatac ttgctcctgc 4020

actgttggag gaggaggagg gattaatttc ataatttcat aaatcaactc ttccaacact 4080

cctcctgttt agtaatagca tcacttgttc ctgtcttttg ttccattgcc aagctcccca 4140

aggtgaaatt gaaaatagag tgcaagacac aggctgtgtt ggagttgagg aaagttttgc 4200

tggagaactg cttgcaccac gtgtctggtc actgatagat gaggactggc caggtcagga 4260

cagctgacac tgggagaagg ggctgcccgg gggggcatga cagactctgg aaaaggaggg 4320

ttggagtatt aaactggctg ggaatgagag gcctctaatc ttttctccaa aaagaaaaaa 4380

aaaaaaaaaa aaaaggctta atgctcatgc ggtggaagtc agagtgaagc aaagtgagtt 4440

ctgtctgtct tgctgctatg agcgtgtgat ggaacaacag tgtcatttgc tttttctcaa 4500

atatttaatg catgtttgtg acataatttt tttaagtaat ttcaaataaa tattttaaag 4560

taaaaagttc taagattttt gtgtctccag gtaaagtctc aaactgtctt tggtcactaa 4620

tatgagattt tgtcttcatt ttaaatggat tcatgtaagt gtcctgtggg agaagagtta 4680

atggttatcc ttggaaaata agaacttttt atgcctcagt taggtcatat ggtttaggat 4740

ctgattttgt agttgtggag taaaaaaggt tgtttaagaa aaaaaaaaca aaaaaccttg 4800

atattcaaat tcagaaactt gatttttgag gatgcaacca gaatttggac taacggtgga 4860

gagggctggc ggagtcagac cacccagact cgcagaagat tgaagaagct gcagtgctcc 4920

tgtggagagg ccctttctag gaggtgtggc tggcttgtca gtgctttctc ttctctgcag 4980

tgaattggat ggcaagcctc gccctctttg aaagctgcca ctctgagcct gccttgagag 5040

catctcaggg agggcagaga ggtggcctcg gtcagcgctg acaggtgccc aaattacctg 5100

acctgttgtg aacatgtgcc tgagtgaggt ggccaggatg ccttttctcc caacactggg 5160

gatgtacact catgcaacat cctatttttg agatttctat gttgtggtag ttctctgttg 5220

ctgtgtagca aattagcgta aactcagagg catagaagaa cactcattta tggtcttgtg 5280

gattctgtgt gtcaaatcag ggatggctgg gctgggttct ctgctcaggc ttttgcaaag 5340

ctgaagggtg ttggccagct gtgttctcag ctggcactca gggtcctctt accagcgcat 5400

tcctgttatt gttagaattc agctccttgc aggatcgaag tccttgattg cttgctagct 5460

gccagcaggg gaattgggta gggctctctc agcttcttaa ggccacctgc attccatctg 5520

caaagcaagg tactttgaat ttctctgacg tttcccgcca gctgcttaga agcccatgga 5580

agccccctgc ttctatgggc ttgtgtgatt gagtcaggct cctgcgaata acctccctac 5640

ctgaaggtca tgtagtaata caacatgatc atggtgtgat aacctcatca gagccacagg 5700

ttccaaggag tagggtgtag gaccttgagg ggaggaggtt cttctgtggg tagacttccc 5760

ctggcgtgga atcggttgat gaggaggttg tggttcttct tgtccaacac ttttcccctg 5820

actggactcc agcccatcgc aatgactctt gcagattgcc ggttctgtcc tctggcttgg 5880

tggttactgc tgaactcagg cagccaccat aaccaggaga acctttctgt gctgcagtca 5940

gatggacatt ctttaaaata tgtcgtttaa gaaaagtttg caggaaagcc gtgtgaatat 6000

atgaaactac ggtgattgaa aagtcctgtt tgtgaggtgt cctgcattgg ctggattagg 6060

aaaggggtca ttcctatgca ggtgggggtc gatgacttac ccaagagtca cctctggaac 6120

attctcgtat gttcatagca gtccatcttt gcagaaggtg tgggggacac ttgtcctgca 6180

agcccaggtt cgtaggaatg ttagcttccc cagacccttg gccgcagagc accgtgcctc 6240

ctttaggagg gacaagaaaa ctcccatatg gttcttccct ctgtcccttc ctgagcccct 6300

ctgagtgttt ggctcttgtg gagttactgc tgctataaca aagctgaccc gactgccctc 6360

ctgagtctcc tcagggaagg aggagctgta ttgtagcctg cattcttagt gccaagcaca 6420

cggtagccac taagtatgta tctcccaaga aagaagagca gaaagaggat ctgccagctc 6480

aggagggcag gtgggggatg gcaagtctgc ggagtgttca taaaccaaat gctaagggaa 6540

acttttgttg gttgtcttag aattttaaaa aataaagtct gttgcagttt atctgctttc 6600

cttcctggag agtggctaaa ctaatgttct cttttacaat atagaatgcg agagcagaaa 6660

acattcagga aaattctata ctgtatttga aaaacatcac catttagttt taactgctcg 6720

ctcttattat aaaaattaat acctaactat gaaaagttag aaagcctgga gaagtatgga 6780

gatgagttgt ccaccattgg gccacctaga gagtgcactg tgagcctgtc cctggtgtcc 6840

tgtactctgg tgatgtgcac tgcatttgct ggcagtgagc cagggagtgg accacatccg 6900

ggcctgggcc gggtggatct ctgcagaagt ttatctctcg gctgacaggg tgggctagat 6960

aggagcagct ctgagggtcc ctattggcag ggaatgtttt tgattatcaa tgacatgcct 7020

ttttgttgtg ggcttgtgat ctttttcttt cctaaatcag ctgctgtgca taaccagtta 7080

ggctctcccg tggcttaaga ttggaattgg tttcccaatg ctaggatgtg ggtgttaggt 7140

ggtttctatc tttccgtttg aaagaggttt cagatcagtg taacatttct agaatcctgt 7200

tgatctgaag gaatggtaga atgtagtagt ttaagggaaa tgaaaagttg aattattttg 7260

atgtttctgc tttaaacctg ctgggtggag tccatttctg agcactggga gccacgtgct 7320

tggctcttga gagcctagct cgatcagccc atgtcacaca ctcacaggtc tggctttgcc 7380

tggtttcgcc acggtttcta acttgagcct cagtttcccc aactgtgaag cggagcctgt 7440

ggcacccacc ttagagcaca tgaaagactt ggaagaggcc gggtagcctg taatcccagc 7500

actttggagg tcaggagatc gagaccatcc tggctaacac ggtgaaaccc catctctact 7560

aaaaaaatac aaaaattagc cgggcacggt ggcgggcgcc agtagtccca gctacacggg 7620

aggctgaggc aggagaatgg cttgaacccg ggaggcggag cttgcagtga gtggagatcg 7680

cgccactgca ctccagcctg ggtgacagag cgagactccc tctcaaaaaa aaaaaagact 7740

tggaagcact ctgtgagttg tcatgcaaga gattaaaaag gccaccactg cccttttctc 7800

ctctctttaa ggaaattgaa accaaaaatt aagtccttct tcttgccagc tggacaggaa 7860

aagccttttt cttggttttt tgaaaataca gctttcactt tcagatcaaa gtgaaaactg 7920

ctaaagactg aatgttctga gttgtgggag tggggggctg gaggggtgtt atgaattgaa 7980

agatactttt ctatttttaa aacattttaa caatgcctta ataatatctg ttctagtttt 8040

gtgttttttt tttttttttt tttaactgtt ctgaaggtac atcagcactg ttctacagct 8100

ttaaataaga atctcatctc cctagaggca agggtactct cgatgtattt ggtcaggggt 8160

gaatgtgctg ctctgtgtaa ctcgtttaaa gttggttaag gtttttttta ttttgtgcac 8220

atagtagaag gagtgaatga agtgttttct gaactcttcc agcttttaac atagtattct 8280

gtgtatagcg aaagaaaaca aaattaaggg ccagggaaca ttaagaaggc aactagaaca 8340

gcactgtcca gtagagcttc ctgtggagat ggaataattc tagttttgca ctaatacagt 8400

agccactggc catatgtgac ttttgagcac ttgaaatgtg acaaatgcaa ctgaggagct 8460

gaattttaat tttatttact tttaattaaa atttaaatgg ccatatattt agacagctct 8520

gaactgcagt aactttagac tctatttgaa acagcgtttg attcagtaac tgttgctgaa 8580

ataaattgaa actcatacaa cagtaaaaac tgtgttactc agcaagttac cactgtgaaa 8640

gctctagaaa ttgtttgaat ttccaatgca aatccttttc aaacagccgc tgttttaata 8700

gcacatgaag cataaaatag gtgcatagca gcgcaacaca gagcaacacg gagaaactat 8760

tgtgacctgg agtgtctcca gtccagcatg caggtgatag gtctctcagc gtttttgcac 8820

acaggttaat gatggtgcag acggtcactt ccttctctga acagccttcc tggtcaccag 8880

caccactgtg gctcatgtgt gtgaggctct tttggcttag ctctctacgt gagtttgctc 8940

cttgagttcc cagagctgac ccatgaaatg agtgatatta ctcctgtttt gtagatagaa 9000

aactgaagcc ttgacaggct gacatgacct ggcaaaaggt gctgcacttg gaaatgtcaa 9060

ttcacggctg acatctggac actttactcc taactgttca gtgaacaaga cgttgctaac 9120

atgcggggga tggaacctag caactcattc tacaagtatg gttcaaatat gttggtacag 9180

ggccttttgc tttgttttcc taaagagatt agattgagat gtggcggagt gctttgacag 9240

ccaccgcagg acaaagttga cagctctggg gttggggagt gttgaggatt tcggagggaa 9300

gccagtcctg ggcagtagtg cgctctgggt tcgtgctttc tcgaggtgtt ccagagctgg 9360

cctggaggga ggctgcggtg cggcagcggg atttctgtca cctggagtat tcttagaagt 9420

tgcattctat gaaaagtgga gcatctgatg agctgtttac tcgctgttgt atctgacggc 9480

agttgaaaga caaagcagga ctggcagcgc agccgcctca gtcagcactg ctgcgttggg 9540

ggcttgacct gcagtctcgc aatcctgggc aataactcat tttcaagaaa gaaaaattaa 9600

acattaagtg attgaagcgt cttgcccaag ccgctactag aaaataaagg tgctggtgct 9660

caggtgcagg tctgcatggt gtgcaaacct gggctccttc ccacaccccc tcagagaggg 9720

cactggtatg ttggagtgaa gagccacgca agacctctgt gaatgggcag agatgggccc 9780

gtggcgcaac acagtaaaat gtattttggt tatgggcatt gtctctaaac ttatgtaaaa 9840

cattataaaa aatggaagga caatgatgaa atgatggcca aaaacataga aaaggatacc 9900

ttgcatgtac tgtgaaatgc aaagaaattc taaagtgtca ttacgagtta cctcatggaa 9960

gaaagcaaaa ggtgaatcta tctagagttt gtggttctga ctcacaagag actgatgttc 10020

atgctgaagg acaagtgtga tgggtggaag gatagagcgc caagaccaca ctctaaagat 10080

gggaacctat gggaactgtc cagggagatg aaagcatgga atgaactgaa gcttgtggac 10140

ttgttgagta gaaagagcct tttaggattg gttttagaat aaaataataa ggcctgtggt 10200

tggggaagat gacttgctgt tcacagagcc tcccttaaca ggtggggacc tcagcttttc 10260

ctttgctgcc atcaagtgag tggtgtacag tcctagccac agtagtaatc tctactggcc 10320

tgactgagcc ctcacccttt atgcagtgtc tcctgccacc ctcctgggag aggctgttct 10380

cagcatagct ggcctggggt cacacagctg gtaggtgtaa agctggcgtc ggagtccagg 10440

tagtctcact ccatagcctg cctctttagc caccgcagat gtagagcaaa gcaagaattg 10500

tccaaagagg taagctaata aagaggaaaa caggctgggt gcagtggctc atgcctgtaa 10560

tcccagcact ttgggatgcc gagaggggtg gatcacgagt tcaggagatc gagaccattc 10620

tggccaattc tctgggcgtg atggcacgca cttgtagtcc cagttacttg ggaggctgag 10680

gcaggagaat cccttgaact caggaggcgg aggttgcagt gagccgggat cacgcaactg 10740

cactccagcc tgggtgacag agtgagactc catctcaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaagg 10800

aaaacaatta tgctgagttc cagtaatctc tgggtccaga gaagtgatat ctgacttctc 10860

aggagagatg ctgatgctgt ctgagggcct gcccagtctc cgaatgattc agacactcca 10920

gggatggaca gttagtgccc taattttccc aagaggattc tgagggtgac ttctctcaac 10980

ccaacaggag gacctggtgc tgtcatcacc agttggagag aggctgtttt gtgaggctgg 11040

ggaccacctg ctgtgtgtgc cgtcttacac tgccatttgc tgatcgcttt agagctagag 11100

gttgtttcta agagtacttc gtgctaacta aaaaatgacg acattgtttt tataaaactg 11160

attcatggtt tgttttttga agcagaaagc tctgaagtca ctcagtccca ccacccagaa 11220

ggacaattag gtgactgtca ctataggacc tctctaggct cgtgtagatg gacacatgga 11280

ttggtcagta gaaatactta cattaaaagt cttatcttta cataaatttg ccaaattatt 11340

aattttgctt gaaagggaaa gatgtctaac ttcagttgga aatactggtt tctgagagat 11400

agtgctgagg ctaagaacat aaaacatgaa aaccgtaagt ggctaagtgc agaaacatca 11460

gagtaaaatc tttgatgaag tcttggtttg cttgggctgt gtaggttgga ggctcagcct 11520

ttgtttctcc ctcctgtggt gcccagtggt ggtgtttctg tgtccatgaa ttttcagcat 11580

ctgtagtttg tagttatgac cactactgca cctagccctt actgagggcc agggcctgtg 11640

ctaagcactt cccagtgtgg attcattaag tcctcataac agcaccatgt gggggcagct 11700

gcgtccctat gtcgtacttg ggacgcgatc tgaccccagt cacttcgggc tcctaaaggg 11760

tctgcagtct cgcctctgcc tgggaaacca cgatttgcag catattccac agacctcatg 11820

cttatcacca ggaggcttcc tgggactgct gtctgaggtt tctaagttcc taacgtggtt 11880

catgcttctg gtgagtttct ttgaggcgac atacccagca ttgcctctgg tcagctcagc 11940

cctgtggtcc cgcgtggcat cctgcagtgt cctctggctg tgactcgtgc cgcgccacct 12000

tgacctggca tccactgtcc tccactgcgt ttgcaggtgg gagccactgt tggtgccttt 12060

tgtcatgtgt gttgaatggt cagggtccca aataagagct gattggggtc attctccttg 12120

aatctgccat gtgcctggac cactctttgc ttcagaactc acacatgttg cctgtcctct 12180

ctggcttgga gggttgtgtg gaatcaaagg tgagacccag tccccaggga tgggcgtttg 12240

cctttgattg cccagctgtc ctgagcgccc tcgcttccgc gcccagctgc tgcctcggtt 12300

gcttgcttga ggatccggat gtagactgag gttggcctta atgtggcagg gggtttctct 12360

tgagccttgg atactttgct actggtccca tcttcctgtg agtgggagcg tcccgcctgg 12420

cccagcctcc cagcggtgac cttagctctc ttagtatatg ggctctgcct gccttggtcc 12480

ccagcttgcc accctagtgc agttgctgct tcgctcttgt tccgctcctt gtctctgtcc 12540

accctgtgct ttattgatgt gtccttactc ggtgttttct gtggagcagg gcatcctggg 12600

cttcctctct gatccctggc tcctgtgctc ttccctgctg ggctccctct tcctttccgt 12660

tttctgctgt gttgccctca cacagctggc atgccacgga tgtcgctcac ccaagccctt 12720

cctagtgttg ctcaccaaac acctcccacc ttgcccccgg gaccttctcc ccttccaggc 12780

tgcaggcagg ctgagggcct ggcatctcag gagtgccgag gctcagcggg aggcagtggg 12840

gcctttgctg gcagctgggc tctgcatcct gactttctga gggcttagtc cttttggtcc 12900

atcttgaatc tcctccaggc ttttggactc tctgctctgt agctggccca tgggaacagg 12960

tacactcagg cctggtctta gactccacta cttgggctgt gccggtgccc ttggtgtcct 13020

cttagtccgt cccacctggg ggccccatcc tgctgtccct tgtgccagag tgctgtcctc 13080

ttgtctttcc acaactggct gctcattgcc tttcccatct cagactcagt tccagcccct 13140

tggtatcagg gaggctctcc ttgagcaccc aacctaaagt tcacagctgt ggttaccagt 13200

ttaaatttct gcctagcacc tttttggttt attttggcta cttatctccc ccatcatgcc 13260

ccctgtccct cccatataaa ctcagtgagt agggaccgca tcatcatcct gcccacagct 13320

ctactgtctg tatcaaccgg gtgcgctacg cagaggctca tggtaaataa ctgcagacca 13380

cgaatcccat ctacttgctg tgctttaata ttggcttaca tctttggatc cagtgagttc 13440

ttttctctct ccctctctct cgctcagtca tacttacttt gtgtaattgg tgatttccag 13500

ccttttgtat agtcctttct tgaatagttg ttttctgtca tcttggcggg gcctcagggg 13560

gttgactgtg tggagggcag gggctgcaga gctgcagctg ctgcctgggc tctcatggcg 13620

cctgcgaagt ataggcaggt gctttgcctc tgagccatct gtagaatggg gtgacggtgg 13680

tttcatcaga ctcagtgaag cgtgtcatac agtgagcgcc tggtcacagc aggcagatga 13740

tgaatgtcag ctaatgagta ttcatcacca atgaatagta acaatttttt ctactaaggc 13800

tatgtaatgt agcctcggaa tcccactcag cacagccccc tggcagcagt gcctttgaga 13860

gctggcatgg tcgagagacc ctggttggcc ttactagtgt ggttggggta cttgagagaa 13920

ctccttcctc acatagctct tccggtgttt agtctttgca tctggaggtt tttcgcgatt 13980

gtgggatagc tttttcaggg gccttgcctt tggcagggca gggacgtgta ctgctgcaat 14040

ctggggtatg ggataacttt ctaaaccaga cccagaactt gacggccgaa ggggcctctt 14100

agccatgcgg ggctaggagc tgacacaggg tcagcagcac gaggtcctgt ggtgctgggt 14160

ggcagagccc ggagggagcc cctgctggtg tgactttagt gtaaaggctg cgggatccca 14220

aattcttaca gaagacttaa gacgggcaca gtgatgtctg ctctttgacc tttgcagtat 14280

gaattagtaa aactgaaatg attacgcttc atttattagg attatgaaaa caataatgta 14340

cttattgaag aaaatgtgga aaatacagaa actacctata atttttctat tgttaacatt 14400

tgagcatatt tcttgtcact tttaatgctg ctttaaatat gtagcaaatg tatcattttg 14460

cattaaaaaa aaatgctgct agcatttcct cctgtcttta aaaagctctt ttaaacaact 14520

ttaaaatatt gtatagatag atgtacacaa ttttctcaat aattggagtt atatttacat 14580

cttgtcactc tttaggaaag gactggccta cttctgtgtt gggttccttc ctgagtgtgc 14640

tttccagctc agtggctcgg acttcaagat ggagacttga gtcctggttc tgtatagtct 14700

tgggccagtt accatatgtc tgatgaatac ttagttttgt catctgtaaa atgaaaatag 14760

cagtacttgc ctcaaagact atttgggagg atctagtgtg aatgttggta atgcggatat 14820

tgtgtagtgt cccagaatat taatgttttt agcctcttgg ctcttactct gtattgttgc 14880

cccaaaagat gatgttcgct tcttattttt catccagtgt aaggatatct ggaaagacaa 14940

agtatagctg ctttcatttc aaaagtgatc agctgcttga gctagcaagc aagctagctt 15000

ccaggcgcag ttatgcagtt tcacagcagg cgcggttccc tcggagcacc cagaggtgct 15060

ctgtggtcgt cagcagtgat gctgtggctg cactgccaga cggggtggca ggtggaccag 15120

agcagatgtg gctcaggaag tgccgtcttc ttcgcctctc cttaatctct ttcagagtct 15180

gtgggttctt gattgcgctg tgggttgctt cagactccag tattaggaga ttgaacccct 15240

tgggtttttg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgctgagc tgggttgagg acatgttaag 15300

caggtggggt gcctcccctg ggtttgctcc tggtggttcc tgtagtgtgg ggtggttctg 15360

agtagttctg gccccactgc tggggtatct gccgactcag tttgtgagat gtggagcttc 15420

atcctggtct ggtgcctcat tttcttcttt agcagtgggc ttagaaccaa tgcagattcc 15480

caagttaagt atttttcctg tggcttaatt attacaagtt tctggtacct aagccctttc 15540

ttactttctg ttctgagggg aagaggagat tatggtgttt ctccccactc cgagtggccc 15600

caggaccttt gcatggcatt tgccgtgtgc ttgggtttgc tctactgggg tgaaagagta 15660

tcatgccccc cagcactcac aaaggcacct ctgctcaccc tccggtgagg ttctgactgg 15720

ccctgggaca tcacctgctc caggatcctc tgtggctcat cccaggagag atgtgggaga 15780

gggaagggga aaaaaggctt acacttgtcg agtggaattc ctgtaggtct gagttccaca 15840

ttgattccta agctgcagaa cccttctgcc ctggctgttt tgtgaatggt agtcagtctt 15900

aaccttttta accaagttaa cattggctgt ctcaggaggc tcacagctcc tgctcctcct 15960

ccaggggagt gcgccctcct cctctgtcgg tagctgtcag gcgccccttc cccccgcagc 16020

agattctcct gggtccttgc ctggccttct ccttacacgt gagcctgcag cttcattcac 16080

agccgctgtg tagaaagaca ggcacatcga taggtccctc cctgcccaga gtgggtggaa 16140

ctgaggcaga cactaaaagc agctgactgg cagccctaga aacacgaagg gtttcattta 16200

tagtttcagt ccttttcctt ctttcgagcc ttgatttaaa aaagaaagga aaaaaaaaaa 16260

gccttgaaat cctgcttctg gattttctaa tttgtgcagg tattagttgc cttgtaatgt 16320

aattaaaaat aaataaaaat gatttataat tagctcatta actgtatcag taaatggatg 16380

ctttaaagag gatcattgat ccctcaaaac agaagcaatg cagtcgttcc ctcattatgc 16440

tgtacttgag atttgctcta gcaacccact cttcctaaag ttaaatatta atccagaccc 16500

tatcagtgca acgtagtagt gtctgaatca gttgtggttt tggtgtaata gcatcaaagc 16560

atgttataaa atctacaaaa ttgtagtggt taactccaaa tatttcactg agacattatt 16620

tttttgggca aaaatgcata gtgaacattg tggagctgag gtgaggaact tcgatttctg 16680

agaaaccacc cgttttaagg gttttgaagg aagagttgga ggagaagagg gagagaataa 16740

attaacagtg agtttccagt attttctgtc gcattttacg ttttagtgga aaaaactggg 16800

aactgaactc acatgcagtt tgtaaaatca ctttttccct agcattcagg attgatgaga 16860

tttaacgggg tgttaaaggt aaactgaggc acataattaa catggacaga actgtatacc 16920

tgagtgtcga gagctgtgag atttcagtga gttgggagac tggaagcgcc cattcttcag 16980

agtgcatctc ctcatgttca gtgggtttaa ggtgctgaag cctttttttt tttttttttt 17040

gaaatggggt cttgcactgg tgcccagact ggagtgcagt ggtgcaatca ccactcactg 17100

tagctttgaa tcctgggctc agcctatcct cccacatcag cctcctgact agctgggact 17160

gcagacctgg gccaacactc ctggcttgaa acaacttgta tccagattgg aggagggcgt 17220

gtttgttttt gtgacctttc ctttccctta aacattgaat aatatcagac ctttgaccat 17280

cactttgctt aaaagaagct actggattta aagtctagga gaacgtcctg gacaagcaaa 17340

cccatagtat gttcctgtat gttccccacc cagagacctg gattataaag tgtttggtgt 17400

gcttcttctg gccccactgt tctttctaaa gtgtttcatt ttacataggc tatcctggct 17460

tcagggttgt cacctctgcc tttgtgcccc ttagtacctt tgtcctttac ctactgcagt 17520

gcagctgcct gttcttcggt agactacaaa gaagtcactt ttgaacaact tagaaattgt 17580

gccttgtggg gaaggcaggg cagagccttg gggctgagat ggaggaggag ccagctctgc 17640

cctgggaggg atacgaagct cgtgaggcag gggacgggtg gagttgcttc acctctttgg 17700

ccccagcttc aaaaccagcc agtcctccct ggctttggct ttaattcaag tttggacaaa 17760

ctggaaaacc agttaatccc attagctcag cttctaaagc cgaaaatcat gccctgaaat 17820

gggtcatctg ttttcatcaa tagctttatt agctatggaa taatatagtt ttgttctcta 17880

actgtaggat ccttcttttg ctcttaaaat agctcagtaa gttgggtctc ataaatacat 17940

gcagcaagca tataccagat aaatacgaaa acattgctga tcttgctttt tagtactaaa 18000

agcagaaaat cgggaattta ctaaatggag aagtcagtcg ttaccttttg atgggtttgg 18060

actcttgcaa ggtagtgatt gtaaacaaga gtgatctttt gttgtttttc aatgaacttt 18120

attctctaat ttttagtaaa gcacactagg aaataatgct tcagaattct gttttctagt 18180

agtttcttga ttaaaatgaa aattcactaa aaaaaaaaac tctgctgtca ccgtttcctt 18240

ttttcttaag ataaccagga aatgaatcat tcagggtttg ctccatggtg atgggtcagg 18300

aagctgcccc tgctgtgtgt ggggcaggag gcttgctgat gtcccaggat ttcacttcgc 18360

ggagacaagc atcagaggct tgcttcattt atagatccta cttcttttct acaccacagc 18420

caactcaaaa tggtgacaaa atctaagacg aggctggaag tcaccgcaga gcagttggaa 18480

gctctgcccc cggttctggg ggcagtgttc ctggagttgt gtccttcggc cccacctcag 18540

tttgtccatt cagctcctcc actgagaatg agatttgtat cataaaggag tttcctgggc 18600

cactcgcagc ccccagctgg agagtgccag cctaatgtgt caggagtagg gggcgaggcc 18660

agagggctat gtgccagctc cttccctaag aagcctcctg ggaaagccct cccaggcact 18720

tcccaggtct cactggccgc ctgagggtgc tcaggccgcc tctccgctgg cactgcttcc 18780

cgacgtgccg ccagcctttc tcatggggac ggggatgatg gcatgcttgg ggggcagcag 18840

ggccttgggg ctgcctcggg ctgtcagtgt gtcctactgg ttctgagatg ccacctctgt 18900

gatccactgt agagagatat attctattat ggtcaatgca tagaaatttc ttcgatttag 18960

agactgaaca ctagtgagca gaactgaaat tgagctctta aaagattttg atgactggtc 19020

tgtggatagc agactttagt gtggttatta tgcggacatc ctgccagttg taaattccct 19080

ggaggtttgg tatgtgcgaa cataagacta aacttatttc tgttttgttg agaagaaatg 19140

attaaaactt ttcattgatg tacttctgta acagactttt ggagaattga agcagtgggt 19200

atattcagta tttgaagtca tagatgaata aaggaggtat gtcgtagttg gcactggtgg 19260

catggcctgt ggtcagcaag gcttttctgt gaaggtatgt gcacagcttt ctaaggcagt 19320

gaaaagtcct ggcaatgtta gtattgagat aatccaaaac acttagtgac tgtttacatt 19380

tttaaaggga tagttggcca tttaaatggt ttctgctaac agatcaaatt attcagtgca 19440

gaggtaaaat attttcagaa tgttaatttt agatgtcatt ttatagagaa tgtatatgag 19500

caatgacaag gtcagcaaaa tatcttagca aaacttgatt gattcattcc atgcacaggc 19560

aagcactgtt ctgggcaccg gagatggagc agtgagccat tgcgtccatc cacagatggc 19620

ctccaggatc gtgcgggttg cagggaggcc gctgggtggg cacggctggg cagtgccctc 19680

atgtgggttt tgttgggctg ctcttactgc gcactgtttc tcagtttggt cggtgttcca 19740

cctcgctgcc tggcccccac ccctcgcctt ctgagggcct cacaaagagc caagcggaag 19800

gcaggctggg gactttgcag gtcagcccag aggcttcatg atgatggttg gtactgtccc 19860

gcggccacca tcagtctcac gctctgcctc gtgcgcagtc ctggcgtcgt gcggcacctc 19920

gctggtccct gctctcctgg aaggaagggc ccagtggggc gcttcgccag agccttcttg 19980

tctgactccc ttacccaaga ggcatggatg gcagggccgc cggctgtgtc ctttctgttc 20040

tgaaaaggca aaacaaaatt gttcttggct cttattatct aatatttgtt acaatagttg 20100

ctcactttta ggtccatttt attacagatt tcagacaggt gtggttatta gtgcccctca 20160

ttgtttggac acaatgccaa tgtcaggagg ccccgtgttc ccctgagccc cctttctgct 20220

aggagcacgg gcaggccacg cctcgccatt aatctctcct gttttagggg aggaatacca 20280

ggccaccccc tcttctctct gtgcaaggga acagacattt gacaaaaacg gatgccatgt 20340

taacgctaat tttgtttgtc tgaggcagat tgcagcaggt gttatctcca tactcttcct 20400

ttcctggagt gttgagcatg tcctgatagt aggggatgcc ccggagggtg gtgaatgtgg 20460

ctgcacaggg cctgaaagct atttgatgtt gctgttactt caggtagaac ttaaagttga 20520

cagtacattc tactctgcag gcagaaacct ggagtggcat tttgacaaat tggaatgccc 20580

tgtttatagt atgctttaat gagttaaatc tgggggatgt ggatagaatt ttagcatcct 20640

agccttggta ttcttccatg actttgggcc aattatttaa taattccaag cctgcatctt 20700

tgttagaatc tctctaagtt tctcctgttg ttatcctcag aacgggactg tgaggtacag 20760

gaggccacgt ggtgtagtgg tttaggtgga cagacttccc agtgctgttc tcatggagag 20820

cccaggcctg tgcctagctc tgcagtgaca gtgatagtga ctggtgaagg taaaggggtc 20880

cacccagacg ctcttgctga tggagagagg ctggcctgtg gctcttccct ggggtggata 20940

ttaacctgct aacgtgccgt atctagtcct gcttacatta ctaagtggta ggaaatttta 21000

ggtaacatct cagactttaa agtggcctac tgagcgggta gaaaagatag ttaaatgcct 21060

agtatgtagt tggtgctcag taattgttga aaagatagaa gctttacttc aaagctcttg 21120

tagtttgttc agtttggaaa aaatatttta atgttgggat gtattaacag ctggactggt 21180

ggctgtctga attgggacca tggttagggt gacgtgtttt cttacttttt tttttttttt 21240

tgggtgagac agtcttgctc tgttgcccag gctggagtgc agtggcagaa tctcggccca 21300

ctgcagcttc tgcctcccgg gttcaagtga ttctcctgcc tcagtctccc gggtagctgg 21360

gactacaagc tcgtgccacc atgcctagct aatttttttt ctatttttac tagagatggg 21420

gtttcaccat tttagccagg atggtcttga tttcctgaac tcgtgatcca cccacctcag 21480

ccacccaaag tgctgggatt acaggcgtga gccaccgcat ccagacacat gtttttttaa 21540

attaaatgtg atagataaaa ttaggctgca gggatggcct gatttgcagg tgcttcatga 21600

gcaagggtgc ccagcattta tttgctgcta ctggagtctc atgtgtgctt gcagcctagc 21660

cttaaaccct ctgtgggcgg tttggaatac ttcctccaaa tgactttttt ggcagggtgg 21720

gaagtggcga tacttcaggt gagagacagt tgaaattaac tttacacaag agccaaactg 21780

taggctgacg tggggccact cacctttgga ctcacccctg gcgggtcctg taagaggtgc 21840

tatatgcttc cactttgcca gctgttcgtt ggccctgttt tgtcttctgc tctttgcttg 21900

attagtgaaa cttagaatgg aaacaggcaa gtttgatttg ttataattcc taggagttct 21960

agcattaagg aagcagatga gtttgatttg ttataattcc ggggactgga taatttgctt 22020

tctcctctct ccatctttaa ttaatctctt aaaggaaagg aggacgacag cacttttcct 22080

gcagtcatcg gtgtaggctt cagccttaac tcatgacata ggctggtgcc actgaccaca 22140

gggctgacct cagctcttgg agcccatggg gtgacaggac atcagcacct ttgaggtggc 22200

ggcatgaggc gtcttccagg ccttgctcct agtgcttgaa aacactgctt tagttttttg 22260

ttaagagaga cagaggccct acttactcct atcccacagg catctggctg ttgacctcct 22320

tgttggcctc ttaaggagag aatacttgag tattgaatta gatcaacttt tctgcctcca 22380

gggaccctgt ttctctctgc tgagactggc agatggaacc tggatttagt ggatggtcac 22440

caggtagctt gggcgacctg ggccgctggg cccctgagga ctcacatatc ttttttcctg 22500

ttcatgtgtt ccttccccac accttggccc attctcagtc cctcccatcc tccttagctg 22560

aagcactcag ggaggtgctg atggggcctt gggacatgca ctggagctgg gtcccaccct 22620

cagacctgtg cccgactgtg ccacattcat tggaaagctg ctttcacact tcctggatgg 22680

aattctctca tttttttcag tgcagaatca ctgagatgat tttttttgga taaatcttta 22740

aaggccagtt gtaaatttat tgatacttgg aattgacaaa attcacttgt ttagtgttgc 22800

taagtcatac tgtgtaagtt tgttgaacac agagttttca ttttatactt tcagaggaga 22860

aatgaaactg aatttcatgg ccagaaatat gtttgagtgt catcctaatg taagaacaga 22920

acagaaagcg tggtgacgtt tcattgtaac tctagtatgt tttctctttt gtccattaga 22980

ctacatgagg aaataattga cttttataac ttcatgtccc cttgtcctga agaagcagct 23040

atgagaagag aggtggtgaa acggatcgaa actgttgtta aagacctttg gccgacggct 23100

gatgtgagta tgttctttgg ggttctgtgc cgcaagtcat gtgcgagtaa atttaaacgc 23160

cctgtggtga tgggtcggct ggatccacac agaccttttc ccatttgccc gagaaagcag 23220

ttctccaagt gtgctttgag agggccaggt cgcctgcaat gctaggaatg cacggccccc 23280

ggcccacctg cacctgatgc cttcgacacc tgcggtggcc acgggtctgt gtgacactgg 23340

cgcacactca agtgcgagga ccattggctg agggattttt tttttttttg gagcggggag 23400

aatgatgtga ttgtttctct taagttcacc ttaaatttag aaatttcacc ctgtcaccca 23460

cccctgcttc cccaccacca cacatggtag catataatgt gttcattttt gtaaaacttg 23520

gaagtgttcc ctcatcacac accactcttg cggtgaagga acaagtgttt ttgacatgtg 23580

gagaggggcc ttctggaatg cttggtgcag gcggtgtgaa gcctgcccct ggctggctct 23640

gctcagcagc cttccctgct gctggctggg ctcaggggac cggcagggct ggccgtgctc 23700

tagctgtgag gggcatgtgt gctcttggtg ggcggtgggc aaggacgacc cagttttctg 23760

ctcctcttta aaaatgatac atatttttgg ctttaaactt cagagcccta ggacaaagcc 23820

ctgccccagt gccttagctg tgggtttaag aagaggttga agggttcaaa gctagctctg 23880

gaaagtcctc agctttgaag ggttgtaggg tgaagacaaa acttgtttca cttcttaact 23940

tagagttttt aaacattcct ttttggggca cgtctttaac ttatagggaa ttttctggtt 24000

aattgttaca cagtcccctc catcagtttc caaggtagtt ttatttttta cccaagggta 24060

tagtgagggc tttcttggag taagaagtaa tggtagtgtg gctgcttggt ctgtggtata 24120

cattttaaag caacctccct ttctttcagg tacagatatt tggcagcttt agtacaggtc 24180

tctatcttcc aactaggtga gtaccagact gcatggcatg ggctagtgtc tgtgcttatt 24240

tagaggctgg gatggtgtct gggcgatatt aagggctaca aatagattct ttgtaattga 24300

gtctaagggg aaaaaggcca gctgaaggaa aagactgtgg ttacagaagg aaattggcag 24360

aaagatttaa tttagtgtta tgaattcatt gctttgcatt ttgcctcaca cttaatttgt 24420

tggggtgcaa aaatgctggg tgctggaaac gtgaagaaga caggtgggag gactgtggga 24480

agtaaacgca atagaaaaca ttctgctgat actttagaac atgtgtttga aaaattgatc 24540

ttatgtttta atgaagattc aagcaaaatt ctctttaaat agtattttct aagggttttt 24600

acctgataag aaaatgtcaa acaagtttgc attctaaaat gtaaactggt attttctcat 24660

taaggattct tgatatcaaa ataaatttca gtgcactatc tcattaaaag tttaccttct 24720

gttaacccac tgctagttag catttggagg ctgaagaggc tctaatctca ggatttgggg 24780

gttgatgtta gcagggccaa tgggtaattg aacaggttcg ggtatccagg aatccctgag 24840

tctgcaggag tgatccagtg taggtagtgc tggagtaggt gctgggagag cggggcctca 24900

gcctgctttg ggggcaggcg ttttcatctg aatcccctca catacctagt gctgttggga 24960

gaatcattta acctttgctt tccatcttat ggaagtcttc ccttcagttc agcgaggatt 25020

tgctgtagtt tatgaactgc atttcacttc cttaggggcc atagcctagt gggattgtgt 25080

cttggccttt gggggagacg caggcacatg tgcggtggtg cttatcctgc ccacacgagt 25140

gtgtaggctg tggtaagggg agcagtggct gacgtgcatt ttcttctgtc agcgacatag 25200

acctggtggt cttcgggaaa tgggagcgtc ctcctttaca gctgctggag caagccctgc 25260

ggaagcacaa tgtggctgag ccgtgttcca tcaaagtcct tgacaaggct acggtgagtg 25320

cctggctttg gcccctctga ctgggcagga gcctcgtcac atcccaggtg gttacaggat 25380

acgcctgtgt cacgagctcg tggtatttta cacagttatt ggccacggtt tcgatgatta 25440

atctgcttct ggtatagaca agtgttttat gtttttgttt tatagtcatg atcaccaact 25500

gagaacgtgt ttagtgagtc tgaacttttg ggatttgtga gcccattaaa ctgttcttgg 25560

aatgaaaata tatgattgtg tctactcatg ttaggatgaa taggaaagga gagtcatatc 25620

tgaaagcgga cactgacgtt caggtgctgc ccattttgga gtgtttggct caatgattaa 25680

accatggttt ttatgattac catttgctac gttaaattca agaggaacaa cttagctgtt 25740

ccttcgttgt tccaaaatat atacatatat gaaaagcctc ttctctttgg gggaagtgtg 25800

gagatgagac tgtgtctggt gtgtacttgt taaagtttat gtcagttcaa gattctaagc 25860

ccccagtgac tgggaggtac ttgcctgtcg tatgacagtt cttagctcac ctgtgcgact 25920

ggctagcatt tcatttttaa atttgtctgt caacttatgt agtgtgtgat tcacatcctc 25980

ctagtgttta gcagagcgtc agttaaggcg ggagcttcct cctgcctgtg cggtggtagg 26040

ggagggggca ttcacatgct tctcaggtga ttccttgtca ggtgcttttg attgggactg 26100

ggggcaaatt ttaaaacgtg atatatgcac tgaaaagtgc acatgtacca ggtgcacctc 26160

ttggtgaaag ttaacgaagt acatgtgctc acgtcattgt catgtggacc agagagagca 26220

ggcagcacca gaggcttcct ccaggcccag gttccaaaag gggctgttgg ctcttctcat 26280

gagcatgaga cgagccctgg ctggccactt tctcaaatgc ttatgggcct tattgcactt 26340

agctctccca gccactctca ccagcagaca ctgttgctct tctcatttta caggtgagga 26400

aacaggtgca gagaggtgag gtagtaagcc caaggtgggt tggcggcagt gcgaggcagc 26460

acctgcgttt agcccaggcc gctgttgtct gctgctcctc tgtgtgtgcc aaggggcagc 26520

ggggaggtgg atgggaatcc tgaccaggcg accacctttg gagtagagaa ctaaggtgcg 26580

gttgtcctga ggacacacag taggttgagc agttgttgca gtaactgctt cgtcccagtg 26640

acctcattac tgtcgcatat tggctactaa gtacctcttc ctctgttgcc tgaaggccag 26700

tgtagactgc agggagatcc tggagcctgc cactgctcct ttccagggac cgtcctcacc 26760

atgcagccgg tctgtcatgg gcacaagagc cccggggcga gggccgagtt taaggtgaaa 26820

gcttgtctgt ttggaaggac aacccaaaac tgaatgttcc agtgttactc ctcacctcag 26880

gatttggggt tgctgcggtg agtgagtgtg tgcaagagta gggcaggaga gtgccaggag 26940

tgactgtggg gaggagtcca tgagatggaa aggaagctgc ttcctgaact ctgggtgtcg 27000

gggaaggcat agccatcgag tgttgacttc ttccaaagca gtttctgatg agttctttgg 27060

gaaagtgttt tgtttctctg ccttcttaga atgtgctggc ccccagagct taccgtgtct 27120

ggtggttgca gtggcgtcca ggtgactctg gccccactgg cctgtcctca cacgctgagt 27180

ccttggtggt ttgccctcaa gtgtagacat taaagcccag aataggtgtg tactgaatgc 27240

cccgtccctg tgttgccttt cactggtgtt taaacctttc atcagaccct gattgttttg 27300

gttaaaggaa ctccgttttt aatgcttcac ggctgaagga aaccaaacat tgcctttttt 27360

cctggaagaa cacagtttca ctggtggggt gggcggtggg gcgtgagtgt ggcctggaca 27420

gttgctcagg caggttttga gtgccatttg gtgacagttc ttgttgggga gagtatttct 27480

aaaatagccc tttatttgct gaatctttta ggggaaaggt ttttttggta aaattatctt 27540

aaagagtgaa aacccaaagt agataaacaa taccagtatt gtttggagaa acagtatcag 27600

tataacgtac aatttaaaaa atggctttga agttacatta aattatttca aaaattcgac 27660

caaatagaag ttgggggcca ggcacctctc cccatcccag cacgtagggt gggcgtggca 27720

gagactaact catcatgttc cctgttagct ccctcccctc agtcctcttt gatgcttggt 27780

cacctccggt gctgatccag ggctgcaggg gcgggacaga acgtgggcct tgctgtgagg 27840

ggctggggcc tgggagttgt cctggattca gggactactg atgctgacaa tgttctctga 27900

ccccctttca ttactaagaa aaaacaccaa acctctgtac agctttggca gcattttgat 27960

gcctggctgt ggagagtcca gcatattaaa gcagttctta aaatgaaatc tttacaggta 28020

ccaataataa agctcacaga tcaggagact gaagtgaaag ttgacatcag ctttaacatg 28080

gagacgggtg tccgggcagc ggagttcatc aagaattaca tgaaggtact gtgcttggtg 28140

acctcgcgca gcgaaagtgc aggactggag tgcttatgct cggcggcatt tctcctacag 28200

atgtttacag ctgtcagctg cacacagggg tctttcgtaa tacagactac acttacatta 28260

tttctcctac aatactattt ctagagatac tttgaaatta catagctgtt tttaaaattt 28320

gcttttcttg agtaaccgtt ttatgaagtt gacaactatt ttagagggct ttgttaaaat 28380

gttgtttcca gttattacaa agagactgct tctagctcag cgtgcctcat tggcaggttt 28440

tgcgcagggg tccagtggaa gttgataaat catgaggtgt cttagatata ctcactttgg 28500

gtggtctcag tgcctgagga tgggcagaga gatttggttg agctgatgta tttgggactc 28560

tgaccatgtt cacgaccccc gggtggtcgt gacttccttc ctgttactgt agagactgtg 28620

cagtccttag caggggcaaa tcctgttaca gtagaggcca ttgtagtcct tagcaggggc 28680

aaatccaccc ctgcaatctg gtcccgtctt gttccatttt caagggcctt gcccttcagg 28740

ttcccccttc ccccttgtca tctggtctga aggagcacgt ctgcccccag cacaacacgg 28800

acagcagcag ccaggctttc cctccctcct gtcatctcct gccgctctgc cttccttgcc 28860

accctcactc tgctctcctg ctccggaggc ccccactgtc ctcacggcct gcgtagcaag 28920

cacataaaca ctccagcgaa cgcactggtc tctccttgag ttcctttgtg cctgtggact 28980

cttcatggtg ggggtgcacc cctgctgagt cataaccgag ggagagctcc acagtctcga 29040

ttttcacaag cccctcagga aattaattct tagcgtctcc caaccagttt gagacttact 29100

gagagtcttc agatgggcaa gaggatggag gaaacgttcc tttctgtctt gtgtaatttg 29160

ctatgtgaaa tctctttgaa agtatggtaa ttactcaata aatctttttc ttttggaatt 29220

tacagaaata ttcattgctg ccttacttga ttttagtatt gaaacagttc cttctgcaga 29280

gggacctgaa tgaagttttt acaggtggaa ttagctcata cagcctaatt ttaatggcca 29340

ttagctttct acaggtacgt atgctttctt gcgaccgttt ctgttgagac atgtgtaaga 29400

gtagactttt ccaaccagtt gtcctgtagg ttccagcagc ctttgctctc cttttactat 29460

attgtttcaa tttgttagag gctgatttct gattcttata ttaaaaccct cttgatcaat 29520

gcacctttct ggaggctcct ttgtagctca ttttgtactg ggtgtaacgg ttagtgcggg 29580

gtgcccatct ggttctgtgg gtccagtgca catcagtgca agctcaagga gttctctata 29640

ttcagaaatg tccatttcat ggtaaacaat aaacatttgt tggtgcttgc ctgtgattta 29700

tattgaaaaa aaattgtctc agaataaagt ttggtaccac atatgagaaa aggatttaca 29760

agattgcttt ctcaattgat gaaacctcat tattttgtct gaaattatat gtggtcctta 29820

ttttgttgag taacatggaa aatctatcag tagaaaacag atgtgtttta aaaaatattg 29880

ttaaatgctg tgatgtattg ataaactgta cttacacttt ttaaacattt aaaatcatct 29940

ctaattgaaa cagtattgtg tttatatttt cttgagtgaa gaattctgtt ctttacagaa 30000

tctttcctgt ataatttagc tgcacaactg gatttgtcca tgtttaccat taatgttgta 30060

cttgtgattg tgctgagtga gccgtttctg ttcatgattt ggtaatgttc tcactgtcgt 30120

gaatgctatg atagtagaac cactgggtaa ccacctgtga tgatcgcagc ttccttggtc 30180

tgtctctgca gagatgcttt aagagtagtg aaaatggaat tccatgtctg ttttcttaca 30240

gttcaagtca cactgtcctg ttttcacttt cccctctgag atgtggccgt tagtgtatag 30300

cctttcttcc atagtttttg gacattattt tgaactaaac atgggcctat gttctttact 30360

aatatactcc tgacttgcac tattttcatg gccttgtagt aacaacagct acttaatact 30420

ttgatcatgc atgtgccatg tgtgcctggg cccagggcct cctgccaccc cctcaggggg 30480

tcctttcagt gatcctgtga ccccacagga ggccaccata gcatgagtcg gattcctggg 30540

ttcactgcca catccctgtg cctgtccagt gcccagagct tgtcctgcct cagcggtgtg 30600

actgtggcaa catttgagtt tcttgactga gtgaggggag gaggcccacc ctgccactgg 30660

ccaggctctt ggatatgtga ttttggctaa aagacaagga ataaggaagg gaataaaggt 30720

gaggccagaa ttggaatcct cctcttgtgt ggtggaaata cgcagagaac tccgggattc 30780

ttctgaacct taaaaacatt tgtatgcttt cgagctgcag ctcctcctgg cactctgtgt 30840

tataaatagt ttcaagcacc gtgcttctct gagggatttc tctcatgtgc ccttgtccat 30900

ccctttctag ttggcactgt ccgatagaat tctctgtgat ggtgacggcc acttctgcat 30960

ggtccggcaa ggggcttggt gccacatgtg gctactgagt attgcagtgt ggctggtgag 31020

agcaacaagc tggattttta attaatttgt tttagttcat ttaaatagac atgtgggcaa 31080

tgcaggtctg gacagctgag aattatgacc gtcaggaggt gtggtggaca gtggtttagt 31140

tcagaacaag cccaatgcct gcttttgaag acgatatggc actgaactga gagtggtgct 31200

catctgtgtg caagcaggat ggaagcttgc tatagatatt atgatgcaat actgatggcc 31260

tatactcagc tgaaatcagt catttcactt tctggtttta tgtgataccg ccatactgtt 31320

cagtctaaca ctgacccctg ttggttgtac ttcagcataa caaaattagg atggtgagaa 31380

tctgaaatta catctaccat ccacacaact aagttatgca gaatatagtc aacttatttg 31440

ccaatatttg gttaatcaag tatctgtgtt tgcaggaagt ttgctgtatg gattaacaat 31500

tccaaaaatt aaacgacaat aaaattgaga ttagtacatt gtattccttt tgaacactcc 31560

tcattgaaga ggctgctgtt caggcttcct cgtggtgctg gtgagtgagc gagtgcctct 31620

cactggtatt gccttgaaga ggctgctgga cggcagactt cgttgcatcc tattttcttt 31680

agaacatgcc ctgaatccat acaaattgtg gatgcattgc ttttacagtt gcatccaaga 31740

attgatgccc ggagagctga tgaaaacctt ggaatgcttc ttgtagaatt ttttgaactc 31800

tatgggagaa attttaatta cttgaaaacc ggtattagaa tcaaagaagg aggtgcctat 31860

attgccaaag aggagatcat gaaagccatg accagcgggt acagaccgtc gatgctgtgc 31920

attgaggacc ccctgctgcc aggtaagggc tccccgacct ccactgctgg gagctaggcc 31980

agcttcgggg ggtggggggg aggtgtgggg gctatgttgg ggctctgaaa gcctcgggca 32040

attcatttgc tcttgatgca ggtttctctt tttttttttt ttttttgaga cagtctcgtt 32100

ctgtcgccca ggttggagtg cagtgacgtg atctcggctc actgcaagct ccgcctcccg 32160

ggttcacgcc attctcctgc ctcagcctcc tgagtagctg ggactacagg cacccaccac 32220

cactcccagc taattttttg tatttttagt agagatgggg tttcaccatg ttagccagga 32280

tggtctcgat ctcctgacct tgtgatctac ctgcctcggc cttccagagt gctgggatta 32340

caggcgtgag ccaccatgcc cagccacagg tttctcttat actaaccagt taataatgac 32400

actttgagaa atccttattt aatgcttcta attaactttt gtctttccaa ctgtttacat 32460

tctataataa agcagaatta aggaaaatct ttttttttct gattatagaa gtattccgta 32520

ttcatcctaa atcatttgtt tcccagaagt atgtaatata gaaaaacagt agatgccata 32580

atccctttat ttggacatgt atttctccac ttttttcgta tatggatatt aatgtttatt 32640

attgttatct tgttgaacac atcccacaac gcaaacctgt tagtcacttg gcttttgact 32700

ttatttccta aagatcatct cagggaaaac acattggctg atgtgttttg tttttgcttg 32760

tagatggcgt gatttatgca ggctcttgag tggttttttt ggtagcacgg tgtggcagtg 32820

tatcatccat ctttttgtct gttggatcag tcacattgga gacattgcca ttgtcttcaa 32880

gtgtctactg aaatgtactc aaaaaaacaa agacccacat aatcattgag atatataata 32940

taaacctaga aaagataaaa ttccggtact tagaatatat gtcctttaaa aaaaatctac 33000

acttaacctg attgtgaaga atgagttgta tgtagattaa aattcgaaac agtgcttttc 33060

tgatgaaaag taagctcctc ttgactgact tccttggtga cttctgtgac agatttcttt 33120

gatttgctgt cccagttttc cacacatgag aattcacatt ccattctaaa ggattcactt 33180

cctgcaggtt ccgttagtgt tgactgagtt ggggtgcact ttgggctagc tgcccttctg 33240

actgccttgt gaggcctcct gattgtcaga tcggctatca cactgggtcg gtgctccggt 33300

ctgcacaatg gtagcttttg gcttccttgt gtgtctgcca cctggagagc gggctttttg 33360

tgagctgttg ctccgtctgt gaatggcagc tgccttcatg aggtgggccg tgagcacgtg 33420

ggcaatgatg atgcagacca ggcccctcgg cactcacaga ccgtgccctg tgtatggtga 33480

ttgacagggc ctttgctagt gccaactgcc atgcgtgccc attgtgttcg cctgtctggg 33540

ctttgctggt gagggcctgc ttcagagtca cttgtatgac aagatctgaa atgtggacga 33600

tggtgtgcgt gtggggagag tctgacatag cctttttgct gcagggaatg atgttggccg 33660

gagctcctat ggcgccatgc aggtgaagca ggtcttcgac tacgcctaca tagtgctcag 33720

ccatgccgtg tcaccgctgg ccaggtccta tccaaacaga gacgccgaaa ggtaatgggt 33780

tgcgtgtctg tgtctgggct cagcatgcct gtgggatggt agttacccct ttcctgtgtc 33840

atttacctcc atgaaattta tgaagggatg ttctgtcgta tttcagtaga atttggatat 33900

gttggtgaag gaaggccttc taggaatgtg ggatggctgt atgggattca tccatggttg 33960

agagttgaaa atttctttct tggagatttg acattttctt cagggtcttt tgttttggag 34020

aggtgatttc tagctttcaa aactttggaa catgatgctt tttctccagc cttgaaagca 34080

taaacattca ctttctaagt gaatgtatct gatcacccaa tccctaccat cttctcttat 34140

gtacactcgt cccttgttct acattttggg ccatttttac agtcccaaaa tgtagtcaga 34200

tgtatttact tctgacccag atgatgctgt ggtggtggta gtggtgggat tggagggggt 34260

gggagatgag ataggaatgg gaaggaagag taacgtggtc gtcaagagtg gaatttgaaa 34320

cagtttgata aatctgttcc atggtggatg atggaataaa cagatttcga ggcctggctc 34380

agcagctgct gcaggcgctg gtggtgctgg agctctgtgt gttcctgagc cgctgtctgc 34440

tcggtgtttt caggcggagc tctgggcccc gtgtagggca ctcatctcag taccatctcc 34500

attctcgcct gtgcagtggg aggtgaaatg tcagcactgt gtgaccatcg agggtgggaa 34560

ggccacgctc ccctacttgg agctgccttt cacagtggtc ttctgtaggt agatgtactg 34620

cgatccaggg tgtgctggag ctgaatcatt agaagtcata tatatttgta aatgtatttt 34680

agctcccttc ctactgtcct tcacctagtg agatgatctg ttaggggtat aaggtaactg 34740

ctcaagaggg gttctaactc cctgatacct gttgtactct gttgatctcc aacaatgtcc 34800

ctttgcagta ctttaggaag aatcatcaaa gtaactcagg aggtaattga ctaccggagg 34860

tggatcaaag agaagtgggg cagcaaagcc cacccgtcgc cggggatggg tgagagatta 34920

attcatttgt gttcatccta accactggct ggcgtgttca tgcagaagtg tctctattcc 34980

tttgtggtaa attggtcaaa ttaagaagat agctagtttt tctgatgagc attaattaaa 35040

aacacaataa gatctagagc agcactgtcc agtagaaaca atgccacaca tagaatttca 35100

aatgcatgcc acacatagaa tttcaaagtt tctagggccg tgtcaaatgt gaaaagaaac 35160

aggtgaaata attttggtag attttattca actgaagtca aaatgttaac atttcaacat 35220

gtaatcaaca taaaaatgat tgagatattt tatagccatt ttttgtacta agtctttgaa 35280

atccagtgtg tatttatttg tacttacagt acatccttat atgggtgcca aattttcata 35340

aaaaatactt gatctatatt tagattttag aaagttcaca tttgaagatg atttgcatac 35400

ccaagttgtt acaagcatgt ttaatgtttt ccaataacta attgactata atttttaaaa 35460

ttaagcaaaa cctaatgttg ggtttgtcag tcacattagc agcattcccg gctcagcaga 35520

acccatgact gatgctgccg gggcggctcc acgccacagt tctcaggagt tattaaccaa 35580

gactttttcc ctccacagac aacaggatca agattaaaga gcgaatagcc acatgcaatg 35640

gggagcagac gcagaaccga gagcccgagt ctccctacgg ccagcgcttg actttgtcgc 35700

tgtccagccc ccagctcctg tcttcaggct cctcagcctc atctgtgtct tcactttctg 35760

ggagtgacgt tgtgagtgcc ctcccctcct ccgtgtgtct gttggacagt ttgtgtctct 35820

ggtaaatgtc catagctgtg agcttaaaat ctccccctta ggtttgctca ggttttgttt 35880

ccttttatgt gtgtggagtg ggtgggaggg tagccccgtg atgtcggcac caggcttcct 35940

ttcccccact gtgaaccttc tgaacctgtc tggctcatgc ggctgtcgag ggcagtaatc 36000

ctcttcacag atttaaaaaa aaattaaatc caagtatctc ttctgtattt cctttaacat 36060

tctgtttcag ttttgatgaa attacttgaa ggaagcctgg gtagatttgg gctgcccgtt 36120

cagaagttag acttaattca aataaccttt catagccagc ctggaggcag gagtttcttt 36180

tcatagcttg aaggaagtag tagtgcacct ttgtggtaca gctgtccttg ttgttttttg 36240

taccgggttc aaggattcag acacaccgcc ctgcacaacg cctagtgttt accagttcag 36300

tctgcaagcg ccagctcctc tcatggccgg cttacccacc gccttgccaa tgcccagtgg 36360

caaacctcag cccaccactt ccagaacact gatcatgaca accaacagcc aggtacgtgg 36420

ccctctggtg cccttcccgg tggtggcccc gggaagggca tctgagctgt gatatgcgct 36480

agagattcat ggtcctttga attcgaagag taactttttg agtctttggc cattgctgtc 36540

ttattctagg aaatcctgtc ttttttgtgg tgttgaggcc caccatgtag agtttcagca 36600

gtgaggagac tggttctcga gtgctgccgt ggcttttcac gggggccagg tcgactgcct 36660

tcctataagt ttcctcactg ccccagcatg agactgctgt cgaggatcat cttgagagag 36720

cgactcagtc gcgacccact tagccgggca ccaggcagcg ccagacactt gtccctactt 36780

cctctcagaa tctcagtgtt gagacttttt taaaagtttt aatgtgaact tattggactt 36840

ttttcatgtt tcaaattagg catactttct aaggcttttt ctgttagaat gtactgtctg 36900

tttctaaaat ttagataaaa ttagaaatct aaaggagaat tttataaata ctaaattttg 36960

tatctacttc cgattataca tcactggaat atgtgtgggt ataaaaccca acatgttaat 37020

tgacttaaaa ccattttctg aaatgtgggg tgtaatttga gcataaaact atgtaggtat 37080

atgcaaaagt atcttgactc attacttgga gttttgcagt atgctctggg gaagacatgc 37140

tcacaggatc caccctgatt ctggcagagc ttctggaatg ctggctctgt aatgacccac 37200

agagttgatg agcagagcca tggcccagcc agacaccata acgtgtctaa ttactgcata 37260

aatgtaaaat tctgaggcaa ttatttacac tcttaaaatg aattatacca cagataaact 37320

tggttgcctt tttatggtca tcacactggc cctgacgtcc tgggccatgt gtcacaaagg 37380

tgtttgtttt aaccacccac aagccttggg gcccttgaga gcccagtgcg gctgctgagc 37440

tccagagcca cactctgcgg ctgcttgtgt ggttcgagcg tgaagtctag ggacgctgag 37500

ggtttctagg ttcttatcta agaagactct tgtccacagt cgatctccag aggtggttgg 37560

ggtaaatgca tgggatgcca agatgcaacg aggtcagtgt tgcaagtctg agaaaagggg 37620

ttcttgttag tgtgcttctg ctgctgacag taatgggtga tgctgacgta gaagcagccc 37680

gggacctgga cagcaggcaa ggatggatct gccggccgtc ccacggcccc ttgggccacc 37740

agtcaggcca gtctcggtct ctgaccccga gttcagtgtg tgagtcgtgg attcatcacg 37800

ggggtgacag ttgttattct gatgatgcta atgttttgag tcatttgatc ttcaatgagt 37860

tttaaacttt atgacttgga ttactgggca tactttatat tctaattgct gtttcagaat 37920

atgaggtatt tctaattcaa agcacaatat tgttaggtta tagtgaaaca aactgcttta 37980

tggagcccac atgcaactgt gccatttatg agctgccctg tggcggtgct gagctttaga 38040

agccggatgg ttttcctgtg attgatttgg tacccatggc cgtctctgtc gttttcttcc 38100

tagaccaggt ttactatacc tccaccgacc ctaggggttg ctcctgttcc ttgcagacaa 38160

gctggtgtag aaggaactgc gtctttgaag gccgtccacc acatgtcttc cccggccatt 38220

ccctcagcgt cccccaaccc gctctcgagc cctcatctgt atcataaggt atagctcttt 38280

cctggtgcgt tcacctgttc aagctgccat gtgagaggtg gtgctgaatg ttttctcctc 38340

caaagagaat tccagagaga tcatttgaaa acggaatttg ctttcttgtc attcagcctc 38400

atgtttgctt gtctttccaa acaaaacttt aaaaagttaa actattttaa gatgtaagat 38460

acagtttaat tggttgccac aaacatctct taattcctct gttgaactga ttagcataaa 38520

actaaaagtt gaaataaggc tcaaaatgaa gacttttctt ttcccattta tataattcat 38580

ttatatgcta aatacctcgg tttctaagaa gcaaatgata aaaccaagag cagatcttgc 38640

catgatgtcc catgtatgct gctgtcattc ccacgttgcc tgatccccac ctggggtagg 38700

agcaagcatc agggtgggca gagctgtgtg ctgggcctca gcaggatcct ggcatgcctg 38760

cccgtatggc tcctcacaag tgcagctgtg tgcacggaaa aaacaggtca cattaggttc 38820

ctatgttctt gaagtacctg aatgattggg agagccatga cgaggatctt ccaggtcagc 38880

ctctatcatg cgtgatgttc ccttgggctg tgcggatgct cggtactttc atcggtgtcc 38940

acacctctta ctctactcca ctcctccttt gcttgtctaa tcctactttg ccaggaagtt 39000

ttattcttga ggcttgcgtc tttggccctg tgttgtatga tggttgtttt taggagttaa 39060

gtcatagaac atttcctctt ggatttatgc atcccccata gacacattca gggtgaaaga 39120

acaacttcgc acagcagctc cttcgttgca ttttggcttt gctttcccag cctcctcctg 39180

ctgtttgtcc tgctctgaga cttccctaaa gccggcgtgt gtttcctctc agtctgcttg 39240

gccgggacct tgcagtgcgg agaatgtgct ttgggtgcag cccaagcaca ggctgctgca 39300

tgccgggatc gacaggctgc tgagggcgag agtaccaggc cctggcatgt gtgactcgct 39360

tgtttctaga aggtcacagt tgggggaaga acatgaccgg gaccttctta tttctttttt 39420

tttgggacag aatctcactc catcccccag gctggagtgc agtggtgtga tctcagctca 39480

ctgcaacctc cgcctcccgg gttcaagcaa ttcttgtgcc tcagcctctc gagtagctgg 39540

aattataggt gtgtgccgcc acacccagcc aatttttgta tttttagtag agacggggtt 39600

tcaccatgtt ggtcaggctg gtctcgagct cctgacctca agtgagctgc ctgcttcagc 39660

ctcccaaagt gctggaatta caggcgcaag gcactggcac ctggccaggg accttcttat 39720

ttctatggat aagtagaaca agttagaagt gaggttctgc tgaatttgtg tggtttgatc 39780

ctggtatatg gttgttgcct tcagtcagtc acggaatggg aagaatactt ttctgtcaaa 39840

tggaagagtt ggaaagtccc agagggcagg tgtccatccc tcctccctac gtaacatcac 39900

gtcggcgctt agtgtggtca ctgccggagg acgtgggcat tgtgcctgtt gtctggctcc 39960

aacattgctg tctctctctt tctccagcag cacaacggca tgaaactgtc catgaagggc 40020

tctcatggcc acacccaagg cggcggctac agctctgtgg gtagcggagg tgtgcggccc 40080

cctgtgggca acaggggaca ccaccagtat aaccgcaccg gatggaggag gaaaaaacac 40140

acacacacgc gggacagtct gcccgtgagc ctcagcagat aatggctcct ggctgcgtcg 40200

gcctccccca cccctccgca gactgccccg cggcctcggc caccggcagg ggaaccgaga 40260

ccagcacccc gcacgtcagc cgggctcacg gcacgcccgc cgctgatcac tctgcatgtt 40320

tctttgtgtg gtggtcgcgt ccatcttcaa gaacagctcg ttgtgctcat ctgtgaagcc 40380

ttattaaacg tggacgttgt tttctgcctt cccaggattc ttccttcagt gctgaggcag 40440

gtcaggctca ggaactgcag ggacgtgaac atgcgcttgc ggtttgcggt agccgtgtct 40500

gttccttcgc ggtttgctat tttcatttcc tgtttgtcaa agcagcagag gagatcaaac 40560

cccgttcgtg tgtctttcct ccatggatag gcttgggagg tcattgtttt actgccctca 40620

cattttgttt gaaatttcag aactgttttt ctatgtaaat attgaaaacc tatgatttgt 40680

gcaataactc agatattttt tatttaattt cctattttca cataagttat atttaaggga 40740

ggagggaatt ttttttaaac aagcttaggt cctttcccga gctgcatttt ctaagttggg 40800

tcatcgtgtc ggctggttgt ctgacgagca tcgttacaaa caccatgatg aggggtttgg 40860

ggttttattt tgattctttt cttttggtcg gagtgagtga aggagtcagg tcgccctgac 40920

ggttttccag agggctcggc tccagagcca cctgacggac tgcccgtggc cctgctgtcg 40980

ggccccaggc cgttgtcttg ctctgaccac agagttttaa tgttttggtt ttcagttctt 41040

ttaaactgga caacaaatcc agcatttcaa gtgccagaag tataactttc taaggagaga 41100

agggttgtca cgttataaaa tctttaggaa aatgtgaact ggaaaatgtt tcagtcagtt 41160

ttagtgacat agcctgtgat gatgggtctg gtgactatta ttgcggaccg tggtacccag 41220

ttttaggaat gtggagaaag gaattctgtt gattccattg aggaatctgt agcgtatgca 41280

ttcgttctgt taagagcaaa tctaggagaa gtgcttcagc tgcccagtgc gccgtgggga 41340

gtgttttaat ggatcatgtc gcaggagagc acagcccagc gttggggccg ggaccgctgg 41400

cgcccgacgt cggaagcata caggtatact atgcaagtgt attctgccac aacaaccact 41460

gtctttgtta cctttttttg aacaagaata tatccatcct gcctaaccct gagtttttgg 41520

agcaccacag ttgtcctggg agttggttgc atcttgtagg ccatctgact tcctgttgtt 41580

aaaacagggg tctggtcttg ctaaacacta caggtaggtt ggtctttgaa gtccactagt 41640

ggagaatgtc gagacaagat acttattacc atgacatctg atggatgtgc agcagtgggg 41700

agttctagat tgatctctga atgtgatgga cgcccagcaa ggacaagctt taaaatgtct 41760

gcggtctgcc cttttgaagc aggactggct cactctgtca ttgggagctg tcggctgcga 41820

ctgcaggttc tctaggaggc attccagaat agagtagcac actgtgtctg cagttctcga 41880

tgaccgaaag ttatcaaaaa tatttaaaat atttaaattg tgaacctatt gataaagaat 41940

atttataaaa actgatctgt aggcctgtac taatctctac gcattagcaa tattgactgt 42000

aaacccacat taaggaaacc actacggggc cggcagtgag tgtcccgtgg ggtgtgcatt 42060

ttaaagctcg attcatagac acaggtacca tgttccattt ccgtcatggt gaagcagatg 42120

aattggcctg gctaccactg tggttgtgtg ctacaggttt gacaaaagat atcatgtttc 42180

gatttttttg tgtgtggaca acaatatgga agctaaaatt gacatatttt tatgtaaagt 42240

ttttctattc tttgattttt aataaacttt ggaaaccagt tttgtgtttg tgttcaagtg 42300

tatgctttca agggtaagag cggcttccac attttcagtt ttgaatttct aaattagggc 42360

aatacgttaa ccagttattc taaataagat tcaaaagaag gcagatgatc ccagtcctat 42420

aaagcaagtt gcggcaggga gattatgttg tcactggtcc attaaagtag gaggaggtga 42480

aaatacaaaa attagccggg catggtgact cactgagtag ctgtaatccc agctactcgg 42540

gagggtgagg catgagaaat gcttgaaccc gggaggcaga gattgcagtc aatcgagacc 42600

gtgctactgc actccagcct gggcgacaca gtgagaccct ttctccaaaa caaaaaacaa 42660

aaagtgggtg gaggttctag gctttgcaca aggcctatat aacagtaaca gaaacgtgct 42720

ctctgtcctc acattctgat gctaacaaat tcagtaaaac tgtttaaatg gttcttacat 42780

gcagtttctg gcaagctgct atgtgatatt gtgtacttag actgcccagg ggcaacattt 42840

tactttcttc atttctttta ggtcaacatt gcatcacttg caaacaagac attacaaacc 42900

aaacaatcat agtgtagctt aaaatgcaac ggacatttgg gatttatttg agaactgacg 42960

tttgggattt atttgagaca gagtctcgga gtctcgctct gttgcccagg ccggaataca 43020

gtggtgcaat ctcggctcac tgcaggctct gccttccagg ttcaaatgat gcttctgcct 43080

cagcctgccg agtagctggg attagaggca cccaccacca tgcctggctg atttttgtat 43140

ttttagtaga gatggggttt caccatgtcg gccaggctgg tcttgaactc ctgacctcag 43200

gtgatctgcc cacctcggcc tcccaaagtg ctgggattac aggtgtgagc caccatgcgc 43260

tgccgacatt tagaatttat aaggaaaggt ataagaattc ttctaggcca gtaagtgaca 43320

gaactgcatg tcccagcctg tgcagctgta gaactatcaa ctgagtgcat gttgtagaac 43380

tatcaactct agagttcttc cagttgtcaa ggtgggtgtt gtgggtaaaa cacgttcctt 43440

ccacccaaag aacagagtag ccctgtcctc ttggcacctg gttcctgagg gggtgcagaa 43500

gctgctcaca gcactgccta gtggtgctgt ggggaagatg gcaggcagct gggtgggact 43560

cgaaagcctc tccagggggc cgagccctgt gcagggtctg catgagctgc catggtcagg 43620

gtggggctgg caggagctga gctgggcctc cgagggaact ggagggcttg tagccagggg 43680

catctggagg aggagcccac gacagtgctg aggtacaggg cactggagtg gggagatgtg 43740

gctgagttag cctctgttgg aggcgggact ggtgggtgtt gtgggggggc actctcggcc 43800

tgccccggat ttccccgtgg gtggtgatgc tgcctactga gccactggtg cctgtaggag 43860

agctgtcttt aggaggcttc caggagcagc cactggagca gccacgttac cagggagcct 43920

gaggccccac agaggcatct gaggtgtcag atttgggtcc cgctctcctc ggaagctgcg 43980

agtactggaa ggtaagggct ttctgggggc agagtgaacc tgtccaggcc actgcgtgaa 44040

catcagtaag cccaccacgt catctcggga ccccgtggac tggatttcat ggtaacaggt 44100

aaccccctca tgaccggctt ttgtacatgc cttttgattt gtccggggtc tcgagtgcca 44160

cctctttacc ccgtgagata cccagagatc tctgtaaatg ctgtgcccag catgcctcgg 44220

cctgggcatg aaccgtacgc aggggaggtg gcgacatttg taatcgagat atggtttcgt 44280

tgtgactggg tcacctgtga tgccctaagc cttgagaact tgtcatgtgt gtgtcattat 44340

cctcttgctg tctaacttgt gagattcttg ccaagcctta ggtgactttg actacctttg 44400

gtccaaggta atcgcctaga atggacggtg gctcctgtta aacacacaca catcccagac 44460

accacgccgg gggctatgcc tgttgtttaa gaatggcccc aaaatatgtt gcctgcactg 44520

tgtctccagg gcctgtgtgg gaggggtagc ttgggagggc cgggtcccgc tagccctggg 44580

ttgcaagggt aaaccgcctg gtgtcattca tggtgagatt tacttacccc atgacttgat 44640

cctagagaag gccagctaag gacttcagag gtcttggagt gagttccagg caagggcaag 44700

aaaccaaggc ttttcatggg ttcttaggta aaggaagggg gtgtggacca gtcgcactgg 44760

gaggtcgagt cctgtctcct aggaagccac atggctgtgg ggtgagcttg cccagggttc 44820

cttcctgcca gtgtggatat ggcgtcctct gcccaggcct cttgagatgg aacgcttgga 44880

gctcagccaa tgctcaggtc gtcataggtg ctgtggggtc actcacactt ggttgagagg 44940

tatgtgactc gaggcagatt cctgtcattc ctgcttgtat ttcatcaagt cctgagcgag 45000

gtttgtggta atgagtgcag gtggctgtga ccgaatccag gtctcctcaa cagataggag 45060

acctccgcac atcctgccat gtcactgttg gaattttcaa gttgggagga atcttaagaa 45120

tcagctagag cagctcagcc ccaaaaatga gaaactgaag tcctgtgatg ggaagggctt 45180

ctaaaggtca cgtggcacat ccgccaggcc cccgagagcg tcctgggcct ggctcccacg 45240

ctgctgctct ttgcaaaggc ctgtggcccc tttttgttgt ctgacgacat gtagagaaat 45300

tgctgtgagt ttacgcagaa cactggtgct tacgctataa ttgagtctca ccaggttctg 45360

aagatgcgtc ttgtgcccat ggctcacatc tgtgggagcc tttcagggac agcggcatca 45420

ccagcctggc cctgtgtgtt gaaatggtta tggtggaact acgtgggctc atgaaacgtg 45480

ggaggcttcc agttggactt tttgtggcca atattgatag gatcctgcca gcggagagcc 45540

cgggcctagg gccaaacggc tggagttagg agctggggtg cgcagagccc tggaaggatt 45600

tggcagggca ggggagaagg gagtaacagc ctcactgtgc ttcaggcttt tccttgctgg 45660

ttcaagtgtc cgctgaaagc agctaacata atcagtacag cttctctgtt ttgggaaatc 45720

aaaccccaaa tctttaattt gatttaaaaa gctttccagg atcttgcctt tgcctccctt 45780

tccaatcttg ccgctcggca gttatttctg ctagaaaata ggtatttccc tctcagtgtc 45840

tccaaatgtg aaagaaaaat catcgtcatc aatagtcggg tataagagag gcagccttct 45900

ccggaagggg accagtgagc aggcagttca cagagcagaa gggagggtgg atctccaggg 45960

accgtcactg gcttcaagtc tcgcttctgt tgcttcctgg ctgtgtgtcc ctgggcatgt 46020

cactcaactc ctgtgctcca gtttcctcag cctcgcaatg ggccattgta cagactaaac 46080

gagtaaacgc acataaagca cctggagccg tgccaggccc gatgtgagca tttgggccgc 46140

atcgactcat gtgattagtc ctggtaggcc cggcgcaggg aaccaagcct gtcaatttaa 46200

aggggagtgg caggaagaac tcatttttaa tgacaggcaa aaagggaaaa tattgtaata 46260

catggcttcc tattttcctt ttcccttttt cttgcctttg aatttataat gttgcttatt 46320

tggtatttaa gattcttgct ctggagcttc aaacattttg aaagaaaaag tagtgtcatt 46380

taataaatgc tgtcatttga cgctctggtt actattttag ggcagcatgg taggtagata 46440

ctgctagtta cttacccaat atccattttt ctttattact tgcaggattg ccaggtttag 46500

aaaatgaaaa cgcaaaactc caagttaaat ttgaatttaa gtagacaatg aatacttttt 46560

tggtggatgt tccaatattg catgggcaat ttaactaggt gtcctgtatt ttatctggct 46620

caactttgtt tagacagcag ggtgcacagc tgaaaagata acttgtataa catccttgca 46680

gctaggggtg gttgcaacag agtgctttcc tttggaatga aacttttctg ggataaagta 46740

ctttgcttcc ctccttggat tctggctgga attcaagtgc aatgcctggt gacacagcag 46800

ccatgttgta atcatgaagc ggctagctgt gtagtaaggc tgacagagca ggaagctgga 46860

aaggacccag agtcgtgagg ctttgggcct tctttatatg ttcatatata acatttgcat 46920

gaagaagaca cccgcatctg tttatgccac tgatattcag ggctctcagc tgaatacaat 46980

tttaactgat atatacagga aacgcacatt tcaaacaaaa tctcatgtga aactccatat 47040

gggtggttct ggttaaagca gtctggtagg gaggaaaaag gggacatcgc ttcattgctt 47100

gaatttcggc tccactccct ttcccttctc ccagattttg ggggatgccc tgtggaaccc 47160

ctcactttct atggaacaca tctttaagcc aggaaaccac ccattctttc ccgctcttat 47220

tctcattttt attttctcaa ctcttttggg caggggttga ggagggtgtc ctgtggtttg 47280

catagatgcc tgctggactg atcagagccc tggatcccat acctggagtc gggagcttcc 47340

cccagagccc tgcaactccc accctggttg ctgtgcacgg cggaaagggc ccgtcaggaa 47400

acaggaaggg agcctgctcc actcaggtca tttgtcctaa tccagctaag gcacaggctg 47460

gagatctcag gggagtccct tccctgtgcc cttaggaacg ctggccccac ctgggtgctg 47520

gtttcaccac tttgttacca aagtctttgt cacagacagg tatcgggtga gcttacagct 47580

cagcctgcag acatagcccc agggcagcat ggctggactg gttgtgcaca gatgcctgct 47640

gcgggctgtg gctcccctgc gggtggaagt cttggcccct ggacctggta ttcgaggtct 47700

tctgagacat tctgccctcg gaatgcttgc ctccctattg atctgtcctg agtggcttgt 47760

tactattttt taatagtcat gtatcagtag ttatgtaaaa tgtggcaaaa atgaatgact 47820

gaagaaaaat gagatggaaa aagaaaaaat ctgaaaatat acaaaataaa agcccacact 47880

gttttgctat tggattcaaa gacctggaac tatccttgca ggagcccctc ggtgcccacc 47940

cgtaggccac actcaccaac tgcacccggg gctgtgcttc caggacccaa aagctccctc 48000

cttgagcggc acccaggcct gctcccacta acctcaccag ccgcacccgt ttctcccacg 48060

gcccgcccag gggaccattg atcctttagt cctcttcggc cagtgtaccc ccaatggccc 48120

aggacagccc ctagtacaca atggctgttt cttgtggaca acgcgtggag gcacacatca 48180

gggccctgct tttaagaagg aagtgctgag acctgggtgc cacctcttcc aggagccatg 48240

gatgccgggg ctcacctcca gagactgaat taaacggtca ggagggagcc tgcacaccgg 48300

agagctctga gcaccgggcg agtctcccgt gtggccaggt tgggagccat cgctgttcac 48360

gtggccaggg ctgccttgcc agaggagctc atcttacttt gccactgtgt aactgttcat 48420

gtttatcaag tcatgacctc ccttgctaca gtcactcttg tctttcgtgt tctatttaat 48480

ttttttaaaa tgctggtggc ctcactcacg aaattttttt caccaccact catggacagg 48540

acctgtcacg tgagacatgc accaaagcac ggatagggat ggccacgatc ctgcctggaa 48600

cgggacttca gaactgggca gagcatggct ccttccggtg ggggccccag aactcttttt 48660

caaaggcaat ggcaggacgg gatccacagt gcttgaccct ttgataagga gacatcctct 48720

ggccaaaggt gacaccacag ggataaggtc cacgtgctgc ttaacactgt tttgggtgca 48780

gaacaaaggg cagctgggac atttcttgtc tggtctcccc ctctacgtgt cctgaatttc 48840

tagcttgttc aaagtggtca aagacccaag gctggtctgg cacagaaggg gtcgtgccta 48900

catgtaggga ggcactgagg cttctgtctc ccgttgtatg tccccaggga caggacagcc 48960

ccctgcctgt tgttccgagt gtcctctgtg aatggggacc atctgtcctc cgggtaactc 49020

cctcctcctt cacctctgtc cacccgctct ggtagccacc ccttccacgt gcagtgcggc 49080

tctgcatccc ggagagcctc gaggactcct tttctcttct ctagtgttgg ctcccatatc 49140

tgtcagttaa ttacctattc attatatgaa catgtttctc ttgggtcatt atttaacttt 49200

tcaaatttat cttctttact caatatattg tgagcgtgga tgtctgttcc ttatgggatc 49260

accactgcca ggcatgtaga aattgcttga tgtagtttca ctggcttgtg gagaggcagt 49320

catgcttctc tgtgcttcta tgccaaagaa agtcagtagc aagcaaatag cagagcttta 49380

gtgaataaga acaatatttt accttgaaaa aggcagcagg aaggagagtt aagactcaag 49440

tttcctttat taaggaaaat tgaaatctag gtacctacag atgctctttg acttatggtt 49500

aggtcttagt aaacccattg taagtcaaaa atgcgtttaa tacacctaac ctaccgaatg 49560

tctatcttac atgtgcttag agcacttata ttagcataca gtcgggcaaa atcatctaac 49620

acaagccgat tctattaata ttaaaattga tgtaatatat gtacatattt tagtacatat 49680

gatagtttaa tatgttcata taatgtatac aggtcaaatc agagtaattg ggagatccat 49740

cgccttaaat atttctttat gctaaaaaca ttggaattat tctatctatt ttgaaatata 49800

caatagactg ttgtgaactt cagtgtccct actgatctag aactaccatg tgatccagaa 49860

atctcactgt tgggtatata tccaaaagga aaaattattg aagagatatc tgcactccat 49920

gtttattgca gcactattga caatagccaa gatgtggaat 49960

<210> 5

<211> 60510

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 5

actttccgcg gagtcggcag ccgcctcgtg tgcctcggcg gcgcttgagc ggcaacagag 60

tcctgcggcg gcgcgcgcgt ccgaggtgcc cggaggccca ggtacgtgcg accccagcta 120

agctagcgcg ggacggttga ccaggcggtt gcggccccgc tgcctgcagc ctgccgcggc 180

ctctgtgacg cgcggtgcgg cctcggggaa cccgcggacg gctggcagca gggacggggc 240

ggggcgagcg cggcggcggg gcaggcggag cggagcgagg ggcggagccg gcggaggccc 300

cgccccgggg ccgagcagca cggacgctac ggagcaggcg cgtcccgctg ccgccgccgc 360

tgccgccgcc gccgccgctg ctgctgccgc cgccgccacc accgccgccg ccgctcgccc 420

ttctcgggat ccgccgccgc catttgcacg ggaaccccgg tgacaggggc tcggcggagg 480

ggcggaggga ggggggaggg cctgcgagcc ccgagggcgg gagcgacgcc gccggcgccg 540

gccaggctcc ctgcgctacc gcgccgcccg tggcggaacc cgggtggcag cggcggcggc 600

ggccgagggc gggcgtgcgc ctgaggcagc ggcggcggcg gcggccctgc gggcggccgg 660

gaggggcggg ggcagcggcc gccgccgttt gatggatccg aggatcgcct ggttccagcc 720

agagcagctc ggaccgtcca atagtctgtg gatgcagatc tgggagacga cccaggggct 780

gaggaacctc tacttcaacc accactgtca cagcagcggc gcgagcagcg cgagcggcgg 840

gagcggcagc ggccccggca gccccggcgg cacggccccg gccccggccg gcatgttccg 900

ctcgggggag cgcccactgg gcggcctcgc cgtgcccgcg gagcagcggg acttcctgcc 960

cctggagacg accaacaaca acaacaatca ccaccagccg gcggcctggg cacggcgggc 1020

atcggcgggc ccctcggcgt cgccggtccc atcggctccc tcgtccccgc gaccggcggc 1080

cgcactcccc gcctccgagt ctaccgaccc ggcctcgggc agcagcaaca agaggaaacg 1140

tgacaacaag gccagcacct acggactcaa ctacagcctg ctgcagccca gcggagggcg 1200

cgcggccgga ggcggacggg cggacggcgg cgggggcgtg tacagcggga ccccgtggaa 1260

gcgacggaac tacaaccagg gagtcgtggg gtgagtgctg gcgtcgtggc ctgcgtcttg 1320

gagggtcggc acacccgcac agcggggaac acgcccacag gcgggagggg gggatgatgg 1380

gtgggggatg gggagcccca gtggggcctc cagagcatcg gtggccattc attccttcat 1440

agcttgacca gtctcggtgg acctttcttt ggaattcctt tggaaaaagt ggagctatcc 1500

tctccttttc gtagtcatct ctaccttcct cctctcctaa ctgtccacac cttcccgatg 1560

cattcttgct tgtccttctc ctggatcttt ctatgctcta gaattcagcc tgccctctga 1620

tccctttctg tcctccacac cttgctcccc accaccacac cccaagatga agccccttag 1680

catcgggcta gttaacttcc tgagaacgtt tctgccttag cgtctttaga tgttaggacc 1740

aggaggtgct cttcttgcca agaatagaaa catccagaat gctccttccc ctcccccagt 1800

ccacgacgaa aatctcctca gccctgaaag acactgcctg ctcttgatcc tttggcccat 1860

cttttatatt tacttaagga aaaaaaaaaa aaaagccagt gtttgccatg tctgtcgtga 1920

gcagaaagca ctgagtgaca gctagcttga agttgtcata gatggtgagc ttttctgagc 1980

cctgacagaa ctttgcagga gttcatggtc ggcagcttct cactgtgagg ttgtcactgt 2040

ggcagaggta gcagtggttt tcatttaggg gtgctggtgt tagtgtgtga atgttgcacc 2100

accggtgact ttgtgtttaa agttcagctc ttacaaaatg gaatcttacc tgagccctag 2160

tgaattatgt acataagctg ggaatgtttc cagcctgctt ttcctttggg aagagcccct 2220

gtgttggctg gattaggtta ctgagtcttt tcttctcgtt cttttttttt cccttttcat 2280

aaacttatgc ttttggattt tggtgtagtg tgtgtgtgag aagtgtagag tgtggtttgt 2340

gtagctccag tatggaaaac cagctctgaa ggtttttgag ggcagtttct cgttttcagg 2400

tactgatctg tagttaggcc tcaggaaatc aatcagtaat cccgtgtgaa ctttcttaga 2460

ctcacccagt cagctctgcc ctggttttgg caaggagaga tagttgtgtg tacctttttg 2520

aaggtttggt aaaatgagtt ggtgggttcc atctgctgta gtgggctggt gtctgctcag 2580

tacactacta ttacaactcc caccttttat ggaaaaatgc agtcatgtgg ttcaggagtg 2640

atgctgggga atgcctcata gctgccctcg ttttccagag gagatccttc ctggctcagg 2700

catttttgcc agcttcaagg gcgctctcca tggtcatcac cttacattaa agatttgtgg 2760

ttccatcctg ttagccttcc catggcaaac ataaacctgt ggtttagtgg caacaactta 2820

atgctgaggg ttctggtggt cttgtcttcc tcgagtgagc tctgcttagg taatcactgt 2880

caaataatac ctggaaggtc cctagctgca tttcactgat gcctctggtc tgtttctaga 2940

aaagatatgc tataaatcca aagtgctggc tgccccttaa tcctgaaaaa gttcccacgc 3000

agaagcttcg gatactgcct tgccctcaga aggatcaggg aggaatgttc acttccctga 3060

gggattactg cttaaaaact gattgtaaac ttgctaagcg gcttatcact ccatcagact 3120

tgtattctta ccctgaagaa gacggcagca gttaggagtg gccctcctag tgtgagagat 3180

gcagtgaata gttcctaagg tttgttaaga gactctgggt tttcagtgat tccattcctt 3240

tccgatcttc gtggtccagt ttcttagctt ttaagggagt ttagttatta aaattttcat 3300

ttacttattg tgtgtgtgtg tatatgcatg tgttcacatg catgtgtgca catatgtgcc 3360

aaagtaagcg agtggaagta acaggacagc atattgggag ttggcattct tcttcagggt 3420

cttgtagatt gaactcagtt caccagtgct tgatggcaaa cagctttttc tgatgagcca 3480

tcttgccagc ctagttttgc ttttttttgt ttttgttttt gtttttgttt ttgtttttgt 3540

ttttaagaga cagggtttct ctgtgtagcc ctggctgtcc tggaactcac tgactggcct 3600

tgaactcaga aatctgcctg cctctgcctc cccaagagct gggattaaag gtgtgcgcca 3660

ccaccgcctg acagttttgc tattttagtt acaggtattt aaacagtagg acttctgagt 3720

gtacctcagt atggtgctat tcattatgtg acagaacttt ccctggggag acataacata 3780

catgtctact cactttagat agggaactca aaacagactt aagtgtgaat accataaaag 3840

ccaaaacttg gtgaaatctg actttttggg gggttactta aaggaatatg ggtgaaaggt 3900

tacttaaagg agccagaaat gactcagaca tctgcatcac caaagcctat ccagctctca 3960

aagctaggga cctggagcac atggcacaga ccgcaggcag ctaaataggt agacagtgtc 4020

ctttctaggt gcctcagttt gtctaaaact cctccaggtt ttttctgctt ccaggtatcc 4080

agctggtccc tgagttgtca ttgcagctga gctctgctct tctgagtggg tctctcagct 4140

ttgtttgttt gtttgtttgt ttgtttactt ttgcatggag tggcacagtg aatctggtta 4200

gtttcaggga tatccaagct gttttgagtt gtttacctcc ctgtttaagg agcttctttg 4260

tagaataaag atttcagtct cagaatacag cactgttcag aggtccagca ctgttcggac 4320

attaaatgta gtgtgactct tagcagtatc tcccacgtcc tgaggtttaa ctggtaccct 4380

gctggtagaa gaacaaattc tcgtgcctgc attcttgagt ggactctcca ggtagggact 4440

caggacatgg cagtagaact ctgtccttta tgcctttggg ctagtggctg acaaactcct 4500

gagttttcat taagagtttg aagccaactc ttaaaggtgt ccaggctctt gagtcttttg 4560

gtttccccta acatgcttca tgttcttgca agtgcaagat cctgtttaac cctctttatg 4620

tacgtatccc cttgtattca ctggatagac actctcagta gcccagtggg gcatcacttg 4680

tatggtacct taggtttcat ctctagtaat cccacaaaag gggaaaaagg tggaagagga 4740

ggaggaggag gaagatgaag aagaaaggaa ggaaggaaag aaacaaatat ttggatttca 4800

tcctaaagtc tctctctctc tctctctccc tctctctctc ttttttaaat gaaattactc 4860

tggatttagt tactgtctct caacctttgc cccctgaagc cgtaaaccca agtctagaga 4920

gggtatttgc attgtctgtt atttatttca gagattcaat ccagggcctt gtgtatgtta 4980

taaaaggacc tctgaccaat gggctatttt ctcttgtgct ttttcctttt tttactgttt 5040

gagacagagt ctcagtaagt tacccaggct tgaacatact ctgtagccca ggtgggtttt 5100

gatactatga tcttcctgga tcagtctcct gaatggcagg aataacaccg gacccaccag 5160

gcccagcttg cttgcttgct tgcttccttc cttccttcct tccttccttc cttcctttat 5220

ttatttattt atacaactgt tttcatgtac ccttttgcta gggctggctg tgttgaagga 5280

tgctgtccgc cagcactttc ttgtccgtag aaatgagcca gatgcccttt tcttggaggt 5340

ttagcagtat ttgtggtaga gaaggaagga tacatagagc tacaagcatg ggaacttagt 5400

gaatcggagc cctcactcct gacctggttt tgagaaactt ctgtggaagg tgcctgatac 5460

tttccaacct cctgaggatg agacactgtg gctgccctga gaggtctctg tttgtcaagg 5520

ctaaatgact ttaacaatat agatatcaaa gagacttggg aaataacctc acttttggat 5580

atttgggttg ctctaggaat tggacctggg ctcccacatt tgtgctagag agtgaagctg 5640

taccccagcc ccctgaaaac acaagtttaa gtaattggtt tttgagctaa ggaggtaaga 5700

atgagtggaa ggaagggcag gttaggaaag gatcctggct gagtggtggg cttagtgact 5760

acagctttga aggtcagggg ctaagaggct gtgctctcct gcagaggggc cgcccattct 5820

ccattgtagt gctctccttt ggctgtcagt gctggtggct ttctttagtg ctgctgttgt 5880

gacatgtttc tttagcctaa ccacgcatgg gtttgctgac cctgctggat acctgctcag 5940

cccagcagat gagcacaggt tggtaggaaa gaagttagaa gactttactc tgcctttggt 6000

gctcacttta atttctgtgt gtttgaacat gcagcttact gtaattcttc agtgaaccga 6060

actcttccgg ctcttttgtt ttaccgattg ggatactgaa atgtattttc aagaagacat 6120

catattgtgg attctatgct acctgtaaat taatagttga gaattgctga attaattcca 6180

actgagattc gttccttctg agacctcatg tgagagttag tttgactggt gggtgagtgg 6240

tgtttctttt ggagtcattg gcacaggtag gcctttacaa ttcctgttat ggctctagct 6300

gttgagatgc aaagggaagc atcacccaga gcattttaga atctgccctg tgcttacacg 6360

ggagattagg acaccagaag gaagaaagga aggaaaagga agatgtgaga cgggtgagag 6420

agaggtcagg atcctggtgc actgggtggc cctcatctca gctgctttca ggaaatagct 6480

acctgcccta gtgttgggcc cagaaaggtt cttggtagga atgttatggg tttcttggtg 6540

cactggactg ggcagataga tggcagtctt ccttgatgag ttctttctca gacaatctga 6600

gaattgtaga aatgaggtag acatgagagc agtgaatagt aggcattctt gtttgttttt 6660

gtttttgttt ttttttgaga cagggtttct ctgtatagcc ctggctgtcc tggaactcac 6720

tctgtagaca aggctggcct cgaactcaga aatccacctg cctctgcctc ccgagtgctg 6780

ggattaaagg cgtgtgccac cacgcccggc atagtaggca ttcttatacc tgccgaagct 6840

gaggaaaatc atgggcacct tccctgtggg acacagagac gctgctcttg tctgacttca 6900

cacagctctc tctcctgctc tctgatgata gtgtttagtg gcggacacta gtccaggatc 6960

acacccacaa acactagact aaatcacata cacacggagt gccgtgttct caatgggtaa 7020

tgggccggga aagctgctgc ttttgaagac tctttgttgg tccactgatt agcatatatg 7080

catgtttctg cagagctgac tggacggctc ggagcctcct caggagctga gaggccagta 7140

gactgctctt tcagtttttg ctaaggactc agcacctgtg gaacatcaaa aaggcttcac 7200

atttgtcata ctgtatatat ttgttacaca taatgacttt tttttaaatg attgtatatt 7260

gaatttgaag atggctttaa gctaggcttt ttattaattt acaatcacct ttaaattctg 7320

agaaatttct tgatgatata agtaagactc gaatactaag aactttggtc ctaaaaagtt 7380

gaatgtgggg ccgtttatga tgtctattgc ccagagatta cacattagta tttaatgaca 7440

aaacatagga attctcgctt aggcccttcc tgaaatagtg gtttgtaatt agtgcagaag 7500

tgcttgcttt cctatcagct tagtaagtag aagtgcgcat gaaaatagaa accgttatta 7560

ccacattcca aaaaaaaaaa aaacctgtcg tacttgttac cataatcaac ctcttcatat 7620

gtagttatgt ttcttctttc ttttgagata atcgaaaggt tagtaggaca ttatagaaat 7680

tagtgattga tcattgtagt cttacttcac tgtcgtaaca tctcaatgac tagtttaatt 7740

cagaaccagg caactaatat tttcataatt tgtaacattt tgtattttgt caggtttaca 7800

agcaaatgtg tgttgagtac agctttatga catttgtaaa ttcatacaca ccaccacaat 7860

gaactttcag aactaggtta agttcatctt ggatactcat tatgtttccc tcatggggaa 7920

ccacaaaaaa aaaaaaaaga tacaactatt gtattaactt ggagatctct gatgcccgta 7980

gttagacaca tccttcttgg cactaaacct taacaagcac tagtctgtcc tcctctctgt 8040

agctttgccc ttttgagaat gtgatgtaaa tggaatcctg tcttctgtaa ctttggctgt 8100

tttcctgttg ctgaaatgtc tcggcgagtc attcagcttg tcttatgtgt cagtagttgt 8160

tctgttaccc agtagtgttc cattgtatgg aggcactagt tgaagaatat tccagaagag 8220

tgctttccag tttttgactg ttacaaataa agctgctata aacatttatg tacatatttt 8280

tatgtgaaca taaggcttca ttttggggga ataaatgccc aaaagcacca tatggtaagt 8340

acatgtttaa agaagtcgct aaccagtttt tatacttcct tcttttgtgt gtgtacatgt 8400

ggtataatca catgcatttg caggtcagag gttcacacca cgtcttcctt tttgctctct 8460

accttatttt tgaaacatga tttctctgaa cctggagtcc actgttttgg ttagactgat 8520

tggccatttg gcccccagga tccacctgtc ttcgtcaatc tccggcatca cattgtgatt 8580

acagacaggc actgccacca tccaccttgt cttcaggagt catatctaaa ctcaggtctt 8640

catgcttgca tagcaatcac tgtactcact aggacatctt cctagactcc ttccactttc 8700

tacacttgat tttaggaggc tgagaatcaa aactaagcca ttttctacag tggctgcatc 8760

atgccaagtt cctgtatgaa ggggtccaga atctatctct ccagtacttg ccgtggccaa 8820

tgtactgtag tacagctctt ttcttctaat aggtgatacc aggcagctcc tgtgctgtgg 8880

tcataccaga ctgattggag taaccctgcc taataagtca tgcccttact ttccatctca 8940

atcatatctg ggattgcagc tcggtggtag aatctttttt ttaatcctat atgcacaaag 9000

tccctgtttt ctagccttgc attgaaaaaa aaatctgaat tcccaaggct tatgtttttc 9060

tggggaaagg gagtgtgttc ttgaaatact cctctttctc ccctcagcgg tgtcttacta 9120

tatttgtcta ccggattggt cttgaactag ggctggtggt ctctgcacct cagattcctg 9180

actagctgga acttcagttg tatgccacaa tactaccctt agtggttgtg gtgtcttgtc 9240

ttgtaataaa taaatgtaat agcaagagaa agaaaaataa attaagtaga tagagtctca 9300

ctatgtagct cactgtgtct tgaatactgg caatcctcct gcctcagcat gccgaatgtt 9360

ggaggacttg ccagtgatgg ctaccgtgcc tgcttgtagt tgttgagtgg aatgaaacat 9420

ccactgtttg tctcccagtt gtcctataat aacctcttaa aaacagcttg ttcaaagcat 9480

gatccaaata tggttctttc cctgctattt aaatcttttg atctataggt ttctctgcca 9540

tctgtttccc tctctattaa atttgttgaa gaaattaggt tacttttttc tttgttttag 9600

ttgagatttt tggatgtggt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt 9660

gtgtgtgtat gtgtttagac atgtgtgcct gtgtgtgcac atgcggcagc cagagaggac 9720

acgtgtggtg gtgccctgct cttttgcttt gcatttaatc cctttgagat gggcgctctc 9780

tctgtgtgtt tttggttagt ctggctggcg gacaaactct gggatctgtc tgtcttttcc 9840

cctgtcagca caggggttgc agacatgcat gtagggtcac atgtggcttt cacatgtgtg 9900

ctaggggtct gagttcagat tctcatgctt aggcagtaac tgagccatct cctcagctct 9960

ctgtaaactt ccctgctctc tcctttctcg aatcatggct ctattacgtc actttacttt 10020

gtctctttgg ttagatatta aattcataat tggaactaga gactgttctg atattttttt 10080

tcatgaatat tcttaccaat ggattataca tatttttaaa aggaaaatag ccagagggat 10140

ggctcagtgg ttaagagcat tggttgctct tctagagacc taggtataat tcccagaacc 10200

cacatggttt ataattggtg gtaactccag tcctagtggg gatccaacac cagctgagtg 10260

tggtgttatg tgccttagat ccactgtgga tggaggcagg cagtggatct ctctgagttc 10320

aagaccagtc tggtttatac atgtcctgat ttcaggaaag ctagggctat gttgagagac 10380

cctgtctcaa taaactacaa caaccactta aaggtcaaat ctgaatagct tttgtgatgt 10440

aggtagccat taatgatgtt tgtctgatgg tattaatgca ctaggatttt aacctcatat 10500

ttggcttgga tccttcccct tgttagttgg tacttctaag agaaggtctc cttccttggc 10560

tccctctggt catgaggact cagttgtctc tctattggag tagagcttga gtgaggattg 10620

gggtgggaag acttacaggc acgagggaga agtaagggcc accgtgggaa ggggaaatgg 10680

gctttgggta gcttggggtg tgtacactcg tgtgcatgag tctgtgtgca tctatgtgtg 10740

tgtgtgtctt tctgtctgtc tgtgcgaaaa gagaaggaag ttctcacaat gaattgtact 10800

aggcctttgg tctctggtta gaaattgcat gagagccctt tgcccattgc caccctgtct 10860

tggcttttga tctgtggcag ccaagggaag ccatatgaga tctgtgacct gttagcctct 10920

gctcaggaga caaagttcac tcagccgtaa ttcagtattc aggaacagta ttttttggtt 10980

ttgttttgtt tttcctttca gattagcctt agattatttt tccttgtctg tttttttttt 11040

tttttttttt tttttttttt taaagattta tttatttatt atatgtaagt acactgtagc 11100

tgtcttcaga cactccagaa gagggagtca gatcttgtta cggatggttg ttagccacca 11160

tgtggttgct gggatttgaa ctctggacct tcggaagagc agtcgggtgc tctaacccac 11220

tgagccatct caccagccct ccttgtctgt ttttaatatt ggagccaatc attcttgttt 11280

tcaggctgat agagataagg ttgtaaggtg actccttccc cctcagacac tttaaaggga 11340

accacttata acagtagagc aagatcattg agggcatggt ggcctggaga gcaagactgt 11400

gaggactctg gaccctagcc ctaggtcagc tttagctttc tcaggagttc tttgtggagg 11460

cagcagtcag ttgtgggtaa gatggctgtc acaccctctt tttttggttt tctgagacag 11520

ggtttctctg tgtagccctg gctgtcctgg aactcactct gtaggccagg ctggccttga 11580

actctgcccg gtggctgtca cacacagtct aaataaagag ggtcttaaga tgggcagtgg 11640

tggtgcacgc ctttaatcct agcacttggg gagcagaggc aggcagatta ctaagttcga 11700

ggcctgcctg gtctacagag tgagttccag aacagccagg gctacacaga gaaaccctgt 11760

ctggaaaaaa agaaaaaaag aaaaaaagaa aaaaaagttc tcttcctttt tgtgtcctcc 11820

tcaaagtata tgaacttggt tgagttttga caagcagttt aggtttatgg aaaagtgagt 11880

gggcagttag tccagtttcc atgtgtcctc tgcgcccagt ttcccatact aagatcttgg 11940

tgtacggtga tgaacttgat gggcctgatg ccgttaagtt cctggagctc aggaaacatg 12000

tgacaagatg gttctgttga ccacccaatt ctcttttatc cacctagtca cccccccccc 12060

ccctttttct tcctgttcct gaacacctgg caaacacctg tcctttcttt gtctcttccg 12120

tttgccatac cctgggctgt attctaagtc gccatcacta agtcttttcc tgttaccttt 12180

cgctcggcag cctgcttttg agatccttta tgtattttcc tggcttggtt tagctgattt 12240

atgtagtgct aagtaatact gcatggtata gatatgttgg tctgtttatc cactcaccta 12300

ctggagaata gagtgttgct tccaagtttg gcattggtgc acaaagctgc tgtaaatatc 12360

cacgtgtgag ttcttgtgtg gccatacttc tagcactttg aataaacacc agggaacaca 12420

actgctgcat tatatggtaa gaatactgcc aagagggtct tccaaagtgg ctgtgtcatt 12480

ttttgcattc ataaaacaga aaatagggtt tcttgttatt tcacttcttc ccctgggtta 12540

ttgttttggc tttttgccat tctagtatat gaatagtgat agcaatttaa tttgtggttc 12600

tgatttcctt catgtgctgg aagtatctga atgcatcaat gttgagtgtt ggggcggctg 12660

agacaggaag gtggtgcatt caaagccagt ctgggcttca tggcaagaca ctgcctttta 12720

gggcttttag tggccaaacc taggatctca tacatgttag gggtgcacac ttgtcactga 12780

gatacatcca agcccaaggc cctgcctcaa gatgaagtaa attagtaata aatgttaggt 12840

tatgagagct ctgccctcat gactagattg atattattct tgttcttttt ctccctttct 12900

ccattttcat atgtattgta tgcatgcata tgtatgtgtg cctatgatgt gtgtgtgtgc 12960

atgcacatgt atacacatgt atatggaggc ctgaggctga tgtggagact caccctcagt 13020

tgctcttcca ttactggtgc aggatctctc aagcccctag cttgctgatg tgcctatagt 13080

atcactagcc agcttgcttg gggggatccc ttgcctctgg cgtctctgta attataggca 13140

ggccactatg cctttttctt ttttttttta agttttgttt attattatac ataagtacac 13200

agtagctgtc ttcagacact ccagaagagg gtctcagatc tcattacata tggttgtgag 13260

ccaccatgtg gttgctggga tttgaactca ggaccttcgg aaggtgcttt taaccgctga 13320

gccatctctc cagccccact tccttccttt ttaaagaatt atttatatat tatgtgagta 13380

tactgttgct gtcttcagac acacaggaag agggcatcag atcctattac aggtagttgt 13440

gagccatcat gtcgttgctg cgagttgaac tcaggatctc tggaagagca gtcagtgctg 13500

ttaaaccacc aaggcatttt ccagcccttc tcttactttc ttacattgct gccttgtgtg 13560

tcggtgttga catttctctt tcatatgctt cccaccatgt cgtgcctgtc atgagggagc 13620

agaaaggctc acaagtgagg gatagttatt ttcttccttg tttttccctt tggtgaatta 13680

agatctgttt ttgctgtgta gcccaggctg gccttgaact tgagttctgc ttcagcttgt 13740

ctagcactgg ggttacagac atggctaaat catctttatc cttccagctg ctagaactat 13800

gggccaaata aagttttgtc cattgtaagc tacctggtct gataaagtct attgtagttg 13860

tataaacaca gacaaagagc accagtgtag caaaaagcta cacctccacc cccatacaat 13920

tactaaagta tctgttctga tagtttgcgt attatttatt tgggatattt ttcttgttga 13980

aatttaagac ttcttggtat gttttatttg agatattttt cttgttgaat tttaagactt 14040

cttagtatgt tttagaatca gcctatcaga taaggacttg cagatacttt cttgcagtct 14100

gtggcttaca ttatcccatc tccccacccc cgaaaagttt aatttcagag tagtcaaata 14160

attataatct ttcagagttt gtgcttttgg taatatgtct accaaaacca agaacactta 14220

ccctttttct taatatttag aagttgctcc atttattgat tgtttagaga caagtcttgc 14280

tatttagctc aggatagtcc aggttagcct tgaagccaca gtcttatctc aaggttgtag 14340

gtatgagaca ttgattgttt ttctttcctt tcctttcctt tcctttcctt tcctttcctt 14400

tcctttcctt tcctttcctt ttctttattt atttttttgg tttttcgaga cagggtttct 14460

ctgtgtagcc ctggctatcc tggaactcat tttgtagacc aggttggcct tgaactcaga 14520

aatccgcctg cctctgcctc ccaagtgctg ggattaaagg tgtgcgccac cattgcctgg 14580

ccaattgttt gctaagctgg agtcttactg cattgtccag gttgctctct atatcctcaa 14640

gtgacccgtt cccttctctt cctgagcccc cggcaatact gcccacttca ctgtctccac 14700

aattttgttt ttccagaaag tcacatatga tgatgtagtg tcttggtttg gcctcactta 14760

gcaggagctt tttaagattc taccatgtct tttttgtttt tttgtttttt ccttctattc 14820

tttttttttt ttttcttcct ttccctgcct ctgcctccta agtgctggga ttaaaggcat 14880

gccccaccac ggactggtac ttccatgact tgatagtctt ccttccattt agaatgactg 14940

gcatgtgcca ccagacccat atttttttgg agttttataa ttttgtgttt tacattttag 15000

tttgtggccc attttaagtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtggtat agtatctgtg 15060

tctagaattg tttcatttgt ttaggtttat ttatttaatt tatatgtgtg agtgtttagt 15120

ctaaatgtct gtatgccaac catgtgtgtg agaagtcaag agagggtgca gattccctgg 15180

tactggagtc atggatactt gtgagtttcc gtgtggctgc tgtgaatcaa acctagggcc 15240

taaggttaat aagggctcta aattgccgag ctatctcttc agcctctaga atctgtgccc 15300

cgccccccac ctttgtatag ctctgattgt ttgggaattc tgtctgtaga ccaggctggc 15360

cttgaactca cagatatctc tacctgcttc tgcctctcaa ataatgggat taaaagcgtg 15420

caccactgtt gtgggaaata tttaagaagt taacccacca tctctctgct ccactggtcc 15480

gtgctcctgc tccagtaccg gtactggcct gccacaacac tatgtcctgg cgcgtcccac 15540

tttggcctgt tctcaccgct gagctactct ctcccagcta gcgggttgat cccgctttca 15600

tgcaacaccc tacacacccc atgatcagcc atctcaacac ctagttaccc agtagaaaac 15660

tgacacttaa agcttaataa tccaatcaga tgtatataac aataagatca caagttacaa 15720

gatgccaata caataatttc agagccaact gataaggata aagctttacc ccaattattc 15780

taatctttgt gacaatctta gctacttgtg gctgttcaaa accatgtggg atcaggatca 15840

tcttcctgtt tgtctgcctc catgttggct tctcccctcc tcctacctct ctctccctgt 15900

cccccaaact cttagctcca actccccttt cctgaagtag caatgaaata atgttatggc 15960

tcggggtcac tccagcacga ggaactgtac taaaggtcac accgcattag gagggctggg 16020

aaccactggg atccttgttt ctttcattaa agtttcagag tctccttcat atagggcctt 16080

tgcatatttt gttagagttc agagttagat tgtttgtttg tacgtgtgct agtataaatg 16140

atattatgct tcaagtttca aattctagac ttatttaata ccttgtatct ttaatcccaa 16200

gtgctgggct taaagcatgt gccaccactg ccctgctctg gccttgttct taatcggagt 16260

gggtgggaaa acatctccct tctcgctgtt ggctttttga agattgtttt gaaaatcagg 16320

ttgaactttc cttttctaat tgctgaggtt ttttgtgaaa gtagttaaaa gtttaaccct 16380

tttttgccta ttaatatgat tatagaattt ttcttctctg gttgcagtaa tggatattat 16440

ttttgaactt tgaactaatc ttgcatatct ggagcaagtt cattcggtta tgtttattta 16500

ttaatcatcc tgcttcagcc tctttaagtg ctgatatacc agctgtgcac caccaagccc 16560

agcgtcttat ttaagtcttg gtagttatat cttcatgcat tggtatgtct catttaggtt 16620

aacagatctg agggatattg ttcttcatga cacttattaa tggctgtaag atcagtagtg 16680

attatttgcc tttcattttt tgtttgttta tttatttatt tttgattttt cgagacaggg 16740

tttctctgta tatccctggc tgttctggaa ctcactttgt agaccaggct ggcctcgaac 16800

tcagaaatct gcctgcctct gcctcccaag tgctgggatt aaaggcttgc gccaccaccg 16860

cccagtttgc ttacttattt ataagttgta tgtttttagc caggtggtga cccatgcctt 16920

taataatccc agcttttggg aggcagaggc aggcagatcc ctaaaattcg aggccagatt 16980

ggtccaagga atggcttcca gggcagccaa agctacatag gaaaatcctg tctcaaaatc 17040

caaacaaata aacaaaaaaa ttgtatgtat gagtgtgtac ttctatattg gctttgtgaa 17100

tatgggtgta gtgtctgcag aagccagaag agagcattct gttcccagga gctgcgggta 17160

ctggggactg aatgctcaga atcgctgagc tgtctctcca gcctcctttc actgctagta 17220

ctagtaactt aatatttgta tgtgtatttg cctgggagta tgtttgtgca ctagataggt 17280

gcttggccag aaggcatcag gtctcctgga actggagtca caggtggttg tgagccacca 17340

tgtaggtact gggagcagaa ccgggttcct ctgcaaaagc aactggtgtg cccttaacca 17400

cttataattc tccagccctg atattggcag tttttatatg ttcttcacta atctggctac 17460

aagttgacca gtttttggtt ttttttgttg tttttttaag aatttattta tttattttat 17520

atatatgatg agtatgctgt agctgtcttc agacacacca gaagagggca tcagatccca 17580

ttacacatgg ctgtgagaca ccatgaggtt gctggaaaac agtcagtgct cttaactgct 17640

gagccatctc ttcaacaccc tgttagtttt tttgtttttt tgttttttaa ataaaagtat 17700

acatatacat tttaaatttt atatttattt tatgttttca ttttttctgc ctgtaattct 17760

gtgccccatt cccattcagt gtttgcaggt gccaaaggaa ggtgtcagat cttttggaac 17820

tggagttaag ggtggtggtg agctaccaca taggtgcagg gaaatgaacc cttggtcctt 17880

tgcaagaaca gccagtacat gtaacctgtg aaccatctct ctagcctatt aaggttttat 17940

agctgaaaat atgcccttct ccctttaaaa aaaaaaaagt gctggatata tcagtttctc 18000

tttttttgtc tgtgtgactt caaagtgcca aatatgtaaa acaaccagag gccagctatg 18060

gtggcacagg cctttaatcc cagcacttgg gaggcagagg caggtaaatc tcttgagttc 18120

gaggacagcc tggtctacag agtgagttcc aggacagtta gggctctgtt acccagagaa 18180

cccggtcttg aaaaagcaaa gcaaagcaaa ccaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 18240

tccctaaacc aacaaaccaa agaacaacaa caggaaagaa ctaatgagaa tgctatatcc 18300

atggtccatt gatggtgaag tgataaacaa catggtgtag ctctacacag taggctgctg 18360

tttactgtta agaggagaaa ttctgctgtg tgaaaagcag gcacagagga caagtattat 18420

acagtgttgc atattatagg aaccacctag gcagtggaac atacagaggc agaaatcatg 18480

atggttattg ccaaaggctg ggggaaagag gaaatcgggt accatgaacc ctaacagttt 18540

caactgagaa tgttaaaaac ttgaggagag ccggggagtg gtggcgcatg cctttaatcc 18600

cagcacttgg gagacagagg caggcagatt tctgagtttg aggacagcct ggtctaaaaa 18660

atgagttcca ggacagccag ggctatacag agaaacgctg tctcaaaaaa caaacaaaca 18720

aacaaaaaaa ccaaaacaaa acaaaaaaaa aaacttcagg agaacaggta gtggcaatag 18780

ttaaacacta aggtgagtga atgtactaat gacatagatt gtgtaattaa aagtggctga 18840

aagcacacta ctacttggtg agcataccta gggtcctggg tttgagccct atattgggag 18900

gaaaacaata gttgtaatgt taaattatgt attatatata ttttaccata atttgtgaaa 18960

atgagaaaaa aatttaaaat tattttattg tgtcttatgt gtgtcttatt tgtgttggca 19020

cccatcatgt tacagaaagg tgcgagccag ctggtgtgag ttttgggaac agaccttggg 19080

ttctctgtcc tgggtgctta taactgcaga gccacttctc cagcctggat gatttattta 19140

ttttttaaaa aatctgtgtg gtattgataa tggaaagggt ttaaaggaag ctatttgaaa 19200

tgtttaattt tcatggtggg aggtgactgg ggatattttg agcctctgct actgagctac 19260

atttccagct ttcaaaattt taacttaatg ctagtattag cattatttaa ttttcatttg 19320

ttactgtttt gatagaattg ttatatatag ttaggatgtt ttatgatgag taaatcagca 19380

caaaatcgtt tatttgtgtt gagtcttgta agggtctaag aatcgctgaa agaagacccc 19440

agactcaata gtattcaaag acaaagagtg ttctgtagaa acagccagca tgagtgggtg 19500

gaggatgggt gggggactga agggggtggt caaccatcca agcaaaatgg caaccatggg 19560

ggaggggtct cacagaccca ttttaaagcc agttacggat tttccagttg tggttgggtc 19620

atcttcaatc aggattggtt gagcttatgg tatgggatat ttgtacactt ctgattggtt 19680

cctacctgga gggagagagg gttaccttat agggactatt tctgtatctg ttataagccc 19740

ctggccagat gtcagagcag ttgctgattg gttgctcttt ttcttcgttt tttccaagaa 19800

gcctgggatg tcctgggaaa ttgaggctta aggcctaaca tggctgccta ttattctaaa 19860

atggagtgag ttaggtcctt tcagtttgat actgtagaac atatggatgc cttcactgct 19920

ctgcttattt gtagccagat tctgagattt gggttttgag attgaaggat cttcaggggt 19980

cagtggagca tagctgtgtt tagagtgttt gctcaccatt caaaggtccc tatgtttgat 20040

ccaacaactc ttcaaatcaa cagaacacca aaataaatta cttaagcctc agagattcta 20100

cctggttttt ccttactaag tgcagaagct gatactgccc ttccctggag ctgagcccgt 20160

ttgcccagca tgctgggtcc ctgtgaacac ctgaatctgg tcctgtcaac ccaggcccgt 20220

gataacataa aacctggggc ctctgtccat gcctgctgcc tcttttcaca gctttgcagg 20280

taacagagca tgcgtggtgg gcttgacact tctttattta ttttatgtat atgagtacac 20340

tgtagctgtg tagatggttg tgagccttca tgtggttgtt gggaattgaa tttaggacct 20400

ctgcttgttc tggccaaccc tgctcgcatc agaagagggc gtccgatttc attatgggtg 20460

gttgtgagcc accatgtagt tgctggaatt tgaactcagg accttcagaa gagcagtcag 20520

tgttgagcca tctcgacagc tcttcttcat gccttttaag tcctgattgg taactgggat 20580

tgaggactgg aaccttctcc tgggggactg acctaacagg tggtgtagtg tgtggtggtt 20640

ttgacaccat atttataaat gatcatgcgg cacaaattca gaactaccat tcaaggatct 20700

attgacggga tcccagagct ggccggttgt cagaacacat ggaccattag atgcctcaga 20760

ctcattgctg tgaccagagc tagtgtggaa gtggggggct gagaattcca ctcaggatgc 20820

agtatctctt cctcactact cactcttctg aattaaggcc aggccaagtg aggtcaacct 20880

taaaacttaa catgggccgg gtgtggtggc acattccttt aatcccagca ctcgggaggc 20940

agaggcaggt ggatttctga gttcgaggcc agtctggtct acaaagtaag ttccaggaca 21000

gccagggaaa cagagaaacc ctgtcttgaa aaaccaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaacctt 21060

aacatgagca agtggattgg tttaggcctt aacaccatgc tttttaaagt taaaagtgaa 21120

aatgcttatt aaggaatctg aggttatatt gcaaggtttc tcttattaaa ctttttggtc 21180

tttaggcagg ccagcttgtg acaggcagag gtaggcagag ttttgaggcc agactggtct 21240

acaaagcacg tcctaagcca gccagaacta tatagtaaga ctttgccttt gaaaaaacag 21300

aaaagacgag aaattggtct tgcagtgaaa gtgttgggtc tttttgtttc cttttggctg 21360

ggtttacttt taagtgagac agtgagttag aggaagaggg tgtacctgtt tacatgtgaa 21420

cattgtgtgc cgggagctcc ttactaagtt ttgaattttc cttaatggaa tcttagataa 21480

attacctata ctttttgatc tggaattttt ttcttaaagt ttatctttgt aacaacttaa 21540

aacaggaaaa agaggggtta gagtcgtaca taactaccat tctgagttct gaccttgtct 21600

tgggaggtgt aattgtttct agtgttctga ggagtcttgc aaacctgcca ggtaaactgg 21660

acaggaacca aagaagtcat tatttagtaa tttatatgtg gtatttttaa acttattcac 21720

atgtaacctc tcttagtctc cccctcgccc tctttgtgga agtcatgtga atgttctgta 21780

gacttcagtt gtagggctgt gcagttgttc ctgctatgga gattgaacac ttgctgctct 21840

ctcttttttt ttttttttga gacagggttt ctctgtgtag tcctggctgt cctggaactc 21900

actctgtaga ccagactagc ctcaaactca gaaatccgcc tgtttctgcc tcccaagtgc 21960

tgagattaaa ggcctgcgcc accacgcccg gcacacttgc tgctcttgta gaagacctga 22020

gtcctgagtt tggttcccag tacctatgta gggtgactca caaccacatg taactctagc 22080

tccaggggga tccaatatct ctggcctcat caggcacctg catatataac ccctatgcat 22140

taatgttgtt ttgttttgtt ttgttttgag atagcacatc tgcttgtctc ttagttcact 22200

atagagaatg acactggcta cgtaggatgc caagtaattt aaaagttatg agctgtgtat 22260

tcctggaatt tcctgtgtag ttttgaaact gtagttgagc atggataact gaaaccacta 22320

aaaggaaaac ggaggtaagg ggtaggagtg ggcggggcct gctttacagt gctctgctga 22380

gccactggcc cagggatgag tgctgaagtg ctttctgtgt ttcctaacct gctgctgctg 22440

cgagcattct ctgtgcctgc tggagtctct ctgcttgtag aacagagctg agcagttcac 22500

tgtccaacag gatctgccta aggatctgga gctggccctg ttgctgagat gataagaggt 22560

aaagcgacac tcaggagatt gctggaaccg ggcagcggtg gcgcacacct ttactcctag 22620

cacttgggag gcggatttct gagtttgagt ccagcctggt ctacagagtg agttccagga 22680

cagccaggcc agggctacac aaagaaaccc tgtctagaaa aaaaaaaaag gagattgctg 22740

gatctcactg acactgctcc acaactcctg ggaaggtgga cagggcaggg ccggtctgct 22800

gggcgccact atagaaatat ttgttaaaat gctaggatgg tgatatgaag gtggttggca 22860

gatgttggtg gttggactga ttgtgtcaaa acatcaagca tcaagagaag gcttaaaaaa 22920

tctaatatct aaagtctttg tcttctacta cttgaataca gcatgcttca agcatccctt 22980

acagttggac atctaaattg tttccttttt gtctgttgga aatgaagctc tagaaacatg 23040

cccagcattg gctttgcagc tattgtcttc gtctgcgttg cttagaatac gcttcttaaa 23100

tgttgccagg gatcttgtga ggcccagcag tgagggaggg agcctggcac tcagcttgga 23160

gcctcttctc cacccatgaa gagtagagat ccactctttt gtttgttggg atggtgcttg 23220

tcaaattttt gcctttcaga ctcttggggt gtgtgtttca caatggaaat gagttacttg 23280

ctgttgacta tggagtttga ctagtgtgtt aggtttttag gggaagaact gggggtactt 23340

cgcatcacca aagtggaaag gtgtttgtcc ttggctataa gatcctgcac gtaggactta 23400

ggtagggtgg atacaggtcg gtgctagagt gcttgcttat tactgtatcc caggaacttg 23460

ggcttggtcc tcagtgatgt tgagcgaaca agcagattaa tgggaacttg ttagttcagc 23520

agcagctctg tctgccagtg agtgatctgt cataaaatga agcggggctc ctcggtcagg 23580

gtcagtgtaa gtgcgtgccg taggtgcttt ttggtgaaga agttaaggta ggaaggggct 23640

ttgagtttgt gaggattatt gaatattatc ctgtgaaaac agcagaccag gagagagaga 23700

gagcttagct gggtacacgc cacaggttga aaactgctga tgtagaatga ctcaggagag 23760

ttttattttt acatttcatt gatttgtctt tcctgttttc ctttccattt tgtttattgt 23820

gttctacatt tttttctaag gacagtttta attccttttg tgggcttgat agctagtcat 23880

atttttaaga tttgttttac tttatgtata tggatgcttt gcctgaatgt atataaatgt 23940

actatgtctg tgcctgatgt ttttagagac cagagacatc tttaactgga tttacaagtg 24000

tgggccatca tttgggtgct gggacaggat ctcagtctat acagtgacag ccagtgctct 24060

taaccagtga gacatctcat caatcatttt taaattattc ttcttttaac tgtgtgtgtt 24120

ttagtgtctt tgtttatctg atgaatgtat ggagatgaga aaacaggttc tgaactcagt 24180

tctttttact tttttttttt ttttttgaga caagtgtctc acaatgtagc tctggctacc 24240

ctggaatttg ctatgtagac caggccttga ttcacaggca tccttctgcc tctgctgccc 24300

acgtgctggg attacaggtg taaaccacac atcagacctc atttacaatt ttacttgtgt 24360

tatttcaagt atgtggtaag gaatacagag taacatcgaa tctttgagca tctacccctg 24420

aatttaagaa actctaattc tattttaaac ttattttctc cttcccttcc ctccttaagg 24480

acaacagctt ttcagatgta ttacacacta cgtggtgccc ctcctgcttt ccaggtgatt 24540

gttgccacag gcaggacagg accttccctg ttcttcccaa gtaatgcgcc atagtctgta 24600

cttacatcca tgagcaatgt gcactgtatt ctgtacttac aaacattgta ttagtgggtt 24660

atctttctta ctttagaaaa ctatacgtgt gagcattcat atatacatat ggcacagctc 24720

tgtagttcag aagataactt ggaatttgtt tatgtgcacc aacacttcag tgtctttgtg 24780

ttttaggaga gcttaatttg agaaacatgg ctgcagaata gaaatttaaa acccatgtat 24840

tgccaggcct ggtggaatgt gcatggagct cgaggtgctt acaagaccat ttgcaggttg 24900

tgtcaggatg ctaacatttg ccacctgttt tcaagccatg taacctcttt ctagtggaca 24960

ggtgtcatta tgtccacttg atagatgaag aaaatgaggc tgaaggaagt atagggaccg 25020

gtatataaat gtgtgtcaga agcaggtata gaatctataa ggcaaggctc cttttgcagt 25080

gatcaaggga ctatagtcag tgatcttggt gcttccagga agcctgtggt agagtaggac 25140

caccgaagtc tcagcgagca cttacgtggg tgctggggag tctgaactgg ttctcatgct 25200

tgcatggata gcatgggctt tacctactga gctttagctt gttaaatatg tcatccagtg 25260

gcattcagca cgtttacatc attatgcaag cctttgtttt tgttttttaa cttttttatt 25320

tattttatgt gtgtgagtgt tctgcctgtg cgccatgtgt ttgcattgcc tgcagaggga 25380

ctggagttac agatggttat gagggaattg aacctgggtt ctctgggaaa gcagtcaagg 25440

gctgttaggc tgtttagtgc tatagattga acccttgaat gcaaatatcc taccaaagcc 25500

ctgctattat ccattccttt ttaagcagtt aaatatttgg gttgtttgct tattttgtct 25560

tttgtggccc tggttgttct ggaactcact ttgaccaggc tggcctcaaa ttcacagaca 25620

tccacctgcc tctgtccccc aagtgctggg atttacgaat ctctgctttc agctccttta 25680

tatttatatc tgggagggaa attgttaggc cagatggcaa ctctgtgttt aagtttgaaa 25740

tgacatttta tattttttat tatttttagg tagggccttt gttgcctagg accttgagtt 25800

cccaagccta ctggatggat tgctagaaga gacttaaaga cttaaagatt tgtgttagac 25860

ttcagaagcc agagccaggg ctagtcgtgt aagcctgtga atttgatccc tggggcctgt 25920

gtgaggttgg aaggaggaca accatagagt tgtcctctca cctccactta ggtgatgtgg 25980

cacaggttgg acatgggatt gcataagtgt gtgcatgtac acatgtgcat tcatgcacac 26040

atacactcac acacacagaa taaaaaattg tttttaaaga taagcatcta gaaacatgac 26100

taagccacag gttggtggtt cgccatatgc tttccactga actgggagtg ttagcagctt 26160

ggttggtcag cattgtgaac ggcagcaggc agcagcagca ggagcttctt acaggtctta 26220

gacagcctca gctcctggga cccctgccct gaagcggcag cccttgagag tgacacatgt 26280

cacagtcctc tgacctaggt gccaggatct ccatcctttg agagaagcta gtgttgcgtg 26340

tcttaggcct gtaggagcgc tccctggaga gagaagcttc tgctgcgtct agagcccagg 26400

cctacattgt cttcagctcc tcacagccct cattgtttct gctgcctctt ttgtttctgc 26460

cctgacaccc tagctgccct tgtgtattta ttgtcactgt ctctacaatg gctgcttcca 26520

ccctctcttt tttatggcag cagcctagcc agctctgcta attatatagt tagaagcaaa 26580

gaaaaaggca caagaatcct tttattggtc ccagtgttgc agtaccagcc caggagcccc 26640

tctccagcgt ggttaacaga gagctgagca gccttcagtg tgaccagaaa tggaccagaa 26700

atggacatct ctatctcaga atttcatgaa aaagaacaac tgtctgaacc aaaaaaatgg 26760

cacagtccct tatgcaaatg aagaactctc cttacactaa ttgtaggctt tctgtttccc 26820

cttgtttggg tgaaaatgcc tgcaaggtaa actgtcatct ggacctcact gagtctttca 26880

tggtaaaatg tctagggcaa tgcgtttcac acaggccagc cccctgcttt ctggagctgc 26940

agttactact ctcgggtagc aagcagcagt ggcagctgag gaacttcatc tgatacctca 27000

gtgcagtatt cacagccaga cctatgtgag gatagtcctg cagctgatgg atggcagcct 27060

gggtgccagg gagagctctg atagctgtca gttaggcagg tggcccttag aaggatgctt 27120

atagaaaaga caagccttcc tgctgcagcc ttcatatcat agtgggtttg ttttctgttt 27180

tgtttgtttt gttttaatgt tttttaaaat ggggaatgtg ggagggggat gtatgctgca 27240

tgtatggagg gaggtcagag gacaacttgt ggaagttact tctctatttt cactatgtgg 27300

atcttaggga ttggacacag gcagcaagta cctttaccct ctgagccacc caatagcaac 27360

tctgtttgtt ttaatgtagt tatcctctta gatgtaaatt gatgtctgat tgtggttttc 27420

attagttaaa ctgtggtggt ttgaataggt atgtctccca tagacttctg tgtttgaatg 27480

cttggcacta ttgagagatg tggccttact ggagtaggtg tgggcttatg ggagggagtt 27540

tgtcactgtg ggggcaggct ttgagatctc ctatgctcaa tctctagccg gtatggaatt 27600

cagtctcctt gctagctaag gatttagatg tagaactctc agttatctca tctctgtgct 27660

gccatggact gaacctctga acatgtaagc cagcctcaga taaatgctgt cttttataag 27720

agttgccttg gtcatggtgt ctctgcacag aaataaagcc ctatctaata taatggctaa 27780

cagtgcattt ttatgtgtct attgcaatct gtctttcttc tttggagaaa tgtctgttta 27840

gacctttctt ttttcccttt tgcattgttg aatcatgctt cttacataat ctgtcaggat 27900

agtatttctt tatcaaatat ataacttgca aatatactct cccattctgg ggattttctt 27960

tttactttca gttttttaaa aattggcttt aaaaattttt atgtgtatga gtgttttcct 28020

gcatgcatgt ctgtgcacca tgcctggtgc ccttggtggt cagacgagag cattcggtat 28080

cctgaaactg gagttacaga tgttgtgagc cagcatgtgg gtgctaggaa ttgaaccctg 28140

agtactctgg aagaccagca ggctctccta aacatgagcc atctctccag cccagtcctt 28200

tactctctta atactttact cttttgcaca aaggtttaca atttttgatt aaattcaatt 28260

ggttcttcct tttatatgtg tgtttagtgt catgtcttaa gaagtcagtg ccaaatgtag 28320

tgtttcctac agtgtgcttt ccagagtttg aggttttaag tgtggctttt tggcactctg 28380

agtgaattat tgaatattgt tgaaggtaag tgtctggcct tattcttttg tatgcggata 28440

tccagttccc tcagcaccat ttgttgcatg atctattgaa cagtctttgc tcactagttt 28500

gagttatttt tattatgtta actaagagtg cacagaaata gaaacttctt gtgttcaagg 28560

atgatttaaa aggaaacaaa tttacgagtt agagatgcta ttgaaatcgt ataagatgtt 28620

aattttcatg gcatctcatg ataccactcg aagtgaacat tggtggtgtt gtgtgatgtg 28680

gaagtgtatt taggtcctgg ccagagtgac acccttcggt tatgaaaatt tggcccttgc 28740

agcagtgtca cctgctctta cttggcatgc atgcatgcat gggtcaccaa gttgtgcttt 28800

gctcttggct gttaatacag accaggtaaa tctcttgcgt ggcctgagcc ggacaagcag 28860

gtgcagcagt atgtatgtgc tgggacacag ggcagccctg tgctcccaag gaaggctagc 28920

ccttagccca aacagaaacc atgtgagact tcctgtggca ccgtccactt tctcttgtgc 28980

tcctgaaggg ttaattcccc ccacccctga gagttagccg ggaagaggga attatttaca 29040

cctcgtctga caaagggagc ttgttttgct tttcccagag gaattattta caggatcctt 29100

gcttctgtgc tccttctgtg gttggttagg gtgcttcctc atggctagtg accccacctt 29160

tgcctcagtt ccactgtaac cacagctttt cattgactgc aactagattc aaagcttgtg 29220

ctcccagtct tagatgggat taggatgttt gctcttaaca ctgattttac tgccaagatt 29280

ctgtcaagtt gaagattcac tacatcagtt ttgtttgcat gaccatagag ttcttcacag 29340

ctaaattctt aactgggttg tccctccctg tttaaagtgc tagactaccc atttgatttt 29400

taactattga aaatgagtga tgctgagata agcttccggg tgaggacctc atgcccctgg 29460

ggcagagagg ttctttagct gttttctgct tggatacagt ttggtttaga tattcagttt 29520

ggttttggtt gtttggttgt ttgttttgag acagggtttc tctgtgtcat cctggctgtc 29580

ctggaactca ctctgtagac caggctggcc tcaaactcag agagatctcc tgcctgtgcc 29640

tcctgagtgc tgacattaaa ggtgtgtgcc accaccacct ggctagaaga tggagtcttt 29700

ttatgctgtt ctgagcaaag agtctccact ttgtaggctg tgaaggcaag tggctgaaac 29760

tggaagtgaa gctctgccta gctgctggaa ggagtggctc tccccccccc cccccccagg 29820

cggaagtgtt ccttgtcttg tatgcatgtc aggaagtgta gtaatcttgt atgacttcag 29880

gatgggattc atttagtatg atagtataca acatttttct aagtttgtat caagtcatag 29940

ctaagcagat tatatatata tatgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgta 30000

tatttttttt tttaaataac caaaacaaga gtgttatgtg aattaacaca ttatgggcta 30060

ggtatggtgc cacacccacc agtgagagtt tgaccatgct ctagtgaata tatagacaat 30120

acaaactggg ctttttccct ttgattttta cttattattt taatctatct atccatctgt 30180

ctatctgttt attttgatgg gggggaataa caagggcaag gtggtcatgg aaagactggg 30240

aagtgagtgt gatgggttgc ataatgtgag tcccagagga tcactgaaaa tactacatgg 30300

aaaaaaaaag agaatttcaa catatgaacc agggaaatgg cctaggatgg agagagctga 30360

gtggcagagc acttgtctgt gtgcaaggct tcgggtgtga ccccagcact gcaaataaat 30420

aataacaaaa gggaaagggt tcactgatcc agcaatgtag gtagatatca aaatattgac 30480

actgaaagac taaatgagta accctacaag tattttctgc ataatttgct ttatatgctt 30540

tttataaaat tatatataac tatacgagat gcaaaactaa agtagtaaaa aggacatatt 30600

aattgttgct gacgatgggt aaaaataaaa gcaggctgaa ttatagagac ccaagaaagc 30660

ttgggaaggt gtcagtgtgt tcactattac gattataaag atagtctgac atccactggc 30720

caaaatcaag ttttaatgtg tagcttatta ttatacttaa gtgttatgga gctaaaataa 30780

taccggtaaa aacctcagct tcactgggtg gtggtacaca cctttaatcc caacactcaa 30840

gaggcagagg cagggaggca gagaggcaga ggcagaatct gtgagttcaa ggccagcctg 30900

atctgcacag agaattctag tacagccagg gccaaataat acagaataag acaagtcctt 30960

attctcatcg atgtgtatcc tcattagctg ggtaatagca cacgagctga tagttctggg 31020

gacttgggcc caggcctcac atgctaagaa agagcactat cactaagcta catgtctatt 31080

cagtgttttg agatagggtc ttgctgcata gtttagacag gcctagaact catgatcttt 31140

ctgtctcagc ttcctgagtg ctagaattac aaacatgcac accactttgg ctgatagagt 31200

agtttattct aaaatgcttt taaaattgga accatgtaaa acaatcaatt ttagtaatat 31260

aatctcttgt tcatttttaa agttttaatt atgagggatt tattttcttt ttaagattga 31320

ttttatttta cgtgtgtgtt ttgcctgtgt cctgtggagc tcagtagtgg ttgactactg 31380

gagctggagt taaggatggg tgtgaagtac atgtgggtcc tgggaacaca acctgggtcc 31440

tctgcaagag cagcaagtgc tcttaactgc tggatcactt ttattagttt aaaaaaaatg 31500

tgtatattat ttttctgcat acatatctgt gcacctcttg catgtctggt gcttgcagaa 31560

accagaatag agcatctaat ctcctggagt gaactacagt tggaagccaa tatgttggtt 31620

cggagacttg aactgggccc cctggaagag cagcaagttt tttcttaacc agtgagtgag 31680

ccatttctcc aaccctaatg tgattctctt cattagttta tctatttact tatttgagga 31740

aaagcctcac tatgtagctc tagctggcct ggagctggcc ttgaactcac aaagatctgc 31800

ttcctgaacg ttgggattaa agttatgctc cagcatacct tgactctcaa gtacaccata 31860

gtttatggca ttaagtatag tcacaatgta ttgtggcaat tgtcactatt aagttccaga 31920

acattcatca ccaaatagga attctgtttc tttccagccc ctggcaacca agaggctctg 31980

gattttctta ttcttcatgt gtcatgtaat agactcatac tgtatggggc tggttttata 32040

gcttcagggg tttagtgcat ggttctcatg ctgggacaca tggtgggatg taggcagaca 32100

gggtgctgaa ggtaagttta gaattctaca tctagattag taagctgtag gaagacatgc 32160

acgcacacat gcatgcacac tgagcctgat ttgagcattt gaaaccccaa agcccatctc 32220

caagtgacat acttcctcca acaaagccac acctcctaat tcctgtcaag tagtgccact 32280

ccctaaagac caagcatcca cataaacgaa cctgtagtgg ccactcctct tcaaaccacc 32340

gtgtgtgtgt gcgtgcgtgc gtgcgtgcgt gcgtgcgtgc gtgcgtgcgt gcgtgcgtgc 32400

gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtaacttaat atcaaccatt tgaaagcata caatttatgt 32460

tgttgtcatt gcccgtctcc agaaattttt atcctcccca actgaagctg aaaatactgc 32520

tatattttct cttccatcct tgcccctata gccatgattg tctattatgt caggattatt 32580

cctgggattt gacttctcta gagacctcat aaaaatggga tcaaacagta tccttttgag 32640

tccagctgat ttcactctgc gtaacagtat tctcaaggtc cactcacttt ttatccacca 32700

ttcctcgccc atagactcct tcacttggct ctgcctcagg ctagcatgaa taacactgca 32760

gtgaacaggt ctcttctgga gacctgctct cagttctttg ggggatgcac ccatgtgata 32820

attctgtgtg tgtttgttag tttttcttta acaaattgcc atgattctct ccccatgctg 32880

tccattttat attcccggaa gcagagacaa gggtcctcca gctgtgtcac gtgcttgtct 32940

gcacacgaca acgtgtttcc ttttgtttgt tttatagaaa tcaccctaat agctactata 33000

aaattttcat acactttaca ttttaatgta taaccaagtc ttaatgtact gctggacagc 33060

agttacccct aaacccttgt ggaagtgtgg aggactctga caactgtcag tctcctcctc 33120

agccttactt actcccaaat atcaaggcgg cccagggaag tacacagtgt accttggtct 33180

ggcatgtaac ttttgaagac tttatggaac ctacagatgg cagaggtcag caggtgttcc 33240

ctgtagagac aatacgtact ccttattggg tctgtggtct ctgtctcagc cgctgcactc 33300

tggtgtgctg gtgacaagca gctggagtca acgtggaaag gagtgagggg tgttgattgt 33360

attctagaat agttattcat atgtgcttga atttgaatta tatatacttt ttaaaaattt 33420

attttgctat tttatgtgta tgagtgtttt gcctccatgt atgtgcgtgt gccacactca 33480

tgcttggtgc cggaggaggt ggtgagcctc tatgtgggtg ctgggaaccg agccctcctt 33540

tgcaacaaca gtactcttaa gcactgagcc aactctctag cccattatat atgcttatcg 33600

tgtgtcgcag tataattctg acttcttttc aaccatttaa aaatgaaact ataaaagcac 33660

ttttaacttg tggagtgtat acaaatggcc tttgttttgc tctttgggca tgaactctgt 33720

taagagagag ctgagtagat gtcgggggag gggggacgaa tgtggtttgt tagaactttt 33780

ggaaattcca ttttctggtt aaggcaaagg gtacagtact tagctgatgg caagaagtgc 33840

tatgctcaga gtagaagacc ctagaattac agatggggta ggtgtgtcta taacaactta 33900

catgaagaga ccaggacctg gcacagtgct cagcatgttg tctactgtta agtgttttat 33960

gggacatagg tgggaggagt gtctataaga acaagaagga tggttagtgg ctaccattgc 34020

taaatgatta ttttattggt ggacctgtct cagagacaca tggtcattgc tctgtgcctg 34080

agagagtcca tgaagagctg agagagctga ggtctgggag tcatatcagg acttggacgc 34140

atatggaggg acaggcagta ggtgaagcct cctagcttgt tacacacaca catggactga 34200

aaatgaagga aggtgccatc ttcctgtttc tgctgtaatg aaacaccaga gacagttttt 34260

tttttttttt tgaacagagg ttgcttttat ttagctgaag ctgagaagcc caaagtcaaa 34320

gggcccatgc cagattcaga gctgcttgct gcacatgtct tcctagcccc tcactagaat 34380

tgttcttacc ccatgcctcc aaactctgcc agcccctgcc caatacctgc ctccagatgt 34440

ttcagcacct cggatagtta tagcagcaac cccactctga gtgccaaatc ggtagtagaa 34500

ttttgacaga agcagaaaca atagggatgt agacagacag accagtgatt tattaggaaa 34560

atcagcttgt gtggttatgg agggacagaa atccctaagc aggctgtcta gaagtggaag 34620

gtgctgggac gccagtactc tgtaactctt gtttctgtcc agaggtctca gagttaggga 34680

gccagcaggt ggtgtttctg tcagtttgag accaaaggcc ttacagattc agggatgggc 34740

tgctataaat tctggagttc aaaggccaga gaacctaggc ttctgatggc cagagaggcc 34800

tcatagttgt gtcgctatga ggaaatctct agatgtattt ctctttgatt ctctctgtta 34860

atgaaatgga ctggtttcca taaaagttct taaaattaga aattaacttt tttagaatct 34920

atctgatgtt aatagcatta tggatacttg gaccagagat taagtaagag cctatggaca 34980

caataaaagt ccctcttcaa agctagaggc acggctttgc acagcacagg aaggaatatg 35040

gaagatggcc attctccatg tgactctcca agccagcacc agaattacag gttttattct 35100

tatgtgagaa cttcagatgc tctgtgagtt tgttgtctct agtgactgta ttaagcagaa 35160

cagaagctaa agatggatgg agagaagtca gaatgatatc atcaaaaggg accaattgca 35220

gagcccaaat atagacccct aagctgctct gaatgaatga tgggtgttgg ctttaagtta 35280

ggtcaaccct agtcacaggc tttttttttt ttttatgata gggtttcatg tcattcaggc 35340

tggctttgaa ctcactgttg ttgctgaagg tgaccttaaa ctcctggtaa ccccacctgc 35400

aattcttgaa ttgtaggcat gcgttgcagg aaatattaaa aaaggaacag gcacattcct 35460

gtgcttgtgt cggcaactct ctgccctggt ggcatggctg gccatgcact ggtgacctgt 35520

ttttatcaag tggaggctct aactcacaac tccaagatct ctccacccaa cttgctaggt 35580

tccctctggc aggtcgctac cacgccaatc ccatgattca aatcccccac accgctgtgg 35640

tgcacctcag gcagacccac actttgctgc catacctttc tctcttgaac ctggaggaga 35700

cgggagggaa agcatcacat aaacttagtt cacgatagtc gcaagtaagt gttagttttt 35760

aaaaaaaaca gggctggaga gatgatggct cagaggttaa gagcactgac tgctcttcca 35820

gaggtcctga gttcaaatcc cagcaaccac atggtagctc acaaccatcc gtaacgagat 35880

ctgactccct catctggagt ctctgaagac agcaacagtg tacttacata taataaataa 35940

ataaatcttt taaaaaaaaa gttgaagccg ggcgtggtgg tgcacgcctt taatcccagc 36000

actccggagg cagaggcagg tggatttctg agtttgaggc cagcctggtc tacagagtga 36060

gttccaggac agccagggct aaacagagaa accctgtctc gaaaaaaaaa aaaagttgaa 36120

aaaatatagc ttaatgtttt ttgtttttgt ttttgttttt ttcgagacag ggtttctctg 36180

tgtagctctg tagatcaggc tggccatgaa ctcagaaatc cggctgcctc tgcctcccaa 36240

gtgctgggat taataaaggc atgagccacc actgcccggc aaattttttt ctgtagaact 36300

tatatttagc tttacaaagt ttatagcaga attgagtgga aggtacaggg attccctgta 36360

tagccccggc actcccttga gtccccttat atgacgttct gcccagagca gtatagttgt 36420

tcagttagtt aatcttcatt ggcttgttgt tagcgagtgg tccctgatgt gtattggtgt 36480

tgtagtaaat agttaatctc agttgatcat tcagttgatc attcaacttg atcattcagt 36540

tcccagagaa aagacacaca acctttttat ttatttattt atttatttat ttatttattt 36600

atttttaaag atttatttat tatgtgtaag tacactgtag ctgtcttgag acactccaga 36660

agagggagtc agatctcgtt acggatggtt gtgagccacc atggttgctg ggatttgaac 36720

tcgggacctt tggaagagca gtcgggtgct cttacccact gagccatctc actagccccc 36780

aacctttata tttataataa gccttaatca gctctagagc tgggcagtta tctaccctct 36840

atggctatta tgtctactac tctatcaata actacgagtt ataacttgcc atgttgcctc 36900

tggacagctt ttaactccag ttggccagcc ctcatggcca tgtttttatt tctcacccat 36960

cgagtcttct ctccaccttc tccctctcct agaagtcctt gcctccagcc ccagcccaaa 37020

tcaaactccc acttctctgt cttctgtcca gctataggct gtaggcatct ttattcacct 37080

atggggataa cttgggggtc aaggttacat agcattactt gggtcaaccc aagaatctgc 37140

tccctgggac aactagggct gtatttagca ttacaacaca tagaacagac taaacatcaa 37200

catatcagta ttgctggaac ttcttactta gtggaatgat ggatccaaga tgcatcacat 37260

agaattggtt ttattgcccc aaaattcttt gctctgtctc ccaactcttg gcaaccactg 37320

agccttcttc ccccatcttc agtttgactt tccccaagat gtcttacagt tggaatcaca 37380

cagtttacag cctttgaatt tggcttcttt cactcagcag ccagcattta aggcccttta 37440

aatttgtcct ggcttggtag ctctcctcgt tctcatgctg tgtgatcttc ctttgtacag 37500

atgcactaga ccacatttcc tctgctgaag gccatgttgg gtgcttccat ctgggcagcc 37560

atgaaaggcc tgttctatat gtcctggtgt aagcttttga gagcatgttt ttagcttcct 37620

ggattgctgg attataaact ttgagaatgt ttgtttgtct attgattgat tggcagacag 37680

gttctcactg tgtagtccta gcacggaact caaagagatg tgctggcctc tgttgggatt 37740

agaggcatac accaccactt ctggcctcta gcttatgttt tcattctcac ttaaattttt 37800

tttcttcccc aaaaccttta aaacacacaa acaaacaaaa agatagaaag tatgtggaag 37860

ctggggccat ggcttagtgg ttaagagcac tcgcagtttt atttccagca cccacgtgtt 37920

ggctcctaac tgtcttatgc cctctctggc ctctgagtac acagacatgc aggcaaaata 37980

ccgtacacat aaaatgtaat aattaataat gacaagaaca acacagattg tgagtggtga 38040

ccccgtgact gggatcagac ctgcacacac attaaattat gcctgtattg aattgtcttg 38100

taaaattaat tatctgataa tggtgcttat ttcccgaggg tttgctttgt gcttggtaaa 38160

cagtaaacct tgtagagata cagatagaag ctgcctgtat ctgcactcct gctctcccca 38220

ctcagcaagt gggaaggagg ctgtctgtgt aaaatgcttc ccccagcaca ggctggctgt 38280

gtaaagctca ggttttgttt ttgtttttgt tttgtttttg cttgtttgtt tgtttattgc 38340

tactttaagg aagaaaggga acctgggaca tgtggcccag ggtgcttgga ccggagtgcc 38400

tctgcgtgtg tgcctttggt tggttttgag cagaaagaat ttggtaagct atcagatcag 38460

catgagaaga aaggtggacc tgggaagcag agagcagagg aggaagtcct ggtgaccgtt 38520

gggactggga gtaagatgat ctttggttct ggtcttgtgg catttgaggt gacagcctgg 38580

caagaggtct ctggcattga gctggaatgc tgaactggct aactatgttt ctgtttctac 38640

catgaattct ggaaccttct ggagccactt acattgcttt gtggttttgt agggcttgat 38700

tgctcacttc ccttagtgtc ttggtatagt tgagaaaaat taagtggtat agaaagttgt 38760

aagtgcctgg ccttccctgg aggaaaatac caccagctgt tatagctact ttggaagttt 38820

gtctcaaatt tgaatacgta attctgacac cagcagacac tccttgaatg tgtatgaaac 38880

cgaccatgac ttgttagtgc tctgtaccaa agtgctgaca ctgagtcctg ggcttggggt 38940

cctccttgct ccctggtggc cgtgctgccc cacatttgac cacagaatcc cttctacagt 39000

tgctcaggct ccctagttac gcaggtagaa cctttgctct acagggtaag attattaaaa 39060

taattttctc tagttgatat atttccttgt tacaaagatt tagtttttaa aaaaatacat 39120

gccattaaca tacattttat aaaatgggtc agtaaaagta tacatttcaa aacagtaaat 39180

ccctctcttt catgtcactg cttaaactta atcactgctg atagtaagtt ccagatcttg 39240

ctttgtggga acagggaaat gtacagctat ccaagccaag cgcattcatg tgtacatagc 39300

atgtatcacg tgggacacca actgtggaga agacgactct taggaccggt atgtcactaa 39360

gcagactgta atcctcactg gaagggtaga caacagattc ttgccggtga tggaaatcct 39420

tctgggttct gttgttgact gtaagttttt agcatttcct gatcatgagt tctgtgctgt 39480

gcatccttgt acccatgcct ttatattaat ccttatggaa tatttctgaa ggatagggtt 39540

agggagtttg gaaattacat gaacctcttg agatatttgg taacttatac ttccacctgt 39600

agcatctatg cttttttcat catccttttc aaaaagtgtc cgctcttagc tacactaaga 39660

cttaactaag actagttact aatagttctt gggtgaatat agtcagtgct tttgtgtagc 39720

attagatcct tgtgttaaaa agcctggatg gtggttgtaa cagaccttgt tttacctttg 39780

tgtttgtgtt tgcatattcc atgcccttat aagagaattg tgattctttg cctactttaa 39840

cttttagaag gaaagtacta ttatccaaat ggaggacact tgggtacaac aatcaaatcc 39900

agcttctctt gttctctcaa aacacagacc actgttgtgt ccaagtgtgt aggggtttcc 39960

agtctgtacc tgggaagcta ccaattctgt agcagacgcc agctgggtgt ctatcgttct 40020

agttctgtag tcccctggtc tagttcatgc taaccttact tacccaggga tagcaacaga 40080

gcttttatca ctggtgtccc cagcccaatt gcaagcccca ggttgttggg gtagtatgca 40140

acacttttac tagattatct tagaaaagct gccttcgagg aataaatggc agagatgcag 40200

aaacacagga tggtctggag gctccccagc ttctgtgcca gtggagttga gatgtgcccc 40260

cgcctggctc ttgctccccc gcagggaagc gccagcatgt tctgtcagta agtaagctct 40320

gctagaccag gccttttggg caggtgtggg aagctttttc ctgtaaacat gatcaactcg 40380

gatcttctcc ctgatgtcaa ggtggcaggg aagaacagga agcccagagc ttcttctctt 40440

accctggtct tcacagcatc atcccgatgc agtccaccat cagccagtta tcagtggaca 40500

gaaaagcatg gagtgcctaa atggttccaa agattacaag gctgtatttc aggaatcaga 40560

agtctcacaa tcagggcagt gttgcatagt gtagtcacag agctcagttc tcaagatctg 40620

caatttataa tttcatctga gcttcacggg ggtgggggat gggggtgggt ggggggtgat 40680

gtttcacaga acttcctggt gttactatga tccagaccct ggagaaactg ttttctgtgc 40740

atagttagat ggttctagag gcatacagct gcattggtgt gtgaaagaca gcctacagaa 40800

cttgtctctg tcctaattta ttctatcatg atatcaagct tatactcagc caagagtggg 40860

cacttcagac acagacttta gtctgtgcag tacttagtca ataagcactt agattcactg 40920

tgattctatg ttagcaaagt catgtaggcc aggctggaga gatggtttac tggttaagag 40980

cgttggctgc tcttccagag gtcctgagtt caattcccag caaccacatg gtggctcaca 41040

accatctgta atgggatctg atgctctctt ctgatgtgtc taagtgtact catatacata 41100

aaataaataa gtaaagtcta aaaaaaaagt tttaagaaaa agaaaaaagt ctaacaagcc 41160

aaagagactc aaaagtactg aagtctgctt tgaatgttta tgaagaatgt accaagattt 41220

attactgctt gcattgtgca tgccactagt tgcatagaga aagaaagggt gtgtttggca 41280

tgactaagag gaccctaccc ggcctgacat gggtctcctt ttcttactga tgaaaggcat 41340

tttgctttat tagcttggcc ttctaccttc ttcacacaga tggttgtgtt ggcatatgat 41400

catctaaaac cctagcaccg gggacaggaa gacagcaggc ctgcctgagc tgcataacaa 41460

gaccctggtt taaaaaaata aaataaaata aaataaaatt gtgggggctg gagagatggc 41520

tcagtggcta agagcactgt ctgctctttg aaaggtcctg agttcaattc tcagcaacca 41580

catggtggct cacaaccatt tataaaggga tctgatgccc tcttctggtg tgtctggaaa 41640

cagctacagt gtattcataa ataaaacaaa tctttaggaa aaaaaaatag agaatccttt 41700

aaaaaataat aaataaataa aactgtggcg gggattctct tgacaagcac tcacacggcc 41760

ccaggttctt ctagcaactt aaggagctaa agaaatacag taacttctgg gagcagaagg 41820

gagatgatag ttcatagact attaagtact tgcatagtcc tttcttttat agtgctgggt 41880

atccaatccc gggctccaca tcacatgcta ggcaaatact tttacggcta aactgcaacc 41940

tagcccttag gggaatcctg tcttaaaact tgtagaaccc tgaataactt gctgtcaaat 42000

taatgtgctg acagaaagcc caggatcaca gcactgaaag cagattttag aatcttccct 42060

accttaccat tgtgttcaga aaatcccttc tgtagggtct ttgctttatg atagtctagt 42120

ttgttttcat gtatagtaac aagaacctgt ggtccctttc tgaagcctgt ctgtggtgaa 42180

gcagtgcaga acagaccact agcacccttt acaaaccctg ctttgatgaa tttttttctc 42240

tgttcttgga tagagatggc tcagtttgac aagttctgtt catactatac acattcccag 42300

cgtgcacatt cagagaacag actctcttga ctggtgtctt ctgacataaa ctttaactgg 42360

caggtggact ctatacttct gtctgcattg aatcagaaac catgtaagga aaccttcata 42420

tggtagaggt agtcaagttt tcagttcttc cctcgctagg atgctttatc tggaagctac 42480

agataaactc tcaaaatgca cccctgacct cttcacctgc ccagtcccag aagtgcctta 42540

cctcaggcag ggcctcagct agaactcaga gggtttttta ggcagcagaa gaggcaagaa 42600

caaaaggttg cttgctccca ctggttccat tttttaagac atcagtgcct catgaggtag 42660

aagttgcagc cagtgaaagt gaaaaagaaa ggatttttcc cttcttcaaa actagttttg 42720

gtctacttga gtttctgtct tcccactcca tggccagtgg attttctaat tgcagacact 42780

ccctctaggg tacccctgac ttcttcacct tccaatccta gggagagttt aatgcgtgct 42840

tctcttcagt ctcttttcac ttcctctttc cacggtaact ccccagggtc tcagggactt 42900

ggaagcaagg agtgtctttg gttctgccca aggcccagtt gtcttgttcc cagccagctg 42960

tctgtgtgta cagtgtttcc gagcttctgt cctaggtctt ctgtgatgat gtgttctagg 43020

ccttgctgct ctgtccatct gatacgatct tcttaaatgc tcacattgta gtctctccaa 43080

ccctcccttt taatttcccc ttttcttttc tttcccttcc ttctctcttt tgcttttttt 43140

tcaagacagg gtttctctgt atagccctgg ctgtcctgga actcactctg tagaccaggc 43200

tggcctcgaa ctcagaaatc cacttgcctc tgcctcccga gtgctgggaa taaaggtgtg 43260

tgccaccaag cccggctccc tctctttctc tccccttctc ttttcattga acataccagg 43320

gcgcatgctc taccaccaag ccacaccttc agcctagcct gaccttctta gctttgtcgt 43380

tatcctgagc ctgtattccc ttcctgacgg gcctgtctac atgagatgct ttggtttcat 43440

gccttgccca ctgtagtctc tggaagcctg cagctttctc agagcccttc tctgcctgac 43500

attcttctca gggcactgct gggtcactga ctagcttgtt catttgacag ttaattcatt 43560

aagcaagtgc catactgttt tgctccttgt ggcgaggtgg gatagtcagg aagctctgct 43620

gcctgggctc agggcctgcc ttcctggtct atgcctgcag agtatgagac ctggcctgta 43680

tgactttaaa aagaaaaagg aaggcaaaaa ctcacctaca gcttagtaga ggaacacaca 43740

agggatttct tactttcttt taattaaatt ctgtatatta cctctttaac ttgtatgatt 43800

ataatattaa aatgaaggca aaaattgcaa gtataaattc atcagctgaa ttataagact 43860

tttttttact atttttttat tacgtatttt cctcaattac attttcaatg cgatcccaaa 43920

agtccctcat accctccccc cgaattataa gacttttaag attattcatg aaactgactt 43980

catattggat cggcccgcct cacatttgct ttctgctttt ttcttcagtc tgcatgaaga 44040

aatcagtgat ttttatgagt acatgtctcc cagacccgag gaagagaaga tgcggatgga 44100

ggtagtgagc aggatcgaga gtgtgattaa agagctctgg cccagtgctg atgtgagtac 44160

ttgtcctgga cctgggcttg aggcagagcc tgccccagac tgtctctcat agagactcac 44220

tcacactgta agtgctttgg tagaggtagt ctactttatt ttgcagcagg gtcttacgat 44280

gtcataccca tggctagccc tgaactcaag cctccttaag cttcccagac atgtgccaca 44340

cccagctttg gtcaaatcac atcttaaagg caaacaggga cctgcagcct gtagactttg 44400

gggtttgttg atgactttct tccactcaga tgctttactc taaacctctt cctctcagtt 44460

ctgagtagca cccaataaag tggacagaac ttaggcttat taatgcaagg aaaagagagg 44520

tccagcctca gtacagtagt tagttgctgg aagggattta tcaaggcttc atctttgttt 44580

ttactctagc ccgtcagtgt aaacattgca gttggcttgt agctgacggc atttcttttg 44640

ctacttgaag ttgactgtct tgggcaaatg caggcgagtg tatgcctctc attgcaaacc 44700

actctttgtt ccccgggcca acttcttttg attactcagt cagtgagcag atttgttgcc 44760

ttagtctcca ctttgtgtgt atctcttttt tttttttttt ttttttttaa gattatttat 44820

ttatttattt tatgtatgtg agtacacagt agccgtcttc agatacacca gaagagggca 44880

tcagatctca ttacagatgg ttgtgagcca ccatgtggtt gctgggaatt gaactcagca 44940

cctctggaag agcagtcagt gctcttaacc gctgagccat ccctccagcc ccgtgtgtat 45000

ctcttattat tggcattaat acttaatttt ttagggattc tttcaggtct gctgtagaat 45060

cctccctgag caaagagtaa ctgactttgt tgcatagatt ccttagacct tcctgaagtg 45120

atgtaaggga agccagggcc aggtttgtcc atttggcaaa agaaagaagt tcaaatatag 45180

gtaaagaata gaagggaagg cacaggtgcc cttcactgca ctggggcaca gcagagatgg 45240

ctccgcctgg catgcctctg taagcactgc tgacatctag tggctagaaa gggaagctgc 45300

tggcagtgcc atgacctgca cagaccctat agcaagggag aacctgcccc aggttaagat 45360

gcctccatct ttccgaaacc tttctgaggt aggcaattgt attcatacaa atagaagtgc 45420

agagatacgg ctaggttccc ggaacttttt tttttttttt tttttttttt ttaccagaat 45480

ggtttagcat tttcctgact tggcttacag acacatgtat aattgcctgg gtgcctctgt 45540

cctcagtgga ccaagattct cagttgatag cacatcagga tcttgtatag actgctcctg 45600

gtactctctc gcactgacct acacatcagc acatggtcag cagctaaata ttctgaattc 45660

atgagagaac tcctgcagag aggacagaat taaggatttg tgacattcct tatcttgtaa 45720

aagaatacta actagccttt gaaacataac ttgtgaaact tctgtataat gtgtacacat 45780

gtatattatt atatgtatat gtaggcatgt gtgtagaagt cagaggacag tttttttttc 45840

ccatttttta ttaggtattt agctcattta catttccaat gctataccaa aagtccccca 45900

tagccaccca cccccactcc cctacccacc cactcccctt tttttggccc tggcgttccc 45960

ctgtactggg gcatataaag tttgcgtgtc taatgggcct ctctttccag tgatggccgc 46020

ctaggccatc ttttgataca tatgcagcta gagtcaagag ctccggggta ctggttagtt 46080

cataatgttg ttccacctat agggtgagga cagtttttat agtcaggttt tgtctacctc 46140

tatatgtggt ctgggcatca ggcttgcata gcgagcatct tcaactgctg agccatctca 46200

atggcctcaa cgtctctgat ttagattata agccatgctc tgagtgaatg cccgtgaggc 46260

atggtgtccc tactttagga aagccttgta tttggacctg tccattctaa aacaccagta 46320

gaggacaaaa gggacgtgca tttctctgta ggcaccttaa tgtgattttt cttcccttgt 46380

tctaggtcca gatatttgga agttttaaaa ctggcctgta tttacctacc aggttagtat 46440

gttgatgaag ttttgaagga ttattatttt gaagggatta ttgtccactg gggctattga 46500

atatgtctga gtagaaatgg ggcttgtttg tttattgttt ttgagatagg gtctctgtgt 46560

agtctgggct gtcctaaagc ttggtgagaa cagttgtcat aggtgagata tggaaaaggc 46620

acataaataa tgagattgga agtaaatgcg tgtatttaca cactgagagc cagcatgatg 46680

ctctggcttt atgcagctta atagtcaggt cacatctcat tgaggcagca cacgtgaagt 46740

ttaataccag aaggctctag gaaaaaccaa acaaaccaaa aaaccattca ctaatagaat 46800

ttaatatgtt tgaggttttg tttctgtcag cattatctca tgtcctgggg cctgagatct 46860

gtgaaatacc tgagggtatg aggttgctaa aattgacact ccctgcttct cctctcctct 46920

cctctcctct cccctcctct cccctcccct cccctcccct cccctcacct cccctcccct 46980

cccctcccct ctcctctgct tcccttccaa aacttaccat cagcacactg atgctctgaa 47040

gcagagaggg aaagggattc ttgttaccct aacttaaagt tggtaagcat aattgtcagc 47100

tacaatagag acctgattga tgcttcttga aacctcacac gtgtccctac agtgacatcg 47160

atcttgtggt gtttgggaag tgggagaacc tgcctctctg gaccctggaa gaagcccttc 47220

ggaaacacaa agtcgctgac gaggattccg tgaaagttct agacaaagca acggtaagtt 47280

cttagcattg tgtctttgtg agccttatta cctgcaggag aaacttggac tctaatctcg 47340

aatagcacag ttggaatgtg actcagtgaa tcattttttg aatgtcacag tgactatgca 47400

taaagactgt cattggagaa tcaaagtaac ttgtccaggc tatacatttc tttaagaata 47460

atacccaatt tttcatgcgt aatgaaatat aaaaatagat tactagctgg gcattggtgg 47520

cgcaggcctg taatcccagc acttgggagg cagaggcagg tgatcttagt ttgaggccag 47580

cctggtctac agtgtgagtt tgtttctgtt aaatagcccc tagttataac aaaagatatt 47640

gttctcttat tttgcacttg agatcttgtc aaggcctttt tttttttttt aattaaaaag 47700

gatatgtttt tattttgtgt gtgtgttttg gggctacagc agagggcttt ggatcctcta 47760

gagctgagct gcaagcagat tgagccacaa tgtgggtgct aggaattgaa cttaaactca 47820

ctaagtgatg actcttagcc attgagccat ctctatagcc tctgaagtca tgctttctat 47880

agagaagtcc tgtcgcaaac aatgttttaa atagaatata ttgtattttt atgaatttat 47940

tgctttttag aatttttaga atttattgcc ttctatgaac tttttcattt tacttatgtg 48000

cgtgcacaca caccccccac gctccccctc cccccatgcc ctgtgtaggt ctgtgcgtga 48060

gaggacagta tggtgcagtt tctccactct gagctggagg tccagctcag gttatcaagc 48120

ttggcagcag acgcctttgc ccgctgtgtt ggctggtgcc tggtcctcag agcacttcat 48180

ggttttgtgg tctcgtgaga agtgtagagg tcacaggtct agctagtaac cttgtgtcct 48240

gattctgcca cttactttgg gagactattt taaactttta tgtcttcttt ttctaggttc 48300

ctattattaa attaacagat tcttttactg aagtgaaagt tgatatcagc tttaatgtcc 48360

agaatggcgt gagagcagca gacctcatta aagattttac taaggtcaga tacagtctat 48420

attgtgaagc tattaagttt gtctcgagcg actgctgtgc tgtgctgtct tctgcccagc 48480

ttatgtatgc gtgcggctga cacatgactg catttcgtgt gcttcctgtg gacgggtttc 48540

tgaaaggttg tggacacttg tgaagaccac tctgttcctt aggctgagtg gcatgggagc 48600

tgagattgta caacaagctg actctggcca gtttttaatc tccaagttta gattagaatc 48660

tttcccaggg agcctttttt tttaatccca aattctctgt caggagatac ttgctacttt 48720

atcttgaggt aatgttagtt tatttcaatt ggtttcaaaa taaagaagtt gccagcatta 48780

tatatactca gaacatttta cagccccaga cctgaaagca ttctgtccaa tgcagtcacc 48840

tttcttaagc agttctccag tttctagaca tttcagtttt tgtattttgg tgtttttagt 48900

ttttcaaaca ggatttctta tgtagccctg gctgtcctgg aactaactct gtagaccagg 48960

atggccttga actcacagag atcctcctgc ctctgcctcc cacatgctgg gattaaaggc 49020

atgctccacc actgccctgc tttttgcttg ttattttgag gcagagtctc actatgtggt 49080

tggcctcaag cttttaatct ttctagcaca gtatctggga ttgctgggat catagttgtg 49140

tcctactgcg gcttctgcct gctgtacctt gcttcctttt tcctatcagg catgaaagaa 49200

tatagaagat agaaagaaaa agaaaaatat ctcttttgca ggggctatgt atatgtgtat 49260

agcttttcat aaaaagaaac taaacgttcc aaattgtttg cttactaaca aacaatagaa 49320

gatgacatga aaagccatgg ccatcctctg tagcggacct tgtgttctgt gcctggagcg 49380

ttaacagttc tggagggtta tatctgtcag ctctaagagc cctgctcatc ttctgtaaag 49440

caggaagtga tctgggtggt gacctgtcca ctgggtgaca gcgggcaaga ctgtgtgtgc 49500

tcgggcagct gcagaatgga ataggggacc ttgctgtaca gcagaaggcc acacacaaat 49560

gatttcttga ctttcttact ggattagtgc cttaaatgtt gaggtgcttt ggcctttgtg 49620

ctatttctgt tgtctgtttt aagagacctt tctgtgatca taataatatg gttagatagt 49680

tagtatgtct gttcagacag catgtggccg ccattattta cgtcaccatg aggagaaagc 49740

cttttattac ttagaagggt gactttgaaa ttgaatatat tacatatatc taccaaattt 49800

tgtattataa ggaccaattt atgcccctgg tgatgctttg ggctattaaa atataggaat 49860

tcattgaaaa tgtaatttca tttctctttc agaaatatcc tgtattgcca tacttggttt 49920

tagtattgaa acagttctta ttacagaggg accttaatga agtatttaca ggtggaattg 49980

gttcttatag tctcttttta atggcagtca gtttccttca ggtaagttgt gtgggtgtgc 50040

tatatcagtg tgcactggaa aaaagataaa ctacttgcag agacatttgg ggagaaaatt 50100

taaatcagga atttttacag tacttctcct ttaaactggg taccttttat atagtttagc 50160

aaattagtat ttaaacattc ctaggagaga gattgagact ttactaggta tgttaacatg 50220

taatgtttgg cctggtttct gtaaatgtga atgcaataac agccaaaaca cagggctgtc 50280

tggagctcac tggtcagtca tcaagctctg ggttcagtaa aagaccttat ttcagatgga 50340

aagtgattat ggaagacagc tgatgtcagc agcagacctt tggctcctgc atgcctctct 50400

acttacactt agacattcat ttgtacatac aagtacacat accacttgaa catacacaca 50460

cacacagcag cagtgcgcgc gcacacacac acacacacac acacagcagc agcatttgta 50520

catacaagta cacataccac ttgaacatac acacacacac acacagcagc agcagcagca 50580

gcacacagag ggactgggaa atggctcagt cagtaaagta cttgccattg caagcatgag 50640

aatctgagtg tagatcgcta aagcccacta acaagctgga cacagcagca ggtgcttata 50700

gtcccagcac tggagaggga gagacaagag gatccctggg gctagctggc ccaccagtct 50760

agcccactgg gttcagtact tcagtgacag acactctttc acttgcctat catgcataaa 50820

gtctaggttc cattccttag caccgttatc tgaaaaacaa caagtatggt ggccagatgt 50880

ggcaggtaga tctccatgag ttcaaggcca gcctggtcta cacagtgaat gccaggacag 50940

ccagaactac atagtgagac cctgtgttga taaacctaaa tatatatatt ataatatatt 51000

gtgggcagtg acttaggaag acacctctca tcaactgctg tctttgatat acatgtacac 51060

acacacacac cagaaataag agtacattta aagcagttac ccatggaagc tcagctataa 51120

ctgacacatg ttctttggat aagagcttta gttttgcctg tttggcagtg gttgccagta 51180

accagactgc taagtgagat gaattccctg atgtggctca cactcagcct tacctacctg 51240

gtctataccc atggtgcatt gcatgagctt tgtagcatag ctgtcaactg gtccaagatg 51300

atgatgatga tgatgatgat gatgatagcg agtgctcgta gaagttggga tctcacttat 51360

accccctcct tcataacaga gaaaatccaa aataatttct tccttttttt ttttttttct 51420

gttttagtta catcccaggg aagatgcttg catccccaat acaaactatg gtgttctctt 51480

aatagagttt tttgaattat atggacggca cttcaattac ttaaagactg gcatccggat 51540

aaaggatggt ggttcctatg tggccaaaga tgaagtacag aaaaatatgc ttgatggcta 51600

ccggccgtca atgctttata tcgaagatcc tttacaacca ggtactgcga ttcggtgtct 51660

gtaggcttca gaggggcgtc acagtccacc catgctttac tctgttcaga tgaaaatgct 51720

tatttctaag tagcacttgt tcagaatatt cttatcatac taaaagagac acatactcca 51780

gaaaaaccac ctgctagact tgcacataag ttgaggtagt gtccatttga ctttcaaagc 51840

caagcagaga ggaattcact gtggggtggg tttgcagcca tctctcctcc tgtgggctgc 51900

catttccagc tagttgtcag cagggcttta gtgaggtaag atgggggctg gagagatggc 51960

tcagccgtta agagcactga atgctcttcc aggggtcctg agttcaatac ccagcaacca 52020

cgtggtggct cacaaccatc tgtaatggga tctgatgccc tcttctggtg tgtctgaaga 52080

cagtggcagt gggcagtgta ctcacataca taaaataagt aaatctttaa aaaaaaagaa 52140

agaaagaaag aaagaaagaa agaaagaaag aaagaaagaa agaaagaaag aaagaaaaga 52200

aaagaaaaga aaagaaagaa aggaggaaag gtggaagtcc tcagacagca gggagcatgg 52260

gcagaaaagc tccaggagac cgctcttact catgttctga ctgctgcttt ctttttgtgt 52320

gccctctctg tatggctcta gctttgggag tggcttgaga gtgaacggag tgcaagtttc 52380

tgcctcactt tcacaacgtt aaatgtattt gcttatgatg tgcagatgta tgttcatagc 52440

taattcagac aaagaccagg cagcaccctt ccttccttac tgttttcaat gtagcttggc 52500

tttattccga ggagaaaata gccagctgtt tgtttgtatg tgataggaga atccttgctg 52560

ggctaaagtt gtatgcaggc agtgggtggg tgtaccatag caaagcactg tgcaggtctt 52620

ccaaggctga cagcccactc atgagcagct gtcacccttg ttcctgggca agggctcatc 52680

agcctttatt cataataacc agcagccagg tttacttgtc ttcgtatcca tttcttttaa 52740

aggtaatgat gttggaagga gttcctatgg ggccatgcag gtgaaacagg cctttgatta 52800

tgcctatgtg gtattgagtc atgcagtgtc accgattgca aagtactatc ccaacaatga 52860

aacagagagg taaaagtcta gcccaggcca gcctgtgtgt tgagagtggt tggtacttct 52920

tatcttcaac ttaatgtaca cctcttttgt ttttttttaa cctgtgcagc atattaggta 52980

gaataattag agtgacggat gaagttgcca cgtatagaga ttggatatca aaacagtggg 53040

gcttgcagaa taggcccgag ccatcatgca acggtaagac ctccttgatg gtggactggg 53100

tcttagaggc tttttctatg ttttgtgtat ttaatgggaa gaaacgtttt ccaatctttt 53160

gccacttttt caggaaatgg tgttaccttg atagtagata ctcagcagtt agataagtgt 53220

aataataatc tgtctgaaga aaaggaagcc cttggaaaat gtagaagtaa cgcctcggaa 53280

cctcttagta aacactcttc aaactcttca tcaggtccag tgtcctcctc ctctgccacg 53340

cagtccagct ctagtgacgt cgtaagtatg acacatgctg ccccagcctg ctctttggag 53400

ggccctcaca ggcaccaggg atatttccaa tacctttcat tcttgtactt tttccctaac 53460

attttttttt aaagaaattt gaaaatctag tgaaggtaga acccgtcagt ggctgtagca 53520

ttccatactc cattagcatt gacctgctta ttatattcct gacactctgt cccgtaggca 53580

gctcctcttc ctctttgatc tgcttcaaag atggcagatg tcacacttca ccccagcctc 53640

catagcatgc atcctggatt tagatggctt gcttattctt tattcctcac taagttttat 53700

gaccatgctc aggtcactca gagctctagt aagagaatgt cctctcacta acccacagtc 53760

cccagtctcg cctccagagg gcatccttgt ccttgtaaag gattttctac atcacatatt 53820

ggttttccat gtcggggttc ctagagcttt gatctcatgc tatagaatat tatttgtaaa 53880

gcagctttca ctttcttttt tttttttctt tttttctttt ttgtttgttt gtttttttgt 53940

tgttgttatt gttgttgttt tcgagacagg gtttctcttt ataaccctgg ctgtcctgga 54000

actcactttg tagaccaggc tggcctcgaa ctcagaaatc cgcctgcccc tgcctcccaa 54060

gtgctgggat taaaggcgtg caccaccacc gcctggctgc ttttactttc ttaagctttt 54120

ttttttcttt acttgttttt gagatcccta attgaaattg ttaattgata aaacttgcat 54180

ttaataaaag tataattcag ggttcccagc aatgatatca ggcagctctc aactgcctgt 54240

atgtaactct aggagtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtttgt 54300

gtttgtgttt tctggaactc actatgtaga ctaagctggc ctcaaactca gattcaactg 54360

cttctgtctc ccaagttcta ggattaaagg ctcagttttg agtttctaat gtattcagta 54420

ttacacagct actttcactc ttaatttaag gatgtttcca gctaggcatg gtggcacatg 54480

ccttcagtcc tggcactcgg gaggcagagg gagacagtcc tccaccaggg ccatatagag 54540

agatggtgtc tcaatccccc tgccttcccc ccaatatcca tgttatttag taacctctcc 54600

cagctcccct ttcccataac ctttggtcta cttcctgtct ctatcatgat gaataacatc 54660

tcacattaaa ttttcgttgt aaaaaatttg agtctactta attaaagttt aaggtagatt 54720

tgtctttcct ttgaattttg actttaatat gtgattgcaa aatgtcctat tagggtcatg 54780

gaggtactag catgtgccct gggtttagtc ctctgcactg cataaatcag gcttggtagt 54840

acatatctat aatcccaata atagggaggg tggaagcagg agactcagga gcaggagtta 54900

aagacatgct ctgttgcaga gtgagttgga gcccagcctg cattaaatga gactgtgtct 54960

caaagaaaaa ggaagaaaga aagaaccaat tttccacata gcaatatgat ggcatattgt 55020

tatggagtca taaatactga tatactggat ccttgtgtct gggttctgga gtggtgcttt 55080

ggaaggtgga atgaatgcta agctagatgt ccctgtagag actgccttga aaagaagaat 55140

ttagctatgc cgctgacgtg tcaggcagtg taccaacata aagcagccaa gagagcagat 55200

ggagcttaga acaagcatcc ctgtcctaga cactcagttg tgccacttga acctgccatc 55260

ttgcaataag gtccctccct ctttatggtg atcttccatt gtttatatga cttgctattt 55320

taaaaagttc acatcaactg gaactcacaa tgattgacat tcacaactga tttaaaaatc 55380

agctagatgt ggtcagtgac ttggcaataa ctagaagcat acagtagaat agatcacctc 55440

acatgtctgc agaaggggct gggaaatgac tcaatggggt agaggtgcaa gctgtgcaag 55500

caaaaggacc tgagtgtgaa caccccatgt cctctgactt gagtgtgaat accctgtgtc 55560

ccctgacctg agtgtgaccc gaatcccttt gaaacagtca tgactgtgtt tgcctgcagc 55620

tgtactgttg ggagcagaag ctctcattca gtgagggacc ctgtctcaga aaataaagtg 55680

gaggggtaga ggaagacaga agctgttgtc tggtctctga ctgcatgctt tggatgcgca 55740

cacacacctt ccttcacaca gcatttgaag taaagcctcc tcaggtccca gatgtgtctg 55800

tttagactag aaagtactta gccgaaattg ttgcccctct gagttctgaa tatgaaaatt 55860

actaatatat tgctttaccc atgtgacttg tgttaggatt ctgatgcaac gccatgcaaa 55920

acccccaaac agctgctctg ccgtccaccc actgtcaccc gggtaggctc acaggatgtc 55980

tccttggagg tctctcaggc agttgggaaa atgcagagca ctcaaaccac taacacaccc 56040

aacaacgcca acaaatcaca ggtgggtaga atctgtgctt gttactctta gcgttcagtt 56100

ttagatagtt agaagttctt ttttcgcttc taattttaaa atgtgtattt attaaagcat 56160

ttataacaag tatgaatagc ctatccttat ttactagagt tgataaaaat gtccacggca 56220

tttgttgctt ctttccatgt ttataagctc catcaaaccc acacattctc acgcctctac 56280

taaacactaa tatttcacag gggtaaattt tttcagtact ttctaaagta ttgagaaaat 56340

acattatttt gttgtactta ctgttgttgg acagatcaga taacagttgt gtttttatag 56400

attgaaaatc acataaaatt atccaattag aattaaattt caattcttgt ctcatactat 56460

tattggaaga ataaataatg aaacacagcc tgagaaagca gaagtcataa agtggcagca 56520

tggatagtgt cccgttgact agcacgggct caggtgtgtt ccttcctgtt ctcagcagtg 56580

ggaagtgtgg ccttgaaaag cccatctggc ccctctgttt ttctcatctg ctagacagac 56640

ttaattatgt acctcccttt tctataaaat gatgacaaga atagtctacc ttcaaattta 56700

tagtgaatac tatgttaata attatagaaa tgcttagaac aattagaaaa tgttgagcat 56760

atattaagca tcatatagtt agaatttctt acatgtgcac agttgctaca cataaagaac 56820

tctcttagtt aaagaatgaa ctgttttgtc aaaccagatg tcctgaagct ccttttaaga 56880

tagggttgta acatagtaac atagatctta gtgctagcca agcccattga gcattggggc 56940

tgaggatgta gctgagtgta gagcaggctg atgagtggtc tccgtggctg tgcttgaggt 57000

gcactggcat ggaatgtctg cagcatccct agaaacagct agttctttgt tcttatttga 57060

tacttgttgc tgaggacaat taccaggtac ctgggagaca ggttcagttg attaacatca 57120

gctttgactt acttaagtat ttttagttgc caaatagtat tactaatttg ccatgaataa 57180

ctaatcaggc aagagaagaa gcttttgata ctgatctgtg gtaaaaattt tctttcccat 57240

cctcagatgt agcaggttcc ataggaaaag gtctgtcttc ttggaagttg tgatttgatt 57300

ctcccggttc actgtacctc cacagtctta gcatgggcac caaatgcagg tgcagggagg 57360

ggcaggacta accagagact ggtgccagta ggcaccacaa gagctgtcac tgggaacagg 57420

aaagaaacac ctaaactgtt taggtctctt gacctcctcc ggtagtgcac acaacatgat 57480

aaggaggagg taaggtagac ctcctcctta tcatgttgtg tgagcagtag gatccttgag 57540

gaagctttca tgttgtacac atgctgtcag gaaggggagc tatagagttc acccctgtta 57600

gtcctcgttt tctagcctct agaacagtgt gtgatagctg ggtgtgatgg cacacccctt 57660

taatcccagc acttgggagg ggaggtaggc ggatctctga gtgtttgagg ccagcttgaa 57720

ctgcatagga aggaagggcc agactggcca gagtgacagt gtgggagttg tcagtggggg 57780

accatgttaa gtgcgcgcct gcccctttct agtctgggag cggccctgca tgcggtttgc 57840

cagggggcag ctctgctccg attctcactg ctttcttctt ctgcagcatg gatcagcaag 57900

gctcttccgt tcttccagca aaggcttcca aggtacagct caaaccagcc atggggcctt 57960

gatgacaagc aaacagcatc aaggcaaatc caatactcag tattaccatg gcaaaaagag 58020

gagacacaag agggacgcgc ccctctcaga gctttgtaga tagtcggcgc tctgcgacag 58080

actgtcttct gtgtgcaatg atctcgtgct caggacagtt gcacagggac tcctgggacg 58140

gcaggagcct cacactgttc agacgttgat ttagcaactg cgttttttcc cagctcgcca 58200

cggaatggat catgaagact gacaactgca aaaacaaaaa gcaagcaaaa aaaaggggga 58260

aaggctgctt atgtgataag tcatgtgcta caacagggtc attttaagat ttaaagcttg 58320

aatgtaaaat aaatatattt ctcattggct ttatgcagag ttataggggc tagtgctcag 58380

tgtgggtagc tgacaggaag agagcagtgt caaggagatg ggtgggcagg tcagcaggag 58440

catctcatgg gaagtcagac tccgagggaa aggagtttgt gcatggtttt ttttaaaaaa 58500

taattttgca tatatttgcc attttattgt gtgtatatat agaagaccat ataggaaatt 58560

gatatttgta atagtggatt tgttaatact ttttacataa cattactatt tgaattgtaa 58620

acagattttt ttctcaggat tagtttgaag aataattgag ttgtcactct taacacatgc 58680

agggaagtga ttagctctgg tcctgtctgt tttcttcagc attgaaatga cttcatagaa 58740

cccttgtgac ctgcttcaaa attctttcct ctctaagcaa aaggtttatg gtggcaaatg 58800

atgtttattt tattttgtaa aaaagagaaa aatgtactgt gtacttgtgt atacactgaa 58860

caacctctag ctgtctctcc gaatgaacac acctgctctg gatccagtgc tgttgtcttc 58920

ctgggcactg ggccgtagca ggccttgtgt gtgtttccta gcagtctttt cttcccctcc 58980

ctcctcttct tcctcaaagg aaacgaaagg cctccctggg cctgggctgt tcctgtcaca 59040

gtgtggctga cctctagctc cacagccctt gttagctcgc atgctggttc ctctgaccct 59100

gcgttccatg tgcttgtggc gtcctctcat tctttctagg ttcctgctta ctgctgtggg 59160

agagagtaac tgtaaacagc tttaatgaaa tcatacttat aaaaactatt ttcttatact 59220

ccactttatg cttttggtat tgtcgatctt taaaaattaa atggtctttg ataatggatc 59280

gatttttgta ttgccttatt aagaccaaat acttcttgtc atcccattct ttatcctctc 59340

ctttaatgga attgctgtct ttaattaaaa ctttgtaaac actggcttgt tttaatcatc 59400

ctgtaactta ggctgtggtc agctacaagc gcagatgtgt aatcctgtta ctcattgcca 59460

gctgagtctt gagactcggg tggggtactt aacacaatgc atcgtacacg ctctgctcgc 59520

tcgctcgtca gcagagtggt cttggaggtg aaagccctcg tgtctagcat cagtgtgtgt 59580

gtgtgactct gttcagtacg gccgtttccg agatgggatt cttttatatg tgtatgtgtg 59640

aagtactgtt ggcatttagg catttctttt ctatacactt aggaaatact gaagaccaat 59700

cagaccatta atggacactt agtgcaactt tttataatga gaataatgct ataaagtaag 59760

accaaaaccg gtgtcatcac tgaaattaac aattttcaat atgttcatat tttaatttac 59820

aatgggaaaa aatgtgttcc acaactggaa actcacagta ctgtgtaaac tgtgtaagat 59880

tttaaatgtg atgttatttt gactgttctc aattttagag tcacatttta ttctgatcag 59940

aatttttatc aagatgttga agttttgttg ttttgaaact agtttgtcat aacatattgt 60000

gcataatcac agtatttatt ttgtagggct tgtggatgtg tagacttatg tttactgcta 60060

agggaacaat tatttataaa aaaaatatta aatccagtat tagctgccta tttcagacac 60120

ttaacacctg cagagatctg tgttacattt accacactga agttttttta aagaatcacc 60180

ctcattgttg aaagtaaatg tactcttagg tgggttatta gtgtccaata agcatgtgat 60240

tatattaagg tggtggtagc gggaagataa tcttgattcc attgggaatc ttaggttttc 60300

gtaaatttat tgggaaaata gtttttcctg tactgctgat gtttcttttt ggtaaacagt 60360

atctttctaa aagaaaaagc atgaaggaga attgaggtgt gtatacattt ccccagatga 60420

ccagcattgt attcgtgaat actgtgtatc tggaatgagc agtgtgcaag ctgttcattt 60480

ttcaatctga agtaaaatac tttcaagaac 60510

<210> 6

<211> 36659

<212> ДНК

<213> mus musculus

<400> 6

ccgccgcccc cgcgccgcct ccccgcccct cattggagct gaggcggcgg cccccatccc 60

tctccgttcc cggccgccgc cgagggcgtc tttccgccgc cgcgccgcag gagcgccgtg 120

actgactgac ggcccgacgc tctgggcccg ccccctcggc cggtcaccgc cccttcgatg 180

gcctctccct gccgcccgca cgctacgccg ccgccgccgc ggccccctcg ccctccccgc 240

gccgcctgag ccaccgggac cgcagctgcg ccgcgcgccc caccgagcgc cgcccgcgcc 300

catccgcgcg caccggagcg cggcccaggc ccgtccgtcc gtccgtccgc gcggccggcc 360

cggggcgcgg cggggcgggg cgcggcgggg gcggggcgcg gcgggcgacg cgggccccgc 420

gggggcggcg cgtggatgga tccgcgcgtg gcctggatcc agccggagca gaaggggccg 480

gccaatgccc tgtggatgca gatctgggag acctcgcagg gcgtgggccg tggcggctcc 540

ggcttcgcgt cctacttctg cctcaactcg ccggcgctgg acacggcggc cgcgcccggg 600

gcggcggggc gcgcagcacc agcagcagga ggcccggggc cggcgcccgc cgcctcgtcc 660

ccgccgccgg cgcccggccc cgccgcgctg cccccggcgc tgcttaccgc gctagggccc 720

gcggcggaca gcgcaagacg cttgcacaag tccccgtcgc tgtcgtcgtc gtcgtcctcg 780

tcgtcgtcca acgccgagtc gggcaccgag agtcccggct gctcgtcgtc gtcctccagc 840

agcacctcgc tcggccgcgc cggcagcggc cgcaccttct tcagcttcgc cgacggtgct 900

gcccacgcac acccgggccc acgcggctcc acgcccgccg gctcgccgcc gcagcaccag 960

ttccacccgg gtcggcggaa acgcgagaac aaggccagca cgtatggcct caactacctg 1020

ctgtcgggca gccgcgcggc cacgctgagc ggagggggcg gccccggggc ccaggcggcg 1080

cggcccggca cgccgtggaa gagccgcgcg tacagcccgg gcatccaggg gtgagtgcgc 1140

ccgagccgcg gggctgccag cggcgcgggc actttaaaaa ctccgttgga tcgagatcca 1200

ccaggcaggg gggattgaca gttcgggatg gaggcctagg gctagactag aaagtggttc 1260

ctttctttcc tctgctccag ggcagggaag caagggctgg ctgtcagagt gggaagcgtt 1320

tacgcgtgtt ctttcctgta ggctaaatcc tgtatcttag tgtagtgagg ttgaatgtaa 1380

aaaatttttg ttcccttttt ttgagacagt aggtttttgg tattggtgca gtttagccat 1440

caagtgaggt ttagaagtgg agtcttgtgt gtgttgaggt tacctcgtac gttttaattt 1500

tgggcagacg ttcacagaaa gaccgtcacc tggggtttct gaaaaccacc taatagtact 1560

caggtttttt tcctgtgaac tcacaggaag gtgttttcat ttaaaaattt ttccataagg 1620

ctcagaggac cttagcggtt taatgtcccc aatgacagca aggtgggggt gttggtctgg 1680

aattgcccca ggtgagactt ttctagtatg aagctcttca ttcaacctat tggttgaatt 1740

tctgaacatc tagaaacaaa atagtggttg tgtagtctca agactggtga gcttgatttg 1800

cctcagttcc tgccgctctt aaagggcgtc taacctcccc ccctccccct cactccaggg 1860

agcgacatcc ccagttcaag tccacccggg tggttgctag gccctgggac tcctttgagg 1920

taacttctta gggggctgtt tgcggtttga ggtctgtggg gaacacggat actctttaag 1980

gggttggggg tgttacatag aaacagttgt cccctctgca acttgtttca cctgccttgg 2040

atctttgggt cgggattctc cagcatgcac tacaaatcca ggaggagcct ggtttcttct 2100

gccagttccc ccgcagtgct tgcttgtaga actttgtgag acaggtgtgg ccgtggacct 2160

acgggaggtt tctggattgt tacataactg taatggacat ggtgtctgcc gggagacgga 2220

tcctagcctc tgacagagtt ccacttgggt acttaggcat cagcagcatg atctgcccct 2280

cggtgagagt tgtgtccctt gatgtggtct ctctggtggt ctgtaaagct ggtcagcctc 2340

tgtgtgttct tctgtggcgt tttgttagta tgtgtgcctc tgtgggctag gtgtgctttt 2400

agagtctagc atgggtgcag ttggcatggg tggcatgtat ttctattgat cccacaagca 2460

tggtcccttc tttaaatacc ctcccttcct ggtacagatg aacattgcca cctgggtatt 2520

catacttggc tcctgtcacc ctactcccaa gtctgtagtt cttgattagc cgctgtcccc 2580

caagtctggg tctctcttcc tatgtcaagc acattgtaac cactctctgg aggaggatgc 2640

tcaggcagtc caagactggg gtcttctgtg cactgtggcc tagcctgtgt ccttggtcag 2700

cagggtcagt gggatgaggt tctaccagcc cccaactttc acgagagcct ccattacttc 2760

ccccacccac ccaagagaga tgaaggcctg actcggtggt gcttgggctc tgccactctt 2820

cttgcctgag ccctgcctca gagccccact tgctcacttt agggttcaaa acccagctag 2880

agtttagcgt tggatgctgc ctggtgactc ttccttttct gtctaggtgg catgtgttga 2940

atggtgactc ctggaggagg agcttgctaa ctggcttggc atgtgtgcgt gagagagtgc 3000

ctcctgagag ggtaccttgt ctgtttccta ctgtgactga cctctcgagg gggtgggaag 3060

gaattagtga acgggcacca gtagagctga gccctatatg ttaacagtaa aggtggctcc 3120

aactattgct ggttgctctc acgtgagctg atcttggatg gcaaaaaaag gacctgtctg 3180

aagctagtct tgtgctgtgt ggggccagca ccaagcctgg cttagcaaga gacacaagta 3240

aggttaagtg ttggcttgag cgtggcccag ttaacagtga gggggcctgt tatgttagtg 3300

agaggctgct gagcttgctt tctgctgctg gggacgtgcc tttgggggac tccgcagacc 3360

tccagaaagg gtgagtggtt ttctggtggg gtgagagtct gggtctctgc ccaggtggac 3420

acggggcact tgcacctttc agctctctgg gtggagtttg cccttggaaa ctgctagact 3480

gctttcgatc ccgggtagga tgaagaaagc ggacagggct tagtgtaatg agcttgggga 3540

ggagagaagg tgagccctgc tatgggagct cccctgagcc cagctctgaa accttccttg 3600

ggacatggca ggcataatgt cagatgtgcc tctgcatgag tttcttgctt aggatggagg 3660

caggcatggg caggctctct gggtcctccc tccccccttt aactaactca ctgtgccttc 3720

tgagtcctta actctgaccc acagtgtgat tccttagtcc tgggcagtct cagtggcttt 3780

agaagctgct ttgggttaaa agtaaagagc attcccctgg aagtgaggat tggagtgtgg 3840

tcctgacctc cctggtgtct tgcaggagtg cagatggaca ggggaggccc cagcccttgc 3900

atacacctgc agccccatga cttgagttga ctctgaaggt tgtgtcctcc caggtgtgcc 3960

tacagtgggc agcttctctg caactctctt caccatagtt agtctttgaa tgtgtcctgt 4020

gcccttggcg acaggagtcc cgttgtccgt ctgaagccgg agaagcctcc agtgtcagca 4080

gttacagctt ggctgtgact gatggtgctc tcagggctgt ggggtgattc cctcccagct 4140

ccatgactgc tctttttgct gttctcctgt gagggagtca gagctcggtg gagcagccag 4200

gttccctctc ctgcagcaca gctcctggct gttctgacag aagcagatgg cctttcctca 4260

gaaggctcca ttgggaaggc acaggtgagg gcccagtggg ttgtgctgtg gaacacaagt 4320

gtagtcactg ctatctccct ccctgtcttc cagtgagcat caggggatgc acgggaggga 4380

agagggaatc agggaagctg taaaccccgc ctgtgcaggt gacagtggca taagaggttt 4440

ctttcacaga gatgctcaag gttgaagagg gagatgagaa cagtatacta cacagagctt 4500

gttgtcatat ggacagtgtt acctcctgtg caaccttctc caactaaaca gcaccactct 4560

cttgtcatgg ccagtctcca tacagaactg gaaaggctag tgagatgctg tcccgggcag 4620

ctgaggggag tcccggagaa ctgctgcacc acggcttgct caggatggag agctgatgct 4680

ggggaaggct gcccaggagg acaaggccag tcttctctta gactagaata ttaagcaggc 4740

tggcgcagtc ctttggaaaa gaggccctag ggttggggag gccttgggtt tggttcctaa 4800

caccaaggag aaaagcaata gaaacaaaga aacaaacaac cataaaaata aaaatggagt 4860

ccctgagtaa ttttgaagaa aaaccatcta atgctcatgc tgtgtaagtt aaggagggcg 4920

ggcatccggg tgtcctggcg tctgggtgtc ctggcgtcct gtggctggga tatttggatg 4980

aagaagcagg gctgcttccc ccttagaagc aacacacctg tggcttaaaa gtaattttta 5040

agtaaaaaaa tttttttaga ttttttttca tactgttatt tacatatttg attcttgtgt 5100

atgtgcttat gtgagtttat gtgcatcaca tttacaaatg tctgcggtcg ccagaagagg 5160

gcattggatt cctctggacg tgtaatgaca ggcagctgtg ggcagccaga tgtgggtgct 5220

gggaacaatc tggattctct gcacgtgctc ccaactgctg gacagcccat ctagctcttt 5280

aagtagacat ttaaaaggaa aaaaagaaaa tatgacttta agacttgtgc ttcaaagtct 5340

tggttatttt tgatgacaga tgtgagcttt tgggcatcac cttgaaagat ttcataccaa 5400

gtatcctttg ggagcaggga taccagtcag tgcaccatgg acagaaagga tgctgtgcct 5460

tggtaaggtg gtatacctaa gaaagtaaac ccggatgctc acattcagag acatggtttt 5520

gatgatgcag acagaactca agctgcaggg gtgcccgccc tttccaggaa ccatctctag 5580

tgcttgctat ggctggtatt gctgtgatga ggctaggcca gaggctctgc ccagcctgtc 5640

agggttgctt taaccttaaa taaagttgga tggtatgcta accccataag gctgcccagg 5700

agagtgtggc ttacagcaaa gtgaagttgg tgatgccctc tgcatgcctc tgagtggggc 5760

agccatgtcg tcttcccatt tggcatgtgc acggactcag acagcattga actcttgata 5820

cgtctccatt gttcactgtt tctgtggtca ggtagcaaag tccagtgcac taggcttgga 5880

ccggttatct catcagtcac atccttccgg tcacttgagg atggcttggg tgagttctct 5940

attcagcagg gcagagggct gagtgtcagc tgcttgttgt cacatctgtc tccagagccg 6000

gctcataagc acattcctgt agtttcagca cttggggaga ctcctcagag ggctcacatg 6060

attgcatagg ccaattcgga tggtctgtct tcaggccatg caatgcagtg tggtctatag 6120

actattccat cagaaccaca agtttgggca tgggttgctg tctgccacac actggcattg 6180

tttagtagga agacagcatt gatgtgggaa gaggaggcca tggttgtctt gtccaacact 6240

cttgtcctct gcttggacat cagcttatca caagtgactc ttttatattg ccagtcccgt 6300

cttctggctt gattgtcacc cctgaagctg ggctaattga tgacaagaac agtgtgcact 6360

tttctctgcc tctcacagat gaaccattct ttagtgtgcc atttaacaaa gtctatacaa 6420

gagccacgtg attgcacaaa aactgtttca gccatgaggg cacctgcatt catcagattg 6480

tcaccgtggc ccatttaagt tgccacttga taatgacaaa acagcccatg gttgctctgt 6540

gtaagatgtg gcccacaccg gatctgcatg ctccgttgat ggggatggtg gtttgcccat 6600

ggcctcagct gcagaacatg tgcctctccc tggaggagca aaaagacccc ccacaattct 6660

tgccttgtct cttcctgagc tcccatctga atctttagtt tctacggagt tagcttttac 6720

tgtcccctgc ctacctacac tcccagaacc aaagacgtgc atactaagaa agatgcaaaa 6780

gacaaatagg ttttgtatgc aaaagtaaac tttagttttt tgtcttaggc attttaacat 6840

agattgtgag ctttgcagtg attttttgtt gttgttgttg ttgttgtttt gtacatgcaa 6900

aacagtatgt tagtttctct ctgagtgtag ctaagacccc tagtgcagga tgaaaacatt 6960

aacatacaca caggatgaaa aacatgtaga gaagtctcat gccacatctg aaaggtattc 7020

ctatttgctg gcatcctttt ctttttaaat actggataac aaccaaaaag tcagagaacc 7080

tctgattgga ccacctgccg agagtctctg tcatctgtgt tgcctgttgg cctcccgcat 7140

gagctggctg ggctgtggca agacttctgc acaggcttat cttttcccag atgacaggcc 7200

caactagatg ggatgtcccg gacatccttg agtcagtggc ttgtgacact catttgcctt 7260

ttagaaaatt ttttatttta tttatttaca ttccaaatgt tatccccttc ctgttagctc 7320

cagatttctt tgccccatcc cctcttccct ttgcctctga gcaggtgctc tcccccaaac 7380

ctcacctctt accccccccc cccagcatcc cccttccctg aggcatcaag tctttacaga 7440

atttaggcac atcctctccc actgaggcca gacagggcag tcctctgcta catatgtgct 7500

gggggccaca gagaagccca tgtttgctct ttggttggta gcttagtctc tgggagctat 7560

gtggagtctg ggttagttga tactgttggt cttcctatgg ggttgctgct ttgcacaact 7620

ctagcttttc ctggtgtttg ttttctgaga tacagcagtg ggcatgattg ggacacagag 7680

tcaaattagt cccttttttt cttttttttt aaacctcatt ttttttctca tattgggaag 7740

catgcacttg gtttggagtt gactttgtgc aactttatgt tttacttgaa atagtttaac 7800

ttggtaagtt actgaaataa attgaaactc aacttcatta gcccagccac atacttgggg 7860

gtctggttct ggctggtttt acctgtgctc taactcccac acctcagttt ccccacctga 7920

gaagtagggc ctgtgacata actcagtcag tttctgagct ggtcagcatg tgtgagaaag 7980

gctactcctt ctccctttcc tcctctcagg aaatggaaac caaaaatgag cttcttgttg 8040

ccaacaggaa agccttcctc ttcttccttt tcttaaatga cgaagctaca gactcaaagc 8100

tccacatctt agagagggga gagggactca gactcagctg ggagttctgg aatccccctg 8160

ccccctagtc cttgtatttt aaatgcagac gacactttag cccattgtca cagcgtgtgt 8220

gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtac accgtgtgcc tgctgtgctg 8280

cagctggagt taggttgggt tcagttctta gcctctgctc cgaggggagg tttgagtggc 8340

cgtggatgac gatgaccctt actctgagtt ctttgccact tcctacacag agttagtggg 8400

tttagaggga agagagcagt gtgctgggga gccacgacag tgcagggtgg cacagtcctg 8460

tgcagaggag gagatgcagt gtctgtcctg agtagtggcc acacttcatg tgtcctagct 8520

agcacttgga gggtggccag tgcaggtgaa aagctaagtt gaactttaat gtgttgactt 8580

gttttgtggc attgggaatc aagctgagct ctttgagcat gccaggcgga ccgtctacca 8640

gtgaggaccc tcccgagctc ttacttaatt ttagttaaaa tttaaatggc cctgtgtttg 8700

aacagtgctg actttgtgca actttatgtt ttacttgaaa tagtttaact tggtaagtta 8760

ctgaaataaa ttgaaactca actgcagtaa aaagagtgtt gcttagtaag ttgctatgga 8820

gaaagctcta gagttcatgt ttctgagttt ccaatgcaag tcctttatga aaggctgata 8880

tctttgtgcc ggaggcagca gggaacgggg cagtgcagcc cagagcattc tgaggagggg 8940

agcatttctg gtcagcatgc aggagcgagc gagtaggcag gcaggctgct ggtggtgtgg 9000

cgaatgggtt gccttcaggt ctctgcaggt gtcacagctt cccgccacat ctcctagcag 9060

ctctgtgctc aggattcctg gaggctagtg agccctgctc cactgtactc tttgacgtcc 9120

tggttcaaag ccacacagag gcaatatttc ttgtgtttta caggcacaaa cccagtctag 9180

attagctaaa atagtctgac caagaggtct gcacttgtgc atattgctgt tgctgaggga 9240

aatagctacc acagactgag gatttagcac agcactaggc agagccaaag gtaagttcat 9300

gcggagcctt tcctaatgag aacaggcaaa tacagagcct gcctgtgctg tgcttcctct 9360

gtgcagccgc gtcctgcaga ggggcgcagg gagccctttg gggtggatct ggcttcctgg 9420

gctgtttaga ggttgaattt tgggagaggt gaagaagctg tgagttctga catgtcctgg 9480

aagggccagg cttccctgca gtcccaaaac agctcgtttg aacgagatga gagcaatttt 9540

caggagatgt tctgattttg tccaagagtc acctaggaag tgatagaact aggctcagat 9600

gcaggcttct tgcctggcaa gtccatgcac ttgaccagtg ctttccagag agtgagaggg 9660

aacacgagtt gagagtcaga agcatgactt ggtgaaatgg cagagacaag ttgaagcata 9720

agaaagagta ctttggtcac aggcatcttc tctcaattga agtaacattt tagaaagtga 9780

agagcagcta tgatatggta tccaaaagta aagagagcac ttggcatgat aaagaaacaa 9840

aggaattcgg aatataacta ctagttatct tgtgaatgag tcatgagaca ctagtgtggg 9900

catggaagga aggtcactgt gttggcatga cactctgaac tacagggtgg gctactgaac 9960

agtttgaagc ttgtgggggg ctgcttgggg ctggaagaaa gctcactgtg catgagactt 10020

tccttagcag tgagctctgc ctctttcccc tttttcccac ctggctgtag ccggctgtac 10080

tagctagcta gagccttact ggctccactg acccacacct gggccaggcc tctctttttt 10140

atccctttat acagtgtttc cggctgccct ccaggatgct ccaggaggta tggcactgag 10200

agaaacagtc cacccacaca ccacaacaca gcacagggct gtcagtggag ctcaggcctc 10260

gtgattccct agctcactca ttacctagga actaggtaga gggacttgcc aaagaggtga 10320

ggttggtagg agcaatgctt gtgaattcca ggctctgact cctctggaga gaggccagat 10380

gctgccagaa ttctttgctt ctgaggacag gtctttgaac atcccagagg aatgtgagtg 10440

acacttctca ctaatctagc agcagcagga cagggagctc tgtcctactt gagaggggct 10500

cttctccttt ctgtaagaca gtttataggt gactcttcag agcattgatg cctatcgttt 10560

attcactgtt tcttacataa gggtaccccc tgctgatgta aacttaaggc tgttctgtct 10620

cagcctccca gcttccaaga ttacaaacgt gagccatcat ttctggcacc aattctaaaa 10680

tactgatgaa tcggtaaaac tggctcatat ttttaaaagt ggaagcttta aagtatctca 10740

gtcctatcac ccagaaatcg ccaggataat tagatgacca cagctgcaga tggtattctc 10800

caagatcctg gagatagtac ttggagccac caacagaaaa actcactaga atcatcttca 10860

tgaaaactct agtaaattat ttattttgct tcagtaagaa acgtgcagtt tcaaatagaa 10920

acccgggctc ctgagagcga gtgctgtggc tgagaatgta aactgacaaa gcccgagtgc 10980

agaaggtcgt gctaacaagg caccaaccgg tttgctctca gtttatgggc tgagaagtcc 11040

gcccttctgc atcttccctc ctgactgaac atgaggcgtt gctgtgagtt tgctattttg 11100

ttgtgtggtt tcattcacta gtatttgttg attgagccct tactgagcca gtgtcgcagg 11160

cggtgttttc aggaggttca ttgctggccg tgctgctcct ctgtgctgtc ctgtgctctc 11220

agtagctctg cagggccagc cctgcatccc tgggctctgg gttgctctgc tctgaccctg 11280

tgtgtgtagt ttttgcctga gatgtggttt ggttcttcat actgcatagt ggctgctgcc 11340

agtgtctttt tatgaaggga ctggatagat gcattttttg tagagtggat aagggctcta 11400

ctccctgaag cctgttgtgg ccctgtaggg ttgcttggct ttcttctccc atggcagaac 11460

agtgccacca ccacctgtcc tccgagacag gaccttgtct cctctggtct gaagattgat 11520

actaattgct gacctgtcta gacatctctg tctaagctgg cctctttgtg aggcagactt 11580

ttctggacct cagatgcttg tgcactgcag gctgaagttg gcctgcagtc tagggggagg 11640

ctctgtcagg tccttgctcc tgtgttgctg gctttgcctt cctggggtga caagtgtctg 11700

aatgtctgtc catctttgga tgctgcttgc cttggctctg tcactgacac ccagcagctt 11760

cttcctgact cctgactttt ctcaacatta gggacacgct ctgatttttt ttctgtggaa 11820

ctggcagtga ggtagctttc tcttctgggt tcactgtttt tgtgatacac tgtgtccctt 11880

atgccatccc tcttactcta cctgtgcaca gcatatttcc cccctgctca ttttaatact 11940

caataagtct taatactgac ttgctgtgga tattttccta tggaagcagc cgccaccccc 12000

aatccatctg cagatctgaa agtctgcctg ttccatggga tgactattct ctggccttct 12060

ggtaccagat tgtgggcagc agagattcag gctgagctag ggcattacct tgttgggacc 12120

tggactctgc tttgagttgt ttcagctttc cagggtcagt gctcttggct tacccctggg 12180

cttcctagaa ggccttctgg cctcttgttt acagtcagcc cctggggaca ggagtggccc 12240

tgggctccag tgctcagtgc tgctgtgtag ggatgctgcc ttctctccag ggtttccttg 12300

cctgggggcc tgctgtttca atccagctgc tgctgctgct tcctttctca gccttagcac 12360

cagctccttg gaaggcagtc cctgacaact gtcctgtgcc acatgaaacc agtttggatt 12420

tcttcactgt ttattcattt cccctagccc cagggaggac ccttctagtg tgagcaaggg 12480

cctcagtttc tcctgtctgg ctcactggtc tgcagaacga gccacacagg agtaaactac 12540

tggagtatgc aggtcacttc tgctttctct actggtgtac tgagagaaac ctttgcacct 12600

gttgggttat tttctctccc tctgtcttaa ttcctgcctt ttctttctat atttttggta 12660

aatttccact gttagggtct cccttttctc ataaggtcct ttttgtcatc ttgagtgagg 12720

gcagaaacta ctgccctggt cccagtttcc gtatgtgggg ctgtgtgcag agtggttgac 12780

agtggtacca ggactctact cagtggccag tgtcacacag gagaggccca agcacctgtc 12840

acatgcaggt gcagccgtga tgcttccttc cagtctgaat gcagcagcag agctctctgc 12900

atagtgcctg ggcttgtgtc tctaaggagg ctgagtggct ggtctgctga gagggaggga 12960

gtggctgttc agggactaag tcattgagaa tcacacaccc tccatgtgga agggtttcct 13020

aagcaaggag gtatttctga gcaagatggg tgtctgtgtc tgagtttgtt gctcatggca 13080

tgaaggggat ctgggatgtg tcccttatat ccagtgcaaa gtggctcagt cctgctctct 13140

gctgcatttc agtatgctca gtgcctaagt actggcactg cttcatctgg tccagcgctt 13200

accagacttc cctctataga gaccaagggg ctgtagtagg tagccatgtc agaggcattg 13260

ctagcactgc ggcaggaagt gcgtactcta gttaacgctt tgttcatggc ctacctgctg 13320

ttgagaagtg atgctcttgc tttgcctgaa agtggcttct cggtgccctt ggggcttgct 13380

ctgcctgggg catagtcttg agtcttggag catgcacata gagcctctta gaacccctcc 13440

ctcgttaggc tctggaaggc tcttagacat ctatctgttc agagtccaga ttggtaatgt 13500

tgatcagaaa gttgaggagc cctccctttt tttttttttt ttttggtttt ttcgagacag 13560

ggtttctctg tatggccctg gctgtcctgg aactcactct gtagaccagg ctggcctcga 13620

attcagaaat cgcctgcctc tgcctcccaa gtgctgggat taaaggcatg cgccaccacg 13680

ctcggctcga gccctccctc tcttatcttg tgtattaacc tgttgtaatt agcttttact 13740

gtaaacttga ccagactggt cagtgggctt gtctgtggag acttggcttc ttgttaatta 13800

tgtgagaggg accccactct gtacaagaca aacactgtta tctgggcagg tggtcctggg 13860

ctatatgaga agtctaccta agcgtgagcc tcagtgaacc agcaagcacc attcccctgc 13920

ttcaggtctg ctgagttctt gctgttggat gtccttcaat gatagactgc aacctggaga 13980

ggtgcaggcc acatagtgat gggctgcgac ctagaagtat agccacataa acccctttct 14040

ccccaggctg cttttgatga gggttttatc acagcaacac cattttaacc ctagcctctc 14100

ctgactgccc agggagtagc tgctgcacag agatcttcct tctctcttca gctttctcag 14160

gccaagcttg tcctatgcgg tagagcagtc atgtgcaccc cactccacct tccttcagag 14220

ccgtgctctc tataccattt agagccctgt gtagaagata ggtaccagaa agattcttgt 14280

agctattcag aacatctagt gggagtcccc taaacaccca taggctccgt tccagcctac 14340

agccttccac ttattttgag actgcagggt tttcttgttt tttgtgtttt ttttgttttt 14400

tgtttttttt taaaaagcac gtttgatagt ctgaggcaag gttttctaat ttgttcagat 14460

actagttacc ttgtgacata attaaataaa agtgatttat aattagttca ttaaccatgc 14520

catttaatga tgctttaaag aagattaccc gccctcagag ttgtggaagc agctcactta 14580

ttcttctata ggtacttgtg cttgccttgc tcagcagctc attccttctg atgaataaag 14640

aggcccctac agctcagcac agtgggtcag ttgtacttgt gtcaaagaaa gctgcaagac 14700

cctcctgtcc tggctgctct gtgtatgcta cttggtccta ctaacctgct gctgttagct 14760

ttaactgtta gcttggcatg tgtgtgtgtg tggggggggg ggagaattgt tttattttct 14820

ggcaaaaatg gttcctgaag tgaagggttt tggtctcaga aacttactga ttttaaagtt 14880

ttttgagact gggtgtagtg ggccacacct ttaacgctag cactagggag gcaaaggcag 14940

gtgcatctat gtgagttcaa gtccagcctg gccagcatag caagtttcag gtcagcacag 15000

ctatggagta agatcatgtc tgaaagcagc aacagtaacc actgaagaag ttggtagagg 15060

ggaaagaata acttaacagc tgaggaactg aggaggtttc agagttttga tcaacagtct 15120

ggaaagggaa atcagtgcct gaagtcaatg caggtcctag catcactttc cagtagaagt 15180

gggaactgat gggatgaatg ggcagctctg cgggtaaagg gggtgagggt aacagttaca 15240

gagccctagg tctgtgggca gcagagaagc cacgtgctag cagctcacag ttggtgaatt 15300

acatgctgtg gcaacaccca gggagggcca ctggttcttc ctgtgcgtgc gttctcactt 15360

gtgcgcgtcc tccctctccc cctctccccc ctttttagtt tatgtatatg agtgttttgc 15420

ctgcttgtgt ctgtgcacca gctgagatcc tggtgctctg gggaggttgg aaaaatatgt 15480

tgggtctcct ggaattggag tacaaatggt taggagcctc catgtgggtg ctaggagcag 15540

aacctgggtc ctctgaactc ctgaaccatg tctctagcac cagacctctt tttctttgga 15600

taaaggtgcg tcatgaagcc taatgtcaca tttgggtgtt tctctgcctg ttgttgtgtg 15660

gttcttgtgc ctccgtcatg cttgctgcag gccaaggctc tgtttctgct ctgtttctgc 15720

tctgtttcct tgtgctgatg cagtgcagtt gctggctgag gttgaaaaca gcaccttcca 15780

acagtttaca gcttgtgctt gtttcgagtg gggatcccaa gcctgaaggt ctgcgatctt 15840

gggagtagag aaggagccag ctttgcccag gtaggaactg gaaggaatag gaaccaggaa 15900

cctaaggtcg gggctgcact agccagcttg gatttgcttg gattacctgg gacagcactt 15960

cggaagtgaa aaccattctc gcaggatgac catctctttc cttggtagct agatttggta 16020

tggagagagt tggtttggct taatagctgg gatcctttat tcttaagact agcccagaga 16080

tccaagctcc atgtccctga cttgggcatt aaagacagaa actgatggaa tatacaaaaa 16140

ataggagaaa atctgtcgta ttttcctctg gtgttctgag atggtctctt gtggtccagg 16200

ctggcaccaa ctccccattc tcatgcctcc acctcccaag tgctgggtta tagacatgga 16260

ctgccacact cctcctgcag ttggagactt ataggcccca gggtatgaaa gagtagctct 16320

gacacagtga gcatgcaggc ctctagcacc ctctttgcct gcttccttca tctgccccta 16380

ttggaggctc caggatctag gaaagtatag gagtagggct ccctccaggc ttccaggcca 16440

cctgaagcaa gaggtttctc agcattgtcc cttacctggc aggtacctta cctgcacagg 16500

tgtggctttt agtgctaaca gcaggcctag tggacagcag cagagtaatt tttgactccc 16560

acaggctttt gcgtgtgccc agacaggagg tggtgctctg ctacctcttc ccatggctgc 16620

taacagctat tgtcaatcat caagctgcct gtctttgctg actacagttt ggtggtgacc 16680

ctgctttttg gggagggcca ataggaggct tggctttttt tctaaccccc tcatctcaaa 16740

ggcttaaagg caattcctgt gcagtgtcct gttctgagaa cacaaagcac attctttcct 16800

gatttttccc cccagatcag tttgtaatat ttatatcccg tttgtaatga cttcagaacg 16860

atgcgtgcct tgctgatagg accacagcac agcactggat ttaggacacc tgtgtttgac 16920

tgcgcaccac ttcttactct gggcacttac aggccatggc cttactcctg gaggaatgcc 16980

agccacttcc ttcttggccc caagtgagtg atcagtatga ttgcacactg tgctttactg 17040

atggcagggg ttttgctgtg gatcagagga ccctttccag ctttcttctc tggagtatca 17100

gggaaggccc taagggtaaa gtgcacctga gtgaggaagc ccagcatgag acccgaggag 17160

cgggtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg 17220

agactgtctc atgctgttgg tatttcagat agagcttgaa agcttggcca tatgtactgc 17280

tttgcaagtg aagaccttga gtcatgtttt ggctattgga cctctctgtc tacaggatgt 17340

ttgagtgtgg ctagtttgag ctatgcatga gatttttgta agctagcctc agtgttctgt 17400

tgtgaccggg ccagttattt aatttttctt tttgtctttg aaacctgctg ctctgaggct 17460

ttaaactctg ctgttctcat cttgagctcc tcccctctgg acctagtgga cagccagcag 17520

gacctcctgt ggatttgtat gtctttcctg tctcaggctg tgtgttacct atcatgaggt 17580

atgcagtgag ctgcctgtgt gactcaggat gtcttggcta gggcttgaac ctttggctgg 17640

gtactgtgct gcactgcagt tcattgaaaa atgtctgtcg tgagtgtagc tttccgactg 17700

gcattgtttt gaatgcatct ttaaaggtta gttataaata cattaatgct tgggactgac 17760

aagaattcat ctgtggaact ataccatcct gtgagatttt atttcattat atatgttcac 17820

agaaaagaaa cagggagggt agggtgggct ggaaagaccc tcagcaatta agagcactgc 17880

gtgtgctttc agaggacttg gggttggttc ccagtactca cgtgggaggg acctctctac 17940

tgtgcataac tggttccaag ggatctgata ccctcttatg gcctctgagg gcactctgtg 18000

tgcaaatggt atgcagacat acgtgcaggc aaaactccca tacacttaca gtagatacta 18060

ataaataagc tggacttaaa ttttcatttt atgtgtatga atatttggta tatatcagtg 18120

taatgtgtgt gctatgcctt cagaatccag aagagggcat tagatccttt agaactagtc 18180

ttacaaaggc ttttgagcca cattatggct gctgggaatt gaacctgggt cctctggaag 18240

accccagagg agcaagtact tctaataaca gagacatcac tccagtccca gaagctgggt 18300

tctgagtggc tccaatataa tttgaactat agcaaaaggt agaattctgt ttaattgtaa 18360

ctctccttct tcttcttctt cttcttcttc ttcttcttct tcttcttctt cttcttcttc 18420

ttcttcttct tctcctcctc ctcctcctcc tcctcctcct cctcctcctc ctcctcctcc 18480

tcctcctcct cttcttcctt cttcttcttc tttcttcttc tttcttcttc ttcttctttt 18540

ctttttttgg ttttttgaga cagggtttct ctgtatagcc ctggctgtcc tggaactcac 18600

tttgtagacc aggcaggcct caaactcaga aatccgcctg cctctgcctt ccaagtgctg 18660

ggattaaagg catgcgccac cacgcccagc ttcctttttc tcttttttcc acagacttca 18720

tgaggagata atcgactttt ataacttcat gtccccttgt cctgaagaag cagccatgag 18780

aagggaggtg gtgaaacgga tcgaaactgt ggtgaaagac ctctggccca cagctgatgt 18840

gagtatcttg ttcacgtacc agtccatgag gttgtgtcag ctttatccac atgtgcccac 18900

gcttcctatt cccacagtag agcagctccc caggcctagt cccgggagca tcgcctggga 18960

gggaacggct tagacgagca ctctcccctc tactgcgtct agccctggtg tagtccagcc 19020

tctggttagc ctgtgaaacc cataaatagg aatatttata ttcttatggt ccttcattcc 19080

cctcctcttt cattcttgtt taaaaattgc gttaaggtta gaaatctccc tcctgctcca 19140

cccacacttg cagtcactgc agttcacagc atggaacatg tttgcgtcat tagaaattgc 19200

aagtggcagc agagcatggt ggcacatgcc tttcatccca gccctcaggc agcaaaggct 19260

ggaagtttga ggctcaagtg ggctacgtag ggaaactctg tcttaaaaca taacagaata 19320

caagtgttcc tggtgtagca ctcacatgaa tgagtgtgtg tctgtggaaa tgaggtactt 19380

gcctatttgt agtccttggt gcaggcagcc tgtggtatgt cagctgacca gggagctaac 19440

cgcctggcct ggattttgat gtaaataaat gtacaaagag ttttctagtt tgttgcacca 19500

tttcatctgc ttcttcccct aatgtccaag ctggttttgt ttgtcctcgt gtttttcaag 19560

gcatggtggg ggtctgctgg cttgaactct gggacttctc tttcaggtgc agatatttgg 19620

cagctttagt acaggcctct atcttccaac aaggtgagtg tcaaggctga cggcacactt 19680

gggtgttggc ttatggagtg gcagtgtctt tgcttctaag gcttgaatag ccagctaagg 19740

ggaaggattg tggaacacag gggaaatagg cagaaagttg catttattag tttagtatta 19800

aggcaggaga ttgcttgctt ggcatttttc ttcttgcatt taatttcttt cttttttttt 19860

gggggggggt atatttggat aatagtttat tggttaaaag aatatatttc cacaaagatt 19920

tttttgattt gtttacagag ctacccatat tttatagaat acctgaagaa gctggaaagc 19980

tgttcagatt tcatgtgcta aaaaaagaat attcttaatt aaattgtaag aaaaacacta 20040

aaatacacag gacaaataag cctcaagaga aaatatggct gaacaaaaat aatcagcaac 20100

tacatcactt tataacacag gaattataat gaaatgaagt tctctctgga cgactccagc 20160

tatacatgaa atgaaaagta ttttcaacat acatccaatt tccaaagtac aacataatga 20220

aacatttaaa acttcagtgt attttgatta gttcttaaag ccccttcccc caaacatttt 20280

ggcaccaaac aaacttttgc tacaaatggg gatttttttc ctttgagatt tcctgcatga 20340

ccagtgttga taaaataagg aaaggggaaa ggctgattga caagaacagc tacataaact 20400

attagaagac cattcctaat cgagaaatga attggtacta accactgtgt gcatacactt 20460

agatcaatgc ctgtcagagc cttacaacaa cgaatggcag tcttaatcaa cacagaggga 20520

tctttttctg ggtttggtcc atccagcgaa ggagaccagt ggcctccaat ggccatggct 20580

tcatccttgc ctttcattcc cactagaaac taattcaaac caaagaatca tttatatata 20640

tataacacag cccatcaaat tataatagat acttagaaaa ttaggaaggt acaaaccttc 20700

ccaatactac ttttactacc tctgatatct gtcagtcaag gacgagttca gttcagcatt 20760

taatttctta agcacagaaa tgttgggtgt cagacagaaa atggatggga actgccttgg 20820

tctcctgctg ccatagaaca ggaccccggg ttggctgaac tgtaaactgt agaagcttcg 20880

ttagctctca gttctgggga ccgagaagtc ttaagattca gaggcttatc tgggtctaac 20940

tcaccccgta gcagaggtct tgatccattt agaaaacatt gccccagagc ctactcacct 21000

caggaaggag aaaggcctga cctgttggtt gggggggcca catttcagtg ggagtctttg 21060

gggttttgat agtgaataga aaatgttagc gaaccttcaa gcacacttct gttagaacag 21120

tattttatga agctctttat gtagaagtgt cagatttaca tcctaaaatt gtcttctggg 21180

ttcatattgt catatatata atgtataggt ggtttttgtt gtacatgctg gttagcattt 21240

ggaactagcc tgctagtata gcatttggct gtgatgtcag gacttaggaa ctgacatggg 21300

caaaggctct ggaagccaag tagattaaaa gtcttcaggg atctccagac cttgaagcaa 21360

gagccagtga cgatagaata gactgctgaa aacagtttat cctgtcacct gttggttcct 21420

gggactctga ggcccttttc actctggctt tatatactta gatgactcaa gagctgcatt 21480

cagggctcat ggcttaggta cttaggggac cttgttgata agaggcaaca tgctgtggtg 21540

ctggccttcc catgggaggc cacctggtga ggtttgttgt gactgacaca gtttctcttc 21600

tgtccagtga catagacctg gttgtctttg gaaagtggga acgccctcca ttacagttgt 21660

tggaacaagc cctccggaag cacaacgtgg ctgagccgtg ctccatcaaa gttcttgaca 21720

aagctacagt gagtattggg ggacagatac cttcacctga agtccccaca tggggtcagt 21780

gtcctctggt tttcttacag tggttactgg ttatattttg attgtcctct tgtggtataa 21840

ccataccagt gaccatcttc atgatttacc agctgagaac ctgtttggtg ataagtggat 21900

ttgttctcat tgtgagatct tagattttca ctcttggcct taaaagactt gtgtctgtct 21960

gtgtctgtag agtaaagcaa ggcagaggat cactacggag gaactagcac tccacctgct 22020

gttgtcctgg tttgcagctt agagatctgt gtggcagtgg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg 22080

tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtaag accgcacact aacttacgct gaaggaggaa 22140

aacctggagt tccctttgtt gctcagccct gtgtcttctt aggaaaggca ctgtctcagg 22200

ggaaactgaa agataagatt gcttctaaga agttcctggg acgattcatt gaaatggttt 22260

atgttagaca gcttatgatc tcagtctgtg gccctggtat gcaccagaca ccagctctgc 22320

tgccatggac tggtgtttca gttttgagtt ggtgtgttac ctcgtctgta gggtttttgg 22380

ggaaagtgtg agtttcaatc cagtggctgc aagctttgtt ggtacttttg cctggggtgg 22440

gtgagtgttt agatggaagc atgcccactg tggattggat cttcacaaag tgtctagact 22500

gtcccttccc agtggttgtc cctccaggcc tggctaccat actgcctttt attttattca 22560

ccggaactct gcttagtcat gaaccttggg taagatgcag aaggccatgt tgtactcagt 22620

cagtcctcca actcaccggc aggcacatga ggaaacaccc acaatgaata gcaagggaaa 22680

ggctttgagc tcctttaaac acagtgggca gaggtgacac cttgctatga ccagggtcct 22740

gctgtggtcc agggtcctgt tgtgatccag ggaaggtcct gctgtgatcc agggaaggtc 22800

ctgctgtggt ctggggtcct gctgtggccc catctgtgcc atggttgttc tttttgtctt 22860

taattcttca tccagggaga aatccagctg tcttaggcac tctgaccact cagtcttgca 22920

cagttagtga agtgaggccc tttgacaatg tggaggcaat ggggacttgc tgttggtggt 22980

ggtattcaga tgtaggagag cttatgggtg gcctgaggtt cctgagttgt tgaacttttc 23040

aagatccaga cagagcattt gaggattgtt gggtataact gcttagtcct cccagactcc 23100

ctgctccagc atgttgaaaa atatatacct caattacttg aaggcatccc atcctggctg 23160

gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt 23220

gtgtgtgtgc gctcttctct tctcttctct tctcttctct tctcttctct tctcttctct 23280

tctcttctct tctcttctct tctcttctct tctcttctct tctcttctct tctcttctct 23340

tctcttctct tctcttctct tctcttctct tctcttctct tctcttctct tctcttctct 23400

tctcttctct tctcttctct tctcttctct tctcttctct tcttctcttc ctctccctcc 23460

tgctcgtcct gtgatgataa ccatggatct ggatcttgaa gtgcaagggc tttgtgctgc 23520

tgtgtatttc tcagtgtctg gtctaacaga gcagctgtgg tgctctcacc cttgggtgtg 23580

tagtgtgact ttgtagggtg catgtgcagg tcaggcctct cacctgagtc ctctctcagg 23640

ctcccattcc cctcttgctg tcccacttca gagttggcct gtaggagatg gtagagtggg 23700

agtcctgcta ggagaagaca ggtcatggac gttgtgtgga gcttcatgac cactgatttt 23760

aactcctgac agagcccttc tctttaaaac tgacatcctt gaccaccaat tcccttttgt 23820

gaagagagaa cggtgagtga ctgtctggag atgtagatgt cacagcagtt tgtcaactac 23880

atcctcatag gtgcccatca taaagctcac agatcaggag actgaagtta aagtcgacat 23940

cagctttaac atggagactg gcgtgcgggc ggcagagttc atcaagaatt acatgaaggt 24000

actgttgtct caggtgccca gtaggacaga ggtgtgagac cttgttactc atttttctca 24060

tgaatgttaa aaaccttagg atgggtcatg ggtagcaata cagacagtgc aatttccagg 24120

ttctgtcatg gggtctgtgg gggcactcag gaagtgtgta gttgctttct gattggcttt 24180

gagtgactgc ttcttttaga gcactctggg gaaatgttct gtgttagtgc acagcctcgc 24240

tcctgctccc ggctttgtgc tactctccca acctactttc tcacttgcca gactccgtct 24300

aggttggctt agtttagagg cctcagtgct tgtgaatgtg agagtggctg gtgcctgagc 24360

tgctgctttc tggagctttg agtgttggca ctcaggccac acagccaagc ctgtggtctc 24420

tttcctctgt cagttcccct tgtctgtcat tgatctgcag gagcatttgc ccacttccct 24480

cgctctctgt ccctgctttc cctagttctg ttcagggctg agccacctgc ttactgagtg 24540

ctgggattct tgtgtcccac tgatggggtc atggcttggg cctgggggtg tgggggcagt 24600

accctcagct agtgtgaatc cttaagccta aaattggagt caagagtttt tggggggagg 24660

gagcaggaga atgggtgagg agttcttttt ctcccaggaa gcttgtctag agtcccttca 24720

aaagtacatc agctacgggg ctggagagag agctcagagg ttttaagagt tttttcaatt 24780

caattcccag caaccgccca gtagcttata gctatctata atgagatcta gtgccctctt 24840

ctggcctgca ggtgtacatg caggcataat taaaacaata acaaaaaaaa tatcagctga 24900

cctgtatgcc tcttcttggg tttcagaagt actcgctact gccatacttg attttagtgc 24960

tgaaacagtt cctgctgcag agggacctga atgaggtctt cacaggcggg atcagctcct 25020

acagcctcat cctaatggcc atcagctttc tgcaggtgag cggcctccgc actgtgctct 25080

cctcaccctc actgggctga ggaggcgccc ttttctgctt ctcctcacaa tgctttcttg 25140

gtcagccccc gtcctgtagg ttgattctgt gggtgtaggt ttcagaccct gggtgatgcc 25200

tgcctgtgct tcaggaagct ccaactttta ctatactgag aactgtggat tgtcagtttg 25260

gagcaggaga gcaagaattg gtttattcct atataaatca taaaaagcct tttccactgg 25320

cgcttatctg taaattactc ccaaataccc tgagagtaaa gggtagttac caacatgggg 25380

atgagatgga gacatttcct tttgtgtttt tgagataaag tcactctagt cctggatgac 25440

ctagaactca tgtgcagccc agcctggctt tggacccatg gcagtcctct tgactcagtt 25500

tccctggcac tgagactgca catgtgagcc actctgcctg gcaagccctc tgtgattatt 25560

ggtcttaaat tcggtgtcat ctctgctttg cgagtagagc actaggagct gccctgtcag 25620

cagctggcct cccaagcaag gcgctcctct ccttgctggt tggttggttg gtgatgttga 25680

gccagaacct cttacatact gacctggaat tcactttgta gcccaggctg gccttgaact 25740

agtagcaagt cttctgtctt aggctcctga gcactgagat tatagatgtg agctcttaca 25800

cctgctaact catatacaaa atagcacctg tgttaaagtt ttattgcatt tctattggct 25860

tgagaaaaca tttgcctgtg tgtgttagtc acctgagtgt atgtccccat gtatatcact 25920

gagagtgtat gtatgtcccc atgtatatca ctgagagtgt atgtatgtcc ccatgtatat 25980

cactgagagt gtatgtatgt ccccatgtat atcactgaga gtgtatgtat gtccccatgt 26040

atatcactga gagtgtatgt ccccatgtat atcactgaga gtgtatgtat gtccccatgt 26100

atatcactga gagtgtatac atgtccccac gtatatcact gagagtgtac gtatgtcccc 26160

atggctgccc aagtctcttt ccccacgtat atcactggtt ctcctttgtg agtgcttgct 26220

gagggtttgt tattcccaat gacactgcta gcctgcaagt cagactgtag ctcggactgt 26280

ggtgagcttt gatgcagacg tgttgcccct gaagcattag tccccaggtg tgacagcgga 26340

gaggcttaca gtgctgagcc atcacagtgg gtgacattac tgttagcgac atggcctctg 26400

tttatatctt gagtacccct gatttgaggt aatgtgtttg gatatcttgt caggacaggt 26460

gacgttacct tgagtggggt ttcccaaggc ttcctggtgt gctgttacta ggatccttct 26520

ggctgtcaga cctcacagag ctatatagat gggatagccc tccttctgtg cctgtgttgg 26580

agaccaccca cctgaggctg gacctggtgt agcattctgc ttatctcact gctgctgcct 26640

gagggaagaa ggccaggccc tgtactgggc tgccttgagt atttgatttg gctcaaaagc 26700

aaggacataa aggcttggca agaggactgc cctgttatgt agaggaggga agaactctga 26760

cattatgagg gattattcct ggaaggccac attcatgctt cagccctgtg ctaccaggac 26820

ttggacacta gggaggcttg accgtcacca tctagaattg tgcaaaggac aagttctctg 26880

tgtgaccatg gaagcgatga gccacacgct actcttggat gctgagagta actggcatgc 26940

ccacactcat tctgtagtgg gcagctcagg tctataaagt tgctggcacc tgggagttag 27000

ttatcaggga ccgtgggcaa gcgtcacaga gaggctgtgg cttgctagaa caaagtgtgc 27060

aggtgaaata gcctgacagt gatgtgtgaa agctggaagt gagttcccag gcagagttag 27120

ctctgtccac tcacatcctg gtccaatgat tgtgatactg ttcagtctca tcctgctccc 27180

tcctggtagc atgtcaggat gatgacattg atgtgaacca tgcagccacc atccagatga 27240

caatgtggaa aacttaccat tgcagcatga gggtaactag atgtgtgtgc ttggatgtcg 27300

tggtctgaat ggatgttgag atgtgttctt tctttcaagc ctcccaccaa cagaggctgt 27360

ccattgtctt gtgttttctc aggtgctatc gagtggggac ccctcagtgg gttcctggag 27420

agctgctagg tgagtgttgt tggagtgtag cttgaattca tatgctggtg gctctcttgc 27480

ttttacagtt acatccaaga atcgatgccc ggagagctga tgaaaacctg ggaatgcttc 27540

ttgtagaatt ttttgaactt tatggaagaa attttaatta cttaaaaact ggtattagaa 27600

taaaagaagg aggtgcctat atcgccaaag aagagatcat gaaagccatg accagtgggt 27660

accgaccatc gatgctgtgc attgaggacc ccttactgcc tggtgagctt gcccctctgg 27720

ctggaagcac agtgctggct tatctctacc agcagaactc agtgggaaca ctttcaggtt 27780

tctaacgagt ttactgcact ttaaaatgtt tacattctgg aaatatcata actaggaaag 27840

gctaatcagg gaatcctcac aggaaacatt cacttcagga aggaagcatg ggccaggaag 27900

tgaagaatgg ggactcctgc aggtgattct cctggctttc ctatgtcact gcaaatgttg 27960

ctcttgcagt atgtggtggc tgagctagga ctccaagccc cactccattg gcacgtgtaa 28020

gggtgcttat ctcacccacc gtggtaacac ttggtcttta agtccttgcc aatctgataa 28080

ctgctgcaca ttcttattta gttatagtcc ttcctggtgc ttgctcttca actctgcata 28140

tgcctgttga gcctgtcttg ggtgataggc taagtgcatg atgggatcag ggcaggctgt 28200

gacaacagga cgacgggagg ctgcaaacgc cttggctttg ttcttctttc gtggaactgt 28260

gcgctgcgct gcagccatgg tctcctgagc tggccacgtt ggtgttctgt gctaggggag 28320

ccttgtccac atgactctca gatcccagct tgtgctttca tttgtattca gtcgcttatt 28380

attctgctcc tattccttat ttatttacta tcctcatttt tttaaataat gtttttatta 28440

aatattttct ttatttacat ttcaaatgtt atcccctttc ctggtttccc ctccgaaaac 28500

cccctatcct catccccact tccccctgct caccaaccca cccactccca cttccctgtc 28560

ctgttattcc cctatactgg gccttcgagc cttcacaaga ccaagaggcc tctcctctca 28620

ttgatgtcct acaaggccat cctctgctac atatgtggct ggagccatgg gtccctccat 28680

gtgtactagc tggttggtgg tttagtccct gggagctctg gggggttctg gttggttgat 28740

attattattc cttctatggg gctgcaaacc tcttcagctc cttcagtcca ttctctagct 28800

tctccattgg ggactctgtg cagtggttgg ctgtgagcat tcacttctgt atttgtcagg 28860

ttctggcaga gcctctcagg agacagctat atcaggctcc agtcagcaaa cacttgttgg 28920

catccacaat agtgtctggg tttgttgtct gtatttggga tagatcccca ggtgggacag 28980

tctctggatg gcctttcttt cagtttctgc tctatacttt gtctccgtat ctcctcccat 29040

ggatattttc ttccccctac tgtcctcaaa tttaatgatt atttttaaac tgttcgttct 29100

agggtgagac taatttcttt aaaaatcttt tgaaaggaaa atagacaatt ctagtgagct 29160

gtcttcaagt ggctaacgga tcccataaat ggggaggtgg ggttttcgtg gaaacgtcct 29220

gacagtgtgt catctacttg agtgtcccat gtcttcaggt tctatttcag tgtgcctgca 29280

ttactcctgg actgtagctg tgtctaggaa gatgaaattc ccatatcctc cctaaaatcc 29340

catacttgag atgactgagc agtgaatcta tgtaggagtt acagttcctc ttgatgctag 29400

tggtagcttc atttgctttg ctctgtgagt ttgtaataca gcattcttcc cttaaagggc 29460

ttccttccag ttctgatact ctgttcagtg tgagcgaccc cgttacactg tgtgccactc 29520

agggcttatc atgacattga tcatgccaag tccacactgc tggttggtgt gttggatatt 29580

ctggatttcc ttgtggtgtg ggcttccctt tttttttctt tttccctttt ctgctacctg 29640

gggtcttagc agactctgtg aactgtcaga cacttgtggc tgcccccttt ccattgttag 29700

gaatagactg gtcacagagt ctgaagcact gaacctgtgt gcaattatat accatgcact 29760

tgcagcagct cgctcgggtc tgtgtttaca tgcctgttgc ttgagctgct gtagttggga 29820

ggcatttggt ggtgagcccc tattcacagt accttgtatg agagacaggt gcctttgtgt 29880

tgcaggaaat gatgttggac ggagttccta tggggccatg caggtgaagc aggtgtttga 29940

ctacgcttac attgtgctca gccacgctgt gtcaccgctc gccaggtctt accccaacag 30000

ggattctgaa aggtaatggg tcttgtgcct gggttctagg ctcctctttc ctgtagagta 30060

gcaggtgtac tttttcatgt gcttctgtgg catggatgga tacactgtca tacttgagtg 30120

gaccttgagg aaagcttttt tgggggcaac aagatggctt ttgggtagcc cgtggcctag 30180

gacagcattt cttagtgggg tggtattgta cttgggacat tctgtattag agcagattcc 30240

tgactttgaa aacctcggtt ggtgcctgtc cagcagctgt caggtgtgct tgcttaggtt 30300

gtgagtgggt tcagatctga acacactgct ctgcctctac agctgtttag ccgtccttca 30360

ctttacagtt gaggatagtc tacagtgtct cctttagtgg ttgtcaggca tatttatttc 30420

cagttcagct tagctgctat agtatgtgca catggggagc aggaggagac aagagtggaa 30480

ggggagaaat gggctgaaca gactgctgtc agcagtgtgt gaatgtctgt tccagagctg 30540

gctgcctcag gaaactgtta ggaatgggcc tggctttcca tgattgtcca cacacagtgt 30600

tgcaggccag cccctagcct gtaatgggcg cctgggtatc tctccacacc tgtgcagtgg 30660

aaacaaagtg tcaggacttc atggctaccg cttaaactgg attgaagcca tcatttgtag 30720

acagatcttg gttaaggact tctacatagt gaacctacct ttatctgtac cgtgatctca 30780

tggtactatg aatgtaaaca tgtcagacct catgctctct cctgtcttta atgagcctca 30840

catctgacac ctagtgctta tgtccaaccc tgttctctgc agtactttag gaagaatcat 30900

caaagtcacc caggaagtga tcgactaccg gaggtggatc aaagaaaagt ggggtagcag 30960

aatcctcccg tctccagacc ttggtgagag actgacagtg tgaggcgtgg cctctcacca 31020

tagcacagaa gcatctctgc cctcttgtag ggttggccaa gctgtgaaag tagttccttt 31080

tctacttttt ctgataggct atccgttctg taagctctgg accctataga aatacagtcg 31140

tagctgcagt aaacgaaggg aaggagcaga tggaagtggt tgctaatgtt gcatttgatt 31200

aaacgaaggt atactccaac acagtggcaa gaaatcactg agatgcagat aggttttgtt 31260

ccaaatctta gaaatccagt atgtatttgt ttcagaattc tacattctac attgacattg 31320

gacatatttg ttttatgttt atagtttatg acagctacag gttaagactt acacagcact 31380

ggacaaatta tagtgttttc tggtgactag tttgattcac atttaaaatt agattaactc 31440

agatacaagg tttggtttgt taacattcag agttcagcag ccttgtgctt cgagcacatt 31500

gtactaatca ctaacctgga ctttgctttc ctgccccaga caacaggatt aagataaagg 31560

agagaattac cacgtgcaat ggggagcaga tgcagagccg ggagcccagc tccccttaca 31620

cccagcgcct gactctgtcc ctgtccagtc cccagctgct gtcttcaggc tcttctgctt 31680

cttctgtgtc ctcactttct ggaagtgaca ttgtgagtgg gcttttgctc ttgactcgtc 31740

cttctcatgg ggtggggtgg ccactgtcct tgttatctgt agcagggagt tcaagaccta 31800

ttcctcctcc atctcagtcc cttgctgggg tgtgaggatg tgtgtgtgtg tgagagatgt 31860

atgtgtgtgt gtgagatgta tttgtgtgga tatctatgga gtatatgtga ggtacgtgtg 31920

ggtgggaggt tggggtgtgt gtgtgtggtg tcgtgtctgt ctttgttggg tgttctttga 31980

cataggcttt aagaacccct ggctgtgttg ctccgatgac ccatcaatag cactcagcca 32040

aactttggac tttgagtggt tttttttgag aaatggttta gagatttacc ggttaggtcc 32100

atgtgcctca tctgcatttt ctgcagccta gtctttctcg tgctgcagtg actgaggaag 32160

gataggtttg ctgtaatggc ctttcctagc ttcctcctta aaggcgcctg gctcacactt 32220

cagctgcgct gtgcttatga ctctccttgt ctctgtgctg cgctctagga ctccgacaca 32280

ccgccctgca ccacacccag tgtttatcag ttcagcctgc aagcacccac taccctgatg 32340

gccagcctgc ccacagcctt gccaatgccc agcagcaaac cccagcctgc tgcttccaga 32400

acgttgatca tgacaacaaa caaccaggta caggcttcct ccccggggac ggcatccggg 32460

ccaagcagga ccctagatca gcgttcttgt ggacgactgg gtctagtgct gtctcccggc 32520

agtcatcgtg ctttggtggc tgcagttgtt actcagcctg ttgtgtaacg cagtctctga 32580

cctggagtct gatgttgttc tggagcactg gatgcctctg acaggtgctc tctcagtgcc 32640

gctttgcatg cagtagtgtc cagggcacgc actgctggct gcgtagacac ttgctctctc 32700

tctccagaaa ctcagtgtca gcatgggctt agactctctg ttagtcagtc agtactcggg 32760

acttctcttt ttaaatttta tataaagtga atcaaaagaa aagtatagaa attcagtatt 32820

gtgttgggtt tgtacaaact cagtgcatta ttaactggga aggagaagca gcatttgacg 32880

tgggagttga gtgggaaaca gaacagaagc atgtagatgg ctttcctgga gtcctttggc 32940

cctgctgaga tccattccca cacagctgct ttgaagctga gctctacgaa agcatgtgac 33000

tctgatgttg gtgagcgttg gacacccttc ccccagtgta gcccagacta cagacctcaa 33060

cgagtgcacg cgaggaactt tccaaggcag ttgttgaagc tattaaattc taccccactt 33120

caacttgact gtcagcttcc ggaaaggaca ctgcccaccc ttccactctg gaggcctctt 33180

tgtcactcgc caggacagtg tcttggagag cccgatgcag ggccagcttc agtttcctgc 33240

cggaggtgtt ttggacctgt ggtgtctaag aaagtatagg tgtggatccc agttggttgt 33300

cacagttgta tgattatcct gtgtgagtgt gagtcaggct gagcttgaaa ccaaagtttg 33360

ctgtaatggc ctggagcaga gtgctggcat ccgattctcc accatgtgct ttctacagag 33420

gtagccaggc tgctgcctct cccagcagct gctatccccc tatggagctc tgctgtcaaa 33480

ggttagctcc tactgtagca agtctctctg caagtgctgg gtaaagcagc gatacctgca 33540

gtgtcaggct gagagtggca cttaccagct ttcttttgct ttgggtggga cagataatgc 33600

ggtggccaga aagagccgcc ctctttgact cttcttgtgt tcctctgttc ctctggggtc 33660

tgagggttgt tcactttggg gctcattcta gggactaaag tgacagttgc tgttttggtg 33720

gctctaattg ttttgaattt ggtttgatct ttggagaatg ttagatttta tgacctagtg 33780

actgttataa cttggtattg taattgctat ttgagaagat gagatgattg taattccaag 33840

gccacagtgt ccttaggtca caacagaagc tgtgctccgt gggcatgtgt gtgagtggat 33900

tcgcacagcc agccccacac tgctttcact tggtgtgaag tttcacttgt gggaagctca 33960

tgtttctctt ttccttctag accagggtta ctatccctcc accaaccctc ggagtcgccc 34020

ctgttccttg cagacaggct ggtgtcgacg gaaccacatc tttgaaggct gttcacagtg 34080

taacttcccc agccattccc tcggcatccc ccaacccact gtctagtcct catctgtatc 34140

acaaggtaag tgtcgtctgc tgctgggcta ctttactgca gccgcttgct cactcggggc 34200

cctgcacccc ttggaactga attcccctgc atgctctctg gttggtggtt cagtctctgt 34260

gagcccccat gggcccgggt ttgttgactc tgaccctgca gggaccttct cacacccatg 34320

aagaggcaga gcagattaaa agcctgtagg ctctgagtgg agccatagtc tgttcagagg 34380

gaagggttcc ctcagcttac tgcacgccgc agcagggatt atgtggctat gggttcctgt 34440

tgtacattgt gtcttttcac ctcatggtct gtgtgctgca ctccagccct gctttctctc 34500

tctccagcag cacaatggca tgaaactgtc catgaaaggc tcccacaacc acactcaggg 34560

tggcggctac agctctgtgg gcagtggagc tgtgaggcct cctgtaggca accgaggaca 34620

tcatcagtac aaccgcaccg gctggaggag aaaaaagcac gcacacacaa gggacagcct 34680

gcccgtgagt ctcagcagat aatggtcctg actgactgcc caaaggcctc gctcgggcac 34740

cacaggggag ccgagaccag catccagcac ctccaccgct gtctgccaag cgcagcccag 34800

cactggtcac tctgcatgtt tgtgtggtgg ccgcatccat cttacagaac agctccttgt 34860

gctcatctgt gaagccttac tacatgtgga tgtgcgtctg cctgcctaga agtcttcatc 34920

tgtgcccagc agggcggcct aggagtgtca gggactggat gtgcggctgt gcagccgggt 34980

cagctaggtg gccatttggg gttctcatcg tgtctgtcac aggcagagac gccaagccct 35040

gctccgtgtc ttctgacgga gtgggcaggc tgctgtttta ctgccctcat gtcttgtttg 35100

aaaatttggg actgtttttc tatgtaaata ttgaaaactt atgatttgtg caataactca 35160

gatatttttt atttaatttc atattttcac ataagttata tttaagggag gagggaattt 35220

tttttaaaac acgcttaaat cctttcccaa tttgcatttt ctaagttggg ttcctcgtgt 35280

tggctggtta tctgatagca tcctgacatg aacaccgtga ggagggaggg gcctgtgggc 35340

tttgttttta tgtcttttct tttggtcaga tgcagtgaag gagccaagtc aacttgatag 35400

ttctgtgagg ccagtgtgta cctggcagcc tggctgtcgg ccttgggcct ttgtcctctc 35460

tgaccacgag ttctgacatt ttggtttggg tttttaaaaa ctagacacca aatccagcat 35520

ttaaagtgcc agaagtaaga acctctaaga ggagaagagg ttgtcacgtc gtataaatcg 35580

taaagaatcg tgactctggg cgtgcttcgg tcattaagtg acgtggtcta gagtcacggg 35640

cctggtgagt atcgttacag acaatggcac ccagatttag gaatgtggag aaagggattt 35700

tgttgattcc attgaggaat ctgcataggt atgcactcgt tctgttaaga gcaaatatct 35760

gaaaaggacc tccgttgtcc aggcacatgg gggtatttta atgtatcaca ggagagcaca 35820

gccccagtgt gggcccagga gcggctggtg cctggcgtca gaagcataca ggtatactat 35880

gcaagtgtat tctgccacaa ccactgtctt tgttactttt tttgaacaag aatccatcca 35940

ttgcctgacc ctgattctca agcaccacgg ttgtcctgga gtgcttgcag ttgtaggccc 36000

tctgacttct gcttctaaaa cgggggtctg gacctgctgc acaccacagg caggttgctt 36060

cttgtccacc agtacagagt gtcaagccga gtgctgtgcc acctgattga catgcagcag 36120

tggaaattct gaatggatgt ctgagtgaca ttggacacct cgccaaggac aagctctgtg 36180

tgtctgggtc tgcctcctgc tgccgtggtg aggctgttga ctctgggagg cattccagag 36240

cagaggagca catgggtctg cagctcatga ggattggagt catccagaat atttaaaatt 36300

atttaaattg tgaagcctgt tgctaaagaa tatttatgaa cactggtcca tagcctgtac 36360

taatttacac attagcaata ttgactgtat ctgcattaag gagccaccgt ggggccgttc 36420

gagtgacccg cagatgtgcg ttttaaagtt ctgtcatcca caggcacagg tatgtgtccg 36480

tctccgtcat ggtgaaccag atgaattggc ctggcgacca ctgtggccat atgctacagt 36540

ttacaaaatg ataccatgtt taaattttct gtgcggacaa caatgtggac actaaaatta 36600

acatattttt atgtaaagtt tttctattct ttgatcttta ataaacttta gatgctaga 36659

<210> 7

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 7

agatctgcat ccacag 16

<210> 8

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 8

cagatctgca tccacag 17

<210> 9

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 9

ccagatctgc atccacag 18

<210> 10

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 10

ccagatctgc atccaca 17

<210> 11

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 11

cccagatctg catccac 17

<210> 12

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 12

cccagatctg catcca 16

<210> 13

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 13

tcccagatct gcatcca 17

<210> 14

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 14

gtctcccaga tctgcat 17

<210> 15

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 15

tctcccagat ctgcat 16

<210> 16

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 16

gtctcccaga tctgca 16

<210> 17

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 17

tcaactttca cttcagt 17

<210> 18

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 18

tcaactttca cttcag 16

<210> 19

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 19

tgtttcaata ctaaaa 16

<210> 20

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 20

catcaacttt cacttcag 18

<210> 21

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 21

catcaacttt cacttcagt 19

<210> 22

<211> 20

<212> ДНК

<213> искусственная

<220>

<223> Олигонуклеотидный мотив

<400> 22

caacataagt ctacacatcc 20

<210> 23

<211> 19

<212> ДНК

<213> искусственная

<220>

<223> Олигонуклеотидный мотив

<400> 23

cagttttacc gattcatca 19

<210> 24

<211> 19

<212> ДНК

<213> искусственная

<220>

<223> Праймер

<400> 24

ctgtgccttg ggtggcttt 19

<210> 25

<211> 24

<212> ДНК

<213> искусственная

<220>

<223> Праймер

<400> 25

aaggaaagaa gtcagaaggc aaaa 24

<210> 26

<211> 34

<212> ДНК

<213> искусственная

<220>

<223> Зонд

<220>

<221> ZEN

<222> (9)..(10)

<223> внутренний гаситель

<400> 26

agctccaaat tctttataag ggtcgatgtc catg 34

<210> 27

<211> 16

<212> ДНК

<213> искусственная

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 27

agcgaagtgc acacgg 16

<210> 28

<211> 13

<212> ДНК

<213> искусственная

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 28

gcgtaaagag agg 13

<210> 29

<211> 18

<212> ДНК

<213> искусственная

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 29

caagcgaagt gcacacgg 18

<210> 30

<211> 15

<212> ДНК

<213> искусственная

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 30

cagcgtaaag agagg 15

<210> 31

<211> 18

<212> ДНК

<213> искусственная

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 31

caaaggttgt tgtactct 18

<210> 32

<211> 17

<212> ДНК

<213> искусственная

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 32

cagttttatg ctaatca 17

<210> 33

<211> 17

<212> ДНК

<213> искусственная

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 33

gtattcttat tcttgct 17

<210> 34

<211> 19

<212> ДНК

<213> искусственная

<220>

<223> олигонуклеотидный мотив

<400> 34

cattgctttt ataatccta 19

<---

1. Антисмысловой олигонуклеотид для ингибирования экспрессии PAPD5 и PAPD7, где указанный антисмысловой олигонуклеотид имеет последовательность:

TcAACtttcactTcAG;

где заглавные буквы представляют бета-D-окси нуклеозиды LNA, строчные буквы представляют нуклеозиды ДНК, все цитозины нуклеозидов LNA представляют собой 5-метилцитозин и все межнуклеозидные связи представляют собой фосфоротиоатные межнуклеозидные связи.

2. Конъюгированное соединение для ингибирования экспрессии PAPD5 и PAPD7, содержащее антисмысловой олигонуклеотид по п. 1 и конъюгатную группировку, присоединенную к указанному антисмысловому олигонуклеотиду.

3. Конъюгированное соединение по п. 2, где конъюгатная группировка способна связываться с рецептором асиалогликопротеина.

4. Конъюгированное соединение по п. 3, где конъюгатная группировка представляет собой группировку трехвалентного N-ацетилгалактозамина (GalNAc).

5. Конъюгированное соединение по любому из пп. 2-4, где конъюгатная группировка ковалентно присоединена к указанному антисмысловому олигонуклеотиду.

6. Конъюгированное соединение по любому из пп. 2-5, где между антисмысловым олигонуклеотидом и конъюгатной группировкой расположен линкер.

7. Конъюгированное соединение по п. 6, где линкер представляет собой физиологически лабильный линкер.

8. Конъюгированное соединение по п. 7, где физиологически лабильный линкер представляет собой линкер, чувствительный к расщеплению нуклеазой S1.

9. Конъюгированное соединение по п. 7 или 8, где физиологически лабильный линкер представляет собой динуклеотид цитидин-аденозин, связанный фосфодиэфиром, с тремя последовательными фосфодиэфирными связями.

10. Конъюгированное соединение по любому из пп. 7-9, где С6аминоалкильная группа расположена между конъюгатной группировкой и физиологически лабильным линкером.

11. Конъюгированное соединение по п. 10, где конъюгатная группировка способна связываться с рецептором асиалогликопротеина и где конъюгатная группировка представляет собой группировку трехвалентного N-ацетилгалактозамина (GalNAc), где конъюгатная группировка ковалентно присоединена к указанному антисмысловому олигонуклеотиду, где между антисмысловым олигонуклеотидом и конъюгатной группировкой расположен динуклеотид цитидин-аденозин, связанный фосфодиэфиром, с тремя последовательными фосфодиэфирными связями, и где С6аминоалкильная группа расположена между конъюгатной группировкой и динуклеотидом цитидин-аденозин, связанным фосфодиэфиром, с тремя последовательными фосфодиэфирными связями.

12. Конъюгированное соединение по любому из пп. 2-11, которое имеет формулу:

GN2-C6ocoaoTcAACtttcactTcAG;

где заглавные буквы представляют бета-D-окси нуклеозиды LNA, все цитозины нуклеозидов LNA представляют собой 5-метилцитозин, строчные буквы представляют нуклеозиды ДНК, подстрочный символ о представляет фосфодиэфирную нуклеозидную связь, и все другие межнуклеозидные связи представляют собой фосфоротиоатные межнуклеозидные связи;

где С6 представляет собой аминоалкильную группу с 6 атомами углерода; и

где GN2 представляет собой трехвалентный GalNAc кластер, показанный на Фиг. 2;

где волнистая линия связи указывает место конъюгирования трехвалентного GalNAc кластера к С6аминоалкильной группе.

13. Фармацевтически приемлемая соль антисмыслового олигонуклеотида по п. 1 или конъюгированного соединения по любому из пп. 2-12, где указанная фармацевтически приемлемая соль антисмыслового олигонуклеотида или конъюгированного соединения предназначена для ингибирования экспрессии PAPD5 и PAPD7.

14. Фармацевтически приемлемая натриевая соль антисмыслового олигонуклеотида по п. 1 или конъюгированного соединения по любому из пп. 2-12, где указанная фармацевтически приемлемая натриевая соль антисмыслового олигонуклеотида или конъюгированного соединения предназначена для ингибирования экспрессии PAPD5 и PAPD7.

15. Фармацевтически приемлемая калиевая соль антисмыслового олигонуклеотида по п. 1 или конъюгированного соединения по любому из пп. 2-12, где указанная фармацевтически приемлемая калиевая соль антисмыслового олигонуклеотида или конъюгированного соединения предназначена для ингибирования экспрессии PAPD5 и PAPD7.

16. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибиторной активностью в отношении PAPD5 и PAPD7, содержащая антисмысловой олигонуклеотид по п. 1, или конъюгированное соединение по любому из пп. 2-12, или фармацевтически приемлемую соль по любому из пп. 13-15 и фармацевтически приемлемый разбавитель, растворитель, носитель, соль и/или адъювант.

17. Фармацевтическая композиция по п. 16, где фармацевтически приемлемый разбавитель представляет собой стерильный фосфатно-солевой буферный раствор.

18. Способ in vitro ингибирования экспрессии PAPD5 и PAPD7 в клетке-мишени, которая экспрессирует PAPD5 и PAPD7, причем указанный способ включает введение в указанную клетку-мишень антисмыслового олигонуклеотида по п. 1, или конъюгированного соединения по любому пп. 2-12, или фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 13-15 в эффективном количестве.

19. Антисмысловой олигонуклеотид по п. 1, конъюгированное соединение по любому пп. 2-12, или фармацевтически приемлемая соль по любому из пп. 13-15, или фармацевтическая композиция по п. 16 или 17 для применения в лечении инфекции HBV у субъекта.

20. Антисмысловой олигонуклеотид по п. 1, конъюгированное соединение по любому пп. 2-12, или фармацевтически приемлемая соль по любому из пп. 13-15, или фармацевтическая композиция по п. 16 или 17 для применения в лечении хронической инфекции HBV у субъекта.

21. Антисмысловой олигонуклеотид по п. 1, конъюгированное соединение по любому пп. 2-12, или фармацевтически приемлемая соль по любому из пп. 13-15, или фармацевтическая композиция по п. 16 или 17 для применения в уменьшении заразности субъекта, инфицированного HBV.

22. Способ лечения инфекции HBV у субъекта, страдающего от инфекции HBV, причем способ включает введение терапевтически эффективного количества антисмыслового олигонуклеотида по п. 1, конъюгированного соединения по любому пп. 2-12, фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 13-15 или фармацевтической композиции по п. 16 или 17 субъекту, страдающему от инфекции HBV.

23. Способ лечения хронической инфекции HBV у субъекта, страдающего от хронической инфекции HBV, причем способ включает введение терапевтически эффективного количества антисмыслового олигонуклеотида по п. 1, конъюгированного соединения по любому пп. 2-12, фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 13-15 или фармацевтической композиции по п. 16 или 17субъекту, страдающему от хронической инфекции HBV.

24. Способ уменьшения заразности субъекта, инфицированного HBV, причем способ включает введение терапевтически эффективного количества антисмыслового олигонуклеотида по п. 1, конъюгированного соединения по любому пп. 2-12, фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 13-15 или фармацевтической композиции по п. 16 или 17 субъекту, инфицированному HBV.

25. Применение антисмыслового олигонуклеотида по п. 1, конъюгированного соединения по любому пп. 2-12, фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 13-15 для производства лекарственного средства для лечения инфекции HBV у субъекта.

26. Применение антисмыслового олигонуклеотида по п. 1, конъюгированного соединения по любому пп. 2-12, фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 13-15 для производства лекарственного средства для лечения хронической инфекции HBV у субъекта.

27. Применение антисмыслового олигонуклеотида по п. 1, конъюгированного соединения по любому пп. 2-12, фармацевтиче