Штамм "a/chicken/chelyabinsk/314-1/2020 h9n2" вируса гриппа птиц рода alphainfluenzavirus вида influenza a virus подтипа н9 для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против гриппа птиц и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа птиц типа а подтипа н9

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается нового штамма вируса гриппа типа А подтипа Н9 сем. Orthomyxoviridae, рода Alphainfluenzavirus, депонированного в коллекции ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером: №333 - деп/20-121 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ». Предложенный штамм репродуцируется в 11 -суточных куриных эмбрионах СПФ-кур, где достигает инфекционного титра не менее 8,5 lg ЭИД₅₀/см³. В составе инактивированной вакцины штамм обладает выраженными антигенными и иммуногенными свойствами, вызывая выработку специфических антител, улавливаемых в ИФА и РТГА. Представленный штамм может быть использован для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против гриппа птиц, а также для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа птиц типа А подтипа Н9. 5 табл., 1 ил., 5 пр.

 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, а именно к получению нового штамма вируса гриппа птиц подтипа Н9, и может быть использовано для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против гриппа птиц подтипа Н9, а также при разработке и изготовлении средств диагностики и специфической профилактики гриппа птиц подтипа Н9.

Грипп птиц - остро протекающая, высококонтагиозная вирусная болезнь домашних, синантропных и диких птиц, характеризуется септицемией, проявляется угнетением, отеками, поражением органов дыхания и пищеварения [3].

Возбудитель - РНК-содержащий вирус, относящийся к семейству Orthomyxoviridae (по классификации International Committee on Taxonomy of Viruses (ICTV) - 00.046), роду Alphainfluenzavirus (ID: 197911 no классификации The National Center for Biotechnology Information (NCBI), к виду Influenza A virus (ID 00.046.0.01.001).

На сегодняшний день грипп птиц вызывается только вирусом гриппа А, который подразделяется на подтипы на основе антигенных различий двух поверхностных гликопротеинов: гемагглютинина (НА) и нейраминидазы (NA). На данный момент известно 18 гемагглютинирующих (Н1-Н18) и 11 нейраминидазных подтипов (N1-N11) вирусов гриппа А [11].

Вирусы низкопатогенного гриппа птиц подтипа H9N2 показывают практически одинаково низкую патогенность в экспериментальных условиях при тестировании с помощью IVPI, однако в полевых условиях они часто демонстрируют заболеваемость и смертность от средней до высокой степени [13].

Способность данных вирусов обмениваться генетическим материалом, повышает вероятность эволюции и появления вирусов с неизвестными свойствами, возможно, с высоким пандемическим потенциалом [2].

В связи с возможностью инфицирования людей вирусом гриппа птиц подтипа H9N2, Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) уделяет ему пристальное внимание наряду с вирусом гриппа птиц подтипов Н5, Н7, проводит работу по антигенной и генетической характеристике вируса для разработки средств специфической профилактики в целях готовности к возможной пандемии [9, 16].

Известны штаммы вируса гриппа птиц, выделенные на территории РФ, используемые для изготовления диагностических и вакцинных препаратов.

Известен штамм "НОВОСИБИРСКИЙ" вируса гриппа птиц Influenzae virus avicum для контроля иммуногенной и антигенной активности вакцин и изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа птиц [5]. Это производственный штамм вируса гриппа птиц типа А, подтипа H5N1.

Известен штамм A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 вируса гриппа птиц Influenza virus avicum типа А подтипа Н5 для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против гриппа птиц и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа птиц типа А подтипа Н5 [6].

Известен штамм A/chiken/Kostroma/3175/17 H5N2 вируса гриппа птиц подтипа H5N2 Infuenza A virus рода Alphainfluenzavirus для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против гриппа птиц и для изготовления антигенсодержащих диагностикумов [7].

Известен штамм «A/chicken/Primorsk/419/2018 H9N2» вируса гриппа птиц (аналог), выделенный на территории Приморского края. Штамм предназначен для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против гриппа птиц и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа птиц типа А подтипа Н9 [8]. Однако указанный штамм имеет следующие недостатки: штамм относится к генетической линии Y280, представители которой широко распространены на территории Китая и Юго-Восточной Азии, но исходя из литературных данных, вирусы H9N2 генетической линии G1 не менее широко распространены [11]. Изоляты этой генетической линии выделяли во многих странах Ближнего Востока, включая Египет, Иран, Израиль, Саудовскую Аравию и Объединенные Арабские Эмираты [12, 17]. Вирус также регулярно изолировали в Ираке, Иордании, Кувейте, Ливане и Омане [14,15]. В РФ за период 2012-2020 гг.вирусы генетической линии G1 выявляли в Амурской области (A/chicken/Amursky/03/12, A/chicken/Amur_Russia/17/2018), Челябинской области (A/chicken/Chelyabinsk/30/2019), Новосибирской области (A/chicken/Siberia/03/2018) и Забайкальском крае (A/chicken/Zabaikal/2137/2019) [1, 4].

Техническая проблема заключается в расширении арсенала актуальных штаммов вируса гриппа птиц типа А подтипа Н9, циркулирующих на территории РФ, и обладающих инфекционной, антигенной и иммуногенной активностью, сохраняющих иммуногенные свойства после инактивации, обеспечивая тем самым получение чувствительных и высокоспецифичных диагностикумов и вакцинных препаратов, создающих эффективную защиту домашней птицы против гомологичного вируса.

Наиболее близким предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является вакцинный штамм A/chicken/Israel/215/2007 H9N2 (Ck/215), относящийся к генетической линии G1 и используемый в Израиле при изготовлении вакцины против низкопатогенного вируса гриппа птиц подтипа Н9 [10]. Однако этот штамм имеет ряд недостатков. Штамм был выделен более десяти лет назад и антигенно отличается от ныне существующих вариантов, а одним из важнейших факторов выбора эффективного штамма для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики, а так же для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против вирусов гриппа птиц является антигенное соответствие между гемагглютининовым белком вакцины и штаммом, циркулирующим в полевых условиях. Штамм A/chicken/Israel/215/2007 H9N2 антигенно отличается от изолятов, циркулирующих на территории РФ.

Указанная проблема решена путем получения штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц, который может использоваться для контроля иммуногенной и антигенной активности вакцин и изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа птиц подтипа Н9.

Вирусный изолят, послуживший источником для получения штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2», был выделен в ФГБУ «ВНИИЗЖ» в 2020 г. из проб, поступивших с птицефабрики Челябинской области Российской Федерации.

В результате вирусовыделения из гомогената внутренних органов кур был получен штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц.

Штамм прошел 3 пассажа на 11-суточных СПФ-куриных эмбрионах. Способен вызывать гибель эмбрионов кур в течение 48-72 ч инкубации.

Подтип H9N2 идентифицирован методами полимеразной цепной реакции (ПЦР), нуклеотидного секвенирования, в РТГА (реакция торможения гемагглютинации) и РИНА (реакция ингибиции нейраминидазной активности).

При проведении филогенетического анализа нуклеотидной последовательности фрагмента гена НА участка 1414-1573 п. н. было установлено, что исследуемый изолят «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц принадлежит к генетической линии G1, широко распространенной на территории Ближнего Востока.

По фрагменту гена НА наиболее генетически близкими оказались последовательности вирусов гриппа птиц подтипа H9N2, выделенные в Израиле (98,2-99,0% совпадений), а также последовательности вирусов гриппа птиц подтипа H9N2, выделенные на территории стран Ближнего Востока (98-99% совпадений).

Сайт расщепления гемагглютинина содержит основные аминокислоты и имеет структуру RSSR/GLF, что позволяет охарактеризовать вирус как потенциально низковирулентный.

Штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц типа А, подтипа H9N2, депонирован 11 декабря 2020 г. в Государственную коллекцию штаммов микроорганизмов ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» под регистрационным номером №333 - деп/20-121-ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ».

Экспериментально подтверждена возможность использования штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц для контроля иммуногенной и антигенной активности вакцин и для приготовления биопрепаратов для специфической профилактики и диагностики гриппа птиц.

Сущность изобретения пояснена на графическом изображении (фиг. 1). На фиг. 1 представлена дендрограмма, отражающая филогенетические взаимоотношения штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» с эпизоотическими и вакцинными штаммами вируса гриппа птиц подтипа Н9. Дендрограмма основана на сравнении нуклеотидных последовательностей участка гена гемагглютинина.

Показано, что исследуемый штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» принадлежит к обширной линии штаммов G1, выявленных на территории стран Ближнего Востока.

Сущность изобретения пояснена следующим перечнем последовательностей:

SEQ ID №1: представляет последовательность нуклеотидов фрагмента гена гемагглютинина штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2»;

SEQ ID №2: представляет последовательность аминокислот фрагмента гемагглютинина штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2».

Исследования основывались на определении первичной структуры фрагмента гена гемагглютинина (НА) испытуемого образца штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» с последующим анализом филогенетического родства с другими штаммами и изолятами вируса гриппа птиц подтипа H9N2. В результате секвенирования была определена нуклеотидная (360 н.о.) и аминокислотная (119 а.о.) последовательности фрагмента гена НА штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2».

Штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологическая характеристика

Штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц относится к семейству Orthomyxoviridae, роду Alphainfluenzavirus, виду Influenza A virus, подтипу H9N2 и обладает морфологическими признаками, характерными для вируса гриппа типа А.

Вирионы вируса гриппа - оболочечные, плеоморфные. Диаметр сфероподобных частиц около 100 нм; нитевидные частицы около 17 нм в диаметре, длиной 250 нм и более. На поверхности вириона находятся шипообразные выступы (до 14 нм), образованные гомотримерами НА. В промежутках между кластерами НА у вирусов типа А размещаются молекулы NA.

Липидная мембрана окружает петлеобразные филаменты нуклеокапсидов с восемью фрагментами вирусного генома, каждый из которых представлен линейной одноцепочечной антисмысловой РНК.

Общая длина генома составляет около 13600 нуклеотидов (нт). Наиболее крупный фрагмент (№1) содержит около 2350 и.о.; №2 - чуть менее 2350 и.о.; №3, как правило, - 2250 и.о.; №4 - 1780 и.о.; №5 - 1575 и.о.; №6 -1420 и.о.; №7 - 1050 и.о.; №8 - 900 н.о.

На обоих концах каждой геномной цепи РНК содержатся повторяющиеся отрезки, причем повторы 5'-концевого участка (у вирусов типа А они имеют вид 5'-AGUAGAAACAAGG) комплементарны инвертированным повторам, расположенным на 3'-конце. Кроме того, 3'-концевые участки некоторых фрагментов генома содержат консервативные отрезки, типичные для вирусных штаммов, поражающих субъектов определенного биологического вида [ICTV-International Committee on Taxonomy of Viruses].

Антигенные свойства

По своим антигенным свойствам штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц относится к семейству Orthomyxoviridae, роду Alphainfluenzavirus, виду Influenza A virus, типу А, подтипу H9N2.

Гемагглютинирующая активность штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» подавляется специфической сывороткой к вирусу гриппа птиц подтипа H9N2 («IZSVe», Италия), что подтверждает принадлежность штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц к подтипу Н9. Титр специфической сыворотки составил 6 log₂. Нейраминидазная активность штамма подавляется специфической сывороткой к вирусу гриппа птиц (ВГП) подтипа H5N2 («IZSVe», Италия).

Биотехнологические свойства

Инактивированный вирус индуцирует антитела, выявляемые методами реакции торможения гемагглютинирующей активности (РТГА). Так, через 14 суток после однократной иммунизации цыплят инактивированной вакциной из штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц в прививном объеме 0,5 см³/гол средний титр антител по группе к НА, обеспечивающим реакцию торможения гемагглютинации, составил 3,8 log₂ (таблица 5).

Гено- и хемотаксономическая характеристики

Штамм «A/chicken/Chelyabinsky314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц типа А подтипа Н9 является РНК-содержащим вирусом с молекулярной массой 250×10⁶ Д.

Геном вируса гриппа представлен однонитевой РНК негативной полярности в виде 8 нитей (сегментов) в комплексе с белком нуклеопротеина (NP).

Вирионы вируса гриппа имеют наружную липопротеиновую оболочку, чаще сферической формы. Диаметр сферических форм около 100 нм. Вирусные частицы содержат РНК - 1%, белки - 70%, жиры - 20%, углеводы - до 8%.

Антигенная вариабельность и таксономическая классификация вируса основана на идентификации двух основных поверхностных белков -гемагглютинина и нейраминидазы.

Устойчивость к внешним факторам

Штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса ГП чувствителен к детергентам, формальдегиду, бета-пропиолактону, производным азиридина, быстро инактивируется при прогревании (56°С), ультрафиолетовом облучении и при рН ниже 5,0.

Дополнительные признаки и свойства

Иммуногенная активность - иммуногенен в составе инактивированной вакцины.

Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает. Иммунизация цыплят дозой, в два раза превышающей прививную, не вызывает видимых клинических изменений в общем состоянии птицы, а также локальных поражений ткани в месте введения.

Патогенные свойства

Вирулентность - низкая (не вызывает гибель зараженной птицы в дозе 10^7,0 ЭЛД₅₀).

Контагиозность - контагиозен. Неиммунные цыплята заражаются при совместном содержании с зараженными.

Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.

Пример 1.

Определение подтиповой антигенной характеристики штамма проводили с помощью перекрестной реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и реакции ингибиции нейраминидазной активности (РИНА) с референтными гипериммунными сыворотками к антителам 16 Н-типов вируса гриппа птиц и с референтными сыворотками против гриппа птиц подтипов N1-N2 по нейраминидазе. Образцы вирусной суспензии исследовали предварительно в реакции гемагглютинации (РГА) для определения гемагглютинирующей активности вируса. Активность штамма вируса гриппа птиц «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» в РГА составила 8 log₂. В качестве отрицательного контроля использовали нормальную сыворотку крови кур производства ФГБУ «ВНИИЗЖ». Результаты представлены в таблице 1 и таблице 2.

В РТГА гемагглютинирующая активность испытуемого образца подавлялась специфической сывороткой к вирусу гриппа птиц подтипа H9N2 («IZSVe», Италия), что подтверждает принадлежность образца штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц к подтипу Н9. Титр сыворотки составил 6 log₂.

В РИНА нейраминидазная активность испытуемого образца подавлялась специфической сывороткой к вирусу гриппа птиц подтипа H5N2 («IZSVe», Италия).

Согласно результатам серологических исследований штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» был отнесен к вирусу гриппа птиц подтипа H9N2.

Также для подтиповой принадлежности штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» проводили молекулярно-биологические исследования экстраэмбриональной жидкости (ЭЭЖ), полученной от зараженных данным штаммом свободных от специфической патогенной микрофлоры куриных эмбрионов (СПФ-КЭ). Для этого выделяли общую РНК, которую использовали для постановки обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР). Первичную индикацию гена М проводили методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени (ОТ-ПЦР-РВ), используя праймеры M25F, M124R и флуоресцентно-меченный олигонуклеотидный зонд М64. С помощью классической ОТ-ПЦР амплифицировали фрагмент гена НА. Методом секвенирования была определена нуклеотидная последовательность фрагмента (360 н. о.) гена НА штамма вируса гриппа птиц «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» и соответствующая ей аминокислотная последовательность (119 а. о.). Было установлено, что по фрагменту гена НА к штамму вируса гриппа птиц «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» наиболее близкими оказались последовательности вирусов гриппа А птиц подтипа Н9, выделенные ранее на территории стран Ближнего Востока (98-99% совпадений).

Таким образом, на основании серологических и молекулярно-биологических исследований установлена принадлежность штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» к семейству Orthomyxoviridae, роду Alphainfluenzavirus, виду Influenza A virus, типу А, подтипу H9N2.

Пример 2.

Для использования штаммов вируса в качестве контрольных штаммов при заражении в целях контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин, а также для использования в качестве диагностического и производственного необходимо получить штамм вируса с высокой инфекционной активностью. Для определения инфекционной активности штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц из вирусного материала готовили ряд десятикратных последовательных разведений (от 10^-1 до 10^-10). Каждое разведение вируса инокулировали в аллантоисную полость четырем 11-суточным СПФ-куриным эмбрионам (КЭ) в объеме 0,2 см³. Четырем эмбрионам контрольной группы вводили ФБР тем же способом в объеме 0,2 см³. Специфичность гибели подтверждали в реакции гемагглютинирующей активности (РГА) исследованием экстраэмбриональной жидкости (ЭЭЖ) от каждого зараженного эмбриона. Титр вируса в образце определяли по методу Кербера и выражали в единицах ЭИД₅₀/см³ (таблица 3).

Таким образом, инфекционная (in vivo) активность штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц при 10-кратном титровании в СПФ-КЭ составила 8,5 lg ЭИД₅₀/см³.

Пример 3.

Для использования штамма для контроля антигенной и иммуногенной активности, а так же для приготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа птиц подтипа Н9 необходимо получить штамм, свободный от контаминации чужеродными вирусами, бактериями и грибами. Подтверждение отсутствия контаминации бактериальной и грибной микрофлорой проводили в соответствии с ГОСТ 28085 «Средства лекарственные биологические для ветеринарного применения. Метод бактериологического контроля стерильности». Отсутствие контаминации микоплазмами проводили в соответствии с требованиями ГФ XIV, том 1, с. 1201-1222.

В результате исследований установлено, что штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц не контаминирован бактериями, грибами и микоплазмами. В результате испытаний с применением методов полимеразной цепной реакции (ПЦР) и полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) было установлено, что штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц не контаминирован вирусами ньюкаслской болезни (НБ), инфекционного бронхита кур (ИБК), инфекционного ларинготрахеита птиц (ИЛТ), инфекционной бурсальной болезни (ИББ), реовирусом птиц и содержит в своем составе только геном вируса гриппа птиц типа А подтипа H9N2.

Пример 4.

Патогенные свойства штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц изучали на цыплятах 30-суточного возраста. В опыте использовали птицу яичного кросса. Штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц вводили цыплятам внутримышечно в объеме 0,5 см³ с инфекционной активностью 106 ЭИД50/см³. В результате у цыплят наблюдали характерные клинические признаки заболевания (угнетенное состояние, взъерошенность оперения, отказ от корма и т.д.), гибели зараженной птицы не было отмечено.

Таким образом, штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц является низковирулентным.

Пример 5.

Для получения иммунных сывороток крови к штамму «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» приготовили вакцину, содержащую в качестве основного компонента данный штамм (предлагаемое изобретение). Для изготовления вакцины использовали адъювант Montanide ISA 70 (SEPPIC, Франция). Для приготовления антигена использовали экстраэмбриональную жидкость СПФ-КЭ зараженных штаммом «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» с инфекционной активностью 8,5 ЭИД₅₀/см³, при этом гемагглютинирующая активность составляла значение 6 log₂. Для инактивации инфекционных свойств вируса гриппа птиц использовали бета-пропиолактон (БПЛ). Для этого из исходного раствора БПЛ готовили 10%-ный рабочий раствор на стерильной деминерализованной воде. В сосуд с вируссодержащей жидкостью вносили рабочий раствор БПЛ до конечной концентрации 0,05%. Сосуд с содержимым инкубировали при температуре (18-26)°С в течение 24 ч при постоянном перемешивании на шейкере. После окончания процесса инактивации вирусный материал помещали в холодильник (4-8)°С, предварительно из сосуда отбирали пробу материала в объеме 5,0 см³ для проведения исследований по определению полноты инактивации вируса и стерильности материала. После подтверждения полноты инактивации готовили серию лабораторного образца вакцины. Для этого смешивали 30 частей антигена с заданными характеристиками и 70 частей адъюванта. Содержание антигенного материала и масляного адъюванта в прививной дозе вакцины в соотношении 30:70 является оптимальным, так как обеспечивает толерантную презентацию антигена в организме иммунизированной птицы. Эмульсию получали на гомогенизаторе при 3000 об/мин. Иммунизацию 30-суточного возраста цыплят проводили внутримышечно в прививном объеме 0,5 см³ на голову. На 14 и 42 сутки после вакцинации у иммунизированных птиц отбирали кровь и исследовали на наличие специфических антител к вирусу гриппа птиц типа А подтипа Н9 в ИФА и РТГА (таблица 4, 5).

Результаты исследований свидетельствуют о выраженной антигенной активности лабораторного образца вакцины на основе штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц рода Alphainfluenzavirus вида Influenza A virus подтипа Н9, т.к. установлено наличие специфических антител к вирусу гриппа подтипа H9N2 в ИФА и антигемагглютининов к вирусу гриппа птиц подтипа H9N2 в РТГА.

Таким образом, заявляемый штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц рода Alphainfluenzavirus вида Influenza A virus подтипа Н9 необходим для создания диагностических препаратов, используемых при типировании новых вирусных вариантов, оценки активности противовирусных препаратов и эффективности вакцин, а так же для создания биопрепаратов для специфической профилактики гриппа птиц типа А подтипа Н9.

Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента РФ на изобретение «Штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц рода Alphainfluenzavirus вида Influenza A virus подтипа H9 для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против гриппа птиц и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа птиц типа А подтипа Н9»:

1. Анализ генетических свойств изолята вируса гриппа A/Chicken/Chelyabinsk/30/2019 H9N2, выделенного на территории Челябинской области / Н.Г. Зиняков, О. С.Осипова, П. Б. Акшалова и др. // Ветеринария сегодня. - 2019. - №4 (31). - С.49-53.

2. Низкопатогенный грипп птиц, вызванный вирусом подтипа Н9. Обзор литературы. / Варкентин А.В., Волков М.С., Ирза В.Н. - В.: Труды федерального центра охраны здоровья животных, 2014, Т.12 (1). С. 41-53.

3. Ортомиксовирусы. Руководство по вирусологии. / Каверин Н.В., Львов Д.К., Щелканов М.Ю. - М.: МИА, 2013, С.307 - 313.

4. О распространении вируса низкопатогенного гриппа A/H9N2 в мире и на территории Российской Федерации. Проблемы искоренения болезни / М.С. Волков, А.В. Варкентин, В.Н. Ирза // ВетС.- 2019. - №3. - С.51-55.

5. Патент РФ №2323740, МПК А61К 39/145, C12N 7/00, 2006 г.

6. Патент РФ №2647566, МПК А61К 39/145, C12N 7/00, 2017 г.

7. Патент РФ №2736788, МПК C12N 7/00, 2020 г.

8. Патент РФ №2736786, МПК C12N 7/00, 2020 г.

9. Antigenic and genetic characteristics of zoonotic influenza A viruses and development of candidate vaccine viruses for pandemic preparedness. -URL:https://www.who.int/influenza/vaccines/virus/202103_zoonotic_vaccinevirus update.pdf (дата обращения 11.03.21).

10. Antigenic Cartography of H9 Avian Influenza Virus and Its Application to Vaccine Selection/ Y.Wang, I. Davidson, R. Fouchier, E. Spackman - Avian Diseases, 2015. Vol.60(ls). -P.218-225.

11. A Global Perspective on H9N2 Avian Influenza Virus / T. P. Peacock, J. James, J. E. Sealy and M. Iqbal. - Viruses, 2019. Vol.11.- P. 620-628.

12. Characterization of avian H9N2 influenza viruses from United Arab Emirates 2000 to 2003/ Aamir U.B., Wernery U., Ilyushina, N., Webster R.G.// Virology.- 2007.- Vol.361.- P. 45-55.

13. Epidemiological survey and genetic evolution of H9 subtype influenza viruses in Shanghai, China, from 2006 to 2010 / J.P. Zhou, F.F. Ge, J. Liu [et al.] // Arch. Virology. - 2012. - Vol.157. - P. 1193-1198.

14. Genetic analysis of H9N2 avian influenza viruses circulated in broiler flocks: Acase study in Iraq in 2014-2015/ Kraidi Q.A., Madadgar O., Ghalyanchi Langeroudi A., Karimi V. // Virus Genes. -2017.-Vol.53- P. 205-214.

15. Genetic comparison of H9N2 AI viruses isolated in Jordan in 2003/ Monne I., Cattoli G., Mazzacan E. [et al] //Avian Dis.- 2007.- Vol.51.-P. 451-454.

16. Infection with avian influenza viruses / OIE. Terrestrial Animal Health Code, 2019. Chapter 10.4. - URL: https://www.oie.int/standard-setting/terrestrial-code/access-online (дата обращения 11.03.21).

17. Summary of avian influenza Activity in Europe, Asia, and Africa, 2006-2009/ I.H. Brown // Avian Dis. - 2010. - Vol.54. - P. 187-193.

Штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц семейства Orthomyxoviridae, род Alphainfluenzavirus вида Influenza A virus подтипа Н9, депонированный в Коллекцию штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером: №333 - деп/20-121-ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ» для изготовления биопрепаратов для специфической профилактики гриппа птиц типа А подтипа Н9.