Комбинированная пре- и пробиотическая композиция

Группа изобретений относится к области пищевой промышленности и фармакологии и предназначено для получения медикамента, содержащего ферментированную пробиотическую композицию. Представлено применение субстанции для получения медикамента для лечения кишечного заболевания, где субстанция содержит ферментированную композицию, содержащую, по меньшей мере, один ферментированный растительный материал, ферментированные морские водоросли или водоросли и один или более штаммов молочнокислых бактерий, где по меньшей мере один ферментированный растительный материал представляет собой один или более Brassica spp. и ферментированные морские водоросли или водоросли представляют собой бурые водоросли, а один или более штаммов молочнокислых бактерий представляют собой пробиотические бактерии. Кроме того, описано применение субстанции в качестве снижающего уровень холестерина и уровень триглицеридов в крови средства, а также применение указанной субстанции в качестве средства, уменьшающего повреждение печени. Технический результат: предоставление эффективной субстанции для получения медикамента для лечения кишечного заболевания и уменьшения повреждений печени. 5 н. и 8 з.п. ф-лы, 4 ил., 1 табл., 11 пр.

 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к ферментированному растительному материалу, имеющему высокое содержание штаммов молочнокислых бактерий и высокое содержание глюкозинолатов. В частности, настоящее изобретение относится к новому способу получения новой ферментированной композиции на основе растительного материала, имеющей высокое содержание штаммов молочнокислых бактерий и высокое содержание глюкозинолатов, при этом указанная ферментированная композиция обладает питательными и/или фармакологическими свойствами.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В древние времена фитотерапия была способом, часто единственным способом, борьбы с заболеваниями и инфекциями у человека и животных, и было показано, что растения содержат множество компонентов, обладающих полезными питательными и фармакологическими свойствами. Несмотря на полученные в течение долгого времени знания и попытки выделения активных ингредиентов из растений, исследователи редко добивались успеха из-за сложности взаимодействий между отдельными компонентами растений. Примерами сильнодействующих растительных экстрактов, которые хорошо интегрированы в современные методы лечения, являются такие лекарственные средства, как морфин для избавления от сильной боли, дигиталис для лечения болезней сердца, таксол для лечения рака.

Одними из представляющих интерес компонентов, обладающих полезными питательными и фармакологическими свойствами, являются глюкозинолаты. Считается, что побочные продукты, полученные из глюкозинолатов, оказывают защитное действие против некоторых форм рака.

Глюкозинолаты являются вторичными метаболитами растений, которые естественным образом присутствуют, например, в растении Brassicaceae. На основании боковых цепей исходных аминокислот глюкозинолаты подразделяют на алифатические, ароматические и индольные глюкозинолаты, которые образуются из метионина, фенилаланина и триптофана, соответственно. Глюкозинолаты являются естественными компонентами, например, многих растений с острым вкусом, таких как горчица, капуста и хрен. Причиной острого вкуса этих растений являются горчичные масла, образующиеся из глюкозинолатов при пережевывании, разрезании или ином повреждении растительного материала. Эти природные химические вещества, скорее всего, участвуют в системе защиты растений от вредителей и заболеваний, однако в небольшом количестве они также употребляются с пищей людьми и, как считают, вносят вклад в оздоровительные свойства крестоцветных овощей.

Хотя полезные питательные и фармакологические свойства побочных продуктов, получаемых из глюкозинолатов, представляют определенный интерес, в промышленности также имеет место тенденция и попытки уменьшения содержания, или даже избавления от, глюкозинолатов в пищевых и кормовых продуктах, поскольку глюкозинолаты, как считалось ранее, оказывают токсическое действие на человека и животных.

Европейская ассоциация производителей масел (FEDIOL) в 2010 г. издала рекомендации для своих членов, согласно которым поставщики рапса должны обеспечивать и гарантировать, что продукты из рапса, а также используемые сертифицированные семена рапса, имеют уровень глюкозинолатов ниже 18 мкмоль/г. Это является более низким уровнем относительно прежнего уровня 25 мкмоль/г.

Кроме того, исследовательской группой ранее был описан (в WO 2014/131422) способ получения соединения, полезного против инфекций Salmonella, E. coli и Lawsonia у кур. Основная идея заключалась в использовании ферментированного кормового продукта, который был ферментирован до такой степени, что в ферментированном корме практически не оставалось глюкозинолатов. Полученный кормовой продукт был практически свободен от глюкозинолатов, но богат побочными продуктами глюкозинолатов, которые, как было показано, эффективны против инфекций Salmonella, E. coli и Lawsonia у кур.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили ферментированный растительный материал, имеющий высокое содержание штаммов молочнокислых бактерий и высокое содержание глюкозинолатов, который обладает питательными и/или фармакологическими свойствами.

Авторы настоящего изобретения разработали новый способ получения новой ферментированной композиции, имеющей высокое содержание штаммов молочнокислых бактерий и высокое содержание глюкозинолатов, и в то же время обладающей питательными и/или фармакологическими свойствами.

Таким образом, один аспект изобретения относится к ферментированной композиции, содержащей по меньшей мере один растительный материал, один или более штаммов молочнокислых бактерий и имеющий содержание глюкозинолатов по меньшей мере 2 мкмоль/г, в расчете на сухое вещество.

Следующий аспект настоящего изобретения относится к ферментированной композиции, содержащей по меньшей мере один растительный материал, один или более штаммов молочнокислых бактерий и по меньшей мере 10% (по массе) глюкозинолатов, естественным образом присутствующих в по меньшей мере одном растительном материале.

Другой аспект настоящего изобретения относится к применению ферментированной композиции по настоящему изобретению в качестве ингредиента.

Следующий аспект настоящего изобретения относится к применению ферментированной композиции по настоящему изобретению в пищевом продукте, в пищевой добавке, в фитотерапевтическом препарате, в лекарственном средстве природного происхождения, в медицинском препарате и/или в качестве вспомогательного препарата в сочетании с одним или более другими лекарственными средствами.

Следующий аспект настоящего изобретения относится к субстанции для использования в качестве медикамента, содержащей ферментированную композицию по настоящему изобретению.

Другой аспект настоящего изобретения относится к субстанции для использования в лечении, ослаблении, стабилизации или профилактике кишечных заболеваний у млекопитающего (такого как человек или животное), которая содержит ферментированную композицию по настоящему изобретению.

Следующий аспект настоящего изобретения относится к субстанции для использования в лечении, ослаблении, стабилизации или профилактике аутовоспалительных заболеваний (таких как спондилоартропатия или спондилоартрит, в частности, псориатическая артропатия, псориатический артрит), склероза (такого как системная склеродермия), аллергии или непереносимости (такой как аллергия/непереносимость глютена и/или аллергия/непереносимость лактозы), запора, активации кишечной микрофлоры, усталости (такой как синдром хронической усталости), воспаления, диареи, стимуляции кишечной микрофлоры ребенка до и после рождения, воспалительных заболеваний кишечника (таких как болезнь Крона или язвенный колит у млекопитающего), бактериальных инфекций (таких как инфекции, вызываемые грамположительными бактериями, в частности, Staphylococcus, предпочтительно Staphylococcus aureus; и/или Clostridium, предпочтительно Clostridium perfringens или Clostridium difficile), кожных заболеваний (таких как ладонно-подошвенный пустулез, акне, розацеа и/или ринофима) и/или боли в спине у млекопитающего (такого как человек или животное), при этом субстанция содержит ферментированную композицию по настоящему изобретению.

Дополнительный аспект настоящего изобретения относится к ферментированной композиции или субстанции для использования в качестве снижающего уровень холестерина в крови средства, снижающего уровень триглицеридов в крови средства, уменьшающего повреждение печени и/или уменьшающего гипертензию средства, при этом субстанция содержит ферментированную композицию по настоящему изобретению.

Другой аспект настоящего изобретения относится к ферментированной композиции, содержащей по меньшей мере один растительный материал, выбранный из группы, состоящей из разновидностей рапса, крестоцветных овощей, разновидностей горчицы и/или морских водорослей, предпочтительно разновидностей рапса и/или морских водорослей; и одну или более молочнокислых бактерий, при этом композиция содержит по меньшей мере 2 мг HDMPPA (3-(4'-гидроксил-3',5'-диметоксифенил)пропионовой кислоты) на 100 г ферментированной композиции, в расчете на сухое вещество, например, по меньшей мере 3 мг/100 г, например, по меньшей мере 4 мг/100 г, например, по меньшей мере 5 мг/100 г, например, по меньшей мере 7 мг/100 г, например, по меньшей мере 10 мг/100 г, например, по меньшей мере 15 мг/100 г, например, по меньшей мере 20 мг/100 г, например, по меньшей мере 30 мг/100 г, например, по меньшей мере 40 мг/100 г, например, по меньшей мере 50 мг/100 г, например, по меньшей мере 60 мг/100 г, например, по меньшей мере 70 мг/100 г, например, по меньшей мере 80 мг/100 г.

Следующий аспект настоящего изобретения относится к ферментированной композиции, содержащей по меньшей мере один растительный материал и одну или более молочнокислых бактерий, при этом композиция содержит по меньшей мере 2 мг HDMPPA (3-(4'-гидроксил-3',5'-диметоксифенил)пропионовой кислоты) на 100 г ферментированной композиции, в расчете на сухое вещество, например, по меньшей мере 3 мг/100 г, например, по меньшей мере 4 мг/100 г, например, по меньшей мере 5 мг/100 г, например, по меньшей мере 7 мг/100 г, например, по меньшей мере 10 мг/100 г, например, по меньшей мере 15 мг/100 г, например, по меньшей мере 20 мг/100 г, например, по меньшей мере 30 мг/100 г, например, по меньшей мере 40 мг/100 г, например, по меньшей мере 50 мг/100 г, например, по меньшей мере 60 мг/100 г, например, по меньшей мере 70 мг/100 г, например, по меньшей мере 80 мг/100 г, и при этом одну или более молочнокислых бактерий, присутствующих в композиции, выбирают из группы, состоящей из Pediococcus pentosaceus, Pendiococcus acidilactici, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus, Enterococcus faecium и/или их сочетания.

Другой аспект настоящего изобретения относится к получению комбинированного препарата, содержащего:

(a) ферментированную композицию по настоящему изобретению или субстанцию по настоящему изобретению; и

(b) одно или более лекарственных средств.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способу получения ферментированной композиции по настоящему изобретению, включающему этапы:

(i) получения растительного материала;

(ii) получения одного или более штаммов молочнокислых бактерий;

(iii) проведения ферментации растительного материала путем объединения растительного материала, полученного на этапе a), с одним или более штаммами молочнокислых бактерий, полученными на этапе b),

(iv) продолжения ферментации до получения ферментированной композиции, имеющей значение pH ниже 5,0 и имеющей:

(a) общее содержание глюкозинолатов по меньшей мере 2 мкмоль/г или более, в расчете на сухое вещество, и/или

(b) по меньшей мере 10% (по массе) глюкозинолатов, естественным образом присутствующих в по меньшей мере одном растительном материале.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

На Фигуре 1 показан эффект, определяемый по уровню CRP, ферментированной композиции по настоящему изобретению на спондилоартрит/псориатический артрит у пациента. Эффект, продемонстрированный на фигуре 1, был обнаружен у 58-летнего пациента-мужчины, страдающего спондилоартритом/псориатическим артритом, связанным с антигеном HLA-B27. Лечение модифицирующими течение заболевания противоревматическими лекарственными средствами (DMARD), включающими анти-TNF-альфа антитело и метотрексат, в полной дозе в течение нескольких лет. Несмотря на комбинированную терапию sDMARD и bDMARD, не удавалось нормализовать уровень CRP до использования вспомогательного средства в форме ферментированной композиции, описанной в настоящем документе. Кружки (•) обозначают уровень CRP в образце, полученном от пациента. Квадраты () обозначают нормализованный уровень CRP у здорового человека. Лечение с использованием ферментированной композиции по настоящему изобретению было начато в точке 1 на графике и через 17 дней ежедневного введения ферментированной композиции уровень CRP был нормализован, в точке 2.

На Фигуре 2 приведена хроматограмма количества HDMPPA (3-(4'-гидроксил-3',5'-диметоксифенил)пропионовой кислоты) в ферментированных семенах рапса/морских водорослях (1), ферментированных семенах рапса (2) и не ферментированных семенах рапса (3). Количество определяли методом жидкостной хроматографии сверхвысокого давления с квадрупольно-времяпролетной масс-спектроскопией (UPLC-QTOF-MS), анализируя экстракт в 80% метаноле. Из данной хроматограммы видно, что ферментированные семена рапса/морские водоросли (1) содержат значительно больше HDMPPA в сравнении с ферментированными семенами рапса (2), которые содержат значительно больше HDMPPA в сравнении с не ферментированными семенами рапса (2).

На Фигуре 3 приведена хроматограмма соединения, присутствующего в значительных количествах в ферментированных семенах рапса/морских водорослях (1), при этом в ферментированных семенах рапса (2), не ферментированных морских водорослях (3) и не ферментированных семенах рапса (4) (при определении в анализе методом жидкостной хроматографии сверхвысокого давления с квадрупольно-времяпролетной масс-спектроскопией (UPLC-QTOF-MS) экстракта в 80% метаноле) соединение отсутствует или присутствует в незначительных количествах. В сочетании с дополнительным анализом (методом жидкостной хроматографии сверхвысокого давления с квадрупольно-времяпролетной масс-спектроскопией (UPLC-QTOF-MS)) молекулярных масс MS1 и MS2 ферментированных семян рапса/морских водорослей (1) было установлено, что указанное соединение, обнаруженное в ферментированных семенах рапса/морских водорослях (1), в сравнении с ферментированными семенами рапса (2), не ферментированными морскими водорослями (3) и не ферментированными семенами рапса (4), представляло собой молекулу жирной кислоты, такую как молекула модифицированной жирной кислоты.

На Фигуре 4 показан эффект ферментированной композиции по настоящему изобретению на уровень холестерина и повреждение печени. Тестировали две разные породы свиней 1) «польскую большую белую» и 2) «польскую ландрас». Тесты проводили на беременных и лактирующих свиноматках. K1 относится к свиноматкам породы «польская большая белая», получающим обычный корм без ферментированной композиции; K2 относится к свиноматкам породы «польская ландрас», получающим обычный корм без ферментированной композиции; K1 относится к свиноматкам породы «польская большая белая», получающим обычный корм без ферментированной композиции и K2 относится к свиноматкам породы «польская ландрас», получающим обычный корм без ферментированной композиции. Темные столбики и стрелки показывают концентрацию общего холестерина; у беременных свиноматок породы «польская большая белая», получающих композицию, полученную в примере 1, имело место снижение уровня общего холестерина (A) на 15%; при этом у беременных свиноматок породы «польская ландрас» имело место снижение уровня общего холестерина (B) на 10% и у лактирующих свиноматок породы «польская большая белая» имело место снижение уровня общего холестерина (C) на 25%. Горизонтально заштрихованные столбики и стрелки показывают уровень ЛНП-холестерина. У беременных свиноматок породы «польская большая белая» имело место снижение уровня ЛНП-холестерина (G) на 58%, у беременных свиноматок породы «польская ландрас» имело место снижение уровня ЛНП-холестерина (H) только на 36%, у лактирующих свиноматок породы «польская большая белая» имело место снижение уровня ЛНП-холестерина (J) на 72% и у лактирующих свиноматок породы «польская ландрас» имело место снижение уровня ЛНП-холестерина (K) на 49%. Пестрые столбики и стрелки показывают концентрацию триглицеридов. У беременных свиноматок породы «польская ландрас» имело место снижение концентрации триглицеридов (D) на 21%, у лактирующих свиноматок породы «польская большая белая» имело место снижение концентрации триглицеридов (E) на 28% и у лактирующих свиноматок породы «польская ландрас» имело место снижение концентрации триглицеридов (F) на 38%.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

На протяжении многих лет интерес к пробиотикам и пребиотикам продолжал расти, количество вариантов их применения непрерывно возрастало, а также возрастало количество известных присущих им питательных и/или фармакологических свойств. В этом отношении, авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что комбинированная ферментированная композиция, содержащая пробиотики и пребиотики, обладает удивительными и улучшенными питательными и фармакологическими свойствами.

Пребиотики хорошо известны квалифицированным специалистам и представляют собой химические вещества, вызывающие рост или активность микроорганизмов (например, бактерий и грибков), которые, при употреблении в пищу человеком или животным, благоприятно влияют на здоровье хозяина. Наиболее известным примером использования пребиотиков является их использование в желудочно-кишечном тракте, где пребиотики могут приводить к изменению состава микроорганизмов в кишечной микрофлоре.

Пробиотики также хорошо известны квалифицированным специалистам и представляют собой живые микроорганизмы, которые при введении человеку или животному, как известно, способствуют укреплению здоровья.

Таким образом, один аспект настоящего изобретения относится к способу получения ферментированной композиции по настоящему изобретению, в частности, ферментированной композиции, содержащей пребиотик и пробиотик, включающему этапы:

(i) получения растительного материала;

(ii) получения одного или более штаммов молочнокислых бактерий;

(iii) проведения ферментации растительного материала путем объединения растительного материала, полученного на этапе a), с одним или более штаммами молочнокислых бактерий, полученными на этапе b),

(iv) продолжения ферментации до получения ферментированной композиции, имеющей значение pH ниже 5,0 и имеющей:

(a) общее содержание глюкозинолатов по меньшей мере 2 мкмоль/г или более, в расчете на сухое вещество, и/или

(b) по меньшей мере 10% (по массе) глюкозинолатов, естественным образом присутствующих в по меньшей мере одном растительном материале.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция содержит один или более пробиотических бактериальных штаммов. Предпочтительно, по настоящему изобретению можно использовать разные штаммы пробиотических бактерий.

Если растительный материал представляет собой морские водоросли или водоросли, способ получения ферментированной композиции может быть таким, как описано в настоящем документе или как описано в WO 2014/206419. Описание способа получения ферментированных морских водорослей или водорослей, приведенное в WO 2014/206419, включено в настоящий документ посредством ссылки.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения одна или более пробиотических бактерий могут представлять собой производящие молочную кислоту бактерии, молочнокислые бактерии. Из-за активности молочнокислых бактерий, их часто используют в ферментации пищевых продуктов, так как подкисление среды ингибирует рост микроорганизмов, вызывающих порчу продуктов. Белковые бактериоцины, токсины, продуцируемые бактериями для ингибирования роста аналогичного или близкородственного бактериального штамма(ов), продуцируются некоторыми штаммами молочнокислых бактерий и создают дополнительный барьер для вызывающих порчу продуктов и патогенных микроорганизмов.

Кроме того, молочнокислые бактерии могут продуцировать молочную кислоту и другие продукты метаболизма, которые вносят вклад в органолептический, текстурный, питательный и фармакологический профиль ферментированной композиции.

Промышленное значение молочнокислых бактерий подтверждается тем, что они имеют статус «обычно считающихся безопасными» (GRAS) из-за их повсеместного присутствия в пищевых продуктах и их вклада в оздоровление микрофлоры слизистых оболочек человека. Родами, относящимися к молочнокислым бактериям, которые могут быть использованы по настоящему изобретению, являются Lactobacillus, Leuconostoc, Pediococcus, Lactococcus, а также Streptococcus, Aerococcus, Carnobacterium, Enterococcus, Oenococcus, Teragenococcus, Vagococcus и Weisella; эти роды относятся к порядку Lactobacillales.

В настоящем изобретении один или более штаммов молочнокислых бактерий, используемых на этапе (iii) для ферментации, могут быть выбраны из молочнокислых бактерий, выбранных из группы, состоящей из Lactobacillus, Leuconostoc, Pediococcus, Lactococcus, а также Streptococcus, Aerococcus, Carnobacterium, Enterococcus, Oenococcus, Teragenococcus, Vagococcus и Weisella. Предпочтительно, один или более штаммов молочнокислых бактерий, используемых на этапе (iii) для ферментации, могут быть выбраны из молочнокислых бактерий, выбранных из группы, состоящей из молочнокислых бактерий рода Enterococcus, Lactobacillus, Pediococcus или Lactococcus, или их сочетаний.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения один или более штаммов молочнокислых бактерий, используемых на этапе (iii) для ферментации, могут быть выбраны из группы, состоящей из одного или более из Enterococcus spp., Lactobacillus spp., Lactococcus spp., Pediococcus spp., а также их сочетаний. Предпочтительно, один или более штаммов молочнокислых бактерий, используемых на этапе (iii) для ферментации, могут быть выбраны из группы, состоящей из одного или более из Enterococcus faecium, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus plantarum, Pediococcus acidililactili, Pediococcus pentosaceus, Lactococcus lactis, Lactococcus cremoris, Lactococcus diacetylactis, Leuconostoc cremoris, а также их сочетаний.

В следующем варианте осуществления один или более штаммов молочнокислых бактерий, используемых на этапе (iii) для ферментации, включают Lactobacillus plantarum, Enterococcus faecium и/или Lactobacillus rhamnosus.

В другом варианте осуществления один или более штаммов молочнокислых бактерий, используемых на этапе (iii) для ферментации, включают один или более из Enterococcus faecium MCIMB 30122, Lactobacillus rhamnosus NCIMB 30121, Pediococcus pentosaceus HTS (LMG P-22549), Pendiococcus acidilactici NCIMB 30086 и/или Lactobacillus plantarum LSI (NCIMB 30083) или их сочетание.

Для повышения продуктивности и эффективности можно использовать два или более штаммов молочнокислых бактерий, например, три или более штаммов молочнокислых бактерий, например, четыре или более штаммов молочнокислых бактерий, например, 7 или более штаммов молочнокислых бактерий, например, 10 или более штаммов молочнокислых бактерий, например, 15 или более штаммов молочнокислых бактерий, например, 20 или более штаммов молочнокислых бактерий, например, 25 или более штаммов молочнокислых бактерий, например, 30 или более штаммов молочнокислых бактерий, например, 35 или более штаммов молочнокислых бактерий, например, 40 или более штаммов молочнокислых бактерий.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения может быть получена заквасочная культура, или инокулят, содержащая один или более штаммов молочнокислых бактерий, описанных в настоящем документе.

Термин «инокулят» означает исходный материал, например, один или более штаммов молочнокислых бактерий, используемый для инокуляции новой культуры. Инокулят может быть использован для запуска интересующего процесса.

«Инокуляция» означает внесение микроорганизма(ов) (например, одного или более штаммов молочнокислых бактерий), который будет расти при внесении в культуральную среду, например, в ферментационный чан, содержащий среду, которую предстоит ферментировать, например, растительный материал.

Может быть получен первичный инокулят, что означает получение исходного инокулята в серии повторяющихся аналогичных, практически идентичных процессов инокуляции, например, одного или более повторений процесса ферментации. Аликвоту продукта процесса ферментации можно использовать для инокуляции в новом процессе ферментации. Таким образом, инокулят может представлять собой ферментированный кормовой продукт, содержащий жизнеспособные продуцирующие молочную кислоту бактерии в достаточном количестве для запуска процесса молочнокислой ферментации другого кормового продукта, или аналогичного кормового продукта, который предстоит ферментировать, например, растительного материала.

Инокулят по настоящему изобретению может находиться в жидкой форме, сухой форме или практически сухой форме. Содержание влаги в инокуляте может быть скорректировано для оптимизации процесса ферментации. В одном варианте осуществления инокулят может быть получен в виде практически чистых жизнеспособных бактерий (например, бактерий в лиофилизированной форме) или бактерий, суспендированных в подходящей среде перед применением (например, в воде, буфере или ростовой среде).

Пропорция инокулятов, добавляемых к растительному материалу, может варьироваться. В случае, если считается, что нагрузка нежелательных микроорганизмов значительна в растительном материале или ферментационной системе, пропорция инокулята в ферментационной смеси (инокулят+растительный материал+дополнительная вода) может быть увеличена для того, чтобы ферментация происходила за счет микроорганизмов (например, молочнокислых бактерий) инокулятов. Таким образом, может быть получен инокулят с концентрацией молочнокислых бактерий в инокуляте, достаточной для обеспечения численного превосходства над другими (не молочнокислыми) бактериями, дрожжами или плесенью, присутствующими в растительном материале.

Соответственно, в одном варианте осуществления изобретения пропорция инокулятов в сочетании растительного материала с одним или более молочнокислыми материалами, как описано в пункте (iii), находится в диапазоне 0,1-99,9 об%; например, 1-99 об%; например, 5-70 об%; например, 10-50 об%; например, 25-35 об%; например, 0,1-10 об%; например, 0,5-5 об%; например, 1-2,5 об%; или примерно 1-2 об%.

Процесс ферментации по настоящему изобретению, предпочтительно, может быть по существу гомоферментативным процессом. «По существу гомоферментативный» означает, что преобладающая бактериальная микрофлора, направляющая ферментацию, является гомоферментативной. Используемый в настоящем документе термин «по существу гомоферментативный» относится к процессу ферментации, в котором 60% или более бактерий являются гомоферментативными, например, 70% или более бактерий являются гомоферментативными, например, 80% или более бактерий являются гомоферментативными, например, 85% или более бактерий являются гомоферментативными, например, 90% или более бактерий являются гомоферментативными, например, 95% или более бактерий являются гомоферментативными, например, 99% или более бактерий являются гомоферментативными.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментация представляет собой, по существу, гомоферментацию, такую как гомолактическая ферментация.

Используемый в настоящем документе термин «гомолактическая ферментация» указывает на то, что основным продуктом ферментации является молочная кислота, и уровни уксусной кислоты и этанола находятся либо ниже порога вкусового ощущения, либо на уровне или слегка выше порога вкусового ощущения. Предпочтительно, термин «по существу гомоферментативный» указывает на то, что соотношение концентраций (мМ/мМ) молочной кислоты и уксусной кислоты или молочной кислоты и этанола превышает 1:1, например, 2:1 или более, например, 10:1 или более, например, 20:1 или более, например, 50:1 или более, или, например, 100:1 или более.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения способ по настоящему изобретению представляет собой, по существу, гетероферментативную ферментацию.

Используемый в настоящем документе термин «по существу гетероферментативный» означает, что преобладающая бактериальная микрофлора, направляющая ферментацию, является гетероферментативной. Используемый в настоящем документе термин «по существу гетероферментативный» относится к процессу ферментации, в котором 60% или более бактерий являются гетероферментативными, например, 70% или более бактерий являются гетероферментативными, например, 80% или более бактерий являются гетероферментативными, например, 85% или более бактерий являются гетероферментативными, например, 90% или более бактерий являются гетероферментативными, например, 95% или более бактерий являются гетероферментативными, например, 99% или более бактерий являются гетероферментативными.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения гетероферментация по настоящему изобретению приводит к тому, что большая часть продуктов ферментации представляют собой уксусную кислоту и этанол, и отношение концентраций (мМ/мМ) уксусной кислоты и этанола к концентрации молочной кислоты превышает 1:1, например, 2:1 или более, например, 10:1 или более, например, 20:1 или более, например, 50:1 или более, или например, 100:1 или более.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция, полученная на этапе iv), имеет концентрацию уксусной кислоты и/или этанола по меньшей мере 50 мМ, например, по меньшей мере 100 мМ, например, 100-1000 мМ, например, 100-500 мМ, например, 100-300 мМ, например, 100-200 мМ, например, 150-500 мМ, например, 200-500 мМ, или, например, 300-500 мМ.

Ферментация по настоящему изобретению может продолжаться в течение 10 дней или менее, например, 9 дней или менее, например, 8 дней или менее, например, 7 дней или менее, например, 6 дней или менее, например, 5 дней или менее, например, 4 дней или менее, например, 3 дней или менее, например, 2 дней или менее, например, 36 часов или менее, например, 24 часов или менее.

Хотя ферментация должна занимать как можно меньше времени, авторы изобретения также обнаружили, что может потребоваться некоторое время ферментации для приобретения ферментированной композицией желательных питательных и/или фармакологических свойств. Таким образом, в одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментация должна продолжаться в течение более 8 часов, например, более 10 часов, например, более 12 часов, например, более 15 часов, например, более 17 часов, например, более 20 часов, например, более 24 часов, например, в диапазоне от 24 часов до 10 дней, например, в диапазоне от 20 часов до 8 дней, например, в диапазоне от 15 часов до 6 дней, например, в диапазоне от 12 часов до 4 дней, например, в диапазоне от 10 часов до 2 дней, например, в диапазоне от 8 часов до 36 часов, например, в диапазоне от 8 часов до 24 часов.

Контролирование температуры может быть одним из наилучших способов улучшения качества и свойств ферментированной композиции. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментацию проводят при температуре ниже 50°C, например, ниже 47°C, например, ниже 45°C, например, ниже 43°C, например, в диапазоне 15-45°C, например, 18-43°C, например, 25-40°C, например, 30-40°C, например, 15-20°C, или, например, 40-45°C.

Предпочтительно, процесс ферментации может включать использование градиента температуры, при этом указанный градиент температуры включает 3 стадии: начальная температура, повышение температуры и стабильная температура ферментации.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения начальная температура может находиться в диапазоне 18-30°C, например, в диапазоне 20-28°C, например, в диапазоне 22-26°C, например, в диапазоне 24-25°C.

Предпочтительно, повышение температуры в процессе ферментации по настоящему изобретению может быть медленным повышением температуры от начальной температуры до стабильной температуры ферментации. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения повышение температуры достигается без дополнительного подогрева. Используемый в настоящем документе термин «без дополнительного подогрева» означает повышение температуры ферментации, при котором тепло образуется за счет самой ферментации без использования электрических, механических или топливных источников тепла.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения стабильная температура ферментации может быть ниже 50°C, например, ниже 47°C, например, ниже 45°C, например, ниже 43°C, например, в диапазоне 20-45°C, например, в диапазоне 22-43°C, например, в диапазоне 25-40°C, например, в диапазоне 30-40°C, например, в диапазоне 40-45°C.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментация может представлять собой одностадийную ферментацию растительного материала.

Используемый в настоящем документе термин «одностадийная ферментация» означает процесс ферментации, в котором один и тот же вид растительного материала подвергают одним и тем же условиям ферментации, или практически одним и тем же условиям ферментации. Таким образом, термин «одностадийная ферментация» исключает вариант с отбором части растительного материала в процессе ферментации, дальнейшей ферментацией оставшегося растительного материала, с последующим смешиванием отобранной ранее части с дополнительно ферментированным материалом. Предпочтительно, термин «одностадийная ферментация» также подразумевает повышение температуры без дополнительного подогрева.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения получение ферментированной композиции не включает последующее добавление растительного материала и/или одного или более штаммов молочнокислых бактерий в ферментированную композицию.

Содержание влаги в растительном материале, который будет ферментирован, может быть другим важным параметром, который следует контролировать для осуществления контроля над процессом ферментации и полученной ферментированной композицией. Таким образом, в одном из вариантов осуществления настоящего изобретения содержание влаги в процессе ферментации может находиться в диапазоне 20-60% (по массе), например, в диапазоне 30-50% (по массе), например, предпочтительно, в диапазоне 35-45% (по массе).

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения ферментация может продолжаться до достижения ферментированной композицией значения pH ниже pH 6,5, например, ниже pH 6,0, например, ниже pH 5,5, например, ниже pH 5,0, например, в диапазоне pH 3,0-6,5, например, в диапазоне pH 3,0-6,0, например, в диапазоне pH 3,1-5,5, например, в диапазоне pH 5,0-3,2, например, в диапазоне 3,3-4,2, например, 3,4-4,0, например, 3,5-3,8, например, 3,7-4,2, например, 3,7-4,0, или, например, 3,8-4,2.

В другом варианте осуществления ферментированная композиция, полученная на этапе iv), имеет концентрацию молочной кислоты по меньшей мере 50 мМ, например, по меньшей мере 100 мМ, например, 100-1000 мМ, например, 100-500 мМ, например, 100-300 мМ, например, 100-200 мМ, например, 150-500 мМ, например, 200-500 мМ, или, например, 300-500 мМ.

Поскольку считается, что пробиотический эффект одного или более штаммов молочнокислых бактерий достигает своего пика через период времени от 6 часов до 10 дней, например, от 12 часов до 9 дней, например, от 18 часов до 8 дней, например, от 24 часов до 7 дней, например, 2-6 дней, например, через 3-5 дней, например, через 4-5 дней, например, от 6 часов до 4 дней, например, от 6 часов до 3 дней, например, от 6 часов до 2 дней, например, от 6 часов до 24 часов, например, от 6 часов до 18 часов, например, от 6 часов до 12 часов, процесс ферментации может быть остановлен в пределах этого периода времени. После остановки ферментации ферментированную композицию можно высушивать для продления жизнеспособности (КОЕ) одного или более штаммов молочнокислых бактерий.

Ферментированная композиция по настоящему изобретению может представлять собой жидкость, густую суспензию или сухой порошок.

Способ по настоящему изобретению может дополнительно включать этап уменьшения содержания влаги от содержания влаги, достигнутого в процессе ферментации, до содержания влаги ферментированной композиции. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения композицию можно сушить.

Для сохранения активности компонентов в ферментированной композиции можно использовать любые способы уменьшения содержания влаги, которые не вредят пре- и пробиотическим компонентам ферментированной композиции и которые обеспечивают высокую жизнеспособность молочнокислых бактерий, присутствующих в ферментированной композиции. Способ уменьшения содержания влаги, описанный в WO 2013/029632, может быть предпочтительным (содержание WO 2013/029632 включено в настоящий документ посредством ссылки).

В соответствии с настоящим изобретением, для улучшения процесса ферментации растительный материал может быть предварительно обработан до объединения растительного материала с одним или более штаммами молочнокислых бактерий, как описано для этапа (iii).

Такая предварительная обработка может включать перемалывание, нарезание, разрубание, шинкование и/или дробление растительного материала.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения растительный материал, полученный на этапе (i), необязательно, после предварительной обработки имеет средний диаметр 5 мм или менее, например, средний диаметр 4 мм или менее, например, средний диаметр 3 мм или менее, например, средний диаметр 2 мм или менее, например, средний диаметр 1 мм или менее, например, средний диаметр в диапазоне от 25 мкм до 5 мм, например, от 0,1 мм до 4 мм, например, средний диаметр в диапазоне от 0,5 мм до 2,5 мм, например, средний диаметр в диапазоне от 0,5 мм до 2 мм.

Определение среднего диаметра растительного материала можно проводить, например, визуальной инспекцией под микроскопом, методом лазерной дифракции или просеиванием.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения растительный материал может иметь естественное содержание глюкозинолатов, составляющее по меньшей мере 3 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 4 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 5 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 7,5 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 10 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 12,5 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 15 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 17,5 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 20 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 25 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 30 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 40 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 50 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 60 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 70 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 80 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 90 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 100 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 125 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 150 мкмоль/г сухого вещества.

Используемый в настоящем документе термин «естественное содержание» относится к определенному/проанализированному содержанию глюкозинолатов в растительном материале до ферментации. Если ранее определение или анализ растительного материала не был, или не мог быть, проведен, то термин «естественное содержание» относится к естественному содержанию, которое, согласно литературным данным, присуще конкретному растительному материалу.

Используемый в настоящем документе термин «растительный материал» относится к организмам (например, растениям, морским водорослям или водорослям), способным осуществлять фотосинтез.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения растительный материал можно выбирать из по меньшей мере одного белкового растительного материала. Растительный материал, и белковый растительный материал, можно выбирать из по меньшей мере одного из: Brassica spp., морских водорослей, водорослей, подсолнечника, пальмы, сои, кормовых бобов, люпина или их сочетания. Предпочтительно, растительный материал, и белковый растительный материал, можно выбирать из Brassica spp., морских водорослей/водорослей или их сочетания.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения Brassica spp., предпочтительно, можно выбирать из одного или более из: разновидностей рапса, крестоцветных овощей, разновидностей капусты и/или разновидностей горчицы. Предпочтительно, Brassica spp. можно выбирать из одной или более разновидностей рапса. Предпочтительно, разновидности рапса представляют собой продукт из семян рапса, например, муку из семян рапса или жмых из семян рапса, предпочтительно, жмых из семян рапса.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения Brassica spp. можно выбирать из одного или более видов, таких как Brassica napus, Brassica oleracea, Brassica campestris и/или Brassica rapa.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения морские водоросли и/или водоросли можно выбирать из одного или более из: бурых водорослей, красных водорослей, зеленых водорослей, таких как келп, Laminaria saccharina, Laminaria digitata и/или Laminaria hyperborean.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения растительный материал включает сочетание Brassica spp., в частности, Brassica napus или Brassica campestris, и морских водорослей/водорослей.

В случае, если растительный материал включает сочетание Brassica spp., в частности, Brassica napus или Brassica campestris, и морских водорослей/водорослей, морские водоросли/водоросли, предпочтительно, могут быть подвергнуты предварительной обработке, которая приводит к достижению среднего диаметра, составляющего не более 75% от среднего диаметра Brassica spp., например, не более 50% от среднего диаметра.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения растения Brassica spp., полученные на этапе (i), необязательно, имеют после предварительной обработки средний диаметр 3 мм или менее, например, средний диаметр 2 мм или менее, например, средний диаметр 1 мм или менее, например, средний диаметр в диапазоне от 25 мкм до 3 мм, например, от 0,1 мм до 2,5 мм, например, средний диаметр в диапазоне от 0,5 мм до 2,25 мм, например, средний диаметр в диапазоне от 1,0 мм до 2 мм.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения морские водоросли/водоросли, полученные на этапе (i), необязательно, имеют после предварительной обработки средний диаметр 2 мм или менее, например, средний диаметр 1,5 мм или менее, например, средний диаметр 1 мм или менее, например, средний диаметр в диапазоне от 25 мкм до 2 мм, например, от 0,1 мм до 1,5 мм, например, средний диаметр в диапазоне от 0,5 мм до 1,25 мм, например, средний диаметр в диапазоне от 0,75 мм до 1 мм.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения соотношение между Brassica spp. и морскими водорослями/водорослями составляет по меньшей мере 1:1, например, по меньшей мере 1:2, например, по меньшей мере 1:3, например, по меньшей мере 1:4, например, по меньшей мере 1:5, например, по меньшей мере 1:6, например, по меньшей мере 1:7, например, по меньшей мере 1:8, например, по меньшей мере 1:9, например, по меньшей мере 1:10.

Растительный материал может быть получен в форме семян, прессованного жмыха, муки или других остатков после промышленного использования указанного растительного материала. Предпочтительно, растительный материал может быть получен в форме жмыха или муки, даже более предпочтительно, растительный материал может быть получен в форме жмыха.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения в сочетание растительного материала, полученного на этапе a), и одного или более штаммов молочнокислых бактерий, полученных на этапе b), могут быть добавлены один или более дополнительных ингредиентов, выбранных из группы, состоящей из злаков, (например, пшеницы, ячменя, ржи, риса, кукурузы (силоса из стержней початков кукурузы (CCM) или отходов), тритикале, овса), овощей (например, картофеля, фасоли, гороха, кукурузы, сои) и/или углеводных ингредиентов (например, сыворотки, творога, обезжиренного молока и тому подобного).

Если в сочетание растительного материала, полученного на этапе a), и одного или более штаммов молочнокислых бактерий, полученных на этапе b), могут быть добавлены злаки, предпочтительно пшеница, то злаки будут составлять 1-15% (по массе) композиции, например, 5-10% (по массе) композиции.

Если в сочетание растительного материала, полученного на этапе a), и одного или более штаммов молочнокислых бактерий, полученных на этапе b), могут быть добавлены овощи, предпочтительно, крахмалосодержащие овощи, например, картофель, то овощи будут составлять 0,1-5% (по массе) композиции, например, 0,5-2% (по массе) композиции.

Если в сочетание растительного материала, полученного на этапе a), и одного или более штаммов молочнокислых бактерий, полученных на этапе b), могут быть добавлены углеводные ингредиенты, например, сыворотка, то углеводные ингредиенты будут составлять 0,1-5% (по массе) композиции, например, 0,5-2% (по массе) композиции.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения процесс ферментации может, предпочтительно, представлять собой анаэробный процесс ферментации или практически анаэробный процесс ферментации.

Используемый в настоящем документе термин «практически анаэробная ферментация» означает ферментацию, при которой отсутствует кислородный или другой респираторный метаболизм, или окислительное фосфорилирование. Таким образом, термин «практически анаэробная ферментация» означает, что кислород (или другие соединения - акцепторы электронов) не добавляется систематически в процессе ферментации. Кислород, естественным образом присутствующий и включенный при запуске процесса ферментации, может быть допустим.

Показано, что способ по настоящему изобретению подходит для производства нового ферментированного растительного материала, имеющего высокое содержание штаммов молочнокислых бактерий и высокое содержание глюкозинолатов, и обладающего питательными и/или фармакологическими свойствами.

Предпочтительный аспект настоящего изобретения относится к ферментированной композиции, содержащей по меньшей мере один растительный материал, один или более штаммов молочнокислых бактерий и имеющей содержание глюкозинолатов по меньшей мере 2 мкмоль/г сухого вещества. Предпочтительно, композиция может содержать по меньшей мере 10% (по массе) глюкозинолатов, естественным образом присутствующих в по меньшей мере одном растительном материале.

В следующем предпочтительном аспекте настоящего изобретения ферментированная композиция содержит по меньшей мере один растительный материал, один или более штаммов молочнокислых бактерий и по меньшей мере 10% (по массе) глюкозинолатов, естественным образом присутствующих в по меньшей мере одном растительном материале. Предпочтительно, композиция содержит по меньшей мере 2 мкмоль/г сухого вещества.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция может иметь содержание глюкозинолатов по меньшей мере 3 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 4 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 5 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 7,5 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 10 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 12,5 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 15 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 17,5 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 20 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 25 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 30 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 40 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 50 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 60 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 70 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 80 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 90 мкмоль/г сухого вещества, например, по меньшей мере 100 мкмоль/г сухого вещества.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения содержание глюкозинолатов, присутствующих в ферментированной композиции, может составлять по меньшей мере 10% (по массе) глюкозинолатов, естественным образом присутствующих в по меньшей мере одном растительном материале, например, по меньшей мере 10% (по массе), например, по меньшей мере 20% (по массе), например, по меньшей мере 30% (по массе), например, по меньшей мере 40% (по массе), например, по меньшей мере 50% (по массе), например, по меньшей мере 60% (по массе), например, по меньшей мере 65% (по массе), например, по меньшей мере 70% (по массе), например, по меньшей мере 75% (по массе), например, по меньшей мере 80% (по массе).

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения содержание глюкозинолатов, присутствующих в ферментированной композиции, может находиться в диапазоне 10-80% (по массе) глюкозинолатов, естественным образом присутствующих в по меньшей мере одном растительном материале, например, в диапазоне 20-75% (по массе), например, в диапазоне 30-70% (по массе), например, в диапазоне 40-60% (по массе), например, в диапазоне 45-55% (по массе).

Используемый в настоящем документе термин «глюкозинолаты, естественным образом присутствующие в по меньшей мере одном растительном материале» относится к определенному/проанализированному содержанию глюкозинолатов в растительном материале, который будет ферментирован, до ферментации. Если до ферментации определение или анализ растительного материала не был, или не мог быть, проведен, то термин «глюкозинолаты, естественным образом присутствующие в по меньшей мере одном растительном материале» относится к количеству глюкозинолатов, которое, согласно литературным данным, присуще конкретному растительному материалу.

Содержание глюкозинолатов можно определять методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC), которая является аналитическим инструментом, хорошо известным специалистам в данной области. Определение глюкозинолатов можно проводить в соответствии с Постановлением Совета (ЕЭС) № 1864/90 от 29 июня 1990 г., согласно которому глюкозинолаты, присутствующие в растительном материале, экстрагируют в водном растворе метанола, затем проводят очистку и ферментативное десульфирование на ионообменных смолах, с последующим определением методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии с градиентным элюированием и УФ-детекцией.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция содержит по меньшей мере один растительный материал, выбранный из группы, состоящей из разновидностей рапса, крестоцветных овощей, разновидностей горчицы и/или морских водорослей, предпочтительно, разновидностей рапса или сочетания разновидностей рапса и морских водорослей; и одну или более молочнокислых бактерий, при этом композиция содержит по меньшей мере 2 мг HDMPPA (3-(4'-гидроксил-3',5'-диметоксифенил)пропионовой кислоты) на 100 г ферментированной композиции, в расчете на сухое вещество, например, по меньшей мере 3 мг/100 г, например, по меньшей мере 4 мг/100 г, например, по меньшей мере 5 мг/100 г, например, по меньшей мере 7 мг/100 г, например, по меньшей мере 10 мг/100 г, например, по меньшей мере 15 мг/100 г, например, по меньшей мере 20 мг/100 г, например, по меньшей мере 30 мг/100 г, например, по меньшей мере 40 мг/100 г, например, по меньшей мере 50 мг/100 г, например, по меньшей мере 60 мг/100 г, например, по меньшей мере 70 мг/100 г, например, по меньшей мере 80 мг/100 г.

HDMPPA (3-(4'-гидроксил-3',5'-диметоксифенил)пропионовая кислота) представляет собой соединение, изначально обнаруженное в качестве одной из основных молекул в кимчи. Кимчи представляет собой ферментированный корейский овощной гарнир, включающий капусту, красный перец, чеснок, имбирь и молочнокислые бактерии. Исследователи считают, что HDMPPA способствует активной иммунной защите в центральной нервной системе, ЦНС (смотри Jin-Woo Jeong et al. 2015), обладает антиоксидантной активностью и способствует предотвращению и/или лечению атеросклероза (Hyun Ju Kim, el al. 2007), приводит к снижению уровней липидов, обладает противоопухолевыми и антиатерогенными свойствами, обладает противовирусными свойствами в отношении возбудителей острого респираторного синдрома (Ye-Rang Yun et al. 2014). Количество HDMPPA в кимчи составляет примерно 1 мг/100 г кимчи.

Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что ферментированный растительный материал по настоящему изобретению содержит значительно больше HDMPPA, чем ферментированный продукт по настоящему изобретению, в сравнении с количеством HDMPPA, присутствующем в не ферментированном растительном материале или в продуктах кимчи, описанных в литературе предшествующего уровня техники.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция содержит по меньшей мере 2 мг HDMPPA (3-(4'-гидроксил-3',5'-диметоксифенил)пропионовой кислоты) на 100 г ферментированной композиции, в расчете на сухое вещество, например, по меньшей мере 3 мг/100 г, например, по меньшей мере 4 мг/100 г, например, по меньшей мере 5 мг/100 г, например, по меньшей мере 7 мг/100 г, например, по меньшей мере 10 мг/100 г, например, по меньшей мере 15 мг/100 г, например, по меньшей мере 20 мг/100 г, например, по меньшей мере 30 мг/100 г, например, по меньшей мере 40 мг/100 г, например, по меньшей мере 50 мг/100 г, например, по меньшей мере 60 мг/100 г, например, по меньшей мере 70 мг/100 г, например, по меньшей мере 80 мг/100 г.

Значительное увеличение содержания HDMPPA в ферментированной композиции по настоящему изобретению может быть обусловлено уникальным сочетанием молочнокислых бактерий, используемых для ферментации. Таким образом, одна или более молочнокислых бактерий, присутствующих в композиции, могут быть выбраны из группы, состоящей из Pediococcus pentosaceus, Pendiococcus acidilactici, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus, Enterococcus faecium и/или их сочетания. Предпочтительно, молочнокислые бактерии, присутствующие в композиции, могут представлять собой Pediococcus pentosaceus, Pendiococcus acidilactici, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus и Enterococcus faecium.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения получена ферментированная композиция, содержащая по меньшей мере один растительный материал и одну или более молочнокислых бактерий, при этом композиция содержит по меньшей мере 2 мг HDMPPA (3-(4'-гидроксил-3',5'-диметоксифенил)пропионовой кислоты) на 100 г ферментированной композиции, в расчете на сухое вещество, например, по меньшей мере 3 мг/100 г, например, по меньшей мере 4 мг/100 г, например, по меньшей мере 5 мг/100 г, например, по меньшей мере 7 мг/100 г, например, по меньшей мере 10 мг/100 г, например, по меньшей мере 15 мг/100 г, например, по меньшей мере 20 мг/100 г, например, по меньшей мере 30 мг/100 г, например, по меньшей мере 40 мг/100 г, например, по меньшей мере 50 мг/100 г, например, по меньшей мере 60 мг/100 г, например, по меньшей мере 70 мг/100 г, например, по меньшей мере 80 мг/100 г, и при этом одну или более молочнокислых бактерий, присутствующих в композиции, выбирают из группы, состоящей из Pediococcus pentosaceus, Pendiococcus acidilactici, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus, Enterococcus faecium и/или их сочетания.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ни композиция, ни ферментированная композиция, не содержит Lactobacillus kimchi.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения по меньшей мере один растительный материал (когда композиция содержит HDMPPA) выбирают из группы, состоящей из разновидностей рапса, крестоцветных овощей, разновидностей горчицы и/или морских водорослей, предпочтительно, разновидностей рапса и/или морских водорослей. Предпочтительно, растительный материал не является разновидностями капусты. Даже более предпочтительно, растительный материал представляет собой (когда композиция содержит HDMPPA) сочетание разновидностей рапса и морских водорослей.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция была проанализирована на содержание HDMPPA и других важных молекул путем анализа экстракта ферментированной композиции в 80% метаноле методом хроматографии сверхвысокого давления с квадрупольно-времяпролетной масс-спектроскопией (UPLC-QTOF-MS). Помимо значительного количества HDPPA в ферментированном растительном материале, даже более значительное количество молекулы было обнаружено во фракции ферментированных семян рапса/морских водорослей (1), в то время как в ферментированных семенах рапса (2), не ферментированных морских водорослях (3) и не ферментированных семенах рапса (4) молекула отсутствовала или присутствовала в незначительных количествах.

Масс-спектроскопия является общепринятым методом, используемым, когда молекула, находящаяся в естественной среде или в сложной среде, и не полученная путем синтеза, должна быть определена или идентифицирована на основании молекулярной массы.

Для определения молекулы ферментированную композицию подвергали как анализу MS1, так и анализу MS2. Используемый в настоящем документе термин «анализ MS1» означает анализ интактной молекулы, с небольшим фракционированием, методом масс-спектроскопии, таким как LC-QTOF-MS. Используемый в настоящем документе термин «анализ MS2» означает анализ фрагментов молекулы методом масс-спектроскопии, таким как LC-QTOF-MS.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения молекула имеет молекулярную массу MS1 в диапазоне 280-340 дальтон, например, в диапазоне 300-320 дальтон, например, в диапазоне 305-315 дальтон, например, примерно 311 дальтон, например, примерно 311,2228 дальтон.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения молекула имеет первую молекулярную массу MS2 в диапазоне 210-230 дальтон, например, в диапазоне 215-225 дальтон, например, примерно 223 дальтон, например, примерно 223,1694 дальтон.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения молекула имеет вторую молекулярную массу MS2 в диапазоне 80-90 дальтон, например, в диапазоне 85-88 дальтон, например, примерно 87 дальтон, например, примерно 87,0436 дальтон.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения молекула имеет третью молекулярную массу MS2 в диапазоне 220-245 дальтон, например, в диапазоне 230-240 дальтон, например, примерно 235 дальтон, например, примерно 235,1666 дальтон.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения молекула имеет четвертую молекулярную массу MS2 в диапазоне 210-230 дальтон, например, в диапазоне 215-225 дальтон, например, примерно 224 дальтон, например, примерно 224,1725 дальтон.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения молекула имеет пятую молекулярную массу MS2 в диапазоне 265-285 дальтон, например, в диапазоне 270-280 дальтон, например, примерно 275 дальтон, например, примерно 275,2005 дальтон.

Предпочтительно, молекула по настоящему изобретению имеет молекулярную массу MS1 в диапазоне 280-340 дальтон, например, в диапазоне 300-320 дальтон, например, в диапазоне 305-315 дальтон, например, примерно 311 дальтон, например, примерно 311,2228 дальтон; первую молекулярную массу MS2 в диапазоне 210-230 дальтон, например, в диапазоне 215-225 дальтон, например, примерно 223 дальтон, например, примерно 223,1694 дальтон; вторую молекулярную массу MS2 в диапазоне 80-90 дальтон, например, в диапазоне 85-88 дальтон, например, примерно 87 дальтон, например, примерно 87,0436 дальтон; третью молекулярную массу MS2 в диапазоне 220-245 дальтон, например, в диапазоне 230-240 дальтон, например, примерно 235 дальтон, например, примерно 235,1666 дальтон; четвертую молекулярную массу MS2 в диапазоне 210-230 дальтон, например, в диапазоне 215-225 дальтон, например, примерно 224 дальтон, например, примерно 224,1725 дальтон; и пятую молекулярную массу MS2 в диапазоне 265-285 дальтон, например, в диапазоне 270-280 дальтон, например, примерно 275 дальтон, например, примерно 275,2005 дальтон.

Различные фракции молекулярных масс MS2 могут иметь место в ферментированной композиции в следующих относительных концентрациях/количествах: первая MS2 > вторая MS2 > третья MS2 > четвертая MS2 > пятая MS2.

Без связи с какой-либо теорией, авторы настоящего изобретения считают, что молекула по настоящему изобретению представляет собой соединение жирной кислоты, предпочтительно, соединение модифицированной жирной кислоты.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения количество соединения жирной кислоты может быть увеличено в сравнении с не ферментированным растительным материалом.

Кроме того, количество соединения жирной кислоты может быть увеличено в сравнении с кимчи, например, ферментированной композицией, содержащей разновидности капусты, например, корейскую капусту, или ферментированным растительным материалом, полученным в основном с использованием Lactobacillus kimchi.

Используемое в настоящем документе выражение «в основном с использованием» означает, что более 50% от общего содержания молочнокислых бактерий в композиции, или в ферментированной композиции, составляет Lactobacillus kimchi.

Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что молекула может присутствовать по меньшей мере в 2-кратном избытке относительно концентрации/количества в не ферментированном растительном материале, например, по меньшей мере 5-кратном, например, по меньшей мере 10-кратном, например, по меньшей мере 15-кратном избытке. Неожиданно было установлено, что молекула может присутствовать по меньшей мере в 2-кратном избытке относительно концентрации/количества в кимчи, например, по меньшей мере 5-кратном, например, по меньшей мере 10-кратном, например, по меньшей мере 15-кратном избытке.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения молекула, например, соединение жирной кислоты, отсутствует в не ферментированном растительном материале, например, отсутствует в ферментированных семенах рапса или в ферментированных морских водорослях.

Ферментированная композиция по настоящему изобретению может содержать такие же один или более штаммов молочнокислых бактерий, какие получают на этапе (ii).

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения по меньшей мере один из одного или более штаммов молочнокислых бактерий, полученных на этапе (ii), не присутствует в ферментированной композиции, например, по меньшей мере два, например, по меньшей мере 3, например, по меньшей мере 4, например, по меньшей мере 5, например, по меньшей мере 10, например, по меньшей мере 15.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция содержит один или более штаммов молочнокислых бактерий, например, два или более штаммов молочнокислых бактерий, например, три или более штаммов бактерий, например, четыре или более штаммов бактерий, например, 7 или более штаммов бактерий, например, 10 или более штаммов бактерий, например, 15 или более штаммов бактерий, например, 20 или более штаммов бактерий, например, 25 или более штаммов бактерий, например, 30 или более штаммов бактерий, например, 35 или более штаммов бактерий, например, 40 или более штаммов бактерий.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения один или более штаммов молочнокислых бактерий, присутствующих в ферментированной композиции, могут быть выбраны из группы, состоящей из Lactobacillus, Leuconostoc, Pediococcus, Lactococcus, Streptococcus, Aerococcus, Carnobacterium, Enterococcus, Oenococcus, Teragenococcus, Vagococcus и Weisella. Предпочтительно, один или более штаммов молочнокислых бактерий, присутствующих в ферментированной композиции, представляют собой молочнокислые бактерии рода Enterococcus, Lactobacillus, Pediococcus, Lactococcus или их сочетания.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения один или более штаммов молочнокислых бактерий могут быть выбраны из группы, состоящей из одного или более из: Enterococcus spp., Lactobacillus spp., Lactococcus spp., Pediococcus spp., а также их сочетания. Предпочтительно, один или более штаммов молочнокислых бактерий выбраны из группы, состоящей из одного или более из: Enterococcus faecium, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus plantarum, Pediococcus acidililactili, Pediococcus pentosaceus, Lactococcus lactis, Lactococcus cremoris, Lactococcus diacetylactis, Leuconostoc cremoris, а также их сочетания.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения основным штаммом(ами) молочнокислых бактерий, присутствующих в композиции, может быть Pediococcus pentosaceus, Pendiococcus acidilactici, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus или Enterococcus faecium. Предпочтительно, основными молочнокислыми бактериями, присутствующими в композиции, могут быть Lactobacillus plantarum.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения один или более штаммов молочнокислых бактерий могут быть выбраны из группы, состоящей из одного или более из: Enterococcus faecium MCIMB 30122, Lactobacillus rhamnosus NCIMB 30121, Pediococcus pentosaceus HTS (LMG P-22549), Pendiococcus acidilactici NCIMB 30086 и/или Lactobacillus plantarum LSI (NCIMB 30083).

Для оказания желательного эффекта ферментированная композиция должна иметь высокое содержание жизнеспособных молочнокислых бактерий. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция содержит один или более штаммов молочнокислых бактерий в общем количестве, находящемся в диапазоне 10⁵-10¹² КОЕ на грамм, например, в диапазоне 10⁶-10¹² КОЕ на грамм, например, в диапазоне 10⁷-10¹¹ КОЕ на грамм, например, в диапазоне 10⁸-10¹¹ КОЕ на грамм, например, в диапазоне 10⁹-10¹⁰ КОЕ на грамм.

Для улучшения процесса ферментации и эффектов ферментированной композиции ферментированная композиция может содержать измельченный растительный материал. Растительный материал может быть измельчен путем перемалывания, нарезания, разрубания, шинкования и/или дробления, с получением измельченного растительного материала.

Ферментированная композиция по настоящему изобретению может содержать измельченный растительный материал, имеющий средний диаметр 5 мм или менее, например, средний диаметр 4 мм или менее, например, средний диаметр 3 мм или менее, например, средний диаметр 2 мм или менее, например, средний диаметр 1 мм или менее, например, средний диаметр в диапазоне от 25 мкм до 5 мм, например, от 0,1 мм до 4 мм, например, средний диаметр в диапазоне от 0,5 мм до 2,5 мм, например, средний диаметр в диапазоне от 0,5 мм до 2 мм.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция может содержать растительный материал, включающий сочетание Brassica spp., в частности, Brassica napus или Brassica campestris, и морских водорослей/водорослей.

Предпочтительно, морские водоросли/водоросли, присутствующие в ферментированной композиции, могут иметь средний диаметр, который составляет не более 75% от среднего диаметра Brassica spp., например, не более 50% от среднего диаметра.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения растения Brassica spp., если они присутствуют в ферментированной композиции, имеют средний диаметр 3 мм или менее, например, средний диаметр 2 мм или менее, например, средний диаметр 1 мм или менее, например, средний диаметр в диапазоне от 25 мкм до 3 мм, например, от 0,1 мм до 2,5 мм, например, средний диаметр в диапазоне от 0,5 мм до 2,25 мм, например, средний диаметр в диапазоне от 1,0 мм до 2 мм.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения морские водоросли/водоросли, если они присутствуют в ферментированной композиции, имеют средний диаметр 2 мм или менее, например, средний диаметр 1,5 мм или менее, например, средний диаметр 1 мм или менее, например, средний диаметр в диапазоне от 25 мкм до 2 мм, например, от 0,1 мм до 1,5 мм, например, средний диаметр в диапазоне от 0,5 мм до 1,25 мм, например, средний диаметр в диапазоне от 0,75 мм до 1 мм.

Если ферментированная композиция содержит сочетание Brassica spp., в частности, Brassica napus или Brassica campestris, и морских водорослей/водорослей, соотношение между Brassica spp. и морскими водорослями/водорослями составляет по меньшей мере 1:1, например, по меньшей мере 1:2, например, по меньшей мере 1:3, например, по меньшей мере 1:4, например, по меньшей мере 1:5, например, по меньшей мере 1:6, например, по меньшей мере 1:7, например, по меньшей мере 1:8, например, по меньшей мере 1:9, например, по меньшей мере 1:10.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения содержание растительного материала в ферментированной композиции составляет по меньшей мере 50% растительного материала, например, по меньшей мере 55% растительного материала, например, по меньшей мере 60% растительного материала, например, по меньшей мере 65% растительного материала, например, по меньшей мере 70% растительного материала, например, по меньшей мере 75% растительного материала, например, по меньшей мере 80% растительного материала, например, по меньшей мере 85% растительного материала, например, по меньшей мере 90% растительного материала, например, по меньшей мере 95% растительного материала.

Ферментированная композиция может быть получена во многих формах. Предпочтительно, ферментированная композиция может представлять собой жидкость, густую суспензию или сухой порошок.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения получена ферментированная композиция, имеющая высокое содержание молочной кислоты, высокое содержание глюкозинолатов, и высокую пре- и пробиотическую активность. В соответствии с настоящим изобретением, пребиотиком может быть ферментированный растительный материал, описанный в настоящем документе. В соответствии с настоящим изобретением, пробиотиком может быть один или более штаммов молочнокислых бактерий.

Ферментированная композиция содержит большое количество молочной кислоты. Таким образом, ферментированная композиция может иметь значение pH в диапазоне pH 3-5, например, в диапазоне pH 3,5-4,5, например, в диапазоне pH 3,8-4,4, 3,85-4,1, 3,9-4,0, например, в диапазоне pH 4,0-4,3, например, примерно pH 4,2.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция может быть смешана с одной или более другими ферментированными композициями, содержащими один или более других штаммов молочнокислых бактерий и/или один или более других растительных материалов. Такие смешанные ферментированные композиции могут оказывать дополнительные эффекты и/или синергические эффекты.

Ферментированная композиция по настоящему изобретению может быть использована в качестве ингредиента.

Ферментированная композиция, получаемая способами по изобретению, может составлять часть пищевого ингредиента (или быть ингредиентом). Таким образом, один из аспектов изобретения относится к пищевому/кормовому ингредиенту, содержащему ферментированную композицию по изобретению. В настоящем документе термины «пищевой продукт» и «корм» могут быть использованы взаимозаменяемо, однако термин «пищевой продукт» означает, в частности, съедобный материал, подходящий для употребления в пищу людьми, в то время как термин «корм» означает, в частности, съедобный материал, подходящий для употребления в пищу животными. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения термин «животное(животные)» может включать свиней, поросят, крупный рогатый скот и лошадей, домашнюю птицу, например, цыплят, индеек, кур, гусей, собак, кошек и уток, а также рыб, например, лосось и форель.

Пищевой/кормовой ингредиент также может являться частью пищевого/кормового продукта. Таким образом, в следующем аспекте изобретение относится к пищевому/кормовому продукту, содержащему пищевой/кормовой ингредиент по изобретению.

Дополнительный аспект относится к применению ферментированной композиции по изобретению в качестве пищевого/кормового ингредиента.

Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к пищевому/кормовому продукту, содержащему ферментированную композицию, предпочтительно, в виде сухого кормового/пищевого ингредиента по изобретению. Предпочтительно, пищевой/кормовой продукт содержит сухой кормовой/пищевой ингредиент в диапазоне 5-50% по массе, например, в диапазоне 5-30%, например, 10-30% или например, 10-20%.

В следующем аспекте настоящего изобретения ферментированная композиция или ингредиент по настоящему изобретению можно использовать в пищевом продукте, в пищевой добавке, в фитотерапевтическом препарате, в лекарственном средстве природного происхождения, в медицинском препарате и/или в качестве вспомогательного препарата в сочетании с одним или более другими лекарственными средствами. Предпочтительно, ферментированная композиция или ингредиент по настоящему изобретению можно использовать в качестве вспомогательного препарата. Используемый в настоящем документе термин «вспомогательный» означает «вносящий вклад в, или усиливающий, действие» применяемого терапевтического режима.

Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что композиция по настоящему изобретению обладает питательными и/или фармакологическими свойствами. Таким образом, предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к субстанции для использования в качестве медикамента, содержащей ферментированную композицию по настоящему изобретению.

Используемый в настоящем документе термин «субстанция» означает лекарственное средство, комплексный материал, или их сочетание, которое может способствовать укреплению здоровья млекопитающего. Комплексный материал, предпочтительно, может представлять собой ферментированную композицию по настоящему изобретению.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения термин «млекопитающее», в соответствии с настоящим изобретением, может означать человека или животное.

Предпочтительно, субстанция по настоящему изобретению может быть использована в лечении, ослаблении, стабилизации или профилактике кишечных заболеваний у млекопитающего (такого как человек или животное), при этом указанная субстанция содержит ферментированную композицию по настоящему изобретению.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения кишечное заболевание у млекопитающего может быть выбрано из группы, состоящей из аутовоспалительных заболеваний, таких как спондилоартропатия, спондилоартрит (в частности, псориатическая артропатия, псориатический артрит), склероза (такого как системная склеродермия), аллергии или непереносимости (такой как аллергия/непереносимость глютена и/или аллергия/непереносимость лактозы), запора, активации кишечной микрофлоры, усталости (такой как синдром хронической усталости), воспаления, диареи, стимуляции кишечной микрофлоры ребенка до и после рождения, воспалительных заболеваний кишечника (таких как болезнь Крона или язвенный колит у млекопитающего), бактериальных инфекций (таких как инфекции, вызываемые грамположительными бактериями, в частности, Staphylococcus, предпочтительно Staphylococcus aureus; и/или Clostridium, предпочтительно Clostridium perfringens или Clostridium difficile), кожных заболеваний (таких как ладонно-подошвенный пустулез, акне, розацеа и/или ринофима) и/или боли в спине с подтвержденными и не подтвержденными рентгенографией патологическими изменениями позвоночника (I и II).

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированный продукт по настоящему изобретению может активировать кишечную микрофлору у млекопитающего. Используемый в настоящем документе термин «активация» означает повышение активности кишечной микрофлоры, относительно активности, ожидаемой на основании количества введенных молочнокислых бактерий. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения кишечная микрофлора после введения ферментированной композиции по настоящему изобретению может продуцировать по меньшей мере в 2 раза больше молочной кислоты в сравнении с нормальным количеством продуцируемой молочной кислоты, например, по меньшей мере в 3 раза, например, по меньшей мере в 4 раза, например, по меньшей мере в 5 раз, например, по меньшей мере в 7,5 раз, например, по меньшей мере в 10 раз, например, по меньшей мере в 12,5 раз, например, по меньшей мере в 15 раз.

Исследователи обнаружили, что часто причиной заболевания, патологического состояния или повреждения у млекопитающего является нестабильная, аномальная и/или инфекционная кишечная микрофлора, которая вынуждает организм млекопитающего реагировать, например, в форме дискомфорта, заболевания, патологического состояния или повреждения. Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что ферментированная композиция (или субстанция) по настоящему изобретению может быть очень подходящей для противодействия или предотвращения такого дискомфорта, заболевания, патологического состояния или повреждения.

Используемый в настоящем документе термин «лечение» означает применение средства, например, субстанции или ферментированной композиции по настоящему изобретению, в попытке излечения или ослабления заболевания, патологического состояния или повреждения у млекопитающего.

Используемый в настоящем документе термин «ослабление» относится к действию средства, например, субстанции или ферментированной композиции по настоящему изобретению, способствующему уменьшению интенсивности заболевания, патологического состояния или повреждения, и/или уменьшению симптомов у млекопитающего.

Используемый в настоящем документе термин «профилактика» означает применение средства, например, субстанции или ферментированной композиции по настоящему изобретению, в попытке предотвращения заболевания, патологического состояния или повреждения у млекопитающего и/или для предварительной защиты млекопитающего.

Используемый в настоящем документе термин «стабилизация» означает применение средства, например, субстанции или ферментированной композиции по настоящему изобретению, для стабилизации кишечной микрофлоры у млекопитающего с целью укрепления здоровья (например, предотвращения, лечения или ослабления заболевания, патологического состояния или повреждения у млекопитающего). Многие заболевания, патологические состояния и/или повреждения у млекопитающего могут быть результатом нестабильной, аномальной и/или инфекционной кишечной микрофлоры. Таким образом, используемый в настоящем документе термин «стабилизация» означает применение средства, например, субстанции или ферментированной композиции по настоящему изобретению, для стабилизации, нормализации и борьбы с инфекционной кишечной микрофлорой у млекопитающего.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения субстанция по настоящему изобретению может быть использована для лечения, ослабления, стабилизации или профилактики аутовоспалительных заболеваний, таких как спондилоартропатия, спондилоартрит (в частности, псориатическая артропатия, псориатический артрит), склероза (такого как системная склеродермия), аллергии или непереносимости (такой как аллергия/непереносимость глютена и/или аллергия/непереносимость лактозы), запора, активации кишечной микрофлоры, усталости (такой как синдром хронической усталости), воспаления, диареи, стимуляции кишечной микрофлоры ребенка до и после рождения, воспалительных заболеваний кишечника (таких как болезнь Крона или язвенный колит у млекопитающего), бактериальных инфекций (таких как инфекции, вызываемые грамположительными бактериями, в частности, Staphylococcus, предпочтительно Staphylococcus aureus; и/или Clostridium, предпочтительно Clostridium perfringens или Clostridium difficile), кожных заболеваний (таких как ладонно-подошвенный пустулез, акне, розацеа и/или ринофима) и/или боли в спине, при этом субстанция содержит ферментированную композицию по настоящему изобретению.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения млекопитающее является человеком или животным, предпочтительно, животное является домашним животным, например, собакой, кошкой, лошадью, коровой, свиньей, курицей, овцой или козой.

Псориаз является хроническим аутоиммунным заболеванием, характеризующимся наличием участков аномальной кожи. Такие участки кожи, как правило, бывают покрасневшими, зудящими и чешуйчатыми. По степени распространенности они могут варьироваться от небольших и локализованных до покрывающих все тело. Основными видами псориаза являются пятнистый псориаз, каплевидный псориаз, обратный псориаз, пустулезный псориаз и эритродермический псориаз. Лечение осложнений в виде последствий псориаза также входит в определение лечения, ослабления, стабилизации или профилактики псориаза. Осложнениями, связанными с псориазом, являются повышенный риск псориатического артрита, лимфомы, сердечно-сосудистые заболевания, болезнь Крона, язвенный колит, хроническая усталость и депрессия.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция (или субстанция) для лечения, ослабления, стабилизации или профилактики псориаза, предпочтительно, может содержать Brassica spp.; морские водоросли/водоросли или сочетание Brassica spp. и морских водорослей/водорослей.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения показатель площади поражения и индекса степени тяжести псориаза (PASI) у млекопитающего, страдающего псориазом, уменьшается на 10% или более, когда ферментированную композицию или субстанцию по настоящему изобретению вводят млекопитающему, например, на 20% или более, например, на 30% или более, например, на 40% или более, например, на 50% или более, например, на 60% или более, например, на 70% или более, например, на 80% или более, например, на 90% или более, например, на 95% или более, например, на 100%.

C-реактивный белок (CRP) представляет собой пентамерный белок, присутствующий в плазме крови млекопитающего. Уровни C-реактивного белка могут повышаться в ответ на воспаление и используются в качестве маркера воспаления. Измерение и построение диаграмм значений CRP может быть полезным для определения прогрессирования заболевания или эффективности лечения.

Таким образом, одним из способов определения степени или тяжести спондилоартрита, например, псориаза, и, в частности, псориатического артрита, может быть измерение уровней C-реактивного белка (CRP) у млекопитающего.

Обычно специалисты в данной области определяют максимальный уровень (статистически проверенный) CRP, при наличии которого млекопитающее все еще считается нормальным и здоровым. В Дании органами здравоохранения установлено основанное на величине CRP значение 8 (статистически проверенное) в качестве границы, отделяющей здорового от нездорового человека. В контексте настоящего изобретения максимальный уровень CRP, принятый для нормального/здорового млекопитающего, может соответствовать величине CRP ниже 8. Таким образом, млекопитающее, у которого уровень CRP ниже 8, считается нормальным и здоровым, а млекопитающие, имеющие уровень CRP 8 или выше, считаются аномальными/больными.

В случае, если у указанного млекопитающего развивается воспаление, уровень CRP возрастает. Предпочтительно, уровень CRP у млекопитающего, страдающего от воспаления, может составлять по меньшей мере 10 мг/л CRP, например, по меньшей мере 15 мг/л CRP, например, по меньшей мере 20 мг/л CRP, например, по меньшей мере 25 мг/л CRP, например, по меньшей мере 30 мг/л CRP, например, по меньшей мере 40 мг/л CRP, например, по меньшей мере 50 мг/л CRP, например, по меньшей мере 75 мг/л CRP, например, по меньшей мере 100 мг/л CRP.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения уровень CRP у млекопитающего снижается до уровня CRP ниже 8 после введения млекопитающему суточной дозы ферментированной композиции по настоящему изобретению. В частности, уровень CRP у млекопитающего снижается до уровня CRP ниже 8 через 5 месяцев или менее, например, через 4 месяца или менее, например, через 3 месяца или менее, например, через 2 месяца или менее, например, через 1 месяц или менее, например, через 25 дней или менее, например, через 22 дня или менее, например, через 20 дней или менее, например, через 18 дней или менее, например, через 17 дней или менее, например, через 16 дней или менее, например, через 15 дней или менее, например, через 14 дней или менее, например, через 12 дней или менее, например, через 10 дней или менее.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения уровень CRP у млекопитающего снижается до уровня CRP, составляющего не более 75% от уровня CRP до введения ферментированной композиции по настоящему изобретению, который определяют как среднее значение на протяжении периода времени 10 дней, например, не более 60%, например, не более 50%, например, не более 40%, например, не более 30%, например, не более 20%, например, не более 10%.

Склероз, в частности, системная склеродермия, представляет собой аутоиммунное заболевание соединительной ткани. Оно характеризуется утолщением кожи, вызываемым накоплением коллагена и повреждением мелких артерий. Существуют две формы заболевания. При ограниченной кожной склеродермии поражаются только лицо, руки и ноги. При диффузной кожной склеродермии поражается большая поверхность кожи, и болезнь может прогрессировать, затрагивая внутренние органы, включая почки, сердце, легкие и желудочно-кишечный тракт.

Лечение осложнений в виде последствий склероза также входит в определение лечения, ослабления, стабилизации или профилактики склероза.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция (или субстанция) для лечения, ослабления, стабилизации или профилактики склероза, в частности, системной склеродермии, предпочтительно, может содержать Brassica spp., даже более предпочтительно, рапс или семена рапса.

В следующем варианте осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция (или субстанция) для лечения, ослабления, стабилизации или профилактики склероза, в частности, системной склеродермии, предпочтительно, может содержать Brassica spp., морские водоросли/водоросли или, даже более предпочтительно, сочетание Brassica spp. и морских водорослей/водорослей.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения шрамы на коже млекопитающих, страдающих склерозом, могут уменьшаться на по меньшей мере 20%, например, по меньшей мере 30%, например, по меньшей мере 40%, например, по меньшей мере 50%, например, по меньшей мере 60%, например, по меньшей мере 70%, например, по меньшей мере 80%, например, по меньшей мере 90%, например, по меньшей мере 95%.

Аллергия включает ряд аллергических заболеваний или состояний, вызываемых гиперчувствительностью иммунной системы к каким-либо факторам окружающей среды. В некоторых случаях аллергическая реакция вызывает небольшие, но очень раздражающие проблемы у млекопитающих, а в других ситуациях аллергическая реакция может быть тяжелой и требующей принятия экстренных мер. Аллергические заболевания могут включать лихорадку, пищевую аллергию, атопический дерматит, аллергическую астму, аллергический артрит, атопическую экзему и анафилаксию. Симптомы могут включать покраснение глаз, зудящую сыпь, насморк, одышку или затрудненное дыхание, учащенное сердцебиение, удушье или отек.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция (или субстанция) для лечения, ослабления, стабилизации или профилактики аллергии, предпочтительно, может содержать Brassica spp.; морские водоросли/водоросли или сочетание Brassica spp. и морских водорослей/водорослей.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция (или субстанция) подходит для лечения, ослабления, стабилизации или профилактики аллергии на глютен и/или аллергии на лактозу.

Предпочтительно, млекопитающее, страдающее аллергией, такой как аллергия на глютен и/или аллергия на лактозу, после приема композиции по настоящему изобретению может больше не испытывать аллергическую реакцию и впоследствии питаться нормально.

Запором называют состояние, когда опорожнение кишечника происходит редко и требует больших усилий. Запор является обычной причиной болезненной дефекации. Тяжелый запор включает обстипацию (невозможность выхода кала и газов) и чрезмерное уплотнение стула, которое может прогрессировать до непроходимости кишечника и становиться опасным для жизни. Запор является обычным явлением. В общей популяции показатели наличия запора варьируются от 2 до 30%. Из пожилых людей, живущих в домах престарелых, запорами страдают от 50% до 75% людей. Лечение осложнений в виде последствий запора также входит в определение лечения, ослабления, стабилизации или профилактики запора. Осложнениями, связанными с запором, являются лезии спинного мозга, паркинсонизм, рак толстого кишечника, анальные трещины, проктит, дисфункция тазового дна, анизмус, синдром опущения промежности и болезнь Гиршспрунга.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция (или субстанция) для лечения, ослабления, стабилизации или профилактики запора, предпочтительно, может содержать Brassica spp., даже более предпочтительно, рапс или семена рапса.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированную композицию (или субстанцию) вводят млекопитающему в сочетании с одним или более лекарственными средствами, чтобы избежать побочного эффекта в виде запора, который могут вызывать многие медикаменты.

Предпочтительно, запор у млекопитающего может быть устранен или ослаблен в течение 15 часов после приема ферментированной композиции по настоящему изобретению, например, в течение 10 часов, например, в течение 8 часов, например, в течение 6 часов, например, в течение 4 часов, например, в течение 3 часов, например, в течение 2 часов, например, в течение 1 часа.

Активация кишечной микрофлоры, описанная ранее, означает повышенную активность кишечной микрофлоры и может приводить к более регулярному опорожнению кишечника. При более регулярном опорожнении кишечника пища на меньшее время задерживается в кишечнике и углеводы, присутствующие в пище, легко преобразуются микрофлорой кишечника, в то же время распад белков из пищи может быть уменьшен и может быть уменьшена тенденция к образованию и накоплению эндотоксинов в кишечнике.

Лечение осложнений в виде последствий активации кишечной микрофлоры также входит в определение лечения, ослабления, стабилизации или профилактики активации кишечной микрофлоры. Осложнениями, связанными с активацией кишечной микрофлоры, являются, например, ожирение и рак.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения у млекопитающего может происходить активация кишечной микрофлоры, в виде более регулярного опорожнения кишечника, в течение 15 часов после приема ферментированной композиции по настоящему изобретению, например, в течение 10 часов, например, в течение 8 часов, например, в течение 6 часов, например, в течение 4 часов, например, в течение 3 часов, например, в течение 2 часов, например, в течение 1 часа.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция (или субстанция) для лечения, ослабления, стабилизации или профилактики активации кишечной микрофлоры, предпочтительно, может содержать Brassica spp., морские водоросли/водоросли или сочетание Brassica spp. и морских водорослей/водорослей.

Усталостью называют возникновение субъективного ощущения усталости, которая отличается от слабости, развивающееся постепенно. В отличие от слабости, усталость может уменьшаться после периодов отдыха. Усталость может иметь физические или психические причины. Физическая усталость представляет собой временную неспособность мышц поддерживать оптимальную физическую работоспособность, а психическая усталость представляет собой временное снижение максимальной когнитивной способности в результате длительных периодов когнитивной активности. Лечение осложнений в виде последствий усталости также входит в определение лечения, ослабления, стабилизации или профилактики усталости. Осложнением, связанным с усталостью, в частности, длительной усталостью, является, например, хроническая усталость, которая может являться симптомом заболеваний и патологических состояний, известных специалистам в данной области.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения млекопитающее ощущает уменьшение усталости и/или прибавление сил, физических и/или психических, после введения одной дозы в сутки ферментированной композиции (или субстанции) по настоящему изобретению в течение 30 дней или менее, например, 25 дней или менее, например, 20 дней или менее, например, 15 дней или менее, например, 10 дней или менее, например, 5 дней или менее, например, 3 дней или менее, например, 2 дней или менее, например, 1 дня или менее.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция (или субстанция) для лечения, ослабления, стабилизации или профилактики усталости предпочтительно, может содержать Brassica spp., морские водоросли/водоросли или сочетание Brassica spp. и морских водорослей/водорослей.

Олигосахариды, в частности, присутствующие в грудном молоке, стимулируют развитие кишечной микрофлоры у детей. Однако некоторые из этих олигосахаридов не синтезируются в организме матери, но поступают в организм матери с пищей или синтезируются кишечной микрофлорой матери.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированный продукт по настоящему изобретению снабжает мать одним или более олигосахаридами, которые затем передаются ребенку. Передача одного или более олигосахаридов от матери к ребенку осуществляется до рождения или с грудным молоком после рождения.

Ферментированная композиция (или субстанция), предоставляющая матери один или более олигосахаридов, которые затем передаются ребенку, предпочтительно, может содержать Brassica spp., морские водоросли/водоросли или сочетание Brassica spp. и морских водорослей/водорослей.

Воспалительные заболевания кишечника (IBD) представляют собой группу воспалительных состояний толстого кишечника и тонкого кишечника. Диарея, болезнь Крона и язвенный колит представляют собой основные симптомы и виды воспалительных заболеваний кишечника. Болезнь Крона поражает не только тонкий кишечник и толстый кишечник, она также поражает рот, пищевод, желудок и анус, в то время как язвенный колит в основном поражает толстый кишечник и прямую кишку. Лечение осложнений в виде последствий воспалительного заболевания кишечника также входит в определение лечения, ослабления, стабилизации или профилактики воспалительного заболевания кишечника. Осложнениями, связанными с воспалительным заболеванием кишечника, являются артрит, гангренозная пиодермия, первичный склерозирующий холангит, синдром псевдодисфункции щитовидной железы (NTIS) и усталость.

Кроме того, диарея может возникать у пациентов, перенесших операцию обходного желудочного анастомоза. Операция обходного желудочного анастомоза представляет собой хирургическую процедуру, при которой размер желудка уменьшают путем разделения его на небольшой верхний отдел и больший по размеру «остаточный» отдел, а затем тонкий кишечник соединяют с обоими отделами. Как правило, операцию назначают для лечения патологического ожирения (определяемого как индекс массы тела, превышающий 40), диабета 2 типа, гипертензии, апноэ сна и других сопутствующих заболеваний.

Если пациент с обходным желудочным анастомозом употребляет содержащую сахар пищу, сахар быстро проходит в кишечник, где развивается физиологическая реакция, называемая синдромом сбрасывания. Содержимое желудка будет быстро сбрасываться в кишечник для разбавления сахаров, что приводит к диарее. Таким образом, пациенты, перенесшие операцию обходного желудочного анастомоза, часто страдают приступами диареи и имеют риск развития пищевой недостаточности.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения лечение диареи (возникающей либо в результате воспалительного заболевания кишечника (IBD), например, болезни Крона, операций обходного желудочного анастомоза, либо в результате инфицирования бактериями, такими как E. coli, вирусами или паразитами) у млекопитающего может быть достигнуто путем введения одной дозы в сутки ферментированной композиции (или субстанции) по настоящему изобретению в течение 5 дней или менее, например, 4 дней или менее, например, 3 дней или менее, например, 2 дней или менее, например, 1 дня или менее, например, 20 часов или менее, например, 15 часов или менее, например, 10 часов или менее, например, 5 часов или менее, например, 2 часов или менее.

Используемый в настоящем документе термин «лечение диареи у млекопитающего» относится к субъективному мнению млекопитающего об улучшении здоровья и/или объективному анализу стула, полученного от млекопитающего, например, с использованием Бристольской шкалы формы кала.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ослабление диареи у млекопитающего может быть достигнуто путем введения одной дозы в сутки ферментированной композиции (или субстанции) по настоящему изобретению в течение 5 дней или менее, например, 4 дней или менее, например, 3 дней или менее, например, 2 дней или менее, например, 1 дня или менее, например, 20 часов или менее, например, 15 часов или менее, например, 10 часов или менее, например, 5 часов или менее, например, 2 часов или менее.

Используемый в настоящем документе термин «облегчение диареи у млекопитающего» относится к субъективному мнению млекопитающего об улучшении здоровья и/или объективному анализу стула, полученного от млекопитающего, например, с использованием Бристольской шкалы формы кала.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция (или субстанция) для лечения, ослабления, стабилизации или профилактики воспалительного заболевание кишечника, предпочтительно, может содержать Brassica spp., морские водоросли/водоросли или сочетание Brassica spp. и морских водорослей/водорослей.

Ферментированная композиция (или субстанция) по настоящему изобретению неожиданно продемонстрировала эффективность против бактериальной инфекции.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция (или субстанция), которая может быть использована для лечения, ослабления, стабилизации или профилактики бактериальной инфекции, предпочтительно, может содержать морские водоросли/водоросли или сочетание Brassica spp. и морских водорослей/водорослей.

Используемый в настоящем документе термин «бактериальная инфекция» относится к инфекциям, вызываемым либо грамположительными бактериями, либо грамотрицательными бактериями. Предпочтительно, бактериальная инфекция, описанная в настоящем документе, может быть вызвана грамположительными бактериями, в частности, Staphylococcus, предпочтительно Staphylococcus aureus, и/или Clostridium, предпочтительно Clostridium perfringens и Clostridium difficile.

Как указано, одна такая бактериальная инфекция может представлять собой инфекцию, вызываемую Staphylococcus, в частности, инфекцию, вызываемую Staphylococcus aureus, что может приводить, например, к фурункулезу, или, что хуже, к хроническому фурункулезу.

Фурункулез наиболее распространен у животных, таких как собаки или кошки, но может развиваться и у человека. У животных и людей, страдающих фурункулезом, могут возникать фурункулы, которые являются проявлением глубокого фолликулита (инфекции и воспаления одного или более волосяных фолликулов).

Фурункулы представляют собой бугристые, красные, заполненные гноем уплотнения вокруг волосяного фолликула, которые являются чувствительными, теплыми и очень болезненными. Они имеют размеры от горошины до мяча для гольфа. Желтую или белую точку в центре уплотнения можно увидеть, когда фурункул готов прорваться и выпустить гной. В случае тяжелой инфекции у индивидуума может возникать лихорадка, набухание лимфатических узлов и чувство усталости.

Фурункулы могут появляться на ягодицах или вблизи заднего прохода, на спине, шее, животе, груди, руках, ногах или ступнях, или даже в ушном канале.

Staphylococcus aureus может разноситься в разные участки тела с кровотоком (бактериемия), вызывая бактериальные инфекции (или осложнения), такие как раневые инфекции, абсцессы, остеомиелит, эндокардит или пневмония, которые могут нанести серьезный вред здоровью, или даже привести к гибели инфицированного животного или человека.

Штаммы Staphylococcus aureus также могут продуцировать ферменты и экзотоксины, которые могут вызывать определенные заболевания или увеличивать степень их тяжести. Такие заболевания также считаются осложнениями в виде последствий бактериальной инфекции, и их лечение также входит в определение лечения, ослабления, стабилизации или профилактики бактериальной инфекции; они включают пищевое отравление, септический шок, синдром токсического шока и токсический эпидермальный некролиз. Почти любая система органов может быть инфицирована Staphylococcus aureus.

Другой бактериальной инфекцией может быть инфекция, вызываемая Clostridium, которая может приводить, например, к пищевому отравлению, сепсису или мионекрозу, такому как газовая гангрена. Инфекция Clostridium может быть вызвана, в частности, Clostridium perfringens или Clostridium difficile.

Мионекроз, например, газовая гангрена, является состоянием некротического поражения, специфическим для мышечной ткани. Он часто имеет место при инфекциях Clostridium perfringens, которые вызывают мионекроз в результате продуцирования альфа-токсинов. Этот альфа-токсин является летальным токсином, он также известен как фосфолипаза C (лецитиназа). Он повышает проницаемость сосудов и проявляет некротизирующую активность. Секретируемые токсины обладают очень сильным действием и разрушают окружающие ткани, одновременно приводя к образованию газа.

Инфекцию, вызываемую Clostridium, можно лечить, ослаблять, стабилизировать путем введения ферментированной композиции (или субстанции) по настоящему изобретению инфицированному млекопитающему. Ферментированная композиция (или субстанция) по настоящему изобретению, предпочтительно, может содержать морские водоросли/водоросли или сочетание Brassica spp. и морских водорослей/водорослей. Предпочтительно, ферментированная композиция (или субстанция) по настоящему изобретению может содержать морские водоросли/водоросли.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированную композицию (или субстанцию) вводят млекопитающему (животному или человеку) в сочетании с одним или более лекарственными средствами, чтобы избежать бактериальной инфекции, побочных эффектов бактериальной инфекции или побочных эффектов, которые могут иметь многие медикаменты.

Предпочтительно, бактериальные инфекции у млекопитающего, такие как бактериальная инфекция, вызываемая Staphylococcus aureus и/или Clostridium perfringens, или Clostridium difficile, могут быть излечены или ослаблены в течение 40 дней, например, в течение 30 дней, например, в течение 20 дней, например, в течение 15 дней, например, в течение 12 дней, например, в течение 10 дней.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция или субстанция может быть использована в качестве средства, снижающего уровень холестерина в крови, средства, снижающего уровень триглицеридов в крови, уменьшающего повреждение печени и/или уменьшающего гипертензию средства, при этом субстанция содержит ферментированную композицию по настоящему изобретению.

Холестерин представляет собой сложную группу соединений, поскольку некоторые виды считаются вредными для организма млекопитающих, со временем некоторые соединения холестерина вызывают различные заболевания и приводят к гибели людей, в то время как другие соединения холестерина необходимы для жизненных процессов животного.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения уровень холестерина в крови может быть снижен путем введения одной дозы в сутки ферментированной композиции (или субстанции) по настоящему изобретению в течение 200 дней или менее, например, 150 дней или менее, например, 100 дней или менее, например, 75 дней или менее, например, 50 дней или менее, например, 40 дней или менее, например, 30 дней или менее, например, 20 дней или менее, например, 10 дней или менее.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция (или субстанция), используемая для снижения уровня холестерина в крови у млекопитающего, предпочтительно, может содержать Brassica spp., например, разновидности рапса, морские водоросли/водоросли или сочетание Brassica spp., например, разновидностей рапса, и морских водорослей/водорослей.

Уровень общего холестерина представляет собой общее количество холестерина в крови. Общий холестерин включает липопротеины низкой плотности (ЛНП), также называемые «плохим» холестерином, который является холестерином, блокирующим кровеносные сосуды и повышающим риск сердечных заболеваний. Он также включает липопротеины высокой плотности (ЛВП), «хороший» холестерин, который способствует защите от сердечных заболеваний. Чем выше уровень ЛВП, тем лучше. Общий холестерин также включает триглицериды. Эти триглицериды представляют собой другой тип жира, который может накапливаться в теле. Высокие уровни триглицеридов и низкие уровни ЛВП увеличивают риск сердечных заболеваний.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция (или субстанция) по настоящему изобретению может вызывать снижение концентрации общего холестерина в крови млекопитающего. Предпочтительно, концентрация общего холестерина может быть снижена, в сравнении с концентрацией общего холестерина у млекопитающих, не принимающих препараты для снижения уровня холестерина, на по меньшей мере 2%, например, по меньшей мере 5%, например, по меньшей мере 10%, например, по меньшей мере 15%, например, по меньшей мере 20%, например, по меньшей мере 25%, например, по меньшей мере 30%.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения снижение уровня общего холестерина может быть достигнуто путем введения одной дозы в сутки ферментированной композиции (или субстанции) по настоящему изобретению в течение 200 дней или менее, например, 150 дней или менее, например, 100 дней или менее, например, 75 дней или менее, например, 50 дней или менее, например, 40 дней или менее, например, 30 дней или менее, например, 20 дней или менее, например, 10 дней или менее.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция (или субстанция), используемая для снижения уровня общего холестерина у млекопитающего, предпочтительно, может содержать Brassica spp., например, разновидности рапса, морские водоросли/водоросли или сочетание Brassica spp., например, разновидностей рапса, и морских водорослей/водорослей.

ЛНП-холестерин считается «плохим» холестерином, поскольку частицы ЛНП представляют опасность для здоровья, способствуя возникновению сердечно-сосудистых заболеваний, когда они проникают в эндотелий и окисляются. Увеличение концентраций частиц ЛНП сильно коррелирует со степенью накопления атеросклеротических бляшек в стенках артерий с течением времени. Известно, что увеличение концентраций ЛНП приводит к увеличению частоты и риска развития, например, сердечно-сосудистых заболеваний, инсульта и других осложнений сосудистых заболеваний.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция (или субстанция) по настоящему изобретению может вызывать снижение концентрации ЛНП-холестерина в крови млекопитающего. Предпочтительно, концентрация ЛНП-холестерина может быть снижена, в сравнении с концентрацией ЛНП-холестерина у млекопитающих, не принимающих препараты для снижения уровня холестерина, на по меньшей мере 10%, например, по меньшей мере 15%, например, по меньшей мере 20%, например, по меньшей мере 25%, например, по меньшей мере 30%, например, по меньшей мере 35%, например, по меньшей мере 40%, например, по меньшей мере 45%, например, по меньшей мере 50%, например, по меньшей мере 60%, например, по меньшей мере 70%.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения снижение уровня ЛНП-холестерина может быть достигнуто путем введения одной дозы в сутки ферментированной композиции (или субстанции) по настоящему изобретению в течение 200 дней или менее, например, 150 дней или менее, например, 100 дней или менее, например, 75 дней или менее, например, 50 дней или менее, например, 40 дней или менее, например, 30 дней или менее, например, 20 дней или менее, например, 10 дней или менее.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция (или субстанция), используемая для снижения уровня ЛНП-холестерина у млекопитающего, предпочтительно, может содержать Brassica spp., например, разновидности рапса, морские водоросли/водоросли или сочетание Brassica spp., например, разновидностей рапса, и морских водорослей/водорослей.

ЛВП-холестерин называют «хорошим» холестерином или «здоровым» холестерином, поскольку он может способствовать выведению молекул жира из стенок артерий, уменьшению накопления макрофагов и, таким образом, способствовать предотвращению или даже регрессу атеросклероза и снижению частоты возникновения и риска, например, сердечно-сосудистых заболеваний, инсульта и других осложнений сердечно-сосудистых заболеваний.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция (или субстанция) по настоящему изобретению может способствовать поддержанию уровня или даже увеличению концентрации ЛВП-холестерина в крови млекопитающего. Предпочтительно, концентрация ЛВП-холестерина может быть повышена, в сравнении с концентрацией ЛНП-холестерина у млекопитающих, не принимающих препараты для снижения уровня холестерина, на по меньшей мере 2%, например, по меньшей мере 5%, например, по меньшей мере 8%, например, по меньшей мере 10%, например, по меньшей мере 15%, например, по меньшей мере 20%, например, по меньшей мере 25%, например, по меньшей мере 30%.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения поддержание или увеличение уровня ЛВП-холестерина может быть достигнуто путем введения одной дозы в сутки ферментированной композиции (или субстанции) по настоящему изобретению в течение 200 дней или менее, например, 150 дней или менее, например, 100 дней или менее, например, 75 дней или менее, например, 50 дней или менее, например, 40 дней или менее, например, 30 дней или менее, например, 20 дней или менее, например, 10 дней или менее.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция (или субстанция), используемая для поддержания или увеличения уровня ЛВП-холестерина у млекопитающего, предпочтительно, может содержать Brassica spp., например, разновидности рапса, морские водоросли/водоросли или сочетание Brassica spp., например, разновидностей рапса, и морских водорослей/водорослей.

Триглицериды представляют собой форму, в которой большая часть жира существует в пищевых продуктах и в организме. Была обнаружена связь высоких уровней триглицеридов, присутствующих в кровотоке у человека, с атеросклерозом и, как следствие, с риском сердечных заболеваний и инсульта.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция (или субстанция) по настоящему изобретению может вызывать снижение концентрации триглицеридов в крови млекопитающего. Предпочтительно, концентрация триглицеридов может быть снижена, в сравнении с концентрацией триглицеридов у млекопитающих, не принимающих композицию (или субстанцию) по настоящему изобретению, на по меньшей мере 10%, например, по меньшей мере 15%, например, по меньшей мере 20%, например, по меньшей мере 25%, например, по меньшей мере 30%, например, по меньшей мере 35%, например, по меньшей мере 40%, например, по меньшей мере 45%, например, по меньшей мере 50%, например, по меньшей мере 60%, например, по меньшей мере 70%.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения снижение уровня триглицеридов в крови может быть достигнуто путем введения одной дозы в сутки ферментированной композиции (или субстанции) по настоящему изобретению в течение 200 дней или менее, например, 150 дней или менее, например, 100 дней или менее, например, 75 дней или менее, например, 50 дней или менее, например, 40 дней или менее, например, 30 дней или менее, например, 20 дней или менее, например, 10 дней или менее.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция (или субстанция), используемая для снижения уровня триглицеридов у млекопитающего, предпочтительно, может содержать Brassica spp., например, разновидности рапса, морские водоросли/водоросли или сочетание Brassica spp., например, разновидностей рапса, и морских водорослей/водорослей.

AST (аспартатаминотрансферазу), ALT (аланинаминотрансферазу) и ALP (щелочную фосфатазу) традиционно используют в качестве биомаркеров повреждения печени. Повышение уровней AST, ALT и/или ALP является показателем повреждения печени. Для получения информации о состоянии печени у пациента проводят тесты на функцию печени. Большинство повреждений печени или заболеваний печени исходно проявляются лишь слабыми симптомами, однако эти заболевания должны быть обнаружены как можно раньше.

Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что уровни AST (аспартатаминотрансферазы), ALT (аланинаминотрансферазы) и ALP (щелочной фосфатазы) были значительно снижены у пациентов, принимающих ферментированную композицию (или субстанцию) по настоящему изобретению.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция (или субстанция) по настоящему изобретению может вызывать снижение концентрации AST и/или ALT, и/или ALP в крови млекопитающего. Предпочтительно, концентрация общего холестерина может быть снижена, в сравнении с концентрацией общего холестерина у млекопитающих, не принимающих препараты для снижения уровня холестерина, на по меньшей мере 2%, например, по меньшей мере 5%, например, по меньшей мере 10%, например, по меньшей мере 15%, например, по меньшей мере 20%, например, по меньшей мере 25%, например, по меньшей мере 30%.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения снижение уровня AST и/или ALT, и/или ALP может быть достигнуто путем введения одной дозы в сутки ферментированной композиции (или субстанции) по настоящему изобретению в течение 200 дней или менее, например, 150 дней или менее, например, 100 дней или менее, например, 75 дней или менее, например, 50 дней или менее, например, 40 дней или менее, например, 30 дней или менее, например, 20 дней или менее, например, 10 дней или менее.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментированная композиция (или субстанция), используемая для снижения уровней AST и/или ALT, и/или ALP в крови млекопитающего, предпочтительно, может содержать Brassica spp., например, разновидности рапса, морские водоросли/водоросли или сочетание Brassica spp., например, разновидностей рапса, и морских водорослей/водорослей.

Одним из последствий повреждения печени является гипертензия, также известная как высокое кровяное давление (ВКД). Вследствие упомянутых благоприятных эффектов на печень снижение кровяного давления может быть достигнуто у пациентов, принимающих ферментированную композицию (или субстанцию) по настоящему изобретению. Некоторые из этих эффектов могут быть достигнуты в случае хронического медицинского состояния, при котором кровяное давление в артериях постоянно повышено. Сохраняющееся длительное время высокое кровяное давление является основным фактором риска для болезни коронарных артерий, инсульта, сердечной недостаточности, болезни периферических сосудов, потери зрения и хронической почечной недостаточности.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения одна доза, или единичная доза, составляет 50 грамм ферментированного продукта по настоящему изобретению или менее, например, 40 грамм или менее, например, 30 грамм или менее, например, 25 грамм или менее, например, 20 грамм или менее, например, 15 грамм или менее, например, 10 грамм или менее.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения субстанция и/или ферментированная композиция может быть использована в качестве вспомогательного препарата в сочетании с одним или более другими лекарственными средствами.

Один из аспектов настоящего изобретения относится к комбинированному препарату, включающему:

(a) ферментированную композицию по настоящему изобретению, или субстанцию по настоящему изобретению; и

(b) одно или более лекарственных средств.

Без связи с какой-либо теорией, ферментированная композиция и/или субстанция может выполнять двойную функцию в комбинированном препарате по настоящему изобретению. Двойная функция может заключаться в первом аспекте - в лечении, стабилизации и/или ослаблении, и/или во втором аспекте - в профилактике заболеваний, патологических состояний и/или травм у млекопитающего.

Следует отметить, что варианты осуществления и признаки, описанные в контексте одного из аспектов настоящего изобретения, также применимы и к другим аспектам изобретения.

Далее изобретение будет описано более подробно в следующих неограничивающих примерах.

ПРИМЕРЫ

Пример 1

Получение ферментированной композиции, содержащей семена рапса, по настоящему изобретению.

В качестве примера по настоящему изобретению смешивали примерно 80% муки из семян рапса (со средним диаметром примерно 2 мм), примерно 14% пшеничных и 1% картофельных хлопьев (источник овощей) и 5% Perlac (источник углеводов) в ферментационном чане. Содержание влаги доводили до примерно 40% и добавляли сочетание продуцирующих молочную кислоту бактерий Pediococcus pentosaceus, Pediococcus acidilactici и Lactobacillus plantarum. Поступление воздуха в ферментационный чан происходило непосредственно из воздуха в комнате, в которой находился ферментационный чан. Ингредиенты смешивали при комнатной температуре, и температура медленно повышалась из-за тепла, выделяемого при ферментации, до стабильной температуры, составляющей примерно 42°C.

Через 20 часов ферментации ферментационный бульон имел значение pH 4,2 и концентрацию молочной кислоты примерно 140 мМ. Ферментированная композиция содержала бактерии в количестве 3,6×10⁶ КОЕ/грамм, и анализ ферментированной композиции показал, что было продуцировано очень небольшое количество уксусной кислоты и этанола, таким образом, смесь считали на 95-100% гомоферментативной. Содержание глюкозинолатов после ферментации составляло 16,5 мкмоль/г, следовательно, примерно 50% глюкозинолатов, естественным образом присутствующих в муке из семян рапса, было сохранено.

Полученную ферментированную композицию сушили в центробежной распылительной сушилке для сохранения молочнокислых бактерий и поддержания высокого количества жизнеспособных клеток.

Пример 2

Способ по настоящему изобретению для получения ферментированной композиции, содержащей сочетание из 20% морских водорослей (Laminaria saccharina) и 80% муки из семян рапса.

Морские водоросли (Laminaria saccharina) предварительно измельчали до достижения среднего диаметра примерно 1 мм, смешивали с сочетанием продуцирующих молочную кислоту бактерий Pediococcus pentosaceus, Pediococcus acidilactici и Lactobacillus plantarum в ферментационном чане и доводили содержание влаги до примерно 40%. Поступление воздуха в ферментационный чан происходило непосредственно из воздуха в комнате, в которой находился ферментационный чан. Ферментацию проводили при температуре примерно 30°C.

После 3 дней ферментации морских водорослей муку из семян рапса, которые были предварительно измельчены до диаметра примерно 2 мм, добавляли к ферментированной композиции, содержащей морские водоросли, в соотношении муки из семян рапса и морских водорослей, составляющем 80:20 (по массе), вместе с сочетанием продуцирующих молочную кислоту бактерий Pediococcus pentosaceus, Pediococcus acidilactici и Lactobacillus plantarum, в ферментационном чане и ферментацию продолжали в течение 3 дней при 25°C. Полученный ферментационный бульон имел содержание бактерий 3,0×10⁶ КОЕ/грамм, pH 4,2 и концентрацию молочной кислоты примерно 140 мМ.

Полученную ферментированную композицию, содержащую сочетание морских водорослей, муки из семян рапса и молочнокислых бактерий, сушили в центробежной распылительной сушилке для сохранения молочнокислых бактерий и поддержания высокого количества жизнеспособных клеток.

Пример 3

2 пациента, страдающие аллергией на глютен, и 1 пациент, страдающий непереносимостью лактозы, принимали примерно 25 г ферментированной композиции, полученной в примере 1, в сутки. После приема ферментированной композиции никто из пациентов не испытывал какого-либо дискомфорта или аллергических реакций, и все три пациента могли принимать пищу без ограничений. Один пациент прекратил прием ферментированной композиции, и аллергическая реакция возобновилась. После возобновления приема ферментированной композиции пациент перестал испытывать дискомфорт или аллергические реакции и вновь смог принимать пищу без ограничений.

Пример 4

8 пациентов, страдающих запором, принимали одну дозу примерно 25 г ферментированной композиции, полученной в примере 1. Через 1-3 часа все три пациента почувствовали облегчение, и дефекация у них перестала вызывать затруднение.

Пример 5

1 пациент, страдающий диареей вследствие бактериальной инфекции, вызванной E. coli, принимал одну дозу 20 г ферментированной композиции, полученной в примере 1. Через 2 часа стул у пациента стал более твердым и самочувствие пациента улучшилось. Через 10 часов стул опять стал жидким и симптомы диареи возобновились. Пациент принял еще 20 г ферментированной композиции, полученной в примере 1, и вновь стул у пациента стал более твердым, и пациент почувствовал себя лучше.

Пример 6

2 пациента, страдающие диареей из-за воспалительного заболевания кишечника (IBD), болезни Крона, и 2 пациента, страдающие воспалительным заболеванием кишечника (IBD), язвенным колитом, не отвечающие на традиционные методы лечения, принимали одну дозу 15 г ферментированной композиции, полученной в примере 2. Через 2 часа стул у пациентов стал более твердым и самочувствие пациентов улучшилось, со значительным уменьшением боли в животе.

Пример 7

1 пациент в возрасте 58 лет, страдающий ассоциированным с HLA B27 спондилоартритом, псориатическим артритом, в течение примерно 4½ лет получал обычно назначаемое лечение, включающее применение DMARD (модифицирующих течение заболевания противоревматических лекарственных средств), таких как анти-TNF-альфа антитело и метотрексат.

Пациенту вводили единичную суточную дозу 5-10 грамм сухой ферментированной композиции, полученной в примере 2, наряду с полной дозой обычно назначаемых препаратов DMARD, анти-TNF-альфа антитела и метотрексата.

На протяжении 4½ лет лечения обычно назначаемыми препаратами уровни CRP колебались от примерно 20 мг/л до примерно 110 мг/л. Однако через 17 дней дополнения обычно назначаемых препаратов ферментированной композицией уровень CRP у пациента снизился до примерно 3 мг/л и нормализовался (смотри фигуру 1). Более того, показатель площади поражения и индекса степени тяжести псориаза (PASI) уменьшился на примерно 70%.

Пример 8

Были проведены лабораторные эксперименты по сравнению антибактериальных эффектов разных композиций в отношении грамположительных бактерий Clostridium perfringens. Тестировали три композиции:

1) композицию по настоящему изобретению, в которой растительный материал представлял собой морские водоросли, измельченные и суспендированные в воде в концентрации 0,25 г/мл. После интенсивного перемешивания твердые вещества и супернатант использовали в тесте,

2) композицию по настоящему изобретению, в которой растительный материал представлял собой семена рапса, измельченные и суспендированные в воде в концентрации 0,25 г/мл. После интенсивного перемешивания твердые вещества и супернатант использовали в тесте,

3) контроль, представляющий собой воду.

Во все образцы добавляли примерно 10⁶ КОЕ/мл Clostridium perfringens с показателем мутности по Макфарланду примерно 0,5. Образцы инкубировали в течение примерно 24 часов при 37°C.

Визуальный анализ показал, что композиция, содержащая морские водоросли (1), ингибировала рост Clostridium perfringens, при этом рост Clostridium perfringens имел место как в образце, содержащем семена рапса (2), так и в контрольном образце, содержащем воду (3).

Пример 9

1 пациент, страдающий акне в тяжелой форме, принимал единичную дозу 20 г ферментированной композиции, полученной в примере 1. Через 14 дней высыпания на коже полностью исчезли.

Тот же пациент также страдал от хронических болей в спине. Однако после одного месяца лечения от акне ферментированной композицией из примера 1 боли в спине неожиданно полностью исчезли. После прекращения приема ферментированной композиции в течение одной недели боли в спине возобновились. После возобновления приема единичной суточной дозы 20 г ферментированного продукта из примера 1 боли в спине вновь прекратились.

Пример 10

Для выявления потенциальных различий продуктов с растительными экстрактами их подвергали нецелевому метаболомическому анализу методом жидкостной хроматографии сверхвысокого давления в сочетании с QTOF масс-спектроскопией (UPLC-QTOF-MS).

Хроматографию проводили на специализированной системе Dionex UltiMate^® 3000 Quaternary Rapid Separation UHPLC+ (Thermo Fisher Scientific, Germering, Germany).

Разделение выполняли на колонке Kinetex 1.7u XB-C18 (100×2,1 мм, 1,7 мкм, 100 Å, Phenomenex, Torrance, CA, USA). Муравьиную кислоту (0,05%) в воде и ацетонитрил (с добавлением 0,05% муравьиной кислоты) использовали в качестве подвижных фаз A и B, соответственно.

Условия градиента были следующими: 0,0-0,5 мин, 2% B; 0,5-14,0 мин 2-20% B; 14,0-20,0 мин 20-45% B, 20,0-24,5 мин 45-100% B, 24,5-26,5 мин 100%, 26,5-26,55 мин 100-2% B и 26,55-30,0 мин 2% B. Скорость потока подвижной фазы составляла 300 мкл⋅мин^-1. Температуру колонки поддерживали на уровне 25°C. Мониторинг при четырех длинах волн (205 нм, 220 нм, 250 нм и 390 нм) проводили при помощи детектора в УФ-видимой области.

Система жидкостной хроматографии была соединена с компактным масс-спектрометром micrOTOF-Q (Bruker, Bremen, Germany), оснащенным электрораспылительным источником ионов (ESI), действующим в режиме регистрации положительных и отрицательных ионов. Напряжение при распылении ионов поддерживали на уровне -3900 В в режиме регистрации отрицательных ионов. Температуру сушки устанавливали на 250°C и поток сухого газа устанавливали на уровне 8 л⋅мин^-1. Устанавливали давление распыляющего газа на 2,5 бар и энергию столкновения на 15 эВ. Азот использовали в качестве сухого газа, распыляющего газа и газа для соударений.

Диапазон m/z устанавливали на 50-1400. Использовали режим AutoMSMS для получения MS и MS/MS спектров трех наиболее распространенных ионов, присутствующих в каждый момент времени, с разумным исключением для дополнительного охвата менее представленных ионов. Все файлы были откалиброваны на основе спектров соединений, полученных от Na+-формиатных комплексов, в начале каждого эксперимента.

Экстракт образцов в метаноле (80% метанол) разновидностей рапса (семян рапса) по настоящему изобретению, морских водорослей (Laminaria spp.) по настоящему изобретению, сочетания разновидностей рапса (семян рапса) и морских водорослей (Laminaria spp.) по настоящему изобретению, не ферментированных разновидностей рапса (семян рапса) и не ферментированных морских водорослей (Laminaria spp.) пропускали в режиме autoMSMS для получения MS и MS/MS спектров молекул, присутствующих в разных экстрактах. Диапазон m/z устанавливали на 50-1400. Na⁺-формиатные комплексы использовали в качестве калибрующего вещества и инжектировали в начале пропускания каждого образца. Все файлы были автоматически откалиброваны на основе спектров соединений, полученных от Na+-формиатных комплексов, в процессе последующей обработки данных.

Результаты

Анализ ферментированного комбинированного продукта (рапса и морских водорослей) показал наличие преобладающего пика с «отношением массы к заряду» (m/z), составляющим (в режиме регистрации отрицательных ионов):

масса MS1=311,2228

массы MS2=223,1694; 87,0436; 235,1666; 224,1725; 275,2005

время удержания: 22,52 мин (в заданных условиях).

По оценкам, данное соединение представляет собой жирную кислоту, в частности, модифицированную жирную кислоту.

Было установлено, что второй преобладающий пик имел «отношение массы к заряду» (m/z), составляющее (в режиме регистрации отрицательных ионов):

масса MS1=225,0772

время удержания: 11,86 мин (в заданных условиях).

На основании сравнительных исследований с чистыми образцами HDMPPA было показано, что этот второй преобладающий пик представляет собой HDMPPA.

Анализ ферментированного рапса показал наличие преобладающего пика с «отношением массы к заряду» (m/z), составляющим (в режиме регистрации отрицательных ионов):

масса MS1=225,0772

время удержания 11,86 мин (в заданных условиях).

На основании сравнительных исследований с чистыми образцами HDMPPA было показано, что этот второй преобладающий пик представляет собой HDMPPA.

Анализ ферментированных морских водорослей (Laminaria spp.), ферментированного рапса (семян рапса), не ферментированных морских водорослей (Laminaria spp.) и не ферментированного рапса (семян рапса) не показал наличия каких-либо значительных пиков, аналогичных приведенным выше результатам (смотри фигуры 2 и 3).

Как видно из хроматограммы на фигуре 2, может быть получено значительное количество HDMPPA (3-(4'-гидроксил-3',5'-диметоксифенил)пропионовой кислоты) в ферментированных семенах рапса/морских водорослях (1) и ферментированных семенах рапса (2), в сравнении с не ферментированными семенами рапса (3). Данная хроматограмма показывает, что ферментированные семена рапса/морские водоросли (1) содержат значительно больше HDMPPA в сравнении с ферментированными семенами рапса (2), которые содержат значительно больше HDMPPA в сравнении с не ферментированными семенами рапса (2).

Как видно из хроматограммы на фигуре 3, соединение может быть обнаружено в значительных количествах в ферментированных семенах рапса/морских водорослях (1), в то время как в ферментированных семенах рапса (2), не ферментированных морских водорослях (3) и не ферментированных семенах рапса (4) соединение отсутствует или присутствует в незначительных количествах. В сочетании с дополнительным анализом молекулярных масс MS1 и MS2 ферментированных семян рапса/морских водорослей (1) было установлено, что соединение, обнаруженное в ферментированных семенах рапса/морских водорослях (1), в сравнении с ферментированными семенами рапса (2), не ферментированными морскими водорослями (3) и не ферментированными семенами рапса (4), представляло собой молекулу жирной кислоты, такую как молекула модифицированной жирной кислоты.

Пример 11

Эффект ферментированной композиции по настоящему изобретению на уровень холестерина и повреждение печени тестировали на двух разных породах свиней: 1) породе «польская большая белая» и 2) породе «польская ландрас». Тесты проводили на беременных и лактирующих свиноматках.

Были составлены следующие группы на основании породы свиней и получаемого корма:

K1 Беременные: свиноматки породы «польская большая белая», получающие обычный корм без ферментированной композиции.

K2 Беременные: свиноматки породы «польская ландрас», получающие обычный корм без ферментированной композиции.

K1 Лактирующие: свиноматки породы «польская большая белая», получающие обычный корм без ферментированной композиции.

K2 Лактирующие: свиноматки породы «польская ландрас», получающие обычный корм без ферментированной композиции.

D1 Беременные: свиноматки породы «польская большая белая», получающие смешанный корм, содержащий 4% ферментированной композиции, полученной в примере 1.

D2 Беременные: свиноматки породы «польская ландрас», получающие смешанный корм, содержащий 4% ферментированной композиции, полученной в примере 1.

D1 Лактирующие: свиноматки породы «польская большая белая», получающие смешанный корм, содержащий 4% ферментированной композиции, полученной в примере 1.

D2 Лактирующие: свиноматки породы «польская ландрас», получающие смешанный корм, содержащий 4% ферментированной композиции, полученной в примере 1.

Через 150 дней кормления у животных собирали образцы крови и анализировали на:

Концентрацию общего холестерина

Концентрацию ЛНП-холестерина

Концентрацию ЛВП-холестерина

Концентрацию триглицеридов

Концентрацию AST

Концентрацию ALT

Концентрацию ALP.

Данные по содержанию холестерина и жира

Результаты определения общего холестерина, ЛНП-холестерина, ЛВП-холестерина и триглицеридов приведены на фигуре 4.

Неожиданно было обнаружено (смотри фигуру 4, темные столбики и стрелки), что уровень общего холестерина был значительно снижен у свиноматок независимо от породы и от того, были ли свиноматки лактирующими или беременными. Кроме того, похоже, что снижение уровня было более выражено у животных породы «польская большая белая», чем породы «польская ландрас», и у лактирующих свиноматок, чем у беременных свиноматок. У беременных свиноматок породы «польская большая белая», получающих композицию, полученную в примере 1, имело место снижение уровня общего холестерина (A) на 15%, при этом у беременных свиноматок породы «польская ландрас», получающих композицию, полученную в примере 1, имело место снижение уровня общего холестерина (B) только на 10%. Однако наиболее значительное снижение было достигнуто в случае лактирующих свиноматок породы «польская большая белая», получающих композицию, полученную в примере 1, у которых имело место снижение уровня общего холестерина (C) на 25%.

Что касается ЛНП-холестерина, авторы изобретения неожиданно обнаружили, что концентрация ЛНП-холестерина («плохого» холестерина) была значительно снижена у свиноматок, независимо от породы и от того, были ли свиноматки лактирующими или беременными (смотри фигуру 4, горизонтально заштрихованные столбики и стрелки). Кроме того, похоже, что снижение уровня было более выражено у животных породы «польская большая белая», чем породы «польская ландрас», и у лактирующих свиноматок, чем у беременных свиноматок. У беременных свиноматок породы «польская большая белая», получающих композицию, полученную в примере 1, имело место снижение уровня ЛНП-холестерина (G) на 58%, при этом у беременных свиноматок породы «польская ландрас», получающих композицию, полученную в примере 1, имело место снижение уровня ЛНП-холестерина (H) только на 36%. Однако наиболее значительное снижение было достигнуто в случае лактирующих свиноматок породы «польская большая белая», получающих композицию, полученную в примере 1, у которых имело место снижение уровня ЛНП-холестерина (J) на 72%, и у лактирующих свиноматок породы «польская ландрас», получающих композицию, полученную в примере 1, имело место снижение уровня ЛНП-холестерина (K) на 49%.

Что касается триглицеридов, авторы изобретения обнаружили, что концентрация триглицеридов также была значительно снижена у свиноматок, независимо от породы и от того, были ли свиноматки лактирующими или беременными (смотри фигуру 4, пестрые столбики и стрелки). У беременных свиноматок породы «польская ландрас», получающих композицию, полученную в примере 1, имело место снижение концентрации триглицеридов (D) только на 21%; у лактирующих свиноматок породы «польская большая белая», получающих композицию, полученную в примере 1, имело место снижение концентрации триглицеридов (E) на 28%, и у лактирующих свиноматок породы «польская ландрас», получающих композицию, полученную в примере 1, имело место снижение концентрации триглицеридов (F) на 38%.

Следующим удивительным открытием, сделанным авторами настоящего изобретения, было то, что в крови у свиноматок, получающих смешанный корм, содержащий композицию, полученную в примере 1, наблюдалось сохранение и даже повышение концентрации ЛВП-холестерина («хорошего» холестерина).

Тест показал (смотри фигуру 4, вертикально заштрихованные столбики и стрелки), что у беременных свиноматок породы «польская большая белая», получающих композицию, полученную в примере 1, имело место повышение уровня ЛВП-холестерина на 3%, у беременных свиноматок породы «польская ландрас», получающих композицию, полученную в примере 1, имело место повышение уровня ЛВП-холестерина на 10%, у лактирующих свиноматок породы «польская большая белая», получающих композицию, полученную в примере 1, имело место повышение уровня ЛВП-холестерина на 10% и у лактирующих свиноматок породы «польская ландрас», получающих композицию, полученную в примере 1, имело место повышение уровня ЛВП-холестерина на 35%.

Таким образом, ферментированная композиция (или субстанция) по настоящему изобретению проявляет высокую активность в снижении концентрации жира и частиц «плохого» холестерина, в то время как концентрация частиц «хорошего» холестерина повышается, при этом другие побочные эффекты от средств, снижающих уровень холестерина, отсутствуют. Такие побочные эффекты могут включать проблемы с кишечником, повреждение печени, мышечное воспаление, высокий уровень сахара в крови и диабет 2 типа.

Данные анализа повреждения печени

Результаты определения концентраций AST, ALT и ALP приведены ниже в таблице 1.

Показатель	K1	D1	P-значение	K2	D2	P-значение	KxD
			БЕРЕМЕННЫЕ СВИНОМАТКИ
AST (Ед/л)	32,45	24,80	0,032	44,31	38,85	0,039	0,018
ALT (Ед/л)	41,31	33,45	0,041	62,58	60,61	0,410	0,043
ALP (Ед/л)	175,67	169,99	0,231	125,43	130,52	0,309	0,032
	ЛАКТИРУЮЩИЕ СВИНОМАТКИ
AST (Ед/л)	26,44	16,17	0,023	44,33	27,60	0,028	0,025
ALT (Ед/л)	29,42	24,89	0,058	23,74	20,55	0,122	0,042
ALP (Ед/л)	152,45	119,29	0,032	130,42	91,94	0,036	0,036

Таблица 1. Показатели AST, ALT и ALP у лактирующих и беременных свиноматок разных пород, получающих или не получающих с кормом ферментированную композицию, полученную в примере 1.

Как видно из таблицы 1, у свиноматок, получающих смешанный корм, содержащий 4% ферментированной композиции, полученной в примере 1, значительно снижались концентрации биомаркеров AST и ALT. Уровни ALP в крови могут повышаться в случае обструкции желчных протоков, внутрипеченочного холестаза или инфильтративного заболевания печени, однако при кормлении композицией, полученной в примере 1, уровень ALP также значительно снижался.

Таким образом, ферментированная композиция (или субстанция) по настоящему изобретению проявляет высокую активность в снижении концентрации AST, ALT и ALP, и при этом можно избегать других побочных эффектов от обычно используемых препаратов.

Литература

WO 2013/029632

WO 2014/131422

WO 2014/206419

Jin-Woo Jeong et al., Journal of Medicinal Food, 18 (6) 2015, 677-684

Hyun Ju Kim et al., J. Agric. Food Chem., 2007, 55, 10486-10492

Jeong sook Noh et al., British Journal of Nutrition, (2013), 109, 17-24

Ye-Rang Yun et al., Journal of Medicinal Food, 17 (8) 2014, 886-893.

1. Применение субстанции для получения медикамента для лечения кишечного заболевания, где субстанция содержит ферментированную композицию, содержащую по меньшей мере один ферментированный растительный материал, ферментированные морские водоросли или водоросли и один или более штаммов молочнокислых бактерий, где по меньшей мере один ферментированный растительный материал представляет собой один или более Brassica spp. и ферментированные морские водоросли или водоросли представляют собой бурые водоросли, а один или более штаммов молочнокислых бактерий представляют собой пробиотические бактерии.

2. Применение субстанции для получения медикамента для лечения, ослабления, стабилизации или профилактики кишечного заболевания у млекопитающего, такого как человек или животное, которая содержит ферментированную композицию, содержащую сочетание ферментированного растительного материала и ферментированных морских водорослей или водорослей и один или более штаммов молочнокислых бактерий, где по меньшей мере один ферментированный растительный материал представляет собой один или более Brassica spp. и ферментированные морские водоросли или водоросли представляют собой бурые водоросли, а один или более штаммов молочнокислых бактерий представляют собой пробиотические бактерии.

3. Применение по п. 2, где кишечное заболевание у млекопитающего может быть выбрано из группы, состоящей из аутовоспалительных заболеваний, таких как спондилоартропатия, спондилоартрит, в частности, псориатическая артропатия или псориатический артрит; склероза, такого как системная склеродермия; аллергии или непереносимости, такой как аллергия/непереносимость глютена и/или аллергия/непереносимость лактозы; запора; активации кишечной микрофлоры; усталости, такой как синдром хронической усталости; воспаления; диареи; стимуляции кишечной микрофлоры ребенка до и после рождения; воспалительных заболеваний кишечника, таких как болезнь Крона или язвенный колит у млекопитающего; бактериальных инфекций, таких как инфекции, вызываемые грамположительными бактериями, в частности, Staphylococcus, предпочтительно Staphylococcus aureus; и/или Clostridium, предпочтительно Clostridium perfringens или Clostridium difficile; кожных заболеваний, таких как ладонно-подошвенный пустулез, акне, розацеа и/или ринофима; диабета 2 типа и/или боли в спине с подтвержденными и не подтвержденными рентгенографией патологическими изменениями позвоночника (I и II).

4. Применение по любому из пп. 2, 3, где указанный по меньшей мере один Brassica spp. выбран из одного или более видов, таких как Brassica napus; Brassica oleracea; Brassica campestris и/или Brassica rapa.

5. Применение субстанции в качестве снижающего уровень холестерина в крови средства, где субстанция содержит ферментированную композицию, содержащую по меньшей мере один ферментированный растительный материал, ферментированные морские водоросли или водоросли и один или более штаммов молочнокислых бактерий, где по меньшей мере один ферментированный растительный материал представляет собой один или более Brassica spp. и ферментированные морские водоросли или водоросли представляют собой бурые водоросли, а один или более штаммов молочнокислых бактерий представляют собой пробиотические бактерии.

6. Применение по любому из пп. 1-5, где субстанция представляет собой вспомогательный препарат, используемый совместно с одним или более другими лекарственными средствами.

7. Применение по любому из пп. 1-6, где ферментированная композиция имеет значение pH ниже 6,5, например, ниже pH 6,0, например, ниже pH 5,5, например, ниже pH 5,0, например, в диапазоне pH 3,0-6,5, например, в диапазоне pH 3,0-6,0, например, в диапазоне pH 3,1-5,5, например, в диапазоне pH 5,0-3,2, например, в диапазоне 3,3-4,2, например, 3,4-4,0, например, 3,5-3,8, например, 3,7-4,2, например, 3,7-4,0 или, например, 3,8-4,2.

8. Применение по любому из пп. 1-7, где ферментированная композиция имеет концентрацию молочной кислоты по меньшей мере 50 мМ, например, по меньшей мере 100 мМ, например, 100-1000 мМ, например, 100-500 мМ, например, 100-300 мМ, например, 100-200 мМ, например, 150-500 мМ, например, 200-500 мМ или, например, 300-500 мМ.

9. Применение по любому из пп. 1-8, где бурые водоросли выбраны из келп, Laminaria saccharina, Laminaria digitata и/или Laminaria hyperborean.

10. Применение по любому из пп. 1-9, где один или более штаммов молочнокислых бактерий выбирают из группы, состоящей из рода Enterococcus, Lactobacillus, Pediococcus или Lactococcus, или их сочетаний.

11. Применение по любому из пп. 1-10, где ферментированная композиция получена путем гомолактической ферментации.

12. Применение субстанции в качестве снижающего уровень триглицеридов в крови средства, где субстанция содержит ферментированную композицию, содержащую по меньшей мере один ферментированный растительный материал, ферментированные морские водоросли или водоросли и один или более штаммов молочнокислых бактерий, где по меньшей мере один ферментированный растительный материал представляет собой один или более Brassica spp. и ферментированные морские водоросли или водоросли представляют собой бурые водоросли, а один или более штаммов молочнокислых бактерий представляют собой пробиотические бактерии.

13. Применение субстанции в качестве уменьшающего повреждение печени, где субстанция содержит ферментированную композицию, содержащую по меньшей мере один ферментированный растительный материал, ферментированные морские водоросли или водоросли и один или более штаммов молочнокислых бактерий, где по меньшей мере один ферментированный растительный материал представляет собой один или более Brassica spp. и ферментированные морские водоросли или водоросли представляют собой бурые водоросли, а один или более штаммов молочнокислых бактерий представляют собой пробиотические бактерии.