Композиции и способы ингибирования экспрессии генов аполипопротеина c-iii (apoc3)

Изобретение относится к области биотехнологии. Описана группа изобретений, включающая конъюгат для ингибирования экспрессии гена аполипопротеина C-III (APOC3), содержащий двухцепочечную рибонуклеиновую кислоту (дцРНК) и лиганд, фармацевтическую композицию для ингибирования экспрессии гена APOC3, способ ингибирования экспрессии APOC3 в клетке и способ лечения нарушения, опосредованного экспрессией APOC3. Изобретение расширяет арсенал средств для ингибирования экспрессии гена аполипопротеина C-III (APOC3). 4 н. и 9 з.п. ф-лы, 4 ил., 11 табл., 7 пр.

 

Перекрестная ссылка на родственные заявки

По данной заявке испрашивается приоритет предварительной патентной заявки № 61/499620, поданной 23 июня 2011, которая включена в настоящее описание посредством ссылки во всей своей полноте.

Ссылка на список последовательностей

Данная заявка включает список последовательностей, поданный электронно в виде текстового файла, названного 11111US_sequencelisting.txt, созданного в XX месяца 201X, с размером Χ00000 байт. Данный список последовательностей включен посредством ссылки.

Область техники, к которой относится настоящее изобретение

Настоящее изобретение относится к двухцепочечной рибонуклеиновой кислоте (дцРНК), мишенью которой является ген APOC3, и способам применения данной дцРНК для ингибирования экспрессии APOC3.

Предпосылки создания настоящего изобретения

В США 30% взрослых людей имеют повышенные уровни триглицеридов (ТГ) >150 мг/дл. Распространенность взрослых людей с тяжелой гипертриглицеридемией (ТГ>500 мг/дл) составляет 1,7%. Современное лечение включает изменение образа жизни (рацион, упражнения и прекращение курения), назначение высококачественного рыбьего жира, фибратов и ниацина.

ApoC3 представляет собой секретируемый белок печени, для которого показано, что он ингибирует липопротеинлипазы, которые гидролизуют ТГ до свободных жирных кислот; ингибирует ApoE-опосредованное поглощение печенью ТГ-обогащенных липопротеинов посредством LDLR и LRP, а также независимого от рецептора эндоцитоза; и способствует секреции в печени VLDL. По меньшей мере, одна мутация в человеческом гене APOC3 связана с благоприятной липидограммой. (Pollin TI et al. (2008) A null mutation in human APOC3 confers a favorable plasma lipid profile and apparent cardioprotection. Science. 322(5908):1702-5).

Показано, что двухцепочечные молекулы РНК (дцРНК) блокируют генную экспрессию высококонсервативным регуляторным механизмом, известным как РНК-интерференция (РНКи). В WO 99/32619 (Fire et al.) описано применение дцРНК, по меньшей мере, из 25 нуклеотидов в длину для ингибирования экспрессии генов в C. elegans. Также показано, что дцРНК разрушает РНК-мишень в других организмах, включая растения (см., например, WO 99/53050, Waterhouse et al.; и WO 99/61631, Heifetz et al.), Drosophila (см., например, Yang, D., et al., Curr. Biol. (2000) 10:1191-1200), и млекопитающих (см. WO 00/44895, Limmer; и DE 101 00 586.5, Kreutzer et al).

Сущность настоящего изобретения

Описанной в настоящем изобретении является двухцепочечная рибонуклеиновая кислота (дцРНК) для ингибирования экспрессии гена APOC3, где дцРНК содержит смысловую цепь и антисмысловую цепь, каждая из 30 нуклеотидов или менее в длину, где антисмысловая цепь содержит, по меньшей мере, 15 смежных нуклеотидов антисмысловой последовательности из таблицы 1, 2, 6, 7 или 10. В одном варианте осуществления дцРНК содержит смысловую цепь, состоящую из нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:70, и антисмысловую цепь, состоящую из нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:151 (AD-45149.1UM). В другом варианте осуществления последовательность смысловой цепи выбрана из таблицы 1, 2, 6, 7 или 10, и антисмысловая цепь выбрана из таблицы 1, 2, 6, 7 или 10.

В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере, один нуклеотид дцРНК представляет собой модифицированный нуклеотид, например, по меньшей мере, один модифицированный нуклеотид, выбранный из группы, состоящей из: 2'-O-метил-модифицированного нуклеотида, нуклеотида, содержащего 5'-фосфоротиоатную группу, и концевого нуклеотида, соединенного с холестериновым производным или группой на основе бисдециламида додекановой кислоты, 2'-дезокси-2'-фтор-модифицированного нуклеотида, 2'-дезокси-модифицированного нуклеотида, замкнутого нуклеотида, нуклеотида, не содержащего основания, 2'-амино-модифицированного нуклеотида, 2'-алкил-модифицированного нуклеотида, морфолинонуклеотида, фосфороамидата и нуклеотида, содержащего неприродное основание.

В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере, одна цепь содержит 3'-неспаренный конец, по меньшей мере, из 1 нуклеотида, или каждая цепь содержит 3'-неспаренный конец, по меньшей мере, из 2 нуклеотидов.

Любая дцРНК настоящего изобретения может дополнительно содержать лиганд, например, лиганд, который конъюгирован с 3'-концом смысловой цепи дцРНК. В некоторых вариантах осуществления дцРНК настоящего изобретения дополнительно содержит, по меньшей мере, один N-ацетилгалактозамин.

Кроме того, настоящее изобретение относится к клетке, содержащей любую дцРНК настоящего изобретения; вектору, кодирующему, по меньшей мере, одну цепь любой дцРНК настоящего изобретения, и клетке, содержащей вектор.

Также включенными в настоящее изобретение являются фармацевтические композиции для ингибирования экспрессии гена APOC3, содержащего любую дцРНК настоящего изобретения. Фармацевтическая композиция может содержать липидный состав, например, липидный состав, содержащий MC3.

Другой аспект настоящего изобретения представляет собой способ ингибирования экспрессии APOC3 в клетке, включающий: (a) приведение клетки в контакт с дцРНК APOC3 настоящего изобретения и (b) выдерживание клетки, полученной на стадии (a), в течение периода времени, достаточного для достижения разрушения мРНК транскрипта гена APOC3, посредством чего ингибируется экспрессия гена APOC3 в клетке. В некоторых вариантах осуществления экспрессия APOC3 ингибируется, по меньшей мере, на 30%.

Следующий аспект настоящего изобретения представляет собой способ лечения нарушения, опосредованного экспрессией APOC3, включающий введение человеку, нуждающемуся в данном лечении, терапевтически эффективного количества дцРНК APOC3 настоящего изобретения или фармацевтической композиции настоящего изобретения. Нарушение может представлять собой, например, повышенное содержание триглицеридов, например, уровень триглицеридов >150 мг/дл или >500 мг/дл. В некоторых вариантах осуществления введение вызывает увеличение активности липопротеинлипазы и/или липазы печени. дцРНК или фармацевтическую композицию можно вводить при дозе приблизительно от 0,01 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг или приблизительно от 0,5 мг/кг до приблизительно 50 мг/кг.

Описание фигур

На фиг.1 представлен график, показывающий воздействие на мРНК-мишени, уровни триглицеридов (ТГ) и суммарного холестерина у мышей после обработки киРНК, мишенью которой является APOC3 ("киРНК#1" и "киРНК#2").

На фиг.2 показана структура GalNAc.

На фиг.3 показана структура киРНК, конъюгированной с Chol-п-(GalNAc)3 через фосфатную связь на 3'-конце.

На фиг.4 показана структура киРНК, конъюгированной с LCO(GalNAc)3 (a(GalNAc)3-3'-литохолевый-олеоиловый киРНК конъюгат).

Подробное описание настоящего изобретения

Подробности одного или более вариантов осуществления настоящего изобретения изложены в описании ниже. Другие признаки, цели и преимущества настоящего изобретения будут ясны из описания и фигур, и из формулы изобретения.

Настоящее изобретение относится к дцРНК и способам применения дцРНК для ингибирования экспрессии гена APOC3 в клетке или млекопитающем, где мишенью дцРНК является ген APOC3. Настоящее изобретение также относится к композициям и способам лечения патологических состояний и нарушений у млекопитающего, вызванных экспрессией гена APOC3. дцРНК APOC3 направлена на специфическое к последовательности разрушение мРНК APOC3.

Определения

Для удобства, значения определенных терминов и фраз, применяемых в описании, примерах и прилагаемой формуле изобретения, даны ниже. Если есть явное расхождение между применением термина в других частях данного описания и его определением, приведенном в данном параграфе, определение в данном параграфе будет иметь преимущество.

Каждый "G," "C," "A" и "U" обычно обозначает нуклеотид, который содержит гуанин, цитозин, аденин и урацил в качестве основания, соответственно. "T" и "dT" применяют взаимозаменяемо в настоящем описании, и они относятся к дезоксирибонуклеотиду, в котором основанием нуклеотида является тимин, например, дезоксириботимин. Однако следует понимать, что термин "рибонуклеотид" или "нуклеотид", или "дезоксирибонуклеотид" может также относиться к модифицированному нуклеотиду, как дополнительно подробно описано ниже, или имитирующей заменяющей молекуле. Специалист в данной области техники хорошо осведомлен, что гуанин, цитозин, аденин и урацил может быть заменен другими молекулами по существу без изменения свойств спаривания оснований олигонуклеотида, содержащего нуклеотид, несущий данную заменяющую группу. Например, но без ограничения, нуклеотид, содержащий инозин в качестве его основания может образовывать пару с нуклеотидами, содержащими аденин, цитозин или урацил. Следовательно, нуклеотиды, содержащие урацил, гуанин или аденин можно заменять в нуклеотидных последовательностях настоящего изобретения нуклеотидом, содержащим, например, инозин. Последовательности, содержащие данные заменяющие группы, являются вариантами осуществления настоящего изобретения.

"APOC3" относится к гену аполипопротеина C-III. Согласно NCBI LM интернет-сайту, аполипопротеин C-III представляет собой белок липопротеина очень низкой плотности (VLDL). APOC3 ингибирует липопротеинлипазу и липазу печени; считают, что он задерживает катаболизм обогащенных триглицеридами частиц. Гены APOA1, APOC3 и APOA4 близко примыкают как в крысином, так и в человеческом геномах. Гены A-I и A-IV транскрибируются из одной цепи, тогда как гены A-I и C-III транскрибируются конвергентно. Увеличение уровня apoC-III вызывает развитие гипертриглицеридемии. Человеческая последовательность мРНК APOC3 представлена GenBank с номером доступа NM_000040.1, включенной в настоящее изобретение как SEQ ID NO:1. Последовательность мРНК ANGPTL3 макаки-крабоеда (Macaca fascicularis) представлена GenBank с номером доступа X68359.1.

Как используется в настоящем описании, "последовательность-мишень" относится к смежной части нуклеотидной последовательности молекулы мРНК, образованной в процессе транскрипции гена APOC3, включая мРНК, которая представляет продукт процессинга РНК первичного продукта транскрипции.

Как используется в настоящем описании, термин "цепь, содержащая последовательность" относится к олигонуклеотиду, содержащему цепь нуклеотидов, которая описана последовательностью, приведенной с использованием стандартной нуклеотидной номенклатуры.

Как используется в настоящем описании и если не указано иное, термин "комплементарная" при применении для описания первой нуклеотидной последовательности относительно второй нуклеотидной последовательности, относится к способности олигонуклеотида или полинуклеотида, содержащего первую нуклеотидную последовательность, гибридизоваться и образовывать дуплексную структуру в определенных условиях с олигонуклеотидом или полинуклеотидом, содержащим вторую нуклеотидную последовательность, как понятно специалисту в данной области техники.

Например, первую нуклеотидную последовательность можно описать как комплементарную второй нуклеотидной последовательности, когда две последовательности гибридизуются (например, подвергаются отжигу) в условиях строгой гибридизации. Условия гибдридизации включают температуру, ионную силу, pH и концентрацию органического растворителя для стадий отжига и/или промывки. Термин «условия строгой гибридизации» относится к условиям, в которых первая нуклеотидная последовательность будет предпочтительно гибридизоваться с ее последовательностью-мишенью, например, второй нуклеотидной последовательностью, и в меньшей степени или вообще не будет гибридизоваться с другими последовательностями. Условия строгой гибридизации зависимы от последовательности и являются разными при различных параметрах окружающей среды. Как правило, условия строгой гибридизации выбраны так, чтобы они составляли приблизительно на 5°C ниже термической температуры плавления (T_m) для нуклеотидной последовательности при определенной ионной силе и pH. T_m представляет собой температуру (при определенной ионной силе и pH), при которой 50% первых нуклеотидных последовательностей гибридизуются с идеально подходящей последовательностью-мишенью. Подробное руководство по гибридизации нуклеиновых кислот находится, например, в Tijssen (1993) Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology-Hybridization with Nuckeic Acid Probes part I, chap. 2, "Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acid probe assays," Elsevier, N.Y. ("Tijssen").

Можно применять другие условия, такие как физиологически значимые условия, которые могут быть внутри организма. Специалист в данной области техники сможет определить набор условий, наиболее подходящий для исследования на комплементарность двух последовательностей согласно конечному применению гибридизованных нуклеотидов.

Это включает спаривание оснований олигонуклеотида или полинуклеотида, содержащего первую нуклеотидную последовательность с олигонуклеотидом или полинуклеотидом, содержащим вторую нуклеотидную последовательность по всей длине первой и второй нуклеотидной последовательности. Такие последовательности можно называть "полностью комплементарными" относительно друг друга в настоящем изобретении. Однако когда первую последовательность называют "по существу комплементарной" относительно второй последовательности в настоящем изобретении, две последовательности могут быть полностью комплементарными или они могут образовывать одно или более, но обычно не более 4, 3 или 2 пар оснований, спаренных вопреки принципу комплементарности, при гибдридизации, при этом сохраняя способность гибридизоваться в условиях, наиболее подходящих для их конечного применения. Однако когда два олигонуклеотида конструируют так, чтобы они образовывали при гибдридизации один или более одноцепочечных неспаренных концов, данные неспаренные концы не следует считать спариванием оснований вопреки принципу комплементарности относительно определения комплементарности. Например, дцРНК, содержащую первый олигонуклеотид, из 21 нуклеотида в длину, и второй олигонуклеотид, из 23 нуклеотидов в длину, в которой более длинный олигонуклеотид содержит последовательность в 21 нуклеотид, которая полностью комплементарна более короткому олигонуклеотиду, можно, тем не менее, называть "полностью комплементарной" для целей, описанных в настоящем изобретении.

"Комплементарные" последовательности, как используется в настоящем описании, могут также содержать или могут быть образованы полностью из пар оснований не по Уотсону-Крику и/или пар оснований, образованных неприродными и модифицированными нуклеотидами, поскольку удовлетворяют приведенным выше требованиям относительно их способности гибридизоваться. Данные пары оснований не по Уотсону-Крику включают, но не ограничивается ими, спаривание оснований G:U «качели» или по Хугстену.

Термины "комплементарная", "полностью комплементарная" и "по существу комплементарная" в настоящем изобретении можно использовать в отношении соответствия оснований между смысловой цепью и антисмысловой цепью дцРНК, или между антисмысловой цепью дцРНК и последовательностью-мишенью, как будет понятно из контекста их применения.

Как используется в настоящем описании, полинуклеотид, который является "по существу комплементарным, по меньшей мере, части матричной РНК (мРНК)" относится к полинуклеотиду, который является по существу комплементарным смежной части соответствующей мРНК (например, мРНК, кодирующей APOC3), содержащей 5' UTR, открытую рамку считывания (ORF) или 3' UTR. Например, полинуклеотид является комплементарным, по меньшей мере, части мРНК APOC3, если последовательность является по существу комплементарной непрерываемой части мРНК, кодирующей APOC3.

В одном варианте осуществления антисмысловая цепь дцРНК является достаточно комплементарной мРНК-мишени так, чтобы вызвать расщепление мРНК-мишени.

Термин "двухцепочечная РНК" или "дцРНК", как используется в настоящем описании, относится к комплексу молекул рибонуклеиновой кислоты, имеющему дуплексную структуру, содержащую две антипараллельные и по существу комплементарные, как определено выше, цепи нуклеиновых кислот. Как правило, большинство нуклеотидов каждой цепи представляют собой рибонуклеотиды, но, как описано подробно в настоящем изобретении, каждая или обе цепи могут также содержать, по меньшей мере, один нерибонуклеотид, например, дезоксирибонуклеотид и/или модифицированный нуклеотид. Кроме того, как используется в настоящем описании, "дцРНК" может содержать химические модификации рибонуклеотидов, включая значительные модификации при многочисленных нуклеотидах и включая все типы модификаций, описанные в настоящем изобретении или известные в данной области техники. Любые такие модификации, как использовано в молекуле типа киРНК, включены "дцРНК" для целей данного описания и формулы изобретения.

Две цепи, образующие дуплексную структуру, могут представлять собой различные части одной более длинной молекулы РНК или они могут представлять собой отдельные молекулы РНК. Когда две цепи являются частью одной более длинной молекулы и, следовательно, соединены непрерывной цепью нуклеотидов между 3'-концом одной цепи и 5'-концом соответствующей другой цепи, образующих дуплексную структуру, соединяющую цепь РНК, называют "петлей типа шпилька". Когда две цепи соединены ковалентно способом, отличным от непрерывной цепи нуклеотидов между 3'-концом одной цепи и 5'-концом соответствующей другой цепи, образующих дуплексную структуру, соединяющую структуру называют "линкером". Цепи РНК могут содержать одинаковое или различное количество нуклеотидов. Максимальное количество пар оснований является количеством нуклеотидов в самой короткой цепи дцРНК минус любые неспаренные концы, которые присутствуют в дуплексе. В добавление к дуплексной структуре, дцРНК может содержать один или более нуклеотидных неспаренных концов. Термин "киРНК" также используется в настоящем описании для обозначения дцРНК, как определено выше.

Как используется в настоящем описании, "нуклеотидный неспаренный конец" относится к неспаренному нуклеотиду или нуклеотидам, которые выступают из дуплексной структуры дцРНК, когда 3'-конец одной цепи дцРНК выходит за пределы 5'-конца другой цепи, или наоборот. "Тупой" или "тупой конец" означает то, что нет неспаренных нуклеотидов на данном конце дцРНК, т.е. нет нуклеотидного неспаренного конца. дцРНК "с тупыми концами" представляет собой дцРНК, которая является двухцепочечной по всей длине, т.е. нет нуклеотидного неспаренного конца на обоих концах молекулы.

Термин "антисмысловая цепь" относится к цепи дцРНК, которая содержит область, которая по существу комплементарна последовательности-мишени. Как используется в настоящем описании, термин "область комплементарности" относится к области в антисмысловой цепи, которая является по существу комплементарной последовательности, например, последовательности-мишени, как определено в настоящем изобретении. Когда область комплементарности является неполностью комплементарной последовательности-мишени, нарушение комплементарности наиболее допустимо в концевых областях и, если оно(и) присутствует, обычно в концевой области или областях, например, в пределах 6, 5, 4, 3 или 2 нуклеотидов 5'- и/или 3'-конца.

Термин "смысловая цепь", как используется в настоящем описании, относится к цепи дцРНК, которая содержит область, которая по существу комплементарна области антисмысловой цепи.

Как используется в настоящем описании, термин "липидно-нуклеиновая частица" включает термин "SNALP" и относится к везикуле липидов, покрывающей ограниченную водную внутреннюю часть, содержащую нуклеиновую кислоту, такую как дцРНК, или плазмиду, для которой транскрибируется дцРНК. Липидно-нуклеиновые частицы, например, SNALP, описаны, например, в опубликованных патентных заявках США № 20060240093, 20070135372, и USSN 61/045228, поданной 15 апреля 2008. Данные заявки включены в настоящее описание посредством ссылки.

"Введение в клетку" при ссылке на дцРНК означает облегченное поглощение или абсорбцию в клетке, как будет понятно специалисту в данной области техники. Абсорбция или поглощение дцРНК может осуществляться диффузными способами без посторонней помощи или активными клеточными способами, или вспомогательными агентами или устройствами. Значение данного термина не ограничено клетками in vitro; дцРНК можно также "вводить в клетку", где клетка является частью живого организма. В данном случае, введение в клетку будет включать доставку в организм. Например, для in vivo доставки дцРНК можно вводить в место в ткани или вводить системно. In vitro введение в клетку включает способы, известные в данной области техники, такие как электропорация и липофекция. Дополнительные подходы описаны в настоящем описании или они являются известными в данной области техники.

Термины "сайленс", "ингибировать экспрессию", "понижающе регулировать экспрессию", "подавлять экспрессию" и подобные, когда они относятся к гену APOC3, в настоящем описании относятся, по меньшей мере, к частичному подавлению экспрессии гена APOC3, как проявляется снижением количества мРНК, которую можно выделить из первой клетки или группы клеток, в которых ген APOC3 транскрибируется, и которая обработана или которые обработаны так, что экспрессия гена APOC3 ингибирована, по сравнению со второй клеткой или группой клеток, по существу идентичных первой клетке или группе клеток, но которая не обработана или которые не обработаны таким способом (контрольные клетки). Степень ингибирования обычно выражают в виде

Альтернативно, степень ингибирования может быть приведена в виде снижения параметра, который функционально связан с экспрессией гена APOC3, например, количества белка, кодируемого геном APOC3, который секретируется клеткой, или количества клеток, проявляющих определенный фенотип, например, апоптоз. В принципе, сайленс гена APOC3 можно определить в любой клетке, экспрессирующей мишень, или конститутивно или геномной инженерией, и любым подходящим анализом. Однако когда нужна ссылка для того, чтобы определить, ингибирует ли указанная дцРНК экспрессию гена APOC3 до определенной степени и, следовательно, включена в настоящее изобретение, анализы, приведенные в примерах ниже, будут служить в качестве данной ссылки.

Например, в некоторых случаях, экспрессия гена APOC3 подавлена, по меньшей мере, приблизительно на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% или 50% введением двухцепочечного олигонуклеотида, приведенного в настоящем изобретении. В некоторых вариантах осуществления ген APOC3 подавлен, по меньшей мере, приблизительно на 60%, 70% или 80% введением двухцепочечного олигонуклеотида, приведенного в настоящем изобретении. В некоторых вариантах осуществления, ген APOC3 подавлен, по меньшей мере, на приблизительно 85%, 90% или 95% введением двухцепочечного олигонуклеотида, приведенного в настоящем изобретении.

Как используется в настоящем описании в контексте экспрессии APOC3, термины "лечить", "лечение" и подобные относятся к облегчению или ослаблению патологических процессов, опосредованных экспрессией APOC3. В контексте настоящего изобретения, когда они относятся к любому из других состояний, приведенных в настоящем описании ниже (отличным от патологических процессов, опосредованных экспрессией APOC3), термины "лечить", "лечение" и подобные означают облегчение или ослабление, по меньшей мере, одного симптома, связанного с данным состоянием, или замедление или обращение развития такого состояния.

Как используется в настоящем описании, фразы "эффективное количество" относится к количеству, которое приносит терапевтическую пользу при лечении, предотвращении или контролировании патологических процессов, опосредованных экспрессией APOC3, или явного симптома патологических процессов, опосредованных экспрессией APOC3. Конкретное количество, которое является эффективным, может легко определить практикующий врач, и оно может изменяться в зависимости от факторов, известных в данной области техники, таких как, например, тип патологических процессов, опосредованных экспрессией APOC3, история болезни и возраст пациента, стадия патологических процессов, опосредованных экспрессией APOC3, и введение других агентов против патологических процессов, опосредованных экспрессией APOC3.

Как используется в настоящем описании "фармацевтическая композиция" содержит фармацевтически эффективное количество дцРНК и фармацевтически приемлемый носитель. Как используется в настоящем описании, "фармацевтически эффективное количество", "терапевтически эффективное количество" или просто "эффективное количество" относится к количеству РНК, эффективному для обеспечения предполагаемого фармацевтического, терапевтического или превентивного результата. Например, если указанное клиническое лечение считают эффективным, когда имеется, по меньшей мере, 25% снижение измеримого параметра, связанного с заболеванием или нарушением, терапевтически эффективное количество лекарственного средства для лечения данного заболевания или нарушения представляет собой количество, необходимое для осуществления, по меньшей мере, 25% снижения данного параметра. Например, терапевтически эффективное количество дцРНК, мишенью которой является APOC3, может снижать уровень APOC3 в сыворотке, по меньшей мере, на 25%.

Термин "фармацевтически приемлемый носитель" относится к носителю для введения терапевтического агента. Данные носители включают, но без ограничения, физиологический раствор, забуференный физиологический раствор, декстрозу, воду, глицерин, этанол и их комбинации. Термин, в частности, включает среду для клеточных культур. Что касается лекарственных средств, водимых перорально, фармацевтически приемлемые носители включают, но без ограничения, фармацевтически приемлемые эксципиенты, такие как разбавители, дезинтегранты, связующие, лубриканты, подсластители, ароматизаторы, красители и консерванты. Подходящие инертные разбавители включают карбонат натрия и кальция, фосфат натрия и кальция и лактозу, тогда как кукурузный крахмал и альгиновая кислота представляют собой подходящие дезинтегранты. Связующие включают крахмал и желатин, тогда как лубриканты, если они присутствуют, будут обычно представлять собой стеарат магния, стеариновую кислоту или тальк. При желании, таблетки можно покрывать материалом, таким как глицеринмоностеарат или глицериндистеарат, для замедления поглощения в желудочно-кишечном тракте.

Как используется в настоящем описании, "трансформированная клетка" представляет собой клетку, в которую введен вектор, из которого экспрессируется молекула дцРНК.

Двухцепочечная рибонуклеиновая кислота (дцРНК)

Как описано более подробно в настоящем описании, настоящее изобретение относится к молекулам двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК) для ингибирования экспрессии гена APOC3 в клетке или млекопитающем, где дцРНК содержит антисмысловую цепь, содержащую область комплементарности, которая является комплементарной, по меньшей мере, части мРНК, образующейся при экспрессии гена APOC3, и где область комплементарности составляет менее чем 30 нуклеотидов в длину, обычно 19-24 нуклеотидов в длину, и где указанная дцРНК, при контакте с клеткой, экспрессирующей указанный ген APOC3, ингибирует экспрессию указанного гена APOC3, по меньшей мере, на 30%, как оценено, например, ПЦР или способом гибридизации с использованием разветвленных ДНК (bDNA), или способом на основе белка, таким как вестерн-блоттинг. Экспрессию гена APOC3 можно снизить, по меньшей мере, на 30% при сравнении анализом, описанном в примерах ниже. Например, экспрессию гена APOC3 в клеточной культуре, такой как в Hep3B клетках, можно оценить измерением уровня мРНК APOC3, таким как bDNA или TaqMan анализом, или измерением концентрации белка, таким как ELISA анализ. дцРНК настоящего изобретения может дополнительно содержать один или более одноцепочечных нуклеотидных неспаренных концов.

дцРНК может быть синтезирована стандартными способами, известными в данной области техники, как дополнительно обсуждается ниже, например, использованием автоматизированного ДНК синтезатора, такого как коммерчески доступный, например, от Biosearch, Applied Biosystems, Inc. дцРНК содержит две цепи РНК, которые являются достаточно комплементарными для гибридизации, образуя дуплексную структуру. Одна цепь дцРНК (антисмысловая цепь) содержит область комплементарности, которая является по существу комплементарной и обычно полностью комплементарной последовательности-мишени, полученной из последовательности мРНК, образованной в процессе экспрессии гена APOC3, другая цепь (смысловая цепь) содержит область, которая комплементарна антисмысловой цепи, так что две цепи гибридизуются и образуют дуплексную структуру при смешивании в подходящих условиях. Как правило, дуплексная структура состоит из 15-30 или 25-30, или 18-25, или 19-24, или 19-21, или 19, 20 или 21 пар оснований в длину. В одном варианте осуществления дуплекс состоит из 19 пар оснований в длину. В другом варианте осуществления дуплекс состоит из 21 пары оснований в длину. Когда две различные киРНК используют в комбинации, длины дуплексов могут быть одинаковыми или могут отличаться.

Каждая цепь дцРНК настоящего изобретения обычно состоит из 15-30 или 18-25, или 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеотидов в длину. В других вариантах осуществления каждая цепь состоит из 25-30 нуклеотидов в длину. Каждая цепь дуплекса может иметь одинаковую или различную длину. Когда две различные киРНК применяют в комбинации, длины каждой цепи каждой киРНК могут быть одинаковыми или могут отличаться.

дцРНК настоящего изобретения включают дцРНК, которые являются более длинными, чем 21-23 нуклеотида, например, дцРНК, которые являются достаточно длинными для обработки Dicer, являющимся РНКазным III ферментом, до киРНК 21-23 пар оснований в длину, которые затем встраиваются в RISC. Соответственно, дцРНК настоящего изобретения может состоять, по меньшей мере, из 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или, по меньшей мере, 100 пар оснований в длину.

дцРНК настоящего изобретения может содержать один или более одноцепочечных неспаренных концов из одного или более нуклеотидов. В одном варианте осуществления, по меньшей мере, один конец дцРНК содержит одноцепочечный нуклеотидный неспаренный конец из 1-4, обычно 1 или 2 нуклеотидов. В другом варианте осуществления антисмысловая цепь дцРНК содержит неспаренные концы из 1-10 нуклеотидов, каждый на 3'-конце и 5'-конце в смысловой цепи. В следующих вариантах осуществления смысловая цепь дцРНК содержит неспаренные концы из 1-10 нуклеотидов, каждый на 3'-конце и 5'-конце в антисмысловой цепи.

дцРНК, имеющие, по меньшей мере, один нуклеотидный неспаренный конец, могут обладать неожиданно лучшими ингибирующими свойствами, чем копия с тупыми концами. В некоторых вариантах осуществления наличие только одного нуклеотидного неспаренного конца усиливает активность интерференции дцРНК, без воздействия на ее суммарную стабильность. Проверено, что дцРНК, содержащая только один неспаренный конец, является особенно стабильной и эффективной in vivo, а также в ряде клеток, средах для клеточных культур, крови и сыворотке. Как правило, одноцепочечный неспаренный конец расположен на 3'-конце антисмысловой цепи или, альтернативно, на 3'-конце смысловой цепи. дцРНК может также содержать тупой конец, обычно расположенный на 5'-конце антисмысловой цепи. Такие дцРНК могут обладать повышенной стабильностью и ингибирующей активностью, таким образом, обеспечивая введение при низких дозах, т.е. менее чем 5 мг/кг массы тела реципиента в день. Как правило, антисмысловая цепь дцРНК содержит нуклеотидный неспаренный конец на 3'-конце, и 5'-конец является тупым. В другом варианте осуществления один или более нуклеотидов на неспаренном конце заменен нуклеозидтиофосфатом.

В одном варианте осуществления ген APOC3 представляет собой ген humAPOC3. В конкретных вариантах осуществления смысловая цепь дцРНК представляет собой одну из смысловых последовательностей из таблиц 1, 2, 6, 7, 11 или 12, и антисмысловая цепь представляет собой одну из антисмысловых последовательностей таблиц 1, 2, 6, 7, 11 или 12. Альтернативные антисмысловые агенты, мишенью которых являются другие области в последовательности-мишени, приведенные в таблицах 1, 2, 6, 7, 11 или 12, можно легко определить, используя последовательность-мишень и фланкирующую APOC3 последовательность.

Специалисту в данной области техники хорошо известно, что дцРНК, имеющие дуплексную структуру 20-23, но конкретно 21 пару оснований, известны как особенно эффективные для индукции РНК интерференции (Elbashir et al, EMBO 2001, 20:6877-6888). Однако обнаружено, что другие дцРНК, которые являются более короткими или более длинными дцРНК, могут быть также эффективными. В вариантах осуществления, описанных выше, в соответствии с типом олигонуклеотидных последовательностей, приведенных в таблицах 1, 2, 6, 7, 11 или 12, дцРНК, представленные в настоящем изобретении, могут содержать, по меньшей мере, одну цепь длины, описанной в настоящем описании. Обосновано ожидать, что более короткие дцРНК, содержащие одну из последовательностей таблиц 1, 2, 6, 7, 11 или 12, минус только несколько нуклеотидов на одном или обоих концах могут быть аналогично эффективными при сравнении с дцРНК, описанными выше. Следовательно, дцРНК, содержащие частичную последовательность, по меньшей мере, из 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более смежных нуклеотидов из одной из последовательностей таблиц 1, 2, 6, 7, 11 или 12, и отличающиеся по их способности ингибировать экспрессию гена APOC3 в анализе, как описано в настоящем описании ниже, не более чем на 5, 10, 15, 20, 25 или 30% ингибирования от дцРНК, содержащей полную последовательность, охватываются настоящим изобретением. Кроме того, дцРНК, которые расщепляют требуемую APOC3 последовательность-мишень, можно легко получить, используя соответствующую антисмысловую последовательность и комплементарную смысловую последовательность APOC3.

Кроме того, дцРНК, приведенные в таблицах 1, 2, 6, 7, 11 или 12, определяют место в APOC3, которое подвержено расщеплению на основе РНКи. Как таковое, настоящее изобретение дополнительно относится к дцРНК, мишенью которых является последовательность, являющаяся мишенью одного из агентов настоящего изобретения. Как используется в настоящем описании, считают, что вторая дцРНК направлена на последовательность первой дцРНК, если вторая дцРНК расщепляет единицу генетического кода где-нибудь в пределах мРНК, которая является комплементарной антисмысловой цепи первой дцРНК. Такая вторая дцРНК будет обычно состоять, по меньшей мере, из 15 смежных нуклеотидов первой из последовательностей, приведенных в таблицах 1, 2, 6, 7, 11 или 12, соединенных с дополнительными нуклеотидными последовательностями, взятыми из области, смежной выбранной последовательности в гене APOC3.

Расщепление РНК мишени можно определить обычно гель-электрофорезом и, при необходимости, связанными с ним способами гибдридизации нуклеиновых кислот, известными в данной области техники. Участок расщепления в мРНК мишени дцРНК можно определить, применяя способы, обычно известные специалисту в данной области техники, например, способом 5'-RACE, описанным в Soutschek et al., Nature; 2004, volume 432, p. 173-178 (которая включена в настоящее описание посредством ссылки для всех целей).

дцРНК, представленная в настоящем изобретении, может содержать одно или более нарушений комплементарности с последовательностью-мишенью. В одном варианте осуществления дцРНК, представленная в настоящем изобретении, содержит не более 3 нарушений комплементарности. Если антисмысловая цепь дцРНК содержит нарушение комплементарности с последовательностью-мишенью, предпочтительно, чтобы участок нарушения комплементарности не располагался в области комплементарности. Если антисмысловая цепь дцРНК содержит нарушение комплементарности с последовательностью-мишенью, предпочтительно, чтобы нарушение комплементарности было ограничено 5 нуклеотидами с каждого из концов, например, 5, 4, 3, 2 или 1 нуклеотидом с каждого из 5'- или 3'-концов области комплементарности. Например, для 23 нуклеотидной дцРНК цепи, которая является комплементарной области гена APOC3, дцРНК обычно не содержит какого-либо нарушения комплементарности в пределах центральных 13 нуклеотидов. Способы, описанные в настоящем изобретении, можно применять для определения является ли дцРНК, содержащая нарушение комплементарности с последовательностью-мишенью, эффективной для ингибирования экспрессии гена APOC3. Оценка эффективности дцРНК с нарушением комплементарности при ингибировании экспрессии гена APOC3 является важной, особенно, если известно, что конкретная область комплементарности в гене APOC3 обладает полиморфной изменчивостью последовательности в популяции.

В другом аспекте настоящее изобретение представляет собой одноцепочечную антисмысловую олигонуклеотидную РНКи. Антисмысловой олигонуклеотид представляет собой одноцепочечный олигонуклеотид, который является комплементарным последовательности в пределах мРНК-мишени. Антисмысловые олигонуклеотиды могут ингибировать трансляцию стехиометрическим способом спаривания оснований с мРНК и физической блокировкой системы трансляции, см. Dias, N. et al, (2002) Mol. Cancer Ther. 1:347-355. Антисмысловые олигонуклеотиды могут также ингибировать экспрессию белка-мишени связыванием с мРНК-мишенью и стимуляцией разрушения мРНК-мишени РНКазой-H. Одноцепочечная антисмысловая молекула РНК может состоять приблизительно из 13 до приблизительно 30 нуклеотидов в длину и содержать последовательность, которая является комплементарной последовательности-мишени. Например, одноцепочечная антисмысловая молекула РНК может содержать последовательность, которая состоит, по меньшей мере, приблизительно из 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более смежных нуклеотидов одной из антисмысловых последовательностей таблиц 1, 2, 6, 7 или 10.

Модификации

В еще другом варианте осуществления дцРНК химически модифицируют для увеличения стабильности. Нуклеиновые кислоты, представленные в настоящем изобретении, можно получить и/или модифицировать способами, хорошо разработанными в данной области техники, такими как способы, описанные в "Current protocols in nucleic acid chemistry," Beaucage, S.L. et al. (Eds.), John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, USA, которая включена в настоящее описание посредством ссылки. Конкретные примеры дцРНК соединений, полезных в настоящем изобретении, включают дцРНК, содержащие модифицированные остовы или неприродные межнуклеотидные связи. Как определено в данном описании, дцРНК, содержащие модифицированные остовы, включают дцРНК, которые сохраняют атом фосфора в остове, и дцРНК, которые не содержат атом фосфора в остове. Для целей настоящего описания и как иногда ссылаются в данной области техники, модифицированные дцРНК, которые не содержат атом фосфора в их межнуклеотидном остове, можно считать олигонуклеозидами.

Модифицированные дцРНК остовы включают, например, фосфоротиоаты, хиральные фосфоротиоаты, фофородитиоаты, фосфотриэфиры, аминоалкилфосфотриэфиры, метил и другие алкилфосфонаты, включая 3'-алкиленфосфонаты и хиральные фосфонаты, фосфинаты, фосфороамидаты, включая 3'-аминофосфороамидат и аминоалкилфосфороамидаты, тионофосфороамидаты, тионоалкилфосфонаты, тионоалкилфосфотриэфиры и боранофосфаты, содержащие нормальные 3'-5' связи, их 2'-5' соединенные аналоги и такие, которые содержат обратную направленность, где соседние пары нуклеозидных блоков соединены 3'-5' с 5'-3' или 2'-5' с 5'-2'. Различные соли, смешанные соли и формы свободной кислоты являются также включенными.

Репрезентативные патенты США, в которых описано получение приведенных выше содержащих фосфор связей, включают, но без ограничения, патенты США 3687808; 4469863; 4476301; 5023243; 5177195; 5188897; 5264423; 5276019; 5278302; 5286717; 5321131; 5399676; 5405939; 5453496; 5455233; 5466677; 5476925; 5519126; 5536821; 5541316; 5550111; 5563253; 5571799; 5587361 и 5625050, каждый из которых включен в настоящее описание посредством ссылки.

Модифицированные дцРНК остовы, которые могут не содержать атом фосфора, включают остовы, которые образованы короткоцепочечными алкильными или циклоалкильными межнуклеозидными связями, смешанными гетероатомными и алкильными или циклоалкильными межнуклеозидными связями, или одной или более межнуклеозидными гетероароматическими или гетероциклическими межнуклеозидными связями. Они включают связи, содержащие морфолиновые связи (образованные частично из сахарной части нуклеозида); силоксановые остовы; сульфидные, сульфоксидные и сульфоновые остовы; формацетильные и тиоформацетильные остовы; метиленформацетильные и тиоформацетильные остовы; содержащие алкен остовы; сульфаматные остовы; метилениминные и метиленгидразиновые остовы; сульфонатные и сульфамидные остовы; амидные остовы и другие, содержащие смешанные N, O, S и CH₂ компонентные части.

Репрезентативные патенты США, в которых описано получение приведенных выше олигонуклеозидов, включают, но без ограничения, патенты США 5034506; 5166315; 5185444; 5214134; 5216141; 5235033; 564562; 5264564; 5405938; 5434257; 5466677; 5470967; 5489677; 5541307; 5561225; 5596086; 5602240; 5608046; 5610289; 5618704; 5623070; 5663312; 5633360; 5677437 и 5677439, каждый из которых включен в настоящее описание посредством ссылки.

В других подходящих миметиках дцРНК, как сахарная, так и межнуклеозидная связь, т.е. остов, нуклеотидного блока заменены новыми группами. Остатки гетероциклических оснований оставляют для гибдридизации с подходящей нуклеиновой кислотой, являющейся мишенью. Один данный олигомерный миметик, дцРНК миметик, для которого показано, что он обладает превосходными гибдридизационными свойствами, называют пептидо-нуклеиновой кислотой (ПНК). В ПНК соединениях сахарный остов дцРНК заменен содержащим амид остовом, в частности аминоэтилглициновый остов. Гетероциклические основания оставляют и непосредственно или опосредованно связывают с аза атомами азота амидной части остова. Репрезентативные патенты США, в которых описано получение ПНК соединений, включают, но без ограничения, патенты США 5539082; 5714331 и 5719262, каждый из которых включен в настоящее описание посредством ссылки. Дополнительное описание ПНК соединений можно найти в Nielsen et al., Science, 1991, 254, 1497-1500.

Другие варианты осуществления настоящего изобретения представляют собой дцРНК с фосфоротиоатными остовами и олигонуклеозиды с гетероатомными остовами, и, в частности, -CH₂-NH-CH₂-, -CH₂-N(CH₃)-O-CH₂- [также известный как метилен(метилимино) или MMI остов], -CH₂-O-N(CH₃)-CH₂-, -CH₂-N(CH₃)-N(CH₃)-CH₂- и -N(CH₃)-CH₂-CH₂- [где нативный фосфодиэфирный остов представлен как -O-P-O-CH₂-] вышеуказанного патента США 5489677, и амидные остовы вышеуказанного патента США 5602240. Также предпочтительными являются дцРНК, содержащие структуры морфолинового остова вышеуказанного патента США 5034506.

Модифицированные дцРНК могут также содержать одну или более замещенных сахарных групп. Предпочтительные дцРНК содержат в положении 2' одну из следующих групп: OH; F; O-, S- или N-алкил; O-, S- или N-алкенил; O-, S- или N-алкинил; или O-алкил-O-алкил, где алкил, алкенил и алкинил могут быть незамещенными или замещены C₁-C₁₀алкилом или C₂-C₁₀алкенилом и алкинилом. Особенно предпочтительными являются O[(CH₂)_nO]_mCH₃, O(CH₂)_nOCH₃, O(CH₂)_nNH₂, O(CH₂)_nCH₃, O(CH₂)_nONH₂ и O(CH₂)_nON[(CH₂)_nCH₃)]₂, где n и m равны 1 до приблизительно 10. Другие предпочтительные дцРНК содержат в положении 2' одну из следующих групп: низший C₁-C₁₀алкил, замещенный низший алкил, алкарил, аралкил, O-алкарил или O-аралкил, SH, SCH₃, OCN, Cl, Br, CN, CF₃, OCF₃, SOCH₃, SO₂CH₃, ONO₂, NO₂, N₃, NH₂, гетероциклоалкил, гетероциклоалкарил, аминоалкиламино, полиалкиламино, замещенный силил, РНК расщепляющую группу, репортерную группу, интеркалятор, группу для улучшения фармакокинетических свойств дцРНК или группу для улучшения фармакодинамических свойств дцРНК, и другие заместители, обладающие аналогичными свойствами. Предпочтительная модификация включает 2'-метоксиэтокси (2'-O-CH₂CH₂OCH₃, также известную как 2'-O-(2-метоксиэтил) или 2'-MOE) (Martin et al, Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504), т.е. алкоксиалкокси группу. Следующая предпочтительная модификация включает 2'-диметиламинооксиэтокси, т.е. группу O(CH₂)₂ON(CH₃)₂, также известную как 2-DMAOE, как описано в примерах настоящего описания ниже, и 2'-диметиламиноэтоксиэтокси (также известную в данной области техники как 2'-O-диметиламиноэтоксиэтил или 2'-DMAEOE), т.е. 2'-O-CH₂-O-CH₂-N(CH₂)₂, также описанную в примерах настоящего описания ниже.

Другие предпочтительные модификации включают 2'-метокси (2'-OCH₃), 2'-аминопропокси (2'-OCH₂CH₂CH₂NH₂) и 2'-фтор (2'-F). Аналогичные модификации можно получить в других положениях в дцРНК, в частности в положении 3' сахара в 3'-концевом нуклеотиде или в 2'-5' соединенных дцРНК и положении 5' 5'-концевого нуклеотида. дцРНК могут также содержать сахарные миметики, такие как циклобутильные группы вместо пентофуранозильного сахара. Репрезентативные патенты США, в которых описано получение модифицированных сахарных структур, включают, но без ограничения, патенты США 4981957; 5118800; 5319080; 5359044; 5393878; 5446137; 5466786; 5514785; 5519134; 5567811; 5576427; 5591722; 5597909; 5610300; 5627053; 5639873; 5646265; 5658873; 5670633 и 5700920, обладателями некоторых из которых главным образом являются заявители настоящей заявки, и каждый из которых включен в настоящее описание посредством ссылки во всей своей полноте.

дцРНК могут также содержать модификации или заместители нуклеинового основания (часто называемого в данной области техники просто "основание"). Как используется в настоящем описании, "немодифицированные" или "природные" нуклеиновые основания включают пуриновые основания: аденин (A) и гуанин (G), и пиримидиновые основания: тимин (T), цитозин (C) и урацил (U). Модифицированные нуклеиновые основания включают другие синтетические и природные нуклеиновые основания, такие как 5-метилцитозин (5-me-C), 5-гидроксиметилцитозин, ксантин, гипоксантин, 2-аминоаденин, 6-метильные и другие алкильные производные аденина и гуанина, 2-пропильные и другие алкильные производные аденина и гуанина, 2-тиоурацил, 2-тиотимин и 2-тиоцитозин, 5-галогенурацил и цитозин, 5-пропинилурацил и цитозин, 6-азоурацил, цитозин и тимин, 5-урацил (псевдоурацил), 4-тиоурацил, 8-галоген, 8-амино, 8-тиол, 8-тиоалкил, 8-гидроксил и другие 8-замещенные аденины и гуанины, 5-галоген, в частности 5-бром, 5-трифторметил и другие 5-замещенные урацилы и цитозины, 7-метилгуанин и 7-метиладенин, 8-азагуанин и 8-азааденин, 7-деазагуанин и 7-деазааденин и 3-деазагуанин и 3-деазааденин.

Дополнительные нуклеиновые основания включают основания, описанные в патенте США 3687808, основания, описанные в The Concise Encyclopedia Of Polymer Science and Engineering, pages 858-859, Kroschwitz, J. L, ed. John Wiley & Sons, 1990, основания, описанные Englisch et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613, и основания, описанные Sanghvi, Y S., chapter 15, dsRNA Research and Applications, pages 289-302, Crooke, S. T. and Lebleu, B., Ed., CRC Press, 1993. Некоторые из этих нуклеиновых оснований являются особенно пригодными для увеличения связывающей способности олигомерных соединений, представленных в настоящем изобретении. Они включают 5-замещенные пирролидины, 6-азапиримидины и N-2,N-6 и O-6 замещенные пурины, включая 2-аминопропиладенин, 5-пропинилурацил и 5-пропинилцитозин. Показано, что 5-метилцитозиновые замещения увеличивают стабильность дуплекса нуклеиновой кислоты на 0,6-1,2°C (Sanghvi, Y. S., Crooke, S. T. and Lebleu, B., Eds., dsRNA Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278) и являются примерами замещения оснований, даже более конкретно при комбинировании с 2'-O-метоксиэтильными сахарными модификациями.

Репрезентативные патенты США, в которых описано получение некоторых из вышеуказанных модифицированных нуклеиновых оснований, а также других модифицированных нуклеиновых оснований, включают, но без ограничения, вышеуказанный патент США 3687808, а также патенты США 4845205; 513030; 5134066; 5175273; 5367066; 5432272; 5457187; 5459255; 5484908; 5502177; 5525711; 5552540; 5587469; 5594121, 5596091; 5614617 и 5681941, каждый из которых включен в настоящее описание посредством ссылки, и патент США 5750692, также включенный в настоящее описание посредством ссылки.

Конъюгаты

Другая модификация дцРНК настоящего изобретения включает химическое связывание с дцРНК одной или более групп или конъюгатов, которые увеличивают активность, распределение в клетке или клеточное поглощение дцРНК. Данные группы включают, но без ограничения, липидные группы, такие как холестериновая группа (Letsinger et al, Proc. Natl. Acid. Sci. USA, 1989, 86:6553-6556), холиновая кислота (Manoharan et al, Biorg. Med. Chem. Let, 1994, 4:1053-1060), тиоэфир, например, берил-S-тритилтиол (Manoharan et al, Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660:306-309; Manoharan et al, Biorg. Med. Chem. Let., 1993, 3:2765-2770), тиохолестерин (Oberhauser et al, Nucl. Acids Res., 1992, 20:533-538), алифатическая цепь, например, додекандиольный или ундецильный остатки (Saison-Behmoaras et al, EMBO J, 1991, 10:1111-1118; abanov et al, FEBS Lett., 1990, 259:327-330; Svinarchuk et al, Biochimie, 1993, 75:49-54), фосфолипид, например, дигексадецил-рац-глицерин или 1,2-ди-O-гексадецил-рац-глицеро-3-H-фосфонат триэтиламмония (Manoharan et al, Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651-3654; Shea et al, Nucl. Acids Res., 1990, 18:3777-3783), полиаминная или полиэтиленгликольная цепь (Manoharan et al, Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14:969-973), или адамантануксусная кислота (Manoharan et al, Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651-3654), пальмитильная группа (Mishra et al, Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264:229-237), или октадециламинная или гексиламинокарбонилоксихолестериновая группа (Crooke et al, J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277:923-937).

Не обязательно для всех положений в указанном соединении, чтобы они были одинаково модифицированы, и действительно, более одной из приведенных выше модификаций можно вводить в одно соединение или даже в один нуклеозид в дцРНК. Настоящее изобретение также включает дцРНК соединения, которые представляют собой химерные соединения. "Химерные" дцРНК соединения, или "химеры", в контексте настоящего изобретения, представляют собой дцРНК соединения, в частности дцРНК, которые содержат две или более химически отличающихся областей, причем каждая получена, по меньшей мере, из мономерного блока, т.е. нуклеотида в случае дцРНК соединения. Данные дцРНК обычно содержат, по меньшей мере, одну область, в которой дцРНК химически модифицируют так, чтобы она придавала дцРНК повышенную устойчивость к разрушению нуклеазами, повышенное клеточное поглощение и/или повышенную связывающую способность к нуклеиновой кислоте, являющейся мишенью. Дополнительная область дцРНК может служить в качестве субстрата для ферментов, способных расщеплять гибриды РНК:ДНК или РНК:РНК. В качестве примера, РНКаза H представляет собой клеточную эндонуклеазу, которая расщепляет РНК цепь РНК:ДНК дуплекса. Активация РНКазы H, следовательно, приводит в результате к расщеплению РНК-мишени, посредством чего значительно увеличивается эффективность дцРНК ингибирования генной экспрессии. Следовательно, сравнимые результаты можно часто получить с более короткими дцРНК при применении химерных дцРНК, по сравнению с фосфоротиоатдезокси дцРНК, гибридизующимися с той же областью, являющейся мишенью.

В некоторых случаях, дцРНК можно модифицировать нелигандной группой. Ряд нелигандных молекул конъюгировали с дцРНК для того, чтобы увеличить активность, улучшить распределение в клетке или клеточное поглощение дцРНК, и способы осуществления данных конъюгаций имеются в научной литературе. Данные нелигандные группы включали липидные группы, такие как холестерин (Letsinger et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86:6553), холевая кислота (Manoharan et al, Bioorg. Med. Chem. Lett., 1994, 4:1053), тиоэфир, например, гексил-S-тритилтиол (Manoharan et al, Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660:306; Manoharan et al, Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3:2765), тиохолестерин (Oberhauser et al, Nucl. Acids Res., 1992, 20:533), алифатическая цепь, например, додекандиольный или ундецильный остатки (Saison-Behmoaras et al., EMBO J., 1991, 10:111; Kabanov et al, FEBS Lett., 1990, 259:327; Svinarchuk et al, Biochimie, 1993, 75:49), фосфолипид, например, дигексадецил-рац-глицерин или 1,2-ди-O-гексадецил-рац-глицеро-3-H-фосфонат триэтиламмония (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651; Shea et al, Nucl. Acids Res., 1990, 18:3777), полиаминная или полиэтиленгликольная цепь (Manoharan et al, Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14:969), или адамантануксусная кислота (Manoharan et al, Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651), пальмитильная группа (Mishra et al, Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264:229), или октадециламинная или гексиламинокарбонилоксихолестериновая группа (Crooke et al, J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277:923). Репрезентативные патенты США, в которых описано получение данных дцРНК конъюгатов, перечислены выше. Стандартные способы конъюгирования включают получение дцРНК, несущих аминолинкер в одном или более положениях последовательности. Затем аминогруппу подвергают взаимодействию с молекулой, которую конъюгируют, используя подходящие конденсирующие или активирующие реагенты. Реакцию конъюгирования можно осуществлять или с дцРНК, все еще связанной с твердой подложкой, или после отщепления дцРНК в фазе раствора. Очистка дцРНК конъюгата ВЭЖХ обычно дает чистый конъюгат.

Конъюгирование лиганда с дцРНК может улучшать ее клеточное поглощение, а также направлять ее в конкретную ткань, или улучшать поглощение специфическими типами клеток, такими как клетки печени. В некоторых случаях, гидрофобный лиганд конъюгируют с дцРНК, облегчая прямое проникновение через клеточную мембрану и/или поглощение клетками печени. Альтернативно, лиганд, конъюгированный с дцРНК, представляет собой субстрат для опосредованного рецепторами эндоцитоза. Данные подходы применяли для облегчения клеточного проникновения антисмысловых олигонуклеотидов, а также дцРНК агентов. Например, холестерин конъюгировали с различными антисмысловыми олигонуклеотидами, что приводило в результате к соединениям, которые были по существу более активными по сравнению с их неконъюгированными аналогами. См. M. Manoharan Antisense & Nuckeic acid Drug Development 2002, 12, 103. Другие липофильные соединения, которые конъюгировали с олигонуклеотидами, включают 1-пиренмасляную кислоту, 1,3-бис-O-(гексадецил)глицерин и ментол. Один пример лиганда для опосредованного рецепторами эндоцитоза представляет собой фолевую кислоту. Фолевая кислота проникает в клетку опосредованным фолатными рецепторами эндоцитозом. дцРНК соединения, содержащие фолевую кислоту, будут эффективно транспортироваться в клетку опосредованным фолатными рецепторами эндоцитозом. Ли и сотрудники сообщают, что присоединение фолевой кислоты к 3'-концу олигонуклеотида приводило в результате к 8-кратному усилению клеточного поглощения олигонуклеотида. Li, S.; Deshmukh, H. M.; Huang, L. Pharm. Res. 1998, 15, 1540. Другие лиганды, которые конъюгировали с олигонуклеотидами, включают полиэтиленгликоли, углеводные кластеры, сшивающие агенты, порфириновые конъюгаты, пептиды для доставки и липиды, такие как холестерин и холестеринамин. Примеры углеводных кластеров включают Chol-п-(GalNAc)₃ (N-ацетилгалактозаминхолестерин) и LCO(GalNAc)₃ (N-ацетилгалактозамин-3'-литохоликолеоил.

Углеводные конъюгаты

В некоторых вариантах осуществления композиций и способов настоящего изобретения олигонуклеотид дцРНК дополнительно содержит углевод. Углевод, конъюгированный с дцРНК, является полезным для доставки нуклеиновых кислот, а также композиций, подходящих для in vivo терапевтического применения, как описано в настоящем описании. Как используется в настоящем описании, "углевод" относится к соединению, которое представляет собой или углевод per se, полученный из одного или более моносахаридных блоков, содержащих, по меньшей мере, 6 атомов углерода (которые могут быть линейными, разветвленными или циклическими), причем атом кислорода, азота или серы соединен с каждым атомом углерода; или соединение, содержащее в качестве своей части углеводную группу, полученную из одного или более моносахаридных блоков, причем каждый содержит, по меньшей мере, шесть атомов углерода (которые могут быть линейными, разветвленными или циклическими), причем атом кислорода, азота или серы соединен с каждым атомом углерода. Репрезентативные углеводы включают сахара (моно-, ди-, три- и олигосахариды, содержащие приблизительно 4, 5, 6, 7, 8 или 9 моносахаридных блоков), и полисахариды, такие как крахмалы, гликоген, целлюлоза и полисахаридные камеди. Конкретные моносахариды включают C5 и выше (например, C5, C6, C7 или C8) сахара; ди- и трисахариды включают сахара, содержащие два или три моносахаридных блока (например, C5, C6, C7 или C8).

В одном варианте осуществления углеводный конъюгат для применения в композициях и способах настоящего изобретения представляет собой моносахарид. В одном варианте осуществления, моносахарид представляет собой N-ацетилгалактозамин, такой как

В другом варианте осуществления углеводный конъюгат для применения в композициях и способах настоящего изобретения выбран из группы, состоящей из:

Другой репрезентативный углеводный конъюгат для применения в вариантах осуществления, описанных в настоящем изобретении, включает, но без ограничения:

где один из X или Y представляет собой олигонуклеотид, другой представляет собой водород.

В некоторых вариантах осуществления углеводный конъюгат дополнительно содержит один или более дополнительных лигандов, как определено выше, таких как, но, не ограничиваясь ими, ФК регуляторы и/или пептид, способствующий проникновению в клетку.

Линкеры

В некоторых вариантах осуществления конъюгат или лиганд, описанный в настоящем описании, можно присоединять к дцРНК настоящего изобретения через различные линкеры, которые могут быть расщепляемыми или нерасщепляемыми.

Термин "линкер" или "линкерная группа" означает органическую группу, которая соединяет две части соединения, например, ковалентно соединяет две части соединения. Линкеры обычно содержат непосредственно связь или атом, такой как кислород или сера, блок, такой как NR8, C(O), C(O)NH, SO, SO₂, SO₂NH, или цепь атомов, такую как, но, не ограничиваясь ими, замещенный или незамещенный алкил, замещенный или незамещенный алкенил, замещенный или незамещенный алкинил, арилалкил, арилалкенил, арилалкинил, гетероарилалкил, гетероарилалкенил, гетероарилалкинил, гетероциклилалкил, гетероциклилалкенил, гетероциклилалкинил, арил, гетероарил, гетероциклил, циклоалкил, циклоалкенил, алкиларилалкил, алкиларилалкенил, алкиларилалкинил, алкениларилалкил, алкениларилалкенил, алкениларилалкинил, алкиниларилалкил, алкиниларилалкенил, алкиниларилалкинил, алкилгетероарилалкил, алкилгетероарилалкенил, алкилгетероарилалкинил, алкенилгетероарилалкил, алкенилгетероарилалкенил, алкенилгетероарилалкинил, алкинилгетероарилалкил, алкинилгетероарилалкенил, алкинилгетероарилалкинил, алкилгетероциклилалкил, алкилгетероциклилалкенил, алкилгетероциклилалкинил, алкенилгетероциклилалкил, алкенилгетероциклилалкенил, алкенилгетероциклилалкинил, алкинилгетероциклилалкил, алкинилгетероциклилалкенил, алкинилгетероциклилалкинил, алкиларил, алкениларил, алкиниларил, алкилгетероарил, алкенилгетероарил, алкинилгетероарил, где один или более метиленов могут быть прерваны или оканчиваются O, S, S(O), SO₂, N(R8), C(O), замещенным или незамещенным арилом, замещенным или незамещенным гетероарилом, замещенным или незамещенным гетероциклилом; где R8 представляет собой водород, ацил, алифатический или замещенный алифатический. В одном варианте осуществления линкер содержит приблизительно 1-24 атомов, 2-24, 3-24, 4-24, 5-24, 6-24, 6-18, 7-18, 8-18 атомов, 7-17, 8-17, 6-16, 7-17 или 8-16 атомов.

Расщепляемая линкерная группа представляет собой группу, которая является достаточно стабильной вне клетки, но которая, после проникновения в клетку-мишень, расщепляется, высвобождая две части, которые линкер удерживал вместе. В предпочтительном варианте осуществления расщепляемая линкерная группа расщепляется, по меньшей мере, приблизительно в 10 раз, 20 раз, 30 раз, 40 раз, 50 раз, 60 раз, 70 раз, 80 раз, 90 раз или более, или, по меньшей мере, приблизительно в 100 раз быстрее в клетке-мишени или в первых нормальных условиях (которые можно, например, выбрать для имитации или представления внутриклеточных условий), чем в крови субъекта, или во вторых нормальных условиях (которые можно, например, выбрать для имитации или представления условий, обнаруживаемых в крови или сыворотке).

Расщепляемые линкерные группы подвержены действию расщепляющих агентов, например, pH, окислительно-восстановительному потенциалу или присутствию разрушающих молекул. Как правило, расщепляющие агенты являются преобладающими, или их обнаруживают при более высокой концентрации или активности внутри клетки, чем в сыворотке или крови. Примеры таких разрушающих агентов включают: окислительно-восстановительные агенты, которые выбраны из конкретных субстратов или которые не обладают субстратной специфичностью, включая, например, окислительные или восстановительные ферменты или восстанавливающие агенты, такие как меркаптаны, присутствующие в клетках, которые могут разрушать окислительно-восстановительно расщепляемую линкерную группу восстановлением; эстеразы; эндосомы или агенты, которые могут создавать кислую окружающую среду, например, агенты, которые дают в результате pH пять или ниже; ферменты, которые могут гидролизовать или разрушать кислотно-расщепляемую линкерную группу действием как обычная кислота, пептидазы (которые могут обладать субстратной специфичностью) и фосфатазы.

Расщепляемая линкерная группа, такая как дисульфидная связь, может быть подвержена влиянию pH. pH человеческой сыворотки составляет 7,4, тогда как средний внутриклеточный pH является немного меньшим в диапазоне приблизительно 7,1-7,3. Эндосомы имеют более кислый pH, в диапазоне 5,5-6,0, и лизосомы имеют даже более кислый pH около 5,0. Некоторые линкеры будут содержать расщепляемую линкерную группу, которая расщепляется при предпочтительном pH, посредством чего высвобождается катионный липид из лиганда внутри клетки или в требуемом отделе клетки.

Линкер может содержать расщепляемую линкерную группу, которая расщепляется конкретным ферментом. Тип расщепляемой линкерной группы, введенной в линкер, может зависеть от клетки, которая является мишенью. Например, лиганд, направленный на печень, может быть соединен с катионным липидом через линкер, который содержит эфирную группу. Клетки печени богаты эстеразами и, следовательно, линкер будет расщепляться более эффективно в клетках печени, чем в типах клеток, которые не богаты эстеразами. Другие типы клеток, богатые эстеразами, включают клетки легкого, коркового вещества почки и семенника.

Линкеры, которые содержат пептидные связи, можно применять, когда мишенью являются типы клеток, богатые пептидазами, такие как клетки печени и синовиоциты.

Как правило, пригодность кандидата на расщепляемую линкерную группу можно оценить тестированием на способность разрушающего агента (или условий) расщеплять кандидата на линкерную группу. Также желательно тестировать кандидата на расщепляемую линкерную группу на способность препятствовать расщеплению в крови или при контакте с другой тканью, не являющейся мишенью. Таким образом, можно определить относительную подверженность расщеплению между первыми и вторыми условиями, где первые условия выбраны так, чтобы характеризовать расщепление в клетке-мишени, и вторые условия выбраны так, чтобы характеризовать расщепление в других тканях или биологических жидкостях, например, крови или сыворотке. Оценку можно осуществлять в бесклеточной системе, в клетках, в клеточной культуре, в органе или культуре тканей или в животных. Может быть полезно проводить первичную оценку в бесклеточных или культуральных условиях и подтверждать дальнейшей оценкой на животных. В предпочтительных вариантах осуществления подходящие соединения, являющиеся кандидатами, расщепляются, по меньшей мере, приблизительно в 2, 4, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или приблизительно 100 раз быстрее в клетке (или в in vitro условиях, выбранных из имитирующих внутриклеточные условий), по сравнению с кровью или сывороткой (или в in vitro условиях, выбранных из имитирующих внеклеточные условий).

В одном варианте осуществления расщепляемая линкерная группа представляет собой окислительно-восстановительную расщепляемую линкерную группу, которая расщепляется при восстановлении или окислении. Пример восстановительно расщепляемой линкерной группы представляет собой дисульфидную линкерную группу (-S-S-). Для определения, представляет ли собой кандидат на расщепляемую линкерную группу подходящую "восстановительно расщепляемую линкерную группу" или, например, является ли он подходящим для применения с конкретной молекулой дцРНК и конкретным агентом для направленной доставки, можно просматривать способы, описанные в настоящем описании. Например, кандидата можно оценить выдерживанием с дитиотреитолом (DTT) или другим восстанавливающим агентом, используя реагенты, известные в данной области техники, которые имитируют скорость расщепления, наблюдаемую в клетке, например, клетке-мишени. Кандидатов можно также оценить в условиях, которые выбраны для того, чтобы имитировать условия крови или сыворотки. В одном варианте осуществления соединения, являющиеся кандидатами, расщепляются самое большое приблизительно на 10% в крови. В других вариантах осуществления подходящие соединения, являющиеся кандидатами, разрушаются, по меньшей мере, приблизительно в 2, 4, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или приблизительно 100 раз быстрее в клетке (или при in vitro условиях, выбранных так, чтобы имитировать внутриклеточные условия), по сравнению с кровью (или при in vitro условиях, выбранных так, чтобы имитировать внеклеточные условия). Скорость расщепления соединений, являющихся кандидатами, можно определить, применяя стандартные кинетические ферментные анализы в условиях, выбранных так, чтобы имитировать внутриклеточную среду, и сравнивая с условиями, выбранными так, чтобы имитировать внеклеточную среду.

В другом варианте осуществления расщепляемый линкер содержит расщепляемую линкерную группу на основе фосфата. Расщепляемую линкерную группу на основе фосфата расщепляют агентами, которые разрушают или гидролизуют фосфатную группу. Примерами агентов, которые расщепляют фосфатную группу в клетках, являются ферменты, такие как фосфатазы в клетках. Примерами линкерных групп на основе фосфата являются -O-P(O)(ORk)-O-, -O-P(S)(ORk)-O-, -O-P(S)(SRk)-O-, -S-P(O)(ORk)-O-, -O-P(O)(ORk)-S-, -S-P(O)(ORk)-S-, -O-P(S)(ORk)-S-, -S-P(S)(ORk)-O-, -O-P(O)(Rk)-O-, -O-P(S)(Rk)-O-, -S-P(O)(Rk)-O-, -S-P(S)(Rk)-O-, -S-P(O)(Rk)-S-, -O-P(S)(Rk)-S-. Предпочтительными вариантами осуществления являются -O-P(O)(OH)-O-, -O-P(S)(OH)-O-, -O-P(S)(SH)-O-, -S-P(O)(OH)-O-, -O-P(O)(OH)-S-, -S-P(O)(OH)-S-, -O-P(S)(OH)-S-, -S-P(S)(OH)-O-, -O-P(O)(H)-O-, -O-P(S)(H)-O-, -S-P(O)(H)-O-, -S-P(S)(H)-O-, -S-P(O)(H)-S-, -O-P(S)(H)-S-. Предпочтительным вариантом осуществления является -O-P(O)(OH)-O-. Данные кандидаты можно оценить, применяя способы, аналогично описанным выше.

В другом варианте осуществления расщепляемый линкер содержит кислоторасщепляемую линкерную группу. Кислоторасщепляемая линкерная группа представляет собой линкерную группу, которая расщепляется в кислых условиях. В предпочтительных вариантах осуществления кислоторасщепляемые линкерные группы расщепляют в кислой среде с pH приблизительно 6,5 или ниже (например, приблизительно 6,0, 5,75, 5,5, 5,25, 5,0 или ниже), или агентами, такими как ферменты, которые могут действовать как обычная кислота. В клетке специфические органеллы с низкой pH, такие как эндосомы и лизосомы, могут обеспечивать условия расщепления для кислоторасщепляемых линкерных групп. Примеры кислоторасщепляемых линкерных групп включают, но без ограничения, гидразоны, сложные эфиры и эфиры аминокислот. Кислоторасщепляемые группы могут иметь общую формулу -C=NN, C(O)O или -OC(O). Предпочтительный вариант осуществления представляет собой вариант, когда углерод, соединенный с кислородом сложного эфира (алкоксигруппа), представляет собой арильную группу, замещенную алкильную группу или третичную алкильную группу, такую как диметил, пентил или трет-бутил. Данные кандидаты можно оценить, применяя способы, аналогично описанным выше.

В другом варианте осуществления расщепляемый линкер содержит расщепляемую линкерную группу на основе сложного эфира. Расщепляемая линкерная группа на сложного основе эфира расщепляется ферментами, такими как эстеразы и амидазы в клетках. Примеры расщепляемых линкерных групп на основе сложного эфира включают, но без ограничения, сложные эфиры алкиленовых, алкениленовых и алкиниленовых групп. Сложный эфир расщепляемых линкерных групп имеет общую формулу -C(O)O- или -OC(O)-. Данные кандидаты можно оценить, применяя способы, аналогично описанным выше.

В еще другом варианте осуществления расщепляемый линкер содержит расщепляемую линкерную группу на основе пептида. Расщепляемая линкерная группа на основе пептида расщепляется ферментами, такими как пептидазы и протеазы в клетках. Расщепляемые линкерные группы на основе пептида представляют собой пептидные связи, образованные между аминокислотами, давая олигопептиды (например, дипептиды, трипептиды и т.д.) и полипептиды. Расщепляемые группы на основе пептида не содержат амидную группу (-C(O)NH-). Амидная группа может быть образована между любым алкиленом, алкениленом или алкинилином. Пептидная связь представляет собой специфический тип амидной связи между аминокислотами, давая пептиды и белки. Расщепляемая группа на основе пептида обычно ограничена пептидной связью (т.е. амидной связью), образованной между аминокислотами, давая пептиды и белки, и не содержит целой амидной функциональной группы. Расщепляемые линкерные группы на основе пептида имеют общую формулу -NHCHRAC(O)NHCHRBC(O)- (SEQ ID NO:13), где RA и RB представляют собой группы R двух соседних аминокислот. Данные кандидаты можно оценить, применяя способы, аналогично описанным выше.

В одном варианте осуществления дцРНК настоящего изобретения конъюгирована с углеводом через линкер. Неограничивающие примеры дцРНК углеводных конъюгатов с линкерами композиций и способов настоящего изобретения включают, но без ограничения:

где один из X или Y представляет собой олигонуклеотид, другой представляет собой водород.

В определенных вариантах осуществления композиций и способов настоящего изобретения лиганд представляет собой один или более GalNAc (N-ацетилгалактозаминных) производных, соединенных через двухвалентный или трехвалентный разветвленный линкер.

В одном варианте осуществления дцРНК настоящего изобретения конъюгирована с двухвалентным или трехвалентным разветвленным линкером, выбранным из группы структур, показанных в любой из формул (XXXI)-(XXXIV):

где: q2A, q2B, q3A, q3B, q4A, q4B, q5A, q5B и q5C представляют собой, независимо в каждом случае, 0-20, и где повторяющееся звено является одинаковым или различным;

P^2A, P^2B, P^3A, P^3B, P^4A, P^4B, P^5A, P^5B, P^5C, T^2A, T^2B, T^3A, T^3B, T^4A, T^4B, T^4A, T^5B, T^5C, каждый независимо в каждом случае, отсутствует, представляет собой CO, NH, O, S, OC(O), NHC(O), CH₂, CH₂NH или CH₂O;

Q^2A, Q^2B, Q^3A, Q^3B, Q^4A, Q^4B, Q^5A, Q^5B, Q^5C, независимо в каждом случае, отсутствует, является алкиленом, замещенным алкиленом, где один или более метиленов могут быть прерваны или закончены одним или более из O, S, S(O), SO₂, N(R ), C(R')=C(R"), C≡C или C(O);

R^2A, R^2B, R^3A, R^3B, R^4A, R^4B, R^5A, R^5B, R^5C, каждый независимо в каждом случае, отсутствует, представляет собой NH, O, S, CH₂, C(O)O, C(O)NH, NHCH(R^a)C(O), -C(O)-CH(R^a)-NH-, CO, или гетероциклил;

L^2A, L^2B, L^3A, L^3B, L^4A, L^4B, L^5A, L^5B и L^5C представляют собой лиганд; т.е. каждый независимо в каждом случае, представляет собой моносахарид (такой как GalNAc), дисахарид, трисахарид, тетрасахарид, олигосахарид или полисахарид; и R^a представляет собой H или аминокислотную боковую цепь. Трехвалентные конъюгирующие GalNAc производные являются особенно пригодными для применения с агентами РНКи для ингибирования экспрессии гена-мишени, такими как производные формулы (XXXV):

,

где L^5A, L^5B и L^5C представляют собой моносахарид, такой как производное GalNAc.

Примеры подходящих двухвалентных и трехвалентных разветвленных линкерных групп, конъюгирующих производные GalNAc, включают, но без ограничения, структуры, приведенные выше, как формулы II VII, XI, X и XIII.

Репрезентативные патенты США, в которых описано получение РНК конъюгатов, включают, но без ограничения, патенты США 4828979; 4948882; 5218105; 5525465; 5541313; 5545730; 5552538; 5578717, 5580731; 5591584; 5109124; 5118802; 5138045; 5414077; 5486603; 5512439; 5578718; 5608046; 4587044; 4605735; 4667025; 4762779; 4789737; 4824941; 4835263; 4876335; 4904582; 4958013; 5082830; 5112963; 5214136; 5082830; 5112963; 5214136; 5245022; 5254469; 5258506; 5262536; 5272250; 5292873; 5317098; 5371241; 5391723; 5416203, 5451463; 5510475; 5512667; 5514785; 5565552; 5567810; 5574142; 5585481; 5587371; 5595726; 5597696; 5599923; 5599928 и 5688941; 6294664; 6320017; 6576752; 6783931; 6900297; 7037646; 8106022, полное содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки.

Вектор, кодирующий дцРНК

В другом аспекте молекулы дцРНК APOC3 экспрессируются из транскрипционных единиц, встроенных в векторы ДНК или РНК (см., например, Couture, A, et al., TIG. (1996), 12:5-10; Skillern, A., et al., международная патентная публикация № WO 00/22113, Conrad, международная патентная публикация № WO 00/22114, и Conrad, патент США 6054299). Данные трансгены можно вводить в виде линейного конструкта, кольцевой плазмиды или вирусного вектора, которые можно вводить, и они могут наследоваться в виде трансгена, интегрированного в геном хозяина. Трансген можно также конструировать так, чтобы обеспечить его наследование в виде экстрахромосомной плазмиды (Gassmann et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1995) 92:1292).

Отдельные цепи дцРНК можно транскрибировать промоторами на двух отдельных экспрессионных векторах и совместно трансфицировать в клетку-мишень. Альтернативно каждую отдельную цепь дцРНК можно транскрибировать промоторами, каждый из которых расположен в одной экспрессионной плазмиде. В одном варианте осуществления дцРНК экспрессируется в виде инвертированного повтора, соединенного линкерной полинуклеотидной последовательностью, так что дцРНК имеет структуру типа “стебель” и петлеобразную структуру.

Экспрессионные векторы рекомбинантной дцРНК обычно представляют собой плазмиды или вирусные векторы ДНК. Экспрессирующие дцРНК вирусные векторы можно конструировать на основе, но, не ограничиваясь ими, аденоассоциированного вируса (для обзора, см. Muzyczka, et al., Curr. Topics Micro. Immunol. (1992) 158:97-129)); аденовируса (см., например, Berkner, et al., BioTechniques (1998) 6:616), Rosenfeld et al. (1991, Science 252:431-434), и Rosenfeld et al. (1992), Cell 68:143-155)); или альфавируса, а также других вирусов, известных в данной области техники. Ретровирусы используют для введения ряда генов во многие различные типы клеток, включая эпителиальные клетки, in vitro и/или in vivo (см., например, Eglitis, et al., Science (1985) 230:1395-1398; Danos and Mulligan, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1998) 85:6460-6464; Wilson et al, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:3014-3018; Armentano, et al, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:61416145; Huber et al, 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:8039-8043; Ferry et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:8377-8381; Chowdhury al, 1991, Science 254:1802-1805; van Beusechem. et al, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7640-19; Kay et al, 1992, Human Gene Therapy 3:641-647; Dai et al, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10892-10895; Hwu et al, 1993, J. Immunol. 150:4104-4115; патент США 4868116; патент США 4980286; PCT публикацию WO 89/07136; PCT публикацию WO 89/02468; PCT публикацию WO 89/05345; и PCT публикацию WO 92/07573). Рекомбинантные ретровирусные векторы, способные трансдуцировать и экспрессировать гены, встроенные в геном клетки, можно получить трансфекцией рекомбинантного ретровирусного генома в подходящую пакующую клеточную линию, такую как PA317 и Psi-CRIP (Comette et al, 1991, Human Gene Therapy 2:5-10; Cone et al, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6349). Рекомбинантные аденовирусные векторы можно использовать для инфицирования большого набора клеток и тканей восприимчивых реципиентов (например, крыс, хомяков, собак и шимпанзе) (Hsu et al, 1992, J. Infectious Disease, 166:769), а также они обладают преимуществом, заключающимся в том, что не требуются митотически активные клетки для инфицирования.

Можно использовать любой вирусный вектор, способный принимать кодирующие последовательности для молекулы(молекул) дцРНК, которую будут экспрессировать, например, векторы, полученные из аденовируса (AV); аденоассоциированного вируса (AAV); ретровирусов (например, лентивирусов (LV), рабдовирусов, вируса лейкемии мышей); вируса герпеса и подобных. Тропизм вирусных векторов можно изменять псевдотипированием векторов оболочечными белками или другими поверхностными антигенами из других вирусов, или заменой различных вирусных капсидных белков, при необходимости.

Например, лентивирусные векторы, представленные в настоящем изобретении, можно псевдотипировать поверхностными белками из вируса везикулярного стоматита (VSV), бешенства, вируса Эбола, вируса Мокола и подобных. векторы AAV, представленные в настоящем изобретении, можно получить для доставки в различные клетки, конструированием векторов, экспрессирующих различные серотипы капсидных белков. Например, AAV вектор, экспрессирующий капсид 2 серотипа в геноме 2 серотипа, называют AAV 2/2. Данный капсидный ген 2 серотипа в векторе AAV 2/2 можно заменить капсидным геном 5 серотипа, получая AAV 2/5 вектор. Способы конструирования векторов AAV, которые экспрессируют различные серотипы капсидных белков, известны специалисту в данной области техники; см., например, Rabinowitz J E et al (2002), J Virol 76:791-801, полное описание которой включено в настоящее описание посредством ссылки.

Выбор рекомбинантных вирусных векторов, пригодных для применения в настоящем изобретении, способы для встраивания последовательностей нуклеиновых кислот для экспрессии дцРНК в векторе и способы доставки вирусного вектора в соответствующие клетки известны специалисту в данной области техники. См., например, Dornburg R (1995), Gene Therap. 2:301-310; Eglitis M A (1988), Biotechniques 6:608-614; Miller A D (1990), Hum Gene Therap. 1:5-14; Anderson W F (1998), Nature 392:25-30; и Rubinson D A ei al., Nat. Genet. 33:401-406, полное описание которых включено в настоящее описание посредством ссылки.

Вирусные векторы можно получить из AV и AAV. В одном варианте осуществления дцРНК, представленная в настоящем изобретении, экспрессируется в виде двух отдельных, комплементарных одноцепочечных молекул РНК из рекомбинантного вектора AAV, содержащего, например, или U6, или H1 РНК промоторы, или промотор цитомегаловируса (CMV).

Подходящий вектор AV для экспрессии дцРНК, представленной в настоящем изобретении, способ получения рекомбинантного вектора AV и способ доставки вектора в клетки-мишени описаны в Xia H et al. (2002), Nat. Biotech. 20:1006-1010.

Подходящие векторы AAV для экспрессии дцРНК, представленной в настоящем изобретении, способы получения рекомбинантного вектора AV и способы доставки векторов в клетки-мишени описаны в Samulski R et al. (1987), J. Virol. 61:3096-3101; Fisher J et al. (1996), J. Virol, 70:520-532; Samulski R et al. (1989), J. Virol. 63:3822-3826; патенте США 5252479; патенте США 5139941; международной патентной заявке № WO 94/13788; и международной патентной заявке № WO 93/24641, полное содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки.

Промотор, регулирующий экспрессию дцРНК или в плазмиде ДНК или в вирусном векторе, представленных в настоящем изобретении, может представлять собой промотор эукариотической РНК полимеразы I (например, рибосомальный промотор РНК), промотор РНК полимеразы II (например, CMV ранний промотор или актиновый промотор или промотор U1 snRNA) или обычно промотор РНК полимеразы III (например, промотор U6 snRNA или 7SK RNA) или прокариотический промотор, например T7 промотор, при условии, что экспрессионная плазмида также кодирует T7 РНК полимеразу, требуемую для транскрипции с T7 промотора. Промотор может также направлять трансгенную экспрессию в поджелудочную железу (см., например, the insulin regulatory sequence for pancreas (Bucchini al., 1986, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:2511-2515)).

Кроме того, экспрессию трансгена можно точно регулировать, например, используя индуцируемую регуляторную последовательность и системы экспрессии, такие как регуляторная последовательность, которая является чувствительной к определенным физиологическим регуляторам, например, уровню циркулирующей в крови глюкозы или гормонам (Docherty et al., 1994, FASEB J. 8:20-24). Такие индуцируемые системы экспрессии, подходящие для контроля трансгенной экспрессии в клетках или млекопитающих, включают регуляцию экдизоном, эстрогеном, прогестероном, тетрациклином, химическими стимуляторами димеризации и изопропил-бета-D1-тиогалактопиранозидом (EPTG). Специалист в данной области техники сможет выбрать подходящую регуляторную/промоторную последовательность в зависимости от предполагаемого применения дцРНК трансгена.

Как правило, рекомбинантные векторы, способные экспрессировать молекулы дцРНК, доставляются, как описано ниже, и сохраняются в клетках-мишенях. Альтернативно, можно использовать вирусные векторы, которые обеспечивают временную экспрессию молекулы дцРНК. Такие векторы можно повторно вводить, при необходимости. После экспрессии дцРНК связываются с РНК-мишенью и регулируют ее функционирование или экспрессию. Доставка дцРНК, экспрессирующей векторы, может быть системной, такой как внутривенное или внутримышечное введение, введением в клетки-мишени, извлеченные из пациента, с последующим введением в пациента, или любым другим способом, который обеспечивает введение в требуемую клетку-мишень.

Плазмиды ДНК, экспрессирующие дцРНК, обычно трансфицируют в клетки-мишени в виде комплекса с катионными липидными носителями (например, олигофектамином) или носителями на основе некатионных липидов (например, Transit-TKO™). Большое количество липидных трансфекций для дцРНК-опосредованнного нокдауна, направленного на различные области одного гена APOC3 или множества генов APOC3 в течение недели или более, также охватываются настоящим изобретением. Успешное введение векторов в клетки хозяина можно контролировать, применяя различные известные способы. Например, о временной трансфекции может сигнализировать репортер, такой как флуоресцентный маркер, такой как зеленый флуоресцентный белок (GFP). Стабильную трансфекцию клеток ex vivo можно обеспечить, используя маркеры, которые придают тансфицированным клеткам устойчивость к специфическим факторам окружающей среды (например, антибиотикам и лекарственным средствам), такую как устойчивость к гигромицину B.

Специфические молекулы дцРНК APOC3 можно также помещать в векторы и использовать в качестве векторов для генной терапии для пациентов, являющихся людьми. Векторы для генной терапии можно доставлять субъекту, например, внутривенной инъекцией, местным введением (см. патент США 5328470) или стереотактической инъекцией (см., например, Chen et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:3054-3057). Фармацевтическое получение вектора для генной терапии может включать вектор для генной терапии в подходящем разбавителе, или может включать матрикс для замедленного высвобождения, в который залит носитель для генной доставки. Альтернативно, когда полный вектор для генной доставки можно получить незатронутым из рекомбинантных клеток, например, ретровирусные векторы, фармацевтическое получение может включать одну или более клеток, которые обеспечивают систему генной доставки.

Фармацевтические композиции, содержащие дцРНК

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим дцРНК, как описано в настоящем описании, и фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтическая композиция, содержащая дцРНК, является пригодной для лечения заболевания или нарушения, связанного с экспрессией или активностью гена APOC3, такого как патологические процессы, опосредованные экспрессией APOC3. Такие фармацевтические композиции формулируют в зависимости от способа доставки.

Фармацевтические композиции, представленные в настоящем изобретении, вводят при дозах, достаточных для ингибирования экспрессии гена APOC3.

Как правило, подходящая доза дцРНК будет находиться в диапазоне 0,01-200,0 миллиграмм на килограмм массы тела реципиента в день, обычно в диапазоне 1-50 мг на килограмм массы тела в день.

Субъектам можно вводить терапевтическое количество дцРНК, такое как приблизительно 0,01 мг/кг, 0,02 мг/кг, 0,03 мг/кг, 0,04 мг/кг, 0,05 мг/кг, 0,06 мг/кг, 0,07 мг/кг, 0,08 мг/кг, 0,09 мг/кг, 0,1 мг/кг, 0,15 мг/кг, 0,2 мг/кг, 0,25 мг/кг, 0,3 мг/кг, 0,35 мг/кг, 0,4 мг/кг, 0,45 мг/кг, 0,5 мг/кг, 0,55 мг/кг, 0,6 мг/кг, 0,65 мг/кг, 0,7 мг/кг, 0,75 мг/кг, 0,8 мг/кг, 0,85 мг/кг, 0,9 мг/кг, 0,95 мг/кг, 1,0 мг/кг, 1,1 мг/кг, 1,2 мг/кг, 1,3 мг/кг, 1,4 мг/кг, 1,5 мг/кг, 1,6 мг/кг, 1,7 мг/кг, 1,8 мг/кг, 1,9 мг/кг, 2,0 мг/кг, 2,1 мг/кг, 2,2 мг/кг, 2,3 мг/кг, 2,4 мг/кг, 2,5 мг/кг дцРНК, 2,6 мг/кг дцРНК, 2,7 мг/кг дцРНК, 2,8 мг/кг дцРНК, 2,9 мг/кг дцРНК, 3,0 мг/кг дцРНК, 3,1 мг/кг дцРНК, 3,2 мг/кг дцРНК, 3,3 мг/кг дцРНК, 3,4 мг/кг дцРНК, 3,5 мг/кг дцРНК, 3,6 мг/кг дцРНК, 3,7 мг/кг дцРНК, 3,8 мг/кг дцРНК, 3,9 мг/кг дцРНК, 4,0 мг/кг дцРНК, 4,1 мг/кг дцРНК, 4,2 мг/кг дцРНК, 4,3 мг/кг дцРНК, 4,4 мг/кг дцРНК, 4,5 мг/кг дцРНК, 4,6 мг/кг дцРНК, 4,7 мг/кг дцРНК, 4,8 мг/кг дцРНК, 4,9 мг/кг дцРНК, 5,0 мг/кг дцРНК, 5,1 мг/кг дцРНК, 5,2 мг/кг дцРНК, 5,3 мг/кг дцРНК, 5,4 мг/кг дцРНК, 5,5 мг/кг дцРНК, 5,6 мг/кг дцРНК, 5,7 мг/кг дцРНК, 5,8 мг/кг дцРНК, 5,9 мг/кг дцРНК, 6,0 мг/кг дцРНК, 6,1 мг/кг дцРНК, 6,2 мг/кг дцРНК, 6,3 мг/кг дцРНК, 6,4 мг/кг дцРНК, 6,5 мг/кг дцРНК, 6,6 мг/кг дцРНК, 6,7 мг/кг дцРНК, 6,8 мг/кг дцРНК, 6,9 мг/кг дцРНК, 7,0 мг/кг дцРНК, 7,1 мг/кг дцРНК, 7,2 мг/кг дцРНК, 7,3 мг/кг дцРНК, 7,4 мг/кг дцРНК, 7,5 мг/кг дцРНК, 7,6 мг/кг дцРНК, 7,7 мг/кг дцРНК, 7,8 мг/кг дцРНК, 7,9 мг/кг дцРНК, 8,0 мг/кг дцРНК, 8,1 мг/кг дцРНК, 8,2 мг/кг дцРНК, 8,3 мг/кг дцРНК, 8,4 мг/кг дцРНК, 8,5 мг/кг дцРНК, 8,6 мг/кг дцРНК, 8,7 мг/кг дцРНК, 8,8 мг/кг дцРНК, 8,9 мг/кг дцРНК, 9,0 мг/кг дцРНК, 9,1 мг/кг дцРНК, 9,2 мг/кг дцРНК, 9,3 мг/кг дцРНК, 9,4 мг/кг дцРНК, 9,5 мг/кг дцРНК, 9,6 мг/кг дцРНК, 9,7 мг/кг дцРНК, 9,8 мг/кг дцРНК, 9,9 мг/кг дцРНК, 9,0 мг/кг дцРНК, 10 мг/кг дцРНК, 15 мг/кг дцРНК, 20 мг/кг дцРНК, 25 мг/кг дцРНК, 30 мг/кг дцРНК, 35 мг/кг дцРНК, 40 мг/кг дцРНК, 45 мг/кг дцРНК или приблизительно 50 мг/кг дцРНК. Промежуточные величины и диапазоны для приведенных величин также предполагаются частью настоящего изобретения.

Фармацевтическую композицию можно вводить один раз в день, или дцРНК можно вводить в виде двух, трех или более доз через подходящие интервалы в течение дня или даже применяя непрерывное вливание или доставку составом с контролируемым высвобождением. В данном случае, количество дцРНК, содержащееся в каждой поддозе, должно быть, соответственно, меньшим для того, чтобы давать суммарную дневную дозу. Единицу дозирования можно также составлять для доставки в течение нескольких дней, например, применяя общепринятый состав с замедленным высвобождением, который обеспечивает замедленное высвобождение дцРНК в течение нескольких дней. Составы с замедленным высвобождением хорошо известны в данной области техники и являются особенно пригодными для доставки агентов в конкретное место, так что их можно применять с агентами настоящего изобретения. В данном варианте осуществления единица дозирования содержит соответствующее множество кратных количеств дневной дозы.

Эффект единичной дозы на уровень APOC3 является продолжительным, так что последующие дозы вводят не более чем через интервалы в 3, 4 или 5 дней, или не более чем через интервалы в 1, 2, 3 или 4 недели, или не более чем через интервалы в 5, 6, 7, 8, 9 или 10 недель.

Специалисту в данной области техники очевидно, что определенные факторы могут влиять на дозу и временные интервалы, требуемые для эффективного лечения субъекта, включая, но, не ограничиваясь ими, тяжесть заболевания или нарушения, предшествующее лечение, общее состояние здоровья и/или возраст субъекта и другие присутствующие нарушения. Более того, лечение субъекта терапевтически эффективными количествами композиции может включать однократное лечение или серию лечений. Оценку эффективных доз и in vivo времени полувыведения для отдельных дцРНК, предлагаемых настоящим изобретением, можно осуществлять, применяя общепринятые способы или на основе in vivo испытаний, используя подходящую животную модель, как описано в другом месте в настоящем описании.

Достижения в генетике мышей привели к разработке ряда мышиных моделей для исследования различных человеческих нарушений, таких как патологические процессы, опосредованные экспрессией APOC3. Такие модели используют для in vivo тестирования дцРНК, а также для определения терапевтически эффективной дозы. Подходящей мышиной моделью является, например, мышь, содержащая плазмиду, экспрессирующую человеческий APOC3. Другая подходящая мышиная модель представляет собой трансгенную мышь, несущую трансген, который экспрессирует человеческий APOC3.

Данные, полученные в анализах клеточных культур и испытаниях на животных, можно использовать для получения диапазона доз для применения на людях. Доза композиций, представленных в настоящем изобретении, лежит обычно в диапазоне циркулирующих концентраций, которые включают ED50 с небольшой или отсутствующей токсичностью. Доза может изменяться в данном диапазоне в зависимости от применяемой лекарственной формы и применяемого пути введения. Для любого соединения, применяемого в способах, представленных в настоящем изобретении, терапевтически эффективную дозу можно оценить первоначально в анализе на клеточной культуре. Дозу можно формулировать на животных моделях, достигая диапазон циркулирующих в плазме концентраций соединения или, при необходимости, полипептидного продукта последовательности-мишени (например, достигая пониженной концентрации полипептида), который включает IC50 (т.е. концентрацию тестируемого соединения, которая достигает полумаксимального ингибирования симптомов), как определено в клеточной культуре. Данную информацию можно использовать для более точного определения доз для людей. Концентрацию в плазме можно измерить, например, высокоэффективной жидкостной хроматографией.

дцРНК, представленные в настоящем изобретении, можно вводить в комбинации с другими известными агентами, эффективными для лечения патологических процессов, опосредованных экспрессией гена-мишени. В любом случае, врач, осуществляющий введение, может регулировать количество и интервалы введения дцРНК в зависимости от результатов, наблюдаемых при применении стандартных величин эффективности, известных в данной области техники или описанных в настоящем изобретении.

Введение

Настоящее изобретение также включает фармацевтические композиции и составы, которые содержат дцРНК соединения, представленные в настоящем изобретении. Фармацевтические композиции настоящего изобретения можно вводить рядом способов в зависимости от того, требуется ли местное или системное лечение, и от области, которую подвергают лечению. Введение может быть местным (включая буккальное и сублингвальное), легочным, например, ингаляцией или инсуфляцией порошков или аэрозолей, включая распылителем; интратрахеальным, интраназальным, эпидермальным и трансдермальным, пероральным или парентеральным. Парентеральное введение включает внутривенную, внутриартериальную, подкожную, интраперитонеальную или внутримышечную инъекцию или вливание; или внутричерепное, например, интрапаренхиматозное, интратекальное или интравентрикулярное введение.

дцРНК можно доставлять способом, направленным на конкретную ткань.

Фармацевтические композиции и составы для местного введения могут включать трансдермальные пластыри, мази, лосьоны, крема, гели, капли, суппозитории, спреи, жидкости и порошки. Общепринятые фармацевтические носители, водные, порошковые или масляные основы, загустители и подобные могут быть необходимы или желательны. Кондомы с покрытием, перчатки и подобное могут также быть пригодными. Подходящие местные составы включают составы, в которых дцРНК, представленные в настоящем изобретении, находятся в смеси с агентом для местной доставки, таким как липиды, липосомы, жирные кислоты, эфиры жирных кислот, стероиды, комплексообразующие агенты и поверхностно-активные вещества. Подходящие липиды и липосомы включают нейтральные (например, диолеоилфосфатидил DOPE этаноламин, димиристоилфосфатидилхолин DMPC, дистеароилфосфатидилхолин), отрицательные (например, димиристоилфосфатидилглицерин DMPG) и катионные (например, диолеоилтетраметиламмопропил DOTAP и диолеоилфосфатидилэтаноламин DOTMA). ДцРНК, представленные в настоящем изобретении, можно инкапсулировать в липосомы или они могут образовывать комплекс в них, в частности в катионные липосомы. Альтернативно, дцРНК можно комплексовать с липидами, в частности катионными липидами. Подходящие жирные кислоты и эфиры включают, но без ограничения, арахидоновую кислоту, олеиновую кислоту, эйкозановую кислоту, лауриновую кислоту, каприловую кислоту, каприновую кислоту, миристиновую кислоту, пальмитиновую кислоту, стеариновую кислоту, линолевую кислоту, линоленовую кислоту, дикапрат, трикапрат, монолеин, дилаурин, глицерил-1 монокапрат, 1-додецилазациклогептен-2-он, ацилкарнитин, ацилхолин, или C_1-10алкиловый эфир (например, изопропилмиристат IPM), моноглицерид, диглицерид или их фармацевтически приемлемую соль. Местные составы описаны подробно в патенте США 6747014, который включен в настоящее описание посредством ссылки.

Липосомальные составы

Существует множество организованных поверхностно-активных структур помимо микроэмульсий, которые исследуют и применяют для формулирования лекарственных средств. Они включают монослои, мицеллы, бислои и везикулы. Везикулы, такие как липосомы, привлекают большой интерес благодаря их специфичности и продолжительности действия, которые они обеспечивают, с точки зрения доставки лекарственных средств. Как используется в настоящем описании, термин "липосома" означает везикулу, состоящую из амфифильных липидов, упорядоченных в сферический бислой или бислои.

Липосомы представляют собой однослойные или многослойные везикулы, которые содержат мембрану, образованную из липофильного материала и водного внутреннего пространства. Водная часть содержит композицию, которую доставляют. Катионные липосомы обладают преимуществом, поскольку способны сливаться с клеточной стенкой. Некатионные липосомы, хотя они и не способны сливаться также эффективно с клеточной стенкой, поглощаются макрофагами in vivo.

Для того чтобы пересечь незатронутыми кожу млекопитающего, липидные везикулы должны проходить через серию тонких пор, каждая с диаметром менее чем 50 нм, под влиянием подходящего трансдермального градиента. Следовательно, желательно использовать липосому, которая способна сильно деформироваться и способна проходить через тонкие поры.

Дополнительные преимущества липосом включают следующее: липосомы, полученные из природных фосфолипидов, являются биосовместимыми и биоразлагаемыми; липосомы могут включать широкий диапазон водно- и жирорастворимых лекарственных средств; липосомы могут защищать инкапсулированные лекарственные средства в их внутренней полости от метаболизма и разрушения (Rosoff, в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., v.1, p. 245). Важными аспектами получения липосомных составов являются заряд липидной поверхности, размер везикулы и водный объем липосом.

Липосомы являются пригодными для транспортировки и доставки активных ингредиентов в место действия. Поскольку липосомальная мембрана структурно идентична биологическим мембранам, при применении липосом на ткани, липосомы начинают сливаться с клеточными мембранами и по мере того как слияние липосомы и клетки прогрессирует, содержимое липосомы высвобождается в клетку, где может действовать активный агент.

Липосомальные составы являются фокусом интенсивных исследований в качестве способа доставки для многих лекарственных средств. Имеется растущее число фактов, что для местного введения, липосомы дают несколько преимуществ по сравнению с другими составами. Данные преимущества включают ослабление побочных эффектов, связанных с большим системным поглощением введенного лекарственного средства, повышенное накопление введенного лекарственного средства в требуемой мишени и способность вводить большое разнообразие лекарственных средств, как гидрофильных, так и гидрофобных, в кожу.

Несколько сообщений подробно описывают способность липосом доставлять агенты, включая высокомолекулярную ДНК в кожу. Соединения, включая анальгетики, антитела, гормоны и высокомолекулярные ДНК, вводят в кожу. Большинство применений приводит в результате к направленной доставке в верхний эпидермис.

Липосомы разделяют на два больших класса. Катионные липосомы представляют собой положительно заряженные липосомы, которые взаимодействуют с отрицательно заряженными молекулами ДНК, образуя стабильный комплекс. Комплекс положительно заряженная ДНК/липосома связывается с отрицательно заряженной клеточной поверхностью и интернализируется в эндосому. Благодаря кислому pH в эндосоме липосомы разрушаются, высвобождая свое содержимое в цитоплазму клетки (Wang et al, Biochem. Biophys. Res. Commun, 1987, 147, 980-985).

Липосомы, которые являются чувствительными к pH или отрицательно заряженными, захватывают ДНК скорее, чем комплекс с ней. Поскольку и ДНК, и липид являются аналогично заряженными, протекает отталкивание, а не образование комплекса. Тем не менее, некоторые ДНК захватываются в водное внутреннее пространство данных липосом. pH-чувствительные липосомы применяют для доставки ДНК, кодирующей ген тимидинкиназы, в клеточные монослои в культуре. Экспрессию экзогенного гена определяли в клетках-мишенях (Zhou et al, Journal of Controlled Release, 1992, 19, 269-274).

Один из основных типов липосомальных композиций включает фосфолипиды, отличные от природного фосфатидилхолина. Нейтральные липосомные композиции, например, можно получить из димиристоилфосфатидилхолина (DMPC) или дипальмитоилфосфатидилхолина (DPPC). Анионные липосомные композиции обычно получают из димиристоилфосфатидилглицерина, тогда как анионные фузогенные липосомы получают, в первую очередь, из диолеоилфосфатидилэтаноламина (DOPE). Другой тип липосомальных композиций получают из фосфатидилхолина (PC), такого как, например, соевый PC и яичный PC. Другой тип получают из смесей фосфолипида и/или фосфатидилхолина, и/или холестерина.

Несколько исследований оценивали местную доставку лекарственных составов в кожу. Нанесение липосом, содержащих интерферон, на кожу морских свинок приводило в результате к уменьшению герпесных ран на коже, тогда как доставка интерферона другими способами (например, в виде раствора или в виде эмульсии) была неэффективной (Weiner et al, Journal of Drug Targeting, 1992, 2, 405-410). Кроме того, в дополнительном исследовании оценивали эффективность интерферона, введенного как часть липосомального состава, относительно введения интерферона, используя водную систему, и заключили, что липосомальный состав лучше, чем водное введение (du Plessis et al, Antiviral Research, 1992, 18, 259-265).

Неионные липосомальные системы также были исследованы для определения их применимости для доставки лекарственных средств в кожу, в частности системы, содержащие неионное поверхностно-активное вещество и холестерин. Неионные липосомальные составы, содержащие Novasome™ I (глицерилдилаурат/холестерин/полиоксиэтилен-10-стеариловый эфир) и Novasome™ II (глицерилдистеарат/холестерин/полиоксиэтилен-10-стеариловый эфир), использовали для доставки циклоспорина-A в дерму кожи мыши. Результаты показали, что такие неионные липосомальные системы эффективны для облегчения отложения циклоспорина-A в различных слоях кожи (Hu et al. S.T.P. Pharma. Sci., 1994, 4, 6, 466).

Липосомы также включают "стерически стабилизированные" липосомы, термин, который, как используется в настоящем описании, относится к липосомам, содержащим один или более специальных липидов, которые при введении в липосомы приводят в результате к увеличенной продолжительности циркуляции относительно липосом, не содержащих такие специальные липиды. Примерами стерически стабилизированных липосом являются липосомы, в которых часть образующей везикулу липидной части липосомы (A) содержит один или более гликолипидов, таких как моносиалоганглиозид GMI, или (B) получен с одним или более гидрофильными полимерами, такими как полиэтиленгликольные (PEG) группы. Не желая быть связанными какой-либо конкретной теорией, в данной области техники считают, что, по меньшей мере, для стерически стабилизированных липосом, содержащих ганглиозиды, сфингомиелин или PEG-дериватизированные липиды, повышенная продолжительность циркуляции стерически стабилизированных липосом является результатом ослабленного поглощения клетками ретикулоэндотелиальной системы (RES) (Allen et al, FEBS Letters, 1987, 223, 42; Wu et al, Cancer Research, 1993, 53, 3765).

Различные липосомы, содержащие один или более гликолипидов, известны в данной области техники. Papahadjopoulos et al (Ann. N.Y. Acad. Sci., 1987, 507, 64) сообщают о способности моносиалоганглиозида GMI, галактоцереброзидсульфата и фосфатидилинозита увеличивать время полувыведения липосом из крови. Данные результаты развиты Gabizon et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1988, 85, 6949). В патенте США 4837028 и WO 88/04924, оба Allen et al, описаны липосомы, содержащие (1) сфингомиелин и (2) ганглиозид G_M1 или галактоцереброзидсульфатный эфир. В патенте США 5543152 (Webb et al.) описаны липосомы, содержащие сфингомиелин. Липосомы, содержащие 1,2-sn-димиристоилфосфатидилхолин, описаны в WO 97/13499 (Lim et al).

Многие липосомы, содержащие липиды, дериватизированные одним или более гидрофильными полимерами, и способы их получения известны в данной области техники. Sunamoto et al. (Bull. Chem. Soc. Jpn., 1980, 53, 2778) описали липосомы, содержащие неионный детергент, 2C_1215G, который содержит PEG группу. Ilium et al. (FEBS Lett., 1984, 167, 79) отметили, что гидрофильное покрытие полистирольных частиц полимерными гликолями приводит в результате к значительному увеличению времени полувыведения из крови. Синтетические фосфолипиды, модифицированные присоединением карбоксильных групп полиалкиленгликолей (например, PEG), описаны Sears (патенты США 4426330 и 4534899). Klibanov et al. (FEBS Lett., 1990, 268, 235) описали эксперименты, показывающие, что липосомы, содержащие фосфатидилэтаноламин (PE), дериватизированный PEG или PEG стеаратом, обладают значительным увеличением продолжительности циркуляции в крови. Blume et al. (Biochimica et Biophysica Acta, 1990, 1029, 91) распространили данные наблюдения на другие PEG-дериватизированные фосфолипиды, например, DSPE-PEG, образованный комбинацией дистеароилфосфатидилэтаноламина (DSPE) и PEG. Липосомы, содержащие ковалентно присоединенные PEG группы на их внешней поверхности, описаны в европейском патенте EP 0445131 B1 и WO 90/04384 Fisher. Липосомные композиции, содержащие 1-20 мольных процента PE, дериватизированного PEG, и способы их применения, описаны Woodle et al. (патенты США 5013556 и 5356633) и Martin et al. (патент США 5213804 и европейский патент EP 0496813 B1). Липосомы, содержащие ряд других конъюгатов липид-полимер, описаны в WO 91/05545 и патенте США 5225212 (оба Martin et al), и в WO 94/20073 (Zalipsky et al.) Липосомы, содержащие PEG-модифицированные церамидные липиды, описаны в WO 96/10391 (Choi et al). В патенте США 5540935 (Miyazaki et al) и в патенте США 5556948 (Tagawa et al) описаны содержащие PEG липосомы, которые можно дополнительно дериватизировать функциональными группами на их поверхности.

Ряд липосом, содержащих нуклеиновые кислоты, известны в данной области техники. В WO 96/40062 Thierry et al. описаны способы инкапсулирования высокомолекулярных нуклеиновых кислот в липосомы. В патенте США 5264221 Tagawa et al. описаны связанные с белком липосомы и утверждается, что содержимое данных липосом может включать дцРНК. В патенте США 5665710 Rahman et al. описаны некоторые способы инкапсулирования олигодезоксинуклеотидов в липосомы. В WO 97/04787 Love et al. описаны липосомы, содержащие дцРНК, мишенью которых является ген raf.

Трансферсомы представляют собой еще другой тип липосом и представляют собой легко деформируемые липидные агрегаты, которые являются привлекательными кандидатами на средства для доставки лекарственных средств. Трансферсомы можно описать как липидные капли, которые являются столь легко деформируемыми, что они способны легко проникать через поры, которые меньше, чем данная капля. Трансферсомы являются приспосабливающимися к окружающей среде, в которой их применяют, например, они являются самоорганизующимися (приспосабливающимися к форме пор в коже), самовосстанавливающимися, часто достигают своей мишени без фрагментации и часто самозагружаемыми. Для получения трансферсом можно добавлять активаторы края поверхности, обычно поверхностно-активные вещества, к стандартной липосомальной композиции. Трансферсомы применяют для доставки сывороточного альбумина в кожу. Показано, что опосредованная трансферсомами доставка сывороточного альбумина также эффективна, как подкожная инъекция раствора, содержащего сывороточный альбумин.

Поверхностно-активные вещества находят широкое применение в составах, таких как эмульсии (включая микроэмульсии) и липосомы. Самый распространенный способ классификации и распределения свойств многих различных типов поверхностно-активных веществ, и природных и синтетических, включает применение гидролипидного баланса (HLB). Природа гидрофильной группы (также известной как "головка") обеспечивает самый подходящий способ классификации различных поверхностно-активных веществ, используемых в составах (Rieger, в Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, p. 285).

Если молекула поверхностно-активного вещества не является ионизированной, ее классифицируют как неионное поверхностно-активное вещество. Неионные поверхностно-активные вещества находят широкое применение в фармацевтических и косметических продуктах и являются применимыми в широком диапазоне pH величин. Как правило, их HLB величины находятся в диапазоне от 2 до приблизительно 18, в зависимости от их структуры. Неионные поверхностно-активные вещества включают неионное эфиры, такие как эфиры этиленгликоля, эфиры пропиленгликоля, эфиры глицерина, эфиры полиглицерина, эфиры сорбитана, эфиры сахарозы и этоксилированные эфиры. Неионные алканоламиды и эфиры, такие как этоксилаты жирных спиртов, пропоксилированные спирты и этоксилированные/пропоксилированные блокполимеры также являются включенными в данный класс. Полиоксиэтиленовые поверхностно-активные вещества являются наиболее популярными членами класса неионных поверхностно-активных веществ.

Если молекула поверхностно-активного вещества несет отрицательный заряд, когда ее растворяют или диспергируют в воде, поверхностно-активное вещество классифицируют как анионное. Анионные поверхностно-активные вещества включают карбоксилаты, такие как мыла, ациллактилаты, ациламиды аминокислот, эфиры серной кислоты, такие как алкилсульфаты и этоксилированные алкилсульфаты, сульфонаты, такие как алкилбензолсульфонаты, ацилизэтионаты, ацилтаураты и сульфосукцинаты и фосфаты. Самыми важными членами класса анионных поверхностно-активных веществ являются алкилсульфаты и мыла.

Если молекула поверхностно-активного вещества несет положительный заряд, когда его растворяют или диспергируют в воде, поверхностно-активное вещество классифицируют как катионное. Катионные поверхностно-активные вещества включают соли четвертичного аммония и этоксилированные амины. Соли четвертичного аммония являются самыми используемыми членами данного класса.

Если молекула поверхностно-активного вещества обладает способностью нести или положительный, или отрицательный заряд, поверхностно-активное вещество классифицируют как амфотерное. Амфотерные поверхностно-активные вещества включают производные акриловой кислоты, замещенные алкиламиды, N-алкилбетаины и фосфатиды.

Применение поверхностно-активных веществ в лекарственных продуктах, составах и в эмульсиях рассмотрено (Rieger, в Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, p. 285).

Частицы нуклеиновой кислоты и липидов

В одном варианте осуществления дцРНК APOC3, представленная в настоящем изобретении, полностью инкапсулирована в липидный состав, например, с образованием SPLP, pSPLP, SNALP или другой частицы нуклеиновая кислота-липид. Как используется в настоящем описании, термин "SNALP" относится к стабильной частице нуклеиновая кислота-липид, включая SPLP. Как используется в настоящем описании, термин "SPLP" относится к частице нуклеиновая кислота-липид, содержащей плазмидную ДНК, инкапсулированную в липидную везикулу. SNALP и SPLP обычно содержат катионный липид, некатионный липид и липид, который препятствует агрегации частиц (например, PEG-липидный конъюгат). SNALP и SPLP являются очень пригодными для системного применения, поскольку они обладают длительным периодом циркуляции после внутривенной (i.v.) инъекции и накапливаются в дистальных областях (например, областях, физически отделенных от места введения). SPLP включают "pSPLP," которые содержат комплекс инкапсулированный конденсирующий агент-нуклеиновая кислота, как рассмотрено в PCT публикации № WO 00/03683. Частицы настоящего изобретения обычно имеют средний диаметр приблизительно от 50 нм до приблизительно 150 нм, более обычно приблизительно от 60 нм до приблизительно 130 нм, более обычно приблизительно от 70 нм до приблизительно 110 нм, чаще всего от 70 нм до приблизительно 90 нм, и по существу являются нетоксичными. Кроме того, нуклеиновые кислоты, когда присутствуют в частицах нуклеиновая кислота-липид, являются устойчивыми в водном растворе к разрушению нуклеазой. Частицы нуклеиновая кислота-липиды и способы их получения описаны, например, в патентах США 5976567; 5981501; 6534484; 6586410; 6815432 и PCT публикации № WO 96/40964.

В одном варианте осуществления отношение липида к лекарственному средству (отношение массы к массе) (например, отношение липида к дцРНК) будет в диапазоне приблизительно от 1:1 до приблизительно 50:1, приблизительно от 1:1 до приблизительно 25:1, приблизительно от 3:1 до приблизительно 15:1, приблизительно от 4:1 до приблизительно 10:1, приблизительно от 5:1 до приблизительно 9:1 или приблизительно от 6:1 до приблизительно 9:1. В некоторых вариантах осуществления отношение липида к дцРНК может составлять приблизительно 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1 или 11:1.

Как правило, частицу липид-нуклеиновая кислота суспендируют в буфере, например, PBS, для введения. В одном варианте осуществления pH киРНК, сформулированной с липидом, составляет 6,8-7,8, например, 7,3 или 7,4. Осмоляльность может составлять, например, 250-350 миллиосмоль/кг, например, в области 300, например, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304 или 305.

Катионный липид может представлять собой, например, N,N-диолеил-N,N-диметиламмонийхлорид (DODAC), N,N-дистеарил-N,N-диметиламмонийбромид (DDAB), N-(I-(2,3-диолеоилокси)пропил)-N,N,N-триметиламмонийхлорид (DOTAP), N-(I-(2,3-диолеилокси)пропил)-N,N,N-триметиламмонийхлорид (DOTMA), N,N-диметил-2,3-диолеилокси)пропиламин (DODMA), 1,2-дилинолеилокси-N,N-диметиламинопропан (DLinDMA), 1,2-дилиноленилокси-N,N-диметиламинопропан (DLenDMA), 1,2-дилинолеилкарбамоилокси-3-диметиламинопропан (DLin-C-DAP), 1,2-дилинолеилокси-3-(диметиламино)ацетоксипропан (DLin-DAC), 1,2-дилинолеилокси-3-морфолинопропан (DLin-MA), 1,2-дилинолеоил-3-диметиламинопропан (DLinDAP), 1,2-дилинолеилтио-3-диметиламинопропан (DLin-S-DMA), 1-линолеоил-2-линолеилокси-3-диметиламинопропан (DLin-2-DMAP), хлоридную соль 1,2-дилинолеилокси-3-триметиламинопропана (DLin-TMA.Cl), хлоридную соль 1,2-дилинолеоил-3-триметиламинопропана (DLin-TAP.Cl), 1,2-дилинолеилокси-3-(N-метилпиперазино)пропан (DLin-MPZ) или 3-(N,N-дилинолеиламино)-1,2-пропандиол (DLinAP), 3-(N,N-диолеиламино)-1,2-пропандиол (DOAP), 1,2-дилинолеилоксо-3-(2-N,N-диметиламино)этоксипропан (DLin-EG-DMA), 1,2-дилиноленилокси-N,N-диметиламинопропан (DLinDMA), 2,2-дилинолеил-4-диметиламинометил[1,3]диоксолан (DLin-K-DMA) или его аналоги, (3aR,5s,6aS)-N,N-диметил-2,2-ди((9Z,12Z)-октадека-9,12-диенил)тетрагидро-3aH-циклопента[d][1,3]диоксол-5-амин (ALN100), (6Z,9Z,28Z,31Z)-гептатриконта-6,9,28,31-тетраен-19-ил-4-(диметиламино)бутаноат (MC3), 1,1'-(2-(4-(2-((2-(бис(2-гидроксидодецил)амино)этил)(2-гидроксидодецил)амино)этил)пипееразин-1-ил)этилазандиил)дидодекан-2-ол (C12-200 или Tech G1) или их смеси. Катионный липид может составлять приблизительно от 20% моль до приблизительно 50% моль или приблизительно 40% моль всех липидов, присутствующих в частице.

Некатионный липид может представлять собой анионный липид или нейтральный липид, включая, но, не ограничиваясь ими, дистеароилфосфатидилхолин (DSPC),

диолеоилфосфатидилхолин (DOPC),

дипальмитоилфосфатидилхолин (DPPC),

диолеоилфосфатидилглицерин (DOPG),

дипальмитоилфосфатидилглицерин (DPPG),

диолеоилфосфатидилэтаноламин (DOPE),

пальмитоилолеоилфосфатидилхолин (POPC),

пальмитоилолеоилфосфатидилэтаноламин (POPE),

4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат диолеоилфосфатидилэтаноламина (DOPE-mal),

дипальмитоилфосфатидилэтаноламин (DPPE),

димиристоилфосфоэтаноламин (DMPE),

дистеароилфосфатидилэтаноламин (DSPE), 16-O-монометил PE,

16-O-диметил PE, 18-1-транс PE,

1-стеароил-2-олеоилфосфатидилэтаноламин (SOPE), холестерин или их смеси. Некатионный липид может составлять приблизительно от 5% моль до приблизительно 90% моль, приблизительно 10% моль или приблизительно 58% моль, если присутствует холестерин, всех липидов, присутствующих в частице.

Конъюгированный липид, который ингибирует агрегацию частиц, может представлять собой, например, полиэтиленгликоль (PEG)-липид, включая, но без ограничения, PEG-диацилглицерин (DAG), PEG-диалкилоксипропил (DAA), PEG-фосфолипид, PEG-церамид (Cer) или их смесь. Конъюгат PEG-DAA может представлять собой, например, PEG-дилаурилоксипропил (C₁₂), PEG-димиристилоксипропил (C₁₄), PEG-дипальмитоилоксипропил (C₁₆) или PEG-дистеарилоксипропил (C₁₈). Другие примеры PEG конъюгатов включают PEG-cDMA (N-[(метоксиполи(этиленгликоль)2000)карбамил]-1,2-димиристилоксипропил-3-амин), mPEG2000-DMG (mPEG-димиристилглицерин (со средней молекулярной массой 2000) и PEG-C-DOMG (R-3-[(ω-метоксиполи(этиленгликоль)2000)карбамоил)]-1,2-димиристилоксипропил-3-амин). Конъюгированный липид, который препятствует агрегации частиц, может составлять от 0% моль до приблизительно 20% моль или приблизительно 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9 или 2% моль всех липидов, присутствующих в частице.

В некоторых вариантах осуществления частица нуклеиновая кислота-липид дополнительно содержит холестерин, например, приблизительно от 10% моль до приблизительно 60% моль или приблизительно 48% моль всех липидов, присутствующих в частице.

В одном варианте осуществления соединение, 2,2-дилинолеил-4-диметиламиноэтил[1,3]диоксолан, можно использовать для получения наночастицы липид-киРНК. Получение 2,2-дилинолеил-4-диметиламиноэтил[1,3]диоксолана описано в предварительной патентной заявке США № 61/107998, поданной 23 октября 2008, которая включена в настоящее описание посредством ссылки.

Например, частица липид-киРНК может содержать 40% 2,2-дилинолеил-4-диметиламиноэтил[1,3]диоксолана:10% DSPC:40% холестерина:10% PEG-C-DOMG (мольные проценты) с размером частиц 63,0±20 нм и киРНК/липид соотношением 0,027.

В еще другом варианте осуществления соединение, 1,1'-(2-(4-(2-((2-(бис(2-гидроксидодецил)амино)этил)(2-гидроксидодецил)амино)этил)пиперазин-1-ил)этилазандиил)дидодекан-2-ол (Tech G1), можно использовать для получения частиц липид-киРНК. Например, дцРНК можно формулировать в липидном составе, содержащем Tech-G1, дистеароилфосфатидилхолин (DSPC), холестерин и mPEG2000-DMG при молярном соотношении 50:10:38,5:1,5 при отношении всех липидов к киРНК 7:1 (масс.:масс.).

В одном варианте осуществления липидоидный ND98-4HC1 (MW 1487), холестерин (Sigma-Aldrich) и PEG-Церамид C16 (Avanti Polar Lipids) можно использовать для получения наночастиц липид-киРНК (т.е. LNP01 частиц). LNP01 составы описаны, например, в международной патентной заявке № WO 2008/042973, которая включена в настоящее описание посредством ссылки.

Дополнительные примеры составов описаны в таблице A.

Таблица А
	Катионный липид	Катионный липид/некатионный липид/холестерин/PEG-липид конъюгат, (% моль соотношение), отношение липид:киРНК
SNALP	DLinDMA	DLinDMA/DPPC/Холестерин/PEG-cDMA (57,1/7,1/34,4/1,4) липид:киРНК ~7:1
S-XTC	XTC	XTC/DPPC/Холестерин/PEG-cDMA (57,1/7,1/34,4/1,4) липид:киРНК ~7:1
LNP05	XTC	XTC/DSPC/Холестерин/PEG-DMG (57,5/7,5/31,5/3,5) липид:киРНК ~6:1
LNP06	XTC	XTC/DSPC/Холестерин/PEG-DMG (57,5/7,5/31,5/3,5) липид:киРНК ~11:1
LNP07	XTC	XTC/DSPC/Холестерин/PEG-DMG (60/7,5/31/1,5) липид:киРНК ~6:1
LNP08	XTC	XTC/DSPC/Холестерин/PEG-DMG (60/7,5/31/1,5) липид:киРНК ~11:1
LNP09	XTC	XTC/DSPC/Холестерин/PEG-DMG (50/10/38,5/1,5) липид:киРНК 10:1
LNP10	ALN100	ALN100/DSPC/Холестерин/PEG-DMG (50/10/38,5/1,5) липид:киРНК 10:1
LNP11	MC3	MC-3/DSPC/Холестерин/PEG-DMG (50/10/38,5/1,5) липид:киРНК 10:1
LNP12	C12-200	C12-200/DSPC/Холестерин/PEG-DMG (50/10/38,5/1,5) липид:киРНК 10:1
LNP13	XTC	XTC/DSPC/Chol/PEG-DMG (50/10/38,5/1,5) липид:киРНК 33:1
LNP14	MC3	MC3/DSPC/Chol/PEG-DMG (40/15/40/5) липид:киРНК 11:1
LNP15	MC3	MC3/DSPC/Chol/PEG-DSG/GalNAc-PEG-DSG (50/10/35/4,5/0,5) липид:киРНК 11:1
LNP16	MC3	MC3/DSPC/Chol/PEG-DMG (50/10/38,5/1,5) липид:киРНК 7:1
LNP17	MC3	MC3/DSPC/Chol/PEG-DSG (50/10/38,5/1,5) липид:киРНК 10:1
LNP18	MC3	MC3/DSPC/Chol/PEG-DMG (50/10/38,5/1,5) липид:киРНК 12:1
LNP19	MC3	MC3/DSPC/Chol/PEG-DMG (50/10/35/5) липид:киРНК 8:1
LNP20	MC3	MC3/DSPC/Chol/PEG-DPG (50/10/38,5/1,5) липид:киРНК 10:1
LNP21	C12-200	C12-200/DSPC/Chol/PEG-DSG (50/10/38,5/1,5) липид:киРНК 7:1
LNP22	XTC	XTC/DSPC/Chol/PEG-DSG (50/10/38,5/1,5) липид:киРНК 10:1

Составы, содержащие SNALP (1,2-дилиноленилокси-N,N-диметиламинопропан (DLinDMA)), описаны в международной публикации № WO2009/127060, поданной 15 апреля 2009, которая включена в настоящее описание посредством ссылки.

Составы, содержащие XTC, описаны, например, в предварительной заявке США серийный № 61/148366, поданной 29 января 2009; предварительной заявке США серийный № 61/156851, поданной 2 марта 2009; предварительной заявке США серийный № поданной 10 июня 2009; предварительной заявке США серийный № 61/228373, поданной 24 июля 2009; предварительной заявке США серийный № 61/239686, поданной 3 сентября 2009, и международной заявке № PCT/US2010/022614, поданной 29 января 2010, которые включены в настоящее описание посредством ссылки.

Составы, содержащие MC3, описаны, например, в предварительной заявке США серийный № 61/244834, поданной 22 сентября 2009, предварительной заявке США серийный № 61/185800, поданной 10 июня 2009, и международной заявке № PCT/US 10/28224, поданной 10 июня 2010, которые включены в настоящее описание посредством ссылки.

Составы, содержащие ALNY-100, описаны, например, в международной патентной заявке номер PCT/US09/63933, поданной 10 ноября 2009, которая включена в настоящее описание посредством ссылки.

Составы, содержащие C12-200, описаны в предварительной заявке США серийный № 61/175770, поданной 5 мая 2009, и международной заявке № PCT/US10/33777, поданной 5 мая 2010, которые включены в настоящее описание посредством ссылки.

Составы, полученные или стандартным, или безэкструзионным способом, можно охарактеризовывать аналогичным способом. Например, составы обычно охарактеризовывают визуальным осмотром. Они должны представлять собой светлые прозрачные растворы, не содержащие агрегатов или осадка. Размер частиц и распределение размера частиц липидных наночастиц можно измерить световым рассеянием, используя, например, Malvern Zetasizer Nano ZS (Malvern, USA). Частицы должны иметь размер приблизительно 20-300 нм, такой как 40-100 нм. Распределение размера частиц должно быть однородным. Суммарную концентрацию киРНК в составе, а также захваченную фракцию, оценивают, применяя анализ с освобождением красителя. Образец формулированной киРНК можно выдерживать с РНК-связывающим красителем, таким как Ribogreen (Molecular Probes), в присутствии или отсутствии поверхностно-активного вещества, разрушающего состав, например, 0,5% Triton-X100. Суммарную киРНК в составе можно определить сигналом образца, содержащего поверхностно-активное вещество, относительно стандартной кривой. Захваченную фракцию определяют вычитанием содержания "свободной" киРНК (как измерено сигналом в отсутствии поверхностно-активного вещества) из суммарного содержания киРНК. Процент захваченной киРНК обычно составляет >85%. Для состава SNALP размер частиц составляет, по меньшей мере, 30 нм, по меньшей мере, 40 нм, по меньшей мере, 50 нм, по меньшей мере, 60 нм, по меньшей мере, 70 нм, по меньшей мере, 80 нм, по меньшей мере, 90 нм, по меньшей мере, 100 нм, по меньшей мере, 110 нм и, по меньшей мере, 120 нм. Подходящий диапазон обычно составляет, по меньшей мере, приблизительно от 50 нм до приблизительно, по меньшей мере, 110 нм, по меньшей мере, приблизительно от 60 нм до приблизительно, по меньшей мере, 100 нм или, по меньшей мере, приблизительно от 80 нм до приблизительно, по меньшей мере, 90 нм.

Композиции и составы для перорального введения включают порошки или гранулы, микрочастицы, наночастицы, суспензии или растворы в водной или неводной среде, капсулы, гелевые капсулы, саше, таблетки или минитаблетки. Загустители, ароматизаторы, разбавители, эмульгаторы, диспергирующие агенты или связующие могут быть желательными. В некоторых вариантах осуществления пероральное составы представляют собой пероральные составы, в которых дцРНК, представленные в настоящем изобретении, вводят в сочетании с одним или более агентами, улучшающими проникновение, поверхностно-активными веществами и хелатирующими агентами. Подходящие поверхностно-активные вещества включают жирные кислоты и/или сложные эфиры или их соли, желчные кислоты и/или их соли. Подходящие желчные кислоты/соли включают хенодезоксихолевую кислоту (CDCA) и урсодезоксихенодезоксихолевую кислоту (UDCA), холевую кислоту, дегидрохолевую кислоту, дезоксихолевую кислоту, глюхолевую кислоту, глихолевую кислоту, гликодезоксихолевую кислоту, таурохолевую кислоту, тауродезоксихолевую кислоту, тауро-24,25-дигидрофузидат натрия и гликодигидрофузидат натрия. Подходящие жирные кислоты включают арахидоновую кислоту, ундекановую кислоту, олеиновую кислоту, лауриновую кислоту, каприловую кислоту, каприновую кислоту, миристиновую кислоту, пальмитиновую кислоту, стеариновую кислоту, линолевую кислоту, линоленовую кислоту, дикапрат, трикапрат, монолеин, дилаурин, глицерил 1-монокапрат, 1-додецилазациклогептан-2-он, ацилкарнитин, ацилхолин или моноглицерид, диглицерид или их фармацевтически приемлемую соль (например, натриевую). В некоторых вариантах осуществления в комбинациях агентов, улучшающих проникновение, применяют, например, жирные кислоты/соли в комбинации с желчными кислотами/солями. Одной примерной комбинацией является натриевая соль лауриновой кислоты, каприновой кислоты и UDCA. Дополнительные агенты, улучшающие проникновение, включают полиоксиэтилен-9-лауриловый эфир, полиоксиэтилен-20-цетиловый эфир. дцРНК, представленные в настоящем изобретении, можно доставлять перорально, в гранулярной форме, включая высушенные распылением частицы, или превращать в комплексы, с получением микро или наночастиц. дцРНК комплексообразующие агенты включают плиаминокислоты; полиимины; полиакрилаты; полиалкилакрилаты, полиоксетаны, полиалкилцианоакрилаты; катионизированные желатины, альбумины, крахмалы, акрилаты, полиэтиленгликоли (PEG) и крахмалы; полиалкилцианоакрилат; DEAE-дериватизированные полиимины, пулланы, целлюлозы и крахмалы. Подходящие комплексообразующие агенты включают хитозан, N-триметилхитозан, поли-L-лизин, полигистидин, полиорнитин, полиспермины, протамин, поливинилпиридин, политиодиэтиламинометилэтилен P(TDAE), полиаминостирол (например, п-амино), поли(метилцианоакрилат), поли(этилцианоакрилат), поли(бутилцианоакрилат), поли(изобутилцианоакрилат), поли(изогексилцианоакрилат), DEAE-метакрилат, DEAE-гексилакрилат, DEAE-акриламид, DEAE-альбумин и DEAE-декстран, полиметилакрилат, полигексилакрилат, поли(D,L-молочную кислоту), поли(DL-молочную-со-гликолевую кислоту (PLGA), альгинат и полиэтиленгликоль (PEG). Пероральные составы для дцРНК и их получение описаны подробно в патенте США 6887906, публикации США 20030027780 и патенте США 6747014, каждый из которых включен в настоящее описание посредством ссылки.

Композиции и составы для парентерального, интрапаренхиматозного (в мозг), интратекального, интравентрикулярного или внутрипеченочного введения могут включать стерильные водные растворы, которые могут также содержать буферы, разбавители и другие подходящие добавки, такие как, но, не ограничиваясь ими, агенты, улучшающие проникновение, соединения, являющиеся носителями, и другие фармацевтически приемлемые носители или эксципиенты.

Фармацевтические композиции настоящего изобретения включают, но без ограничения, растворы, эмульсии и составы, содержащие липосомы. Данные композиции можно получить из ряда компонентов, которые включают, но без ограничения, подготовленные жидкости, самоэмульгирующиеся твердые вещества и самоэмульгирующиеся полутвердые вещества. Особенно предпочтительными являются составы, мишенью которых является печень, при лечении нарушений печени, таких как гепатокарцинома.

Фармацевтические составы настоящего изобретения, которые можно удобно предоставлять в виде единичной дозированной формы, можно получить согласно общепринятым способам, хорошо известным в фармацевтической промышленности. Данные способы включают стадию смешения активных ингредиентов с фармацевтическим носителем(ями) или эксципиентом(ами). Как правило, составы получают равномерным и тщательным смешением активных ингредиентов с жидкими носителями или мелкодисперсными твердыми носителями или обоими и затем, при необходимости, формованием продукта.

Композиции настоящего изобретения можно формулировать в виде любой из возможных дозированных форм, таких как, но, не ограничиваясь ими, таблетки, капсулы, гелевые капсулы, жидкие сиропы, мягкие гели, суппозитории и клизмы. Композиции настоящего изобретения можно также формулировать в виде суспензий в водной, неводной или смешанной среде. Водные суспензии могут дополнительно содержать вещества, которые увеличивают вязкость суспензии, включая, например, натрийкарбоксиметилцеллюлозу, сорбит и/или декстран. Суспензия может также содержать стабилизаторы.

Эмульсии

Композиции настоящего изобретения можно получить и формулировать в виде эмульсий. Эмульсии обычно представляют собой гетерогенные системы одной жидкости, диспергированной в другой в виде капель, обычно превышающих 0,1 мкм в диаметре (Idson, в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199; Rosoff, в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245; Block в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 2, p. 335; Higuchi et al., в Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 301). Эмульсии часто представляют собой двухфазные системы, содержащие две несмешивающиеся жидкие фазы, равномерно смешанные и диспергированные друг в друге. Как правило, эмульсии могут быть или вариантом вода в масле (w/o), или масло в воде (o/w). Когда водная фаза тонко раздроблена и диспергирована в виде мелких капель в объемной масляной фазе, полученную в результате композицию называют эмульсией масла в воде (w/o). Альтернативно, когда масляная фаза тонко раздроблена и диспергирована в виде мелких капель в объемной водной фазе, полученную в результате композицию называют эмульсией воды в масле (o/w). Эмульсии могут содержать дополнительные компоненты в добавление к диспергированным фазам, и активное лекарственное средство, которое может присутствовать в виде раствора или в водной фазе, масляной фазе или само в виде отдельной фазы. Фармацевтические эксципиенты, такие как эмульгаторы, стабилизаторы, красители и антиоксиданты, могут также присутствовать в эмульсиях, по мере необходимости. Фармацевтические эмульсии могут также представлять собой множественные эмульсии, которые состоят более чем из двух фаз, такие как, например, в случае эмульсий масло в воде в масле (o/w/o) и вода в масле в воде (w/o/w). Данные сложные составы часто дают определенные преимущества, которыми не обладают двухфазные эмульсии. Множественные эмульсии, в которых отдельные масляные капли o/w эмульсии окружают небольшие водные капли, составляют w/o/w эмульсию. Аналогично, система масляных капель, покрытых каплями воды, стабилизированная в масляной непрерывной фазе, дает o/w/o эмульсию.

Эмульсии характеризуются совсем малой или отсутствием термодинамической стабильности. Часто, диспергированная или прерывная фаза эмульсии хорошо диспергирована во внешней или непрерывной фазе и сохраняется в данной форме посредством эмульгаторов или вязкости состава. Любая из фаз эмульсии может быть полутвердой или твердой, как в случае мазевых основ и кремов эмульсионного типа. Другие способы стабилизации эмульсий включают использование эмульгаторов, которые можно вводить в любую фазу эмульсии. Эмульгаторы можно приблизительно разбить на четыре категории: синтетические поверхностно-активные вещества, природные эмульгаторы, абсорбирующие основы и тонкодиспергированные твердые вещества (Idson, в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199).

Синтетические поверхностно-активные вещества, также известные как поверхностно-активные агенты, находят широкое применение в составе эмульсий и обсуждаются в литературе (Rieger, в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 285; Idson, в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, volume 1, p. 199). Поверхностно-активные вещества обычно являются амфифильными и содержат гидрофильную и гидрофобную часть. Отношение гидрофильных свойств к гидрофобным свойствам поверхностно-активного вещества называют гидролипидным балансом (HLB), и он представляет собой ценный инструмент для классификации и выбора поверхностно-активных веществ при получении составов. Поверхностно-активные вещества можно разделить на различные классы, в зависимости от природы гидрофильной группы: неионная, анионная, катионная и амфотерная (Rieger, в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 285).

Природные эмульгаторы, используемые в эмульсионных составах, включают ланолин, пчелиный воск, фосфатиды, лецитин и аравийскую камедь. Абсорбирующие основы обладают гидрофильными свойствами, так что они впитывают воду, образуя w/o эмульсии, тем не менее, сохраняя их полутвердую стабильность, такие как безводный ланолин и гидрофильный петролатум. Мелкодисперсные твердые вещества также используют в качестве хороших эмульгаторов, особенно в комбинации с поверхностно-активными веществами и в вязких препаратах. Они включают полярные неорганические твердые вещества, такие как гидроксиды тяжелых металлов, ненабухающие глины, такие как бентонит, аттапульгит, гекторит, каолин, монтмориллонит, коллоидный силикат алюминия и коллоидный силикат магния алюминия, пигменты, и неполярные твердые вещества, такие как углерод или тристеарат глицерина.

Богатый набор неэмульгирующих материалов также включен в эмульсионные составы и делает вклад в свойства эмульсий. Они включают жиры, масла, воски, жирные кислоты, жирные спирты, жирные эфиры, увлажняющие агенты, гидрофильные коллоиды, консерванты и антиоксиданты (Block, в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 335; Idson, в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199).

Гидрофильные коллоиды или гидроколлоиды включают природные камеди и синтетические полимеры, такие как полисахариды (например, аравийская камедь, агар, альгиновая кислота, каррагенан, гуаровая камедь, камедь карайи и трагакант), целлюлозные производные (например, карбоксиметилцеллюлозу и карбоксипропилцеллюлозу) и синтетические полимеры (например, карбомеры, эфиры целлюлозы и карбоксивинильные полимеры). Они диспергируются или набухают в воде с образованием коллоидных растворов, которые стабилизируют эмульсии, образуя прочные межфазные пленки вокруг капель диспергированной фазы и увеличивая вязкость диспергирующей фазы.

Поскольку эмульсии часто содержат ряд ингредиентов, таких как углеводы, белки, стеролы и фосфатиды, которые могут легко поддерживать рост микробов, данные составы часто содержат консерванты. Общепринятые консерванты, включенные в эмульсионные составы, включают метилпарабен, пропилпарабен, четвертичные соли аммония, бензалконийхлорид, эфиры п-гидроксибензойной кислоты и борную кислоту. Антиоксиданты также обычно добавляют к эмульсионным составам для предотвращения окисления состава. Используемые антиоксиданты могут представлять собой акцепторы радикалов, такие как токоферолы, алкилгаллаты, бутилированный гидроксианизол, бутилированный гидрокситолуол, или восстанавливающие агенты, такие как аскорбиновая кислота и метабисульфит натрия, и антиоксидантные синергисты, такие как лимонная кислота, винная кислота и лецитин.

Применение эмульсионных составов дерматологическим, пероральным и парентеральным путями и способы их получения рассматриваются в литературе (Idson, в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199). Эмульсионные составы для пероральной доставки очень широко применяют из-за простоты формулирования, а также эффективности с точки зрения поглощения и биодоступности (Rosoff, в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245; Idson, в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., т.1, p. 199). Слабительные на основе минерального масла, жирорастворимые витамины и пищевые препараты с высоким содержанием жира является материалами, которые обычно вводят перорально в виде o/w эмульсий.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения композиции дцРНК и нуклеиновых кислот формулируют в виде микроэмульсий. Микроэмульсию можно определить как систему воды, масла и амфифила, которая представляет собой отдельный оптически изотропный и термодинамически стабильный жидкий раствор (Rosoff, в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245). Обычно микроэмульсии представляют собой системы, которые получают сначала диспергированием масла в водном растворе поверхностно-активного вещества, и затем добавлением достаточного количества четвертого компонента, обычно промежуточного длинноцепочечного спирта, с получением прозрачной системы. Следовательно, микроэмульсии также описаны как термодинамически стабильные, изотропно прозрачные дисперсии двух несмешивающихся жидкостей, которые стабилизированы межфазными пленками поверхностно-активных молекул (Leung and Shah, в: Controlled Release of Drugs: Polymers and Aggregate Systems, Rosoff, M., Ed., 1989, VCH Publishers, New York, p. 185-215). Микроэмульсии обычно получают смешением от трех до пяти компонентов, которые включают масло, воду, поверхностно-активное вещество, поверхностно-активное совещество и электролит. Является ли микроэмульсия микроэмульсией типа вода в масле (w/o) или масло в оде (o/w), зависит от свойств используемого масла и поверхностно-активного вещества и от структуры и геометрической упаковки полярных головок и углеводородных хвостов молекул поверхностно-активного вещества (Schott, в Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 271).

Феноменологический подход с применением фазовых диаграмм был интенсивно разработан, и он дал всестороннее знание специалисту в данной области техники о том, как составлять микроэмульсии (Rosoff, в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245; Block, в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 335). По сравнению с общепринятыми эмульсиями, микроэмульсии обеспечивают преимущество растворения не растворимых в воде лекарственных средств в составе термодинамически стабильных капель, которые образуются спонтанно.

Поверхностно-активные вещества, используемые при получении микроэмульсий, включают, но без ограничения, ионные поверхностно-активные вещества, неионные поверхностно-активные вещества, Brij 96, полиоксиэтиленолеиловые эфиры, полиэфиры глицерина и жирных кислот, тетраглицеринмонолаурат (ML310), тетраглицеринмоноолеат (MO310), гексаглицеринмоноолеат (PO310), гексаглицеринпентаолеат (PO500), декаглицеринмонокапрат (MCA750), декаглицеринмоноолеат (MO750), декаглицеринсеквиолеат (SO750), декаглицериндекаолеат (DAO750), отдельно или в комбинации с поверхностно-активными совеществами. Поверхностно-активное совещество, как правило, короткоцепочечный спирт, такой как этанол, 1-пропанол и 1-бутанол, предназначен для увеличения межфазной текучести проникновением в пленку из поверхностно-активного вещества и, следовательно, создает нарушенные пленки из-за объемных пор, образуемых между молекулами поверхностно-активного вещества.

Однако микроэмульсии можно получить без использования поверхностно-активного совещества, и не содержащие спирт самоэмульгирующиеся микроэмульсионные системы известны в данной области техники. Водная фаза обычно представляет собой, но не ограничивается ими, воду, водный раствор лекарственного средства, глицерин, PEG300, PEG400, полиглицерины, пропиленгликоли и производные этиленгликоля. Масляная фаза может содержать, но не ограничивается ими, материалы, такие как Captex 300, Captex 355, Capmul MCM, эфиры жирных кислот, среднецепочечные (C₈-C₁₂) моно-, ди- и триглицериды, полиоксиэтилированные эфиры глицерина и жирных кислот, жирные спирты, полигликолизированные глицериды, насыщенные полигликолизированные C8-C10 глицериды, растительные масла и силиконовые масла.

Микроэмульсии представляют особый интерес с точки зрения растворения лекарственных средств и повышенного поглощения лекарственных средств. Микроэмульсии на основе липидов (как o/w, так и w/o) предлагают для увеличения пероральной биодоступности лекарственных средств, включая пептиды (Constantinides et al, Pharmaceutical Research, 1994, 11, 1385-1390; Ritschel, Meth. Find. Exp. Clin. Pharmacol, 1993, 13, 205). Микроэмульсии дают преимущества повышенной растворимости лекарственных средств, защиты лекарственного средства от ферментативного гидролиза, возможного увеличения поглощения лекарственного средства из-за вызванных поверхностно-активными веществами изменений текучести и проницаемости мембраны, простоты получения, простоты перорального введения по сравнению с твердыми лекарственными формами, повышенной клинической эффективности и сниженной токсичности (Constantinides et al., Pharmaceutical Research, 1994, 11, 1385; Ho et al., J. Pharm. Sci., 1996, 85, 138-143). Часто микроэмульсии могут образовываться спонтанно, когда их компоненты смешивают вместе при температуре окружающей среды. Это может быть особенно полезно при формулировании термолабильных лекарственных средств, пептидов или дцРНК. Микроэмульсии также были эффективными при трансдермальной доставке активных компонентов и при косметическом и фармацевтическом применениях. Ожидают, что микроэмульсионные композиции и составы настоящего изобретения будут способствовать усиленному системному поглощению дцРНК и нуклеиновых кислот из желудочно-кишечного тракта, а также усиливать местное клеточное поглощение дцРНК и нуклеиновых кислот.

Микроэмульсии настоящего изобретения могут также содержать дополнительные компоненты и добавки, такие как моностеарат сорбитана (Grill 3), лабразоль и агенты, улучшающие проникновение, улучшающие свойства состава и усиливающие поглощение дцРНК и нуклеиновых кислот настоящего изобретения. Агенты, улучшающие проникновение, применяемые в микроэмульсиях настоящего изобретения, можно классифицировать как принадлежащие к одной из пяти общих категорий: поверхностно-активные вещества, жирные кислоты, желчные кислоты, комплексообразующие агенты и не образующие комплексов поверхностно-неактивные вещества (Lee et al., Critical Reviews в Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p. 92). Каждый из данных классов обсужден выше.

Агенты, улучшающие проникновение

В одном варианте осуществления в настоящем изобретении применяют различные агенты, улучшающие проникновение, для осуществления эффективной доставки нуклеиновых кислот, в частности дцРНК, в кожу животных. Большинство лекарственных средств присутствует в растворе и в ионизированной и неионизированной формах. Однако обычно только растворимые в липидах или липофильные лекарственные средства легко проходят через клеточные мембраны. Было обнаружено, что даже нелипофильные лекарственные средства могут проходить через клеточные мембраны, если мембрана, которую они пересекают, обрабатывают агентом, улучшающим проникновение. В добавление к оказанию помощи в диффузии нелипофильных лекарственных средств через клеточные мембраны, агенты, улучшающие проникновение, также улучшают проходимость липофильных лекарственных средств.

Агенты, улучшающие проникновение, можно классифицировать как принадлежащие одной из пяти общих категорий, т.е. поверхностно-активным веществам, жирным кислотам, желчным кислотам, комплексообразующим агентам и не образующим комплексы поверхностно-неактивным веществам (Lee et al., Critical Reviews в Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p. 92). Каждый из приведенных выше классов агентов, улучшающих проникновение, описаны ниже более подробно.

Поверхностно-активные вещества: согласно настоящему изобретению, поверхностно-активные вещества (или "поверхностно-активные агенты") представляют собой химические молекулы, которые при растворении в водном растворе снижают поверхностное напряжение раствора или межфазное натяжение между водным раствором и другой жидкостью, в результате чего усиливается поглощение дцРНК через слизистую. В добавление к желчным кислотам и жирным кислотам, агенты, улучшающие проникновение, включают, например, лаурилсульфат натрия, полиоксиэтилен-9-лауриловый эфир и полиоксиэтилен-20-цетиловый эфир (Lee et al., Critical Reviews в Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p. 92); и перфторхимические эмульсии, такие как FC-43 (Takahashi et al., J. Pharm. Pharmacol, 1988, 40, 252).

Жирные кислоты: различные жирные кислоты и их производные, которые действуют в качестве агентов, улучшающих проникновение, включают, например, олеиновую кислоту, лауриновую кислоту, каприновую кислоту (н-декановую кислоту), миристиновую кислоту, пальмитиновую кислоту, стеариновую кислоту, линолевую кислоту, линоленовую кислоту, дикапрат, трикапрат, моноолеин (1-моноолеоил-рац-глицерин), дилаурин, каприловую кислоту, арахидоновую кислоту, глицерин 1-монокапрат, 1-додецилазациклогептан-2-он, ацилкарнитины, ацилхолины, их C_1-10алкиловые эфиры (например, метиловый, изопропиловый и трет-бутиловый) и их моно- и диглицериды (т.е. олеат, лаурат, капрат, миристат, пальмитат, стеарат, линолеат и т.д.) (Lee et al., Critical Reviews в Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p,92; Muranishi, Critical Reviews в Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; El Hariri et al., J. Pharm. Pharmacol., 1992, 44, 651-654).

Желчные кислоты: физиологическая роль желчи включает облегчение диспергирования и поглощения липидов и жирорастворимых витаминов (Brunton, chapter 38 в: Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th Ed., Hardman et al. Eds., McGraw-Hill, New York, 1996, pp. 934-935). Различные природные желчные кислоты и их синтетические производные, действуют в качестве агентов, улучшающих проникновение. Таким образом, термин "желчные кислоты" включает любые природные компоненты желчи, а также любые их синтетические производные. Подходящие желчные кислоты включают, например, холевую кислоту (или ее фармацевтически приемлемую натриевую соль, холат натрия), декгидрохолевую кислоту (дегидрохолат натрия), дезоксихолевую кислоту (дезоксихолат натрия), глюхолевую кислоту (глюхолат натрия), глихолевую кислоту (гликохолат натрия), гликодезоксихолевую кислоту (ликодезоксихолат натрия), таурохолевую кислоту (таурохолат натрия), тауродезоксихолевую кислоту (тауродезоксихолат натрия), хенодезоксихолевую кислоту (хенодезоксихолат натрия), урсодезоксихолевую кислоту (UDCA), тауро-24,25-дигидрофузидат натрия (STDHF), гликодигидрофузидат натрия и полиоксиэтилен-9-лауриловый эфир (POE) (Lee et al., Critical Reviews в Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p. 92; Swinyard, chapter 39 в: Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990, p. 782-783; Muranishi, Critical Reviews в Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; Yamamoto et al., J. Pharm. Exp. Ther., 1992, 263, 25; Yamashita et al., J. Pharm. Sci., 1990, 79, 579-583).

Комплексообразующие агенты: комплексообразующие агенты, как используются согласно настоящему изобретению, можно определить как соединения, которые удаляют металлические ионы из раствора образованием с ними комплексов, в результате чего усиливается поглощение дцРНК через слизистую. Относительно их применения в качестве агентов, улучшающих проникновение, в настоящем изобретении, комплексообразующие агенты обладают дополнительным преимуществом, также действуя в качестве ДНКазных ингибиторов, поскольку наиболее охарактеризованные ДНК нуклеазы требуют ион двухвалентного металла для катализа и, таким образом, они ингибируются комплексообразующими агентами (Jarrett, J. Chromatogr., 1993, 618, 315-339). Подходящие комплексообразующие агенты включают, но без ограничения, динатрий этилендиаминтетраацетат (EDTA), лимонную кислоту, салицилаты (например, салицилат натрия, 5-метоксисалицилат и гомованилат), N-ацильные производные коллагена, лаурет-9 и N-аминоацильные производные бета-дикетонов (енмины) (Lee et al., Critical Reviews в Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p. 92; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; Buur et al, J. Control Rel., 1990, 14, 43-51).

Не образующие комплексов поверхностно-неактивные вещества: как используется в настоящем описании, соединения, усиливающие поглощение, не образующие комплексов поверхностно-неактивные вещества, можно определить как соединения, которые проявляют незначительную активность в качестве комплексообразующих агентов или в качестве поверхностно-активных веществ, но которые, тем не менее, усиливают поглощение дцРНК через алиментарную слизистую (Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33). Данный класс агентов, улучшающих проникновение, включает, например, ненасыщенные циклические мочевины, 1-алкил- и 1-алкенилазациклоалканоновые производные (Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p. 92); и нестероидные противовоспалительные агенты, такие как диклофенак натрия, индометацин и фенилбутазон (Yamashita et al., J. Pharm. Pharmacol, 1987, 39, 621-626).

Носители

Некоторые композиции настоящего изобретения также содержат соединения, являющиеся носителями, в составе. Как используется в настоящем описании, "соединение, являющееся носителем", или "носитель" может относиться к нуклеиновой кислоте или ее аналогу, которая является инертной (т.е. не обладает биологической активностью per se), но распознается как нуклеиновая кислота in vivo процессами, которые снижают биодоступность нуклеиновой кислоты, обладающей биологической активностью, например, разрушая биологически активную нуклеиновую кислоту или способствуя ее удалению из тока крови. Совместное введение нуклеиновой кислоты и соединения, являющегося носителем, обычно с избытком последнего, может приводить в результате к значительному снижению количества нуклеиновой кислоты, накопленной в печени, почке или других резервуарах вне кровообращения, предположительно благодаря конкуренции между соединением, являющимся носителем, и нуклеиновой кислотой за общий рецептор. Например, накопление частично фосфоротиоатной дцРНК в ткани печени может ослабляться при совместном введении с полиинозиновой кислотой, сульфатом декстрана, полицитидиновой кислотой или 4-ацетамидо-4'-изотиоцианостилбен-2,2'-дисульфокислотой (Miyao et al., DsRNA Res. Dev., 1995, 5, 115-121; Takakura et al., DsRNA & Nucl. Acid Drug Dev., 1996, 6, 177-183.)

Эксципиенты

В отличие от соединения, являющегося носителем, "фармацевтический носитель" или "эксципиент" представляет собой фармацевтически приемлемый растворитель, суспендирующий агент или любую другую фармацевтически инертную среду для доставки одной или более нуклеиновых кислот в животное. Эксципиент может быть жидким или твердым, и его выбирают с учетом планируемого способа введения, чтобы обеспечивать требуемый объем, плотность и т.д., при комбинировании с нуклеиновой кислотой и другими компонентами указанной фармацевтической композиции. Общепринятые фармацевтические носители включают, но без ограничения, связующие (например, предварительно желатинированный кукурузный крахмал, поливинилпирролидон или гидроксипропилметилцеллюлозу и т.д.); наполнители (например, лактозу и другие сахара, микрокристаллическую целлюлозу, пектин, желатин, сульфат кальция, этилцеллюлозу, полиакрилаты или гидрофосфат кальция и т.д.); лубриканты (например, стеарат магния, тальк, диоксид кремния, коллоидный диоксид кремния, стеариновую кислоту, стеараты металлов, гидрогенизированные растительные масла, кукурузный крахмал, полиэтиленгликоли, бензоат натрия, ацетат натрия и т.д.); дезинтегранты (например, крахмал, крахмалгликолят натрия и т.д.); и смачивающие агенты (например, натрия лаурилсульфат и т.д.).

Фармацевтически приемлемые органические или неорганические эксципиенты, пригодные для непарентерального введения, которые пагубно не взаимодействуют с нуклеиновыми кислотами, можно также использовать для формулирования композиций настоящего изобретения. Подходящие фармацевтически приемлемые носители включают, но без ограничения, воду, солевые растворы, спирты, полиэтиленгликоли, желатин, лактозу, амилозу, стеарат магния, тальк, кремниевую кислоту, вязкий парафин, гидроксиметилцеллюлозу, поливинилпирролидон и подобные.

Составы для местного введения нуклеиновых кислот могут включать стерильные и нестерильные водные растворы, неводные растворы в стандартных растворителях, таких как спирты, или растворы нуклеиновых кислот в жидкой или твердой масляной основе. Растворы могут также содержать буферы, разбавители и другие подходящие добавки. Можно использовать фармацевтически приемлемые органические или неорганические эксципиенты, пригодные для непарентерального введения, которые пагубно не взаимодействуют с нуклеиновыми кислотами.

Подходящие фармацевтически приемлемые эксципиенты включают, но без ограничения, воду, солевые растворы, спирт, полиэтиленгликоли, желатин, лактозу, амилозу, стеарат магния, тальк, кремниевую кислоту, вязкий парафин, гидроксиметилцеллюлозу, поливинилпирролидон и подобные.

Другие компоненты

Композиции настоящего изобретения могут дополнительно содержать другие вспомогательные компоненты, общепринято обнаруживаемые в фармацевтических композициях, при их установленном в данной области техники уровне потребления. Таким образом, например, композиции могут содержать дополнительные, совместимые, фармацевтически активные материалы, такие как, например, противозудные средства, астрингенты, местные анестетики или противовоспалительные агенты, или могут содержать дополнительные материалы, пригодные для физического формулирования различных лекарственных форм композиций настоящего изобретения, такие как красители, ароматизаторы, консерванты, антиоксиданты, замутнители, загустители и стабилизаторы. Однако такие материалы при добавлении не должны чрезмерно препятствовать биологическим активностям компонентов композиций настоящего изобретения. Составы можно стерилизовать и, при желании, смешивать со вспомогательными агентами, например, лубрикантами, консервантами, стабилизаторами, смачивающими агентами, эмульгаторами, солями, влияющими на осмотическое давление, буферами, красителями, ароматизаторами и/или ароматическими веществами и подобными, которые не взаимодействуют пагубно с нуклеиновой кислотой (нуклеиновыми кислотами) состава.

Водные суспензии могут содержать вещества, которые повышают вязкость суспензии, включая, например, натрийкарбоксиметилцеллюлозу, сорбит и/или декстран. Суспензия может также содержать стабилизаторы.

В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции, представленные в настоящем изобретении, содержат (a) один или более соединений дцРНК и (b) один или более антицитокиновых биологических агентов, которые функционируют механизмом, отличным от РНКи. Примеры данных биологических агентов включают биологические агенты, мишенью которых является IL1β (например, анакинра), IL6 (тоцилизумаб) или TNF (этанерцепт, инфликсимаб, адлимумаб или цертолизумаб).

Токсичность и терапевтическую эффективность данных соединений можно определить стандартными фармацевтическими способами в клеточных культурах или на экспериментальных животных, например, для определения LD50 (дозы, летальной для 50% популяции) и ED50 (дозы, терапевтически эффективной для 50% популяции). Соотношение дозы токсичного эффекта к терапевтическому эффекту представляет собой терапевтический индекс, и он может быть выражен как отношение LD50/ED50. Соединения, которые обладают высоким терапевтическим индексом, являются предпочтительными.

Данные, полученные в анализах на клеточных культурах и исследованиях на животных, можно использовать для формулирования диапазона доз для применения на людях. Доза композиций, представленных в настоящем изобретении, обычно лежит в диапазоне циркулирующих концентраций, которые включают ED50 с малой токсичностью или без нее. Доза может изменяться в пределах данного диапазона, в зависимости от применяемой лекарственной формы и применяемого пути введения. Для любого соединения, применяемого в способах, представленных в настоящем изобретении, терапевтически эффективные дозы можно первоначально оценить в анализах на клеточных культурах. Дозу можно формулировать на животных моделях, с получением диапазона циркулирующих в плазме концентраций соединения или, при необходимости, полипептидного продукта последовательности-мишени (например, достигая снижения концентрации полипептида), который включает IC50 (т.е. концентрацию тестируемого соединения, которая достигает полумаксимального ингибирования симптомов), как определено в клеточной культуре. Данную информацию можно использовать для более точного определения подходящих доз для людей. Концентрацию в плазме можно измерить, например, высокоэффективной жидкостной хроматографией.

В добавление к их введению, как обсуждалось выше, дцРНК, представленные в настоящем изобретении, можно вводить в комбинации с другими известными агентами, эффективными для лечения патологических процессов, опосредованных экспрессией APOC3. В любом случае, врач, осуществляющий введение, может установить количество и временные интервалы дцРНК введения на основе результатов, полученных, применяя стандартные измерения эффективности, известные в данной области техники или описанные в настоящем изобретении.

Способы ингибирования экспрессии гена APOC3

Настоящее изобретение также относится к способам с использованием дцРНК настоящего изобретения и/или композиции, содержащей киРНК настоящего изобретения для ослабления и/или ингибирования экспрессии APOC3 в клетке. Способы включают приведение клетки в контакт с дцРНК настоящего изобретения и выдерживание клетки в течение периода времени, достаточного для достижения разрушения мРНК транскрипта гена APOC3, посредством чего ингибируется экспрессия гена APOC3 в клетке. Ослабление генной экспрессии можно оценить любыми способами, известными в данной области техники. Например, ослабление экспрессии APOC3 можно определить по степени экспрессии мРНК APOC3 способами, стандартными для специалиста в данной области техники, например, нозерн-блоттингом, количественной ПЦР в реальном времени, определить по концентрации белка APOC3 способами, стандартными для специалиста в данной области техники, такими как вестерн-блоттинг, иммунологическими способами, и/или определить по биологической активности APOC3, как воздействие на одну или более молекул, связанных с уровнем триглицеридов, например, липопротеинлипазу (LPL) и/или липазу печени, или в in vivo варианте, сам уровень триглицеридов.

В способах настоящего изобретения клетка может быть подвергнута контакту in vitro или in vivo, т.е. клетка может быть внутри субъекта.

Клетка, пригодная для лечения способами настоящего изобретения, может представлять собой любую клетку, которая экспрессирует ген APOC3. Клетка, пригодная для применения в способах настоящего изобретения, может представлять собой клетку млекопитающего, например, клетку примата (такую как клетка человека или клетка примата, отличного от человека, например, клетку обезьяны или клетку шимпанзе), клетку не примата (такую как клетку коровы, клетку свиньи, клетку верблюда, клетку ламы, клетку лошади, клетку козы, клетку кролика, клетку овцы, клетку хомяка, клетку морской свинки, клетку кошки, клетку собаки, клетку крысы, клетку мыши, клетку льва, клетку тигра, клетку медведя или клетку буйвола), клетку птицы (например, клетку утки или клетку гуся), или клетку кита. В одном варианте осуществления клетка представляет собой клетку человека, например, клетку печени человека.

Экспрессию APOC3 ингибируют в клетке, по меньшей мере, приблизительно на 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или приблизительно 100%.

In vivo способы настоящего изобретения могут включать введение субъекту композиции, содержащей дцРНК, где дцРНК содержит нуклеотидную последовательность, которая является комплементарной, по меньшей мере, части РНК транскрипта гена APOC3 млекопитающего, которого подвергают лечению. Когда организм, который подвергают лечению, представляет собой млекопитающее, такое как человек, композицию можно вводить любыми способами, известными в данной области техники, включая, но, не ограничиваясь ими, пероральный, интраперитонеальный или парентеральный пути, включая внутричерепное (например, интравентрикулярное, интрапаренхиматозное и интратекальное), внутривенное, внутримышечное, подкожное, трансдермальное, через дыхательные пути (аэрозольное), назальное, ректальное и местное (включая буккальное и сублингвальное) введение. В определенных вариантах осуществления композиции вводят внутривенным вливанием или инъекцией, или подкожной инъекцией.

В некоторых вариантах осуществления введение осуществляют депо-инъекцией. Депо-инъекция может высвобождать дцРНК постоянным способом в течение продолжительного периода времени. Таким образом, депо-инъекция может снижать частоту дозирования, требуемую для получения требуемого эффекта, например, требуемого ингибирования APOC3, или терапевтического или профилактического эффекта. Депо-инъекция может также обеспечивать более постоянные уровни в сыворотке. Депо-инъекции могут включать подкожные инъекции или внутримышечные инъекции. В предпочтительных вариантах осуществления депо-инъекция представляет собой подкожную инъекцию.

В некоторых вариантах осуществления введение осуществляют насосом. Насос может представлять собой внешний насос или хирургически имплантированный насос. В определенных вариантах осуществления насос представляет собой подкожно имплантированный осмотический насос. В других вариантах осуществления насос представляет собой насос для вливания. Насос для вливания можно использовать для внутривенных, подкожных, артериальных или эпидуральных вливаний. В предпочтительных вариантах осуществления насос для вливания представляет собой подкожный насос для вливания. В других вариантах осуществления насос представляет собой хирургически имплантированный насос, который доставляет дцРНК в печень.

Способ введения может быть выбран в зависимости от того, требуется ли местное или системное лечение, и в зависимости от площади, которую обрабатывают. Способ и место введения может быть выбран для усиления направленности.

В одном аспекте настоящее изобретение также относится к способам ингибирования экспрессии гена APOC3 у млекопитающего. Способы включают введение млекопитающему композиции, содержащей дцРНК, мишенью которой является ген APOC3, в клетку млекопитающего, и поддержание млекопитающего в течение периода времени, достаточного для достижения разрушения мРНК транскрипта гена APOC3, посредством чего ингибируется экспрессия гена APOC3 в клетке. Ослабление генной экспрессии можно оценить любыми способами, известными в данной области техники, и способами, например, количественной ПЦР в реальном времени, описанными в настоящем описании. Ослабление синтеза белка можно оценить любыми способами, известными в данной области техники, и способами, например, ELISA, описанными в настоящем описании. В одном варианте осуществления биопсийный образец пункции печени служит в качестве тканевого материала для контроля ослабления экспрессии гена APOC3 и/или белка. В других вариантах осуществления ингибирование экспрессии гена APOC3 отслеживают косвенно, например, определением экспрессии и/или активности гена в APOC3 пути. Например, активность липопротеинлипазы (LPL) или липазы печени можно контролировать, определяя ингибирование экспрессии гена APOC3. Можно также измерить уровень триглицеридов в образце, например, образце крови или печени. Ингибирование APOC3 можно также отслеживать наблюдением влияния на клинические проявления повышенного уровня триглицеридов, например, влияния на преждевременную ишемическую болезнь сердца (CHD), сыпную ксантому, гепатоспленомегалию и панкреатит. Подходящие анализы описаны ниже в примерах.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способам лечения нуждающегося в лечении субъекта. Способы лечения настоящего изобретения включают введение дцРНК настоящего изобретения субъекту, например, субъекту, для которого полезно ослабление и/или ингибирование экспрессии APOC3, терапевтически эффективного количества дцРНК, мишенью которой является ген APOC3, или фармацевтической композиции, содержащей дцРНК, мишенью которой является ген APOC3.

дцРНК настоящего изобретения можно вводить в "голой" форме или в виде "свободной дцРНК". Голую дцРНК вводят в отсутствии фармацевтической композиции. Голая дцРНК может находиться в подходящем буферном растворе. Буферный раствор может содержать ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат, или любую их комбинацию. В одном варианте осуществления буферный раствор представляет собой забуференный фосфатом солевой раствор (PBS). pH и осмолярность буферного раствора, содержащего дцРНК, можно регулировать так, чтобы он подходил для введения субъекту. Дополнительные буферы описаны выше.

Альтернативно, дцРНК настоящего изобретения можно вводить в виде фармацевтической композиции, такой как дцРНК липосомальный состав. Дополнительные липосомальные составы описаны в настоящем изобретении.

Субъекты, для которого полезно ослабление и/или ингибирование генной экспрессии APOC3, представляют собой субъекты, имеющие повышенный уровень триглицеридов, например, TG>150 мг/дл, или субъекты с тяжелой гипертриглицеридемией, например, TG>500 мг/дл. В одном варианте осуществления субъект содержит генный вариант APOC3 с мутацией, при которой белковый продукт экспрессии мутантного гена приобретает новые и патологические функции. В других вариантах осуществления пациент имеет смешанную HTG (тип V) пониженной LPL активности и/или семейные HTG (IV) неактивирующие LPL мутанты, и/или семейные комбинированные сниженные уровни ApoB-100. В других вариантах осуществления субъект страдает неконтролируемой гипертриглицеридемией с острым панкреатитом, или субъект представляет собой ВИЧ пациента в процессе лечения, или субъект следует рациону с высоким содержанием жиров (постпрандиальная гипертриглицеридемия), или страдает метаболическим синдромом, или подвергается лечению соединением (ретиноидная терапия), или обладает резистентностью к инсулину. Лечение субъекта, для которого полезно ослабление и/или ингибирование генной экспрессии APOC3, включает терапевтическое и профилактическое лечение.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способам применения дцРНК или ее фармацевтической композиции, например, для лечения субъекта, для которого полезно ослабление и/или ингибирование экспрессии APOC3, например, субъекта, имеющего повышенный уровень триглицеридов, в комбинации с другими фармацевтическими агентами и/или другими терапевтическими способами, например, с известными фармацевтическими агентами и/или известными терапевтическими способами, такими, например, как применяемые в настоящее время для лечения повышенного уровня триглицеридов. Например, в определенных вариантах осуществления дцРНК, мишенью которой является APOC3, вводят в комбинации, например, с агентом, пригодным для лечения повышенного уровня триглицеридов. Например, дополнительные терапевтические агенты и терапевтические способы, пригодные для лечения субъекта, для которого полезно ослабление экспрессии APOC3, например, субъекта, имеющего повышенный уровень триглицеридов, включают изменение стиля жизни и рациона, прописывание высококачественного рыбьего жира, фибратов, ниацина, ApoC3 антисмысловых олигонуклеотидов, ингибиторов CETP, секвестрантов желчных кислот, никотиновой кислоты, ингибиторов HMG CoA редуктазы, гемфиброзила, фенофибрата, ингибитора поглощения холестерина, неомицина, жирных кислот омега 3 и подобных. дцРНК и дополнительный терапевтический агент и/или лечение можно вводить одновременно и/или в одной комбинации, например, парентерально, или дополнительный терапевтический агент можно вводить как часть отдельной композиции или в различные моменты времени и/или другим способом, известным в данной области техники или описанным в настоящем изобретении.

В одном варианте осуществления способ включает введение композиции, представленной в настоящем изобретении, так, чтобы экспрессия гена-мишени APOC3 снижалась в течение приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 12, 16, 18 или 24 часов, или 28, 32 или 36 часов. В одном варианте осуществления экспрессия гена-мишени APOC3 снижается на длительный период времени, например, по меньшей мере, приблизительно на два, три, четыре дня или более, например, приблизительно на одну неделю, две недели, три недели или четыре недели или более.

Введение дцРНК согласно способам настоящего изобретения может приводить в результате к снижению тяжести, признаков, симптомов и/или маркеров данных заболеваний или нарушений у пациента с повышенным уровнем триглицеридов. Под "снижением" в данном контексте подразумевают статистически значимое снижение данного уровня. Снижение может составлять, например, по меньшей мере, приблизительно 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или приблизительно 100%.

Эффективность лечения или предотвращения нарушения можно оценить, например, измерением прогрессирования нарушения, ремиссии нарушения, тяжести симптома, качества жизни, дозы лекарственного средства, требуемой для поддержания терапевтического эффекта, концентрации маркера нарушения или любого другого измеряемого параметра, подходящего для указанного нарушения, подвергаемого лечению или направленного на предотвращение. Специалист в данной области техники способен контролировать эффективность лечения или предотвращения измерением любого из данных параметров или любой комбинации параметров. Например, эффективность лечения повышенного уровня триглицеридов можно оценить, например, периодическим измерением уровня триглицеридов в сыворотке. Сравнение последних данных с первоначальными данными дает лечащему врачу указание, является ли лечение эффективным. Специалист в данной области техники способен контролировать эффективность лечения или предотвращения измерением одного из данных параметров или любой комбинации параметров. В связи с введением дцРНК, мишенью которой является APOC3, или ее фармацевтической композиции, "эффективным против" повышенного уровня триглицеридов является указание на то, что введение клинически подходящим способом с пользой влияет, по меньшей мере, у статистически значимой доли пациентов, на такое как облегчение симптомов, вылечивание, ослабление нарушения, продление срока жизни, улучшение качества жизни или другие, обычно признанные в качестве положительных врачами, знакомыми с повышенными уровнями триглицеридов и родственными случаями.

Эффект лечения или предотвращения является очевидным, когда есть статистически значимое улучшение одного или более параметров статуса заболевания, или при неудаче усугубление или развитие симптомов, когда они ожидаются иным образом. В качестве примера, благоприятное изменение, по меньшей мере, на 10% в измеряемом параметре заболевания, и предпочтительно, по меньшей мере, 20%, 30%, 40%, 50% или более может указывать на эффективное лечение. Об эффективности указанного лекарственного средства дцРНК или состава данного лекарственного средства можно также судить на экспериментальной животной модели для указанного заболевания, как известно в данной области техники. При использовании экспериментальной животной модели, эффективность лечения является доказанной, когда наблюдают статистически значимое снижение маркера или ослабление симптома.

Альтернативно, эффективность можно измерить ослаблением тяжести заболевания, как определено специалистом в области диагностики, на основе клинически одобренной шкалы оценки тяжести заболевания, в качестве только одного примера - система классификации по Чайлд-Пью (иногда система классификации Чайльда-Туркотта-Пью). Любое положительное изменение, являющееся результатом, например, снижения тяжести нарушения, измеренного по подходящей шкале, представляет собой адекватное лечение с применением дцРНК или состава дцРНК, как описано в настоящем описании.

Субъектам можно вводить терапевтическое количество дцРНК, такое как приблизительно 0,01 мг/кг, 0,02 мг/кг, 0,03 мг/кг, 0,04 мг/кг, 0,05 мг/кг, 0,06 мг/кг, 0,07 мг/кг, 0,08 мг/кг, 0,09 мг/кг, 0,1 мг/кг, 0,15 мг/кг, 0,2 мг/кг, 0,25 мг/кг, 0,3 мг/кг, 0,35 мг/кг, 0,4 мг/кг, 0,45 мг/кг, 0,5 мг/кг, 0,55 мг/кг, 0,6 мг/кг, 0,65 мг/кг, 0,7 мг/кг, 0,75 мг/кг, 0,8 мг/кг, 0,85 мг/кг, 0,9 мг/кг, 0,95 мг/кг, 1,0 мг/кг, 1,1 мг/кг, 1,2 мг/кг, 1,3 мг/кг, 1,4 мг/кг, 1,5 мг/кг, 1,6 мг/кг, 1,7 мг/кг, 1,8 мг/кг, 1,9 мг/кг, 2,0 мг/кг, 2,1 мг/кг, 2,2 мг/кг, 2,3 мг/кг, 2,4 мг/кг, 2,5 мг/кг дцРНК, 2,6 мг/кг дцРНК, 2,7 мг/кг дцРНК, 2,8 мг/кг дцРНК, 2,9 мг/кг дцРНК, 3,0 мг/кг дцРНК, 3,1 мг/кг дцРНК, 3,2 мг/кг дцРНК, 3,3 мг/кг дцРНК, 3,4 мг/кг дцРНК, 3,5 мг/кг дцРНК, 3,6 мг/кг дцРНК, 3,7 мг/кг дцРНК, 3,8 мг/кг дцРНК, 3,9 мг/кг дцРНК, 4,0 мг/кг дцРНК, 4,1 мг/кг дцРНК, 4,2 мг/кг дцРНК, 4,3 мг/кг дцРНК, 4,4 мг/кг дцРНК, 4,5 мг/кг дцРНК, 4,6 мг/кг дцРНК, 4,7 мг/кг дцРНК, 4,8 мг/кг дцРНК, 4,9 мг/кг дцРНК, 5,0 мг/кг дцРНК, 5,1 мг/кг дцРНК, 5,2 мг/кг дцРНК, 5,3 мг/кг дцРНК, 5,4 мг/кг дцРНК, 5,5 мг/кг дцРНК, 5,6 мг/кг дцРНК, 5,7 мг/кг дцРНК, 5,8 мг/кг дцРНК, 5,9 мг/кг дцРНК, 6,0 мг/кг дцРНК, 6,1 мг/кг дцРНК, 6,2 мг/кг дцРНК, 6,3 мг/кг дцРНК, 6,4 мг/кг дцРНК, 6,5 мг/кг дцРНК, 6,6 мг/кг дцРНК, 6,7 мг/кг дцРНК, 6,8 мг/кг дцРНК, 6,9 мг/кг дцРНК, 7,0 мг/кг дцРНК, 7,1 мг/кг дцРНК, 7,2 мг/кг дцРНК, 7,3 мг/кг дцРНК, 7,4 мг/кг дцРНК, 7,5 мг/кг дцРНК, 7,6 мг/кг дцРНК, 7,7 мг/кг дцРНК, 7,8 мг/кг дцРНК, 7,9 мг/кг дцРНК, 8,0 мг/кг дцРНК, 8,1 мг/кг дцРНК, 8,2 мг/кг дцРНК, 8,3 мг/кг дцРНК, 8,4 мг/кг дцРНК, 8,5 мг/кг дцРНК, 8,6 мг/кг дцРНК, 8,7 мг/кг дцРНК, 8,8 мг/кг дцРНК, 8,9 мг/кг дцРНК, 9,0 мг/кг дцРНК, 9,1 мг/кг дцРНК, 9,2 мг/кг дцРНК, 9,3 мг/кг дцРНК, 9,4 мг/кг дцРНК, 9,5 мг/кг дцРНК, 9,6 мг/кг дцРНК, 9,7 мг/кг дцРНК, 9,8 мг/кг дцРНК, 9,9 мг/кг дцРНК, 9,0 мг/кг дцРНК, 10 мг/кг дцРНК, 15 мг/кг дцРНК, 20 мг/кг дцРНК, 25 мг/кг дцРНК, 30 мг/кг дцРНК, 35 мг/кг дцРНК, 40 мг/кг дцРНК, 45 мг/кг дцРНК или приблизительно 50 мг/кг дцРНК. Величины и диапазоны, промежуточные для приведенных величин, также включены в качестве части настоящего изобретения.

В определенных вариантах осуществления, например, когда композиция настоящего изобретения содержит дцРНК, как описано в настоящем описании, и липид, субъектам можно вводить терапевтическое количество дцРНК, такое как приблизительно от 0,01 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, приблизительно от 0,01 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, приблизительно от 0,05 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, приблизительно от 0,05 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, приблизительно от 0,1 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, приблизительно от 0,1 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, приблизительно от 0,2 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, приблизительно от 0,2 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, приблизительно от 0,3 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, приблизительно от 0,3 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, приблизительно от 0,4 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, приблизительно от 0,4 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, приблизительно от 0,5 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, приблизительно от 0,5 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, приблизительно от 1 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, приблизительно от 1 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, приблизительно от 1,5 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, приблизительно от 1,5 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, приблизительно от 2 мг/кг до приблизительно 2,5 мг/кг, приблизительно от 2 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, приблизительно от 3 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, приблизительно от 3 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, приблизительно от 3,5 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, приблизительно от 4 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, приблизительно от 4,5 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, приблизительно от 4 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, приблизительно от 4,5 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, приблизительно от 5 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, приблизительно от 5,5 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, приблизительно от 6 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, приблизительно от 6,5 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, приблизительно от 7 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, приблизительно от 7,5 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, приблизительно от 8 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, приблизительно от 8,5 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, приблизительно от 9 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг или приблизительно от 9,5 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг. Величины и диапазоны, промежуточные для приведенных величин, также включены в качестве части настоящего изобретения.

Например, дцРНК можно вводить при дозе приблизительно 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8, 7,9, 8, 8,1, 8,2, 8,3, 8,4, 8,5, 8,6, 8,7, 8,8, 8,9, 9, 9,1, 9,2, 9,3, 9,4, 9,5, 9,6, 9,7, 9,8, 9,9 или приблизительно 10 мг/кг. Величины и диапазоны, промежуточные для приведенных величин, также включены в качестве части настоящего изобретения.

В других вариантах осуществления, например, когда композиция настоящего изобретения содержит дцРНК, как описано в настоящем описании, и N-ацетилгалактозамин, субъектам можно вводить терапевтическое количество дцРНК, такое как доза приблизительно от 0,1 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 0,25 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 0,5 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 0,75 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 1 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 1,5 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 2 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 2,5 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 3 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 3,5 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 4 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 4,5 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 5 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 7,5 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 10 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 15 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 20 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 20 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 25 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 25 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 30 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 35 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 40 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 45 до приблизительно 50 мг/кг, приблизительно от 0,1 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 0,25 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 0,5 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 0,75 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 1 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 1,5 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 2 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 2,5 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 3 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 3,5 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 4 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 4,5 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 5 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 7,5 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 10 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 15 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 20 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 20 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 25 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 25 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 30 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 35 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 40 до приблизительно 45 мг/кг, приблизительно от 0,1 до приблизительно 40 мг/кг, приблизительно от 0,25 до приблизительно 40 мг/кг, приблизительно от 0,5 до приблизительно 40 мг/кг, приблизительно от 0,75 до приблизительно 40 мг/кг, приблизительно от 1 до приблизительно 40 мг/кг, приблизительно от 1,5 до приблизительно 40 мг/кг, приблизительно от 2 до приблизительно 40 мг/кг, приблизительно от 2,5 до приблизительно 40 мг/кг, приблизительно от 3 до приблизительно 40 мг/кг, приблизительно от 3,5 до приблизительно 40 мг/кг, приблизительно от 4 до приблизительно 40 мг/кг, приблизительно от 4,5 до приблизительно 40 мг/кг, приблизительно от 5 до приблизительно 40 мг/кг, приблизительно от 7,5 до приблизительно 40 мг/кг, приблизительно от 10 до приблизительно 40 мг/кг, приблизительно от 15 до приблизительно 40 мг/кг, приблизительно от 20 до приблизительно 40 мг/кг, приблизительно от 20 до приблизительно 40 мг/кг, приблизительно от 25 до приблизительно 40 мг/кг, приблизительно от 25 до приблизительно 40 мг/кг, приблизительно от 30 до приблизительно 40 мг/кг, приблизительно от 35 до приблизительно 40 мг/кг, приблизительно от 0,1 до приблизительно 30 мг/кг, приблизительно от 0,25 до приблизительно 30 мг/кг, приблизительно от 0,5 до приблизительно 30 мг/кг, приблизительно от 0,75 до приблизительно 30 мг/кг, приблизительно от 1 до приблизительно 30 мг/кг, приблизительно от 1,5 до приблизительно 30 мг/кг, приблизительно от 2 до приблизительно 30 мг/кг, приблизительно от 2,5 до приблизительно 30 мг/кг, приблизительно от 3 до приблизительно 30 мг/кг, приблизительно от 3,5 до приблизительно 30 мг/кг, приблизительно от 4 до приблизительно 30 мг/кг, приблизительно от 4,5 до приблизительно 30 мг/кг, приблизительно от 5 до приблизительно 30 мг/кг, приблизительно от 7,5 до приблизительно 30 мг/кг, приблизительно от 10 до приблизительно 30 мг/кг, приблизительно от 15 до приблизительно 30 мг/кг, приблизительно от 20 до приблизительно 30 мг/кг, приблизительно от 20 до приблизительно 30 мг/кг, приблизительно от 25 до приблизительно 30 мг/кг, приблизительно от 0,1 до приблизительно 20 мг/кг, приблизительно от 0,25 до приблизительно 20 мг/кг, приблизительно от 0,5 до приблизительно 20 мг/кг, приблизительно от 0,75 до приблизительно 20 мг/кг, приблизительно от 1 до приблизительно 20 мг/кг, приблизительно от 1,5 до приблизительно 20 мг/кг, приблизительно от 2 до приблизительно 20 мг/кг, приблизительно от 2,5 до приблизительно 20 мг/кг, приблизительно от 3 до приблизительно 20 мг/кг, приблизительно от 3,5 до приблизительно 20 мг/кг, приблизительно от 4 до приблизительно 20 мг/кг, приблизительно от 4,5 до приблизительно 20 мг/кг, приблизительно от 5 до приблизительно 20 мг/кг, приблизительно от 7,5 до приблизительно 20 мг/кг, приблизительно от 10 до приблизительно 20 мг/кг, или приблизительно 15 до приблизительно 20 мг/кг. Величины и диапазоны, промежуточные для приведенных величин, также включены в качестве части настоящего изобретения.

Например, субъектам можно вводить терапевтическое количество дцРНК, такое как приблизительно 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8, 7,9, 8, 8,1, 8,2, 8,3, 8,4, 8,5, 8,6, 8,7, 8,8, 8,9, 9, 9,1, 9,2, 9,3, 9,4, 9,5, 9,6, 9,7, 9,8, 9,9, 10,5, 11, 11,5, 12, 12,5, 13, 13,5, 14, 14,5, 15, 15,5, 16, 16,5, 17, 17,5, 18, 18,5, 19, 19,5, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 или приблизительно 50 мг/кг. Величины и диапазоны, промежуточные для приведенных величин, также включены в качестве части настоящего изобретения.

дцРНК можно вводить внутривенным вливанием в течение периода времени, такого как 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или приблизительно 25 минутный период. Введение можно повторять, например, на регулярной основе, такой как раз в две недели (т.е. каждые две недели) в течение одного месяца, двух месяцев, трех месяцев, четырех месяцев или дольше. После первоначального режима лечения, лечение можно осуществлять на менее частой основе. Например, после введения один раз в две недели, введение можно повторять раз в месяц, в течение шести месяцев или года или дольше. Введение дцРНК может снижать уровень APOC3, например, в клетке, ткани, крови, моче или другом отделе пациента, по меньшей мере, приблизительно на 5%, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 39, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или, по меньшей мере, приблизительно на 99% или более.

Перед введением полной дозы дцРНК, пациентам можно вводить меньшую дозу, такую как 5% инфузионная реакция, и отслеживать на побочные эффекты, такие как аллергическая реакция. В другом примере, пациента можно наблюдать на нежелательные иммуностимулирующие эффекты, такие как повышенный уровень цитокинов (например, TNF-альфа или INF-альфа).

Благодаря ингибирующим эффектам на экспрессию APOC3, композиция согласно настоящему изобретению или полученная из нее фармацевтическая композиция могут улучшать качество жизни.

Если не определено иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют такие же значения, как общеизвестно специалисту в данной области техники, к которой относится настоящее изобретение. Хотя способы и материалы, аналогичные или эквивалентные способам и материалам, описанным в настоящем описании, можно применять на практике или в испытаниях дцРНК и способах, представленных в настоящем изобретении, подходящие способы и материалы описаны ниже. Все публикации, патентные заявки, патенты и другие ссылки, приведенные в настоящем описании, включены посредством ссылки во всей своей полноте. В случае конфликта, настоящее описание, включая определения, будет определяющим. Кроме того, материалы, способы и примеры являются только иллюстративными и не предполагаются в качестве ограничивающих.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Получение дцРНК

Источник реагентов

Когда источник реагента специально не указан в настоящем описании, такой реагент можно получить от любого поставщика реагентов для молекулярной биологии при стандартном качестве/чистоте для применения в молекулярной биологии.

киРНК синтез

Одноцепочечные РНК получали твердофазным синтезом в масштабе 1 мкмоль при использовании Expedite 8909 синтезатора (Applied Biosystems, Applera Deutschland GmbH, Darmstadt, Germany) и стекла с контролируемым размером пор (CPG, 500A, Proligo Biochemie GmbH, Hamburg, Germany) в качестве твердой подложки. РНК и РНК, содержащую 2΄-O-метилнуклеотиды, получали твердофазным синтезом при использовании соответствующих фосфороамидитов и 2΄-O-метилфосфороамидитов, соответственно (Proligo Biochemie GmbH, Hamburg, Germany). Данные мономеры вводили в выбранные сайты в последовательности олигорибонуклеотидной цепи, применяя стандартную нуклеозидную фосфороамидитную химию, такую, как описано в Current protocols in nucleic acid chemistry, Beaucage, S.L. et al. (Edrs.), John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, USA. Фосфоротиоатные связи вводили заменой йодного окисляющего раствора раствором реагента Букажа (Chruachem Ltd, Glasgow, UK) в ацетонитриле (1%). Дополнительные вспомогательные реагенты получали от Mallinckrodt Baker (Griesheim, Germany).

Деблокирование и очистку неочищенных олигорибонуклеотидов анионообменной ВЭЖХ осуществляли согласно общепринятым способам. Выходы и концентрации определяли УФ поглощением раствора соответствующей РНК при длине волны 260 нм при использовании спектрофотометра (DU 640B, Beckman Coulter GmbH, Unterschleiflheim, Germany). Двухцепочечную РНК получали смешением эквимолярных количеств комплементарных цепей в буфере для гибридизации (20 мМ фосфат натрия, pH 6,8; 100 мМ хлорид натрия), нагреванием на водяной бане при 85-90°C в течение 3 минут и охлаждением до комнатной температуры в течение 3-4 часов. Раствор гибридизованной РНК хранили при -20°C до использования.

Последовательности нуклеиновых кислот представлены ниже, применяя стандартную номенклатуру и, в частности, сокращения в таблице B.

Таблица B
Сокращения
Сокращение	Нуклеотид (нуклеотиды)
A	аденозин-3΄-фосфат
C	цитидин-3΄-фосфат
G	гуанозин-3΄-фосфат
U	уридин-3΄-фосфат
N	любой нуклеотид (G, A, C и T)
a	2΄-O-метиладенозин-3΄-фосфат
c	2΄-O-метилцитидин-3΄-фосфат
g	2΄-O-метилгуанозин-3΄-фосфат
u	2΄-O-метилуридин-3΄-фосфат
T, dT	2΄-дезокситимидин-3΄-фосфат
sT; sdT	2΄-дезокситимидин-5΄-фосфатфосфоротиоат

Пример 2. Конструирование киРНК APOC3

Транскрипты

Конструирование киРНК осуществляли для идентификации киРНК, мишенью которых являются все транскрипты APOC3 людей и макаки-крабоеда (Macaca fascicularis; далее "cyno"), аннотированные в NCBI генной базе данных (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/). При конструировании использовали следующие транскрипты из NCBI: человеческий - NM_000040.1; cyno - X68359.1. Все дуплексы киРНК конструировали, чтобы разделить 100% идентичность с перечисленными человеческими и cyno транскриптами.

Прогнозирование дизайна, специфичности и эффективности киРНК

киРНК выбирали в зависимости от прогнозируемой специфичности, прогнозируемой эффективности и содержания GC.

Прогнозируемую специфичность всех возможных 19-меров прогнозировали для каждой последовательности. Затем выбирали 19-мерных кандидатов, которые не содержали повторов, длиннее чем 7 нуклеотидов. Отобранные 171 кандидатов киРНК использовали в исчерпывающем поиске против человеческой транскриптомы (определенной как набор NM_ и XM_ данных в человеческом NCBI Refseq наборе).

Бал рассчитывали на основании положения и количества нарушений комплементарности между киРНК и любым потенциальным 'нецелевым' транскриптом и сравнения частоты гептамеров и октамеров, полученных из 3 различных гексамеров, полученных из «seed» области (положения 2-9 относительно 5'-конца молекулы) каждого олигонуклеотида. Обе цепи киРНК приписывали к категории специфичности согласно рассчитанным балам: бал выше 3 определяли как высокоспецифичную, равный 3 определяли как специфичную и от 2,2 до 2,8 как умеренно специфичную. Классифицировали по специфичности антисмысловой цепи. Затем выбирали дуплексы, чьи антисмысловые олигонуклеотиды имели менее чем 70% суммарного содержания GC, не содержали GC в первом положении и не совпадали с мышиным транскриптом NM_023114.3. APOC3

Выбор последовательности киРНК

Все 27 смысловых и 27 антисмысловых олигонуклеотидов киРНК получали и переводили в дуплексы.

Пример 3. Синтез киРНК APOC3

Синтез модифицированных и немодифицированных последовательностей ApoC3

Концевые последовательности APOC3 синтезировали на MerMade 192 синтезаторе или в 1 или 0,2 мкмолярном масштабе.

Единичные цепи и дуплексы получали или немодифицированными, или с 2'-O-метил или 2'-фтор химическими модификациями. Условия получения подходящим образом изменяли в зависимости от природы химических модификаций в единичных цепях.

Синтез, отщепление и деблокирование

При синтезе последовательностей APOC3 (немодифицированных, 2-O-метил или 2'-фтор) применяли олигонуклеотидный синтез на твердой подложке, применяя фосфороамидитную химию.

Синтез приведенных выше последовательностей осуществляли или в 1 или 0,2 мкм масштабе в 96-луночных планшетах. Растворы немодифицированных и модифицированных (2-O-метил или 2'-фтор) амидитов получали при 0,1M концентрации, и этилтиотетразол (0,6M в ацетонитриле) использовали в качестве активатора.

Полученные последовательности отщепляли и деблокировали в 96-луночных планшетах, используя или водный аммиак, или водный метиламин на первой стадии и фторидный реагент на второй стадии. Неочищенные последовательности осаждали при использовании смеси ацетон:этанол (80:20), и осадок ресуспендировали в 0,2M натрий-ацетатном буфере, для преобразования неочищенных единичных цепей в их натриевые соли. Образцы из каждой последовательности анализировали ЖХ-МС для подтверждения идентичности, УФ для определения количества и IEX хроматографией для определения чистоты.

Очистка и обессоливание

Концевые последовательности APOC3 осаждали и очищали на AKTA Purifier системе, используя Sephadex колонку. Способ осуществляли при температуре окружающей среды. Введение и отбор образцов проводили в 96-луночных планшетах (лунка объема 1,8 мл). Единственный пик, соответствующий последовательности полной длины, собирали в элюенте. Обессоленные последовательности APOC3 анализировали на концентрацию (УФ измерением при A260) и чистоту (ионнообменная ВЭЖХ). Затем комплементарные единичные цепи смешивали при стехиометрическом соотношении 1:1, с получением дуплексов киРНК.

В таблицах 1 и 2 приведен первый набор немодифицированных и модифицированных последовательностей.

Пример 4. Скрининг киРНК APOC3 in vitro

Клеточная культура и трансфекция

Hep3B клетки (ATCC, Manassas, VA) выращивали почти до конфлуентности при 37°C в атмосфере 5% CO₂ в RPMI (ATCC), снабженном 10% FBS, стрептомицином и глютамином (ATCC), перед высвобождением из планшета трипсинизацией. Трансфекцию осуществляли добавлением 14,8 мкл Opti-MEM плюс 0,2 мкл Lipofectamine RNAiMax на лунку (Invitrogen, Carlsbad CA. cat # 13778-150) к 5 мкл дуплексов киРНК на лунку в 96-луночном планшете и выдерживали при комнатной температуре в течение 15 минут. Затем добавляли 80 мкл полной ростовой среды без антибиотика, содержащей ~2×10⁴ Hep3B клеток, к смеси киРНК. Клетки выдерживали в течение или 24, или 120 часов перед очисткой РНК. Эксперименты с одноразовой дозой осуществляли при 10 нМ и 0,1 нМ конечной концентрацией дуплекса, и эксперименты на дозозависимый эффект осуществляли при 10, 1, 0,5, 0,1, 0,05, 0,01, 0,005, 0,001, 0,0005, 0,0001, 0,00005, 0,00001 нм конечной концентрации дуплекса.

Выделение суммарной РНК с использованием DYNABEADS mRNA набор для выделения (Invitrogen. part #: 610-12)

Клетки собирали и лизировали в 150 мкл буфера для лизиса/связывания, затем перемешивали в течение 5 минут при 850 об/мин, используя Eppendorf Thermomixer (скорость перемешивания одинаковая во всем способе). Десять микролитров магнитного микроносителя и 80 мкл смеси буфера для лизиса/связывания добавляли в круглодонный планшет и перемешивали в течение 1 минуты. Магнитный микроноситель захватывали, используя магнитный держатель, и супернатант удаляли без выведения из состояния покоя магнитных частиц. После удаления супернатанта, лизированные клетки добавляли к оставшемуся магнитному микроносителю и перемешивали в течение 5 минут. После удаления супернатанта, магнитный микроноситель промывали 2 раза 150 мкл буфера для промывки A и перемешивали в течение 1 минуты. Магнитные частицы снова захватывали, и удаляли супернатант. Затем магнитные частицы промывали 150 мкл буфера для промывки B, захватывали, и супернатант удаляли. Затем магнитные частицы промывали 150 мкл элюирующего буфера, захватывали и удаляли супернатант. Магнитные частицы сушили в течение 2 минут. После сушки, добавляли 50 мкл элюирующего буфера и перемешивали в течение 5 минут при 70°C. Магнитные частицы захватывали магнитом в течение 5 минут. 40 мкл супернатанта удаляли и добавляли к другому 96-луночному планшету.

Синтез cДНК при использовании набора для ABI высокоэффективной обратной транскрипции cДНК (Applied Biosystems. Foster City. CA. Cat #4368813

Мастер-смесь 2 мкл 10X буфера, 0,8 мкл 25X дНТФ, 2 мкл произвольного праймера, 1 мкл обратной транскриптазы, 1 мкл ингибитора РНКазы и 3,2 мкл H₂O на реакцию добавляли в 10 мкл суммарной РНК. cДНК получали, используя Bio-Rad C-1000 или S-1000 термоциклер (Hercules, CA) со следующими стадиями: 25°C 10 минут, 37°C 120 минут, 85°C 5 секунд, 4°C удерживание.

ПЦР в реальном времени

2 мкл cДНК добавляли к мастер-смеси, содержащей 0,5 мкл зонда GAPDH TaqMan (Applied Biosystems Cat # 4326317E), 0,5 мкл зонда ApoC3 TaqMan (Applied Biosystems cat # Hs00163644_ml) и 5 мкл мастер-смеси зонда Lightcycler 480 (Roche Cat #04887301001) на лунку в 384 луночных 50 планшетах (Roche cat # 04887301001). ПЦР в реальном времени осуществляли в ABI 7900HT системе для ПЦР в реальном времени (Applied Biosystems), применяя AACt(RQ) анализ. Каждый дуплекс тестировали для двух различных трансфекций, и каждую трансфекцию анализировали в двух повторах, если не указано иное в сводных таблицах.

Для расчета относительного кратного изменения, данные ПЦР в реальном времени анализировали, применяя AACt способ, и нормализовали относительно анализов, проводимых с клетками, трансфицированными 10 нМ AD-1955, или имитирующими трансфекцию клетками. IC50 рассчитывали, применяя модель для аппроксимации с 4 параметрами, используя XLFit, и нормализовали относительно клеток, трансфицированных AD-1955, или интактных клеток в таком же диапазоне доз, или относительно их собственной наименьшей дозы.

Скрининг на жизнеспособность

Жизнеспособность клеток измеряли на 3, 5 день на HeLa и Hep3B клетках после трансфекции 100, 10, 1, 0,1, 0,01 и 0,0001 нМ киРНК. Клетки высевали на чашки при плотности 10000 клеток на лунку в 96-луночных планшетах. Каждую киРНК анализировали в трех повторах, и данные усредняли. киРНК, мишенью которых является PLK1 и AD-19200, выдерживали в качестве положительного контроля на потерю жизнеспособности и AD-1955 в качестве отрицательного контроля. PLK1 и AD-19200 приводят в результате к зависящей от дозы потере жизнеспособности. Для измерения жизнеспособности, 20 мкл CellTiter Blue (Promega) добавляли к каждой лунке 96-луночных планшетов через 3, 5 дней и выдерживали при 37°C в течение 2 часов. Затем планшеты считывали в спектрофотометре (Molecular Devices) при 560Ex/590Em. Жизнеспособность выражали в виде средней величины световых единиц для трех копируемых трансфекций +/-стандартное отклонение. В некоторых случаях, относительную жизнеспособность оценивали первым усреднением трех копируемых трансфекций и затем нормализацией относительно величин, полученных для наименьшей дозы (0,001 нМ).

Результаты приведены в таблицах 3, 4 и 5.

Пример 5. Тестирование APOC3 in vivo на мышах

киРНК, мишенью которой является APOC3, вводили мышам, как дикого типа (5,0 мг/кг), так и трансгенным мышам гиперлипидемической модели SREBPtg/LDLR-/-KO (1,0 мг/кг). Мышей умерщвляли через два дня после введения и определяли концентрации мРНК в печени, триглицеридов в сыворотке и суммарного холестерина в сыворотке. Использовали состав LNp11, содержащий MC3.

Результаты для дикого типа показаны на фиг.1. Введение киРНК, мишенью которой является APOC3, приводили в результате к нокдауну в уровнях мРНК, 50% снижению триглицеридов и снижению суммарного холестерина у мышей дикого типа. Введение киРНК, мишенью которой является APOC3, приводило в результате к 80% снижению триглицеридов у мышей гиперлипидемической модели, данные не показаны. Результаты показывают, что APOC3 представляет собой обоснованную мишень для лечения гипертриглицеридемии на основе киРНК, включая коронарную болезнь сердца (CAD) и панкреатит.

Пример 6. Синтез и скрининг модифицированной киРНК, мишенью которой является APOC3 (второй набор)

Дополнительные модифицированные киРНК APOC3 получали, как описано в таблице 6 и таблице 7, применяя способы, описанные выше. UMdTdsdT пример модификации представляет собой присоединение dT-фосфоротиоат-dT к каждой цепи. DECAF схема модификации является следующей: смысловая цепь - 2'O-метил на всех пиримидинах, dTsdT/dTdT неспаренный конец; антисмысловая цепь - модификация 'U' в любых двух местах в динуклеотидном мотиве UU/UA/UG в «seed» области (положения 2-9) плюс 2'O-метил в последних 3 нуклеотидах (положения 17-19) плюс 2'O-метил в каждом 'U' в положениях 10-16; dTsdT/dTdT неспаренный конец. FOME схема модификации является следующей: смысловая цепь - 2'F (5' первое основание), затем чередование с 2'OMe, антисмысловая цепь -2'OMe (5' первое основание), затем чередование с 2'F.

киРНК, описанные в таблице 6 и таблице 7, анализировали на Hep3b клетках, как определено выше. Результаты показаны в таблице 8.

Пример 7. Синтез и скрининг модифицированных киРНК, мишенью которых является APOC3 (третий набор)

Дополнительные модифицированные киРНК APOC3 получали, как описано в таблице 9 и таблице 10, применяя способы, описанные выше. киРНК анализировали на Hep3b клетках, как определено выше. Результаты показаны в таблице 11.

Таблица 1
Немодифицированные последовательности киРНК APOC3 (первый набор)
Название дуплекса	Положение в NM_000040.1	SEQ ID NO:	Смысловая последовательность	SEQ ID NO:	Антисмысловая последовательность
AD-24548.1UM	264-282	2	ACUGGAGCACCGUUAAGGA	83	UCCUUAACGGUGCUCCAGU
AD-24549.1UM	417-435	3	GCCCCUGUAGGUUGCUUAA	84	UUAAGCAACCUACAGGGGC
AD-24550.1UM	418-436	4	CCCCUGUAGGUUGCUUAAA	85	UUUAAGCAACCUACAGGGG
AD-24551.1UM	47-65	5	AUGCAGCCCCGGGUACUCC	86	GGAGUACCCGGGGCUGCAU
AD-24552.1UM	412-430	6	GGGCUGCCCCUGUAGGUUG	87	CAACCUACAGGGGCAGCCC
AD-24553.1UM	267-285	7	GGAGCACCGUUAAGGACAA	88	UUGUCCUUAACGGUGCUCC
AD-24554.1UM	266-284	8	UGGAGCACCGUUAAGGACA	89	UGUCCUUAACGGUGCUCCA
AD-24555.1UM	423-441	9	GUAGGUUGCUUAAAAGGGA	90	UCCCUUUUAAGCAACCUAC
AD-24556.1UM	265-283	10	CUGGAGCACCGUUAAGGAC	91	GUCCUUAACGGUGCUCCAG
AD-24557.1UM	45-63	11	CCAUGCAGCCCCGGGUACU	92	AGUACCCGGGGCUGCAUGG
AD-24558.1UM	416-434	12	UGCCCCUGUAGGUUGCUUA	93	UAAGCAACCUACAGGGGCA
AD-24559.1UM	44-62	13	GCCAUGCAGCCCCGGGUAC	94	GUACCCGGGGCUGCAUGGC
AD-24560.1UM	263-281	14	UACUGGAGCACCGUUAAGG	95	CCUUAACGGUGCUCCAGUA
AD-24561.1UM	262-280	15	CUACUGGAGCACCGUUAAG	96	CUUAACGGUGCUCCAGUAG
AD-24562.1UM	261-279	16	ACUACUGGAGCACCGUUAA	97	UUAACGGUGCUCCAGUAGU
AD-24563.1UM	260-278	17	GACUACUGGAGCACCGUUA	98	UAACGGUGCUCCAGUAGUC
AD-24564.1UM	341-359	18	GCCUGAGACCUCAAUACCC	99	GGGUAUUGAGGUCUCAGGC
AD-24565.1UM	340-358	19	UGCCUGAGACCUCAAUACC	100	GGUAUUGAGGUCUCAGGCA
AD-24566.1UM	46-64	20	CAUGCAGCCCCGGGUACUC	101	GAGUACCCGGGGCUGCAUG
AD-24567.1UM	342-360	21	CCUGAGACCUCAAUACCCC	102	GGGGUAUUGAGGUCUCAGG
AD-24568.1UM	345-363	22	GAGACCUCAAUACCCCAAG	103	CUUGGGGUAUUGAGGUCUC
AD-24569.1UM	249-267	23	GUUCCCUGAAAGACUACUG	104	CAGUAGUCUUUCAGGGAAC
AD-24570.1UM	411-429	24	AGGGCUGCCCCUGUAGGUU	105	AACCUACAGGGGCAGCCCU
AD-24571.1UM	339-357	25	CUGCCUGAGACCUCAAUAC	106	GUAUUGAGGUCUCAGGCAG
AD-24572.1UM	351-369	26	UCAAUACCCCAAGUCCACC	107	GGUGGACUUGGGGUAUUGA
AD-24573.1UM	235-253	27	GACCGAUGGCUUCAGUUCC	108	GGAACUGAAGCCAUCGGUC
AD-24574.1UM	248-266	28	AGUUCCCUGAAAGACUACU	109	AGUAGUCUUUCAGGGAACU
AD-24575.1UM	415-433	29	CUGCCCCUGUAGGUUGCUU	110	AAGCAACCUACAGGGGCAG
AD-24576.1UM	234-252	30	UGACCGAUGGCUUCAGUUC	111	GAACUGAAGCCAUCGGUCA
AD-24577.1UM	168-186	31	AGACCGCCAAGGAUGCACU	112	AGUGCAUCCUUGGCGGUCU
AD-45078.1UM	232-250	32	GGUGACCGAUGGCUUCAGU	113	ACUGAAGCCAUCGGUCACCTT
AD-45084.1UM	237-255	33	CCGAUGGCUUCAGUUCCCU	114	AGGGAACUGAAGCCAUCGGTT
AD-45090.1UM	239-257	34	GAUGGCUUCAGUUCCCUGA	115	UCAGGGAACUGAAGCCAUCTT
AD-45096.1UM	240-258	35	AUGGCUUCAGUUCCCUGAA	116	UUCAGGGAACUGAAGCCAUTT
AD-45101.1UM	48-66	36	UGCAGCCCCGGGUACUCCU	117	AGGAGUACCCGGGGCUGCATT
AD-45102.1UM	241-259	37	UGGCUUCAGUUCCCUGAAA	118	UUUCAGGGAACUGAAGCCATT
AD-45107.1UM	49-67	38	GCAGCCCCGGGUACUCCUU	119	AAGGAGUACCCGGGGCUGCTT
AD-45108.1UM	243-261	39	GCUUCAGUUCCCUGAAAGA	120	UCUUUCAGGGAACUGAAGCTT
AD-45113.1UM	166-184	40	CAAGACCGCCAAGGAUGCA	121	UGCAUCCUUGGCGGUCUUGTT
AD-45114.1UM	251-269	41	UCCCUGAAAGACUACUGGA	122	UCCAGUAGUCUUUCAGGGATT
AD-45119.1UM	230-248	42	UGGGUGACCGAUGGCUUCA	123	UGAAGCCAUCGGUCACCCATT
AD-45120.1UM	254-272	43	CUGAAAGACUACUGGAGCA	124	UGCUCCAGUAGUCUUUCAGTT
AD-45121.1UM	259-277	44	AGACUACUGGAGCACCGUU	125	AACGGUGCUCCAGUAGUCU
AD-45122.1UM	410-428	45	CAGGGCUGCCCCUGUAGGU	126	ACCUACAGGGGCAGCCCUG
AD-45123.1UM	49-67	46	GCAGCCCCGGGUACUCCUU	127	AAGGAGUACCCGGGGCUGC
AD-45124.1UM	243-261	47	GCUUCAGUUCCCUGAAAGA	128	UCUUUCAGGGAACUGAAGC
AD-45125.1UM	343-361	48	CUGAGACCUCAAUACCCCA	129	UGGGGUAUUGAGGUCUCAG
AD-45126.1UM	430-448	49	GCUUAAAAGGGACAGUAUU	130	AAUACUGUCCCUUUUAAGC
AD-45127.1UM	269-287	50	AGCACCGUUAAGGACAAGU	131	ACUUGUCCUUAACGGUGCU
AD-45128.1UM	414-432	51	GCUGCCCCUGUAGGUUGCU	132	AGCAACCUACAGGGGCAGC
AD-45129.1UM	166-184	52	CAAGACCGCCAAGGAUGCA	133	UGCAUCCUUGGCGGUCUUG
AD-45130.1UM	251-269	53	UCCCUGAAAGACUACUGGA	134	UCCAGUAGUCUUUCAGGGA
AD-45131.1UM	344-362	54	UGAGACCUCAAUACCCCAA	135	UUGGGGUAUUGAGGUCUCA
AD-45132.1UM	514-532	55	CUGGACAAGAAGCUGCUAU	136	AUAGCAGCUUCUUGUCCAG
AD-45133.1UM	270-288	56	GCACCGUUAAGGACAAGUU	137	AACUUGUCCUUAACGGUGC
AD-45135.1UM	230-248	57	UGGGUGACCGAUGGCUUCA	138	UGAAGCCAUCGGUCACCCA
AD-45136.1UM	254-272	58	CUGAAAGACUACUGGAGCA	139	UGCUCCAGUAGUCUUUCAG
AD-45137.1UM	349-367	59	CCUCAAUACCCCAAGUCCA	140	UGGACUUGGGGUAUUGAGG
AD-45138.1UM	337-355	60	GGCUGCCUGAGACCUCAAU	141	AUUGAGGUCUCAGGCAGCC
AD-45139.1UM	425-443	61	AGGUUGCUUAAAAGGGACA	142	UGUCCCUUUUAAGCAACCU
AD-45140.1UM	232-250	62	GGUGACCGAUGGCUUCAGU	143	ACUGAAGCCAUCGGUCACC
AD-45141.1UM	259-277	63	AGACUACUGGAGCACCGUU	144	AACGGUGCUCCAGUAGUCU
AD-45143.1UM	338-356	64	GCUGCCUGAGACCUCAAUA	145	UAUUGAGGUCUCAGGCAGC
AD-45144.1UM	429-447	65	UGCUUAAAAGGGACAGUAU	146	AUACUGUCCCUUUUAAGCA
AD-45145.1UM	237-255	66	CCGAUGGCUUCAGUUCCCU	147	AGGGAACUGAAGCCAUCGG
AD-45146.1UM	269-287	67	AGCACCGUUAAGGACAAGU	148	ACUUGUCCUUAACGGUGCU
AD-45147.1UM	414-432	68	GCUGCCCCUGUAGGUUGCU	149	AGCAACCUACAGGGGCAGC
AD-45148.1UM	343-361	69	CUGAGACCUCAAUACCCCA	150	UGGGGUAUUGAGGUCUCAG
AD-45149.1UM	430-448	70	GCUUAAAAGGGACAGUAUU	151	AAUACUGUCCCUUUUAAGC
AD-45150.1UM	239-257	71	GAUGGCUUCAGUUCCCUGA	152	UCAGGGAACUGAAGCCAUC
AD-45151.1UM	270-288	72	GCACCGUUAAGGACAAGUU	153	AACUUGUCCUUAACGGUGC
AD-45152.1UM	419-437	73	CCCUGUAGGUUGCUUAAAA	154	UUUUAAGCAACCUACAGGG
AD-45153.1UM	344-362	74	UGAGACCUCAAUACCCCAA	155	UUGGGGUAUUGAGGUCUCA
AD-45154.1UM	514-532	75	CUGGACAAGAAGCUGCUAU	156	AUAGCAGCUUCUUGUCCAG
AD-45155.1UM	240-258	76	AUGGCUUCAGUUCCCUGAA	157	UUCAGGGAACUGAAGCCAU
AD-45157.1UM	425-443	77	AGGUUGCUUAAAAGGGACA	158	UGUCCCUUUUAAGCAACCU
AD-45158.1UM	349-367	78	CCUCAAUACCCCAAGUCCA	159	UGGACUUGGGGUAUUGAGG
AD-45159.1UM	48-66	79	UGCAGCCCCGGGUACUCCU	160	AGGAGUACCCGGGGCUGCA
AD-45160.1UM	241-259	80	UGGCUUCAGUUCCCUGAAA	161	UUUCAGGGAACUGAAGCCA
AD-45161.1UM	338-356	81	GCUGCCUGAGACCUCAAUA	162	UAUUGAGGUCUCAGGCAGC
AD-45162.1UM	429-447	82	UGCUUAAAAGGGACAGUAU	163	AUACUGUCCCUUUUAAGCA

Таблица 2
Модифицированные последовательности киРНК ApoC3 (первый набор) Нуклеотиды, показанные нижним регистром (g, a, u, c) обозначают 2΄-O-метилнуклеотиды; Nf (например, Gf, Af, Uf, Cf) обозначают 2΄-O-фторнуклеотид; s обозначают фосфоротиоатную связь
Название дуплекса	SEQ ID NO:	Смысловая последовательность	SEQ ID NO:	Антисмысловая последовательность
AD-24548.1	164	AcuGGAGcAccGuuAAGGAdTsdT	245	UCCUuAACGGUGCUCcAGUdTsdT
AD-24549.1	165	GccccuGuAGGuuGcuuAAdTsdT	246	UuAAGcAACCuAcAGGGGCdTsdT
AD-24550.1	166	ccccuGuAGGuuGcuuAAAdTsdT	247	UUuAAGcAACCuAcAGGGGdTsdT
AD-24551.1	167	AuGcAGccccGGGuAcuccdTsdT	248	GGAGuACCCGGGGCUGcAUdTsdT
AD-24552.1	168	GGGcuGccccuGuAGGuuGdTsdT	249	cAACCuAcAGGGGcAGCCCdTsdT
AD-24553.1	169	GGAGcAccGuuAAGGAcAAdTsdT	250	UUGUCCUuAACGGUGCUCCdTsdT
AD-24554.1	170	uGGAGcAccGuuAAGGAcAdTsdT	251	UGUCCUuAACGGUGCUCcAdTsdT
AD-24556.1	171	cuGGAGcAccGuuAAGGAcdTsdT	252	GUCCUuAACGGUGCUCcAGdTsdT
AD-24557.1	172	ccAuGcAGccccGGGuAcudTsdT	253	AGuACCCGGGGCUGcAUGGdTsdT
AD-24558.1	173	uGccccuGuAGGuuGcuuAdTsdT	254	uAAGcAACCuAcAGGGGcAdTsdT
AD-24559.1	174	GccAuGcAGccccGGGuAcdTsdT	255	GuACCCGGGGCUGcAUGGCdTsdT
AD-24560.1	175	uAcuGGAGcAccGuuAAGGdTsdT	256	CCUuAACGGUGCUCcAGuAdTsdT
AD-24561.1	176	cuAcuGGAGcAccGuuAAGdTsdT	257	CUuAACGGUGCUCcAGuAGdTsdT
AD-24563.1	177	GAcuAcuGGAGcAccGuuAdTsdT	258	uAACGGUGCUCcAGuAGUCdTsdT
AD-24564.1	178	GccuGAGAccucAAuAcccdTsdT	259	GGGuAUUGAGGUCUcAGGCdTsdT
AD-24565.1	179	uGccuGAGAccucAAuAccdTsdT	260	GGuAUUGAGGUCUcAGGcAdTsdT
AD-24566.1	180	cAuGcAGccccGGGuAcucdTsdT	261	GAGuACCCGGGGCUGcAUGdTsdT
AD-24567.1	181	ccuGAGAccucAAuAccccdTsdT	262	GGGGuAUUGAGGUCUcAGGdTsdT
AD-24568.1	182	GAGAccucAAuAccccAAGdTsdT	263	CUUGGGGuAUUGAGGUCUCdTsdT
AD-24569.1	183	GuucccuGAAAGAcuAcuGdTsdT	264	cAGuAGUCUUUcAGGGAACdTsdT
AD-24570.1	184	AGGGcuGccccuGuAGGuudTsdT	265	AACCuAcAGGGGcAGCCCUdTsdT
AD-24571.1	185	cuGccuGAGAccucAAuAcdTsdT	266	GuAUUGAGGUCUcAGGcAGdTsdT
AD-24572.1	186	ucAAuAccccAAGuccAccdTsdT	267	GGUGGACUUGGGGuAUUGAdTsdT
AD-24573.1	187	GAccGAuGGcuucAGuuccdTsdT	268	GGAACUGAAGCcAUCGGUCdTsdT
AD-24574.1	188	AGuucccuGAAAGAcuAcudTsdT	269	AGuAGUCUUUcAGGGAACUdTsdT
AD-24575.1	189	cuGccccuGuAGGuuGcuudTsdT	270	AAGcAACCuAcAGGGGcAGdTsdT
AD-24576.1	190	uGAccGAuGGcuucAGuucdTsdT	271	GAACUGAAGCcAUCGGUcAdTsdT
AD-24577.1	191	AGAccGccAAGGAuGcAcudTsdT	272	AGUGcAUCCUUGGCGGUCUdTsdT
AD-24555.1	192	GuAGGuuGcuuAAAAGGGAdTsdT	273	UCCCUUUuAAGcAACCuACdTsdT
AD-24562.1	193	AcuAcuGGAGcAccGuuAAdTsdT	274	UuAACGGUGCUCcAGuAGUdTsdT
AD-45078.1	194	GGuGAccGAuGGcuucAGudTsdT	275	ACUGAAGCcAUCGGUcACCdTsdT
AD-45084.1	195	ccGAuGGcuucAGuucccudTsdT	276	AGGGAACUGAAGCcAUCGGdTsdT
AD-45090.1	196	GAuGGcuucAGuucccuGAdTsdT	277	UcAGGGAACUGAAGCcAUCdTsdT
AD-45096.1	197	AuGGcuucAGuucccuGAAdTsdT	278	UUcAGGGAACUGAAGCcAUdTsdT
AD-45101.1	198	uGcAGccccGGGuAcuccudTsdT	279	AGGAGuACCCGGGGCUGcAdTsdT
AD-45102.1	199	uGGcuucAGuucccuGAAAdTsdT	280	UUUcAGGGAACUGAAGCcAdTsdT
AD-45107.1	200	GcAGccccGGGuAcuccuudTsdT	281	AAGGAGuACCCGGGGCUGCdTsdT
AD-45108.1	201	GcuucAGuucccuGAAAGAdTsdT	282	UCUUUcAGGGAACUGAAGCdTsdT
AD-45113.1	202	cAAGAccGccAAGGAuGcAdTsdT	283	UGcAUCCUUGGCGGUCUUGdTsdT
AD-45114.1	203	ucccuGAAAGAcuAcuGGAdTsdT	284	UCcAGuAGUCUUUcAGGGAdTsdT
AD-45119.1	204	uGGGuGAccGAuGGcuucAdTsdT	285	UGAAGCcAUCGGUcACCcAdTsdT
AD-45120.1	205	cuGAAAGAcuAcuGGAGcAdTsdT	286	UGCUCcAGuAGUCUUUcAGdTsdT
AD-45121.1	206	AGAcuAcuGGAGcAccGuudTsdT	287	AACGGUGCUCcAGuAGUCUdTsdT
AD-45122.1	207	cAGGGcuGccccuGuAGGudTsdT	288	ACCuAcAGGGGcAGCCCUGdTsdT
AD-45123.1	208	GCfAGCfCfCfCfGGGUfACfUfCfCfUfUfdTsdT	289	AAGGAGUfACCCGGGGCUGCdTsdT
AD-45124.1	209	GCfUfUfCfAGUfUfCfCfCfUfGAAAGAdTsdT	290	UCUUUCfAGGGAACUGAAGCdTsdT
AD-45125.1	210	CfUfGAGACfCfUfCfAAUfACfCfCfCfAdTsdT	291	UGGGGUfAUUGAGGUCUCfAGdTsdT
AD-45126.1	211	GCfUfUfAAAAGGGACfAGUfAUfUfdTsdT	292	AAUfACUGUCCCUUUUfAAGCdTsdT
AD-45127.1	212	AGcAccGuuAAGGAcAAGudTsdT	293	ACUUGUCCUuAACGGUGCUdTsdT
AD-45128.1	213	GcuGccccuGuAGGuuGcudTsdT	294	AGcAACCuAcAGGGGcAGCdTsdT
AD-45129.1	214	CfAAGACfCfGCfCfAAGGAUfGCfAdTsdT	295	UGCfAUCCUUGGCGGUCUUGdTsdT
AD-45130.1	215	UfCfCfCfUfGAAAGACfUfACfUfGGAdTsdT	296	UCCfAGUfAGUCUUUCfAGGGAdTsdT
AD-45131.1	216	UfGAGACfCfUfCfAAUfACfCfCfCfAAdTsdT	297	UUGGGGUfAUUGAGGUCUCfAdTsdT
AD-45132.1	217	CfUfGGACfAAGAAGCfUfGCfUfAUfdTsdT	298	AUfAGCfAGCUUCUUGUCCfAGdTsdT
AD-45133.1	218	GcAccGuuAAGGAcAAGuudTsdT	299	AACUUGUCCUuAACGGUGCdTsdT
AD-45135.1	219	UfGGGUfGACfCfGAUfGGCfUfUfCfAdTsdT	300	UGAAGCCfAUCGGUCfACCCfAdTsdT
AD-45136.1	220	CfUfGAAAGACfUfACfUfGGAGCfAdTsdT	301	UGCUCCfAGUfAGUCUUUCfAGdTsdT
AD-45137.1	221	CfCfUfCfAAUfACfCfCfCfAAGUfCfCfAdTsdT	302	UGGACUUGGGGUfAUUGAGGdTsdT
AD-45138.1	222	GGcuGccuGAGAccucAAudTsdT	303	AUUGAGGUCUcAGGcAGCCdTsdT
AD-45139.1	223	AGGuuGcuuAAAAGGGAcAdTsdT	304	UGUCCCUUUuAAGcAACCUdTsdT
AD-45140.1	224	GGUfGACfCfGAUfGGCfUfUfCfAGUfdTsdT	305	ACUGAAGCCfAUCGGUCfACCdTsdT
AD-45141.1	225	AGACfUfACfUfGGAGCfACfCfGUfUfdTsdT	306	AACGGUGCUCCfAGUfAGUCUdTsdT
AD-45143.1	226	GcuGccuGAGAccucAAuAdTsdT	307	uAUUGAGGUCUcAGGcAGCdTsdT
AD-45144.1	227	uGcuuAAAAGGGAcAGuAudTsdT	308	AuACUGUCCCUUUuAAGcAdTsdT
AD-45145.1	228	CfCfGAUfGGCfUfUfCfAGUfUfCfCfCfUfdTsdT	309	AGGGAACUGAAGCCfAUCGGdTsdT
AD-45146.1	229	AGCfACfCfGUfUfAAGGACfAAGUfdTsdT	310	ACUUGUCCUUfAACGGUGCUdTsdT
AD-45147.1	230	GCfUfGCfCfCfCfUfGUfAGGUfUfGCfUfdTsdT	311	AGCfAACCUfACfAGGGGCfAGCdTsdT
AD-45148.1	231	cuGAGAccucAAuAccccAdTsdT	312	UGGGGuAUUGAGGUCUcAGdTsdT
AD-45149.1	232	GcuuAAAAGGGAcAGuAuudTsdT	313	AAuACUGUCCCUUUuAAGCdTsdT
AD-45150.1	233	GAUfGGCfUfUfCfAGUfUfCfCfCfUfGAdTsdT	314	UCfAGGGAACUGAAGCCfAUCdTsdT
AD-45151.1	234	GCfACfCfGUfUfAAGGACfAAGUfUfdTsdT	315	AACUUGUCCUUfAACGGUGCdTsdT
AD-45152.1	235	CfCfCfUfGUfAGGUfUfGCfUfUfAAAAdTsdT	316	UUUUfAAGCfAACCUfACfAGGGdTsdT
AD-45153.1	236	uGAGAccucAAuAccccAAdTsdT	317	UUGGGGuAUUGAGGUCUcAdTsdT
AD-45154.1	237	cuGGAcAAGAAGcuGcuAudTsdT	318	AuAGcAGCUUCUUGUCcAGdTsdT
AD-45155.1	238	AUfGGCfUfUfCfAGUfUfCfCfCfUfGAAdTsdT	319	UUCfAGGGAACUGAAGCCfAUdTsdT
AD-45157.1	239	AGGUfUfGCfUfUfAAAAGGGACfAdTsdT	320	UGUCCCUUUUfAAGCfAACCUdTsdT
AD-45158.1	240	ccucAAuAccccAAGuccAdTsdT	321	UGGACUUGGGGuAUUGAGGdTsdT
AD-45159.1	241	UfGCfAGCfCfCfCfGGGUfACfUfCfCfUfdTsdT	322	AGGAGUfACCCGGGGCUGCfAdTsdT
AD-45160.1	242	UfGGCfUfUfCfAGUfUfCfCfCfUfGAAAdTsdT	323	UUUCfAGGGAACUGAAGCCfAdTsdT
AD-45161.1	243	GCfUfGCfCfUfGAGACfCfUfCfAAUfAdTsdT	324	UfAUUGAGGUCUCfAGGCfAGCdTsdT
AD-45162.1	244	UfGCfUfUfAAAAGGGACfAGUfAUfdTsdT	325	AUfACUGUCCCUUUUfAAGCfAdTsdT

Таблица 3
Скрининг модифицированных киРНК ApoC3 (первый набор) при единичной дозе
Дуплекс ID	10 нМ	0,1 нМ
AD-24548.1	0,06	0,38
AD-24549.1	0,17	0,39
AD-24550.1	0,38	0,67
AD-24551.1	1,08	1,02
AD-24552.1	0,98	0,97
AD-24553.1	0,51	0,63
AD-24554.1	0,63	0,78
AD-24555.1	0,06	0,29
AD-24556.1	0,17	0,72
AD-24557.1	0,81	0,93
AD-24558.1	0,90	0,75
AD-24559.1	0,88	0,94
AD-24560.1	0,75	0,85
AD-24561.1	0,40	0,77
AD-24562.1	0,07	0,39
AD-24563.1	0,55	0,91
AD-24564.1	0,70	1,00
AD-24565.1	0,67	1,00
AD-24566.1	0,97	1,01
AD-24567.1	0,89	0,92
AD-24568.1	0,95	0,85
AD-24569.1	0,68	0,88
AD-24570.1	0,74	0,77
AD-24571.1	0,22	0,60
AD-24572.1	0,92	0,91
AD-24573.1	0,65	0,76
AD-24574.1	0,70	0,80
AD-24575.1	0,63	0,94
AD-24576.1	0,05	0,31
AD-24577.1	0,90	0,98
AD-45078.1	0,38	0,78
AD-45084.1	0,60	0,92
AD-45090.1	0,97	0,86
AD-45096.1	0,47	0,82
AD-45101.1	1,01	1,30
AD-45102.1	0,05	0,22
AD-45107.1	0,87	1,06
AD-45108.1	0,02	0,12
AD-45113.1	0,97	1,04
AD-45114.1	0,37	0,77
AD-45119.1	0,91	0,87
AD-45120.1	0,03	0,08
AD-45121.1	0,93	0,94
AD-45122.1	0,92	0,97
AD-45123.1	0,15	0,41
AD-45124.1	0,03	0,07
AD-45125.1	0,16	0,55
AD-45126.1	0,03	0,08
AD-45127.1	0,58	0,75
AD-45128.1	0,97	0,96
AD-45129.1	0,20	0,47
AD-45130.1	0,05	0,12
AD-45131.1	0,24	0,64
AD-45132.1	0,30	0,52
AD-45133.1	0,03	0,10
AD-45135.1	0,02	0,08
AD-45136.1	0,04	0,10
AD-45137.1	0,02	0,19
AD-45138.1	0,86	1,04
AD-45139.1	1,19	1,13
AD-45140.1	0,07	0,33
AD-45141.1	0,03	0,07
AD-45143.1	0,73	0,94
AD-45144.1	0,45	0,95
AD-45145.1	0,04	0,13
AD-45146.1	0,06	0,21
AD-45147.1	0,20	0,49
AD-45148.1	0,80	0,94
AD-45149.1	0,03	0,07
AD-45150.1	0,09	0,28
AD-45151.1	0,03	0,05
AD-45152.1	0,04	0,13
AD-45153.1	0,92	1,02
AD-45154.1	0,14	0,29
AD-45155.1	0,60	0,68
AD-45157.1	0,13	0,29
AD-45158.1	0,37	0,78
AD-45159.1	0,12	0,53
AD-45160.1	0,03	0,11
AD-45161.1	0,59	0,54
AD-45162.1	0,02	0,06

Таблица 4
Данные IC50 модифицированных киРНК ApoC3 (первый набор)
Название дуплекса	IC50 24 часа (нМ)	IC50 120 часов (нМ)
AD-24555	0,038	0,091
AD-24562	0,025	0,106
AD-24576	0,037	0,059
AD-45102.1	0,012	0,022
AD-45108.1	0,014	0,246
AD-45120.1	0,011	0,02
AD-45124.1	0,013	0,264
AD-45126.1	0,025	0,098
AD-45129.1	0,023	0,046
AD-45133.1	0,014	0,015
AD-45135.1	0,008	0,064
AD-45136.1	0,008	0,053
AD-45137.1	0,010	0,077
AD-45141.1	0,007	0,063
AD-45145.1	0,013	0,113
AD-45146.1	0,031	0,316
AD-45149.1	0,011	0,091
AD-45151.1	0,006	0,009
AD-45152.1	0,011	0,051
AD-45160.1	0,019	0,162
AD-45162.1	0,008	0,013

Таблица 5
Жизнеспособность модифицированных киРНК ApoC3 (первый набор) Данные о жизнеспособности выражены как доля жизнеспособных клеток относительно клеток, обработанных наименьшей дозой киРНК (0,0001 нМ). 1-100% жизнеспособность, 0=100% летальность
HeLa День 3	Доля жизнеспособных клеток, нормализованная относительно низкой дозы (0,0001 нМ)
Концентрация (нМ)	10 нМ	1 нМ	0,1 Нм	0,01 Нм	0,0001 нМ
AD-45102.1	0,57	0,72	0,96	1,06	1,00
AD-45108.1	0,58	0,87	0,99	0,97	1,00
AD-45120.1	0,16	0,33	0,75	0,97	1,00
AD-45124.1	0,69	0,84	0,96	0,94	1,00
AD-45126.1	0,47	0,46	0,65	0,95	1,00
AD-45130.1	0,64	0,72	0,93	1,00	1,00
AD-45133.1	0,22	0,51	0,94	0,94	1,00
AD-45151.1	0,43	0,63	1,12	1,06	1,00
AD-45152.1	0,70	0,96	1,02	1,06	1,00
AD-45160.1	0,44	0,68	0,83	0,99	1,00
AD-45162.1	0,62	0,86	1,01	1,01	1,00
AD-24555	0,67	0,91	1,00	0,96	1,00
AD-24562	0,59	0,74	0,82	0,92	1,00
AD-24576	0,39	0,71	1,01	0,91	1,00
AD-45135.1	0,18	0,43	0,94	1,02	1,00
AD-45136.1	0,33	0,48	0,86	1,00	1,00
AD-45137.1	0,65	0,89	0,96	0,91	1,00
AD-45141.1	0,51	0,53	0,88	0,98	1,00
AD-45145.1	0,33	0,58	0,95	0,92	1,00
AD-45146.1	0,39	0,47	0,87	0,93	1,00
AD-45149.1	0,57	0,64	0,96	0,96	1,00
AD-1955	0,62	0,84	0,93	0,99	1,00
PLK	0,02	0,05	0,12	0,62	1,00
AD-19200	0,15	0,34	0,81	0,93	1,00

HeLa День 5	Доля жизнеспособных клеток, нормализованная относительно низкой дозы (0,0001 нМ)
Концентрация (нМ)	10 нМ	1 нМ	0,1 нМ	0,01 нМ	0,0001 нМ
AD-45102.1	0,55	0,79	0,89	1,00	1,00
AD-45108.1	0,77	0,95	0,99	1,01	1,00
AD-45120.1	0,06	0,28	0,90	1,00	1,00
AD-45124.1	1,12	1,13	1,02	1,08	1,00
AD-45126.1	0,84	0,87	0,98	1,04	1,00
AD-45130.1	0,50	0,81	1,04	1,11	1,00
AD-45133.1	0,01	0,11	0,76	0,94	1,00
AD-45151.1	0,17	0,41	0,63	1,00	1,00
AD-45152.1	0,82	0,97	0,84	1,01	1,00
AD-45160.1	0,47	0,83	0,94	1,03	1,00
AD-45162.1	0,79	0,94	0,83	1,00	1,00
AD-24555	0,92	1,04	0,99	0,99	1,00
AD-24562	0,71	0,98	1,05	1,03	1,00
AD-24576	0,10	0,59	0,80	1,00	1,00
AD-45135.1	0,04	0,66	1,02	1,02	1,00
AD-45136.1	0,23	0,67	1,06	0,96	1,00
AD-45137.1	0,73	0,93	1,02	0,98	1,00
AD-45141.1	0,30	0,51	0,91	0,97	1,00
AD-45145.1	0,27	0,76	1,01	1,01	1,00
AD-45146.1	0,29	0,59	0,98	1,02	1,00
AD-45149.1	0,71	0,84	1,01	0,99	1,00
AD-1955	0,67	0,89	0,92	0,95	1,00
PLK	-0,03	0,02	0,06	0,47	0,88
AD-19200	0,05	0,49	1,01	1,03	1,00

Hep3B День 3	Доля жизнеспособных клеток, нормализованная относительно низкой дозы (0,0001 нМ)
Концентрация (нМ)	10 нМ	1 нМ	0,1 нМ	0,01 нМ	0,0001 нМ
AD-45102.1	0,84	1,09	1,02	1,06	1,00
AD-45108.1	0,88	1,02	0,99	0,96	1,00
AD-45120.1	0,69	0,99	0,99	0,94	1,00
AD-45124.1	0,86	1,09	0,95	0,92	1,00
AD-45126.1	0,73	0,95	0,99	0,97	1,00
AD-45130.1	0,81	1,00	1,04	1,00	1,00
AD-45133.1	0,64	0,98	1,05	1,02	1,00
AD-45151.1	0,53	0,70	0,91	0,86	1,00
AD-45152.1	0,86	0,93	0,98	1,02	1,00
AD-45160.1	1,03	1,11	1,00	0,95	1,00
AD-45162.1	0,91	0,95	1,02	0,96	1,00
AD-24555	0,83	0,82	0,93	0,81	1,00
AD-24562	1,14	1,26	1,15	1,03	1,00
AD-24576	0,84	1,06	1,11	1,00	1,00
AD-45135.1	0,99	1,18	1,17	1,18	1,00
AD-45136.1	0,83	0,98	1,05	1,12	1,00
AD-45137.1	0,93	1,12	1,04	1,03	1,00
AD-45141.1	0,71	0,89	0,93	1,12	1,00
AD-45145.1	0,87	1,07	1,03	1,05	1,00
AD-45146.1	0,85	1,01	1,07	1,09	1,00
AD-45149.1	0,98	1,20	1,10	1,04	1,00
AD-1955	0,62	0,92	0,95	0,93	1,00
PLK	0,21	0,32	0,47	0,82	1,00
AD-19200	0,25	0,63	1,03	1,01	1,00

Hep3B День 5	Доля жизнеспособных клеток, нормализованная относительно низкой дозы (0,0001 нМ)
Концентрация (нМ)	10 нМ	1 нМ	0,1 нМ	0,01 нМ	0,0001 нМ
AD-45102.1	0,73	0,96	1,03	0,94	1,00
AD-45108.1	1,01	0,83	0,96	0,96	1,00
AD-45120.1	0,30	0,47	0,81	1,00	1,00
AD-45124.1	1,33	1,24	0,89	1,04	1,00
AD-45126.1	1,08	1,05	1,00	0,92	1,00
AD-45130.1	0,86	0,92	1,09	0,93	1,00
AD-45133.1	0,47	0,58	0,93	0,95	1,00
AD-45151.1	0,29	0,57	0,93	0,91	1,00
AD-45152.1	1,00	0,94	0,93	0,96	1,00
AD-45160.1	1,46	1,25	1,20	0,90	1,00
AD-45162.1	0,83	0,84	0,89	0,85	1,00
AD-24555	1,13	1,00	0,99	0,83	1,00
AD-24562	1,16	1,13	1,03	0,97	1,00
AD-24576	0,68	0,92	1,04	0,90	1,00
AD-45135.1	0,81	1,23	1,35	1,19	1,00
AD-45136.1	0,37	0,74	0,92	1,00	1,00
AD-45137.1	0,74	0,90	0,99	0,96	1,00
AD-45141.1	0,32	0,43	0,61	0,96	1,00
AD-45145.1	0,52	0,74	0,96	1,00	1,00
AD-45146.1	0,60	0,57	0,86	1,02	1,00
AD-45149.1	0,83	0,94	1,01	0,97	1,00
AD-1955	0,63	0,74	0,93	0,85	1,00
PLK	0,03	0,12	0,29	0,86	1,00
AD-19200	-0,04	0,41	0,84	0,95	1,00

Таблица 6
Немодифицированные последовательности киРНК APOC3 (второй набор) и названия дуплексов немодифицированных киРНК
Название немодифицированного дуплекса	SEQ ID NO	Немодифицированная смысловая последовательность	SEQ ID NO	Немодифицированная антисмысловая последовательность	Название модифицированного дуплекса	Тип модификации	Положение в NM_000040.1
AD-45101.1UM	326	UGCAGCCCCGGGUACUCCU	353	AGGAGUACCCGGGGCUGCA	AD-46822.1	end	48-66
					AD-47334.1	FOME	48-66
AD-47361.1	DECAF	48-66
AD-45107.1UM	327	GCAGCCCCGGGUACUCCUU	354	AAGGAGUACCCGGGGCUGC	AD-46825.1	UMdTsdT	49-67
					AD-47338.1	FOME	49-67
AD-47365.1	DECAF	49-67
AD-45113.1UM	328	CAAGACCGCCAAGGAUGCA	355	UGCAUCCUUGGCGGUCUUG	AD-46828.1	UMdTsdT	166-184
					AD-47342.1	FOME	166-184
AD-47369.1	DECAF	166-184
AD-45119.1UM	329	UGGGUGACCGAUGGCUUCA	356	UGAAGCCAUCGGUCACCCA	AD-46831.1	UMdTsdT	230-248
					AD-47346.1	FOME	230-248
AD-47373.1	DECAF	230-248
AD-45078.1UM	330	GGUGACCGAUGGCUUCAGU	357	ACUGAAGCCAUCGGUCACC	AD-46811.1	UMdTsdT	232-250
					AD-47349.1	FOME	232-250
AD-47376.1	DECAF	232-250
AD-45084.1UM	331	CCGAUGGCUUCAGUUCCCU	358	AGGGAACUGAAGCCAUCGG	AD-46815.1	UMdTsdT	237-255
					AD-47352.1	FOME	237-255
AD-47379.1	DECAF	237-255
AD-45090.1UM	332	GAUGGCUUCAGUUCCCUGA	359	UCAGGGAACUGAAGCCAUC	AD-46818.1	UMdTsdT	239-257
					AD-47355.1	FOME	239-257
AD-47382.1	DECAF	239-257
AD-45096.1UM	333	AUGGCUUCAGUUCCCUGAA	360	UUCAGGGAACUGAAGCCAU	AD-46820.1	UMdTsdT	240-258
					AD-47358.1	FOME	240-258
AD-47385.1	DECAF	240-258
AD-45102.1UM	334	UGGCUUCAGUUCCCUGAAA	361	UUUCAGGGAACUGAAGCCA	AD-46823.1	UMdTsdT	241-259
					AD-47335.1	FOME	241-259
AD-47362.1	DECAF	241-259
AD-45108.1UM	335	GCUUCAGUUCCCUGAAAGA	362	UCUUUCAGGGAACUGAAGC	AD-46826.1	UMdTsdT	243-261
					AD-47339.1	FOME	243-261
AD-47366.1	DECAF	243-261
AD-45120.1UM	336	CUGAAAGACUACUGGAGCA	363	UGCUCCAGUAGUCUUUCAG	AD-46829.1	UMdTsdT	254-272
					AD-47347.1	FOME	254-272
AD-47374.1	DECAF	254-272
AD-45127.1UM	337	AGCACCGUUAAGGACAAGU	364	ACUUGUCCUUAACGGUGCU	AD-46832.1	UMdTsdT	269-287
					AD-47353.1	FOME	269-287
AD-47380.1	DECAF	269-287
AD-45133.1UM	338	GCACCGUUAAGGACAAGUU	365	AACUUGUCCUUAACGGUGC	AD-46812.1	UMdTsdT	270-288
					AD-47356.1	FOME	270-288
AD-47383.1	DECAF	270-288
AD-45143.1UM	339	GCUGCCUGAGACCUCAAUA	366	UAUUGAGGUCUCAGGCAGC	AD-46816.1	UMdTsdT	338-356
					AD-47336.1	FOME	338-356
AD-47363.1	DECAF	338-356
AD-45148.1UM	340	CUGAGACCUCAAUACCCCA	367	UGGGGUAUUGAGGUCUCAG	AD-46819.1	UMdTsdT	343-361
					AD-47340.1	FOME	343-361
AD-47367.1	DECAF	343-361
AD-45153.1UM	341	UGAGACCUCAAUACCCCAA	368	UUGGGGUAUUGAGGUCUCA	AD-46821.1	UMdTsdT	344-362
					AD-47344.1	FOME	344-362
AD-47371.1	DECAF	344-362
AD-45158.1UM	342	CCUCAAUACCCCAAGUCCA	369	UGGACUUGGGGUAUUGAGG	AD-46824.1	UMdTsdT	349-367
					AD-47348.1	FOME	349-367
AD-47375.1	DECAF	349-367
AD-45128.1UM	343	GCUGCCCCUGUAGGUUGCU	370	AGCAACCUACAGGGGCAGC	AD-46827.1	UMdTsdT	414-432
AD-47354.1	FOME	414-432
AD-45139.1UM	344	AGGUUGCUUAAAAGGGACA	371	UGUCCCUUUUAAGCAACCU	AD-46830.1	UMdTsdT	425-443
					AD-47360.1	FOME	425-443
AD-47387.1	DECAF	425-443
AD-45144.1UM	345	UGCUUAAAAGGGACAGUAU	372	AUACUGUCCCUUUUAAGCA	AD-46833.1	UMdTsdT	429-447
					AD-47337.1	FOME	429-447
AD-47364.1	DECAF	429-447
AD-45149.1UM	346	GCUUAAAAGGGACAGUAUU	373	AAUACUGUCCCUUUUAAGC	AD-46813.1	UMdTsdT	430-448
					AD-47341.1	FOME	430-448
AD-47368.1	DECAF	430-448
AD-45154.1UM	347	CUGGACAAGAAGCUGCUAU	374	AUAGCAGCUUCUUGUCCAG	AD-46817.1	UMdTsdT	514-532
					AD-47345.1	FOME	514-532
AD-47372.1	DECAF	514-532
AD-45114.1UM	348	UCCCUGAAAGACUACUGGA	375	UCCAGUAGUCUUUCAGGGA	AD-47343.1	FOME	251-269
AD-45141.1UM	349	AGACUACUGGAGCACCGUU	376	AACGGUGCUCCAGUAGUCU	AD-47350.1	FOME	259-277
AD-45138.1UM	350	GGCUGCCUGAGACCUCAAU	377	AUUGAGGUCUCAGGCAGCC	AD-47359.1	FOME	337-355
AD-47386.1	DECAF	337-355
AD-45122.1UM	351	CAGGGCUGCCCCUGUAGGU	378	ACCUACAGGGGCAGCCCUG	AD-47351.1	FOME	410-428
AD-47378.1	DECAF	410-428
AD-45152.1UM	352	CCCUGUAGGUUGCUUAAAA	379	UUUUAAGCAACCUACAGGG	AD-47357.1	FOME	419-437
AD-47357.1	FOME	419-437

Таблица 7
Модифицированные последовательности киРНК ApoC3 (второй набор)
Название модифицированного дуплекса	SEQ ID NO:	Последовательность смысловой цепи 5΄-3΄	SEQ ID NO:	Последовательность антисмысловой цепи 5΄-3΄
AD-46822.1	380	UGCAGCCCCGGGUACUCCUdTsdT	453	AGGAGUACCCGGGGCUGCAdTsdT
AD-47334.1	381	UfgCfaGfcCfcCfgGfgUfaCfuCfcUfdTsdT	454	aGfgAfgUfaCfcCfgGfgGfcUfgCfadTsdT
AD-47361.1	382	uGcAGccccGGGuAcuccudTsdT	455	AGGAGuACCCGGGGCugcadTsdT
AD-46825.1	383	GCAGCCCCGGGUACUCCUUdTsdT	456	AAGGAGUACCCGGGGCUGCdTsdT
AD-47338.1	384	GfcAfgCfcCfcGfgGfuAfcUfcCfuUfdTsdT	457	aAfgGfaGfuAfcCfcGfgGfgCfuGfcdTsdT
AD-47365.1	385	GcAGccccGGGuAcuccuudTsdT	458	AAGGAGuACCCGGGGCugcdTsdT
AD-46828.1	386	CAAGACCGCCAAGGAUGCAdTsdT	459	UGCAUCCUUGGCGGUCUUGdTsdT
AD-47342.1	387	CfaAfgAfcCfgCfcAfaGfgAfuGfcAfdTsdT	460	uGfcAfuCfcUfuGfgCfgGfuCfuUfgdTsdT
AD-47369.1	388	cAAGAccGccAAGGAuGcAdTsdT	461	UGCAUCCuUGGCGGuCuugdTsdT
AD-46831.1	389	UGGGUGACCGAUGGCUUCAdTsdT	462	UGAAGCCAUCGGUCACCCAdTsdT
AD-47346.1	390	UfgGfgUfgAfcCfgAfuGfgCfuUfcAfdTsdT	463	uGfaAfgCfcAfuCfgGfuCfaCfcCfadTsdT
AD-47373.1	391	uGGGuGAccGAuGGcuucAdTsdT	464	UGAAGCCAUCGGuCACccadTsdT
AD-46811.1	392	GGUGACCGAUGGCUUCAGUdTsdT	465	ACUGAAGCCAUCGGUCACCdTsdT
AD-47349.1	393	GfgUfgAfcCfgAfuGfgCfuUfcAfgUfdTsdT	466	aCfuGfaAfgCfcAfuCfgGfuCfaCfcdTsdT
AD-47376.1	394	GGuGAccGAuGGcuucAGudTsdT	467	ACuGAAGCCAuCGGuCaccdTsdT
AD-46815.1	395	CCGAUGGCUUCAGUUCCCUdTsdT	468	AGGGAACUGAAGCCAUCGGdTsdT
AD-47352.1	396	CfcGfaUfgGfcUfuCfaGfuUfcCfcUfdTsdT	469	aGfgGfaAfcUfgAfaGfcCfaUfcGfgdTsdT
AD-47379.1	397	ccGAuGGcuucAGuucccudTsdT	470	AGGGAACuGAAGCCAucggdTsdT
AD-46818.1	398	GAUGGCUUCAGUUCCCUGAdTsdT	471	UCAGGGAACUGAAGCCAUCdTsdT
AD-47355.1	399	GfaUfgGfcUfuCfaGfuUfcCfcUfgAfdTsdT	472	uCfaGfgGfaAfcUfgAfaGfcCfaUfcdTsdT
AD-47382.1	400	GAuGGcuucAGuucccuGAdTsdT	473	UCAGGGAACuGAAGCCaucdTsdT
AD-46820.1	401	AUGGCUUCAGUUCCCUGAAdTsdT	474	UUCAGGGAACUGAAGCCAUdTsdT
AD-47358.1	402	AfuGfgCfuUfcAfgUfuCfcCfuGfaAfdTsdT	475	uUfcAfgGfgAfaCfuGfaAfgCfcAfudTsdT
AD-47385.1	403	AuGGcuucAGuucccuGAAdTsdT	476	UUCAGGGAACuGAAGCcaudTsdT
AD-46823.1	404	UGGCUUCAGUUCCCUGAAAdTsdT	477	UUUCAGGGAACUGAAGCCAdTsdT
AD-47335.1	405	UfgGfcUfuCfaGfuUfcCfcUfgAfaAfdTsdT	478	uUfuCfaGfgGfaAfcUfgAfaGfcCfadTsdT
AD-47362.1	406	uGGcuucAGuucccuGAAAdTsdT	479	UuUCAGGGAACuGAAGccadTsdT
AD-46826.1	407	GCUUCAGUUCCCUGAAAGAdTsdT	480	UCUUUCAGGGAACUGAAGCdTsdT
AD-47339.1	408	GfcUfuCfaGfuUfcCfcUfgAfaAfgAfdTsdT	481	uCfuUfuCfaGfgGfaAfcUfgAfaGfcdTsdT
AD-47366.1	409	GcuucAGuucccuGAAAGAdTsdT	482	UCuUUCAGGGAACuGAagcdTsdT
AD-46829.1	410	CUGAAAGACUACUGGAGCAdTsdT	483	UGCUCCAGUAGUCUUUCAGdTsdT
AD-47347.1	411	CfuGfaAfaGfaCfuAfcUfgGfaGfcAfdTsdT	484	uGfcUfcCfaGfuAfgUfcUfuUfcAfgdTsdT
AD-47374.1	412	cuGAAAGAcuAcuGGAGcAdTsdT	485	UGCUCCAGuAGuCuuucagdTsdT
AD-46832.1	413	AGCACCGUUAAGGACAAGUdTsdT	486	ACUUGUCCUUAACGGUGCUdTsdT
AD-47353.1	414	AfgCfaCfcGfuUfaAfgGfaCfaAfgUfdTsdT	487	aCfuUfgUfcCfuUfaAfcGfgUfgCfudTsdT
AD-47380.1	415	AGcAccGuuAAGGAcAAGudTsdT	488	ACuUGUCCuUAACGGugcudTsdT
AD-46812.1	416	GCACCGUUAAGGACAAGUUdTsdT	489	AACUUGUCCUUAACGGUGCdTsdT
AD-47356.1	417	GfcAfcCfgUfuAfaGfgAfcAfaGfuUfdTsdT	490	aAfcUfuGfuCfcUfuAfaCfgGfuGfcdTsdT
AD-47383.1	418	GcAccGuuAAGGAcAAGuudTsdT	491	AACuUGUCCuuAACGGugcdTsdT
AD-46816.1	419	GCUGCCUGAGACCUCAAUAdTsdT	492	UAUUGAGGUCUCAGGCAGCdTsdT
AD-47336.1	420	GfcUfgCfcUfgAfgAfcCfuCfaAfuAfdTsdT	493	uAfuUfgAfgGfuCfuCfaGfgCfaGfcdTsdT
AD-47363.1	421	GcuGccuGAGAccucAAuAdTsdT	494	UAuUGAGGUCuCAGGCagcdTsdT
AD-46819.1	422	CUGAGACCUCAAUACCCCAdTsdT	495	UGGGGUAUUGAGGUCUCAGdTsdT
AD-47340.1	423	CfuGfaGfaCfcUfcAfaUfaCfcCfcAfdTsdT	496	uGfgGfgUfaUfuGfaGfgUfcUfcAfgdTsdT
AD-47367.1	424	cuGAGAccucAAuAccccAdTsdT	497	UGGGGuAuUGAGGuCucagdTsdT
AD-46821.1	425	UGAGACCUCAAUACCCCAAdTsdT	498	UUGGGGUAUUGAGGUCUCAdTsdT
AD-47344.1	426	UfgAfgAfcCfuCfaAfuAfcCfcCfaAfdTsdT	499	uUfgGfgGfuAfuUfgAfgGfuCfuCfadTsdT
AD-47371.1	427	uGAGAccucAAuAccccAAdTsdT	500	UuGGGGuAuUGAGGuCucadTsdT
AD-46824.1	428	CCUCAAUACCCCAAGUCCAdTsdT	501	UGGACUUGGGGUAUUGAGGdTsdT
AD-47348.1	429	CfcUfcAfaUfaCfcCfcAfaGfuCfcAfdTsdT	502	uGfgAfcUfuGfgGfgUfaUfuGfaGfgdTsdT
AD-47375.1	430	ccucAAuAccccAAGuccAdTsdT	503	UGGACuUGGGGuAuuGaggdTsdT
AD-46827.1	431	GCUGCCCCUGUAGGUUGCUdTsdT	504	AGCAACCUACAGGGGCAGCdTsdT
AD-47354.1	432	GfcUfgCfcCfcUfgUfaGfgUfuGfcUfdTsdT	505	aGfcAfaCfcUfaCfaGfgGfgCfaGfcdTsdT
AD-46830.1	433	AGGUUGCUUAAAAGGGACAdTsdT	506	UGUCCCUUUUAAGCAACCUdTsdT
AD-47360.1	434	AfgGfuUfgCfuUfaAfaAfgGfgAfcAfdTsdT	507	uGfuCfcCfuUfuUfaAfgCfaAfcCfudTsdT
AD-47387.1	435	AGGuuGcuuAAAAGGGAcAdTsdT	508	UGUCCCuUuUAAGCAAccudTsdT
AD-46833.1	436	UGCUUAAAAGGGACAGUAUdTsdT	509	AUACUGUCCCUUUUAAGCAdTsdT
AD-47337.1	437	UfgCfuUfaAfaAfgGfgAfcAfgUfaUfdTsdT	510	aUfaCfuGfuCfcCfuUfuUfaAfgCfadTsdT
AD-47364.1	438	uGcuuAAAAGGGAcAGuAudTsdT	511	AuACuGUCCCuuuuAAgcadTsdT
AD-46813.1	439	GCUUAAAAGGGACAGUAUUdTsdT	512	AAUACUGUCCCUUUUAAGCdTsdT
AD-47341.1	440	GfcUfuAfaAfaGfgGfaCfaGfuAfuUfdTsdT	513	aAfuAfcUfgUfcCfcUfuUfuAfaGfcdTsdT
AD-47368.1	441	GcuuAAAAGGGAcAGuAuudTsdT	514	AAuACuGUCCCuuuuAagcdTsdT
AD-46817.1	442	CUGGACAAGAAGCUGCUAUdTsdT	515	AUAGCAGCUUCUUGUCCAGdTsdT
AD-47345.1	443	CfuGfgAfcAfaGfaAfgCfuGfcUfaUfdTsdT	516	aUfaGfcAfgCfuUfcUfuGfuCfcAfgdTsdT
AD-47372.1	444	cuGGAcAAGAAGcuGcuAudTsdT	517	AuAGCAGCuUCuuGuCcagdTsdT
AD-47343.1	445	UfcCfcUfgAfaAfgAfcUfaCfuGfgAfdTsdT	518	uCfcAfgUfaGfuCfuUfuCfaGfgGfadTsdT
AD-47350.1	446	AfgAfcUfaCfuGfgAfgCfaCfcGfuUfdTsdT	519	aAfcGfgUfgCfuCfcAfgUfaGfuCfudTsdT
AD-47359.1	447	GfgCfuGfcCfuGfaGfaCfcUfcAfaUfdTsdT	520	aUfuGfaGfgUfcUfcAfgGfcAfgCfcdTsdT
AD-47386.1	448	GGcuGccuGAGAccucAAudTsdT	521	AuUGAGGUCuCAGGCAgccdTsdT
AD-47351.1	449	CfaGfgGfcUfgCfcCfcUfgUfaGfgUfdTsdT	522	aCfcUfaCfaGfgGfgCfaGfcCfcUfgdTsdT
AD-47378.1	450	cAGGGcuGccccuGuAGGudTsdT	523	ACCuACAGGGGCAGCCcugdTsdT
AD-47357.1	451	CfcCfuGfuAfgGfuUfgCfuUfaAfaAfdTsdT	524	uUfuUfaAfgCfaAfcCfuAfcAfgGfgdTsdT
AD-47357.1	452	CfcCfuGfuAfgGfuUfgCfuUfaAfaAfdTsdT	525	uUfuUfaAfgCfaAfcCfuAfcAfgGfgdTsdT

Таблица 8
Активность модифицированных киРНК ApoC3 (второй набор) в клетках
Название дуплекса	10 нМ	0,1 нМ	10 нМ SD	0,1 нМ SD
AD-46822.1	0,15	0,31	0,00	0,00
AD-47334.1	0,41	0,82	0,12	0,10
AD-47361.1	0,89	1,00	0,19	0,03
AD-46825.1	0,13	0,26	0,01	0,01
AD-47338.1	0,38	0,73	0,12	0,12
AD-47365.1	0,74	0,93	0,01	0,07
AD-46828.1	0,15	0,57	0,00	0,04
AD-47342.1	0,38	0,91	0,26	0,06
AD-47369.1	1,10	1,26	0,18	0,29
AD-46831.1	0,01	0,37	0,00	0,05
AD-47346.1	0,57	0,95	0,17	0,08
AD-47373.1	0,80	1,06	0,06	0,15
AD-46811.1	0,03	0,31	0,01	0,04
AD-47349.1	0,03	0,29	0,02	0,18
AD-47376.1	0,38	0,95	0,15	0,01
AD-46815.1	0,06	0,37	0,00	0,00
AD-47352.1	0,04	0,35	0,04	0,23
AD-47379.1	0,81	1,03	0,12	0,05
AD-46818.1	0,03	0,26	0,00	0,03
AD-47355.1	0,23	0,60	0,14	0,08
AD-47382.1	0,40	0,81	0,11	0,09
AD-46820.1	0,03	0,38	0,00	0,02
AD-47358.1	0,05	0,45	0,03	0,31
AD-47385.1	0,53	0,84	0,12	0,19
AD-46823.1	0,02	0,22	0,00	0,04
AD-47335.1	0,15	0,70	0,05	0,00
AD-47362.1	0,66	1,07	0,01	0,09
AD-46826.1	0,02	0,18	0,00	0,02
AD-47339.1	0,19	0,62	0,12	0,04
AD-47366.1	0,60	0,82	0,02	0,09
AD-46829.1	0,02	0,22	0,01	0,01
AD-47347.1	0,16	0,66	0,14	0,11
AD-47374.1	0,90	1,15	0,03	0,03
AD-46832.1	0,09	0,56	0,02	0,01
AD-47353.1	0,21	0,65	0,04	0,02
AD-47380.1	0,66	1,02	0,07	0,02
AD-46812.1	0,01	0,10	0,00	0,00
AD-47356.1	0,02	0,13	0,01	0,13
AD-47383.1	0,03	0,21	0,02	0,10
AD-46816.1	0,04	0,53	0,00	0,01
AD-47336.1	0,10	0,37	0,06	0,14
AD-47363.1	0,54	0,88	0,03	0,14
AD-46819.1	0,06	0,49	0,01	0,02
AD-47340.1	0,20	0,72	0,18	0,21
AD-47367.1	0,99	1,10	0,17	0,07
AD-46821.1	0,19	0,67	0,01	0,01
AD-47344.1	0,48	0,90	0,16	0,06
AD-47371.1	1,01	0,92	0,14	0,12
AD-46824.1	0,02	0,21	0,00	0,02
AD-47348.1	0,19	0,66	0,20	0,24
AD-47375.1	0,83	0,94	0,06	0,00
AD-46827.1	0,05	0,54	0,01	0,06
AD-47354.1	0,23	0,79	0,15	0,19
AD-46830.1	0,64	1,01	0,03	0,00
AD-47360.1	0,76	1,22	0,09	0,22
AD-47387.1	0,90	0,84	0,04	0,09
AD-46833.1	0,06	0,46	0,01	0,05
AD-47337.1	0,05	0,23	0,03	0,16
AD-47364.1	0,52	0,79	0,10	0,02
AD-46813.1	0,02	0,27	0,00	0,01
AD-47341.1	0,04	0,17	0,02	0,11
AD-47368.1	0,46	0,56	0,02	0,13
AD-46817.1	0,10	0,29	0,01	0,04
AD-47345.1	0,27	0,58	0,17	0,19
AD-47372.1	0,34	0,44	0,17	0,04
AD-47343.1	0,21	0,66	0,15	0,18
AD-47350.1	0,12	0,58	0,05	0,31
AD-47359.1	0,82	1,04	0,10	0,18
AD-47386.1	0,88	1,28	0,15	0,21
AD-47351.1	0,48	1,01	0,18	0,14
AD-47378.1	1,10	1,08	0,09	0,03
AD-47357.1	0,09	0,28	0,02	0,25
AD-47357.1	0,09	0,28	0,02	0,25

Таблица 9
Название дуплексов киРНК APOC3 (третий набор) и примеры модификаций модифицированных киРНК
Название дуплекса	Химия
AD-45101.1end	Endolight
AD-45159.1	Fluorolight
AD-46822.1	UMdTsdT
AD-47334.1	FOME
AD-47361.1	DECAF
AD-45107.1end	Endolight
AD-45123.1	Fluorolight
AD-46825.1	UMdTsdT
AD-47338.1	FOME
AD-47365.1	DECAF
AD-45113.1end	Endolight
AD-45129.1	Fluorolight
AD-46828.1	UMdTsdT
AD-47342.1	FOME
AD-47369.1	DECAF
AD-45119.1end	Endolight
AD-45135.1	Fluorolight
AD-46831.1	UMdTsdT
AD-47346.1	FOME
AD-47373.1	DECAF
AD-45078.1end	Endolight
AD-45140.1	Fluorolight
AD-46811.1	UMdTsdT
AD-47349.1	FOME
AD-47376.1	DECAF
AD-45084.1end	Endolight
AD-45145.1	Fluorolight
AD-46815.1	UMdTsdT
AD-47352.1	FOME
AD-47379.1	DECAF
AD-45090.1end	Endolight
AD-45150.1	Fluorolight
AD-46818.1	UMdTsdT
AD-47355.1	FOME
AD-47382.1	DECAF
AD-45096.1end	Endolight
AD-45155.1	Fluorolight
AD-46820.1	UMdTsdT
AD-47358.1	FOME
AD-47385.1	DECAF
AD-45102.1end	Endolight
AD-45160.1	Fluorolight
AD-46823.1	UMdTsdT
AD-47335.1	FOME
AD-47362.1	DECAF
AD-45108.1end	Endolight
AD-45124.1	Fluorolight
AD-46826.1	UMdTsdT
AD-47339.1	FOME
AD-47366.1	DECAF
AD-45120.1end	Endolight
AD-45136.1	Fluorolight
AD-46829.1	UMdTsdT
AD-47347.1	FOME
AD-47374.1	DECAF
AD-45127.1end	Endolight
AD-45146.1	Fluorolight
AD-46832.1	UMdTsdT
AD-47353.1	FOME
AD-47380.1	DECAF
AD-45133.1end	Endolight
AD-45151.1	Fluorolight
AD-46812.1	UMdTsdT
AD-47356.1	FOME
AD-47383.1	DECAF
AD-45143.1end	Endolight
AD-45161.1	Fluorolight
AD-46816.1	UMdTsdT
AD-47336.1	FOME
AD-47363.1	DECAF
AD-45148.1end	Endolight
AD-45125.1	Fluorolight
AD-46819.1	UMdTsdT
AD-47340.1	FOME
AD-47367.1	DECAF
AD-45153.1end	Endolight
AD-45131.1	Fluorolight
AD-46821.1	UMdTsdT
AD-47344.1	FOME
AD-47371.1	DECAF
AD-45158.1end	Endolight
AD-45137.1	Fluorolight
AD-46824.1	UMdTsdT
AD-47348.1	FOME
AD-47375.1	DECAF
AD-45128.1end	Endolight
AD-45147.1	Fluorolight
AD-46827.1	UMdTsdT
AD-47354.1	FOME
AD-45139.1end	Endolight
AD-45157.1	Fluorolight
AD-46830.1	UMdTsdT
AD-47360.1	FOME
AD-47387.1	DECAF
AD-45144.1end	Endolight
AD-45162.1	Fluorolight
AD-46833.1	UMdTsdT
AD-47337.1	FOME
AD-47364.1	DECAF
AD-45149.1end	Endolight
AD-45126.1	Fluorolight
AD-46813.1	UMdTsdT
AD-47341.1	FOME
AD-47368.1	DECAF
AD-45154.1end	Endolight
AD-45132.1	Fluorolight
AD-46817.1	UMdTsdT
AD-47345.1	FOME
AD-47372.1	DECAF
AD-45114.1end	Endolight
AD-45130.1	Fluorolight
AD-47343.1	FOME
AD-45141.1	Fluorolight
AD-45121.1end	Endolight
AD-47350.1	FOME
AD-45138.1end	Endolight
AD-47359.1	Fluorolight
AD-47386.1	DECAF
AD-45122.1end	Endolight
AD-47351.1	FOMe
AD-47378.1	DECAF
AD-45152.1	Fluorolight
AD-47357.1	FOMe
AD-47384.1	DECAF

Таблица 10
Последовательности модифицированных киРНК ApoC3 (третий набор)
Название дуплекса	SEQ ID NO:	Смысловая последовательность	SEQ ID NO:	Антисмысловая последовательность
AD-45101.1end	526	uGcAGccccGGGuAcuccudTsdT	650	AGGAGuACCCGGGGCUGcAdTsdT
AD-45159.1	527	UfGCfAGCfCfCfCfGGGUfACfUfCfCfUfdTsdT	651	AGGAGUfACCCGGGGCUGCfAdTsdT
AD-46822.1	528	UGCAGCCCCGGGUACUCCUdTsdT	652	AGGAGUACCCGGGGCUGCAdTsdT
AD-47334.1	529	UfgCfaGfcCfcCfgGfgUfaCfuCfcUfdTsdT	653	aGfgAfgUfaCfcCfgGfgGfcUfgCfadTsdT
AD-47361.1	530	uGcAGccccGGGuAcuccudTsdT	654	AGGAGuACCCGGGGCugcadTsdT
AD-45107.1end	531	GcAGccccGGGuAcuccuudTsdT	655	AAGGAGuACCCGGGGCUGCdTsdT
AD-45123.1	532	GCfAGCfCfCfCfGGGUfACfUfCfCfUfUfdTsdT	656	AAGGAGUfACCCGGGGCUGCdTsdT
AD-46825.1	533	GCAGCCCCGGGUACUCCUUdTsdT	657	AAGGAGUACCCGGGGCUGCdTsdT
AD-47338.1	534	GfcAfgCfcCfcGfgGfuAfcUfcCfuUfdTsdT	658	aAfgGfaGfuAfcCfcGfgGfgCfuGfcdTsdT
AD-47365.1	535	GcAGccccGGGuAcuccuudTsdT	659	AAGGAGuACCCGGGGCugcdTsdT
AD-45113.1end	536	cAAGAccGccAAGGAuGcAdTsdT	660	UGcAUCCUUGGCGGUCUUGdTsdT
AD-45129.1	537	CfAAGACfCfGCfCfAAGGAUfGCfAdTsdT	661	UGCfAUCCUUGGCGGUCUUGdTsdT
AD-46828.1	538	CAAGACCGCCAAGGAUGCAdTsdT	662	UGCAUCCUUGGCGGUCUUGdTsdT
AD-47342.1	539	CfaAfgAfcCfgCfcAfaGfgAfuGfcAfdTsdT	663	uGfcAfuCfcUfuGfgCfgGfuCfuUfgdTsdT
AD-47369.1	540	cAAGAccGccAAGGAuGcAdTsdT	664	UGCAUCCuUGGCGGuCuugdTsdT
AD-45119.1end	541	uGGGuGAccGAuGGcuucAdTsdT	665	UGAAGCcAUCGGUcACCcAdTsdT
AD-45135.1	542	UfGGGUfGACfCfGAUfGGCfUfUfCfAdTsdT	666	UGAAGCCfAUCGGUCfACCCfAdTsdT
AD-46831.1	543	UGGGUGACCGAUGGCUUCAdTsdT	667	UGAAGCCAUCGGUCACCCAdTsdT
AD-47346.1	544	UfgGfgUfgAfcCfgAfuGfgCfuUfcAfdTsdT	668	uGfaAfgCfcAfuCfgGfuCfaCfcCfadTsdT
AD-47373.1	545	uGGGuGAccGAuGGcuucAdTsdT	669	UGAAGCCAUCGGuCACccadTsdT
AD-45078.1end	546	GGuGAccGAuGGcuucAGudTsdT	670	ACUGAAGCcAUCGGUcACCdTsdT
AD-45140.1	547	GGUfGACfCfGAUfGGCfUfUfCfAGUfdTsdT	671	ACUGAAGCCfAUCGGUCfACCdTsdT
AD-46811.1	548	GGUGACCGAUGGCUUCAGUdTsdT	672	ACUGAAGCCAUCGGUCACCdTsdT
AD-47349.1	549	GfgUfgAfcCfgAfuGfgCfuUfcAfgUfdTsdT	673	aCfuGfaAfgCfcAfuCfgGfuCfaCfcdTsdT
AD-47376.1	550	GGuGAccGAuGGcuucAGudTsdT	674	ACuGAAGCCAuCGGuCaccdTsdT
AD-45084.1end	551	ccGAuGGcuucAGuucccudTsdT	675	AGGGAACUGAAGCcAUCGGdTsdT
AD-45145.1	552	CfCfGAUfGGCfUfUfCfAGUfUfCfCfCfUfdTsdT	676	AGGGAACUGAAGCCfAUCGGdTsdT
AD-46815.1	553	CCGAUGGCUUCAGUUCCCUdTsdT	677	AGGGAACUGAAGCCAUCGGdTsdT
AD-47352.1	554	CfcGfaUfgGfcUfuCfaGfuUfcCfcUfdTsdT	678	aGfgGfaAfcUfgAfaGfcCfaUfcGfgdTsdT
AD-47379.1	555	ccGAuGGcuucAGuucccudTsdT	679	AGGGAACuGAAGCCAucggdTsdT
AD-45090.1end	556	GAuGGcuucAGuucccuGAdTsdT	680	UcAGGGAACUGAAGCcAUCdTsdT
AD-45150.1	557	GAUfGGCfUfUfCfAGUfUfCfCfCfUfGAdTsdT	681	UCfAGGGAACUGAAGCCfAUCdTsdT
AD-46818.1	558	GAUGGCUUCAGUUCCCUGAdTsdT	682	UCAGGGAACUGAAGCCAUCdTsdT
AD-47355.1	559	GfaUfgGfcUfuCfaGfuUfcCfcUfgAfdTsdT	683	uCfaGfgGfaAfcUfgAfaGfcCfaUfcdTsdT
AD-47382.1	560	GAuGGcuucAGuucccuGAdTsdT	684	UCAGGGAACuGAAGCCaucdTsdT
AD-45096.1end	561	AuGGcuucAGuucccuGAAdTsdT	685	UUcAGGGAACUGAAGCcAUdTsdT
AD-45155.1	562	AUfGGCfUfUfCfAGUfUfCfCfCfUfGAAdTsdT	686	UUCfAGGGAACUGAAGCCfAUdTsdT
AD-46820.1	563	AUGGCUUCAGUUCCCUGAAdTsdT	687	UUCAGGGAACUGAAGCCAUdTsdT
AD-47358.1	564	AfuGfgCfuUfcAfgUfuCfcCfuGfaAfdTsdT	688	uUfcAfgGfgAfaCfuGfaAfgCfcAfudTsdT
AD-47385.1	565	AuGGcuucAGuucccuGAAdTsdT	689	UUCAGGGAACuGAAGCcaudTsdT
AD-45102.1end	566	uGGcuucAGuucccuGAAAdTsdT	690	UUUcAGGGAACUGAAGCcAdTsdT
AD-45160.1	567	UfGGCfUfUfCfAGUfUfCfCfCfUfGAAAdTsdT	691	UUUCfAGGGAACUGAAGCCfAdTsdT
AD-46823.1	568	UGGCUUCAGUUCCCUGAAAdTsdT	692	UUUCAGGGAACUGAAGCCAdTsdT
AD-47335.1	569	UfgGfcUfuCfaGfuUfcCfcUfgAfaAfdTsdT	693	uUfuCfaGfgGfaAfcUfgAfaGfcCfadTsdT
AD-47362.1	570	uGGcuucAGuucccuGAAAdTsdT	694	UuUCAGGGAACuGAAGccadTsdT
AD-45108.1end	571	GcuucAGuucccuGAAAGAdTsdT	695	UCUUUcAGGGAACUGAAGCdTsdT
AD-45124.1	572	GCfUfUfCfAGUfUfCfCfCfUfGAAAGAdTsdT	696	UCUUUCfAGGGAACUGAAGCdTsdT
AD-46826.1	573	GCUUCAGUUCCCUGAAAGAdTsdT	697	UCUUUCAGGGAACUGAAGCdTsdT
AD-47339.1	574	GfcUfuCfaGfuUfcCfcUfgAfaAfgAfdTsdT	698	uCfuUfuCfaGfgGfaAfcUfgAfaGfcdTsdT
AD-47366.1	575	GcuucAGuucccuGAAAGAdTsdT	699	UCuUUCAGGGAACuGAagcdTsdT
AD-45120.1end	576	cuGAAAGAcuAcuGGAGcAdTsdT	700	UGCUCcAGuAGUCUUUcAGdTsdT
AD-45136.1	577	CfUfGAAAGACfUfACfUfGGAGCfAdTsdT	701	UGCUCCfAGUfAGUCUUUCfAGdTsdT
AD-46829.1	578	CUGAAAGACUACUGGAGCAdTsdT	702	UGCUCCAGUAGUCUUUCAGdTsdT
AD-47347.1	579	CfuGfaAfaGfaCfuAfcUfgGfaGfcAfdTsdT	703	uGfcUfcCfaGfuAfgUfcUfuUfcAfgdTsdT
AD-47374.1	580	cuGAAAGAcuAcuGGAGcAdTsdT	704	UGCUCCAGuAGuCuuucagdTsdT
AD-45127.1end	581	AGcAccGuuAAGGAcAAGudTsdT	705	ACUUGUCCUuAACGGUGCUdTsdT
AD-45146.1	582	AGCfACfCfGUfUfAAGGACfAAGUfdTsdT	706	ACUUGUCCUUfAACGGUGCUdTsdT
AD-46832.1	583	AGCACCGUUAAGGACAAGUdTsdT	707	ACUUGUCCUUAACGGUGCUdTsdT
AD-47353.1	584	AfgCfaCfcGfuUfaAfgGfaCfaAfgUfdTsdT	708	aCfuUfgUfcCfuUfaAfcGfgUfgCfudTsdT
AD-47380.1	585	AGcAccGuuAAGGAcAAGudTsdT	709	ACuUGUCCuUAACGGugcudTsdT
AD-45133.1end	586	GcAccGuuAAGGAcAAGuudTsdT	710	AACUUGUCCUuAACGGUGCdTsdT
AD-45151.1	587	GCfACfCfGUfUfAAGGACfAAGUfUfdTsdT	711	AACUUGUCCUUfAACGGUGCdTsdT
AD-46812.1	588	GCACCGUUAAGGACAAGUUdTsdT	712	AACUUGUCCUUAACGGUGCdTsdT
AD-47356.1	589	GfcAfcCfgUfuAfaGfgAfcAfaGfuUfdTsdT	713	aAfcUfuGfuCfcUfuAfaCfgGfuGfcdTsdT
AD-47383.1	590	GcAccGuuAAGGAcAAGuudTsdT	714	AACuUGUCCuuAACGGugcdTsdT
AD-45143.1end	591	GcuGccuGAGAccucAAuAdTsdT	715	uAUUGAGGUCUcAGGcAGCdTsdT
AD-45161.1	592	GCfUfGCfCfUfGAGACfCfUfCfAAUfAdTsdT	716	UfAUUGAGGUCUCfAGGCfAGCdTsdT
AD-46816.1	593	GCUGCCUGAGACCUCAAUAdTsdT	717	UAUUGAGGUCUCAGGCAGCdTsdT
AD-47336.1	594	GfcUfgCfcUfgAfgAfcCfuCfaAfuAfdTsdT	718	uAfuUfgAfgGfuCfuCfaGfgCfaGfcdTsdT
AD-47363.1	595	GcuGccuGAGAccucAAuAdTsdT	719	UAuUGAGGUCuCAGGCagcdTsdT
AD-45148.1end	596	cuGAGAccucAAuAccccAdTsdT	720	UGGGGuAUUGAGGUCUcAGdTsdT
AD-45125.1	597	CfUfGAGACfCfUfCfAAUfACfCfCfCfAdTsdT	721	UGGGGUfAUUGAGGUCUCfAGdTsdT
AD-46819.1	598	CUGAGACCUCAAUACCCCAdTsdT	722	UGGGGUAUUGAGGUCUCAGdTsdT
AD-47340.1	599	CfuGfaGfaCfcUfcAfaUfaCfcCfcAfdTsdT	723	uGfgGfgUfaUfuGfaGfgUfcUfcAfgdTsdT
AD-47367.1	600	cuGAGAccucAAuAccccAdTsdT	724	UGGGGuAuUGAGGuCucagdTsdT
AD-45153.1end	601	uGAGAccucAAuAccccAAdTsdT	725	UUGGGGuAUUGAGGUCUcAdTsdT
AD-45131.1	602	UfGAGACfCfUfCfAAUfACfCfCfCfAAdTsdT	726	UUGGGGUfAUUGAGGUCUCfAdTsdT
AD-46821.1	603	UGAGACCUCAAUACCCCAAdTsdT	727	UUGGGGUAUUGAGGUCUCAdTsdT
AD-47344.1	604	UfgAfgAfcCfuCfaAfuAfcCfcCfaAfdTsdT	728	uUfgGfgGfuAfuUfgAfgGfuCfuCfadTsdT
AD-47371.1	605	uGAGAccucAAuAccccAAdTsdT	729	UuGGGGuAuUGAGGuCucadTsdT
AD-45158.1end	606	ccucAAuAccccAAGuccAdTsdT	730	UGGACUUGGGGuAUUGAGGdTsdT
AD-45137.1	607	CfCfUfCfAAUfACfCfCfCfAAGUfCfCfAdTsdT	731	UGGACUUGGGGUfAUUGAGGdTsdT
AD-46824.1	608	CCUCAAUACCCCAAGUCCAdTsdT	732	UGGACUUGGGGUAUUGAGGdTsdT
AD-47348.1	609	CfcUfcAfaUfaCfcCfcAfaGfuCfcAfdTsdT	733	uGfgAfcUfuGfgGfgUfaUfuGfaGfgdTsdT
AD-47375.1	610	ccucAAuAccccAAGuccAdTsdT	734	UGGACuUGGGGuAuuGaggdTsdT
AD-45128.1end	611	GcuGccccuGuAGGuuGcudTsdT	735	AGcAACCuAcAGGGGcAGCdTsdT
AD-45147.1	612	GCfUfGCfCfCfCfUfGUfAGGUfUfGCfUfdTsdT	736	AGCfAACCUfACfAGGGGCfAGCdTsdT
AD-46827.1	613	GCUGCCCCUGUAGGUUGCUdTsdT	737	AGCAACCUACAGGGGCAGCdTsdT
AD-47354.1	614	GfcUfgCfcCfcUfgUfaGfgUfuGfcUfdTsdT	738	aGfcAfaCfcUfaCfaGfgGfgCfaGfcdTsdT
AD-45139.1end	615	AGGuuGcuuAAAAGGGAcAdTsdT	739	UGUCCCUUUuAAGcAACCUdTsdT
AD-45157.1	616	AGGUfUfGCfUfUfAAAAGGGACfAdTsdT	740	UGUCCCUUUUfAAGCfAACCUdTsdT
AD-46830.1	617	AGGUUGCUUAAAAGGGACAdTsdT	741	UGUCCCUUUUAAGCAACCUdTsdT
AD-47360.1	618	AfgGfuUfgCfuUfaAfaAfgGfgAfcAfdTsdT	742	uGfuCfcCfuUfuUfaAfgCfaAfcCfudTsdT
AD-47387.1	619	AGGuuGcuuAAAAGGGAcAdTsdT	743	UGUCCCuUuUAAGCAAccudTsdT
AD-45144.1end	620	uGcuuAAAAGGGAcAGuAudTsdT	744	AuACUGUCCCUUUuAAGcAdTsdT
AD-45162.1	621	UfGCfUfUfAAAAGGGACfAGUfAUfdTsdT	745	AUfACUGUCCCUUUUfAAGCfAdTsdT
AD-46833.1	622	UGCUUAAAAGGGACAGUAUdTsdT	746	AUACUGUCCCUUUUAAGCAdTsdT
AD-47337.1	623	UfgCfuUfaAfaAfgGfgAfcAfgUfaUfdTsdT	747	aUfaCfuGfuCfcCfuUfuUfaAfgCfadTsdT
AD-47364.1	624	uGcuuAAAAGGGAcAGuAudTsdT	748	AuACuGUCCCuuuuAAgcadTsdT
AD-45149.1end	625	GcuuAAAAGGGAcAGuAuudTsdT	749	AAuACUGUCCCUUUuAAGCdTsdT
AD-45126.1	626	GCfUfUfAAAAGGGACfAGUfAUfUfdTsdT	750	AAUfACUGUCCCUUUUfAAGCdTsdT
AD-46813.1	627	GCUUAAAAGGGACAGUAUUdTsdT	751	AAUACUGUCCCUUUUAAGCdTsdT
AD-47341.1	628	GfcUfuAfaAfaGfgGfaCfaGfuAfuUfdTsdT	752	aAfuAfcUfgUfcCfcUfuUfuAfaGfcdTsdT
AD-47368.1	629	GcuuAAAAGGGAcAGuAuudTsdT	753	AAuACuGUCCCuuuuAagcdTsdT
AD-45154.1end	630	cuGGAcAAGAAGcuGcuAudTsdT	754	AuAGcAGCUUCUUGUCcAGdTsdT
AD-45132.1	631	CfUfGGACfAAGAAGCfUfGCfUfAUfdTsdT	755	AUfAGCfAGCUUCUUGUCCfAGdTsdT
AD-46817.1	632	CUGGACAAGAAGCUGCUAUdTsdT	756	AUAGCAGCUUCUUGUCCAGdTsdT
AD-47345.1	633	CfuGfgAfcAfaGfaAfgCfuGfcUfaUfdTsdT	757	aUfaGfcAfgCfuUfcUfuGfuCfcAfgdTsdT
AD-47372.1	634	cuGGAcAAGAAGcuGcuAudTsdT	758	AuAGCAGCuUCuuGuCcagdTsdT
AD-45114.1end	635	ucccuGAAAGAcuAcuGGAdTsdT	759	UCcAGuAGUCUUUcAGGGAdTsdT
AD-45130.1	636	UfCfCfCfUfGAAAGACfUfACfUfGGAdTsdT	760	UCCfAGUfAGUCUUUCfAGGGAdTsdT
AD-47343.1	637	UfcCfcUfgAfaAfgAfcUfaCfuGfgAfdTsdT	761	uCfcAfgUfaGfuCfuUfuCfaGfgGfadTsdT
AD-45141.1	638	AGACfUfACfUfGGAGCfACfCfGUfUfdTsdT	762	AACGGUGCUCCfAGUfAGUCUdTsdT
AD-45121.1end	639	AGAcuAcuGGAGcAccGuudTsdT	763	AACGGUGCUCcAGuAGUCUdTsdT
AD-47350.1	640	AfgAfcUfaCfuGfgAfgCfaCfcGfuUfdTsdT	764	aAfcGfgUfgCfuCfcAfgUfaGfuCfudTsdT
AD-45138.1end	641	GGcuGccuGAGAccucAAudTsdT	765	AUUGAGGUCUcAGGcAGCCdTsdT
AD-47359.1	642	GfgCfuGfcCfuGfaGfaCfcUfcAfaUfdTsdT	766	aUfuGfaGfgUfcUfcAfgGfcAfgCfcdTsdT
AD-47386.1	643	GGcuGccuGAGAccucAAudTsdT	767	AuUGAGGUCuCAGGCAgccdTsdT
AD-45122.1end	644	cAGGGcuGccccuGuAGGudTsdT	768	ACCuAcAGGGGcAGCCCUGdTsdT
AD-47351.1	645	CfaGfgGfcUfgCfcCfcUfgUfaGfgUfdTsdT	769	aCfcUfaCfaGfgGfgCfaGfcCfcUfgdTsdT
AD-47378.1	646	cAGGGcuGccccuGuAGGudTsdT	770	ACCuACAGGGGCAGCCcugdTsdT
AD-45152.1	647	CfCfCfUfGUfAGGUfUfGCfUfUfAAAAdTsdT	771	UUUUfAAGCfAACCUfACfAGGGdTsdT
AD-47357.1	648	CfcCfuGfuAfgGfuUfgCfuUfaAfaAfdTsdT	772	uUfuUfaAfgCfaAfcCfuAfcAfgGfgdTsdT
AD-47384.1	649	cccuGuAGGuuGcuuAAAAdTsdT	773	UuUuAAGCAACCuACAgggdTsdT

Таблица 11
Активность модифицированных киРНК ApoC3 (третий набор) в клетках
Название дуплекса	10 нМ	0,1 нМ	10 нМ SD	0,1 нМ SD
AD-45101.1end	1,01	1,30	0,22	0,42
AD-45159.1	0,12	0,53	0,01	0,03
AD-46822.1	0,15	0,31	0,00	0,00
AD-47334.1	0,41	0,82	0,12	0,10
AD-47361.1	0,89	1,00	0,19	0,03
AD-45107.1end	0,87	1,06	0,02	0,08
AD-45123.1	0,15	0,41	0,02	0,02
AD-46825.1	0,13	0,26	0,01	0,01
AD-47338.1	0,38	0,73	0,12	0,12
AD-47365.1	0,74	0,93	0,01	0,07
AD-45113.1end	0,97	1,04	0,20	0,01
AD-45129.1	0,20	0,47	0,07	0,06
AD-46828.1	0,15	0,57	0,00	0,04
AD-47342.1	0,38	0,91	0,26	0,06
AD-47369.1	1,10	1,26	0,18	0,29
AD-45119.1end	0,91	0,87	0,18	0,05
AD-45135.1	0,02	0,08	0,01	0,02
AD-46831.1	0,01	0,37	0,00	0,05
AD-47346.1	0,57	0,95	0,17	0,08
AD-47373.1	0,80	1,06	0,06	0,15
AD-45078.1end	0,38	0,78	0,08	0,05
AD-45140.1	0,07	0,33	0,02	0,06
AD-46811.1	0,03	0,31	0,01	0,04
AD-47349.1	0,03	0,29	0,02	0,18
AD-47376.1	0,38	0,95	0,15	0,01
AD-45084.1end	0,60	0,92	0,03	0,06
AD-45145.1	0,04	0,13	0,01	0,02
AD-46815.1	0,06	0,37	0,00	0,00
AD-47352.1	0,04	0,35	0,04	0,23
AD-47379.1	0,81	1,03	0,12	0,05
AD-45090.1end	0,97	0,86	0,06	0,05
AD-45150.1	0,09	0,28	0,01	0,05
AD-46818.1	0,03	0,26	0,00	0,03
AD-47355.1	0,23	0,60	0,14	0,08
AD-47382.1	0,40	0,81	0,11	0,09
AD-45096.1end	0,47	0,82	0,07	0,26
AD-45155.1	0,60	0,68	0,11	0,07
AD-46820.1	0,03	0,38	0,00	0,02
AD-47358.1	0,05	0,45	0,03	0,31
AD-47385.1	0,53	0,84	0,12	0,19
AD-45102.1end	0,05	0,22	0,03	0,03
AD-45160.1	0,03	0,11	0,00	0,01
AD-46823.1	0,02	0,22	0,00	0,04
AD-47335.1	0,15	0,70	0,05	0,00
AD-47362.1	0,66	1,07	0,01	0,09
AD-45108.1end	0,02	0,12	0,00	0,01
AD-45124.1	0,03	0,07	0,01	0,01
AD-46826.1	0,02	0,18	0,00	0,02
AD-47339.1	0,19	0,62	0,12	0,04
AD-47366.1	0,60	0,82	0,02	0,09
AD-45120.1end	0,03	0,08	0,01	0,03
AD-45136.1	0,04	0,10	0,00	0,01
AD-46829.1	0,02	0,22	0,01	0,01
AD-47347.1	0,16	0,66	0,14	0,11
AD-47374.1	0,90	1,15	0,03	0,03
AD-45127.1end	0,58	0,75	0,02	0,05
AD-45146.1	0,06	0,21	0,00	0,00
AD-46832.1	0,09	0,56	0,02	0,01
AD-47353.1	0,21	0,65	0,04	0,02
AD-47380.1	0,66	1,02	0,07	0,02
AD-45133.1end	0,03	0,10	0,01	0,04
AD-45151.1	0,03	0,05	0,01	0,00
AD-46812.1	0,01	0,10	0,00	0,00
AD-47356.1	0,02	0,13	0,01	0,13
AD-47383.1	0,03	0,21	0,02	0,10
AD-45143.1end	0,73	0,94	0,06	0,09
AD-45161.1	0,59	0,54	0,05	0,06
AD-46816.1	0,04	0,53	0,00	0,01
AD-47336.1	0,10	0,37	0,06	0,14
AD-47363.1	0,54	0,88	0,03	0,14
AD-45148.1end	0,80	0,94	0,06	0,10
AD-45125.1	0,16	0,55	0,02	0,01
AD-46819.1	0,06	0,49	0,01	0,02
AD-47340.1	0,20	0,72	0,18	0,21
AD-47367.1	0,99	1,10	0,17	0,07
AD-45153.1end	0,92	1,02	0,06	0,05
AD-45131.1	0,24	0,64	0,04	0,00
AD-46821.1	0,19	0,67	0,01	0,01
AD-47344.1	0,48	0,90	0,16	0,06
AD-47371.1	1,01	0,92	0,14	0,12
AD-45158.1end	0,37	0,78	0,04	0,00
AD-45137.1	0,02	0,19	0,00	0,06
AD-46824.1	0,02	0,21	0,00	0,02
AD-47348.1	0,19	0,66	0,20	0,24
AD-47375.1	0,83	0,94	0,06	0,00
AD-45128.1end	0,97	0,96	0,18	0,08
AD-45147.1	0,20	0,49	0,01	0,16
AD-46827.1	0,05	0,54	0,01	0,06
AD-47354.1	0,23	0,79	0,15	0,19
AD-45139.1end	1,19	1,13	0,46	0,26
AD-45157.1	0,13	0,29	0,02	0,11
AD-46830.1	0,64	1,01	0,03	0,00
AD-47360.1	0,76	1,22	0,09	0,22
AD-47387.1	0,90	0,84	0,04	0,09
AD-45144.1end	0,45	0,95	0,15	0,20
AD-45162.1	0,02	0,06	0,00	0,03
AD-46833.1	0,06	0,46	0,01	0,05
AD-47337.1	0,05	0,23	0,03	0,16
AD-47364.1	0,52	0,79	0,10	0,02
AD-45149.1end	0,03	0,07	0,00	0,03
AD-45126.1	0,03	0,08	0,02	0,02
AD-46813.1	0,02	0,27	0,00	0,01
AD-47341.1	0,04	0,17	0,02	0,11
AD-47368.1	0,46	0,56	0,02	0,13
AD-45154.1end	0,14	0,29	0,00	0,04
AD-45132.1	0,30	0,52	0,04	0,05
AD-46817.1	0,10	0,29	0,01	0,04
AD-47345.1	0,27	0,58	0,17	0,19
AD-47372.1	0,34	0,44	0,17	0,04
AD-45114.1end	0,37	0,77	0,07	0,15
AD-45130.1	0,05	0,12	0,03	0,00
AD-47343.1	0,21	0,66	0,15	0,18
AD-45141.1	0,03	0,07	0,00	0,00
AD-45121.1end	0,93	0,94	0,05	0,02
AD-47350.1	0,12	0,58	0,05	0,31
AD-45138.1end	0,86	1,04	0,06	0,33
AD-47359.1	0,82	1,04	0,10	0,18
AD-47386.1	0,88	1,28	0,15	0,21
AD-45122.1end	0,92	0,97	0,02	0,11
AD-47351.1	0,48	1,01	0,18	0,14
AD-47378.1	1,10	1,08	0,09	0,03
AD-45152.1	0,04	0,13	0,01	0,02
AD-47357.1	0,09	0,28	0,02	0,25
AD-47384.1	0,09	0,35	0,01	0,17

SEQ ID NO:1

NCBI контрольная последовательность: NM_000040.1, Homo sapiens аполипротеиновая мРНК C-III (APOC3)

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> ALNYLAM PHARMACEUTICALS, INC.

<120> композиции и способы ингибирования экспрессии генов

АПОЛИПОПРОТЕИНА c-iii (apoc-3)

<130> 26421-21247 PCT

<140> PCT/US2012/043642

<141> 2012-06-21

<150> 61/499,620

<151> 2011-06-21

<160> 773

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 533

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 1

tgctcagttc atccctagag gcagctgctc caggaacaga ggtgccatgc agccccgggt 60

actccttgtt gttgccctcc tggcgctcct ggcctctgcc cgagcttcag aggccgagga 120

tgcctccctt ctcagcttca tgcagggtta catgaagcac gccaccaaga ccgccaagga 180

tgcactgagc agcgtgcagg agtcccaggt ggcccagcag gccaggggct gggtgaccga 240

tggcttcagt tccctgaaag actactggag caccgttaag gacaagttct ctgagttctg 300

ggatttggac cctgaggtca gaccaacttc agccgtggct gcctgagacc tcaatacccc 360

aagtccacct gcctatccat cctgcgagct ccttgggtcc tgcaatctcc agggctgccc 420

ctgtaggttg cttaaaaggg acagtattct cagtgctctc ctaccccacc tcatgcctgg 480

cccccctcca ggcatgctgg cctcccaata aagctggaca agaagctgct atg 533

<210> 2

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 2

acuggagcac cguuaagga 19

<210> 3

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 3

gccccuguag guugcuuaa 19

<210> 4

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 4

ccccuguagg uugcuuaaa 19

<210> 5

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 5

augcagcccc ggguacucc 19

<210> 6

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 6

gggcugcccc uguagguug 19

<210> 7

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 7

ggagcaccgu uaaggacaa 19

<210> 8

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 8

uggagcaccg uuaaggaca 19

<210> 9

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 9

guagguugcu uaaaaggga 19

<210> 10

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 10

cuggagcacc guuaaggac 19

<210> 11

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 11

ccaugcagcc ccggguacu 19

<210> 12

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 12

ugccccugua gguugcuua 19

<210> 13

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 13

gccaugcagc cccggguac 19

<210> 14

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 14

uacuggagca ccguuaagg 19

<210> 15

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 15

cuacuggagc accguuaag 19

<210> 16

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 16

acuacuggag caccguuaa 19

<210> 17

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 17

gacuacugga gcaccguua 19

<210> 18

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 18

gccugagacc ucaauaccc 19

<210> 19

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 19

ugccugagac cucaauacc 19

<210> 20

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 20

caugcagccc cggguacuc 19

<210> 21

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 21

ccugagaccu caauacccc 19

<210> 22

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 22

gagaccucaa uaccccaag 19

<210> 23

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 23

guucccugaa agacuacug 19

<210> 24

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 24

agggcugccc cuguagguu 19

<210> 25

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 25

cugccugaga ccucaauac 19

<210> 26

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 26

ucaauacccc aaguccacc 19

<210> 27

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 27

gaccgauggc uucaguucc 19

<210> 28

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 28

aguucccuga aagacuacu 19

<210> 29

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 29

cugccccugu agguugcuu 19

<210> 30

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 30

ugaccgaugg cuucaguuc 19

<210> 31

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 31

agaccgccaa ggaugcacu 19

<210> 32

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 32

ggugaccgau ggcuucagu 19

<210> 33

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 33

ccgauggcuu caguucccu 19

<210> 34

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 34

gauggcuuca guucccuga 19

<210> 35

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 35

auggcuucag uucccugaa 19

<210> 36

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 36

ugcagccccg gguacuccu 19

<210> 37

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 37

uggcuucagu ucccugaaa 19

<210> 38

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 38

gcagccccgg guacuccuu 19

<210> 39

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 39

gcuucaguuc ccugaaaga 19

<210> 40

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 40

caagaccgcc aaggaugca 19

<210> 41

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 41

ucccugaaag acuacugga 19

<210> 42

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 42

ugggugaccg auggcuuca 19

<210> 43

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 43

cugaaagacu acuggagca 19

<210> 44

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 44

agacuacugg agcaccguu 19

<210> 45

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 45

cagggcugcc ccuguaggu 19

<210> 46

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 46

gcagccccgg guacuccuu 19

<210> 47

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 47

gcuucaguuc ccugaaaga 19

<210> 48

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 48

cugagaccuc aauacccca 19

<210> 49

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 49

gcuuaaaagg gacaguauu 19

<210> 50

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 50

agcaccguua aggacaagu 19

<210> 51

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 51

gcugccccug uagguugcu 19

<210> 52

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 52

caagaccgcc aaggaugca 19

<210> 53

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 53

ucccugaaag acuacugga 19

<210> 54

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 54

ugagaccuca auaccccaa 19

<210> 55

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 55

cuggacaaga agcugcuau 19

<210> 56

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 56

gcaccguuaa ggacaaguu 19

<210> 57

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 57

ugggugaccg auggcuuca 19

<210> 58

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 58

cugaaagacu acuggagca 19

<210> 59

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 59

ccucaauacc ccaagucca 19

<210> 60

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 60

ggcugccuga gaccucaau 19

<210> 61

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 61

agguugcuua aaagggaca 19

<210> 62

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 62

ggugaccgau ggcuucagu 19

<210> 63

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 63

agacuacugg agcaccguu 19

<210> 64

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 64

gcugccugag accucaaua 19

<210> 65

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 65

ugcuuaaaag ggacaguau 19

<210> 66

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 66

ccgauggcuu caguucccu 19

<210> 67

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 67

agcaccguua aggacaagu 19

<210> 68

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 68

gcugccccug uagguugcu 19

<210> 69

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 69

cugagaccuc aauacccca 19

<210> 70

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 70

gcuuaaaagg gacaguauu 19

<210> 71

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 71

gauggcuuca guucccuga 19

<210> 72

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 72

gcaccguuaa ggacaaguu 19

<210> 73

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 73

cccuguaggu ugcuuaaaa 19

<210> 74

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 74

ugagaccuca auaccccaa 19

<210> 75

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 75

cuggacaaga agcugcuau 19

<210> 76

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 76

auggcuucag uucccugaa 19

<210> 77

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 77

agguugcuua aaagggaca 19

<210> 78

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 78

ccucaauacc ccaagucca 19

<210> 79

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 79

ugcagccccg gguacuccu 19

<210> 80

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 80

uggcuucagu ucccugaaa 19

<210> 81

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 81

gcugccugag accucaaua 19

<210> 82

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 82

ugcuuaaaag ggacaguau 19

<210> 83

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 83

uccuuaacgg ugcuccagu 19

<210> 84

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 84

uuaagcaacc uacaggggc 19

<210> 85

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 85

uuuaagcaac cuacagggg 19

<210> 86

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 86

ggaguacccg gggcugcau 19

<210> 87

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 87

caaccuacag gggcagccc 19

<210> 88

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 88

uuguccuuaa cggugcucc 19

<210> 89

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 89

uguccuuaac ggugcucca 19

<210> 90

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 90

ucccuuuuaa gcaaccuac 19

<210> 91

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 91

guccuuaacg gugcuccag 19

<210> 92

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 92

aguacccggg gcugcaugg 19

<210> 93

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 93

uaagcaaccu acaggggca 19

<210> 94

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 94

guacccgggg cugcauggc 19

<210> 95

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 95

ccuuaacggu gcuccagua 19

<210> 96

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 96

cuuaacggug cuccaguag 19

<210> 97

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 97

uuaacggugc uccaguagu 19

<210> 98

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 98

uaacggugcu ccaguaguc 19

<210> 99

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 99

ggguauugag gucucaggc 19

<210> 100

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 100

gguauugagg ucucaggca 19

<210> 101

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 101

gaguacccgg ggcugcaug 19

<210> 102

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 102

gggguauuga ggucucagg 19

<210> 103

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 103

cuugggguau ugaggucuc 19

<210> 104

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 104

caguagucuu ucagggaac 19

<210> 105

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 105

aaccuacagg ggcagcccu 19

<210> 106

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 106

guauugaggu cucaggcag 19

<210> 107

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 107

gguggacuug ggguauuga 19

<210> 108

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 108

ggaacugaag ccaucgguc 19

<210> 109

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 109

aguagucuuu cagggaacu 19

<210> 110

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 110

aagcaaccua caggggcag 19

<210> 111

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 111

gaacugaagc caucgguca 19

<210> 112

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 112

agugcauccu uggcggucu 19

<210> 113

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 113

acugaagcca ucggucacct t 21

<210> 114

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 114

agggaacuga agccaucggt t 21

<210> 115

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 115

ucagggaacu gaagccauct t 21

<210> 116

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 116

uucagggaac ugaagccaut t 21

<210> 117

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 117

aggaguaccc ggggcugcat t 21

<210> 118

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 118

uuucagggaa cugaagccat t 21

<210> 119

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 119

aaggaguacc cggggcugct t 21

<210> 120

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 120

ucuuucaggg aacugaagct t 21

<210> 121

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 121

ugcauccuug gcggucuugt t 21

<210> 122

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 122

uccaguaguc uuucagggat t 21

<210> 123

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 123

ugaagccauc ggucacccat t 21

<210> 124

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 124

ugcuccagua gucuuucagt t 21

<210> 125

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 125

aacggugcuc caguagucu 19

<210> 126

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 126

accuacaggg gcagcccug 19

<210> 127

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 127

aaggaguacc cggggcugc 19

<210> 128

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 128

ucuuucaggg aacugaagc 19

<210> 129

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 129

ugggguauug aggucucag 19

<210> 130

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 130

aauacugucc cuuuuaagc 19

<210> 131

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 131

acuuguccuu aacggugcu 19

<210> 132

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 132

agcaaccuac aggggcagc 19

<210> 133

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 133

ugcauccuug gcggucuug 19

<210> 134

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 134

uccaguaguc uuucaggga 19

<210> 135

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 135

uugggguauu gaggucuca 19

<210> 136

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 136

auagcagcuu cuuguccag 19

<210> 137

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 137

aacuuguccu uaacggugc 19

<210> 138

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 138

ugaagccauc ggucaccca 19

<210> 139

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 139

ugcuccagua gucuuucag 19

<210> 140

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 140

uggacuuggg guauugagg 19

<210> 141

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 141

auugaggucu caggcagcc 19

<210> 142

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 142

ugucccuuuu aagcaaccu 19

<210> 143

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 143

acugaagcca ucggucacc 19

<210> 144

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 144

aacggugcuc caguagucu 19

<210> 145

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 145

uauugagguc ucaggcagc 19

<210> 146

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 146

auacuguccc uuuuaagca 19

<210> 147

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 147

agggaacuga agccaucgg 19

<210> 148

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 148

acuuguccuu aacggugcu 19

<210> 149

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 149

agcaaccuac aggggcagc 19

<210> 150

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 150

ugggguauug aggucucag 19

<210> 151

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 151

aauacugucc cuuuuaagc 19

<210> 152

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 152

ucagggaacu gaagccauc 19

<210> 153

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 153

aacuuguccu uaacggugc 19

<210> 154

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 154

uuuuaagcaa ccuacaggg 19

<210> 155

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 155

uugggguauu gaggucuca 19

<210> 156

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 156

auagcagcuu cuuguccag 19

<210> 157

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 157

uucagggaac ugaagccau 19

<210> 158

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 158

ugucccuuuu aagcaaccu 19

<210> 159

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 159

uggacuuggg guauugagg 19

<210> 160

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 160

aggaguaccc ggggcugca 19

<210> 161

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 161

uuucagggaa cugaagcca 19

<210> 162

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 162

uauugagguc ucaggcagc 19

<210> 163

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 163

auacuguccc uuuuaagca 19

<210> 164

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 164

acuggagcac cguuaaggat t 21

<210> 165

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 165

gccccuguag guugcuuaat t 21

<210> 166

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 166

ccccuguagg uugcuuaaat t 21

<210> 167

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 167

augcagcccc ggguacucct t 21

<210> 168

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 168

gggcugcccc uguagguugt t 21

<210> 169

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 169

ggagcaccgu uaaggacaat t 21

<210> 170

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 170

uggagcaccg uuaaggacat t 21

<210> 171

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 171

cuggagcacc guuaaggact t 21

<210> 172

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 172

ccaugcagcc ccggguacut t 21

<210> 173

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 173

ugccccugua gguugcuuat t 21

<210> 174

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 174

gccaugcagc cccggguact t 21

<210> 175

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 175

uacuggagca ccguuaaggt t 21

<210> 176

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 176

cuacuggagc accguuaagt t 21

<210> 177

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 177

gacuacugga gcaccguuat t 21

<210> 178

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 178

gccugagacc ucaauaccct t 21

<210> 179

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 179

ugccugagac cucaauacct t 21

<210> 180

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 180

caugcagccc cggguacuct t 21

<210> 181

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 181

ccugagaccu caauacccct t 21

<210> 182

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 182

gagaccucaa uaccccaagt t 21

<210> 183

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 183

guucccugaa agacuacugt t 21

<210> 184

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 184

agggcugccc cuguagguut t 21

<210> 185

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 185

cugccugaga ccucaauact t 21

<210> 186

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 186

ucaauacccc aaguccacct t 21

<210> 187

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 187

gaccgauggc uucaguucct t 21

<210> 188

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 188

aguucccuga aagacuacut t 21

<210> 189

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 189

cugccccugu agguugcuut t 21

<210> 190

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 190

ugaccgaugg cuucaguuct t 21

<210> 191

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 191

agaccgccaa ggaugcacut t 21

<210> 192

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 192

guagguugcu uaaaagggat t 21

<210> 193

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 193

acuacuggag caccguuaat t 21

<210> 194

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 194

ggugaccgau ggcuucagut t 21

<210> 195

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 195

ccgauggcuu caguucccut t 21

<210> 196

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 196

gauggcuuca guucccugat t 21

<210> 197

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 197

auggcuucag uucccugaat t 21

<210> 198

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 198

ugcagccccg gguacuccut t 21

<210> 199

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 199

uggcuucagu ucccugaaat t 21

<210> 200

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 200

gcagccccgg guacuccuut t 21

<210> 201

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 201

gcuucaguuc ccugaaagat t 21

<210> 202

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 202

caagaccgcc aaggaugcat t 21

<210> 203

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 203

ucccugaaag acuacuggat t 21

<210> 204

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 204

ugggugaccg auggcuucat t 21

<210> 205

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 205

cugaaagacu acuggagcat t 21

<210> 206

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 206

agacuacugg agcaccguut t 21

<210> 207

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 207

cagggcugcc ccuguaggut t 21

<210> 208

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 208

gcagccccgg guacuccuut t 21

<210> 209

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 209

gcuucaguuc ccugaaagat t 21

<210> 210

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 210

cugagaccuc aauaccccat t 21

<210> 211

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 211

gcuuaaaagg gacaguauut t 21

<210> 212

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 212

agcaccguua aggacaagut t 21

<210> 213

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 213

gcugccccug uagguugcut t 21

<210> 214

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 214

caagaccgcc aaggaugcat t 21

<210> 215

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 215

ucccugaaag acuacuggat t 21

<210> 216

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 216

ugagaccuca auaccccaat t 21

<210> 217

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 217

cuggacaaga agcugcuaut t 21

<210> 218

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 218

gcaccguuaa ggacaaguut t 21

<210> 219

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 219

ugggugaccg auggcuucat t 21

<210> 220

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 220

cugaaagacu acuggagcat t 21

<210> 221

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 221

ccucaauacc ccaaguccat t 21

<210> 222

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 222

ggcugccuga gaccucaaut t 21

<210> 223

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 223

agguugcuua aaagggacat t 21

<210> 224

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 224

ggugaccgau ggcuucagut t 21

<210> 225

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 225

agacuacugg agcaccguut t 21

<210> 226

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 226

gcugccugag accucaauat t 21

<210> 227

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 227

ugcuuaaaag ggacaguaut t 21

<210> 228

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 228

ccgauggcuu caguucccut t 21

<210> 229

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 229

agcaccguua aggacaagut t 21

<210> 230

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 230

gcugccccug uagguugcut t 21

<210> 231

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 231

cugagaccuc aauaccccat t 21

<210> 232

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 232

gcuuaaaagg gacaguauut t 21

<210> 233

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 233

gauggcuuca guucccugat t 21

<210> 234

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 234

gcaccguuaa ggacaaguut t 21

<210> 235

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 235

cccuguaggu ugcuuaaaat t 21

<210> 236

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 236

ugagaccuca auaccccaat t 21

<210> 237

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 237

cuggacaaga agcugcuaut t 21

<210> 238

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 238

auggcuucag uucccugaat t 21

<210> 239

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 239

agguugcuua aaagggacat t 21

<210> 240

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 240

ccucaauacc ccaaguccat t 21

<210> 241

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 241

ugcagccccg gguacuccut t 21

<210> 242

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 242

uggcuucagu ucccugaaat t 21

<210> 243

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 243

gcugccugag accucaauat t 21

<210> 244

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 244

ugcuuaaaag ggacaguaut t 21

<210> 245

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 245

uccuuaacgg ugcuccagut t 21

<210> 246

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 246

uuaagcaacc uacaggggct t 21

<210> 247

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 247

uuuaagcaac cuacaggggt t 21

<210> 248

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 248

ggaguacccg gggcugcaut t 21

<210> 249

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 249

caaccuacag gggcagccct t 21

<210> 250

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 250

uuguccuuaa cggugcucct t 21

<210> 251

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 251

uguccuuaac ggugcuccat t 21

<210> 252

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 252

guccuuaacg gugcuccagt t 21

<210> 253

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 253

aguacccggg gcugcauggt t 21

<210> 254

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 254

uaagcaaccu acaggggcat t 21

<210> 255

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 255

guacccgggg cugcauggct t 21

<210> 256

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 256

ccuuaacggu gcuccaguat t 21

<210> 257

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 257

cuuaacggug cuccaguagt t 21

<210> 258

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 258

uaacggugcu ccaguaguct t 21

<210> 259

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 259

ggguauugag gucucaggct t 21

<210> 260

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 260

gguauugagg ucucaggcat t 21

<210> 261

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 261

gaguacccgg ggcugcaugt t 21

<210> 262

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 262

gggguauuga ggucucaggt t 21

<210> 263

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 263

cuugggguau ugaggucuct t 21

<210> 264

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 264

caguagucuu ucagggaact t 21

<210> 265

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 265

aaccuacagg ggcagcccut t 21

<210> 266

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 266

guauugaggu cucaggcagt t 21

<210> 267

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 267

gguggacuug ggguauugat t 21

<210> 268

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 268

ggaacugaag ccaucgguct t 21

<210> 269

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 269

aguagucuuu cagggaacut t 21

<210> 270

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 270

aagcaaccua caggggcagt t 21

<210> 271

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 271

gaacugaagc caucggucat t 21

<210> 272

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 272

agugcauccu uggcggucut t 21

<210> 273

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 273

ucccuuuuaa gcaaccuact t 21

<210> 274

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 274

uuaacggugc uccaguagut t 21

<210> 275

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 275

acugaagcca ucggucacct t 21

<210> 276

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 276

agggaacuga agccaucggt t 21

<210> 277

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 277

ucagggaacu gaagccauct t 21

<210> 278

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 278

uucagggaac ugaagccaut t 21

<210> 279

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 279

aggaguaccc ggggcugcat t 21

<210> 280

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 280

uuucagggaa cugaagccat t 21

<210> 281

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 281

aaggaguacc cggggcugct t 21

<210> 282

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 282

ucuuucaggg aacugaagct t 21

<210> 283

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 283

ugcauccuug gcggucuugt t 21

<210> 284

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 284

uccaguaguc uuucagggat t 21

<210> 285

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 285

ugaagccauc ggucacccat t 21

<210> 286

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 286

ugcuccagua gucuuucagt t 21

<210> 287

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 287

aacggugcuc caguagucut t 21

<210> 288

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 288

accuacaggg gcagcccugt t 21

<210> 289

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 289

aaggaguacc cggggcugct t 21

<210> 290

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 290

ucuuucaggg aacugaagct t 21

<210> 291

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 291

ugggguauug aggucucagt t 21

<210> 292

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 292

aauacugucc cuuuuaagct t 21

<210> 293

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 293

acuuguccuu aacggugcut t 21

<210> 294

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 294

agcaaccuac aggggcagct t 21

<210> 295

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 295

ugcauccuug gcggucuugt t 21

<210> 296

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 296

uccaguaguc uuucagggat t 21

<210> 297

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 297

uugggguauu gaggucucat t 21

<210> 298

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 298

auagcagcuu cuuguccagt t 21

<210> 299

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 299

aacuuguccu uaacggugct t 21

<210> 300

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 300

ugaagccauc ggucacccat t 21

<210> 301

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 301

ugcuccagua gucuuucagt t 21

<210> 302

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 302

uggacuuggg guauugaggt t 21

<210> 303

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 303

auugaggucu caggcagcct t 21

<210> 304

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 304

ugucccuuuu aagcaaccut t 21

<210> 305

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 305

acugaagcca ucggucacct t 21

<210> 306

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 306

aacggugcuc caguagucut t 21

<210> 307

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 307

uauugagguc ucaggcagct t 21

<210> 308

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 308

auacuguccc uuuuaagcat t 21

<210> 309

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 309

agggaacuga agccaucggt t 21

<210> 310

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 310

acuuguccuu aacggugcut t 21

<210> 311

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 311

agcaaccuac aggggcagct t 21

<210> 312

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 312

ugggguauug aggucucagt t 21

<210> 313

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 313

aauacugucc cuuuuaagct t 21

<210> 314

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 314

ucagggaacu gaagccauct t 21

<210> 315

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 315

aacuuguccu uaacggugct t 21

<210> 316

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 316

uuuuaagcaa ccuacagggt t 21

<210> 317

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 317

uugggguauu gaggucucat t 21

<210> 318

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 318

auagcagcuu cuuguccagt t 21

<210> 319

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 319

uucagggaac ugaagccaut t 21

<210> 320

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 320

ugucccuuuu aagcaaccut t 21

<210> 321

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 321

uggacuuggg guauugaggt t 21

<210> 322

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 322

aggaguaccc ggggcugcat t 21

<210> 323

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 323

uuucagggaa cugaagccat t 21

<210> 324

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 324

uauugagguc ucaggcagct t 21

<210> 325

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 325

auacuguccc uuuuaagcat t 21

<210> 326

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 326

ugcagccccg gguacuccu 19

<210> 327

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 327

gcagccccgg guacuccuu 19

<210> 328

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 328

caagaccgcc aaggaugca 19

<210> 329

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 329

ugggugaccg auggcuuca 19

<210> 330

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 330

ggugaccgau ggcuucagu 19

<210> 331

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 331

ccgauggcuu caguucccu 19

<210> 332

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 332

gauggcuuca guucccuga 19

<210> 333

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 333

auggcuucag uucccugaa 19

<210> 334

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 334

uggcuucagu ucccugaaa 19

<210> 335

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 335

gcuucaguuc ccugaaaga 19

<210> 336

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 336

cugaaagacu acuggagca 19

<210> 337

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 337

agcaccguua aggacaagu 19

<210> 338

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 338

gcaccguuaa ggacaaguu 19

<210> 339

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 339

gcugccugag accucaaua 19

<210> 340

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 340

cugagaccuc aauacccca 19

<210> 341

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 341

ugagaccuca auaccccaa 19

<210> 342

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 342

ccucaauacc ccaagucca 19

<210> 343

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 343

gcugccccug uagguugcu 19

<210> 344

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 344

agguugcuua aaagggaca 19

<210> 345

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 345

ugcuuaaaag ggacaguau 19

<210> 346

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 346

gcuuaaaagg gacaguauu 19

<210> 347

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 347

cuggacaaga agcugcuau 19

<210> 348

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 348

ucccugaaag acuacugga 19

<210> 349

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 349

agacuacugg agcaccguu 19

<210> 350

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 350

ggcugccuga gaccucaau 19

<210> 351

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 351

cagggcugcc ccuguaggu 19

<210> 352

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 352

cccuguaggu ugcuuaaaa 19

<210> 353

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 353

aggaguaccc ggggcugca 19

<210> 354

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 354

aaggaguacc cggggcugc 19

<210> 355

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 355

ugcauccuug gcggucuug 19

<210> 356

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 356

ugaagccauc ggucaccca 19

<210> 357

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 357

acugaagcca ucggucacc 19

<210> 358

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 358

agggaacuga agccaucgg 19

<210> 359

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 359

ucagggaacu gaagccauc 19

<210> 360

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 360

uucagggaac ugaagccau 19

<210> 361

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 361

uuucagggaa cugaagcca 19

<210> 362

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 362

ucuuucaggg aacugaagc 19

<210> 363

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 363

ugcuccagua gucuuucag 19

<210> 364

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 364

acuuguccuu aacggugcu 19

<210> 365

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 365

aacuuguccu uaacggugc 19

<210> 366

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 366

uauugagguc ucaggcagc 19

<210> 367

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 367

ugggguauug aggucucag 19

<210> 368

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 368

uugggguauu gaggucuca 19

<210> 369

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 369

uggacuuggg guauugagg 19

<210> 370

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 370

agcaaccuac aggggcagc 19

<210> 371

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 371

ugucccuuuu aagcaaccu 19

<210> 372

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 372

auacuguccc uuuuaagca 19

<210> 373

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 373

aauacugucc cuuuuaagc 19

<210> 374

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 374

auagcagcuu cuuguccag 19

<210> 375

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 375

uccaguaguc uuucaggga 19

<210> 376

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 376

aacggugcuc caguagucu 19

<210> 377

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 377

auugaggucu caggcagcc 19

<210> 378

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 378

accuacaggg gcagcccug 19

<210> 379

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<400> 379

uuuuaagcaa ccuacaggg 19

<210> 380

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 380

ugcagccccg gguacuccut t 21

<210> 381

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 381

ugcagccccg gguacuccut t 21

<210> 382

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 382

ugcagccccg gguacuccut t 21

<210> 383

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 383

gcagccccgg guacuccuut t 21

<210> 384

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 384

gcagccccgg guacuccuut t 21

<210> 385

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 385

gcagccccgg guacuccuut t 21

<210> 386

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 386

caagaccgcc aaggaugcat t 21

<210> 387

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 387

caagaccgcc aaggaugcat t 21

<210> 388

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 388

caagaccgcc aaggaugcat t 21

<210> 389

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 389

ugggugaccg auggcuucat t 21

<210> 390

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 390

ugggugaccg auggcuucat t 21

<210> 391

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 391

ugggugaccg auggcuucat t 21

<210> 392

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 392

ggugaccgau ggcuucagut t 21

<210> 393

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 393

ggugaccgau ggcuucagut t 21

<210> 394

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 394

ggugaccgau ggcuucagut t 21

<210> 395

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 395

ccgauggcuu caguucccut t 21

<210> 396

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 396

ccgauggcuu caguucccut t 21

<210> 397

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 397

ccgauggcuu caguucccut t 21

<210> 398

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 398

gauggcuuca guucccugat t 21

<210> 399

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 399

gauggcuuca guucccugat t 21

<210> 400

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 400

gauggcuuca guucccugat t 21

<210> 401

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 401

auggcuucag uucccugaat t 21

<210> 402

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 402

auggcuucag uucccugaat t 21

<210> 403

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 403

auggcuucag uucccugaat t 21

<210> 404

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 404

uggcuucagu ucccugaaat t 21

<210> 405

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 405

uggcuucagu ucccugaaat t 21

<210> 406

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 406

uggcuucagu ucccugaaat t 21

<210> 407

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 407

gcuucaguuc ccugaaagat t 21

<210> 408

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 408

gcuucaguuc ccugaaagat t 21

<210> 409

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 409

gcuucaguuc ccugaaagat t 21

<210> 410

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 410

cugaaagacu acuggagcat t 21

<210> 411

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 411

cugaaagacu acuggagcat t 21

<210> 412

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 412

cugaaagacu acuggagcat t 21

<210> 413

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 413

agcaccguua aggacaagut t 21

<210> 414

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 414

agcaccguua aggacaagut t 21

<210> 415

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 415

agcaccguua aggacaagut t 21

<210> 416

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 416

gcaccguuaa ggacaaguut t 21

<210> 417

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 417

gcaccguuaa ggacaaguut t 21

<210> 418

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 418

gcaccguuaa ggacaaguut t 21

<210> 419

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 419

gcugccugag accucaauat t 21

<210> 420

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 420

gcugccugag accucaauat t 21

<210> 421

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 421

gcugccugag accucaauat t 21

<210> 422

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 422

cugagaccuc aauaccccat t 21

<210> 423

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 423

cugagaccuc aauaccccat t 21

<210> 424

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 424

cugagaccuc aauaccccat t 21

<210> 425

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 425

ugagaccuca auaccccaat t 21

<210> 426

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 426

ugagaccuca auaccccaat t 21

<210> 427

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 427

ugagaccuca auaccccaat t 21

<210> 428

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 428

ccucaauacc ccaaguccat t 21

<210> 429

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 429

ccucaauacc ccaaguccat t 21

<210> 430

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 430

ccucaauacc ccaaguccat t 21

<210> 431

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 431

gcugccccug uagguugcut t 21

<210> 432

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 432

gcugccccug uagguugcut t 21

<210> 433

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 433

agguugcuua aaagggacat t 21

<210> 434

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 434

agguugcuua aaagggacat t 21

<210> 435

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 435

agguugcuua aaagggacat t 21

<210> 436

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 436

ugcuuaaaag ggacaguaut t 21

<210> 437

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 437

ugcuuaaaag ggacaguaut t 21

<210> 438

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 438

ugcuuaaaag ggacaguaut t 21

<210> 439

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 439

gcuuaaaagg gacaguauut t 21

<210> 440

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 440

gcuuaaaagg gacaguauut t 21

<210> 441

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 441

gcuuaaaagg gacaguauut t 21

<210> 442

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 442

cuggacaaga agcugcuaut t 21

<210> 443

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 443

cuggacaaga agcugcuaut t 21

<210> 444

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 444

cuggacaaga agcugcuaut t 21

<210> 445

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 445

ucccugaaag acuacuggat t 21

<210> 446

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 446

agacuacugg agcaccguut t 21

<210> 447

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 447

ggcugccuga gaccucaaut t 21

<210> 448

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 448

ggcugccuga gaccucaaut t 21

<210> 449

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 449

cagggcugcc ccuguaggut t 21

<210> 450

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 450

cagggcugcc ccuguaggut t 21

<210> 451

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 451

cccuguaggu ugcuuaaaat t 21

<210> 452

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 452

cccuguaggu ugcuuaaaat t 21

<210> 453

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 453

aggaguaccc ggggcugcat t 21

<210> 454

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 454

aggaguaccc ggggcugcat t 21

<210> 455

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 455

aggaguaccc ggggcugcat t 21

<210> 456

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 456

aaggaguacc cggggcugct t 21

<210> 457

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 457

aaggaguacc cggggcugct t 21

<210> 458

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 458

aaggaguacc cggggcugct t 21

<210> 459

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 459

ugcauccuug gcggucuugt t 21

<210> 460

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 460

ugcauccuug gcggucuugt t 21

<210> 461

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 461

ugcauccuug gcggucuugt t 21

<210> 462

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 462

ugaagccauc ggucacccat t 21

<210> 463

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 463

ugaagccauc ggucacccat t 21

<210> 464

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 464

ugaagccauc ggucacccat t 21

<210> 465

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 465

acugaagcca ucggucacct t 21

<210> 466

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 466

acugaagcca ucggucacct t 21

<210> 467

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 467

acugaagcca ucggucacct t 21

<210> 468

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 468

agggaacuga agccaucggt t 21

<210> 469

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 469

agggaacuga agccaucggt t 21

<210> 470

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 470

agggaacuga agccaucggt t 21

<210> 471

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 471

ucagggaacu gaagccauct t 21

<210> 472

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 472

ucagggaacu gaagccauct t 21

<210> 473

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 473

ucagggaacu gaagccauct t 21

<210> 474

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 474

uucagggaac ugaagccaut t 21

<210> 475

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 475

uucagggaac ugaagccaut t 21

<210> 476

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 476

uucagggaac ugaagccaut t 21

<210> 477

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 477

uuucagggaa cugaagccat t 21

<210> 478

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 478

uuucagggaa cugaagccat t 21

<210> 479

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 479

uuucagggaa cugaagccat t 21

<210> 480

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 480

ucuuucaggg aacugaagct t 21

<210> 481

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 481

ucuuucaggg aacugaagct t 21

<210> 482

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 482

ucuuucaggg aacugaagct t 21

<210> 483

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 483

ugcuccagua gucuuucagt t 21

<210> 484

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 484

ugcuccagua gucuuucagt t 21

<210> 485

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 485

ugcuccagua gucuuucagt t 21

<210> 486

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 486

acuuguccuu aacggugcut t 21

<210> 487

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 487

acuuguccuu aacggugcut t 21

<210> 488

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 488

acuuguccuu aacggugcut t 21

<210> 489

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 489

aacuuguccu uaacggugct t 21

<210> 490

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 490

aacuuguccu uaacggugct t 21

<210> 491

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 491

aacuuguccu uaacggugct t 21

<210> 492

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 492

uauugagguc ucaggcagct t 21

<210> 493

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 493

uauugagguc ucaggcagct t 21

<210> 494

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 494

uauugagguc ucaggcagct t 21

<210> 495

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 495

ugggguauug aggucucagt t 21

<210> 496

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 496

ugggguauug aggucucagt t 21

<210> 497

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 497

ugggguauug aggucucagt t 21

<210> 498

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 498

uugggguauu gaggucucat t 21

<210> 499

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 499

uugggguauu gaggucucat t 21

<210> 500

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 500

uugggguauu gaggucucat t 21

<210> 501

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 501

uggacuuggg guauugaggt t 21

<210> 502

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 502

uggacuuggg guauugaggt t 21

<210> 503

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 503

uggacuuggg guauugaggt t 21

<210> 504

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 504

agcaaccuac aggggcagct t 21

<210> 505

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 505

agcaaccuac aggggcagct t 21

<210> 506

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 506

ugucccuuuu aagcaaccut t 21

<210> 507

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 507

ugucccuuuu aagcaaccut t 21

<210> 508

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 508

ugucccuuuu aagcaaccut t 21

<210> 509

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 509

auacuguccc uuuuaagcat t 21

<210> 510

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 510

auacuguccc uuuuaagcat t 21

<210> 511

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 511

auacuguccc uuuuaagcat t 21

<210> 512

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 512

aauacugucc cuuuuaagct t 21

<210> 513

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 513

aauacugucc cuuuuaagct t 21

<210> 514

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 514

aauacugucc cuuuuaagct t 21

<210> 515

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 515

auagcagcuu cuuguccagt t 21

<210> 516

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 516

auagcagcuu cuuguccagt t 21

<210> 517

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 517

auagcagcuu cuuguccagt t 21

<210> 518

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 518

uccaguaguc uuucagggat t 21

<210> 519

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 519

aacggugcuc caguagucut t 21

<210> 520

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 520

auugaggucu caggcagcct t 21

<210> 521

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 521

auugaggucu caggcagcct t 21

<210> 522

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 522

accuacaggg gcagcccugt t 21

<210> 523

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 523

accuacaggg gcagcccugt t 21

<210> 524

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 524

uuuuaagcaa ccuacagggt t 21

<210> 525

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 525

uuuuaagcaa ccuacagggt t 21

<210> 526

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 526

ugcagccccg gguacuccut t 21

<210> 527

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 527

ugcagccccg gguacuccut t 21

<210> 528

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 528

ugcagccccg gguacuccut t 21

<210> 529

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 529

ugcagccccg gguacuccut t 21

<210> 530

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 530

ugcagccccg gguacuccut t 21

<210> 531

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 531

gcagccccgg guacuccuut t 21

<210> 532

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 532

gcagccccgg guacuccuut t 21

<210> 533

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 533

gcagccccgg guacuccuut t 21

<210> 534

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 534

gcagccccgg guacuccuut t 21

<210> 535

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 535

gcagccccgg guacuccuut t 21

<210> 536

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 536

caagaccgcc aaggaugcat t 21

<210> 537

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 537

caagaccgcc aaggaugcat t 21

<210> 538

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 538

caagaccgcc aaggaugcat t 21

<210> 539

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 539

caagaccgcc aaggaugcat t 21

<210> 540

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 540

caagaccgcc aaggaugcat t 21

<210> 541

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 541

ugggugaccg auggcuucat t 21

<210> 542

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 542

ugggugaccg auggcuucat t 21

<210> 543

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 543

ugggugaccg auggcuucat t 21

<210> 544

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 544

ugggugaccg auggcuucat t 21

<210> 545

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 545

ugggugaccg auggcuucat t 21

<210> 546

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 546

ggugaccgau ggcuucagut t 21

<210> 547

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 547

ggugaccgau ggcuucagut t 21

<210> 548

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 548

ggugaccgau ggcuucagut t 21

<210> 549

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 549

ggugaccgau ggcuucagut t 21

<210> 550

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 550

ggugaccgau ggcuucagut t 21

<210> 551

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 551

ccgauggcuu caguucccut t 21

<210> 552

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 552

ccgauggcuu caguucccut t 21

<210> 553

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 553

ccgauggcuu caguucccut t 21

<210> 554

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 554

ccgauggcuu caguucccut t 21

<210> 555

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 555

ccgauggcuu caguucccut t 21

<210> 556

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 556

gauggcuuca guucccugat t 21

<210> 557

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 557

gauggcuuca guucccugat t 21

<210> 558

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 558

gauggcuuca guucccugat t 21

<210> 559

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 559

gauggcuuca guucccugat t 21

<210> 560

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 560

gauggcuuca guucccugat t 21

<210> 561

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 561

auggcuucag uucccugaat t 21

<210> 562

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 562

auggcuucag uucccugaat t 21

<210> 563

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 563

auggcuucag uucccugaat t 21

<210> 564

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 564

auggcuucag uucccugaat t 21

<210> 565

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 565

auggcuucag uucccugaat t 21

<210> 566

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 566

uggcuucagu ucccugaaat t 21

<210> 567

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 567

uggcuucagu ucccugaaat t 21

<210> 568

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 568

uggcuucagu ucccugaaat t 21

<210> 569

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 569

uggcuucagu ucccugaaat t 21

<210> 570

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 570

uggcuucagu ucccugaaat t 21

<210> 571

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 571

gcuucaguuc ccugaaagat t 21

<210> 572

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 572

gcuucaguuc ccugaaagat t 21

<210> 573

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 573

gcuucaguuc ccugaaagat t 21

<210> 574

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 574

gcuucaguuc ccugaaagat t 21

<210> 575

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 575

gcuucaguuc ccugaaagat t 21

<210> 576

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 576

cugaaagacu acuggagcat t 21

<210> 577

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 577

cugaaagacu acuggagcat t 21

<210> 578

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 578

cugaaagacu acuggagcat t 21

<210> 579

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 579

cugaaagacu acuggagcat t 21

<210> 580

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 580

cugaaagacu acuggagcat t 21

<210> 581

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 581

agcaccguua aggacaagut t 21

<210> 582

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 582

agcaccguua aggacaagut t 21

<210> 583

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 583

agcaccguua aggacaagut t 21

<210> 584

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 584

agcaccguua aggacaagut t 21

<210> 585

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 585

agcaccguua aggacaagut t 21

<210> 586

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 586

gcaccguuaa ggacaaguut t 21

<210> 587

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 587

gcaccguuaa ggacaaguut t 21

<210> 588

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 588

gcaccguuaa ggacaaguut t 21

<210> 589

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 589

gcaccguuaa ggacaaguut t 21

<210> 590

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 590

gcaccguuaa ggacaaguut t 21

<210> 591

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 591

gcugccugag accucaauat t 21

<210> 592

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 592

gcugccugag accucaauat t 21

<210> 593

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 593

gcugccugag accucaauat t 21

<210> 594

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 594

gcugccugag accucaauat t 21

<210> 595

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 595

gcugccugag accucaauat t 21

<210> 596

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 596

cugagaccuc aauaccccat t 21

<210> 597

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 597

cugagaccuc aauaccccat t 21

<210> 598

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 598

cugagaccuc aauaccccat t 21

<210> 599

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 599

cugagaccuc aauaccccat t 21

<210> 600

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 600

cugagaccuc aauaccccat t 21

<210> 601

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 601

ugagaccuca auaccccaat t 21

<210> 602

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 602

ugagaccuca auaccccaat t 21

<210> 603

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 603

ugagaccuca auaccccaat t 21

<210> 604

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 604

ugagaccuca auaccccaat t 21

<210> 605

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 605

ugagaccuca auaccccaat t 21

<210> 606

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 606

ccucaauacc ccaaguccat t 21

<210> 607

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 607

ccucaauacc ccaaguccat t 21

<210> 608

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 608

ccucaauacc ccaaguccat t 21

<210> 609

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 609

ccucaauacc ccaaguccat t 21

<210> 610

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 610

ccucaauacc ccaaguccat t 21

<210> 611

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 611

gcugccccug uagguugcut t 21

<210> 612

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 612

gcugccccug uagguugcut t 21

<210> 613

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 613

gcugccccug uagguugcut t 21

<210> 614

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 614

gcugccccug uagguugcut t 21

<210> 615

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 615

agguugcuua aaagggacat t 21

<210> 616

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 616

agguugcuua aaagggacat t 21

<210> 617

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 617

agguugcuua aaagggacat t 21

<210> 618

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 618

agguugcuua aaagggacat t 21

<210> 619

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 619

agguugcuua aaagggacat t 21

<210> 620

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 620

ugcuuaaaag ggacaguaut t 21

<210> 621

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 621

ugcuuaaaag ggacaguaut t 21

<210> 622

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 622

ugcuuaaaag ggacaguaut t 21

<210> 623

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 623

ugcuuaaaag ggacaguaut t 21

<210> 624

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 624

ugcuuaaaag ggacaguaut t 21

<210> 625

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 625

gcuuaaaagg gacaguauut t 21

<210> 626

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 626

gcuuaaaagg gacaguauut t 21

<210> 627

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 627

gcuuaaaagg gacaguauut t 21

<210> 628

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 628

gcuuaaaagg gacaguauut t 21

<210> 629

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 629

gcuuaaaagg gacaguauut t 21

<210> 630

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 630

cuggacaaga agcugcuaut t 21

<210> 631

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 631

cuggacaaga agcugcuaut t 21

<210> 632

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 632

cuggacaaga agcugcuaut t 21

<210> 633

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 633

cuggacaaga agcugcuaut t 21

<210> 634

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 634

cuggacaaga agcugcuaut t 21

<210> 635

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 635

ucccugaaag acuacuggat t 21

<210> 636

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 636

ucccugaaag acuacuggat t 21

<210> 637

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 637

ucccugaaag acuacuggat t 21

<210> 638

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 638

agacuacugg agcaccguut t 21

<210> 639

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 639

agacuacugg agcaccguut t 21

<210> 640

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 640

agacuacugg agcaccguut t 21

<210> 641

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 641

ggcugccuga gaccucaaut t 21

<210> 642

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 642

ggcugccuga gaccucaaut t 21

<210> 643

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 643

ggcugccuga gaccucaaut t 21

<210> 644

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 644

cagggcugcc ccuguaggut t 21

<210> 645

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 645

cagggcugcc ccuguaggut t 21

<210> 646

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 646

cagggcugcc ccuguaggut t 21

<210> 647

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 647

cccuguaggu ugcuuaaaat t 21

<210> 648

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 648

cccuguaggu ugcuuaaaat t 21

<210> 649

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 649

cccuguaggu ugcuuaaaat t 21

<210> 650

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 650

aggaguaccc ggggcugcat t 21

<210> 651

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 651

aggaguaccc ggggcugcat t 21

<210> 652

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 652

aggaguaccc ggggcugcat t 21

<210> 653

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 653

aggaguaccc ggggcugcat t 21

<210> 654

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 654

aggaguaccc ggggcugcat t 21

<210> 655

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 655

aaggaguacc cggggcugct t 21

<210> 656

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 656

aaggaguacc cggggcugct t 21

<210> 657

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 657

aaggaguacc cggggcugct t 21

<210> 658

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 658

aaggaguacc cggggcugct t 21

<210> 659

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 659

aaggaguacc cggggcugct t 21

<210> 660

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 660

ugcauccuug gcggucuugt t 21

<210> 661

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 661

ugcauccuug gcggucuugt t 21

<210> 662

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 662

ugcauccuug gcggucuugt t 21

<210> 663

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 663

ugcauccuug gcggucuugt t 21

<210> 664

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 664

ugcauccuug gcggucuugt t 21

<210> 665

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 665

ugaagccauc ggucacccat t 21

<210> 666

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 666

ugaagccauc ggucacccat t 21

<210> 667

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 667

ugaagccauc ggucacccat t 21

<210> 668

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 668

ugaagccauc ggucacccat t 21

<210> 669

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 669

ugaagccauc ggucacccat t 21

<210> 670

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 670

acugaagcca ucggucacct t 21

<210> 671

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 671

acugaagcca ucggucacct t 21

<210> 672

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 672

acugaagcca ucggucacct t 21

<210> 673

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 673

acugaagcca ucggucacct t 21

<210> 674

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 674

acugaagcca ucggucacct t 21

<210> 675

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 675

agggaacuga agccaucggt t 21

<210> 676

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 676

agggaacuga agccaucggt t 21

<210> 677

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 677

agggaacuga agccaucggt t 21

<210> 678

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 678

agggaacuga agccaucggt t 21

<210> 679

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 679

agggaacuga agccaucggt t 21

<210> 680

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 680

ucagggaacu gaagccauct t 21

<210> 681

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 681

ucagggaacu gaagccauct t 21

<210> 682

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 682

ucagggaacu gaagccauct t 21

<210> 683

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 683

ucagggaacu gaagccauct t 21

<210> 684

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 684

ucagggaacu gaagccauct t 21

<210> 685

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 685

uucagggaac ugaagccaut t 21

<210> 686

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 686

uucagggaac ugaagccaut t 21

<210> 687

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 687

uucagggaac ugaagccaut t 21

<210> 688

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 688

uucagggaac ugaagccaut t 21

<210> 689

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 689

uucagggaac ugaagccaut t 21

<210> 690

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 690

uuucagggaa cugaagccat t 21

<210> 691

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 691

uuucagggaa cugaagccat t 21

<210> 692

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 692

uuucagggaa cugaagccat t 21

<210> 693

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 693

uuucagggaa cugaagccat t 21

<210> 694

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 694

uuucagggaa cugaagccat t 21

<210> 695

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 695

ucuuucaggg aacugaagct t 21

<210> 696

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 696

ucuuucaggg aacugaagct t 21

<210> 697

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 697

ucuuucaggg aacugaagct t 21

<210> 698

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 698

ucuuucaggg aacugaagct t 21

<210> 699

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 699

ucuuucaggg aacugaagct t 21

<210> 700

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 700

ugcuccagua gucuuucagt t 21

<210> 701

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 701

ugcuccagua gucuuucagt t 21

<210> 702

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 702

ugcuccagua gucuuucagt t 21

<210> 703

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 703

ugcuccagua gucuuucagt t 21

<210> 704

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 704

ugcuccagua gucuuucagt t 21

<210> 705

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 705

acuuguccuu aacggugcut t 21

<210> 706

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 706

acuuguccuu aacggugcut t 21

<210> 707

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 707

acuuguccuu aacggugcut t 21

<210> 708

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 708

acuuguccuu aacggugcut t 21

<210> 709

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 709

acuuguccuu aacggugcut t 21

<210> 710

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 710

aacuuguccu uaacggugct t 21

<210> 711

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 711

aacuuguccu uaacggugct t 21

<210> 712

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 712

aacuuguccu uaacggugct t 21

<210> 713

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 713

aacuuguccu uaacggugct t 21

<210> 714

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 714

aacuuguccu uaacggugct t 21

<210> 715

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 715

uauugagguc ucaggcagct t 21

<210> 716

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 716

uauugagguc ucaggcagct t 21

<210> 717

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 717

uauugagguc ucaggcagct t 21

<210> 718

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 718

uauugagguc ucaggcagct t 21

<210> 719

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 719

uauugagguc ucaggcagct t 21

<210> 720

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 720

ugggguauug aggucucagt t 21

<210> 721

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 721

ugggguauug aggucucagt t 21

<210> 722

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 722

ugggguauug aggucucagt t 21

<210> 723

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 723

ugggguauug aggucucagt t 21

<210> 724

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 724

ugggguauug aggucucagt t 21

<210> 725

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 725

uugggguauu gaggucucat t 21

<210> 726

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 726

uugggguauu gaggucucat t 21

<210> 727

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 727

uugggguauu gaggucucat t 21

<210> 728

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 728

uugggguauu gaggucucat t 21

<210> 729

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 729

uugggguauu gaggucucat t 21

<210> 730

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 730

uggacuuggg guauugaggt t 21

<210> 731

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 731

uggacuuggg guauugaggt t 21

<210> 732

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 732

uggacuuggg guauugaggt t 21

<210> 733

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 733

uggacuuggg guauugaggt t 21

<210> 734

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 734

uggacuuggg guauugaggt t 21

<210> 735

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 735

agcaaccuac aggggcagct t 21

<210> 736

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 736

agcaaccuac aggggcagct t 21

<210> 737

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 737

agcaaccuac aggggcagct t 21

<210> 738

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 738

agcaaccuac aggggcagct t 21

<210> 739

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 739

ugucccuuuu aagcaaccut t 21

<210> 740

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 740

ugucccuuuu aagcaaccut t 21

<210> 741

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 741

ugucccuuuu aagcaaccut t 21

<210> 742

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 742

ugucccuuuu aagcaaccut t 21

<210> 743

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 743

ugucccuuuu aagcaaccut t 21

<210> 744

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 744

auacuguccc uuuuaagcat t 21

<210> 745

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 745

auacuguccc uuuuaagcat t 21

<210> 746

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 746

auacuguccc uuuuaagcat t 21

<210> 747

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 747

auacuguccc uuuuaagcat t 21

<210> 748

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 748

auacuguccc uuuuaagcat t 21

<210> 749

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 749

aauacugucc cuuuuaagct t 21

<210> 750

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 750

aauacugucc cuuuuaagct t 21

<210> 751

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 751

aauacugucc cuuuuaagct t 21

<210> 752

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 752

aauacugucc cuuuuaagct t 21

<210> 753

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 753

aauacugucc cuuuuaagct t 21

<210> 754

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 754

auagcagcuu cuuguccagt t 21

<210> 755

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 755

auagcagcuu cuuguccagt t 21

<210> 756

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 756

auagcagcuu cuuguccagt t 21

<210> 757

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 757

auagcagcuu cuuguccagt t 21

<210> 758

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 758

auagcagcuu cuuguccagt t 21

<210> 759

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 759

uccaguaguc uuucagggat t 21

<210> 760

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 760

uccaguaguc uuucagggat t 21

<210> 761

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 761

uccaguaguc uuucagggat t 21

<210> 762

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 762

aacggugcuc caguagucut t 21

<210> 763

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 763

aacggugcuc caguagucut t 21

<210> 764

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 764

aacggugcuc caguagucut t 21

<210> 765

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 765

auugaggucu caggcagcct t 21

<210> 766

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 766

auugaggucu caggcagcct t 21

<210> 767

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 767

auugaggucu caggcagcct t 21

<210> 768

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 768

accuacaggg gcagcccugt t 21

<210> 769

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 769

accuacaggg gcagcccugt t 21

<210> 770

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 770

accuacaggg gcagcccugt t 21

<210> 771

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 771

uuuuaagcaa ccuacagggt t 21

<210> 772

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 772

uuuuaagcaa ccuacagggt t 21

<210> 773

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

олигонуклеотид

<220>

<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический

олигонуклеотид

<400> 773

uuuuaagcaa ccuacagggt t 21

<---

1. Конъюгат для ингибирования экспрессии гена аполипопротеина C-III (APOC3), содержащий двухцепочечную рибонуклеиновую кислоту (дцРНК) и лиганд,

где указанная дцРНК содержит смысловую цепь и антисмысловую цепь, образующие двухцепочечную область, где указанная смысловая цепь содержит по меньшей мере 19 смежных нуклеотидов нуклеотидной последовательности UfCfCfCfUfGAAAGACfUfACfUfGGAdTsdT и указанная антисмысловая цепь содержит по меньшей мере 19 смежных нуклеотидов нуклеотидной последовательности UCCfAGUfAGUCUUUCfAGGGAdTsdT,

где Cf, Af, Uf и Gf представляют собой 2′-фтор-модифицированные C, A, U и G нуклеотиды, соответственно, и dTsdT представляет собой связь dT-фосфоротиоат-dT.

2. Конъюгат по п.1, где указанный лиганд конъюгирован с 3'-концом смысловой цепи дцРНК.

3. Конъюгат по п.1 или 2, где указанный лиганд содержит, по меньшей мере, один N-ацетилгалактозамин.

4. Фармацевтическая композиция для ингибирования экспрессии гена APOC3, содержащая терапевтически эффективное количество конъюгата по любому из пп.1-3 и фармацевтически приемлемый носитель.

5. Фармацевтическая композиция по п.4, содержащая липидный состав.

6. Фармацевтическая композиция по п.4, содержащая липидный состав, содержащий (6Z,9Z,28Z,31Z)-гептатриконта-6,9,28,31-тетраен-19-ил-4-(диметиламино)бутаноат (MC3).

7. Способ ингибирования экспрессии APOC3 в клетке, включающий:

(a) приведение клетки в контакт с конъюгатом по любому из пп.1-3; и

(b) выдерживание клетки, полученной на стадии (a), в течение периода времени, достаточного для достижения разрушения мРНК транскрипта гена APOC3, посредством чего ингибируется экспрессия гена APOC3 в клетке.

8. Способ по п.7, где экспрессия APOC3 ингибируется, по меньшей мере, на 30%.

9. Способ лечения нарушения, опосредованного экспрессией APOC3, включающий введение человеку, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества конъюгата по любому из пп.1-3 или фармацевтической композиции по п.4, 5 или 6.

10. Способ по п.9, где указанное нарушение представляет собой повышенные уровни триглицеридов.

11. Способ по п.9, где указанное нарушение представляет собой уровни триглицеридов >150 мг/дл или >500 мг/дл.

12. Способ по п.9, где введение вызывает повышение активности липопротеинлипазы и/или липазы печени.

13. Способ по п.9, где конъюгат или фармацевтическую композицию вводят в дозе приблизительно от 0,01 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг или приблизительно от 0,5 мг/кг до приблизительно 50 мг/кг.