Способ определения ванкомицина в и его родственных примесей

Изобретение относится к фармации, химии, медицине, биологии. Раскрыт способ определения ванкомицина и его примесей, характеризующийся тем, что после проведения пробоподготовки раствора ванкомицина В проводят ультраэффективное жидкостное хроматографирование в изократическом режиме элюирования с диодно-матричным детектором, с двухкомпонентной подвижной фазой и неподвижной фазой, где подвижная фаза состоит из компонента А и компонента Б в соотношении 75:25, где компонент А представляет собой буферный раствор и тетрагидрофуран, взятые в соотношении 99:1, и где компонент Б представляет собой буферный раствор, тетрагидрофуран и ацетонитрил, взятые в соотношении 70:1:29, где буферный раствор с рН 3,2 представляет собой водный раствор триэтиламина и концентрированную фосфорную кислоту, взятые в эффективном количестве; где неподвижная фаза представляет собой сорбент с геометрическими параметрами 4,6×50 мм и размером частиц 1,8 мкм или 2,6 мкм; далее оценивают содержание ванкомицина В и его примесей. Изобретение обеспечивает высокую чувствительность, эффективность и сокращение времени анализа, а также снижение расхода дорогостоящих реагентов без потери чувствительности и эффективности хроматографического разделения родственных примесей ванкомицина. 5 з.п. ф-лы, 9 ил., 6 табл., 7 пр.

 

Настоящее изобретение относится к фармации, химии, медицине, биологии, а именно, к определению ванкомицина и его примесей.

Уровень техники

Ванкомицин относится к группе гликопептидов, которые, в результате уникального механизма воздействия на большинство грамположительных микроорганизмов, таких как стафилококки и стрептококки, значительно осложняют появление возможности развития резистентности. В настоящее время препараты ванкомицина широко применяются при лечении менингита, сепсиса, пневмонии, остеомиелите, бактериального эндокардита и энтероколита [1]. Для производства лекарственных средств этот гликопептидный антибиотик используется в форме соли ванкомицина гидрохлорида.

Из уровня техники известно определение основного компонента ванкомицина методом жидкостной хроматографии с применением градиентной программой рассчитанной на 40 минут, что является достаточно длительным процессом для рутинного анализа и влечет за собой больший расход дорогостоящих реагентов [2].

В одном из текущих изданий международной фармакопеи известен способ определения примесей ванкомицина с применением ультраэффективной жидкостной хроматографии (далее - УЭЖХ), мелкозернистого сорбента и градиентного режима элюирования в течение 37 минут, а с учетом возврата на исходные условия и уравновешивания хроматографической колонки - в течение 45 минут [3]. Таким образом, представленный метод УЭЖХ нуждается в оптимизации временных ресурсов.

В другом известном способе количественного определения ванкомицина В с применением ВЭЖХ время хроматографирования сократилось до 35 минут [4]. Хроматографическое разделение проводится с применением ацетонитрила, метанола и фосфатного буфера по градиентной программе. Основными недостатками данного способа являются длительная продолжительность анализа, высокие расходы органических растворителей.

Способ определения ванкомицина с использованием УЭЖХ был описан в работе [5] для мониторинга терапевтических препаратов в человеческой сыворотке. Однако представленный способ не обеспечивает приемлемого разделения для определения примесей ванкомицина в лекарственной субстанции.

В альтернативном способе [6] определения ванкомицина В элюирование ванкомицина составляет около 7 мин, где была использована подвижная фаза с высоким содержанием органических растворителей, таких как метанол-ацетонитрил-0,1% раствор фосфорной кислоты в соотношении 25:72:3 соответственно, где водная фаза элюента со значением рН 5,7. К недостаткам способа относится, то, что из-за наличия сложной структуры ванкомицина, в вышеописанных условиях могут образовываться примеси, затрудняющие количественное определение ванкомицина В.

В связи с этим технической задачей является разработка простого, эффективного, высокочувствительного способа определения ванкомицина В и его родственных примесей с применением УЭЖХ для оптимизации временных и материальных затрат при проведения испытаний с последующей оценкой разделительной способности хроматографической системы.

Описание сущности изобретения

Технической задачей является разработка эффективного, высокочувствительного способа определения ванкомицина В и его родственных примесей с применением ультраэффективной жидкостной хроматографии (далее - УЭЖХ) для оптимизации временных и материальных затрат при проведения испытаний с последующей оценкой разделительной способности хроматографической системы.

Техническим результатом заявленного технического решения является высокая чувствительность, эффективность, сокращение времени для анализа, снижение расхода дорогостоящих реагентов без потери чувствительности и эффективности хроматографического разделения родственных примесей ванкомицина.

Технический результат предлагаемого технического решения достигается за счет:

- ультраэффективной жидкостной хроматографии (далее - УЭЖХ) с использованиением в качестве стационарной фазы мелкодисперсного сорбента менее 3 мкм;

- использования подвижной фазы определенного качественного и количественного состава при ее низкой скорости;

- проведения хроматографического разделения в изократическом режиме элюирования.

Осуществление изобретения

Сокращение времени анализа в ходе разработки и при мониторинге содержания основных компонентов и их примесей в лекарственных препаратах - является наиболее востребованным критерием при совершенствовании аналитических методик. В связи с тем, что ультраэффективная жидкостная хроматография (далее - УЭЖХ) зарекомендовала себя как наиболее быстрый и эффективный способ определения действующих веществ, специалисты все чаще прибегают к использованию УЭЖХ для эффективного и скоростного проведения анализа соединений химического и биологического происхождения.

В качестве объекта исследований использовали ванкомицин гидрохлорид (Ванкомицин В) в форме порошка и лиофилизата для приготовления раствора для инъекций и приема внутрь с действующим сроком годности.

Ванкомицин В для приготовления испытуемого раствора, может быть использован в форме порошка или лиофилизата ванкомицина гидрохлорида.

Проведение пробоподготовки заключается в изготовлении испытуемого водного раствора с концентрацией ванкомицина 0,2%, фильтрации полученного раствора через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и переносе раствора в хроматографические виалы с дальнейшим помещением в автоматический пробоотборник хроматографа.

Для наилучшего разделения была использована двухкомпонентная подвижная фаза в виде композиции, представляющая собой две фазы смешанные в эффективном соотношении 75:25, где фаза А (компонент А) в виде композиции, состоящей из буферного раствора и тетрагидрофурана в объемном количественном соотношении 99:1; и где фаза Б (компонент Б), в виде композиции, состоящей из буферного раствора, ацетонитрила и тетрагидрофурана в объемном количественном соотношении 70:1:29.

Буферный раствор представляет собой раствор триэтиламина в очищенной воде, в эффективном объемном соотношении 1: 500 соответственно, со значением рН 3,2, доведенным с помощью концентрированной фосфорной кислоты.

Ванкомицин В представляет собой активный компонент трициклического гликопептидного антибиотика ванкомицина, продуцируемого ферментацией штамма Amycolatopsis orientalis. Для производства лекарственных средств ванкомицин используется в форме соли ванкомицина гидрохлорида.

Ванкомицин обладает структурой

с наличием различных функциональных групп, таких как карбокси-, гидрокси-, амино-, амидные, которые ответственны за ионизацию ванкомицина при различных значения рН. Таким образом, значение рН буферного раствора, может оказывать значительное влияние на устойчивость ванкомицина.

Значение рН буферного раствора и растворителя в диапазоне 2,5-5,5 обеспечивает наиболее эффективное разделение ванкомицина и его примесей, а значение рН буфера более 5,5 приводит к быстрому разложению ванкомицина гидрохлорида, что может привести к искажению результатов анализа.

Вышеописанный эффект вызван наличием различных функциональных групп ванкомицина гидрохлорида, которые обуславливают возможные процессы деградации ванкомицина, а именно: дезамидирования, гидролиза, эпимеризации. При переходе рН подвижной фазы от 2 до 5,5 увеличиваются времена удерживания пиков примесей ванкомицина за счет образования водородных связей и гидрофобных взаимодействий между гидроксильными и амидными группами ванкомицина В и его примесей. Буферный раствор со значением рН 3,2 может обеспечивать оптимальные условия для стабильности ванкомицина и разделения его примесей за наиболее короткое время хроматографирования.

Испытания проводили на жидкостном хроматографе, позволяющем работать в режиме ультраэффективной жидкостной хроматографии (далее - УЭЖХ) и оборудованном следующими модулями: градиентным четырехканальным насосом, обладающим возможностью производить смешение четырех различных элюентов с максимальной скоростью потока 5 мл/мин (максимальное давление 1200 бар), диодно-матричным детектором (с диапазоном длин волн 190-640 нм), термостатируемым колоночным отделением. Отличительной чертой УЭЖХ является использование сорбентов с размером частиц от 1,5 до 3 мкм, а также низкой скорости подвижной фазы и небольшой объем ввода пробы. Благодаря особенностям УЭЖХ позволяет значительно уменьшить время анализа и повысить эффективность хроматографического разделения.

В ходе исследований было выявлено, что колонки с размером частиц сорбента 1,8 мкм и 2.6 мкм демонстрируют наилучшее значение эффективности из ряда альтернативных хроматографических колонок классификации USP (L1) при определении ванкомицина и его примесей. Выбранные колонки Kinetex С18 (2.6 мкм, 4.6×50 мм), Nucleodur С18 isis (1.8 мкм, 4.6×50 мм), содержащие частицы небольшого размера 1,8 мкл и 2.6 мкм, что обеспечивает наилучшее разделение примесей ванкомицина, а равномерное распределение частиц по размеру обуславливает меньшее противодавление колонок, что позволяет использовать их в системе ультраэффективной хроматографии.

Изократическая хроматография значительно упрощает анализ, а также исключает дополнительные временные затраты, необходимые для перехода к стартовому составу компонентов подвижной фазы и уравновешиванию сорбента после разделения. Изократический режим хроматографирования характеризуется постоянным составом подвижной фазы в процессе всего анализа, что наилучшим образом влияет на воспроизводимость заявленного способа.

При разработке заявленного способа с использованием ультраэффективной хроматографии был выбран изократический режим элюирования ванкомицина, который обуславливает техническую простоту исполнения и высокую воспроизводимость заявленного способа.

Условия хроматографирования:

Объем вводимой пробы: 2 мкл.

Скорость потока двух компонентной подвижной фазы: от 0,35 мл/мин до 0,5 мл/мин, в зависимости от геометрии и размера частиц сорбента колонок.

Температура колонки: 20°C

Длина волны детектора: 280 нм

Краткое описание чертежей и иных материалов (Приложения 1-9)

Фиг. 1. Хроматограмма испытуемого раствора, приготовленного из лиофилизата ванкомицина гидрохлорида, полученная способом определения ванкомицина и его родственных примесей на колонке Kinetex С18.

Фиг. 2. Хроматограмма испытуемого раствора, приготовленного из порошка ванкомицина гидрохлорида, полученная способом определения ванкомицина и его родственных примесей на колонке Kinetex С18.

Фиг. 3. Хроматограмма испытуемого раствора, приготовленного из порошка ванкомицина гидрохлорида, полученная способом определения ванкомицина и его родственных примесей с применением колонки Nucleodur С18.

Фиг. 4. Хроматограмма раствора для проверки пригодности, полученная способом определения ванкомицина и его родственных примесей с применением колонки Kinetex С18.

Фиг. 5. Хроматограмма раствора для проверки пригодности, полученная способом определения ванкомицина и его родственных примесей с применением колонки Nucleodur С18.

Фиг. 6. Хроматограмма раствора для проверки пригодности, полученная способом определения ванкомицина и его родственных примесей с применением колонки Zorbax Eclipse Plus С18.

Фиг. 7. Зависимость площади пика (S) ванкомицина В от концентрации (С).

Фиг. 8. Хроматограмма раствора для проверки пригодности, полученная с применением ВЭЖХ.

Фиг. 9. Хроматограмма испытуемого раствора, приготовленного из лиофилизата ванкомицина гидрохлорида, полученная с применением ВЭЖХ.

Высокоэффективная жидкостная хроматография (далее - ВЭЖХ).

Возможность осуществления заявленного способа раскрыта в следующих примерах.

Пример 1. Для определения ванкомицина В и его родственных примесей в лиофилизате готовят испытуемый раствор, содержащий препарат ванкомицина в виде лиофилизата.

Для приготовления испытуемого раствора берут 40 мг содержимого флакона лиофилизата ванкомицина и помещают в мерную колбу вместимостью 20 мл, растворяют в очищенной воде. Затем доводят объем раствора до метки тем же растворителем, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. Полученный раствор переносят в хроматографические виалы, где концентрация раствора составляет 0,2% и помещают их в автоматический пробоотборник хроматографа.

Приготовление буферного раствора с рН 3.2 осуществляют следующим образом: 2 мл триэтиламина помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл, прибавляют 950 мл воды, доводят рН раствора до значения 3.2 с помощью концентрированной фосфорной кислоты, доводят объем раствора до метки водой и перемешивают.

Для приготовления компонента А подвижной фазы смешивают буферный раствор с рН 3.2 и тетрагидрофуран в объемном соотношении 99:1 и дегазируют любым способом известным специалисту из данной области техники.

Для приготовления компонента Б подвижной фазы смешивают буферный раствор с рН 3.2, тетрагидрофуран и ацетонитрил в объемном соотношении 70:1:29 и дегазируют любым способом известным специалисту из данной области техники.

Для получения подвижной фазы смешивают компонент А и компонент Б в соотношении 75:25.

Хроматографические условия:

Колонка: Kinetex С18, 50×4.6 мм, 2.6 мкм

Объем вводимой пробы: 2 мкл;

Скорость потока подвижной фазы: 0,5 мл/мин;

Температура колонки: 20°C;

Температура автосамплера: 5°C;

Детектор: Ультрафиолетовый детектор с длиной волны 280 нм.

Хроматографируют по 2 мкл растворы в следующей последовательности: растворитель в виде очищенной воды, раствор подвижной фазы, испытуемый раствор. На Фиг. 1 представлена типичная хроматограмма испытуемого раствора.

Содержание ванкомицина В по данным фармакопейных статей должно составлять не менее 80,0-91,0%, а суммарное количество примесей - не более 9,0%.

Содержание ванкомицина В, единичных примесей, а также суммы всех примесей рассчитывают методом внутренней нормализации, который характеризуется тем, что процентное содержание ванкомицина В, либо содержание единичной примеси (X_i) в испытуемом образце рассчитывают путем определения площади пика ванкомицина В, либо площади единичной примеси (S_i) как часть от общей площади всех присутствующих на хроматограмме пиков (ΣS_i) за исключением пиков, соответствующих растворителю и подвижной фазе. Таким образом, при расчете процентного содержания ванкомицина В используют следующую формулу:

Данным примером подтверждено, что заявленный технический результат в заявленном способе достигается. Рассчитанное методом внутренней нормализации процентное содержание ванкомицина В и суммарное содержание его примесей составляет 92,1% и 7,9% соответственно, что удовлетворяет требованиям фармакопейных документов.

Пример 2. Определение ванкомицина В и его родственных примесей в порошке ванкомицина гидрохлорида проводят способом, описанным в примере 1.

Данным примером подтверждено, что заявленный технический результат в заявленном способе достигается. Рассчитанное методом внутренней нормализации процентное содержание ванкомицина В и суммарное содержание всех примесей составляет 93,85% и 6,15% соответственно, что удовлетворяет требованиям фармакопейных документов.

Времена удерживания пика ванкомицина В на типичной хроматограмме испытуемого раствора ванкомицина гидрохлорида в форме лиофилизата (Фиг. 1) и в форме порошка (Фиг. 2) совпадают (табл. 1).

Приведенный пример демонстрирует сопоставимость результатов, что подтверждает возможность реализации заявленного способа для определения ванкомицина В и его родственных примесей в различных лекарственных формах ванкомицина гидрохлорида.

Пример 3. Определение ванкомицина В и его родственных примесей в порошке ванкомицина гидрохлорида проводят способом, описанным в примере 1, с использованием колонки Nucleodur С18 isis (4.6×50 мм) с размером частиц сорбента 1,8 мкм при скорости потока подвижной фазы 0,35 мл/мин (Фиг. 3).

Данным примером подтверждено, что заявленный технический результат в заявленном способе достигается. Рассчитанное методом внутренней нормализации процентное содержание ванкомицина В и суммарное содержание всех примесей составляет 93,56% и 6,44% соответственно, что удовлетворяет требованиям фармакопейных документов и совпадает с данными, полученными на колонке с размером частиц 2,6 мкм (табл. 2).

Приведенные примеры продемонстрировали сопоставимость полученных результатов, что подтверждает возможность реализации заявленного способа для определения ванкомицина В и его родственных примесей с использованием хроматографических колонок с различным размером частиц сорбента.

Пример 4. Возможность использования колонок с наилучшим размером частиц сорбента в заявленном способе определения ванкомицина и его суммарных примесей УЭЖХ, подтверждена в результате анализа нескольких сорбентов, что дает возможность использования различных хроматографических колонок с учетом их геометрии и изменения скорости элюента.

Для проверки разрешающей способности заявленного способа в качестве объекта исследований использовали раствор ванкомицина и его продуктов деградации для проверки пригодности хроматографической системы, для приготовления которого был взят стандартный образец ванкомицина гидрохлорида квалификации USP RS с валидной на момент проведения испытаний серией.

При приготовлении раствора ванкомицина и его продуктов деструкции для проверки пригодности хроматографической системы (далее - РППХС), используют стандартный образец ванкомицина гидрохлорида, который растворяют в очищенной воде для получения раствора с концентрацией 0,5 мг/мл. Полученный раствор выдерживают в сушильном шкафу при температуре 65°C в течение 48 часов. Разложенный раствор ванкомицина фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и переносят в хроматографические виалы с дальнейшим помещением в автоматический пробоотборник хроматографа.

В ходе исследования был выбран ряд хроматографических колонок, позволяющих проводить анализ методом УЭЖХ, а именно: Kinetex С18 (2.6 мкм, 4.6×50 мм), Nucleodur С18 isis, (1.8 мкм, 4.6×50 мм), Zorbax RRHD Eclipse Plus CI8 (1.8 мкм, 2.1×50 мм). В результате испытаний было обнаружено, что профиль всех хроматограмм достаточно близок друг к другу, а пики примесей хорошо разделены и симметричны (Фиг. 4-6).

По фармакопейной статье, хроматографические условия считаются пригодными, если на хроматограмме РППХС разрешение между пиком ванкомицина В и пиком его ближайшей примеси составляет не менее 1,5, а фактор асимметрии пика ванкомицина находится в пределах 0,8-1,5.

Хроматографические параметры рассмотренных колонок Kinetex С18 (2.6 мкм, 4.6×50 мм) и Nucleodur С18 isis (1,8 мкм, 4.6×50 мм), обладают наилучшей разрешающей способностью в приведенных условиях (табл. 3) и могут быть рекомендованы для проведения анализа методом УЭЖХ ванкомицина и его примесей.

Пример 5. Линейность способа в аналитической области подтверждается линейной зависимостью площади пика исследуемого вещества от его концентрации в растворе (Фиг. 7). В разработанном способе, аналитическая область содержания примесей ванкомицина соответствует диапазону значений их концентраций 0,0001%-0,02%. Исследование проводилось на примере ванкомицина В в концентрациях, характерных для примесей в испытуемом растворе.

Полученные данные обрабатывали методом наименьших квадратов, который заключается в нахождении коэффициентов а, b и коэффициента корреляции r линейной модели:

Y=b*х+а,

где коэффициент х - обозначает концентрацию ванкомицина В, у - площадь пика ванкомицина В, b - угловой коэффициент модели, а - свободный член.

В результате расчетов коэффициент корреляции составил величину 0,999, что доказывает линейность заявленной методики по фармакопейной статье.

Пример 6. Заявленный способ определения ванкомицина и его родственных примесей сравнивали с методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ).

Условия хроматографирования способом ВЭЖХ:

Хроматографическая колонка: LiChrospher RP-18 (5 мкм, 4.6×250 мм)

Объем вводимой пробы: 20 мкл.

Скорость потока подвижной фазы: 2 мл/мин.

Длина волны детектора: 280 нм

Подвижная фаза А: смесь буферного раствора, тетрагидрофурана и ацетонитрила в объемном соотношении 92:1:7.

Подвижная фаза В: смесь буферного раствора, тетрагидрофурана и ацетонитрила в объемном соотношении 70:1:29.

Элюирование проводилось по градиентной программе, приведенной в таблице 4.

Для сравнения способов определения родственных примесей ванкомицина было проведено хроматографирование РПХХС по заявленному способу УЭЖХ (Фиг. 4) и по способу с применением ВЭЖХ (Фиг. 8). В качестве критериев приемлемости исследуемых методик были выбраны следующие параметры:

- фактор асимметрии пика ванкомицина В;

- эффективность хроматографической колонки, рассчитанной по пику ванкомицина В и измеряемая числом теоретических тарелок (ч.т.т.);

- разрешение между пиком ванкомицина В и ближайшем к нему пиком примеси.

Результаты хроматографирования предложенным методом ультраэффективной хроматографии сопоставимы с результатами, полученными при использовании обычной ВЭЖХ (табл. 5).

При использовании предлагаемого способа определения примесей ванкомицина время анализа сокращается в три раза по сравнению с альтернативной методикой. Таким образом, время, необходимое для анализа примесей ванкомицина в заданных условиях составило 10 минут.

Благодаря более низкой скорости подвижной фазы разработанный способ требует меньшего расхода элюента, а переход к изократическому режиму элюирования упрощает проведение анализа. Предложенные условия хроматографирования с использованием метода УЭЖХ позволяют оценить возможное содержание родственных примесей в лекарственном средстве ванкомицина, что подтверждается соответствием критериев приемлемости (таб. 5) при тестировании хроматографической системы с известной методикой ВЭЖХ.

Пример 7. Для подтверждения возможности промышленного применения предлагаемого изобретения была доказана его правильность путем сравнения полученных результатов с методикой ВЭЖХ (табл.6), ранее прошедшей процесс валидации. Для оценки пригодности разработанной методики при определении Ванкомицина В и родственных примесей анализировали 2 мг/мл водный раствор лекарственного препарата в форме лиофилизата. На Фиг. 9 представлена типичная хроматограмма испытуемого раствора с применение ВЭЖХ.

Содержание Ванкомицина В, максимальной единичной примеси и суммы всех примесей рассчитывали методом внутренней нормализации. В качестве критерия приемлемости при определении примесей ванкомицина дополнительно рассчитывали среднее стандартное отклонение (RSD) площади и времени удерживания пика ванкомицина В.

При использовании заявленного способа с применением УЭЖХ значение суммы примесей больше, чем по методу обычной хроматографии, что свидетельствует о более высокой чувствительность разработанной методики. Все полученные результаты при использовании заявленного способа определения ванкомицина В и его родственных примесей не только сопоставимы с результатами известных способов, но и демонстрируют то, что заявленный способ является более эффективным и чувствительным.

Представленные примеры не ограничивают объем притязаний настоящего изобретения и служат только для цели иллюстрации и раскрытия заявленного способа.

Промышленная применимость

Все приведенные примеры, подтверждают эффективное разделение ванкомицина и его родственных примесей, чувствительность заявленного способа при сокращении времени проведения анализа.

Таким образом, поставленная техническая задача, а именно, разработка эффективного и чувствительного способа для определения ванкомицина и его родственных примесей в различных лекарственных формах достигнута, что подтверждается приведенными примерами.

Применение в фармации, химии, медицине, биологии заявленного способа является эффективным.

Список литературы:

[1] - Mara Lambert. IDSA Guidelines on the Treatment of MRSA Infections in Adults and Children. American Family Physician. 2011. 84

[2] - British Pharmacopoeia (BP). Monographs: Medicinal and Pharmaceutical Substances. 2009

[3] - European Pharmacopoeia (Ph. Eur.) 10.5th Edition

[4] - The United States Pharmacopeia National Formulary (USP) 2020 USP 43 - NF 38.

[5] - Yu. Cao; J. Yu; Yu. Chen; J. Zhang; X. Wu; Y. Zhang; G. Li. Development and Validation of a New Ultra-Performance Liquid Chromatographic Method for Vancomycin Assay in Serum and Its Application to Therapeutic Drug Monitoring. Therapeutic Drug Monitoring, 2014. 36(2). 175-181.

[6] - K. Nirmala, R.R. Raju. Determination of vancomycin by using RP-HPLC method in pharmaceutical preparations. Int. J. Res. Ayurveda Pharm. 2013. 4(1).16-119.

1. Способ определения ванкомицина и его примесей, характеризующийся тем, что после проведения пробоподготовки раствора ванкомицина В проводят ультраэффективное жидкостное хроматографирование в изократическом режиме элюирования с диодно-матричным детектором, с двухкомпонентной подвижной фазой и неподвижной фазой, где подвижная фаза состоит из компонента А и компонента Б в соотношении 75:25, где компонент А представляет собой буферный раствор и тетрагидрофуран, взятые в соотношении 99:1, и где компонент Б представляет собой буферный раствор, тетрагидрофуран и ацетонитрил, взятые в соотношении 70:1:29, где буферный раствор с рН 3,2 представляет собой водный раствор триэтиламина и концентрированную фосфорную кислоту, взятые в эффективном количестве; где неподвижная фаза представляет собой сорбент с геометрическими параметрами 4,6×50 мм и размером частиц 1,8 мкм или 2,6 мкм; далее оценивают содержание ванкомицина В и его примесей.

2. Способ по п. 1, дополнительно характеризующийся тем, что ультраэффективное жидкостное хроматографирование проводят при длине волны детектора 280 нм.

3. Способ по п. 1, дополнительно характеризующийся тем, что ультраэффективное жидкостное хроматографирование проводят при скорости потока подвижной фазы от 0,35 до 0,5 мл/мин.

4. Способ по п. 1, дополнительно характеризующийся тем, что для пробоподготовки берут 2 мкл раствора ванкомицина.

5. Способ по п. 4, дополнительно характеризующийся тем, что для пробоподготовки берут 0,2% раствор ванкомицина.

6. Способ по п. 1, дополнительно характеризующийся тем, что буферный раствор, содержащий водный раствор триэтиламина, содержит триэтиламин и воду, взятые в соотношении 1:500 соответственно.