Способ получения настойки листьев дуба черешчатого, обладающей антимикробной активностью

Авторы патента:

Куркин Владимир Александрович (RU)

Жестков Александр Викторович (RU)

Лямин Артем Викторович (RU)

Рыжов Виталий Михайлович (RU)

Колпакова Светлана Дмитриевна (RU)

Рябов Николай Анатольевич (RU)

B01D11/02 - твердых веществ

A61P31/10 - противогрибковые средства

A61P31/04 - антибактериальные средства

A61K36/49 - Лекарства и медикаменты для терапевтических, стоматологических или гигиенических целей (изготовление специальных лекарственных форм A61J; химические аспекты или использование материалов для дезодорации воздуха, для дезинфекции или стерилизации или для бандажей, перевязочных средств, впитывающих прокладок или хирургических приспособлений A61L; соединения как таковые C01, C07,C08,C12N; мыла C11D; микроорганизмы как таковые C12N)

Владельцы патента RU 2781430:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения настойки листьев дуба черешчатого. Способ получения настойки листьев дуба черешчатого, обладающей антимикробной активностью, путем экстракции лекарственного растительного сырья водным спиртом, в котором настаивают листья дуба черешчатого 70% спиртом этиловым в соотношении «сырье-эктрагент» 1:5 методом дробной перколяции при комнатной температуре в течение 24 часов с получением готового продукта настойки листьев дуба черешчатого на 70% этиловом спирте с выраженной антимикробной активностью в отношении патогенных клинических штаммов микроорганизмов Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Escherichia coli и Candida albicans, которая в дальнейшем может использоваться в качестве антимикробного препарата. Вышеописанный способ характеризуется оптимальной технологией и позволяет получить настойку с антимикробной активностью с высоким содержанием суммы действующих веществ, которая обладает выраженной антимикробной активностью в отношении патогенных клинических штаммов микроорганизмов Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Escherichia coli и Candida albicans. 1 ил., 1 пр.

Данное изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, в частности, к производству лекарственных средств на основе лекарственного растительного сырья (ЛРС) и касается получения настойки из листьев дуба черешчатого (Quercus robur L.), обладающей антимикробной активностью в отношении патогенных клинических штаммов микроорганизмов, таких как Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Escherichia coli и Candida albicans (Фиг. 1).

На сегодняшний день поиск новых противомикробных лекарственных средств остается по-прежнему актуальной проблемой. Растительные препараты имеют ряд преимуществ по сравнению с синтетическими, поскольку обладают широким спектром биологической активности за счет содержащихся в них биологически активных соединений (БАС), в том числе флавоноидов, которые обладают антимикробными, противовоспалительными, антиоксидантными свойствами [3, 4]. Кроме того, растительные препараты не вызывают резистентности у микроорганизмов и безопасны в применении.

В настоящее время в мировой медицинской практике применяется отвар коры дуба черешчатого в качестве вяжущего и противовоспалительного лекарственного средства [3, 4]. Отвар коры дуба имеет ряд недостатков, которые заключаются в малом сроке хранения препарата, низком содержании флавоноидов (0,02%), низком выходе веществ из сырья (27,12%) и отсутствием данных о наличие антимикробной активности на ряд клинических штаммов, например, таких как Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Escherichia coli и Candida albicans.

Прототипом данного способа стал способ получения настойки из листьев тополя черного, обладающей антимикробным действием в отношении штаммов Burkholderia, заключающийся в том, что настаивают листья тополя черного 70% этиловым спиртом в соотношении «сырье - экстрагент» 1:8 в условиях дробной экстракции - дважды при комнатной температуре в течение 24 часов с последующим извлечением при нагревании на кипящей водяной бане и объединением трех извлечений; в итоге получают готовый объединенный продукт - настойку листьев тополя черного на 70% этиловом спирте, в которой содержание суммы флавоноидов (целевые вещества), определенное с использованием спектрофотометрического метода, составляет 0,51%, выход целевых веществ в настойке составляет 90,0% [1, 2].

Недостатком данного прототипа является невозможность его применения для листьев дуба черешчатого, также не описана антимикробная активность в отношении штаммов Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Escherichia coli и Candida albicans. Поэтому целью данного изобретения является усовершенствование способа получения настойки из листьев дуба черешчатого по упрощенной методике ее получения (метод дробной перколяции), обладающей антимикробной активностью на более широкий спектр патогенных клинических штаммов [6].

Технический результат заключается в получении настойки из листьев дуба черешчатого, обладающей антимикробной активностью с более высоким содержанием суммы действующих веществ по сравнению с аналогом – отваром коры дуба, при использовании оптимальной технологии ее получения (метод дробной перколяции).

Технический результат достигается путем осуществления способа, который заключается в проведении экстрагирования измельченных листьев Quercus robur L. 70% спиртом этиловым в соотношении «сырье - экстрагент» – 1:5 методом дробной перколяции, при этом содержание суммы действующих веществ, определенное с использованием спектрофотометрического метода, составляет 0,27%, выход действующих веществ составляет 83,7%.

Данный способ позволяет получить новое антимикробное средство в виде настойки листьев дуба на 70% спирте этиловом, обладающей антимикробной активностью на более широкий спектр патогенных клинических штаммов.

Предлагаемые параметры технологии являются оптимальными и позволяют максимально извлекать сумму действующих веществ из листьев Quercus robur L., обеспечивая максимальный антимикробный эффект в отношении следующих штаммов микроорганизмов: Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Candida albicans (Фиг. 1).

На Фиг. 1 представлены результаты тестирования настойки листьев дуба черешчатого на 70% спирте этиловом на наличие антимикробной активности.

Настойку получают следующим образом.

Первый день. Используется метод дробной перколяции. В установку из трех перколяторов помещают сырье измельченных листьев дуба черешчатого, проходящих сквозь сито диаметром 5 мм, по 1 части в каждый из перколяторов. В установку перколяторов заливают необходимое для намачивания сырья 70% спирт этиловый (данный объем берется исходя из экспериментально установленного коэффициента водопоглощения для листьев, который при учете влажности (7,3%) равен 1,5 мл/г), закрывают пробкой установку и оставляют для настаивания в течение 24 часов при комнатной температуре.

Второй день. Через установку перколируют необходимый объем 70% спирта этилового, рассчитанный из соотношения «сырье – экстрагент» - 1:5, контролируя необходимый объем экстрагента над сырьем (зеркало), при скорости перколяции 1 капля в три секунды. Полученный готовый продукт – настойку, фильтруют через ватно-марлевый тампон и затем помещают во флакон темного стекла и укупоривают пробкой из полимерных материалов.

Предлагаемый способ поясняется следующим примером.

Пример 1

Первый день. Используется три перколятора на 250 мл. В каждый перколятор помещают по 70,0 г измельченных листьев дуба черешчатого, проходящих сквозь сито диаметром 5 мм. В установку из трех перколяторов заливают 1,5 объема от сырья – 315 мл 70% этилового спирта, закрывают установку пробкой и оставляют для настаивания в течение 24 часов при комнатной температуре.

Второй день. Через перколяторы проливают необходимый объем 70% спирта этилового – 1050 мл, данный объем рассчитывается из соотношения «сырье – экстрагент» – 1:5, контролируя необходимый объем экстрагента над сырьем (зеркало), при скорости перколяции 1 капля в три секунды. Полученный готовый продукт – настойку, фильтруют через ватно-марлевый тампон и затем помещают во флакон темного стекла и укупоривают пробкой из полимерных материалов.

Выбор концентрации этилового спирта продиктован литературными данными и подтвержден экспериментально, 70% этиловый спирт, используемый в качестве экстрагента, приводит к максимальному извлечению из сырья суммы флавоноидов (целевых веществ) [4].

Настойку листьев дуба черешчатого, полученную методом дробной перколяции, исследовали на противомикробную активность.

Наличие противомикробной активности определяли на клинических штаммах микроорганизмов: Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Candida albicans. Определение минимальной ингибирующей концентрации проводили методом двойных серийных разведений в мясо-пептонном бульоне (пробирочный, макрометод) в соответствии с методиками, описанными в МУK 4.2.1890-04 [3].

В качестве тестовых культур были использованы штаммы Американской коллекции типовых культур (АТСС): Staphylococcus aureus (АТСС 29213), Escherichia coli (АТСС 25922), Pseudomonas aeruginosa (АТСС 27853), а также Candida albicans (клинический штамм).

Тестирование проводилось в объеме 1 мл (0,5 мл инокулюма микроорганизмов и 0,5 мл соответствующего разведения исследуемого образца) с конечной концентрацией исследуемого микроорганизма примерно 5×10⁵КОЕ/мл. В качестве питательной среды использовался питательный бульон Мюллера-Хинтона (Bio-Rad, США). Инкубацию проводили при температуре 35°С в течение 24 часов. Параллельно проводился опыт для постановки «отрицательного» контроля (Фиг. 2). Оценку результатов проводили визуально по наличию/отсутствию роста микроорганизмов в пробирках с соответствующими разведениями исследуемых образцов. При этом проводили визуальную оценку задержки роста, через 24 часа отсутствие роста оценивали как антимикробный эффект, а появление видимого роста – как отсутствие противомикробной активности [5].

Полученные результаты исследования позволили сделать вывод об имеющейся выраженной антимикробной активности настойки листьев Quercus robur L. Отсутствие роста микроорганизмов Pseudomonas aeruginosa наблюдалось при разведении в 8 раза, Staphylococcus aureus – при разведении в 16 раза; Escherichia coli – при разведении в 32 раз; Candida albicans – при разведении в 64 раз, При дальнейшем разведении рост культуры возобновляется (Фиг. 1).

Таким образом, предлагаемый способ получения настойки из листьев Quercus robur L. методом перколяции разработан впервые для данного вида сырья и обладает следующими преимуществами:

1. Настойка листьев дуба черешчатого, полученная на 70% этиловом спирте в соотношении «сырье-экстрагент» – 1:5, позволяет повысить выход суммы действующих веществ (флавоноидов) из листьев дуба черешчатого с 27,12% до 83,7%, так как является оптимальным экстрагентом для выделения суммы флавоноидов из лекарственного растительного сырья.

2. Полученная настойка листьев дуба черешчатого обладает активностью в отношении штаммов Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Candida albicans, в отличие от настойки на основе листьев тополя черного, что позволяет рекомендовать настойку листьев дуба черешчатого в качестве препарата с широким спектром антимикробной активностью.

3. Обсуждаемое средство позволяет эффективно решить вопрос комплексного использования растения, так как листья дуба черешчатого составляют значительную часть фито-массы растения, а ареал обитания Quercus robur L. значительно шире по отношению к другим видам внутри таксономической группы, что значительно упрощает задачу поиска сырьевой базы для получения лекарственного средства [2].

Настойка листьев дуба черешчатого может применяться в химико-фармацевтической промышленности для производства лекарственных препаратов активных в отношении некоторых клинических штаммов, таких как Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Candida albicans.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

1. Государственная фармакопея Российской Федерации / МЗ РФ. XIV изд. Т. I-IV. М., 2018. [Электронный ресурс] URL: http:// http://femb.ru/femb/pharmacopea.php (дата обращения: 05.10.2020).

2. Губанов И.А., Киселёва К.В., Новиков В.С., Тихомиров В.Н., Иллюстрированный определитель растений Средней России. Т.-2: Покрытосеменные (двудольные: раздельнолепестные). М.: Т-во научных изданий КМК, Ин-т технологических исследований. – 2003. – С. 34.

3. Кароматов И.Д., Махмудова Г.Ф.К. Дуб обыкновенный - применение в лечебной практике // Биология и интегративная медицина. - 2016. - № 3. - С. 41-47.

4. Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов (факультетов) / В.А. Куркин. – 4-е, перераб. и доп. – Самара: ООО «Офорт», ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России, 2019. – С. 966-969.

5. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Методические указания. МУК 4.2.1890-04 // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2004. - Т.6, № 4. – С. 306-359.

6. Патент РФ № 2695661 «Способ получения настойки из листьев тополя черного, обладающей активностью в отношении штаммов Burkholderia» (заявка № 2019112565, от 24.04.2019 г., решение о выдаче патента 25.07.2019 г.).

Способ получения настойки листьев дуба черешчатого, обладающей антимикробной активностью, путем экстракции лекарственного растительного сырья водным спиртом, отличающийся тем, что настаивают листья дуба черешчатого 70% спиртом этиловым в соотношении «сырье-эктрагент» 1:5 методом дробной перколяции при комнатной температуре в течение 24 часов с получением готового продукта настойки листьев дуба черешчатого на 70% этиловом спирте с выраженной антимикробной активностью в отношении патогенных клинических штаммов микроорганизмов Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Escherichia coli и Candida albicans, которая в дальнейшем может использоваться в качестве антимикробного препарата.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения препарата для выведения радиоцезия из организма. Способ получения препарата для выведения радиоцезия из организма, включающий смешивание натуральной кормовой добавки, содержащей, мас.

Способ и устройство для получения экстракта из различных видов растительного сырья воздействием импульсных электрических разрядов // 2780619

Изобретение относится к области химии, а именно к устройству для получения водного экстракта из плодов или листьев софоры японской или корнеплодов скорцонера под воздействием импульсных электрических разрядов при определенной длительности импульса, частоте разрядов, амплитуде напряжения. Устройство состоит из экстракционной камеры цилиндрической формы, изготовленной из полиэтилена, с крышкой, с электродами, где высоковольтный и заземленный электроды из пищевой нержавеющей стали, причем используют электроды типа острие-плоскость, заземленный электрод выполнен в виде сита с размером отверстий 1 мм и плотностью отверстий 25 шт/см2 и расположен на расстоянии 0,03 м от днища экстракционной камеры.

Способ получения биологически активного вещества из устрицы crassostrea gigas // 2778480

Изобретение относится к фармацевтической, пищевой, косметической отраслям промышленности, а именно к способу получения биологически активного вещества из устрицы Crassostrea gigas. Способ получения биологически активного вещества из устрицы Crassostrea gigas включает получение спиртового экстракта путем экстракции сырья 96% этиловым спиртом в соотношении сырье:экстрагент 1:1 и обогащение масляного раствора витамина Ε (группы токоферолов) физиологически активными веществами, при этом в качестве сырья используют устрицы С.

Гранулированный сложный кетоновый эфир гинкобилоба и способ его получения // 2778292

Группа изобретений относится к фармацевтической промышленности, а именно к гранулированному составу из экстракта листьев гинкго билоба, способу его получения и его применению. Способ получения гранулированного состава из экстракта листьев гинкго билоба, включающий следующие стадии: А) смешивание и перемешивание экстракта листьев гинкго билоба, декстрина, порошка сахарозы, крахмала, низкозамещенной гидроксипропилцеллюлозы и аспартама в соответствии с соотношением в составе и добавление в то же время водного раствора этанола с получением мягкого материала; В) получение из мягкого материала влажных гранул с последующим высушиванием влажных гранул; и С) просеивание и выпрямление высушенных гранул, перемешивание, выпуск и расфасовка в пакеты с получением гранулированного состава из экстракта листьев гинкго билоба; где соотношение в составе в массовых частях включает следующее: 35-45 частей экстракта листьев гинкго билоба; 450-500 частей декстрина; 420-450 частей порошка сахарозы; 10-30 частей крахмала; 10-30 частей низкозамещенной гидроксипропилцеллюлозы; и 5-10 частей аспартама; причем экстракция для получения экстракта листьев гинкго билоба включает следующие стадии: а) измельчение листьев гинкго билоба с получением измельченных листьев гинкго билоба; b) добавление водного раствора этанола к измельченным листьям гинкго билоба, проведение двукратной экстракции путем нагревания с обратным холодильником и получение первого фильтрата путем фильтрования; c) добавление воды к отфильтрованному остатку лекарственного средства, оставшемуся после фильтрования, проведение однократной экстракции путем нагревания с обратным холодильником, и затем получение второго фильтрата путем фильтрования; d) объединение и концентрирование второго фильтрата и первого фильтрата в густую пасту, растворение в очищенной воде, охлаждение и фильтрование с получением фильтрата; e) загрузка фильтрата в колонку с макропористой смолой, последовательное элюирование 18% водным раствором этанола, 30% водным раствором этанола и 50% водным раствором этанола с получением 18% этанольного элюента, 30% этанольного элюента и 50% этанольного элюента, соответственно, которые являются первыми элюентами; в первых элюентах 50% этанольный элюент представляет собой первый элюент с высокой концентрацией растворителя, а объединенный раствор 18% этанольного элюента и 30% этанольного элюента представляет собой первый элюент с низкой концентрацией растворителя; f) концентрирование первого элюента с низкой концентрацией растворителя, чтобы не было запаха спирта, загрузка первого элюента с низкой концентрацией растворителя в полиамидную колонку, а затем элюирование этанолом с получением этанольного элюата, который является вторым элюатом; g) объединение и концентрирование второго элюента и первого элюента с высокой концентрацией растворителя до исчезновения запаха спирта; h) экстракция концентрата циклогексаном, отбрасывание циклогексанового экстракта, распылительная сушка концентрированного раствора или концентрирование концентрированного раствора в густую пасту и вакуумная сушка густой пасты; измельчение высушенных продуктов с получением экстракта листьев гинкго билоба; и где гранулированный состав из экстракта листьев гинкго билоба, в расчете на массу загрузки каждого пакета 1 г, удовлетворяет следующим условиям: 1) содержание рутина меньше или равно 1,60 мг/пакет; 2) содержание кверцетина меньше или равно 0,160 мг/пакет; 3) содержание билобалида составляет 1,04-2,08 мг/пакет; 4) содержание гинкголида J составляет 0,04-0,20 мг/пакет; 5) остаточное содержание этанола меньше или равно 0,2 мг/пакет; 6) содержание бифлавоноидов меньше или равно 0,008 мг/пакет, причем указанные бифлавоноиды включают аментофлавон, билобетин и гинкгетин; 7) содержание генистина равно 0, и содержание гинкголида М равно 0; 8) содержание терпеновых лактонов составляет 2,4-4,8 мг/пакет; 9) содержание общих флавоноидов составляет 14,08-26,40 мг/пакет; и 10) содержание общих флавонолгликозидов составляет 9,6-14,0 мг/пакет.

Жидкий экстракт родиолы розовой, обладающий антиоксидантным действием, и способ его получения // 2777415

Группа изобретений относится к фармацевтической промышленности, а именно к экстракту, обладающему антиоксидантной и антирадикальной активностью, и способу его получения. Способ получения жидкого экстракта родиолы розовой (Rhodiola rosea L.), обладающего антиоксидантным действием, включающий смешивание измельченных корневищ родиолы розовой с экстрагентом и экстракцию, при этом в качестве экстрагента используют эвтектическую смесь хлорида холина и глицерина в мольном соотношении 1:2 с добавлением 10-50 мас.

Способ получения хлорофиллсодержащего продукта // 2777191

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к способу получения хлорофиллсодержащего продукта. Способ получения хлорофиллсодержащего продукта включает добавление к зеленой массе листьев томата экстрагента, выбранного из 95% этанола или 80% водного ацетона, гомогенизацию полученной смеси погружным блендером, далее экстрагируют с последующим перемешиванием и настаиванием, проводят фильтрацию полученного экстракта с доведением экстрагентом до необходимого объема при определенных условиях.

Способ получения мирицитрина из коры ореха черного, обладающего нейротропной активностью // 2776898

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к способу получения мирицитрина из коры ореха черного, обладающего нейротропной активностью. Способ получения мирицитрина из коры ореха черного, обладающего нейротропной активностью, с предварительным получением водно-спиртового извлечения и использованием метода колоночной хроматографии на сорбенте, в котором извлечение получают из коры ореха черного с помощью 70%-ного этилового спирта в соотношении «сырье-экстрагент» 1:5 с применением метода дробной мацерации, полученное извлечение упаривают на роторной вакуумной установке до густого экстракта; целевое вещество элюируют смесью хлороформ - этиловый спирт 96% в соотношении 60:40, проводя контроль за разделением веществ хроматографированием в системе растворителей: хлороформ - этиловый спирт 96% - вода 26:16:3; элюаты, содержащие мирицитрин объединяют и упаривают, получая осадок, который после отделения от маточного раствора представляет готовый продукт с выходом мирицитрина 1,7% и степенью чистоты 99,5%.

Способ получения функционального продукта, обогащенного фукоксантинолом и митилоксантином // 2774887

Изобретение относится к способу получения функционального продукта, обогащенного фукоксантинолом и митилоксантином. Способ получения функционального продукта, обогащенного фукоксантинолом и митилоксантином, включает измельчение сырья из мидии М.

Способ получения авторской биологический активной фармакологической энергетической, адаптогенной, биостимулирующей эмульсионной композиции, применяемой в 1-ой половине дня, имеющей в составе: -метиксантины, -гинзенозиды a,b,c,d,f, -фарнезен, -панаксиол, -панакситриол, -элеутерозиды a,b,c,d,e,f, -камеди, -липиды, -кумарин, -салидрозид, -розин, -розавин, -розарин, -родиолин, -астрагалин, -цитраль, -геранил, -гераниол, -таннины, -схизандрин, -схизандрол, -пинены, -энантиомеры лимонена // 2774575

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения энергетической, адаптогенной, биостимулирующей эмульсионной композиции. Способ получения энергетической, адаптогенной, биостимулирующей эмульсионной композиции, характеризующийся тем, что термически обработанные бобы кофе Coffea L., листву, корни, корневища аралии манчжурской Aralia elata, женьшеня обыкновенного Panax ginseng, лимонника китайского Scisandra shinensis, элеутерококка колючего Eleutherococcus senticosus, родиолы розовой Rhodiola rosea, левзеи софлоровидной Rhaponticum carthamoides, плоды можжевельника обыкновенного Juniperus communis L., взятые в равных пропорциях, общей массой 80 г, экстрагируют дистиллированной водой объемом 0,8 л, при температуре 55°С, при воздействии пьезоэлектрическим генератором ультразвука частотой 30 кГц в течение 180 мин, с получением водной эмульсии.

Новый природный энтеросорбент на основе белково-полисахаридного комплекса бурых водорослей // 2773076

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к сорбенту на основе белково-полисахаридного комплекса бурых водорослей. Сорбент на основе белково-полисахаридного комплекса (БПК) бурых водорослей для сорбции ионов тяжелых металлов и среднемолекулярных токсикантов, обладающий активными сорбционными центрами: карбоксильными, гидроксильными, аминогруппами; развитой мезопористой структурой и способностью работать в широком диапазоне рН: от 2 до 10 ед., в состав БПК входит: маннит, легкогидролизуемые полисахариды (ЛГП), белки, соли альгиновых кислот, целлюлоза, зола, в определенном соотношении между собой.

Комплексное средство для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы // 2781387

Изобретение относится к ветеринарной фармакологии с токсикологией, а именно, к профилактическому антитоксическому и иммуномодулирующему средству, препятствующему всасыванию микотоксинов в желудочно-кишечном тракте. Заявлено комплексное средство для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы, содержащее 95 мас.% цеолита в качестве сорбента и 5,0 мас.% пчелиного подмора в качестве адаптогена.