Способ внутрибрюшинного применения медицинского озона для лечения язвенного колита

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной гастроэнтерологии. Инъецируют 5 мл озоно-кислородной смеси с концентрацией озона 1,0-1,2 мг/л внутрибрюшинно, проводят 2-6 процедур 1 раз в день. Судят о наличии лечебного эффекта в случае фиксирования заживления язв стенки кишки при гистологических исследованиях препарата толстой кишки и при статистически значимом уменьшении концентрации IL-17 в сыворотке крови по сравнению с животными группы сравнения на 6 сутки эксперимента. Способ позволяет эффективно лечить язвенный колит в эксперименте, оказывает репаративное и противовоспалительное действие. 4 ил.

 

Изобретение относится к медицине, точнее к гастроэнтерологии, и может быть использовано в комплексном лечении воспалительного заболевания кишечника (ВЗК), а именно язвенного колита (ЯК).

Воспалительные заболевания кишечника (ВЗК) - в частности, язвенный колит (ЯК) - хроническая воспалительная патология кишечника, в патогенезе которого важная роль отводится развитию аутовоспаления с наличием выраженной инфильтрацией плазматическими клетками в стенке толстого кишечника.

В связи с тем, что этиология и патогенез ЯК точно не установлен, терапия не всегда приводит к успеху. Базисная терапия препаратами в лечении ВЗК в наше время представлена производными 5-аминосалициловой кислоты (5-АСК) - сульфасалазином, салофальком или месалазином, цитостатиками, метронидазолом, антагонистом фактора некроза опухоли - инфликсимабом.

Известен способ лечения ЯК в виде внутриартериального введения в регион пораженной ободочной кишечной стенки микрокристаллической суспензии гидрокортизона. Способ обеспечивает локальное депонирование препарата и пролонгированный лечебный эффект [патент RU 2215546, 2003, https://patenton.ru/patent/RU2215546C1]. Однако известно, что гидрокортизон способен вызывать широкий спектр побочных явлений, возникающих у пациентов, что может существенно повлиять на качество их жизни. Кроме того, вместе с предложенным способом необходимо одновременное введение дезагрегантов и гепарина.

Следующий способ включает применение пробиотика бифиформа в дозе 2-3 капсулы внутрь с последующим 4-5-кратным введением мезенхимальных стволовых клеток в слизистую оболочку измененных участков кишки, в количестве 150-200 млн клеток в объеме от 0,5 до 1,5 мл. В последующем вводят бифиформ в дозе по 1 капсуле 3 раза в день в течение 3 недель [патент RU 2460554, 2012, https://patenton.ru/patent/RU2460554C1]. Недостатком данного метода является достаточно сложный способ получения и размножения мезенхимальных стволовых клеток, полученных в результате стернальной пункции донора.

Описан способ получения клинической ремиссии в течении ЯК, путем восстановления уровня сывороточного кортизола до физиологической нормы, [патент RU 2200007 С2, 2003, https://patenton.ru/patent/RU2200007C2] Пациенту вводят этимизол в таблетированной форме по 0,3 г в сутки в течение 30-40 дней либо по 0,6-0,8 г в сутки в течение 10-15 дней после предварительного определения суточных уровней утреннего и вечернего сывороточного кортизола при значении последнего ниже физиологического уровня. Способ позволяет сократить время приема глюкокортикостероидов, уменьшить нежелательные эффекты этих препаратов и избавить пациентов от "синдрома отмены". При этом данный способ не применим у пациентов с опухолями надпочечника. Кроме того, длительное применение глюкокортикостероидных препаратов способствует интенсивному размножению грибов рода Candida на всем протяжении пищеварительного тракта.

Известен следующий способ применения экстракта плаценты для инъекций, [патент RU 2328298 2008, https://patenton.ru/patent/RU2328298C1]. Больному с диагнозом язвенный колит производят лечебную клизму с экстрактом плаценты для инъекций в дозе 0.4 г/кг массы тела. На курс лечения назначают 2-3 процедуры, с интервалом 1-2 недели. Способ, основан на применении плацентарной ткани, содержащей значительное число биологически активных веществ (простагландины, пептиды, гормоны и др.), позволяет активизировать процессы репаративной регенерации в тканях, достигнуть хорошего клинического эффекта. При этом применение данного способа ограничено у пациентов с заболеваниями щитовидной железы, а также у беременных женщин.

Следующий способ для повышения эффективности лечения ЯК заключается в том, что после недельного курса комплексной медикаментозной терапии с исключением преднизолона дополнительно проводят физиотерапию, включающую интерференцию области корней легких током несущей частоты 5000-6000 Гц и модулирующей частоты 100-200 Гц, длительностью 12-15 с, причем электроды для модуляции расположены в области проекции корней легких и прикреплены к поверхности кожи с локальным разрежением 0,1-0,2 атм. [патент RU 2506100С1, 2014, https://patenton.ru/patent/RU2506100C1]. Данный способ физиотерапии имеет противопоказания: лихорадочные состояния, тромбофлебит, глаукома, травматический арахноидит с ликвородинамическими нарушениями, опухолевые заболевания, системные заболевания крови, эпилепсия, имплантированный электрокардиостимулятор, что существенно сужает группу пациентов.

Известен способ лечения ЯК путем приема новых лекарственных средств, увеличения лечебной дозы, изменения схемы терапии для устранения энергодефицита и воспалительного процесса в кишечнике, что приведет к восстановлению функциональных возможностей кишечника и всего организма. [патент RU 2165758 С1, 2001, https://patenton.ru/patent/RU2165758С1]. Длительность приема препаратов, их сочетание, а также эффективные лечебные дозы подбирались опытным путем. Экспериментально установленная оптимальная суточная доза для аминокислотного препарата Big One составляет 1,8-5,4 г, а для 5-аминосалициловой кислоты - 1,0-4,0 г, при длительности приема - 30 дней. Лечение в меньших дозах и в течение более короткого периода неэффективно, а при лечении большими дозами или более длительно улучшение уже не наступает, а могут начаться нежелательные последствия: гнилостные процессы (для Big One) и нарушение функции почек (для 5-аминосалициловой кислоты). Недостатками данного способа является достаточно широкий диапазон дозировок, для подбора оптимальной лечебной дозы, а также дороговизна препарата Big One: в пределах 3000 руб.

Существует средство на основе комплексного соединения цинка с транс-(+)-2R3R дигидрокверцетином и воска коры лиственницы сибирской и Гмелина в виде мягкой лекарственной формы для наружного применения системного действия, представляющая собой гидрофобную ректальную мазь, обладающую противовоспалительной и протекторной активностями с пробиотическим эффектом, продукты комплексной переработки биомассы лиственницы: [патент RU 2649119 С1, 2018, https://patenton.ru/patent/RU2649119С1]. Однако процесс приготовления данного средства трудоемок, а входящий в состав средства дигидрокверцетин имеет ряд противопоказаний, а именно: гиперчувствительность, тяжелая печеночная и/или почечная недостаточность, инфаркт миокарда, стенокардия, выраженный атеросклероз, глаукома, катаракта, инсульт, кома, беременность, кормление грудью.

Известен способ технический результат которого достигается тем, что больным язвенным колитом, получающим терапию глюкокортикостероидами и препаратами 5-аминосалициловой кислоты, дополнительно вводят препарат Витафлор per os по 1 капсуле, покрытой кишечнорастворимой оболочкой, два раза в день в течение периода лечения ГКС. [патент RU 2419443С1, 2011, https://patenton.ru/patent/RU2419443С1]. Недостатком данного метода является то, что препарат не активен в отношении Candida albicans, только проявляет свою антагонистическую активность в отношении грибов рода Candida, видов Candida glabrata, Candida crusei и Candida tropicalis.

Описан способ лечения обострений у больных ЯК на основе процедур комплексного физиотерапевтического лечения озоном - малая аутогемотерапия (МАГТ) с озоном. Собственная озонированная кровь при этом вводится в биологически активные точки. Схема применения аутогемоозонотерапии предложенным способом для предупреждения клинических проявлений ЯК, выраженных в выделении алой крови при дефекации, нарушении функций кишечника, болей в животе, представляет собой инъекционное введение собственной озонированной крови: - в точки V29 (парные) - по 1 мл в каждую, - в точки Е36 (парные) - по 1 мл в каждую, - в точки F8 (парные) - по 1 мл в каждую. Озонированную кровь вводят в терапевтических дозах (по 1 мл) до наступления процесса свертывания крови в шприце (допускается гепаринизация стенок шприца), распределяя ее по шести вышеприведенным точкам [патент RU 2607160 С2, 2017, https://yandex.ru/patents/doc/RU2607160C2_20170110]. Данный способ взят за прототип, однако недостатком аутогемотерапии служит недостаточная трофика кожи при заболевании ЯК, а у пациентов с сахарным диабетом риск развития инфильтрации в местах инъекций.

Изучение лечебного свойства озона проводили на модели экспериментального язвенного колита. Исследование выполнено на базе экспериментально-биологической клиники (вивария) ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России (вет. свидетельство 250 №36971962 от 11 декабря 2017 г, выдан государственной ветеринарной службой Московской области) на 105-ти крысах линии Wistar массой 250±15 г. Возраст животных был более 6 месяцев.

Эксперименты выполнялись в соответствии с нормами гуманного обращения с животными, которые регламентированы «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. №755) и №48 от 23.01.85 г. «О контроле за проведением работ с использованием экспериментальных животных», а также основывались на положениях Хельсинской Декларации Всемирной Медицинской Ассоциации от 1964 г., дополненной в 1975, 1983 и 1989 гг.), согласно протоколу, одобренному Комитетом по биомедицинской этике. Животные содержались в стандартных условиях вивария, при естественном освещении, t воздуха +20-22С и влажности 55-60%, в полипропеленовых клетках Velaz тип 3. В качестве подстилочного материала использовались опилки нехвойных пород деревьев (береза). Животные потребляли сбалансированный полнорационный комбикорм для лабораторных животных. Соответствие по содержанию питательных веществ, витаминов и минералов ГОСТ Р 50258-92. Так же был обеспечен свободный доступ к свежей воде в поилках, объемом 500,0 мл. Перед экспериментом животные прошли двухнедельный период карантина и адаптации.

Модель язвенного колита воспроизводили двухэтапным введением оксазолона («Sigma-aldrich», USA), с клинической и морфологической верификацией. Первый этап характеризовался использованием накожной сенсибилизации путем нанесения на предварительно обработанную межлопаточную область 150 мкл 3% раствора оксазолона. На втором этапе внутрибрюшинно вводили на глубину 7 см 3% раствор оксазолона. Исследование проводили на 2, 4 и 6 сутки. При моделировании язвенного колита экспериментальным животным ежедневно внутрибрюшинно вводили 5 мл озонокислородной смеси 1 раз в сутки в дозе 1,0-1,2 мг/л

Для проведения лечения медицинский озон получают на специальных установках-озонаторах - ex temporo. Установка озонотерапевтическая автоматическая с деструктором озона УОТА-60-01-«Медозон» (ООО «МЕДОЗОН», Москва), пластиковый контейнер 1000 мл, Germany, «Dora», регистрационный № ФСЗ 2011/10918-2011. Забор крови для исследования осуществлялся под общим наркозом (препарат «Золетил-100» (МНН: тилетамина гидрохлорид, «Virbac Sante Animale», Франция) в дозе 20 мг/кг). Забор крови осуществлялся пункцией сердца в левый желудочек в вакуумные пробирки «Vacuette» («Greiner Bio-Оnе», Австрия) с антикоагулянтом (К3 ЭДТА или гепарин) для иммунологических исследований.

Технический результат осуществляется за счет воздействия озона, вводимого внутрибрюшинно в виде озонокислородной смеси определенным способом. Концентрация озона 1,0-1,2 мг/л разработаны специально для лечения экспериментального язвенного колита.

Способ осуществляется следующим образом:

1. Забор озонокислородной смеси производится непосредственно из клапана озонатора, вначале в специальный пластиковый мешок, а затем в шприц объемом 20 мл.

2. Животное фиксируют головой вниз. Заднюю лапу со стороны введения иглы вытягивают (у мелких животных вытягивают и прижимают к пинцету, зафиксированному на коже между ушей). Для этой манипуляции берут короткие иглы диаметром меньше 22G с тупым концом. В нижней трети живота, отступя от средней линии влево (справа мочевой пузырь), прокалывают одновременно кожу, мускулатуру и брюшину (при проколе ощущается специфический треск). Иглу вводят почти в горизонтальном положении (под углом 10-15°) на глубину 0,3-0,5 см, а затем вместе со шприцем переводят в перпендикулярное положение и медленно инъецируют ОКС с концентрацией озона в смеси 1,0-1,2 мкг/мл. Всего проводят 2-4-6 процедур, 1 раз в день.

В предлагаемом способе внутрибрюшинное введение ОКС используется впервые.

При внутрибрюшинном введении абсорбция вещества происходит медленнее, чем при внутривенной инъекции, однако поскольку основной путь всасывания - в брыжеечные сосуды, которые стекают в воротную вену и проходят через печень, то внутрибрюшинная доставка считается парентеральным путем введения и фармакокинетика веществ, вводимых внутрибрюшинно, подвергаются метаболизму в печени, прежде чем попадут в системный кровоток.

Лечебный эффект внутрибрюшинного введения озона и препарата сравнения оценивался на 2, 4 и 6 сутки эксперимента по результатам общеклинического наблюдения за животными (поведение животных, вес до и после), лабораторных данных (общий анализ крови, оценка фагоцитарной системы крови), гистологического исследования препаратов толстой кишки, бактериологического исследования качественного и количественного состава пристеночной микрофлоры толстой кишки.

Полученные результаты свидетельствуют о выраженном противовоспалительном и иммуномодулирующем эффекте медицинского озона, что дает возможность рекомендовать его в качестве одного из актуальных направлений терапии язвенного колита.

Репаративный эффект иллюстрируется рисунками 1 и 2. На рисунке 1 представлена морфология очага повреждения на 6 сутки экспериментального колита, где отчетливо видна язва стенки кишки, очаг некроза слизистой оболочки кишечника, отек, кровоизлияния, выраженная лимфоцитарная инфильтрация с примесью плазмоцитов и большим количеством эозинофилов. Рисунок 2 иллюстрирует морфологию очага повреждения на 6 сутки язвенного колита на фоне внутрибрюшинного введения озонокислородной смеси, где фиксируется заживление язв стенки кишки. Таким образом, на примере морфологии стенки кишки можно судить о положительном влиянии озонотерапии на процесс репарации язвенного дефекта, уменьшение выраженности лимфогранулоцитарной инфильтрации.

Противовоспалительный эффект озонотерапии доказывает исследование концентрации IL-17 в сыворотке крови. Результаты исследования иллюстрируются фигурами 1 и 2. Увеличение концентрации IL-17 в сыворотке крови на 2 сутки эксперимента отчетливо видно на фигуре 1, в то время как применение озонокислородной смеси внутрибрюшинно приводит к статистически значимому уменьшению концентрации IL-17 в сыворотке крови на 6 сутки эксперимента. Исходя из полученных данных можно судить о наличии противовоспалительного и иммунномодулирующего эффектов при озонотерапии.

Способ оценки лечения язвенного колита воздействием медицинского озона в эксперименте, характеризующийся тем, что инъецируют 5 мл озоно-кислородной смеси с концентрацией озона 1,0-1,2 мг/л внутрибрюшинно, проводят 2-6 процедур 1 раз в день; судят о наличии лечебного эффекта в случае фиксирования заживления язв стенки кишки при гистологических исследованиях препарата толстой кишки и при статистически значимом уменьшении концентрации IL-17 в сыворотке крови по сравнению с животными группы сравнения на 6 сутки эксперимента.