Способ оценки качества криоконсервированной спермы жеребцов по концентрации холестерина в семенной плазме

Изобретение относится к коневодству и может быть использовано для отбора жеребцов с высоким качеством криоконсервированной спермы. Способ оценки качества криоконсервированной спермы жеребцов по концентрации холестерина в семенной плазме включает отбор спермы и получение спермоплазмы. Далее в семенной плазме определяют концентрацию холестерина. При концентрации холестерина в семенной плазме ниже 0,18 ммоль/л жеребца следует относить к группе с высоким качеством криоконсервированной спермы, при концентрации холестерина в семенной плазме выше 0,18 ммоль/л, соответственно, к группе с низким качеством криоконсервированной спермы. 2 табл.

 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Изобретение относится к области животноводства, в частности к коневодству и может быть использовано для отбора жеребцов с высоким качеством криоконсервированной спермы.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Холестерин относится к липидам, он циркулирует в крови и используется в качестве строительного компонента для всех клеток организма (Багорова, Н.В. Холестерин и его влияние на организм / Н.В. Багорова // Инновационная наука. - 2017. - №2. - С.209-210.). Известно, что это вещество является важным компонентом клеточных биомембран и, выполняя структурную и функциональную роль, оно влияет на клеточное деление, активность белковых рецепторов плазматических мембран и мембрансвязанных ферментов, стабильность сывороточных липопротеидов и транспортных структур желчи (Тюрюмин, Я.Л. Физиология обмена холестерина / Я.Л. Тюрюмин, В.А. Шантуров, Е.Э. Тюрюмина // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2012. - Т. 84, №2. - С.153-158.). Холестерин также является одним из факторов стабильности мембран сперматозоидов, способствующим их сохранности и адекватной подвижности (Гусякова, О.А. Метаболические характеристики спермальной плазмы с различным числом сперматозоидов / О.А. Гусякова, В.М. Радомская, С.И. Мурский, А.И. Габрильчак, Г.В. Тукманов // Лабораторная служба. - 2008. - Т. 7, №1. - С. 15-19.).

Ближайшим аналогом (прототипом) заявляемого способа является способ оценки качества спермы жеребцов по активности креатинфосфокиназы в сыворотке крови (Заявка №2021128712/14(060850), МПК G01N 33/49, A61D 99/00 (2006.01); заявл. 30.09.2021; Способ оценки качества спермы жеребцов по активности креатинфосфокиназы в сыворотке крови / М.М. Атрощенко, А.И. Синякина, A.M. Зайцев, В.В. Калашников, А.А. Незаленова, А.А. Дацышин, М.Г. Енгалычева, A.M. Шитикова, О.В. Широкова; заявитель ФГБ-НУ "ВНИИ коневодства".), в котором в качестве критерия для оценки качества спермы используют уровень активности креатинфосфокиназы в сыворотке крови. При уровне активности креатинфосфокиназы в сыворотке крови выше 178 МЕ/л жеребца относят к группе с высоким качеством спермы, а при уровне активности креатинфосфокиназы в сыворотке крови ниже 178 МЕ/л, соответственно, к группе с низким качеством спермы.

Недостатком этого способа является то, что он не дает возможности оценить качество криоконсервированной спермы жеребцов.

Мы поставили задачу изучить влияние концентрации холестерина в семенной плазме на качество криоконсервированной спермы жеребцов, оценив количественно значение предельно допустимой концентрации (ПДК) холестерина в ней. А затем выяснить, какая связь существует между концентрацией холестерина в семенной плазме и качеством криоконсервированной спермы.

Предлагаемый нами способ оценки качества криоконсервированной спермы жеребцов по концентрации холестерина в семенной плазме позволит это сделать, не прибегая к процедуре криоконсервации и последующему оттаиванию спермы, а также избежать проведения световой микроскопии для оценки морфологических показателей эякулята.

РАСКРЫТИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Образцы спермы, предназначенной для исследования (n равно 32), получают используя известную методику (Науменкова, В.А. Рекомендации по взятию, разбавлению и замораживанию спермы жеребцов / В.А. Науменкова. - Дивово: «Изд-во ВНИИ коневодства», 2006. - 23 с. Далее - Рекомендации). После этого, каждый эякулят оценивают по следующим показателям: объем эякулята, концентрация сперматозоидов.

Затем одну часть эякулята подвергают процедуре криоконсервации - оттаивания, после чего оценивают выживаемость сперматозоидов при Т 2-4°С и определяют количество морфологически нормальных сперматозоидов в сперме, подвергшейся криоконсервации.

Для получения спермоплазмы другую часть эякулята сразу же после получения спермы центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин с помощью центрифуги ELMI СМ-6М (SIA ELMI, Латвия). После световой микроскопии супернатанта, аликвоты семенной плазмы, свободные от сперматозоидов, замораживают при температуре -18°С до проведения исследований.

Определение концентрации холестерина в семенной плазме проводят на биохимическом анализаторе AU 680 (Beckman Coulter, США). Используя полученные результаты и известные рекомендации (Назаренко, Г.И. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований / Г.И. Назаренко, А.А. Кишкун. - М.: Медицина, 2002. - 544 с.), рассчитывают ПДК холестерина в семенной плазме жеребцов в границах 50 процентиля репрезентативной выборки. Оказалось, что ПДК холестерина в семенной плазме жеребцов равна 0,18 ммоль/л.

Затем животных распределяют по группам. В первую группу попали жеребцы со значением концентрации холестерина в семенной плазме больше 0,18 ммоль/л, во вторую группу, соответственно, меньше 0,18 ммоль/л.

Как видно из полученных данных, жеребцы с концентрацией холестерина в семенной плазме меньше 0,18 ммоль/л превосходили по количеству морфологически нормальных сперматозоидов в криоконсервированной сперме на 19,22% аналогов из группы с большим значением данного показателя (Р не больше 0,01).

Известно, что в сперме жеребцов после криоконсервации - оттаивания, морфологически нормальных сперматозоидов должно быть не менее 80% (Рекомендации). В этом случае сперма считается качественной, т.е. пригодной для искусственного осеменения. Следовательно, криоконсервированную сперму, в которой количество морфологически нормальных сперматозоидов после оттаивания равно этому значению или бюлыпе, можно смело относить к группе с высоким уровнем качества.

На основании результатов нашего эксперимента можно сделать следующее заключение - при значениях концентрации холестерина в семенной плазме меньше 0,18 ммоль/л, отмечается высокий уровень морфологически нормальных сперматозоидов в криоконсервированной сперме.

ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Применимость предлагаемого способа была проверена в условиях Терского племенного конного завода №169 Ставропольского края.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

Производят отбор образцов спермы жеребцов и оценивают каждый по следующим показателям: объем эякулята, концентрация сперматозоидов.

Затем получают спермоплазму. Для этого часть эякулята, полученного от каждого жеребца, сразу же после отбора образцов спермы, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут с помощью центрифуги ELMI СМ-6М (SIA ELMI, Латвия). Проводят световую микроскопию супернатанта, чтобы убедиться в отсутствии сперматозоидов.

Полученные аликвоты семенной плазмы оценивают по концентрации холестерина на биохимическом анализаторе AU 680 (Beckman Coulter, США).

Одновременно, для контроля, оценивают выживаемость сперматозоидов при Т 2-4°С и определяют количество морфологически нормальных сперматозоидов в криоконсервированной сперме, предварительно подвергнув другую часть каждого эякулята процедуре криоконсервации - оттаивания.

Вывод: при концентрации холестерина в семенной плазме меньше 0,18 ммоль/л жеребца относят к группе с высоким качеством криоконсервированной спермы, а при концентрации холестерина в семенной плазме больше 0,18 ммоль/л, соответственно, к группе с низкой.

Таким образом, при практическом использовании предлагаемого способа, для определения качества криоконсервированной спермы жеребцов, не нужно оценивать выживаемость сперматозоидов при Т 2-4°С и знать количество морфологически нормальных сперматозоидов в ней, а достаточно определить уровень концентрации холестерина в семенной плазме.

Способ оценки качества криоконсервированной спермы жеребцов по концентрации холестерина в семенной плазме, включающий определение концентрации холестерина в семенной плазме, отличающийся тем, что при концентрации холестерина в семенной плазме меньше 0,18 ммоль/л жеребца относят к группе с высоким качеством криоконсервированной спермы, при концентрации холестерина в семенной плазме больше 0,18 ммоль/л, соответственно, к группе с низким качеством криоконсервированной спермы.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, перинатологии и клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для прогнозирования перинатальных поражений центральной нервной системы у доношенных новорожденных. Проводят определение концентрации нейронспецифической енолазы, концентрации лактата в сыворотке венозной крови из артерии пуповины, общей активности креатинкиназы, активности МВ-креатинкиназы.
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для превентивной диагностики риска снижения уровня здоровья девушек подросткового возраста. Определяют уровень магния эритроцитов (ммоль/л) и уровень матриксной металлопротеиназы IX (нг/мл) в сыворотке крови.
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для превентивной оценки риска снижения уровня здоровья юношей подросткового возраста. Проводят исследование капиллярной крови и количественное определение с помощью спектрофотометра степени гемолиза эритроцитов.
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для превентивной оценки риска снижения уровня здоровья юношей подросткового возраста. Проводят исследование капиллярной крови и количественное определение с помощью спектрофотометра степени гемолиза эритроцитов.

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, экологии и может быть использовано для диагностики у детей хронических лимфопролиферативных заболеваний носоглотки, ассоциированных с сочетанным воздействием химических факторов атмосферного воздуха и персистирующей герпес-вирусной инфекции.

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, экологии и может быть использовано для диагностики у детей хронических лимфопролиферативных заболеваний носоглотки, ассоциированных с сочетанным воздействием химических факторов атмосферного воздуха и персистирующей герпес-вирусной инфекции.

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии и судебно-медицинской экспертизе, и может быть использовано для диагностики травматической дисфункции эндотелия при сочетанной шокогенной травме. На ранних этапах оказания медицинской помощи проводят сочетанный анализ биомеханики травматического воздействия клинического случая, вычленяя категории пострадавших с наличием сформированных условий гидродинамического удара в аорте в момент травмы: категория пострадавших от высокоэтажного падения - выше 3-го этажа, с первичным соударением тазово-поясничной, ягодичной областью, категория пострадавших - водитель и пассажир переднего сиденья, в первую очередь фиксированных ремнем безопасности, при дорожно-транспортных происшествиях при скорости движения автомобиля не менее 40 км/ч, категория пострадавших - пешеход, наезд автомобиля, с первичной областью приложения травмирующей силы в области бедер и ягодиц с последующим забрасыванием тела на капот автомобиля, при дорожно-транспортных происшествиях при скорости движения автомобиля не менее 40 км/ч.

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии и судебно-медицинской экспертизе, и может быть использовано для диагностики травматической дисфункции эндотелия при сочетанной шокогенной травме. На ранних этапах оказания медицинской помощи проводят сочетанный анализ биомеханики травматического воздействия клинического случая, вычленяя категории пострадавших с наличием сформированных условий гидродинамического удара в аорте в момент травмы: категория пострадавших от высокоэтажного падения - выше 3-го этажа, с первичным соударением тазово-поясничной, ягодичной областью, категория пострадавших - водитель и пассажир переднего сиденья, в первую очередь фиксированных ремнем безопасности, при дорожно-транспортных происшествиях при скорости движения автомобиля не менее 40 км/ч, категория пострадавших - пешеход, наезд автомобиля, с первичной областью приложения травмирующей силы в области бедер и ягодиц с последующим забрасыванием тела на капот автомобиля, при дорожно-транспортных происшествиях при скорости движения автомобиля не менее 40 км/ч.

Изобретение относится к медицине, а именно к эпидемиологии, и может быть использовано для оценки вероятности снижения гуморального иммунитета к коклюшу у детей-школьников, ассоциированного с комплексным воздействием вредных химических факторов среды обитания, особенностей питания и образа жизни. Выполняют определение токсикологических и лабораторных прогностических показателей у ребенка.

Изобретение относится к медицине, а именно к эпидемиологии, и может быть использовано для оценки вероятности снижения гуморального иммунитета к коклюшу у детей-школьников, ассоциированного с комплексным воздействием вредных химических факторов среды обитания, особенностей питания и образа жизни. Выполняют определение токсикологических и лабораторных прогностических показателей у ребенка.

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, терапии, и может быть использовано для прогнозирования риска перехода нетяжелой формы пневмонии в тяжелую. Прогноз тяжести пневмонии ПТП определяют по формуле ПТП=1,2967×КПС-0,7124×Т-1,7345×K++1,0284×Ф-0,1707, где КПС - количество пораженных сегментов легких по результатам лучевых методов диагностики; Т - тестостерон венозной крови, нмоль/л; K+ - калий венозной крови, ммоль/л; Ф - фибриноген венозной крови, г/л.
Наверх