Способ подавление роста бактериальной микрофлоры у коров с субклиническим маститом

Авторы патента:

Смоловская Оксана Владимировна (RU)

Зубова Татьяна Владимировна (RU)

Плешков Владимир Александрович (RU)

Семечкова Анна Вячеславовна (RU)

A61K33/38 - серебро; его соединения

Владельцы патента RU 2784728:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кузбасская государственная сельскохозяйственная академия" (RU)

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к ветеринарной медицине, а именно к способу лечения субклинического мастита у коров. Способ позволяет осуществить подавление роста бактериальной микрофлоры у коров с субклиническим маститом. При этом коровам с субклиническим маститом внутрицистернально вводят фитораствор на основе порошкообразного экстракта лекарственного растения Тимьяна ползучего (Thymus serpyllum L.) в разведении 1:4 два раза в сутки с интервалом 12 часов в течение 3 дней. Введение фитораствора на основе порошкообразного экстракта чабреца способствует более быстрому выздоровлению животных без применения препаратов, содержащих антибиотики. 4 табл.

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к ветеринарной медицине, а именно к способу лечения скрытого (субклинического) мастита у коров.

Мастит является наиболее распространенным заболеванием молочных животных, наносит огромный экономический ущерб молочной промышленности. Мастит является серьезной экономической и медицинской проблемой, связанной со стадами молочных коров, и является основной причиной чрезмерной выбраковки.

Наиболее часто применяют следующие способы лечения скрытого мастита у коров: Мастисан А - комплексный препарат, состоящий бензилпенициллина, стрептомицина, норсульфазола или сульфадимезина, растительного или вазелинового масла.

В состав препарата Мастисан Б входят неомицин, сульфадимезин, метилурацил, диастарат полиглицерин, вазелиновое масло.

Суспензия из эритромицина и сульфадимезина входят в состав препарата Мастисан Е.

В состав Мастицида входят пенициллин, стрептомицин, сульфадимизин и норсульфазол в растительном масле.

Дифурол А - препарат, содержащий фурагин, фуразолидон, полиэтиленоксид - 400 и димексид.

Антибиотики, такие как пенициллин, цефалоспорин, стрептомицин и тетрациклин, используются для лечения и профилактики заболеваний, поражающих молочных коров, вызванных различными грамположительными и грамотрицательными бактериями. Антибиотики часто регулярно вводят целым стадам, чтобы предотвратить мастит.Увеличение заболеваемости в стаде, как правило, приводит к увеличению использования противомикробных препаратов, что, в свою очередь, увеличивает потенциал остатков антибиотиков в молоке и потенциал повышения устойчивости бактерий к противомикробным препаратам.

Также известен способ профилактики и лечения мастита у коров (патент RU 2201756, опубл. 10.04.2003) по методике которого предлагается введение в сосковый канал антимикробного средства (озонированное рафинированное дезодорированное растительное масло) с кислородом.

Недостатком данного способа является то, что препарат применяется только для коров в период сухостоя.

Предложен способ введения тканевого препарата (патент RU 2201758, опубл. 10.04.2003), который обладает иммуномодулирующим действием, состоящий из фильтрата экстракта молочной железы здоровых животных, стабилизированных маннитом.

Недостатком способа является то, что препарат готовят самостоятельно (кустарно) в лабораториях и на мясокомбинатах, в результате чего препарат различается по биологической активности и, естественно, эффективности.

Согласно патенту RU 2320325, опубл. 27.03.2008 предусматривается введение комплексного препарата, состоящего из 2%-раствора новокаина, АСД фракции-2, димексида и 40% раствора глюкозы. К недостаткам данного способа относится низкая эффективность предложенного препарата, длительность лечения мастита.

Патент RU 2463995, опубл. 20.10.2012 является наиболее близким аналогом, который предусматривает лечение субклинического мастита у коров с помощью препарата растительного происхождения - календулы и адаптогена - Лигфола. Недостатком данного способа является трудоемкость приготовления и хранения растительного сырья.

Техническим результатом настоящего изобретения является подавление роста бактериальной микрофлоры у коров с субклиническим маститом.

Технический результат достигается тем, что коровам с субклиническим маститом внутрицистернально вводят фитораствор на основе порошкообразного экстракта лекарственного растения Тимьяна ползучего (Thymus serpyllum L.) (чабрец) в разведении 1:4 для подавления роста бактериальной микрофлоры у коров с субклиническим маститом.

Экстракт чабреца обладает антибактериальной активностью в отношении грамположительных (Streptoccocus faecalis) и грамотрицательных (Escherichia coli) микроорганизмов.

Способ осуществляется следующим образом.

Для инокуляции использовали микробные взвеси (Streptoccocus faecalis, Escherichia coli выделенные из молока коров, больных маститом).

Для определения чувствительности экстракта чабреца к штаммам микроорганизмов применяли метод серийных разведений в бульоне. Тестировали в объеме 2 см³каждого разведения экстракта чабреца с конечной концентрацией исследуемых микроорганизмов 1×10⁶ КОЕ/мл.

Питательный бульон (МПБ) для определения чувствительности разливали по 2,0 см³ в каждую пробирку. Количество пробирок определяли из необходимого диапазоном разведений чабреца (шесть штук) и увеличили на две пробирки для постановки контролей (контроль на рост культуры - МПБ с культурой без чабреца; контроль на чистоту (стерильность) бульона - МПБ (без чабреца и без культуры).

Для определения необходимой максимальной концентрации фитораствора в ряду серийных разведений использовался исходный образец порошкообразного экстракта чабреца. Разводили 1:1 (10 г экстракта+10 мл стерильной дистиллированной воды).

Исходный раствор экстракта чабреца, разведенный 1:1 в количестве 2,0 см³ при помощи микропипетки со стерильным наконечником, вносили в первую пробирку ряда, содержащую 2,0 см³ МПБ. Тщательно перемешивали и новым стерильным наконечником переносили 2,0 см³ раствора экстракта чебреца в МПБ из первой пробирки во вторую пробирку, содержавшую первоначально также 2,0 см³ МПБ. Эту процедуру повторяли, пока не приготовили необходимый ряд разведений, состоящий из восьми пробирок. Из последней пробирки 2,0 см³ взвеси удаляли.

Таким образом, получили ряд пробирок с растворами чабреца, концентрации которых отличаются в соседних пробирках в 2 раза.

Для этой цели использовали свежие 16-18-часовые агаровые культуры, которые для приготовления взвеси, вносили в стерильный 0,9%-ный водный раствор натрия хлорида. Делали взвесь по стандарту мутности 10 ЕД (в 1 мл культуры концентрация микробных клеток 10⁹). В первую пробирку, содержащую 10 мл МПБ, вносили 0,1 мл культуры с концентрацией микробных клеток 10⁹ (получив концентрацию микробных клеток в 1 мл 10⁷). Содержимое перемешивали и 1 мл переносили во вторую пробирку с 9 мл питательной среды МПБ для приготовления конечного инокулюма (в 1 мл культуры концентрация микробных клеток составила 10⁶, то есть в 1 мл среды будет 100 тыс.микробных клеток). Таким образом, конечная концентрация микроорганизма в каждой пробирке достигнет 1·10⁶ КОЕ/мл (100 тыс.микробных клеток в 1 мл среды)

Пробирки закрывали стерильными ватно-марлевыми пробками. Все пробирки с тестируемыми штаммами, и пробирки с контролями, инкубировали в термостате при обычной атмосфере при температуре 37°С в течение 16-18 часов.

Для определения наличия роста микроорганизмов пробирки с посевами просматривали в проходящем свете, отмечая пробирку, в которой отсутствует рост.Рост культур в присутствии чабреца сравнивали с контрольной пробиркой МПБ без засеянного в нее микроорганизма и разведения чабреца. При отсутствии роста культур в контрольных пробирках с МПБ (без чабреца и культуры), и при росте культур (в пробирке с культурой, но без чабреца) определяли МПК по наименьшей концентрации чабреца, которая подавляет видимый рост микроорганизма в разведениях.
При постановке методов серийных разведений в бульоне проводили контроль роста культур в питательных бульонах без чабреца. Также контролировали чистоту суспензии микроорганизмов, использованных для инокуляции, путем высева на неселективные среды (МПБ, МПА).

Рост культур в МПБ во взвесях с чабрецом контролировался микроскопией - окраска мазков по Грамму и высевом на плотные питательные среды (среда Эндо для кишечной палочки; среда МИС для стрептококка).

Таблица 1- Результаты опыта
Степень разведения	Бактериальные культуры	контроль МПБ с культурой без чабреца	контроль МПБ чабреца и без культуры
1:2	1:4	1:8	1:16	1:32	1:64
-	-	+	+	+	+	Escherichia coli	+	-
-	-	-	-	+	+	Enterococcus faecalis	+	-

(+) - реакция положительная (есть рост бактериальной микрофлоры)

(-) - реакция отрицательная (нет роста бактериальной микрофлоры)

Таким образом, оптимальным для подавления роста бактериальных культур Escherichia coli и Enterococcus faecalis является разведение 1:4.

Сущность способа поясняется примерами.

Для подтверждения эффективности предлагаемого способа были проведены опыты по изучению влияния фитораствора на основе порошкообразного экстракта чабреца с целью подавления роста бактериальной микрофлоры у коров с субклиническим маститом.

Научно-хозяйственный опыт проводили на коровах черно-пестрой породы. В опыт было отобрано 12 коров по принципу аналогов, больных скрытой формой мастита, у каждого животного было поражено по одной доле вымени.

Диагноз на скрытый мастит у коров устанавливали на основании отсутствия у них клинически выраженных признаков воспаления вымени и положительных реакций молока с 2%-ным раствором мастидина. С целью исключения раздражения вымени исследования молока повторяли через 3 суток.

С целью установления чувствительности к антибиотикам выделенных из проб молока культур использовался метод диффузии в агар с применением дисков содержащих антибиотики.

Таблица 2 - Чувствительность к Escherichia coli Экспертиза №1Н
№	Диск антибиотика	Зона, мм	Срок годности	№	Диск антибиотика	Зона, мм	Срок годности
1	Ампициллин	21	сер. 16 до 05.2022	16	Тетрациклин	27	сер.030321 до 03.2022
2	Амоксициллин	20	сер. 6 до 05.2022	17	Норфлоксацин	30	сер.050520 до 11.2021
3	Оксациллин	-	сер.010121 до 12.2022	18	Левофлоксацин	31	сер. 15 до 04.2022
4	Имипенем	30	сер. 11 до 12.2021	19	Левомицетин	-	сер. 14 до 04.2022
5	Цефалексин	24	сер. 10 до 03.2022	20	Линкомицин	-	сер. 15 до 04.2022
6	Цефуроксим	20	сер. 14 до 04.2022	21	Фурагин	26	сер. 10 до 11.2021
7	Цефотаксим	26	сер. 14 до 05.2022	22	Кларитромицин	-	сер.060621 до 12.2022
8	Цефтазидим	22	сер. 17 до 03.2022	23	Олеандомицин	-	сер.030321 до 03.2022
9	Эритромицин	-	сер. 11 до 04.2022	24	Рокситромицин	-	сер.010121 до 07.2022
10	Стрептомицин	23	сер.010121 до 01.2022	25	Цефтриаксон	30	сер.030321 до 03.2022
11	Гентамицин	20	сер. 19 до 03.2022	26	Меропенем	27	сер. 17 до 03.2022
12	Амикацин	21	сер. 17 до 04.2022	27	Энрофлоксацин	28	сер.070721 до 07.2022
13	Тобрамицин	20	сер. 17 до 04.2022	28	Нитроксолин	21	LOT 0000456548 до 10.2022
14	Доксициклин	20	сер. 11 до 03.2022	29	Фосфомицин	36	сер.010121 до 01.2022
15	Ципрофлоксацин	23	сер. 14 до 05.2022	30	Ломефлоксацин	22	сер.050520 до 05.2022

Таблица 3 - Чувствительность к Enterococcus faecalis Экспертиза №1Н+2Н
№	Диск антибиотика	Зона, мм	Срок годности	№	Диск антибиотика	Зона, мм	Срок годности
1	Ампициллин	26	сер. 16 до 05.2022	16	Тетрациклин	-	сер.030321 до 03.2022
2	Амоксициллин	26	сер. 6 до 05.2022	17	Норфлоксацин	21	сер.050520 до 11.2021
3	Оксациллин	-	сер.010121 до 12.2022	18	Левофлоксацин	25	сер. 15 до 04.2022
4	Имипенем	26	сер. 11 до 12.2021	19	Левомицетин	-	сер. 14 до 04.2022
5	Цефалексин	-	сер. 10 до 03.2022	20	Линкомицин	-	сер. 15 до 04.2022
6	Цефуроксим	-	сер. 14 до 04.2022	21	Фурагин	25	сер. 10 до 11.2021
7	Цефотаксим	-	сер. 14 до 05.2022	22	Кларитромицин	21	сер.060621 до 12.2022
8	Цефтазидим	-	сер. 17 до 03.2022	23	Олеандомицин	20	сер.030321 до 03.2022
9	Эритромицин	21	сер. 11 до 04.2022	24	Рокситромицин	20	сер.010121 до 07.2022
10	Стрептомицин	-	сер.010121 до 01.2022	25	Цефтриаксон	20	сер.030321 до 03.2022
11	Гентамицин	-	сер. 19 до 03.2022	26	Меропенем	20	сер. 17 до 03.2022
12	Амикацин	-	сер. 17 до 04.2022	27	Энрофлоксацин	28	сер.070721 до 07.2022
13	Тобрамицин	-	сер. 17 до 04.2022	28	Нитроксолин	-	LOT 0000456548 до 10.2022
14	Доксициклин	-	сер. 11 до 03.2022	29	Фосфомицин	20	сер.010121 до 01.2022
15	Ципрофлоксацин	26	сер. 14 до 05.2022	30	Ломефлоксацин	21	сер.050520 до 05.2022

Был проведен анализ полученных данных, в результате которого, был выбран антибиотик Энрофлоксацин, имеющий наибольшую зону задержки роста (28 мм) для обоих культур Escherichia coli и Enterococcus faecalis. Действующее вещество Энрофлоксацин входит в состав лекарственного препарата Энрофлон-гель.

Были сформированы 2 группы (контрольная и опытная).

В контрольной группе проводили лечение Энрофлон-гелем (шприц 7,5 г), согласно инструкции для интрацистернального применения, в состав лекарственного препарата входит: 300 мг энрофлоксацина и 50 мг кетопрофена.

Таблица 4 - Результаты опыта
Группа	Схема лечения	День диагностики (от начала лечения)
3-ий день	4-ий день	5-ий день
Контрольная	Энрофлон-гель интрацистернально 7,5 г два раза в сутки с интервалом 12 часов	+	+	-
Опытная	Фитораствор на основе порошкообразного экстракта Тимьяна ползучего (разведение 1:4), интрацистернально 10 мл два раза в сутки с интервалом 12 часов	+	-	-

Примечание:+положительная реакция; - отрицательная реакция с 2%-ным раствором мастидина.

Таким образом, интрацистернальное применении фитораствора на основе порошкообразного экстракта чабреца в разведении 1:4 у коров с субклиническим маститом (опытная группа) подавляло рост микроорганизмов на 3-е сутки введения препарата по сравнению с контрольной группой, где положительный результат наблюдали на 5-й день применения препарата Энрофлон-геля.

Способ подавления роста бактериальной микрофлоры у коров с субклиническим маститом, характеризующийся тем, что коровам с субклиническим маститом внутрицистернально вводят фитораствор на основе порошкообразного экстракта лекарственного растения Тимьяна ползучего (Thymus serpyllum L.) в разведении 1:4 два раза в сутки с интервалом 12 часов в течение 3 дней.

Изобретение относится к области медицины, а именно к сексологии и андрологии, и предназначено для коррекции сексуальной дисфункции у женщин, а также повышения сексуальной активности и усиления либидо. Композиция для наружного применения, предназначенная для коррекции сексуальной дисфункции у женщин, содержащая нитрат серебра, горчичное масло, ароматический компонент, вазелиновую основу и воду, при следующем соотношении компонентов, мас.%: нитрат серебра – 0,3, горчичное масло – 2, ароматическое масло – 9,2, вазелин – 80, вода – 8,5.

Наночастицы для применения в повышении работоспособности головного мозга или в лечении стресса // 2782384

Группа изобретений относится к области медицины. Раскрыто применение наночастицы или агрегата наночастиц и композиции на их основе для улучшения обучения, запоминания и внимания у субъекта, где материал наночастицы или агрегата наночастиц выбран из проводникового материала, выбранного из Tl, Po, Ag, Pd, Ir, Pt и/или Au, и органического материала, имеющего смежные sp2-гибридизированные углеродные центры в своей структуре, и изоляционного материала, выбранного из La2O3, SiO2, SnO2, Ta2O5, ReO2, ZrO2, HfO2, Y2O3 и алмазоподобного углерода, где i) медианный размер ядра наночастицы или агрегата наночастиц популяции составляет по меньшей мере 30 нм, когда материал представляет собой проводниковый материал, где ii) ядро наночастицы или агрегата наночастиц покрыто биосовместимым покрытием, обеспечивающим отрицательный поверхностный заряд, где iii) наночастицы или агрегаты наночастиц не используются в качестве носителя терапевтического соединения или лекарственного средства и где iv) биосовместимое покрытие, обеспечивающее отрицательный поверхностный заряд, выбирают из фосфата, дикарбоновой кислоты, янтарной кислоты или сульфата.

Применение растительного экстракта в качестве активного агента в процессах реэпителизации и цикатризации ткани // 2782198

Группа изобретений относится к фармацевтической промышленности, а именно к применению средства в качестве реэпителизирующего и заживляющего агента для лечения повреждений ткани. Применение экстракта надземных частей Salvia haenkei в качестве реэпителизирующего и заживляющего агента для лечения повреждений ткани.

Способ гемостатического лифтинга тканей полых органов при эндоскопических хирургических вмешательствах // 2781337

Изобретение относится к медицине, а именно к эндоскопии и хирургии. Вокруг образования осуществляют подслизистое введение смеси раствора желатина и раствора индигокармина 0,4% с помощью эндоскопического инъектора через канал эндоскопического ножа.

Наночастицы для применения для лечения неврологического расстройства // 2779758

Группа изобретений относится к области медицины. Раскрыто применение наночастицы или агрегата наночастиц для профилактики или лечения неврологического заболевания или по меньшей мере одного его симптома у субъекта без воздействия на наночастицу или агрегат наночастиц электрического поля или любого другого внешнего источника активации, где материал наночастицы или агрегата наночастиц выбран из проводникового материала, выбранного из Tl, Po, Ag, Pd, Ir, Pt и/или Au и органического материала, имеющего смежные sp2-гибридизированные углеродные центры в своей структуре; и изоляционного материала, выбранного из Al2O3, LaAlO3, La2O3, SiO2, SnO2, Ta2O5, ReO2, ZrO2, HfO2 и алмазоподобного углерода, где i) медианный размер ядра наночастицы или агрегата наночастиц популяции составляет по меньшей мере 30 нм, когда материал представляет собой проводниковый материал, и где ii) ядро наночастицы или агрегата наночастиц покрыто биосовместимым покрытием, где iii) биосовместимое покрытие, обеспечивающее отрицательный поверхностный заряд, выбирают из фосфата, дикарбоновой кислоты, янтарной кислоты или сульфата, и биосовместимое покрытие, обеспечивающее нейтральный поверхностный заряд, выбирают из агента, включающего функциональную группу, выбранную из спирта (R-OH), альдегида (R-COH), кетона (R-CO-R), сложного эфира (R-COOR), кислоты (R-COOH), тиола (R-SH), сахарида, ангидрида (RCOOOC-R) и пиррола.

Композиция для лечения инфицированных ран различного генеза и способ ее получения // 2778646

Группа изобретений относится к области медицины и раскрывает композицию для лечения инфицированных ран различного генеза, содержащую полисахарид, гидроксипропилметилцеллюлозу, глицерин, природный протеолитический фермент, лекарственное антимикробное средство и воду, при этом композиция дополнительно содержит карбонат натрия и эуксил, в качестве полисахарида содержит альгинат натрия, природного протеолитического фермента - папаин, и нитрат серебра как лекарственное средство, при следующем соотношении компонентов, мас.

Способ получения фитопрепарата для повышения иммунитета при бактериальных инфекциях крупного рогатого скота // 2776238

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к ветеринарной фармакологии. Способ получения фитопрепарата предусматривает подготовку настойки на основе 70% этилового ректифицированного спирта и водного раствора серебра «Аргерита-40».

Способ лечения гнойных ран // 2775878

Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, в частности к гнойной хирургии. Способ лечения гнойных ран большой площади после перенесенной имплантации искусственных материалов включает предварительную обработку гнойной раны раствором хлоргексидина 0,02% и подсушивание.

Способ профилактики лептоспироза крупного рогатого скота // 2774094

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к ветеринарной фармакологии. Способ профилактики лептоспироза крупного рогатого скота включает проведение подготовительной терапии, при которой одновременно в течение 10 дней животному выпаивают водный раствор серебра, содержащий 0,8 мг ионов серебра на 100 мл воды в количестве 19-20 см3, на одно животное, внутримышечно однократно вводят комбинированный витаминный комплекс «Элеовит» в дозе 5-6 см3 на одно животное и выпаивают в течение 14 дней водно-спиртовую настойку, содержащую 2 части травы эхинацеи пурпурной, 1 часть зверобоя продырявленного - листьев и цветков по 0,5 частей, 0,5 частей листьев крапивы двудомной и 0,5 частей мелисы - листьев и верхушечных побегов по 0,25 частей, полученную на основе 70% этилового спирта при соотношении 1:5 и водного раствора серебра, добавленного в количестве 200 мл, что составляет 0,8 мг ионов серебра на 100 мл.

Способ повышения антибактериальной активности наночастиц серебра препаратами арговит и диметилсульфоксид в отношении streptococcus pyogenes // 2773398

Изобретение относится к ветеринарии. Раскрыт способ повышения антибактериальной активности наночастиц серебра в отношении Streptococcus pyogenes, заключающийся в том, что в 0,2 мл раствора препарата арговит с содержанием действующего вещества 13 мг/мл вносят равный объем 0,2 мл диметилсульфоксида с содержанием действующего вещества 1000 мг/мл, результат повышения бактерицидной активности определяют, используя метод последовательных серийных разведений в 1,6 мл мясопептонного бульона с последующем внесением 0,2 мл 1,5⋅106 КОЕ/мл референтного штамма Streptococcus pyogenes АТСС 19615 и изолята Streptococcus pyogenes, выделенного от крупного рогатого скота с клиническим проявлением инфекционного заболевания, с последующем инкубированием в течение 24 ч при Т=37,5±0,5°С.