Стоматологический гель для профилактики и лечения воспалительных заболеваний пародонта

Изобретение относится к области медицины, а именно к стоматологии, и может быть использовано для профилактики и лечения воспалительных заболеваний пародонта (ВЗП). Стоматологический гель содержит сухой экстракт корня барбариса обыкновенного, натрия альгинат, глицерин, бензалкония хлорид и воду очищенную при следующем содержании компонентов, мас.%: сухой экстракт корня барбариса обыкновенного - 1,0; натрия альгинат - 3,0; глицерин - 18,0; бензалкония хлорид - 0,005; вода очищенная - остальное. Предлагаемый стоматологический гель оказывает специфическое антимикробное действие в отношении пародонтопатогенных микроорганизмов, нормализует микроциркуляцию в тканях пародонта. При этом гель обладает оптимальными технологическими характеристиками, обусловливающими его тиксотропность и легкое, равномерное распределение. 5 ил., 1 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к стоматологии и может быть использовано для профилактики и лечения воспалительных заболеваний пародонта (ВЗП).

Ведущая роль в формировании воспалительного процесса в тканях пародонта принадлежит анаэробной микрофлоре, а именно, эндотоксинам пародонтопатогенных микроорганизмов (ППМ): Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A. actinomycetemcomitans), Actinomyces naeslundii, Prevotella intermedia (P. intermedia), Prevotella nigrescens (P. nigrescens), Tannerella forsythia, Тreponema denticola и Eikenella corrodens. Однако P. gingivalis признана основным этиологическим агентом хронического пародонтита.

Эдотоксины ППМ проникают через эпителий десны, вызывая ряд патологических изменений в ее соединительной ткани, что способствует выраженному расстройству капиллярного кровотока, обычно начинающегося со снижения его интенсивности, а заканчивающееся развитием капиллярного стаза в нутритивном звене микроциркуляторного русла. Нарушения в системе микроциркуляции при хроническом воспалении сначала носят очаговый характер, но по мере увеличения степени тяжести воспалительного процесса в тканях пародонта признаки нарушения микроциркуляции нарастают, а изменения в микрососудах приобретают генерализованный характер.

Таким образом, устранение ППМ представляется эффективным способом профилактики и лечения ВЗП.

С этой целью применяют целый ряд химиотерапевтических средств. Так, например, существует мнение, что «золотым стандартом» среди анаэробицидных препаратов является метронидазол. Препарат нашел широкое применение. Тем не менее, его использование ассоциировано с нейротоксичностью и генотоксичностью.

Хлоргексидин применяется в медицинской практике в течение почти 60 лет. Нежелательные эффекты хлоргексидина, чаще всего связаны с искажением вкуса, изменением цвета зубов (реакция Майяра), образованием пятен и язв во рту или на губах, отеком слюнных желез, появлением признаков аллергической реакции, которая может включать затруднение дыхания или отек лица, губ, языка и гортани.

Гели «Холисал» и «Метрогил Дента», являются наиболее часто назначаемыми препаратами при ВЗП. Однако гель «Холисал» в своем составе содержит холина салицилат, одно из производных салициловой кислоты, которые занимают первое место среди медикаментозных аллергенов, провоцирующих приступ удушья и формирование бронхиальной астмы. Салицилаты и нестероидные противовоспалительные средства (НПВС) способны стать причиной, так называемой, «аспириновой (простагландиновой) астмы», характеризующейся приступом удушья, полипозом слизистой носа и синусита. Непереносимость салицилатов, НПВС и тартразина обозначается как аспириновая триада. Салицилаты также способны спровоцировать такие проявления как различные дерматиты, крапивница, отек Квинке; возможны головные боли и боли в животе, а также другие симптомы. В тяжелых случаях наблюдаются анафилактические реакции.

Такие лекарственные средства, применяемые при ВЗП, как «Оралсепт», «Холисал», «ОКИ», «Метрогекс» и «Дологель» в качестве консервантов содержат парабены, которые, как было экспериментально установлено, стимулируют экспрессию онкогена и пролиферацию клеток рака молочной железы.

«Лидент бэби», «Калгель», «Мундизал», применяемые в детской стоматологии, и «Оралсепт» содержат спирт, в то время как содержание спирта в детских лекарственных формах крайне нежелательно и исключает из показаний к применению детский возраст младше 5-6 лет.

В то же время фитопрепараты (ФП) занимают важное место в современной медицине и фармации. ФП оказывают мягкое воздействие на организм, обладают постепенно, но стойко развивающимся терапевтическим эффектом и имеют мало противопоказаний в отличие от синтетических. При приеме ФП нежелательные эффекты, случаи непереносимости, проявления лекарственной болезни встречаются в 5 раз реже, чем при использовании других лекарственных средств.

Изучение антибактериальной активности растительных экстрактов убедительно свидетельствуют о специфической ингибирующей активности некоторых растений в отношении ППМ.

В настоящее время в терапии ВЗП применяют следующие ФП: «Хлорофиллипт», который представляет собой спиртовой экстракт листьев эвкалипта; мазь «Календула», содержит настойку календулы; «Ротокан» - водно-спиртовой экстракт из смеси лекарственного растительного сырья (ЛРС): цветков ромашки, цветков календулы (ноготков) и травы тысячелистника; «Пародонтоцид» - смесь эфирных масел шалфея мускатного, мяты перечной, душицы, цветков гвоздичного дерева; «Сангвиритрин» - (спиртовый раствор, содержащий алкалоиды маклеи - сангвинарина гидрохлорид и хелиритрина гидрохлорид; «Сальвин» - эстракт шалфея лекарственного; «Мараславин» - отвар сбора, состоящего из травы полыни понтийской, травы чабера, бутонов гвоздичного дерева, плодов черного перца, и корневищ имбиря, с добавлением винного уксуса и «Стоматофит» - водно-спиртовый экстракт корневищ аира, травы арники, коры дуба, листьев мяты перечной, цветков ромашки аптечной, травы тимьяна аптечного и листьев шалфея.

Выбор лекарственной формы имеет существенное значение для обеспечения эффективности фармакотерапии. Существенного прогресса в оказании стоматологической помощи в амбулаторных условиях удалось достичь благодаря применению пролонгированных лекарственных форм аппликационного действия в виде гелей. По сравнению с другими лекарственными формами гели обладают рядом преимуществ: легко наносятся на поверхность слизистой оболочки полости рта, хорошо удерживаются на ней и обеспечивают длительный контакт с обработанной поверхностью, значительно пролонгируя действие препарата.

Известно о существовании «Лечебно-профилактического средства в виде геля для лечения и профилактики инфекционно-воспалительных заболеваний слизистой оболочки полости рта». Предлагаемый стоматологический гель содержит сухой экстракт коры Ивы козьей 1,0-2,0; сухой экстракт корня Солодки голой 1,0-2,0; водный экстракт сульфидно-иловой йодобромной грязи 2,0-3,0; эфирное масло Шалфея лекарственного 0,05-0,1; хлоргексидина биглюконат 1,0-2,0; лидокаина гидрохлорид 1,0-2,0; кислоту аскорбиновую 2,0-3,0; карбопол 3,0-5,0; сорбитол 2,0-4,0 и нипагин 0,2-0,5. Гель с фитопелоидной композицией удобен и гигиеничен в применении, с хорошей фиксацией и равномерным распределением на деснах; обладает противовоспалительными, иммуномодулирующими и регенерирующими свойствами [патент RU 2699560, 2019].

Однако существенным недостатком заявленного средства служит присутствие в качестве консерванта нипагина (парабен), что может потенцировать экспрессию онкогена.

Известно о существовании стоматологического геля с растительным экстрактом для лечения воспалительных заболеваний пародонта и слизистой оболочки полости рта, который содержит в качестве действующего вещества сангвиритрин в количестве 0,5 мас.% и масляный экстракт цветков календулы и травы тысячелистника, взятых в соотношении 1:1, в количестве 5 мас.%, а в качестве мазевой основы - гидроксиэтилцеллюлозу в количестве 2 мас.%, глицерин в количестве 3 мас.%, кремофор RH-40 в количестве 1 мас.%, натрия сахаринат в количестве 0,5 мас.%, масло мятное в количестве 0,1 мас.% и воду очищенную в количестве до 100 мас.%. Изобретение обеспечивает пролонгированное антимикробное, противовоспалительное, регенерирующее, кровоостанавливающее действие, а также хорошую фиксацию и равномерное распределение на деснах и обеспечивает удобное и гигиеничное применение [патент RU 2621297, 2017].

Тем не менее недостатком данного средства является то, что предлагаемый гель в качестве основного действующего вещества содержит сангвиритрин, одним из компонентов которого является сангвинарин. Лекарственные формы, содержащие сангвинарин, широко использовались во всем мире как профилактические средства ВЗП. Однако в начале 2000 годов в научной литературе появились сведения о возможной связи между применением продуктов, содержащих сангвинарин, и возникновением лейкоплакии, и их использование было в значительной степени прекращено.

Известно о существовании дентального геля на основе морских водорослей и экстракта хвои, содержащий экстракт хвои 91,8-89,5 мас.%, натрий-медь-хлорофиллин (МПХ) 5,0-7,0 мас.%, бензойную кислоту 1,7-1,8 мас.%, и карбомер 1,5-1,7 мас.%. Технологический процесс включает экстрагирование измельченной хвои сосны водой при температуре 80°С в течение 60 минут. И последующее нагревание до 80°С в течение 30 мин после прибавления натрий-медь-хлорофиллина [патент RU 2733845, 2020].

Недостатком технологического процесса является длительное нагревание, поскольку экспериментально установлено, что натрий-медь-хлорофиллин представляет собой термолабильное соединение, которое утрачивает фармакологическую активность при нагревании. Также при нагревании улетучиваются фитонциды хвои, обладающие бактерицидной активностью.

Описан гель стоматологический, содержащий масло чайного дерева, масло какао и пектин при следующем соотношении компонентов, мас.%: гвайазулен - 0,03-0,09, пектин- 4,0-4,5, масло шалфея - 0,2-0,4, масло тимьяна- 0,1-0,3, масло гвоздики - 0,4-0,8, масло какао - 0,1-0,3, масло чайного дерева - 0,1-0,3, гидрофобный гель «Hydrophobes Basisgeb» (Gelatum basalis hydrophobicum) - остальное. Технический результат – профилактика и лечение пародонта и слизистой оболочки полости рта [патент RU 2706010, 2019].

Недостатком предлагаемого геля является гидрофобная основа. При создании стоматологических гелей предпочтительнее использование гидрофильных основ, обладающих необходимыми структурно-механическими свойствами, обеспечивающими равномерное распределение геля и оптимальную тиксотропность.

Известен стоматологический гель для лечения и профилактики инфекционно-воспалительных заболеваний слизистой оболочки полости рта, содержащий сухой экстракт коры Ивы белой 8,0-10,0, эфирное масло Эвкалипта прутовидного 0,05-0,1, аскорбиновую кислоту 2,0 - 4,0, лидокаина гидрохлорид 3,0-4,0, хлоргексидина биглюконат 3,0-4,0, коллагенсодержащее сырье рыбного происхождения 30,0-40,0, глицерин 1,0-2,0, сорбитол 3,0-4,0, нипагин 0,3-0,5 [патент RU 2749713, 2021]. Недостатком данного геля является его многокомпонентность, присутствие в составе эфирного масла, способного оказывать раздражающее действие и применение в качестве консерванта парабена.

Известен стоматологический гель для лечения воспалительных заболеваний пародонта и слизистой оболочки полости рта, возникших на фоне психоэмоционального стресса. Предлагаемое средство содержит: в качестве действующих веществ - масляный экстракт зверобоя (5,0 мас.%), пиобактериофаг поливалентный (0,5 мас.%), глицин (3,0 мас.%) и сухой экстракт корней и корневищ кровохлебки (5,0 мас.%), в качестве мазевой основы - гидроксиэтилцеллюлозу (2 мас.%), глицерин (3 мас.%), кремофор RH-40 (1 мас.%), натрия сахаринат (0,5 мас.%) и воду очищенную (до 100 мас.%). Средство оказывает антимикробное, противовоспалительное, репаративное, иммуностимулирующее, антидепрессивное и успокаивающее действие, стимулирует процессы микроциркуляции крови в слизистой оболочке и прилежащих тканях, повышает проницаемость покровных тканей и способствует лучшей резорбции лекарственных веществ [патент RU 2754828, 2021].

Недостатком геля является антибактериальная активность, в основном, в отношении аэробной факультативной и условно-патогенной микрофлоры полости рта, что может при длительном применении стать причиной размножения и развития анаэробных микроорганизмов - этиопатогенного фактора ВЗП.

Известно о проведении исследовательской работы по получению термореверсивного геля с берберина сульфатом, синтезированным (ЗАО «Вифитех»). Однако авторами не обосновано введение берберина сульфата именно количестве 0,03 г в основу. Авторы не учитывают также синергизма антибактерий. Кроме этого, введение именно экстракта корня барбариса обусловливает данную навеску, поскольку авторы не учитывают синергизма антибактериального действия суммы протобербериновых алкалоидов, обеспечивающих антибактериальное действие. Например, известно о антимикробном действии в отношении пародонтопатогенной микрофлоры пальматина, колумбамина, эпиберберина, ятрорризина и пальматина, входящих в состав экстракта корня барбариса.

Известно о проведенных исследованиях противовоспалительной активности 5% геля с экстрактом барбариса, однако также не обосновано количество вводимого действующего вещества и выбор основы.

Наиболее близкой к изобретению по составу основы является стоматологическая композиция в форме геля для ухода за тканями полости рта, которая содержит в качестве основных действующих компонентов экстракт осиновой коры в количестве 0,01-0,3 масс.%, медное производное хлорофилла - 0,01-0,2 масс.%, дигидрокверцитин - 0,1-0,5 масс. % и экстракт пихты сибирской - 0,01-0,1 масс. %, а в качестве вспомогательных – вещества, выбранные из группы: альгинат натрия, метилсалицилат, эмульгатор, ароматизатор, метилпарабен, ментол, эвгенол, сорбит, гидроксиэтилцеллюлоза, лимонная кислота, аллантоин, Д-пантенол, касторовое масло и вода [патент RU 2733718, 06.10.2020]. Данное средство обладает пролонгированными свойствами и оказывает антимикробное, противовоспалительное и регенерирующее действие, легко распределяется по слизистой оболочке, обеспечивает удобное и гигиеничное применение. Однако является многокомпонентным и содержит метилсалицилат, что увеличивает риск возникновения аллергической реакции, в качестве консерванта – метилпарабен, не обладает специфической антибактериальной активностью в отношении ППМ.

Задачей изобретения является расширение ассортимента отечественных стоматологических средств в форме геля для профилактики и лечения ВЗП в амбулаторных условиях, эффективность которого обусловлена специфическим антибактериальным действием в отношении ППМ, практически не оказывающим влияния на факультативную микрофлору полости рта и нормализующим микроциркуляцию в тканях пародонта.

ТЕХНИЧЕСКИЙ РЕЗУЛЬТАТ заключается в повышении эффективности средства за счет специфической антимикробной активности берберина – основного компонента экстракта корня барбариса, в отношении ППМ, в частности Р. gingivalis и улучшения микроциркуляции в тканях пародонта.

Предлагаемое средство на основе соединений природного происхождения для профилактики и лечения ВЗП содержит в качестве действующего вещества один компонент - сухой экстракт корня барбариса обыкновенного, а в качестве гелевой основы натрия альгинат, глицерин и воду очищенную при следующем соотношении компонентов, мас.%: сухой экстракт корня барбариса обыкновенного 1,0; натрия альгината 3,0; глицерина 18,0; бензалкония хлорида 0,005; воды очищенной до 100,0.

Сухой экстракт корня барбариса содержит сумму протобербериновых алкалоидов, основным из которых является берберин.

Корень барбариса зарегистрирован в качестве биологически активной добавки, разрешенной для применения на территории РФ (Регистрационный номер декларации о соответствии – ЕАЭС N RU.Д–HB25.B.05902/20). В Государственную фармакопею XIV издания введены фармакопейные статьи на настойки гомеопатические матричные Вerberis vulgaris e fructibus Berberis, Fructus (ФС.2.6.0012.18) и Вerberis vulgaris, Berberis (ФС.2.6.0013.18). В соответствии с данными экспериментальных и клинических исследований берберин, основной компонент экстракта корня барбариса, обладает антиоксидантными свойствами, показано антиноцицептивное и противовоспалительное действие алкалоида, доказана эффективность берберина в отношении грибов рода Candida spp., специфическое подавление берберином роста таких ППМ как P. gingivalis, других анаэробных ППМ: A. actinomycetemcomitans, Actinomyces naeslundii, P. intermedia и P. nigrescens.

Альгинаты представляют собой линейные анионные полисахариды бурых водорослей, которые широко применяются в качестве гелеобразователей в пищевой, косметической промышленности, биотехнологии и фармации.

Глицерин - пропан-1,2,3-триол (ФС.2.2.0006.15) - C₃H₈O₃, прозрачная, бесцветная или почти бесцветная, сиропообразная жидкость без запаха, применяли в качестве пластификатора.

Бензалкония хлорид (ФС 42-0131-04) представляет собой смесь алкилбензилдиметиламмония хлоридов, которая содержит не менее 95,0 % и не более 104,0 % бензалкония хлорида, в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество, использовали в качестве консерванта.

Воду очищенную (ФС. 2.2.0020.18) использовали в качестве растворителя.

Предварительные исследования экстракта корня барбариса: определение минимальной ингибирующей активности в отношении Porphyromonas gingivalis, обоснование навески, вводимой в гель, выбор оптимальной гелевой основы, обеспечивающей максимальное высвобождение действующих биологически активных соединений, предварительные фармакологические исследования в эксперименте на животных, проведены авторами изобретения.

Экспериментально было установлено, что предлагаемый гель является эффективным средством для улучшения состояния тканей пародонта, воздействуя на патогенную микрофлору и оказывая антимикотическое действие. За счет уменьшения воспалительной реакции гель способствует нормализации микроциркуляции в тканях пародонта.

Изобретение иллюстрируется оптимальными реологическими свойствами геля (рис. 1), технологическими свойствами, обусловливающими его тиксотропность, влиянием геля на микробиоту полости рта, обеспечивающем антибактериальное действие в отношении анаэробных микроорганизмов роды Bacteroides, P. gingivalis (рис. 2,3), антимикотическую активность в отношении C. albicans (рис. 4) и микроциркуляциию в тканях пародонта (рис. 5, таблица 1) пациентов с диагнозом генерализованный катаральный гингивит.

Пример 1. Состав стоматологического геля, мас.%: сухой экстракт корня барбариса обыкновенного - 1,0; натрия альгинат - 3,0; глицерин - 18,0; бензалкония хлорид - 0,005; вода очищенная до 100,0.

Получают стоматологический гель следующим образом: навеску 30,0 г натрия альгината помещают в фарфоровую ступку. В 500,0 мл воды очищенной растворяют 0,05 г. Полученный раствор добавляют к навеске натрия альгината в ступке и оставляют на 1 час для набухания полисахарида.

В 300,0 мл воды растворяют 10,0 г сухого экстракта корня барбариса обыкновенного. К полученному раствору прибавляют 180,0 г глицерина, перемешивают и доводят массу смеси до 500,0 г водой очищенной.

Полученный раствор переносят в ступку к смеси натрия альгината и бензалкония хлорида и тщательно перемешивают. Для получения однородного геля, смесь оставляют еще на 1 час и снова тщательно перемешивают.

Полученный гель представляет собой прозрачную однородную вязкую массу желтоватого цвета с приятным вкусом и запахом.

Реологические характеристики разработанного стоматологического геля определяли на ротационном вискозиметре «Brookfield RVDV II+Pro» (США). Для измерения реологических параметров использовали шпиндели различных номеров (RV02-07), которые вращали в исследуемом образце при 12 последовательно увеличивающихся скоростях сдвига от 5 с^-1 до 100 с^-1.

Разрушение структуры геля осуществляли с использованием мешалки МИ–02 (Болгария) при максимальной скорости вращения крыльчатки в течение 10 минут. Через 10 минут после прекращения перемешивания регистрировали показания на каждой из 12 убывающих скоростей вискозиметра.

По полученным в ходе изучения реологических параметров данным строили график зависимости напряжения сдвига (рис. 1) от градиента приложенной скорости, позволяющие судить о типе течения системы и о наличии тиксотропных свойств полученного геля.

Представленная на графике (рис. 1) зависимость имеет нелинейный характер. Восходящая и нисходящая кривые образуют петлю гистерезиса, что указывает на преобладании в исследуемом геле тиксотропных связей, способных к восстановлению после разрушения системы. Исследуемая гелевая композиция обладает тиксотропными свойствами.

Значение рН стоматологических средств может оказать влияние на уровень рН ротовой жидкости, сдвигая значение в щелочную сторону, что может приводить к осаждению солей фосфата кальция или в кислую, следствием чего могут нарушаться процессы минерализации зубной эмали. Для определения рН навеску исследуемого геля в количестве 5,0 помещали в коническую колбу со шлифом, прибавляли 50 мл воды очищенной (ФС.2.2.0020.15), подогретой до температуры 50-60°С, колбу закрывали крышкой и закрепляли на столике перемешивающего устройства «LS-120» («ЛАБ-ПУ-02», Россия). Встряхивание проводили с частотой 100 колебаний в минуту в течение 30 мин после чего смесь фильтровали через фильтр «синяя лента» (ТУ 03-11-03, Россия). рН водных извлечений определяли с помощью рН–метра «HI98103 Checker» (HANNA, США).

Полученные значения рН находились в интервале 7,0-7,2. Поскольку обычно кислотность смешанной слюны человека составляет интервал от 6,8 до 7,4, исследуемый гель не будет оказывать влияния на данный показатель.

Определение коллоидной стабильности разработанного геля проводили с применением лабораторной центрифуги «Армед LC-04A» (Россия). С этой целью навески исследуемого геля в количестве 5,0 г вносили в центрифужные пробирки и центрифугировали при 6000 об/мин в течение 5 мин после чего наблюдали отделение жидкой фазы.

При кинетической и агрегативной неустойчивости системы должно было наблюдаться отделение жидкой фазы. В результате проведенных исследований было установлено, что отделения жидкой фазы в исследуемых образцах геля не наблюдалось.

Термическую стабильность геля определяли в условиях резко меняющихся температур. С этой целью образцы геля термостатировали в течение 7 суток при температуре 40-42°С в термостате «Binder ED 53» (Германия) с последующим выдерживанием в камере холодильника фармацевтического «Бирюса 150К-G» (Россия) с температурой 8°С в течение 7 дней, и дальнейшем хранении при комнатной температуре (23°С) в течение трех суток. В ходе проведения испытаний проводили визуальную оценку исследуемых образцов.

При определении термической стабильности гелей расслоения фаз не наблюдалось.

Таким образом, в ходе проведенных исследований было установлено, что полученный гель обладает стабильно пластичными свойствами, легок в нанесении и распределении по поверхности. Тиксотропные свойства предлагаемой композиций позволяют обеспечивать полное восстановление структуры после приложенных напряжений, возникающих в ходе технологического процесса изготовления мягких лекарственных форм. Отсутствие проявлений коагуляции, уплотнения, помутнения, разжижения или расслоения при центрифугировании, нагревании и охлаждении свидетельствуют о его коллоидной и термической стабильности.

С целью изучения антимикробной активности разработанного стоматологического геля его образцы стерилизовали методом мембранной фильтрации, используя в качестве растворителя фосфатный буферный раствор, с помощью капсульных шприц-фильтров, оснащенных двухслойным фильтром с ассиметричной мембраной на основе полиэфирсульфона «Propor SG» (Великобритания) с минимальной сорбцией на мембране.

В основном ППМ являются анаэробами, поэтому антимикробные свойства стоматологического геля определяли в отношении грамотрицательных неспорогенных микроорганизмов рода Bacteroides, выращенных при температуре 37°С в течение 24 часов на скошенном мясо-пептонном агаре. Стандартную бактериальную суспензию готовили на стерильном 0,9% растворе натрия хлорида. Для этого бактериологической петлей вносили исследуемую культуру в стерильный флакон со стерильным 0,9% раствором натрия хлорида и доводили концентрацию микроорганизмов до значения 0,5 единиц стандарта мутности по МакФарланду.

В ряд пробирок вносили по 0,5 мл бактериальной взвеси, к которым прибавляли исследуемый гель, добавляли по 9 мл среды Шадлера на агаровой основе и перемешивали. Полученные смеси инкубировали при 37°С в течение 48 часов после чего оценивали наличие или отсутствие роста.

В результате проведенных исследований было установлено, что предлагаемый стоматологический гель подавляет рост микроорганизмов рода Bacteroides (рис.2).

С целью определения антибактериальной активности разработанного стоматологического геля в отношении P. gingivalis из тестовых культур (штамм АТСС 32277, США) готовили инокулюм – бактериальную взвесь на стерильном физиологическом растворе и доводили до мутности 0,5 по Мак-Фарланду (1,5×10⁸ КОЕ/мл). Стерильной пипеткой переносили стандартную взвесь микроорганизма в количестве 0,1 мл в пробирки, содержащие одинаковое количество разведений геля, пробирки интенсивно встряхивали в течение 30 с. и инокулировали в чашки Петри на твердую питательную среду - 5% кровяной агар. С помощью микропипетки наносили 0,1 мл взвеси микроорганизма с разведениями геля на поверхность питательной среды и равномерно распределяли стерильным шпателем.

Чашки Петри инкубировали в анаэробных условиях системы BD GasPak™ EZ Container Systems (США), оснащенной стандартными контейнерами для инкубирования GasPak™ EZ (США) и газогенерирующими пакетами GasPak™ EZ (США) в течение 7 суток. Создание анаэробных условий контролировали с помощью сухих полосок индикаторных анаэробных GasPak™ (США) и полосок индикаторных СО₂ GasPak™ (США). После инкубации определяли интенсивность роста P. gingivalis.

В ходе проведенных исследований было установлено, что наблюдается подавление роста P. gingivalis предлагаемым стоматологическим гелем (рис. 3).

Антимикотические свойства стоматологического геля в отношении C. albicans проводили методом диффузии и посевом исследуемого штамма на обработанную стоматологическим гелем питательную среду.

С этой целью готовили взвесь культуры дрожжеподобных грибов C. albicans (штамм ATCC 10231) в изотоническом растворе натрия хлорида с концентрацией 5⋅10⁸ КОЕ/мл. В качестве питательной среды использовали агаризованную среду Сабуро.

По первому способу на пластину среды Сабуро толщиной 5 мм с помощью шпателя высевали «газоном» C. albicans, в центре вырезали лунку цилиндром из нержавеющей стали с внутренним диаметром 8 мм. В лунку загружали 0,2 г стоматологического геля. После инкубирования чашек Петри при температуре 30°С в течение 48 часов визуально оценивали рост C. albicans.

По второму способу площадь чашки Петри делили на два сектора, один из которых обрабатывали исследуемым гелем, второй - стерильным 0,9% раствором натрия хлорида - контроль. После подсушивания в каждый сектор вносили культуру C. albicans и чашки Петри помещали в термостат при температуре 30°С. Через 48 часов проводили визуальную оценку антимикотического действия.

В ходе проведенных исследований было установлено, что предлагаемый стоматологический гель подавляет рост и размножение C. аlbicans (рис. 4).

Поскольку воспалительные заболевания сопровождаются нарушением микроциркуляции в тканях пародонта оценку эффективности разработанного геля методом лазерной допплеровской флоуметрии с применением аппарата ЛАКК-01 (ОП «Лазма», Россия) у стоматологических пациентов с установленным диагнозом генерализованный катаральный гингивит (ГКГ).

Пародонтологическое лечение предлагаемым стоматологическим гелем пациентов проводили на базе кафедры терапевтической стоматологии ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава России (400078, Волгоградская обл., г. Волгоград, ул. Герцена, д. 10).

Пациенты основной группы (n=30) мужчины и женщины возрастной категории 18-35 лет дважды в сутки - утром и вечером после проведения гигиенических процедур наносили разработанный стоматологический гель на десну с вестибулярной и оральной сторон в количестве около 0,2 г (размером с горошину) в течение 14 дней.

Для сравнительной оценки определяемых показателей была сформирована группа контроля из добровольцев аналогичного возраста, мужчин и женщин, не имеющих ВЗП (n=30).

Определяемыми показателями являлись:

- показатель микроциркуляции (ПМ), который представляет собой произведение средней скорости движения эритроцитов и показателя капиллярного гематокрита (объемная концентрация эритроцитов в капилляре), значение ПМ также зависит от количества капилляров в исследуемой ткани;

- среднее колебание перфузии относительно среднего значения потока крови ПМ - σ;

- коэффициент вариаций (K_v), характеризующий вазомоторную активность микрососудов и представляющий собой соотношение между перфузией ткани и величиной ее изменчивости;

- относительное насыщение кислородом крови микроциркуляторного русла - SО₂;

- Sm - индекс перфузионной сатурации кислорода (Sm = SO₂/ПМ, где SO₂ - относительное насыщение кислородом крови микроциркуляторного русла биоткани, ПМ - средняя перфузия), характеризуеющий очевидную связь между потоком крови (перфузией) в микроциркуляторном русле и не потребленным тканями кислородом.

- U - индекс удельного потребления кислорода в ткани.

ЛДФ-показатели регистрировали в шести точках верхней и нижней челюстей в области маргинальной десны (рис. 5).

Оценку состояния микроциркуляции тканей пародонта проводили в основной группе пациентов и контрольной группе до лечения и через 14 дней после начала лечения предлагаемым гелем по значениям определяемых показателей, представленных в табл. 1.

Таблица 1 – Результаты определения микроциркуляции в тканях пародонта

в контрольной и основной группах пациентов

определяемый показатель	контрольная группа (M±Δm)	основная группа
до лечения (M±Δm)	после лечения (M±Δm)
ПМ (пф. ед.)	25,8±0,2	44,4±1,4*	34,4±1,3*
σ (пф. ед.)	5,3±0,1	3,9±0,2*	4,6±0,2*
KV (%)	19,8±1,1	27,0±1,0*	19,40±1,2**
SO2 (%)	70,9±1,4	85,1±1,2	72,6±1,1
Sm (отн. ед.)	2,75±0,1	1,92±0,2*	2,11±0,2*
U (отн. ед)	1,45±0,02	1,28±0,02*	1,43±0,02**

*различия статистически значимы – р≤0,01; **различия статистически незначимы.

При сравнении значений показателей до и после лечения использовали парный t-критерий Стьюдента с предварительной оценкой соответствия исследуемых совокупностей нормальному распределению.

В ходе проведенных исследований было установлено, что у пациентов основной группы с диагностированным ГКГ до начала лечения были определены более высокие показатели микроциркуляции со значениями перфузионных единиц в интервале 44,4–45,0 по сравнению с этим показателем у пациентов контрольной группы (25,8±0,2). Различие в данных показателях у пациентов исследуемой и контрольной группы было статистически значимо (р≤0,01).

Различия показателя среднего колебания перфузии относительно среднего значения потока крови в сравниваемых исследуемых и контрольной группах также были статистически значимыми (р≤0,01), как и при сравнении значений коэффициента вариации показателей микроциркуляции.

Сравнительный анализ показателей оксигенации ткани десны свидетельствует о статистически значимом увеличении среднего относительного насыщения кислородом микроциркуляторного русла SO₂ у пациентов с катаральным гингивитом с параллельным снижением индекса удельного потребления кислорода (p<0,01).

Таким образом, на основании анализа ЛДФ-грамм у пациентов с диагностированным ГКГ установлены: рост активной модуляции кровотока, возрастание высокочастотных и пульсовых флуктуаций, повышение внутрисосудистого сопротивления. Показатель среднеквадратичного отклонения (δ) увеличивался в среднем на 17%, что свидетельствует об ослаблении артериального сосудистого тонуса и застое крови в венулярном звене. Наблюдался также рост показателя Кv в среднем на 18,1% в результате активации эндотелиальной секреции и миогенного механизма контроля микроциркуляции.

Через 14 дней после начала лечения в основной группе пациентов все еще наблюдались более высокие, по сравнению с контрольной группой, показатели микроциркуляции. Тем не менее, было отмечено улучшение кровотока в тканях пародонта. Среднеквадратичное отклонение амплитуды колебаний кровотока увеличилось на 18%.

Отмечалось существенное снижение показателя SO₂ - относительное насыщение кислородом крови микроциркуляторного русла по сравнению со значениями данного показателя до начала лечения. А значения индекса удельного потребления кислорода уже не имели статистически значимой разницы между исследуемой группой и группой контроля.

Таким образом, предлагаемый стоматологический гель обладает оптимальными технологическими характеристиками, обусловливающими его тиксотропность и легкое, равномерное распределение. Стоматологический гель обладает антибактериальной активностью в отношении грамотрицательных микроорганизмов и проявляет выраженные бактерицидные свойства в отношении основного этиопатогенного фактора ВЗП - P. gingivalis. Предлагаемый гель также проявляет антимикотические свойства в отношении С. albicans.

Применение предлагаемого стоматологического геля нормализует микроциркуляцию в тканях пародонта.

Представленные результаты позволяют рекомендовать разработанный стоматологический гель на основе природных компонентов для профилактики и лечения ВЗП.

Стоматологический гель для профилактики и лечения воспалительных заболеваний пародонта, включающий в качестве биологически активного компонента сухой экстракт корня барбариса обыкновенного (Berberis vulgaris L., Berberidaceae), в качестве гелевой основы – натрия альгинат, глицерин в качестве пластификатора, бензалкония хлорид – в качестве консерванта при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Сухой экстракт корня барбариса обыкновенного	1,0
Натрия альгинат	3,0
Глицерин	18,0
Бензалкония хлорид	0,005
Вода очищенная	до 100,0