Способ гистологической окраски эластических и коллагеновых волокон на одном препарате

Авторы патента:

G01N1/30 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2785548:

Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Уральский федеральный университет имени первого Президента России Б.Н. Ельцина" (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, может быть применено в патологической анатомии и предназначено для выявления эластических и коллагеновых волокон на одном препарате. Предложен способ гистологической окраски эластических и коллагеновых волокон на одном гистологическом препарате, включающий фиксацию материала в растворе формалина, обезвоживание в спиртах и в ксилоле, заключение материала в парафин, изготовление срезов из парафиновых блоков, депарафинизацию, погружение в раствор орсеина при определенных условиях, приготовление красителя осуществляют предварительно по общепринятой методике, отличающийся тем, что после окраски орсеином гистологический препарат промывают в течение 2-3 с в дистиллированной воде, затем дифференцируют в абсолютированном изопропиловом спирте 10 мин, осушают поверхность среза фильтровальной бумагой и наносят на него 0,1% раствор прочного зеленого FCF, смешанный с насыщенным раствором пикриновой кислоты в соотношении 1:10 непосредственно перед окраской через 20 мин гистологический препарат промывают в дистиллированной воде 2-3 с, дегидратируют, просветляют и заключают в синтетическую монтирующую среду. Технический результат заключается в том, что при выполнении окраски гистологических препаратов по предлагаемому способу за счет использования доступных и простых в приготовлении красителей достигается упрощение процесса изготовления гистологических препаратов, на которых видны как эластические, так и коллагеновые волокна. 3 ил.

Способы гистологической окраски для выявления эластических и коллагеновых волокон на одном гистологическом препарате известны из ряда источников, а именно: известен способ окраски гистологических препаратов по Вейгерту-ван Гизону резорцин-фуксином с докрашиванием пикрофуксином, при котором эластические волокна окрашиваются в темно-синий цвет, а коллагеновые в красный [Bancroft J.D., Layton C., Suvarna S.K. Bancroft's Theory and Practice of Histological Techniques. 7th (edn) // Churchill Livingstone, NY, USA. - 2013. - Р. 206-207]. Также известен способ окраски эластических волокон резорцин-фуксином с докрашиванием гистологических препаратов прочным зеленым FCF, который окрашивает коллагеновые волокна в светло-зеленый цвет [патент РФ №2761756]. Недостатком известных способов окраски гистологических препаратов является то, что приготовление раствора резорцин-фуксина трудоемко, затратно по времени и требует специального лабораторного оборудования. Также известен способ гистологической окраски эластических волокон орсеином по Тенцеру-Унна, но он не предполагает окрашивания коллагеновых волокон [Меркулов Г.А. Курс патогистологической техники // Л.: Медицина. - 1969. - С. 189-190].

В качестве прототипа - наиболее близкого аналога - выбран способ окраски эластических и коллагеновых волокон на одном гистологическом препарате, описанный J.B.J.G. Valdiero и соавт. (2019) [Valdiero J. B. J. G., Dias da Cunha R.L., de Brito-Gitirana L. Combined staining of elastic and collagen fibers for histopathological and differential diagnosis in aorta pathologies // Journal of Histotechnology. - 2019. - Vol. 42. - №.2. - P. 87-91.]. Материал фиксируют в 10% растворе нейтрального забуференного формалина, обезвоживают в спиртах возрастающей концентрации и в ксилоле, заключают в парафин, из парафиновых блоков изготавливают срезы, депарафинированные срезы погружают в 1% раствор орсеина при температуре 60°C на 30 мин, для удаления избытка красителя проводят дифференцировку в солянокислом спирте 10 с, промывают в дистиллированной воде, окрашивают 1% раствором светового зеленого 2 мин, дегидратируют, просветляют и заключают в синтетическую монтирующую среду, в результате чего эластические волокна окрашиваются в коричневый цвет, коллагеновые волокна в светло-зеленый цвет.

Недостатком приведенного способа является использование труднодоступного красителя, раствора светового зеленого, для окраски коллагеновых волокон.

Проблема, на решение которой направлен патентуемый способ, состоит в упрощении процесса изготовления гистологических препаратов, на которых видны как эластические, так и коллагеновые волокна, за счет использования доступных и простых в приготовлении красителей.

Указанная проблема решается за счет того, что гистологические срезы после депарафинизации погружают в 1% раствор орсеина при температуре 60°C на 30 мин, после чего промывают в дистиллированной воде 2-3 с, затем дифференцируют в абсолютированном изопропиловом спирте в течение 10 мин. Осушают поверхность срезов фильтровальной бумагой и наносят на 20 мин 0,1% раствор прочного зеленого FCF, смешанный с насыщенным раствором пикриновой кислоты в соотношении 1:10 непосредственно перед окраской, далее промывают в дистиллированной воде 2-3 с, дегидратируют, просветляют и заключают в синтетическую монтирующую среду, на гистологических препаратах отчетливо видны эластические волокна, которые имеют красно-коричневый цвет и коллагеновые волокна, окрашенные в светло-зеленый цвет.

Способ поясняется фотографиями этапов окраски и гистологических препаратов:

На Фиг. 1 представлены этапы окраски гистологических препаратов.

1 - погружение в 1% орсеин при температуре 60°C на 30 минут;

2 - дифференцировка в абсолютированном изопропиловом спирте 10 минут;

3 - нанесение на поверхность среза смеси 0,1% раствора прочного зеленого FCF и насыщенного раствора пикриновой кислоты в соотношении 1:10, на 20 минут.

На Фиг. 2 представлен гистологический препарат участка передней межжелудочковой ветви левой венечной артерии взрослого человека. Ув. х40.

1 - эластические волокна;

2 - коллагеновые волокна.

На Фиг. 3 представлен гистологический препарат хорды митрального клапана взрослого человека. Ув. х400.

1 - эластические волокна;

2 - коллагеновые волокна.

Указанная проблема решается следующим образом.

Для изготовления гистологических препаратов берут материал, фиксированный в 10% растворе нейтрального забуференного формалина, обезвоживают в спиртах возрастающей концентрации и в ксилоле, затем пропитывают парафином. Из парафиновых блоков изготавливают срезы толщиной 3-5 мкм, которые помещают на предметные стекла. Стекла со срезами, далее гистологические препараты, после депарафинизации в ксилоле помещают в абсолютированный спирт, затем в 90% спирт. Из 90% спирта их переносят в 1% раствор орсеина при температуре 60°C на 30 мин. 1% раствор орсеина готовят заранее по общепринятой методике, для чего в 100 мл 70% этилового спирта растворяют 1 г орсеина и добавляют 1 мл концентрированной соляной кислоты [1]. После выдержки в 1% растворе орсеина гистологические препараты промывают в дистиллированной воде в течение 2-3 с, затем дифференцируют в абсолютированном изопропиловом спирте 10 мин. Осушают поверхность срезов фильтровальной бумагой и наносят на них 0,1% раствор прочного зеленого FCF, смешанный с насыщенным раствором пикриновой кислоты в соотношении 1:10 непосредственно перед окраской, время окрашивания составляет 20 мин. Приготовление растворов прочного зеленого FCF и насыщенного раствора пикриновой кислоты осуществляют предварительно. Приготовление раствора прочного зеленого FCF: 0,1 г прочного зеленого FCF смешивают с 0,2 мл ледяной уксусной кислоты и добавляют 100 мл дистиллированной воды. Приготовление насыщенного раствора пикриновой кислоты: 1,2 г пикриновой кислоты растворяют в 100 мл подогретой до 60-70°C дистиллированной воды, после охлаждения раствора наблюдается выпадение кристаллического осадка, что указывает на получение насыщенного раствора. Через 20 мин гистологические препараты промывают в дистиллированной воде в течении 2-3 с, дегидратируют, просветляют и заключают в синтетическую монтирующую среду. На гистологических препаратах отчетливо видны эластические волокна, которые имеют красно-коричневый цвет и коллагеновые волокна, окрашенные в светло-зеленый цвет.

Технический результат заключается в том, что при выполнении окраски гистологических препаратов по предлагаемому способу, за счет использования доступных и простых в приготовлении красителей достигается упрощение процесса изготовления гистологических препаратов, на которых видны как эластические, так и коллагеновые волокна.

Используемая литература

1. Меркулов Г.А. Курс патогистологической техники // Л.: Медицина. - 1969. - С. 189-190.

2. Патент RU 2761756 C1 11.01.2021 Дмитриева Е.Г., Хацко С.Л. Способ дифференцированной окраски эластических и коллагеновых волокон на гистологическом препарате, ФГБОУ ВО Уральский государственный медицинский университет Минздрава России.

3. Bancroft J.D., Layton C., Suvarna S.K. Bancroft's Theory and Practice of Histological Techniques. 7th (edn) // Churchill Livingstone, NY, USA. - 2013. - Р. 206-207.

4. Valdiero J. B. J. G., Dias da Cunha R. L., de Brito-Gitirana L. Combined staining of elastic and collagen fibers for histopathological and differential diagnosis in aorta pathologies //Journal of Histotechnology. - 2019. - Vol. 42. - №.2. - P. 87-91.

Способ гистологической окраски эластических и коллагеновых волокон на одном гистологическом препарате, включающий фиксацию материала в 10% растворе нейтрального забуференного формалина, обезвоживание в спиртах возрастающей концентрации и в ксилоле, заключение материала в парафин, изготовление срезов из парафиновых блоков, депарафинизацию, погружение в 1% раствор орсеина при температуре 60ºC в течение 30 мин, при этом приготовление красителя осуществляют предварительно по общепринятой методике: в 100 мл 70% этилового спирта растворяют 1 г орсеина и добавляют 1 мл концентрированной соляной кислоты, отличающийся тем, что после окраски орсеином гистологический препарат промывают в течение 2-3 с в дистиллированной воде, затем дифференцируют в абсолютированном изопропиловом спирте 10 мин, осушают поверхность среза фильтровальной бумагой и наносят на него 0,1% раствор прочного зеленого FCF, состоящий из 0,1 г прочного зеленого FCF, 0,2 мл ледяной уксусной кислоты и 100 мл дистиллированной воды, смешанный с насыщенным раствором пикриновой кислоты в соотношении 1:10 непосредственно перед окраской, через 20 мин гистологический препарат промывают в дистиллированной воде 2-3 с, дегидратируют, просветляют и заключают в синтетическую монтирующую среду.

Изобретение относится к области физики. Раскрыт способ определения адгезионной прочности лакокрасочных покрытий, включающий подготовку образцов, проведение испытаний, получение и анализ результатов.

Способ персонификации терапии язвенного дефекта при синдроме диабетической стопы // 2785531

Изобретение относится к медицине, а именно к способу персонификации терапии язвенного дефекта при синдроме диабетической стопы. Способ персонификации терапии язвенного дефекта при синдроме диабетической стопы, в ранах с адекватным и сопоставимым магистральным кровотоком на основе морфологического фенотипа, заключается в том, что проводят морфологическую оценку тканей на серийных парафиновых срезах биоптата раны после окраски гематоксилином и эозином и определяют относительную площадь некроза, фиброза и грануляций в %, с последующим расчетом коэффициента репарации по определенной эмпирической формуле, и при КР менее 1 назначение адъювантной терапии считается нецелесообразным, рекомендуется оперативное лечение раны.

Способ отбора взвешенных веществ в воде для экологических исследований и устройство для его осуществления // 2785193

Группа изобретений относится к области охраны окружающей среды. Раскрыт способ отбора твердых взвешенных частиц для экологических исследований, включающий всасывание воды со взвешенным веществом с применением насоса и шланга, погружаемого на определенную глубину исследования, в пробоотборник-накопитель, представляющий собой вертикально расположенную трубу, нижняя часть которой герметично соединена с контейнером для сбора взвешенных частиц, в верхней части конструкции через шланг осуществляется излив лишней воды и введение в ее пространство штанги с фильтром для контроля процесса накопления взвешенного материала в контейнере в ее нижней части и возможностью уплотнения вещества путем задавливания ко дну, на этапе извлечения проб отсоединение контейнера со взвешенным материалом с последующей герметичной упаковкой открытого верхнего отверстия заглушкой с уплотнительным кольцом и дальнейшего использования для транспортировки и хранения проб.

Нейтрализующие антитела к вирусу гриппа b и пути их применения // 2784915

Изобретения относятся к области биотехнологии. Описана группа изобретений, включающая выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, обладающие вариантом Fc-участка, где антитело или его связывающий фрагмент связываются с гемагглютинином (HA) вируса гриппа B и нейтрализуют вирус гриппа B в двух филогенетически разных линиях и обладают увеличенным периодом полувыведения из сыворотки по сравнению с антителом c нативным Fc, выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую вышеуказанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, вектор для получения вышеуказанного выделенного антитела или антигенсвязывающего фрагмента, клетку-хозяина, экспрессирующую выделенное антитело или антигенсвязывающий фрагмент, способ получения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и композицию для лечения инфекции, вызванной вирусом гриппа B (варианты).

Способ экспонирования тест-организмов при биотестировании водных сред // 2784540

Изобретение относится к биотестированию токсичности природных, сточных вод, водных растворов и водных вытяжек из отходов. Раскрыт способ экспонирования тест-организмов при биотестировании водных сред, выполняемый на пробах, помещенных в светопрозрачные емкости и размещенных по окружности во вращающуюся кассету, которая установлена наклонно в климатической камере, при этом емкости с пробами загружают в кассету, а скорость вращения кассеты составляет для тест-организмов – водоросль Chlorella vulgaris 40-50 об/мин, водоросль Dunaliella tertiolecta 25-30 об/мин, рачки Artemia salina L.

Способ диагностики рака легких // 2784356

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для диагностики рака легкого. Проводят измерение уровней биомаркеров в образце выдыхаемого воздуха методом газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (ГХ-МС) с предварительным концентрированием летучих органических соединений в сорбционных трубках с сорбентом Tenax ТА, используя ГХ-МС систему, оснащенную двухстадийным термодесорбером.

Люминесцентный способ определения тербия с ципролетом // 2784340

Изобретение относится к аналитической химии, в частности к способам люминесцентного определения тербия. Тербий переводят в люминесцирующее комплексное соединение с органическим реагентом (R) - ципролетом.

Способ прогнозирования риска развития обострения хронического гингивита у пациентов, перенесших новую коронавирусную инфекцию // 2784295

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии и микробиологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития обострения хронического гингивита у пациентов, перенесших новую коронавирусную инфекцию. Оценивают наличие видов микроорганизмов, выделенных из десневого желобка: Streptococcus oralis, Neisseria elongata, Streptococcus intermedius, Staphylococcus epidermidis, Corynebacterium durum, Neisseria subflava, Neisseria flavescens, Streptococcus sanguinis, Streptococcus mitis, Streptococcus gordonii, Veillonella parvula – 1 группа и Haemophilus parainfluenzae – 2 группа.

Способ прогнозирования риска перехода нетяжелой формы пневмонии в тяжелую // 2783852

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, терапии, и может быть использовано для прогнозирования риска перехода нетяжелой формы пневмонии в тяжелую. Прогноз тяжести пневмонии ПТП определяют по формуле ПТП=1,2967×КПС-0,7124×Т-1,7345×K++1,0284×Ф-0,1707, где КПС - количество пораженных сегментов легких по результатам лучевых методов диагностики; Т - тестостерон венозной крови, нмоль/л; K+ - калий венозной крови, ммоль/л; Ф - фибриноген венозной крови, г/л.

Способ анализа проб газа во вращающейся печи для обжига цемента // 2783781

Изобретение относится к способу анализа проб газа во вращающейся печи для обжига цемента с помощью по меньшей мере одного зонда для отбора проб газа. Способ для анализа проб газа во вращающейся печи для обжига цемента с помощью зондов для отбора проб газа включает первый и второй зонды для отбора проб газа, причем первый зонд для отбора проб газа перемещается так, чтобы достигнуть положения отбора проб газа, причем пробы газа отбираются из печи и анализируются с помощью первого зонда для отбора проб газа, находящегося в положении отбора проб, в то время как второй зонд для отбора проб газа удерживается в убранном положении и очищается, после чего второй зонд для отбора проб газа перемещается так, чтобы достигнуть положения отбора проб газа, и первый зонд для отбора проб газа перемещается из положения отбора проб в убранное положение и очищается, в то время как пробы газа отбираются из печи и анализируются с помощью второго зонда для отбора проб газа, находящегося в положении отбора проб.