Применение нового ингибитора тирозинкиназ, анлотиниба, при остеосаркоме и хондросаркоме

Группа изобретений относится к области медицины и фармацевтики. Предложено применение анлотиниба и его фармацевтически приемлемой соли при приготовлении лекарственного средства для ингибирования запущенной и/или метастатической остеосаркомы. Группа изобретений также относится к применению анлотиниба и его фармацевтически приемлемой соли в качестве усилителя цисплатина при ингибировании запущенной и/или метастатической остеосаркомы, и к применению фармацевтической композиции, содержащей анлотиниб или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, для ингибирования запущенной и/или метастатической остеосаркомы. Анлотиниб обеспечивает значительный ингибирующий эффект на пролиферацию линий клеток остеосаркомы, индуцирует блокировку клеточного цикла у клеток остеосаркомы, а также может ингибировать миграцию и инвазию клеток остеосаркомы. Также анлотиниб усиливает цитолитическое действие цисплатина, оказываемое на клетки остеосаркомы. 3 н. и 11 з.п. ф-лы, 7 ил., 1 табл., 8 пр.

 

Область техники

Настоящее изобретение относится к области лекарственных средств, в частности, к применению анлотиниба при остеосаркоме и хондросаркоме.

Предпосылки изобретения

Анлотиниб является низкомолекулярным многоцелевым ингибитором тирозинкиназ, который был разработан Китаем и защищен независимыми правами интеллектуальной собственности с патентной публикацией, в которой раскрыто данное соединение, под номером WO2008/112407. В 2011 году было получено клиническое одобрение, в 2013 году была завершена I фаза клинических испытаний, а в настоящее время проводятся клинические испытания применения анлотиниба при различных формах рака, в том числе при немелкоклеточном раке легких, саркоме мягких тканей, раке желудка, колоректальном раке, медуллярном раке щитовидной железы, дифференцированном раке щитовидной железы, плоскоклеточном раке пищевода и др.

В патентном документе (международной публикации № WO2008/112407 и китайском патенте № ZL200880007358.X) раскрыта ингибирующая активность анлотиниба при раке толстой кишки, немелкоклеточном раке легких, раке печени и раке молочной железы. Однако до настоящего времени публикаций о применении анлотиниба при остеосаркоме не было.

Краткое описание изобретения

Цель настоящего изобретения заключается в новом применении анлотиниба для устранения недостатков в предшествующем уровне техники.

Для достижения вышеуказанной цели было разработано техническое решение, взятое на вооружение в настоящем изобретении, которое заключается в применении анлотиниба и его фармацевтически приемлемой соли при приготовлении лекарственного средства для ингибирования остеосаркомы и/или хондросаркомы.

Предложено применение анлотиниба и его фармацевтически приемлемой соли в качестве усилителя цисплатина при ингибировании остеосаркомы и/или хондросаркомы.

Кроме того, фармацевтически приемлемая соль анлотиниба представляет собой гидрохлорид анлотиниба.

Кроме того, данное лекарственное средство ингибирует рост и/или метастазирование остеосаркомы и/или хондросаркомы. Помимо этого, данное лекарственное средство ингибирует метастазирование остеосаркомы и/или хондросаркомы в легкие.

Кроме того, данное лекарственное средство ингибирует рецидив остеосаркомы и/или хондросаркомы.

Кроме того, метастазирование остеосаркомы и/или хондросаркомы представляет собой миграцию и/или инвазию.

Кроме того, остеосаркома представляет собой первичную остеосаркому и/или вторичную остеосаркому.

Кроме того, остеосаркома представляет собой остеосаркому остеобластного типа и/или остеолитического типа.

Кроме того, остеосаркома представляет собой остеобластную остеосаркому, хондробластную остеосаркому и/или фибробластную остеосаркому. Помимо этого, остеосаркома представляет собой хондробластную остеосаркому.

Кроме того, хондросаркома представляет собой дедифференцированную хондросаркому и/или высокодифференцированную хондросаркому.

Кроме того, остеосаркома является запущенной и/или метастатической остеосаркомой, и хондросаркома является запущенной и/или метастатической хондросаркомой.

Кроме того, субъект с остеосаркомой и/или хондросаркомой уже проходил лечение с помощью химиотерапии и/или лучевой терапии. Помимо этого, к химиотерапевтическому средству, применяемому при химиотерапии, которую получает субъект с остеосаркомой и/или хондросаркомой, относятся метотрексат, ифосфамид, цисплатин и доксорубицин. Помимо этого, заболевание прогрессирует после прохождения субъектом с остеосаркомой и/или хондросаркомой лечения с помощью химиотерапии и/или лучевой терапии.

Кроме того, лекарственное средство содержит терапевтически эффективное количество анлотиниба или его фармацевтически приемлемой соли и фармацевтически приемлемый носитель.

С другой стороны, настоящее изобретение относится к способу лечения остеосаркомы и/или хондросаркомы, и данный способ предусматривает введение терапевтически эффективного количества анлотиниба или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в таком лечении пациенту.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу ингибирования роста и/или метастазирования остеосаркомы и/или хондросаркомы, и данный способ предусматривает введение терапевтически эффективного количества анлотиниба или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в таком лечении пациенту. Помимо этого, настоящее изобретение относится к способу ингибирования метастазирования остеосаркомы и/или хондросаркомы в легкие.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу ингибирования миграции и/или инвазии остеосаркомы и/или хондросаркомы, и данный способ предусматривает введение терапевтически эффективного количества анлотиниба или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в таком лечении пациенту.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения первичной остеосаркомы и/или вторичной остеосаркомы, и данный способ предусматривает введение терапевтически эффективного количества анлотиниба или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в лечении пациенту.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения остеогенной остеосаркомы и/или остеолитической остеосаркомы, и данный способ предусматривает введение терапевтически эффективного количества анлотиниба или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в лечении пациенту.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения остеобластной остеосаркомы, хондробластной остеосаркомы и/или фибробластной остеосаркомы, и данный способ предусматривает введение терапевтически эффективного количества анлотиниба или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в лечении пациенту.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения дедифференцированной хондросаркомы и/или высокодифференцированной хондросаркомы, и данный способ предусматривает введение терапевтически эффективного количества анлотиниба или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в лечении пациенту.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения запущенной и/или метастатической остеосаркомы и/или хондросаркомы, и данный способ предусматривает введение терапевтически эффективного количества анлотиниба или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в лечении пациенту.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу предупреждения и/или лечения рецидива остеосаркомы и/или хондросаркомы, и данный способ предусматривает введение терапевтически эффективного количества анлотиниба или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в лечении пациенту.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения субъекта с остеосаркомой и/или хондросаркомой, который уже прошел лечение с помощью химиотерапии и/или лучевой терапии. Помимо этого, к химиотерапевтическому средству, применяемому при химиотерапии, которую получает субъект с остеосаркомой и/или хондросаркомой, относятся метотрексат, ифосфамид, цисплатин и доксорубицин. Помимо этого, заболевание прогрессирует после прохождения субъектом с остеосаркомой и/или хондросаркомой лечения с помощью химиотерапии и/или лучевой терапии.

Анлотиниб можно вводить в форме его свободного основания или в форме его соли, гидрата и пролекарства, и такое пролекарство превращается in vivo в форму свободного основания анлотиниба. Например, в объем настоящего изобретения входит фармацевтически приемлемая соль анлотиниба, и указанную соль можно получить из различных органических кислот и неорганических кислот в соответствии со способами, хорошо известными в данной области техники.

В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения анлотиниб вводят в форме его гидрохлоридной соли. В некоторых конкретных вариантах осуществления анлотиниб вводят в форме его моногидрохлоридной или дигидрохлоридной соли. В некоторых конкретных вариантах осуществления анлотиниб вводят в кристаллической форме его гидрохлоридной соли. В некоторых конкретных вариантах осуществления анлотиниб вводят в кристаллической форме дигидрохлоридной соли анлотиниба.

Анлотиниб или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить различными путями, и к указанным путям относятся без ограничения пероральное введение, парентеральное введение, внутрибрюшинное введение, внутривенное введение, внутриартериальное введение, трансдермальное введение, подъязычное введение, внутримышечное введение, ректальное введение, трансбуккальное введение, интраназальное введение, ингаляционное введение, вагинальное введение, внутриглазное введение, местное введение, подкожное введение, внутрижировое введение, внутрисуставное введение и интратекальное введение. В некоторых конкретных вариантах осуществления лекарственное средство вводят посредством перорального введения, и к конкретным лекарственным формам относятся без ограничения таблетки, капсулы, порошок, гранулы, капли, пасты, пудры и др., предпочтительно таблетки и капсулы. Среди них таблетки могут представлять собой обычные таблетки, диспергируемые таблетки, шипучие таблетки, таблетки с замедленным высвобождением, таблетки с контролируемым высвобождением или таблетки с энтеросолюбильной оболочкой, а капсулы могут представлять собой обычные капсулы, капсулы с замедленным высвобождением, капсулы с контролируемым высвобождением или капсулы с энтеросолюбильной оболочкой. Пероральный препарат можно приготовить традиционным способом с применением фармацевтически приемлемого носителя, хорошо известного в данной области техники. К фармацевтически приемлемому носителю относятся без ограничения наполнитель, абсорбент, смачивающее средство, связующее, разрыхлитель, смазывающее средство и др. К наполнителю относятся крахмал, лактоза, маннит, микрокристаллическая целлюлоза и др.; к абсорбенту относятся без ограничения сульфат кальция, гидрофосфат кальция, карбонат кальция и др.; к смачивающему средству относятся вода, этанол и др.; к связующему относятся без ограничения гидроксипропилметилцеллюлоза, повидон, микрокристаллическая целлюлоза и др.; к разрыхлителю относятся без ограничения кроскармеллоза натрия, кросповидон, поверхностно-активное вещество, гидроксипропилцеллюлоза с низкой степенью замещения и др.; и к смазывающему средству относятся без ограничения стеарат магния, тальк, полиэтиленгликоль, лаурилсульфат натрия, тонкоизмельченный силикагель, тальк и др. К фармацевтическому вспомогательному веществу также относятся краситель, подсластитель и др.

В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения суточная доза, вводимая пациенту, может составлять от 2 до 20 мг; в некоторых конкретных вариантах осуществления суточная доза, вводимая пациенту, может составлять от 5 до 20 мг; в некоторых конкретных вариантах осуществления суточная доза, вводимая пациенту, может составлять от 10 до 16 мг; в некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего раскрытия суточная доза, вводимая пациенту, может составлять от 10 мг до 14 мг; и в некоторых конкретных вариантах осуществления суточная доза, вводимая пациенту, может составлять 8 мг, 10 мг, 12 мг, 14 мг или 16 мг.

В описанных выше способах лечения анлотиниб или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить один или несколько раз в сутки в виде одной дозы или нескольких доз. В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения анлотиниб или его фармацевтически приемлемую соль вводят один раз в сутки.

Количество вводимого анлотиниба или его фармацевтически приемлемой соли можно определить на основании тяжести заболевания, реакции на заболевание, какой-либо связанной с лечением токсичности, а также возраста и общего состояния здоровья пациента. Предпочтительно, анлотиниб или его фармацевтически приемлемую соль вводят посредством дробного введения, указанное дробное введение предусматривает период введения и период отсутствия введения, и анлотиниб или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить один или несколько раз в сутки во время периода введения. Например, анлотиниб или его фармацевтически приемлемую соль вводят ежесуточно во время периода введения, затем введение прекращают на некоторый период времени во время периода отсутствия введения, затем следует период введения, затем период отсутствия введения, и таким образом вышеуказанные процедуры можно повторять множество раз. В том числе, отношение периода введения к периоду отсутствия введения в сутках составляет 2 : 0,5-5, предпочтительно 2 : 0,5-3, более предпочтительно 2 : 0,5-2 и еще более предпочтительно 2 : 0,5-1.

В некоторых конкретных вариантах осуществления введение продолжают в течение 2 недель и прекращают на 2 недели. В некоторых конкретных вариантах осуществления лекарственное средство вводят один раз в сутки в течение 14 последовательных суток с последующими 14 сутками без введения; затем лекарственное средство вводят один раз в сутки в течение 14 последовательных суток с последующими 14 сутками без введения, следовательно, дробное введение таким образом можно повторять несколько раз, при этом введение длится 14 последовательных суток с последующими 14 сутками без введения.

В некоторых конкретных вариантах осуществления введение продолжают в течение 2 недель и прекращают на 1 неделю. В некоторых конкретных вариантах осуществления лекарственное средство вводят один раз в сутки в течение 14 последовательных суток с последующими 7 сутками без введения; затем лекарственное средство вводят один раз в сутки в течение 14 последовательных суток с последующими 7 сутками без введения, следовательно, дробное введение таким образом можно повторять несколько раз, при этом введение длится 14 последовательных суток с последующими 7 сутками без введения.

В некоторых конкретных вариантах осуществления введение продолжают в течение 5 суток и прекращают на 2 суток. В некоторых конкретных вариантах осуществления лекарственное средство вводят один раз в сутки в течение 5 последовательных суток с последующими 2 сутками без введения; затем лекарственное средство вводят один раз в сутки в течение 5 последовательных суток с последующими 2 сутками без введения, следовательно, дробное введение таким образом можно повторять несколько раз, при этом введение длится 5 последовательных суток с последующими 2 сутками без введения.

В некоторых вариантах осуществления анлотиниб или его фармацевтически приемлемую соль пациенту с остеосаркомой или хондросаркомой вводят отдельно в качестве единственного активного ингредиента. В некоторых вариантах осуществления анлотиниб или его фармацевтически приемлемую соль пациенту с остеосаркомой или хондросаркомой одновременно или последовательно вводят вместе с другими противоопухолевыми лекарственными средствами. В некоторых вариантах осуществления к другим противоопухолевым лекарственным средствам относятся без ограничения алкилирующее средство, комплекс платины, производное фторпиримидина, камптотецин и аналоги камптотецина, антрахиноновый противоопухолевый антибиотик и таксаны. В некоторых вариантах осуществления другим противоопухолевым лекарственным средством является цисплатин.

Согласно еще одному аспекту, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения остеосаркомы и/или хондросаркомы, содержащей анлотиниб или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.

Согласно еще одному аспекту, настоящее изобретение относится к набору, содержащему (a) фармацевтическую композицию, содержащую по меньшей мере одну стандартную дозу анлотиниба или его фармацевтически приемлемой соли, и (b) инструкцию по лечению остеосаркомы и/или хондросаркомы.

Преимущества настоящего изобретения следующие:

1. Впервые было обнаружено, что анлотиниб может ингибировать рост и метастазирование остеосаркомы и/или хондросаркомы. Анлотиниб способен значительно ингибировать рост линий клеток остеосаркомы 143B, U2OS, MG63 и SJSA, индуцировать блокировку цикла у указанных линий клеток, а также одновременно ингибировать миграцию и инвазию линий клеток остеосаркомы.

2. Впервые было обнаружено, что анлотиниб способен усиливать цитолитическое действие химиотерапевтического лекарственного средства цисплатин, оказываемое на клетки остеосаркомы.

3. Впервые обнаружено, что анлотиниб можно применять для лечения остеосаркомы и/или хондросаркомы.

Если не указано иное, в контексте настоящей заявки указанные далее термины, применяемые в настоящем описании и в формуле изобретения, имеют описанные далее значения.

«Пациент» относится к млекопитающему, предпочтительно человеку.

Термин «фармацевтически приемлемый» означает, что вещество можно применять для приготовления фармацевтической композиции. Указанная фармацевтическая композиция, как правило, безопасна, нетоксична, не является ни биологически нежелательной, ни нежелательной по другим причинам и является приемлемой для фармацевтического применения на людях.

К «фармацевтически приемлемой соли» относятся без ограничения кислотно-аддитивные соли, образованные с неорганическими кислотами, такими как соляная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и др.; или кислотно-аддитивные соли, образованные с органическими кислотами, такими как уксусная кислота, трифторуксусная кислота, пропионовая кислота, гексановая кислота, гептановая кислота, циклопентанепропионовая кислота, гликолевая кислота, пировиноградная кислота, молочная кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, яблочная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, 1,2-этионовая кислота, 2-изетионовая кислота, бензолсульфоновая кислота, п-хлорбензолсульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота, 3-фенилпропионовая кислота, триметилуксусная кислота, трет-бутилуксусная кислота, додецил-серная кислота, глюконовая кислота, глутаминовая кислота, гидроксинафтойная кислота, салициловая кислота, стеариновая кислота и др.

«Терапевтически эффективное количество» относится к количеству соединения, которое при введении человеку для лечения заболевания является достаточным для достижения контроля над указанным заболеванием.

«Лечение» относится к любому введению терапевтически эффективного количества соединения и включает:

(1) ингибирование заболевания в организме человека, страдающего от патологии или симптоматики заболевания или имеющего признаки их проявления (т.е. предупреждение дальнейшего развития патологии и/или симптоматики), или

(2) облегчение заболевания в организме человека, страдающего от патологии или симптоматики заболевания или имеющего признаки их проявления (т.е. обращение развития патологии и/или симптоматики).

«CR» относится к полному ответу, в частности означает, что целевой опухолевый очаг исчезает, нового очага не появляется, а уровень опухолевого маркера находится в пределах нормы и сохраняется в течение по меньшей мере 4 недель.

«PR» относится к частичному ответу, в частности означает, что сумма диаметров целевых опухолевых очагов уменьшается на 30% или более от исходного уровня и сохраняется в течение по меньшей мере 4 недель.

«PD» относится к прогрессирующему заболеванию, в частности означает, что сумма диаметров целевых опухолевых очагов увеличивается на 20% или более от исходного уровня.

«SD» относится к стабильному заболеванию, в частности означает, что степень снижения одного или нескольких целевых опухолевых очагов не достигает уровня PR, степень увеличения также не достигает уровня PD, и уровень SD находится между уровнем PR и уровнем PD.

«qd» означает прием лекарства один раз в сутки.

Термин «запущенная» включает в себя «местно-распространенную».

Краткое описание графических материалов

Фиг. 1: анлотиниб ингибирует пролиферацию клеток остеосаркомы.

Фиг. 2: анлотиниб индуцирует блокировку клеточного цикла клеток остеосаркомы.

Фиг. 3: анлотиниб индуцирует блокировку клеточного цикла клеток остеосаркомы.

Фиг. 4: анлотиниб усиливает индуцированный цисплатином апоптоз (DDP) клеток остеосаркомы.

Фиг. 5: анлотиниб усиливает индуцированный цисплатином апоптоз (DDP) клеток остеосаркомы.

Фиг. 6: анлотиниб ингибирует миграцию и инвазию клеток остеосаркомы.

Фиг. 7: анлотиниб ингибирует миграцию и инвазию клеток остеосаркомы.

Подробное описание изобретения

Далее на основании примеров будут подробно описаны конкретные варианты осуществления, предусмотренные настоящим изобретением.

Пример 1

1. Материалы и способы

1.1 Материалы: линии клеток остеосаркомы человека 143B, U2OS, MG63 и SJSA были приобретены у Американской коллекции типовых культур (ATCC). Анлотиниб (новый ингибитор тирозинкиназ) был получен от CHIA TAI TIANQING PHARMACEUTICAL GROUP CO., LTD. Анлотиниб растворяли в диметилсульфоксиде и смешивали в рабочий раствор с концентрацией 16 ммоль/л в качестве исходного раствора, который помещали в холодильник с температурой -20°С до последующего применения и перед применением доводили до требуемой концентрации культуральной средой DMEM, содержащей сыворотку.

Экспериментальные реагенты и приборы: среда DMEM с высоким содержанием глюкозы, эмбриональная бычья сыворотка (Thermo, США); расщепляемая каспаза 3, антитело к p-PARP, антитело к GAPDH, вторичное антитело, меченное пероксидазой хрена (Sixin Biotechnology Co., Ltd.); диметилсульфоксид (Sigma, США); 0,02% ЭДТА + 0,25% трипсина (Miltenyi Biotec Co., Германия); термостатический инкубатор (Shanghai Rongyan Instrument Co., Ltd.); проточный цитометр (Becton Dickinson Co., США); многофункциональный считыватель микропланшетов (Molecular Devices Co., США).

1.2 Способы проведения экспериментов

1.2.1 Культура клеток: линии клеток остеосаркомы 143B, U2OS, MG63 и SJSA культивировали в полной культуральной среде DMEM (содержащей эмбриональную бычью сыворотку с объемной долей 10%, 0,1 г/л стрептомицина и 100 ед/мл пенициллина) и инкубировали в термостатическом инкубаторе, содержащем 5% CO₂ (объемная доля), при температуре 37°С. После достижения приблизительно 85% конфлюэнтности клеток клетки отделяли с помощью смешанного раствора для отделения клеток, содержащего 0,02% ЭДТА и 0,25% трипсина, а затем клетки собирали, центрифугировали на 1000 об/мин в течение 3 мин и пересевали.

1.2.2 Детектирование пролиферации клеток с помощью cck-8: клетки 143B, клетки U2OS, клетки MG63 и клетки SJSA в логарифмической фазе роста собирали, промывали PBS, подсчитывали и распределяли в отдельные пробирки. Клетки высевали в 96-луночный планшет (3000 клеток/лунка) и культивировали в течение 24 ч для обеспечения прикрепления клеток. Затем добавляли анлотиниб с различными молярными концентрациями (0 мкМ, 1 мкМ, 2 мкМ, 4 мкМ, 8 мкМ, 16 мкМ, 32 мкМ и 64 мкМ), смесь инкубировали в течение 24 ч, а затем проводили детектирование. В каждую лунку добавляли 100 мкл реагента cck-8, разведенного в 10 раз культуральной средой DMEM, и полученную смесь инкубировали при температуре 37°С в течение 45 минут. У полученной смеси значение поглощения в каждой лунке при 450 нм детектировали с помощью считывающего устройства для микропланшетов.

1.2.3 Эксперимент по клонированию на питательной среде: клетки 143B, клетки U2OS, клетки MG63 и клетки SJSA обрабатывали 1 мкМ анлотинибом и аспирировали супернатант. Клетки фиксировали 4% параформальдегидом в течение 15 мин, 3 раза промывали PBS, окрашивали 0,1% кристаллическим фиолетовым в течение 10 мин, дважды промывали PBS и фотографировали после сушки на воздухе.

1.2.4 Детектирование клеточного цикла с помощью проточного цитометра: клетки 143B, клетки U2OS, клетки MG63 и клетки SJSA добавляли в жидкую культуральную среду, содержащую различные молярные концентрации анлотиниба (0 мкМ, 1 мкМ, 2 мкМ и 4 мкМ), для культивирования. Спустя 24 ч клетки собирали, центрифугировали на 1000 об/мин в течение 1 минуты, промывали PBS и фиксировали 70% этанолом. Добавляли раствор для PI-окрашивания из набора для анализа клеточного цикла, смесь инкубировали в темноте при комнатной температуре в течение 15 мин и производили детектирование с помощью проточного цитометра. Изображения анализировали с помощью программного обеспечения ModFit. Эксперимент повторяли 3 раза.

1.3.5 Детектирование апоптоза клеток с помощью проточного цитометра: клетки 143B, клетки U2OS, клетки MG63 и клетки SJSA добавляли в жидкую культуральную среду, содержащую 2 мкМ анлотиниба (с или без 10 мкМ цисплатина (DDP)), для культивирования. Спустя 24 ч клетки собирали, центрифугировали на 1000 об/мин в течение 1 минуты и промывали PBS. После этого для детектирования апоптоза клеток применяли набор для детекции апоптоза клеток Annexin-V-FITC/PI Cell Apoptosis Detection Kit. Клетки добавляли к 100 мкл 1× связывающего буфера и ресуспендировали, добавляли 5 мкл аннексина V-FITC и 2,5 мкл реагента для PI-окрашивания и смесь встряхивали и равномерно перемешивали в темноте. Полученную в результате смесь оставляли для прохождения реакции при комнатной температуре в течение 15 мин, затем добавляли 300 мкл 1× буфера для связывания и полученную смесь равномерно перемешивали и производили детектирование с помощью проточного цитометра. Эксперимент повторяли 3 раза.

1.3.6. Экспериментальный анализ миграции и инвазии клеток в системе Transwell: клетки высевали в верхний конец камеры системы Transwell (5×10⁴ клеток/лунка). Клетки 143B, клетки U2OS, клетки MG63 и клетки SJSA обрабатывали 1 мкМ анлотинибом. В верхний конец камеры системы Transwell добавляли культуральную среду, содержащую 2% сыворотки (в эксперименте по инвазии требовалось 4 часа предварительной обработки 10% матригелем), а в нижний конец добавляли культуральную среду, содержащую 10% сыворотки. Спустя 24 часа клетки фиксировали 4% параформальдегидом, окрашивали кристаллическим фиолетовым и фотографировали под микроскопом.

1.4 Основные наблюдаемые показатели: анлотиниб был способен оказывать значительный ингибирующий эффект на рост и метастазирование клеток остеосаркомы, в то же время он был способен усиливать цитолитическое действие химиотерапевтических препаратов, оказываемое на клетки остеосаркомы.

2. Результаты

2.1 Анлотиниб ингибировал пролиферацию клеток остеосаркомы

Для оценки антипролиферативных эффектов анлотиниба на линии клеток остеосаркомы 143B, U2OS, MG63 и SJSA линии клеток остеосаркомы обрабатывали анлотинибом с концентрацией 0 мкМ, 1 мкМ, 2 мкМ или 4 мкМ в течение 24 часов или 48 часов. Из результатов было видно, что скорость пролиферации клеток снижалась с увеличением концентрации анлотиниба и анлотиниб также оказывал значительный ингибирующий эффект на пролиферацию линий клеток остеосаркомы при одинаковой концентрации и различной продолжительности действия лекарственного средства. Из приведенных выше результатов было видно, что анлотиниб оказывал значительный ингибирующий эффект на пролиферацию линий клеток остеосаркомы и ингибирующий эффект проявлялся в зависимости от времени и концентрации.

Таблица 1

Линии клеток	143B	U2OS	MG63	SJSA
IC50 (24 ч)	20,81	41,28	30,11	25,66
IC50 (48 ч)	7,95	25,92	14,84	10,22

2.2 Анлотиниб вызывал блокировку клеточного цикла у клеток остеосаркомы

Для изучения механизма, с помощью которого анлотиниб ингибировал пролиферацию клеток остеосаркомы, производили детектирование стадии клеточного цикла с использованием линий клеток остеосаркомы 143B, U2OS, MG63 и SJSA в качестве целевых клеток. Из результатов было видно, что после обработки анлотинибом в клетках происходила блокировка цикла в фазе G2/M, что одновременно сопровождалось уменьшением количества клеток в фазе G1.

2.3 Анлотиниб усиливал вызванный цисплатином (DDP) апоптоз клеток остеосаркомы

Затем авторами настоящего изобретения был исследован хемосенсибилизационный эффект анлотиниба на линии клеток остеосаркомы, было использовано 2 мкМ анлотиниба, и был выбран классический анализ изучения апоптоза клеток с применением аннексина V-FITC/PI. Из результатов было видно, что анлотиниб был способен значительно усиливать вызванный цисплатином апоптоз линий клеток остеосаркомы.

2.4 Анлотиниб ингибировал миграцию и инвазию клеток остеосаркомы

Для изучения влияния анлотиниба на миграцию и инвазию линий клеток остеосаркомы авторами настоящего изобретения был использован анализ в системе Transwell. Из результатов было видно, что анлотиниб значительно ингибировал миграцию и инвазию линий клеток остеосаркомы спустя 24 часа после обработки анлотинибом.

3 Выводы

Анлотиниб был способен значительно ингибировать рост линий клеток остеосаркомы 143B, U2OS, MG63 и SJSA, индуцировать блокировку у них клеточного цикла, а также одновременно ингибировать миграцию и инвазию линий клеток остеосаркомы. Из результатов дополнительного исследования было видно, что анлотиниб также был способен усиливать цитолитическое действие химиотерапевтического лекарственного средства цисплатин, оказываемое на клетки остеосаркомы.

Пример 2

Капсулы, содержащие дигидрохлорид 1-[[[4-(4-фтор-2-метил-1Н-индол-5-ил)окси-6-метоксихинолин-7-ил]окси]метил]циклопропиламина (дигидрохлорид анлотиниба)

Название сырья и вспомогательных веществ	Количество (1000 капсул)
Дигидрохлорид анлотиниба	14,16 г (эквивалентно 12 г анлотиниба)
Маннит	89 г
Микрокристаллическая целлюлоза	138,4 г
Гидроксипропилцеллюлоза	5,9 г
Стеарат магния	0,99 г

Дигидрохлорид анлотиниба пульверизовали, оставляли просеиваться через сито с ячейками размером 80 меш, а затем равномерно перемешивали с маннитом и гидроксипропилцеллюлозой. Затем добавляли определенное количество микрокристаллической целлюлозы и равномерно их перемешивали, а смесь оставляли просеиваться через сито с ячейками размером 0,8 мм. Наконец, добавляли определенное количество стеарата магния и равномерно перемешивали, а полученную смесь загружали в капсулы.

Капсулы с другим содержанием дигидрохлорида анлотиниба можно приготовить и получить, основываясь на той же пропорции и рекомендации, которые описаны выше.

Пример 3

22-летний пациент мужского пола пришел на прием к врачу: результаты послеоперационного патологического исследования указывали на остеосаркому проксимального отдела левой плечевой кости, из результатов компьютерной томографии (CT) грудной клетки было видно метастазирование в легкие.

Пациент без явного предрасполагающего фактора испытывал боль и припухлость в левом плече, и данные симптомы усиливались в ночное время. После приема у врача на полученных с помощью магнитно-резонансной томографии (MR) изображениях левой плечевой кости была выявлена злокачественная опухоль кости в средней и верхней части левой плечевой кости. Была произведена ампутация надплечья. Результаты послеоперационного патологического исследования свидетельствовали об остеосаркоме проксимального отдела (левой) плечевой кости с инвазией в диафиз плечевой кости и окружающие ее поперечно-полосатые мышечные ткани и без вовлечения мышечной и кожной ткани на ампутированном в результате хирургической операции конце, а также метастатическая опухоль не была обнаружена в лимфатических узлах. По результатам СТ грудной клетки в обоих легких были выявлены очаговые затемнения и было рекомендовано повторное обследование. Пациенту назначали метотрексат и эпирубицин (1 цикл) в течение одного месяца со дня приема у врача, а спустя один месяц из-за нарушения функции печени схему приема заменяли на химиотерапию эпирубицином и цисплатином (1 цикл). Затем по результатам СТ грудной клетки были выявлены множественные узелки в легких, которые посчитали метастазированием, и схему приема заменяли на химиотерапию эпирубицином, цисплатином и ифосфамидом (4 цикла). Оптимальным терапевтическим эффектом было SD.

Через девять месяцев после приема у врача пациенту назначали лечение путем перорального приема капсулы дигидрохлорида анлотиниба (12 мг) один раз в сутки (за один цикл лечения считали 2 недели непрерывного приема и 1 неделю отмены).

После прохождения пациентом 2 циклов по результатам СТ грудной клетки, брюшной полости и полости таза было выявлено, что терапевтический эффект оценивался по RECIST1.1 как SD (незначительный), а общий размер целевых очагов составлял 40 мм, что не сильно отличалось по сравнению с исходным уровнем (41 мм). После 3 циклов приема по результатам СТ грудной клетки, брюшной полости и полости таза было видно, что общий размер целевых очагов составлял 37 мм, что было немного меньше по сравнению с предыдущим результатом. После 5 циклов приема по результатам СТ грудной клетки, брюшной полости и полости таза было видно, что очаги уменьшались по сравнению с предыдущими результатами, а общий размер целевых очагов составлял 34 мм. После 8 циклов приема по результатам СТ грудной клетки, брюшной полости и полости таза было видно, что общий размер целевых очагов составлял 30 мм. После 12 циклов приема по результатам СТ грудной клетки, брюшной полости и полости таза было видно целевые очаги уменьшались еще больше, и терапевтический эффект оценивали по RECIST1.1 как PR, а общий размер целевых очагов составлял 27 мм. После 15 циклов приема по результатам СТ грудной клетки и брюшной полости было видно, что общий размер целевых очагов составлял 27 мм, и терапевтический эффект оценивали как PR. После 18 циклов приема по результатам СТ грудной клетки, брюшной полости и полости таза было видно целевые очаги уменьшались еще больше, а общий размер целевых очагов составлял 20 мм. После 21 цикла приема по результатам СТ грудной клетки и брюшной полости было видно, что общий размер целевых очагов составлял 24 мм, что было немного больше по сравнению с предыдущим результатом, и терапевтический эффект оценивали как PR.

Пример 4

У 38-летней пациентки с помощью СТ-контролируемого пункционного вмешательства была диагностирована хондросаркома шейно-грудного отдела позвоночника. По результатам PET-CT были видны множественные метастазы в обоих легких, в правом надпочечнике и в хвосте поджелудочной железы.

Пациентка без явного предрасполагающего фактора испытывала боль в правой части спины, в плечах и правой верхней конечности, сопровождающуюся онемением и припухлостью правой верхней конечности. Пациентка пришла на прием к врачу, и по результатам MRI шейки матки был обнаружен объемный очаг в правом верхнем средостении и в параспинальной области. Проводили пункцию под контролем CT, и из результатов патологического исследования было видно соответствие с данными по дедифференцированной хондросаркоме. Затем проводили следующие хирургические операции: иссечение придатков T1-2 и опухоли в межпозвонковом отверстии через задний доступ; фиксацию С6, 7-Т2; правый грудно-подмышечный разрез с помощью видеоассистированной торакальной хирургии (VATS); и резекцию опухоли заднего средостения. Все полученные результаты послеоперационного патологического исследования свидетельствовали о наличии хондросаркомы. После этого проводили местную лучевую терапию, направленную на шейный и грудной отделы позвоночника, с дозой 50 Гр/25 F. Через 16 месяцев появились местно-распространенная боль и дискомфорт, и пациентке назначали химиотерапию гемцитабином и эндостаром (3 цикла) и биологическую терапию (2 цикла). Через 2 месяца по результатам повторного MRI шеи наблюдали рецидив развития очага, и данный рецидивирующий очаг лечили с помощью ускорителя для стереотаксической терапии. Через 6 месяцев по результатам повторного PET-CT-обследования наблюдали следующее: рецидив опухоли и метастазирование в части позвоночного канала и межпозвонкового отверстия; инвазию в некоторые соседние кости; множественные метастатические опухоли в обоих легких, правой части плевры, воротах левого легкого, правом надпочечнике и хвосте поджелудочной железы; и инвазию в левую главную поясничную мышцу, которую нельзя было удалить. Затем лечение очагов в теле позвонка проводили с использованием ускорителя для стереотаксической терапии. После лечения боль в шее и плечах пациентки не уменьшалась, и пациентке назначали пероральный прием месконтина (30 мг) два раза в сутки.

Через один месяц после приема у врача пациентке назначали лечение путем перорального приема капсулы дигидрохлорида анлотиниба (12 мг) один раз в сутки (за один цикл лечения считали 2 недели непрерывного приема и 1 неделю отмены).

После прохождения пациенткой 2 циклов по результатам СТ наблюдали рассеянные множественные узелки и опухолевидные образования как в легких, так и в плевре, некоторые из которых были похожи на предыдущие, а некоторые были несколько меньше по сравнению с предыдущими. Опухолевидное образование в правом нижнем отделе плевры инвазировало в правый отдел диафрагмы и стенку грудной клетки, имело менее четкую границу с правым надпочечником и было немного меньше по сравнению с предыдущим результатом. На нижней границе поля сканирования рыхлое опухолевидное образование в левой поясничной мышце было меньше по сравнению с предыдущим результатом. Общий размер целевых очагов составлял 148 мм, что было на 25 мм меньше по сравнению с исходным уровнем (173 мм), и терапевтический эффект оценивали по RECIST1.1 как SD (незначительный). После прохождения пациенткой 4 циклов по результатам СТ было видно, что общий размер целевых очагов составлял 139 мм, что было немного меньше по сравнению с предыдущим результатом. После прохождения пациенткой 6 циклов по результатам СТ было видно, что общий размер целевых очагов составлял 126 мм, что было на 13 мм меньше по сравнению с предыдущим результатом. После прохождения пациенткой 7 циклов по результатам СТ было видно, что общий размер целевых очагов составлял 131 мм, что было немного больше по сравнению с предыдущим результатом. После прохождения пациенткой 11 циклов по результатам СТ было видно, что общий размер целевых очагов составлял 127 мм, что было немного меньше по сравнению с предыдущим результатом. После прохождения пациенткой 14 циклов по результатам СТ было видно, что общий размер целевых очагов составлял 129 мм, что фактически оставалось без изменений по сравнению с предыдущим результатом. После прохождения пациенткой 17 циклов по результатам СТ было видно, что общий размер целевых очагов составлял 131 мм, что фактически оставалось без изменений по сравнению с предыдущим результатом. После прохождения пациенткой 21 цикла по результатам СТ было видно, что общий размер целевых очагов составлял 138 мм, что было немного больше по сравнению с предыдущим результатом. После прохождения пациенткой 25 циклов по результатам СТ было видно, что общий размер целевых очагов составлял 129 мм, что было немного меньше по сравнению с предыдущим результатом.

Пример 5

У 27-летней пациентки с помощью СТ и послеоперационного патологического исследования была диагностирована хондросаркома таза, и очаг прогрессировал после многократного лечения.

Пациентка обнаружила у себя опухолевидное образование в нижней части брюшной полости и пришла на прием к врачу. По результатам СТ было видно, что в полости таза, матке и передней нижней части мочевого пузыря можно было наблюдать нерегулярное затемнение от опухолевидного образования со смешанной плотностью, и данное опухолевидное образование имело максимальное сечение 16 см × 11 см × 13 см. После этого проводили хирургическую резекцию. Результаты послеоперационного патологического исследования: высокодифференцированная хондросаркома. Пациентка не проходила послеоперационную химиолучевую терапию. По результатам повторного осмотра, проведенного через 15 месяцев после приема у врача, был выявлен рецидив данного опухолевидного образования в области таза. Через 6 месяцев была проведена хирургическая операция, и опухоль была неоперабельной из-за обширных спаек, обнаруженных во время операции. Результаты послеоперационного патологического исследования: высокодифференцированная хондросаркома. Затем пациентка проходила химиотерапию опухоли в области таза путем внутриартериальной инфузии, и ей вводили пирарубицин (60 мг), цисплатин (60 мг) и интерлейкин-2 (2 млн. ед.). Через один месяц пациентка без перерыва между курсами лечения проходила химиотерапию опухоли брюшной полости и области таза путем внутриартериальной инфузии, и ей вводили пирарубицин (60 мг), цисплатин (60 мг) и интерлейкин-2 (2 млн. ед.). Пациентка испытывала ухудшение боли в пояснично-крестцовом отделе, которая распространялась на левое бедро, и боль была настолько сильной, что пациентка не могла сидеть и передвигаться при помощи собственных ног. По результатам СТ наблюдали прогрессирование опухолевидного образования в брюшной полости и области тазе.

Через 2 месяца после приема у врача пациентке назначали лечение путем перорального приема капсулы дигидрохлорида анлотиниба (12 мг) один раз в сутки (за один цикл лечения считали 2 недели непрерывного приема и 1 неделю отмены).

После 2 циклов приема проводили СТ-сканирование, и по результатам было видно, что общий размер целевых очагов составлял 210 мм, что не отличалось от исходного уровня (210 мм), и терапевтический эффект оценивали как SD. После 4 циклов приема по результатам повторного СТ-исследования было видно, что общий размер целевых очагов составлял 210 мм, что не отличалось от предыдущего результата. После 6 циклов приема общий размер целевых очагов составлял 220 мм, что было на 10 мм больше по сравнению с предыдущим результатом. После 8 циклов приема по результатам повторного СТ-исследования было видно, что общий размер целевых очагов составлял 240 мм, что было на 20 мм больше по сравнению с предыдущим результатом. После 11 циклов приема по результатам повторного СТ-исследования было видно, что общий размер целевых очагов составлял 240 мм, что не отличалось от предыдущего результата. После 14 циклов приема по результатам повторного СТ-исследования было видно, что общий размер целевых очагов составлял 240 мм, что не отличалось от предыдущего результата.

Пример 6

27 апреля 2013 года 25-летний пациент перенес хирургическое удаление очага остеосаркомы в проксимальном отделе правой плечевой кости и протезирование головки плечевой кости. Результаты послеоперационного патологического исследования свидетельствовали об остеосаркоме (хондробластного типа) проксимальной части правой плечевой кости, которая поразила полость костного мозга и инвазировала в корковый слой кости и мягкую ткань, в опухоли можно было видеть очаговый некроз и липоидный некроз, и не наблюдали инфильтрации опухолевой ткани в эпифизарной зоне и нижнем крае среза. После хирургической операции назначали доксорубицин и ифосфамид. Пациент проходил 4 курса химиотерапии, во время которых имело место сильное угнетение костного мозга. Поддерживающую терапию для костного мозга проводили во время перерыва в химиотерапии до окончания химиотерапии в августе 2013 года. В ходе химиотерапии по результатам повторного PET/CT-обследования всего организма, проведенного в июне 2013 года, наблюдали описанные далее состояния. 1. После хирургической операции в связи с остеосаркомой правой плечевой кости и химиотерапии появилась полосчатое затемнение со слегка повышенным метаболизмом, расположенное вокруг искусственно имплантированной кости в правом предплечье. 2. В правой подмышечной впадине были увеличены лимфатические узлы с небольшим увеличением метаболизма. После завершения химиотерапии пациента лечили введением клеток CIK посредством инфузии. В конце 2015 года пациент испытывал боль в верхней части левой плечевой кости, видимого опухолевидного образования не наблюдалось, и пациент страдал от повторяющихся болей. По результатам MRI, проведенной в мае 2016 года, наблюдали аномальное изменение в средней и верхней части левой плечевой кости, которое представляло собой инфекционный участок или опухание и болезненный участок. По результатам PET/CT, проведенной 12 мая 2016 года, наблюдали описанные далее состояния. 1. После хирургической операции в связи с остеосаркомой правой плечевой кости и комплексного лечения не было признаков рецидива опухоли в правой плечевой кости, а в верхней части левой плечевой кости присутствовал полосчатый гиперметаболический очаг. 2. В обеих подмышечных впадинах не было никаких признаков метастаз в лимфатических узлах. 3. В обеих подмышечных впадинах присутствовали слегка гиперметаболические и увеличенные лимфатические узлы, затем проводили биопсию опухолевидного образования в левой плечевой кости, и результаты патологического исследования свидетельствовали о наличии круглоклеточной опухоли, которую, с большей вероятностью, диагностировали как хондробластную остеосаркому. 7 июня 2016 года и 1 июля 2016 года пациент прошел 2 курса химиотерапии доксорубицином и ифосфамидом, и процесс прошел успешно. По результатам повторного MRI-исследования, проведенного после химиотерапии, было видно, что опухоль была немного большей, чем до этого. 22 июля 2016 года была проведена микроволновая инактивация опухоли проксимальной части левой плечевой кости и внутренняя фиксации костного трансплантата. Из результатов послеоперационных патологических исследований было видно соответствие с патологическими изменениями рецидива остеосаркомы и было видно, что были вовлечены мышечные ткани, прилегающие к опухоли. 17 августа, 8 сентября, 8 октября, 31 октября, 28 ноября и 21 декабря 2016 года вводили высокие дозы метотрексата. Пациент прошел 6 курсов химиотерапии, и процесс прошел успешно. После завершения химиотерапии угнетение костного мозга было оценено как I–II степени. Двустороннее метастазирование в легкие было обнаружено в ноябре 2017 года, заболевание прогрессировало, и химиотерапию не стали продолжать. По результатам повторного СТ-обследования, проведенного 20 октября 2018 года, было видно, что в обоих легких присутствовало множество рассеянных очаговых затемнений с разными размерами, указанные очаговые затемнения были увеличены по количеству и размеру по сравнению с предыдущими результатами, и заболевание прогрессировало.

С 10 ноября 2018 года пациенту было назначено лечение путем перорального приема капсулы дигидрохлорида анлотиниба (12 мг) один раз в сутки (за один цикл лечения считали 2 недели непрерывного приема и 1 неделю отмены). К 21 декабря 2018 года пациентом было пройдено 2 цикла лечения, и по результатам обычной СТ в обоих легких были обнаружены множественные узелки и опухолевидные образования, при этом наибольший очаг (3,2 см) был расположен в средней доле правого легкого. Терапевтический эффект оценивали по RECIST1.1 как SD (незначительный). Общий размер целевых очагов составлял 53,5 мм, что на 5,5 мм меньше по сравнению с исходным уровнем. В настоящее время пациент получает непрерывное лечение.

Пример 7

7 ноября 2016 года 18-летняя пациентка перенесла резекцию очага. Результаты патологического исследования от 15 ноября 2016 года свидетельствовали о наличии остеосаркомы правой большеберцовой кости. 29 ноября 2016 года под общим наркозом была проведена имплантация PORT и была проведена дополнительная послеоперационная системная внутривенная химиотерапия. 1 декабря 2016 года вводили доксорубицин и цисплатин (1 курс химиотерапии), а с 16 декабря 2016 года по 5 января 2017 года вводили метотрексат (2 цикла химиотерапии). По результатам повторного СТ-обследования, проведенного 19 января 2017 года, было видно, что очаг в правой большеберцовой кости было немного больше, чем до этого. 19 января 2017 года вводили ифосфамид (1 курс химиотерапии), и химиотерапия прошла хорошо, без явной желудочно-кишечной реакции и угнетения костного мозга. 7 февраля 2017 года под общим наркозом была произведена сегментарная резекция опухоли проксимальной части правой большеберцовой кости, замена сустава и транспозиция лоскута икроножной мышцы. Интраоперационный диагноз: злокачественная остеосаркома проксимальной части правой большеберцовой кости. Результаты послеоперационного патологического исследования: (край среза возле медуллярной полости правой большеберцовой кости) небольшое количество сломанных костей и интрамедуллярная жировая ткань. Отчет о патологическом исследовании сегмента опухоли: (проксимальная часть правой большеберцовой кости) остеосаркома, при этом опухоль инвазировала и проникла в хрящ на поверхности сустава, обильно проникла в кортикальное вещество кости и инвазировала в окружающую мягкую ткань, а в сосуде наблюдался опухолевый тромб. 24 февраля 2017 года вводили доксорубицин и цисплатин (1 курс химиотерапии), и после химиотерапии у пациентки имела место лейкоцитопения (III степени). 10 марта 2017 года вводили ифосфамид (1 курс химиотерапии), и после химиотерапии у пациентки имела место лейкоцитопения (II степени) и отсутствовали явные побочные эффекты, возникающие в результате химиотерапии. 31 марта 2017 года вводили метотрексат, и у пациентки имело место повреждение печени (IV степени), которое уменьшалось после симптоматического лечения. 15 апреля 2017 года вводили доксорубицин и цисплатин (1 курс химиотерапии). После профилактики рвоты у пациентки имела место рвота (II степени), которая уменьшалась после симптоматического лечения. 3 мая 2017 года проводили химиотерапию ифосфамидом, и после химиотерапии у пациентки имела место лейкоцитопения (IV степени). 20 мая 2017 года проводили химиотерапию метотрексатом, и после химиотерапии у пациентки имело место повреждение печени (II степени). 4 июня 2017 года проводили химиотерапию доксорубицином и цисплатином, 19 июня 2017 года проводили химиотерапию ифосфамидом, и у пациентки имела место лейкоцитопения (IV степени). 11 июля 2017 года проводили химиотерапию метотрексатом, и у пациентки имело место повреждение печени (I степени). 29 июля 2017 года проводили химиотерапию доксорубицином и цисплатином, и у пациентки имела место лейкоцитопения (II степени). 16 августа 2017 года проводили химиотерапию ифосфамидом, и после нее у пациентки имела место лейкоцитопения (IV степени). 6 сентября 2017 года проводили химиотерапию метотрексатом, и у пациентки имело место угнетение костного мозга (I степени). По результатам повторного СТ-обследования, проведенного 3 января 2018 года, было видно, что маленькие узелки в основании нижней доли левого легкого были примерно схожи с предыдущими узелками, а в дорсальном сегменте нижней доли левого легкого недавно сформировались тонкие и маленькие узелки. По результатам повторного СТ-обследования, проведенного в октябре 2018 года, было видно метастазирование в легкие, метастазирование в область таза и опухолевидное образование позади правой бедренной кости, что свидетельствовало о возможности рецидива. 30 октября 2018 года проводили пункционную биопсию опухолевидного образования в правом бедре, и результаты патологических исследований свидетельствовали о высокозлокачественной веретеноклеточной саркоме с массивным коагуляционным некрозом (в мягких тканях возле нижней части правой бедренной кости).

С 16 ноября 2018 года пациентке было назначено лечение путем перорального приема капсулы дигидрохлорида анлотиниба (12 мг) один раз в сутки (за один цикл лечения считали 2 недели непрерывного приема и 1 неделю отмены). К 26 декабря 2018 года пациенткой было пройдено 2 курса лечения. По результатам СТ в нижней доле правого легкого были видны узелки смешанной плотности, маленькие узелки были видны в основании нижней доли левого легкого, которые были примерно схожи с предыдущими узелками, было видно затемнение от опухолевидного образования на правой стенке таза, которое сопровождалось окостенением и некрозом и имело меньший размер, чем прежде. Кроме того, по результатам СТ было видно, что правая большеберцовая кость была примерно схожа с результатами предыдущего исследования. Терапевтический эффект оценивали по RECIST1.1 как SD (незначительный). Общий размер целевых очагов составлял 218 мм, что на 13 мм меньше по сравнению с исходным уровнем. В настоящее время пациентка получает непрерывное лечение.

Пример 8

32-летняя пациентка в течение 6 месяцев без явного предрасполагающего фактора испытывала боль на внешней стороне правой голени. Боль была постоянной и не связанной с такими движениями, как ходьба, и не уменьшалась даже после отдыха. Пациентка не проходила ни диагностику, ни лечение, а боль постепенно усиливалась и проявлялась по ночам. Был сделан рентгеновский снимок, и на снимке было видное остеолитическое повреждение на проксимальном конце правой малоберцовой кости. 1 декабря 2017 года пациентка пришла на прием к врачу, а 5 декабря была сделана биопсия с рассечением опухоли конечности. 7 декабря по результатам морфологической диагностики было выдвинуто предположение о наличии мезенхимальной немелкоклеточной злокачественной опухоли проксимального отдела правой малоберцовой кости, а при сочетании морфологического диагноза с клинической визуализацией нельзя было исключать и остеосаркому. 19 апреля 2018 года результаты послеоперационных патологических исследований свидетельствовали, что остеосаркома проксимальной части правой малоберцовой кости сопровождалась изменениями, появившимися после химиотерапии, а степень некроза опухоли составляла менее 90%.

12 декабря 2017 года, 7 февраля 2018 года, 4 мая 2018 года и 6 июля 2018 года в течение 1 суток соответственно проводили химиотерапию метотрексатом. Химиотерапию (1 цикл) ифосфамидом (IFO) проводили в следующие периоды времени: с 16 декабря 2017 года по 30 декабря 2017 года, со 2 марта 2018 года по 7 марта 2018 года (терапевтический эффект оценивали как SD), с 18 апреля 2018 по 22 апреля 2018 года (снижение уровня тромбоцитов (IV степень)), с 14 июня 2018 года по 18 июня 2018 года (терапевтический эффект оценивали как SD), с 30 августа 2018 года по 3 сентября 2018 года (терапевтический эффект оценивали как PD). Химиотерапию цисплатином и амрубицином (1 цикл) проводили соответственно в следующие периоды времени: с 17 января 2018 года по 20 января 2018 года, с 24 мая 2018 года по 27 мая 2018 года и с 20 июля 2018 года по 23 июля 2018 года (терапевтический эффект оценивали как SD). По результатам комплексной оценки было выявлено, что поначалу (с декабря 2017 года по март 2018 года) химиотерапия первой линии переносилась пациенткой нормально, а в более поздние сроки (после апреля 2018 года) химиотерапия второй линии переносилась плохо, было видно угнетение костного мозга, а патологическое состояние пациентки прогрессировало.

История болезни пациентки соответствовала требованиям клинического испытания для назначения гидрохлорида анлотиниба для лечения остеосаркомы. С 12 октября 2018 года пациентке было назначено лечение путем перорального приема капсулы дигидрохлорида анлотиниба (12 мг) один раз в сутки (за один цикл лечения считали 2 недели непрерывного приема и 1 неделю отмены). 23 ноября 2018 года проводили первую оценку опухоли после того, как пациентка уже прошла 2 цикла. По сравнению с исходным уровнем (37 мм) (размер целевых очагов в средней доле правого легкого составлял 24 мм, а размер целевых очагов в нижней доле правого легкого составлял 13 мм) размер целевых очагов уменьшился до 20 мм (размер целевых очагов в средней доле правого легкого составлял 10 мм, а размер целевых очагов в нижней доле правого легкого составлял 10 мм). 3 января 2019 года проводили оценку опухоли после 4 циклов приема. Общий длинный диаметр целевых очагов составлял 16 мм (размер целевых очагов в средней доле правого легкого составлял 10 мм, а размер целевых очагов в нижней доле правого легкого составлял 6 мм). В настоящее время пациентка получает непрерывное лечение.

Выше описаны лишь предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения. Следует отметить, что, как понятно специалистам в данной области техники, также можно внести некоторые модификации и дополнения без отступления от способа по настоящему изобретению, и эти модификации и дополнения также следует рассматривать как подпадающие под объем защиты настоящего изобретения.

1. Применение анлотиниба и его фармацевтически приемлемой соли при приготовлении лекарственного средства для ингибирования запущенной и/или метастатической остеосаркомы.

2. Применение анлотиниба и его фармацевтически приемлемой соли в качестве усилителя цисплатина при ингибировании запущенной и/или метастатической остеосаркомы.

3. Применение по п. 1 или 2, где фармацевтически приемлемая соль анлотиниба представляет собой дигидрохлорид.

4. Применение по п. 1 или 2, где остеосаркома представляет собой первичную остеосаркому и/или вторичную остеосаркому.

5. Применение по п. 1 или 2, где остеосаркома представляет собой остеогенную остеосаркому и/или остеолитическую остеосаркому.

6. Применение по п. 1 или 2, где остеосаркома представляет собой остеобластную остеосаркому, хондробластную остеосаркому и/или фибробластную остеосаркому.

7. Применение по п. 1 или 2, где метастатическая остеосаркома представляет собой остеосаркому с метастазированием в легкие.

8. Применение по п. 1 или 2, где субъект с остеосаркомой уже проходил лечение с помощью химиотерапии и/или лучевой терапии.

9. Применение по п. 8, где химиотерапевтическое средство, применяемое при химиотерапии, которую получает субъект с остеосаркомой, включает метотрексат, ифосфамид, цисплатин и доксорубицин.

10. Применение по п. 8, где заболевание прогрессирует после прохождения субъектом с остеосаркомой лечения с помощью химиотерапии и/или лучевой терапии.

11. Применение по п. 1 или 2, где суточная доза указанного анлотиниба или его фармацевтически приемлемой соли, вводимая пациенту, выбрана из одной из следующих доз: 8 мг, 10 мг, 12 мг, 14 мг или 16 мг.

12. Применение по п. 11, где анлотиниб или его фармацевтически приемлемая соль вводится пациенту посредством дробного введения, указанное дробное введение предусматривает период введения и период отсутствия введения, и режим дробного введения представляет собой непрерывное введение в течение 2 недель и отмену на 1 неделю.

13. Применение по п. 1, где анлотиниб или его фармацевтически приемлемая соль вводится пациенту с остеосаркомой одновременно или последовательно с другим(и) противоопухолевым(и) лекарственным(и) средством(ами), при этом указанное другое противоопухолевое лекарственное средство включает алкилирующее средство, комплекс платины, производное фторпиримидина, камптотецин и аналоги камптотецина, антрахиноновый противоопухолевый антибиотик и таксаны.

14. Применение фармацевтической композиции для ингибирования запущенной и/или метастатической остеосаркомы, при этом композиция содержит анлотиниб или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.