Способ извлечения головного мозга у подопытного кролика

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к неврологии. Кролику по линии коронарного шва, отступив от сагиттального шва по 5 мм в обе стороны, накладывают по одному фрезевому отверстию. Через каждое фрезевое отверстие вводят по 3 мл 10% раствора формалина. После этого подопытного кролика помещают в холодильную камеру при температуре плюс 4°С. Через 24 часа его извлекают из холодильной камеры и выполняют широкую краниотомию крыши черепа до его основания. Резецируют заднюю дугу первого и второго шейных позвонков. Начиная с ольфакторных долей, поднимают головной мозг кверху и кзади, выполняя диссекцию полушарий головного мозга от окружающих тканей. Выполняют резекцию черепно-мозговых нервов и сосудов у основания внутренней поверхности черепа. На уровне второго шейного позвонка выполняют резекцию спинного мозга и его корешков, после чего головной мозг извлекают. Способ эффективен и позволяет без повреждения извлекать головной мозг у экспериментального животного. 1 пр.

 

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для извлечения головного мозга у подопытного кролика. Проведение гистопатологического анализа головного мозга подопытного лабораторного животного - кролика которому, было выполнено моделирование злокачественного ишемического инсульта в бассейне средней мозговой артерии (СМА), с целью оценки успешности моделирования, изучения патофизиологических, биохимических, молекулярных, генетических механизмов и определения эффективности лечения, является важным этапом эксперимента (Schaar K.L., Brenneman М.М., Savitz S.I. Functional assessments in the rodent stroke model // Experimental & translational stroke medicine. 2020. Vol. 2. N. 13. P. 1; Fluri F., Schuhmann M., Kleinschitz C. Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research // Drug design development and therapy. 2015. Vol. 9. P. 3446) и предусматривает извлечение головного мозга из полости черепа без его повреждения (Туховской Е.А. Изучение морфологических и функциональных последствий фокального инсульта головного мозга на модели окклюзии средней мозговой артерии // фундаментальные и прикладные исследования в современном мире. 2013. Т. 1., №4 (04). С. 200).

Череп кролика вытянут в длину, имеет продолговатую форму (https://pushistiymir.ru/kroliki/bolezni-lechenie/anatomiya), ольфакторные доли - удлиненные и находятся в передних отделах полости черепа. Головной мозг кролика покрыт мозговыми оболочками; твердой, мягкой и арахноидеи. Твердая мозговая оболочка, является наружной, плотно связана с костями черепа, обеспечивает фиксацию мозга в полости черепа (https://www.bioscience.com.pk/topics/zoology/item/466-structure-and-functions-of-rabbit-brain), поэтому извлечение головного мозга подопытного кролика без повреждения является трудной задачей.

Таким образом разработка новых способов извлечения головного мозга у подопытного кролика из полости черепа после моделирования злокачественного ишемического инсульта в бассейне СМА без повреждения и нарушения его целостности, для последующего проведения гистологического анализа, является актуальной задачей современной экспериментальной медицины.

Проведенными исследованиями по научно-медицинской и патентной литературе выявлены различные способы извлечения головного мозга у подопытного лабораторного животного - кролика.

В работах Su-ming Z., Ramirez-Lassepas М., Hernandez L.A., Lee S.H., Heros R.C. A new model of experimental cerebral infarction in New Zeland white rabbits // Journal of Tongji medical university. 1995. Vol. 15. N. 1. P. 7. и Benes V., Zabramski J.M., Boston M., Puca A., Spetzler R.F. Effect of intra-arterial antifibrinolytic agents on autologous arterial emboli in the cerebral circulation of rabbits // Stroke. 1990. Vol. 21. N. 11. P. 1596. описан способ извлечения головного мозга у подопытного кролика. Способ предусматривает выполнение широкой краниотомии, после чего извлекают головной мозг.

Недостатком данного способа является недостаточная эффективность, обусловленная возможностью повреждения морфологической структуры головного мозга при его извлечении из полости черепа.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка высокоэффективного способа извлечения головного мозга из полости черепа у подопытного кролика.

Техническим результатом, проявляющимся при реализации данного способа, является повышение его эффективности за счет исключения возможности повреждения головного мозга.

Указанный технический результат достигается, тем что подопытному животному - кролику выполняют обезболивание и эвтаназию в соответствии с Хельсинской декларацией о гуманном отношении к животным.

После выполнения эвтаназии по линии коронарного шва, отступив от сагиттального шва по 5 мм в обе стороны, накладывают по одному фрезевому отверстию. Через каждое фрезевое отверстие вводят по 3 мл 10% раствора формалина. После этого подопытного кролика помещают в холодильную камеру при температуре плюс 4°С. Через 24 часа его извлекают из холодильной камеры и выполняют широкую краниотомию крыши черепа до его основания. Резецируют заднюю дугу первого и второго шейных позвонков. Начиная с ольфакторных долей, поднимают головной мозг кверху и кзади, выполняя диссекцию полушарий головного мозга от окружающих тканей. Выполняют резекцию черепно-мозговых нервов и сосудов у основания внутренней поверхности черепа. На уровне второго шейного позвонка выполняют резекцию спинного мозга и его корешков, после чего головной мозг извлекают.

Подробное описание способа.

Подопытное животное - кролика обезболивают и выполняют эвтаназию в соответствии с Хельсинской декларацией о гуманном отношении к животным. Укладывают подопытного кролика на живот и фиксируют на операционном столе. На конвекситальной поверхности черепа подопытного кролика выполняют срединный разрез кожи. Выполняют отсепаровку кожно-мышечно-апоневротического лоскута до уровня скуловой дуги с обеих сторон. По линии коронарного шва, отступив от сагиттального шва по 5 мм в обе стороны, накладывают по одному фрезевому отверстию. Через каждое фрезевое отверстие вводят по 3 мл 10% раствора формалина гистологического нейтрального забуференного Блика. После этого подопытного кролика помещают в холодильную камеру при температуре плюс 4°С. Через 24 часа его извлекают из холодильной камеры и в положении подопытного животного на животе, выполняют широкую краниотомию крыши черепа до его основания. Резецируют заднюю дугу первого и второго шейных позвонков. Начиная с ольфакторных долей, поднимают головной мозг кверху и кзади, выполняя диссекцию полушарий головного мозга от окружающих тканей. Выполняют резекцию черепно-мозговых нервов и сосудов у основания внутренней поверхности черепа. На уровне второго шейного позвонка выполняют резекцию спинного мозга и его корешков, после чего головной мозг извлекают.

Практическая реализуемость заявляемого способа иллюстрируется примером извлечения головного мозга у подопытного животного - кролика.

Пример: в качестве подопытного животного использовали кролика калифорнийской породы массой 1,8 кг в возрасте 2 месяца, которому было выполнено моделирование злокачественного ишемического инсульта в бассейне СМА согласно методике, описанной в работе Doerfler A., Forsting М, Reith W., Staff С, Sabine Н., , Kummer R.V., Hacke W., Sartor K. Decompressive craniectomy in a rat model of "malignant" cerebral hemispheric stroke: experimental support of an aggressive therapeutic approach // J. Neurosurgery 1996. Vol. 85. P. 854.

Кролика обезболили и выполнили эвтаназию в соответствии с Хельсинской декларацией о гуманном отношении к животным. Уложили подопытного кролика на живот и зафиксировали на операционном столе. На конвекситальной поверхности черепа подопытного кролика выполнили срединный разрез кожи. Выполнили отсепаровку кожно-мышечно-апоневротического лоскута до уровня скуловой дуги с обеих сторон. По линии коронарного шва, отступив от сагиттального шва по 5 мм в обе стороны, наложили по одному фрезевому отверстию. Через каждое фрезевое отверстие ввели по 3 мл 10% раствора формалина гистологического нейтрального забуференного Блика. После этого подопытного кролика поместили в холодильную камеру при температуре плюс 4°С. Через 24 часа его извлекли из холодильной камеры и в положении подопытного животного на животе, выполнили широкую краниотомию крыши черепа до его основания. Резецировали заднюю дугу первого и второго шейных позвонков. Начиная с ольфакторных долей, подняли головной мозг кверху и кзади, выполняя диссекцию полушарий головного мозга от окружающих тканей. Выполнили резекцию черепно-мозговых нервов и сосудов у основания внутренней поверхности черепа. На уровне второго шейного позвонка выполнили резекцию спинного мозга и его корешков, после чего головной мозг извлекли.

Визуальный осмотр извлеченного согласно заявляемому способу у подопытного кролика головного мозга показал отсутствие каких-либо повреждений головного мозга.

Согласно предлагаемому способу было проведено извлечение головного мозга у 30 подопытных кроликов, которым было выполнено моделирование злокачественного ишемического инсульта в бассейне СМА согласно методике, описанной в работе Doerfler A., Forsting М., Reith W., Staff С, Sabine Н., , Kummer R.V., Hacke W., Sartor K. Decompressive craniectomy in a rat model of "malignant" cerebral hemispheric stroke: experimental support of an aggressive therapeutic approach // J. Neurosurgery 1996. Vol. 85. P. 854. У всех 30 подопытных кроликов не были зафиксированы какие-либо повреждения извлеченного головного мозга.

Таким образом, предлагаемый способ извлечения головного мозга у подопытного кролика эффективен и позволяет без повреждения извлекать головной мозг у экспериментального животного.

Способ извлечения головного мозга у подопытного кролика, включающий обезболивание, выполнение эвтаназии и широкой краниотомии крыши черепа, отличающийся тем, что после выполнения эвтаназии по линии коронарного шва, отступив от сагиттального шва по 5 мм в обе стороны, накладывают по одному фрезевому отверстию, через каждое из которых вводят по 3 мл 10% раствора формалина; после чего подопытного кролика помещают в холодильную камеру при температуре плюс 4°С; через 24 часа его извлекают из холодильной камеры, выполняют широкую краниотомию крыши черепа до его основания, резецируют заднюю дугу первого и второго шейных позвонков; затем, начиная с ольфакторных долей, поднимают головной мозг кверху и кзади, выполняя диссекцию полушарий головного мозга от окружающих тканей; выполняют резекцию черепно-мозговых нервов и сосудов у основания внутренней поверхности черепа, а на уровне второго шейного позвонка - резекцию спинного мозга и его корешков, после чего головной мозг извлекают.