Инъецируемая медицинская композиция

Предложенное техническое решение относится к медицинским изделиям, предназначенным для ухода за кожей, в частности к инъецируемым составам для введения в дерму пациента для использования в эстетической медицине для улучшения качества кожи. Инъецируемая медицинская композиция содержит в качестве активных веществ гиалуроновую кислоту и смесь аминокислот, включающую: аргинин, глутаминовую кислоту, глицин, метионин, фенилаланин, пролин, треонин, валин. 4 з.п. ф-лы, 2 табл., 9 ил.

 

Предложенное техническое решение относится к медицинским изделиям, предназначенным для ухода за кожей, в частности к инъецируемым составам для введения в дерму пациента для использования в эстетической медицине для улучшения качества кожи.

При проведении поиска, среди известных технических решений был обнаружен патент на изобретение, решающий сходные задачи, а именно, патент Европейского союза на изобретение № 1137671 «REACTION PRODUCTS OF HYALURONIC ACID AND NATURAL AMINO ACIDS AND THEIR USE IN COSMETIC AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS (Продукт реакции гиалуроновой кислоты и натуральных аминокислот и его использование в косметике и фармацевтической композиции)» (МПК A61K; A61P; A61Q; Jasper Ltd Liability Co, Италия, з. № EP99936979, 29.07.1999, приор. 29.07.1999, публ. 04.10.2001). Изобретение относится к высокомолекулярным солям гиалуроновой кислоты. Более конкретно, эти соли характеризуются тем, что они имеют в качестве противоиона природную аминокислоту. Продукты изобретения могут быть получены, начиная с высокомолекулярной гиалуроновой кислоты или ее солей. Эти новые соли гиалуроновой кислоты с высоким молекулярным весом могут быть использованы в косметической и фармацевтической областях. Продукты солеобразования между гиалуроновой кислотой и, по крайней мере, природной аминокислотой. Указанная аминокислота выбрана из числа лизина, аргинина, метионина или аспарагиновой кислоты.

В настоящем техническом решении используется иной, сокращенный, состав аминокислот в иных массовых долях, при этом, исходя из концентраций, аминокислоты используются в композиции как питательные вещества, что не позволяет достичь желаемого терапевтического и визуального эффекта.

Наиболее близким к заявляемой композиции является решение по патенту Российской Федерации на изобретение № 2704032 «Композиция на основе аминокислот для восстановления фиброэластина в дермальных соединительных тканях» (МПК A61K 31/198; A61K 31/401; A61K 31/728; A61Q 19/00; A61P 17/00; ПРОФЕШИНАЛ ДАЙЕТЕТИКС С.П.А., Италия, з. № 2017118971 от 03.12.2015, приор. 04.12.2014, публ. 23.10.2019). Изобретение относится к области фармацевтики и может быть использовано для восстановления фиброэластина в дермальных соединительных тканях. Для этого используют композицию, содержащую в качестве активного ингредиента смесь аминокислот, состоящую из глицина, L-пролина, L-аланина, L-валина, L-лейцина и гидрохлорида L-лизина в заявленных массовых соотношениях. Изобретение оказывает стимулирующее воздействие на синтез как коллагена, так и эластина.

В указанном решении также, как и в предыдущем, используются сокращенный набор аминокислот в иных концентрациях.

Предложенное решение может быть полезно в профилактике и лечении дермоэпидермальной атрофии в результате старения, вызванного экзогенными факторами, создании условий для нормализации биоритмической функции клеток, в частности, фибробластов, через повышение экспрессии белка СLOCK в фибробластах при их клеточном старении, создании геропротекторного эффекта в смешанной культуре эпидермиса кожи человека при старении через повышение экспрессии белка KLOTHO и повышение экспрессии рецепторов к мелатонину MTNR1А и MTNR1В типов.

В общем случае реализации предлагаемая композиция характеризуется наличием, в качестве активных веществ, гиалуроновой кислоты и смеси разноплановых по своим химическим и биологическим свойствам аминокислот, включающую: аргинин, глутаминовую кислоту, глицин, метионин, фенилаланин, пролин, треонин, валин.

В первом частном случае гиалуроновая кислота присутствует в композиции в виде соли гиалуроной кислоты, в частности, натриевой соли, или в виде их комбинации.

В ином частном случае выполнения, композиция дополнительно характеризуется тем, что средний молекулярный вес гиалуроновой кислоты составляет от 1,1 до 2,1кДа.

В развитие указанного частного случая, композиция дополнительно характеризуется тем, что соотношение компонентов, масс. составляет, %:

гиалуроновая кислота	1,0-2,0
смесь аминокислот	0,00081-0,0038

В развитие указанного частного случая, композиция дополнительно характеризуется тем, что смесь аминокислот имеет соотношение компонентов, мас.%:

аргинин	0,00025-0,00080
глутаминовая кислота	0,00005-0,00030
глицин	0,00010-0,00050
метионин	0,00001-0,00020
фенилаланин	0,00015-0,00050
пролин	0,00005-0,00050
треонин	0,00010-0,00050
валин	0,00010-0,00050

В ином частном случае выполнения, содержит фосфатно-солевой буферный раствор, воду для инъекций.

В следующем частном случае, содержит соединения гиалуроновой кислоты с несколькими аминокислотами из перечня: аргинин, глутаминовая кислота, глицин, метионин, фенилаланин, пролин, треонин, валин.

Целесообразно введение композиции интрадермально.

В развитие указанного частного случая, композиция используется как средство против старения кожи, вызванного воздействием экзогенных факторов, в частности, за счет нормализации биоритмической (циркадианной) функции фибробластов, повышения экспрессии клеточных рецепторов к мелатонину MTNR1А и MTNR1В типов, повышения экспрессии белка KLOTHO, повышения экспрессии циркадианного гена CLOCK.

Медицинские композиции на основе гиалуроновой кислоты, модифицированной аминокислотами, обладают хорошей биосовместимостью и переносимостью, постепенно резорбируются и не вызывают образования соединительно-тканных капсул в месте введения и отрицательных реакций со стороны кожи. Гиалуроновая кислота относится к несульфированным гликозаминогликанам, входящим в состав эпителиальной ткани человека. Вследствие своего высокого содержания во внеклеточных матриксах гиалуроновая кислота играет важную роль в гидродинамике тканей, процессах миграции и пролиферации клеток, а также участвует в ряде взаимодействий с поверхностными рецепторами клеток. Гиалуроновая кислота обладает гидрофильными свойствами и оказывает увлажняющее действие на кожу человека. Полезный эффект композиции обеспечивается, в том числе, физическими и биологическими свойствами гиалуроновой кислоты, вызывающей локальный эффект ревитализации клеток кожи.

Учитывая, что естественная форма существования гиалуроновой кислоты в матриксе дермы проявляется в виде комплекса с разнообразными макромолекулами, предложенная композиция дополнена смесью аминокислот. Аминокислоты могут не содержаться в композиции в свободном состоянии, образуя связи с молекулами гиалуроновой кислоты. Гиалуроновая кислота в составе композиции действует совместно с комплексом из восьми аминокислот, шесть из которых являются незаменимыми: аргинин, в отдельности, способствующий синтезу собственного коллагена, разглаживанию морщин, повышению упругости кожи, регенерации и заживлению тканей; глутаминовая кислота, способствующая регенерации эпителиального покрова, стимулирующая синтез коллагена, в результате чего наблюдается выраженный лифтинг-эффект, способствует увлажнению и питанию кожи; метионин является носителем тиоловой группы, что делает его незаменимым участником антиоксидантных каскадов в коже и способствует выведению из организма тяжелых металлов; глицин способствует увлажнению кожи, ускорению регенерационных процессов, вовлечен в синтез заменимых аминокислот; фенилаланин способствует подавлению образования меланоцитстимулирующего гормона MSH, ингибирует тирозиназы и формирование меланина; валин способствует синтезу и росту тканей в организме человека; треонин способствует выработке коллагена и эластина; пролин способствует синтезу коллагена, обладает противовоспалительным действием.

Оптимальное сочетание гиалуроновой кислоты и необходимых аминокислот обеспечивает очевидный геропротекторный и экзопротекторный эффект, стимулируя синтез критически важных белков в клетках дермы человека при старении, а также способствует нормализации биоритмической функции клеток, участвуя в процессе экспрессии необходимых для этого генов.

Указанные концентрации аминокислот позволяют достичь заявляемого эффекта, поскольку доставляются прямым образом (инъекционным) в ткань пациента, минуя эпидермальный барьер. В настоящем изобретении применяются такие концентрации веществ, при которых они выступают сигнальными молекулами, от наномолярных до фемтомолярных. Таким образом, в отличие от решений, известных из уровня техники, аминокислоты в составе композиции применяются как сигнальные молекулы, а не питательные вещества.

В результате обеспечивается активация собственных клеточных механизмов защиты, репарации и адаптации, позволяющих клеткам кожи естественным образом противостоять стресс-факторам внешней среды.

Интрадермальный способ введения композиции позволяет доставить действующие компоненты композиции непосредственно в ткань дермы, тем самым, обеспечив быструю ответную реакцию ткани. Как показано в примерах, это приводит к существенному повышению регенеративного потенциала кожи и снижает степень проявления внешних признаков возрастной инволюции, что лежит в основе наблюдаемого полезного эффекта.

При проведении исследований нескольких вариаций композиции in vitro было обнаружено, что композиция из гиалуроновой кислоты и смеси аминокислот индуцирует повышение экспрессии генов CLOCK, белка KLOTHO, а также рецепторов к мелатонину. Указанный эффект отсутствует при изменении перечня активных компонентов, в частности, при исключении даже одной из восьми аминокислот. Проведенные авторами изобретения исследования показали, что предлагаемая композиция обеспечивает нормализацию биоритмической функции фибробластов, повышения экспрессии клеточных рецепторов к мелатонину MTNR1А и MTNR1B типов, повышения экспрессии белка KLOTHO, повышения экспрессии циркадианного гена CLOCK. Подробное описание эффектов приведено в примерах реализации изобретения.

Циркадианный ген CLOCK является важной составляющей в регуляции генов циркадных ритмов. Два фактора транскрипции CLOCK и BMAL1 образуют гетеродимерный комплекс CLOCK:BMAL1, активно участвующий в экспрессии генов. Циркадианный регулятор CLOCK обладает активностью ацетилтрансферазы, что позволяет изменять связывание ДНК с гистонами [1]. Участвует в регуляции транскрипционной активности глюкокортикоидного рецептора (GR) путем его ацетилирования [2]. Ген CLOCK оказывает свое влияние и в посттранскрипционной регуляции, действуя на метаболические ферменты ASS1, NDUFA9 и IMPDH2 [3]. Циркадные часы влияют на многие процессы в организме, поэтому если они перестают функционировать правильно, то накапливаются метаболические последствия, приводящие к старению [4].

Повышенная экспрессия KLOTHO увеличивает продолжительность жизни клеток [5]. Отсутствие белка у нокаутных мышей вызывает ускоренное старение [5, 6]. В настоящий момент известно, что в ответ на повреждение ДНК KLOTHO уменьшает клеточное старение в первичных клетках фибробластов человека MRC-5 и эндотелиальных клетках вены человеческой пуповины (HUVEC) через p53/ 21-зависимый путь. Потеря активности KLOTHO в первичных клетках фибробластов MRC-5 приводит к фенотипу преждевременного старения, который зависит от белка p53, стимулирующего последующий p53-зависимый CDK-фактор p21. Этот результат указывает на участие KLOTHO в ингибировании старения через чувствительный к р53/р21 путь. Аналогично, через путь p53/p21, KLOTHO снижает клеточное старение в HUVEC, что повышает потенцирование этого внутриклеточного сигнального пути в контроле старения. Экспрессия гена молекул р53 и р21 снижается в клетках, обработанных KLOTHO.

Мелатонин является гормоном индоламинового ряда и выступает основным регулятором биологических ритмов, проводником синхронизирующего сигнала из центральной нервной системы ко всем периферическим тканям/органам [7]. Как и все остальные гормоны, мелатонин оказывает свое действие через специальные рецепторы. Рецепторы MTNR1А, MTNR1В представляют собой белки, из 350 и 362 аминокислот, несущие сайт гликозилирования на N-конце, сайты фосфорилирования для протеинкиназы С, казеинкиназы 1 и 2 и протеинкиназы А, принимающие участие в регуляции функций рецепторов. Рецепторы мелатонина MTNR1А и MTNR1В составляют обособленную группу внутри суперсемейства рецепторов, связанных с G-белками, за счет наличия у них имеют NRY-мотива, вместо мотива DRY/ERY, который характерен для других рецепторов, связанных с G-белками. Этот участок MTNR1А-рецепторов участвует в рецепторном транспорте и клеточном сигналинге. Эффекторная система, на которую действует мелатонин через рецепторы MTNR1А и MTNR1B, включает аденилатциклазу, фосфолипазу С, фосфолипазу А2, калиевые каналы и, возможно, гуанилатциклазу и кальциевые каналы. MTNR1А и MTNR1B были найдены и полностью охарактеризованы в сетчатке, супрахиазматическом ядре, миометрии, плаценте, гранулезных клетках и клетках желтого тела, иммунных клетках, желудочно-кишечном тракте, коже.

Таким образом, композиция гиалуроновой кислоты и выбранного авторами набора аминокислот обеспечивает оптимальные биологические (биомиметические) свойства и максимальную аффинность к элементам дермального матрикса кожи человека. Высокая биосовместимость изделия лежит в основе пролонгированного эффекта. Применение комплекса гиалуроновой кислоты с аминокислотами позволяет достичь естественного и выраженного косметического эффекта, в том числе, на макроуровне. Полная биодеградация биосинтетической гиалуроновой кислоты происходит в течение 30 дней в зависимости от места введения, при этом ее положительный эффект сохраняется в течение длительного времени. За счет относительно небольшой массовой доли, аминокислоты, присутствующие в композиции, не оказывают системного воздействия на организм человека, действуя исключительно по месту введения композиции.

Доставка аминокислот в форме водного раствора в геле с гиалуроновой кислотой в форме натриевой соли восстанавливает пластичность дермального матрикса и гарантирует удержание аминокислот в дермоэпидермальной области на протяжении достаточно длительного времени для оказания желаемого биологического эффекта.

Композиции для инъекций получаются путем растворения порошка аминокислот в воде, введения в раствор натриевой соли гиалуроновой кислоты, доведения осмолярности и pH получаемого раствора с помощью буферных солей до физиологических значений. Итоговый раствор стерилизуется в промышленных условиях. После этого гелевый раствор готов для введения в ткани кожи человека.

Стерильный водный раствор натриевой соли гиалуроновой кислоты может содержать буферные агенты для коррекции рН (например, фосфатный буфер), а также другие технологические адъюванты, позволяющие обеспечить необходимые физико-химические свойства и тканевую совместимость стерильных форм для инъекций. Изобретение подробно проиллюстрировано в следующих примерах.

Предлагаемое изобретение поясняется следующими графиками и рисунками:

Фиг. 1 - гистограмма сравнения относительной площади экспрессии гена CLOCK;

Фиг. 2 - визуальное сравнение площади экспрессии гена CLOCK в образцах;

Фиг. 3 - гистограмма сравнения относительной площади экспрессии маркера KLOTHO;

Фиг. 4 - визуальное сравнение относительной площади экспрессии маркера KLOTHO в образцах;

Фиг. 5 - гистограмма сравнения относительной площади экспрессии рецептора к мелатонину MTNR1А;

Фиг. 6 - визуальное сравнение относительной площади экспрессии рецептора к мелатонину MTNR1А;

Фиг. 7 - гистограмма сравнения относительной площади экспрессии рецептора к мелатонину MTNR1B;

Фиг. 8 - визуальное сравнение относительной площади экспрессии рецептора к мелатонину MTNR1B;

Фиг. 9 - визуальное сравнение поверхности кожи до и после применения композиции.

Для понимания принципов работы и особенностей различных реализаций изобретения, ниже приведено описание примеров выполнения и фигур технического решения. Хотя в тексте описания подробно объясняются предпочтительные варианты реализации композиции, необходимо понимать, что возможны и иные варианты реализации, в частности, иное соотношение компонентов, чем приведено в примерах ниже. Соответственно, нет необходимости в ограничении объема правовой охраны технического решения исключительно представленными реализациями и соотношением компонентов. Вместе с тем, при описании предпочтительных вариантов технического решения, для ясности понимания основных принципов изобретения специалистом, необходимо уточнить термины, применяемые в описании.

В формуле и при описании предпочтительных вариантов выполнения, для обеспечения ясности понимания, используются специальные термины. Предполагается, что термин используется в самом широком смысле, в каком он может быть истолкован специалистами в данной области техники и включает все технические эквиваленты, используемые тем же образом и с той же целью. Так, в частности, словосочетание «медицинская композиция» в контексте настоящего изобретения означает смесь веществ синтетического или природного происхождения в виде лекарственной формы или медицинского изделия (класс III), например, раствора или геля, применяемые для профилактики и лечения заболеваний и/или патологических состояний. Словосочетание «активное вещество» означает химическое вещество в составе медицинской композиции, физиологическим действием которой на организм обуславливаются лечебные свойства композиции. В случае настоящего решения активных веществ в составе композиции несколько, в этом случае такой препарат называется комбинированным. Кроме активных веществ в состав композиции, в соответствии с одним из частных случаев, входят и неактивные наполнители, позволяющие придать композиции соответствующую лекарственную форму, в частности, раствора или геля для инъекций. В контексте настоящего решения, под термином «смесь» понимают химическую систему или часть химической системы, состоящую из двух или более веществ. Вместе с тем, для данного решения, смесь не обязательно может быть разделена на компоненты физическими методами, поскольку честь компонентов смеси могут вступить в реакцию между собой, образуя новые компоненты. Под «комбинацией» понимается наличие в композиции, в частности, гиалуроновой кислоты в свободной форме и форме соли, например, натриевой.

Слова «состоящий», «содержащий», «включающий» означают, что, по меньшей мере, указанный компонент, элемент, часть или шаг способа присутствует в композиции, предмете или способе, но не исключает присутствие иных компонентов, материалов, частей, шагов способа, даже если такой компонент, материал, часть, шаг способа выполняет ту же функцию, что и указанный. Следует также отметить, что для композиции даны соотношения активных компонентов в массовых долях, в процентах от общей массы. При этом, остальное до 100% массы дополняют вспомогательными веществами, например, буферным раствором, агентами для коррекции осмолярности или иными технологическими добавками, обеспечивающими необходимые физико-химические свойства композиции и ее тканевую совместимость. Кроме того, основой композиции по массе, служит вода для инъекций ввиду формы выполнения композиции.

Материалы, из которых изготовлены различные элементы настоящей группы изобретений, указанные ниже при описании примеров конкретного выполнения системы, являются типичными, но не обязательными для применения. Указанные в настоящих примерах выполнения компоненты системы, могут быть заменены многочисленными аналогами, выполняющими ту же функцию.

Гель интрадермальный с гиалуронатом натрия, в двух вариантах исполнения (состав S и состав Y) представляет собой инъекционный, прозрачный, бесцветный, стерильный, апирогенный, полностью биосинтетический, биодеградируемый в тканях организма человека, гель гиалуроновой кислоты в комплексе с аминокислотами, помещенный в стерильный стеклянный шприц, с составами, приведенными в Табл. 1 и 2.

Таблица 1

Состав S, компоненты:	Массовая доля (%)
Гиалуроновая кислота (гиалуронат натрия), 1,4кДа	1,3
Аминокислоты:	<0,5
Аргинин	0,00045
Глутаминовая кислота	0,00010
Глицин	0,00020
Метионин	0,00006
Фенилаланин	0,00025
Пролин	0,00010
Треонин	0,00035
Валин	0,00040
Фосфатно-солевой буферный раствор	<1,0
Вода для инъекций	Остальное до 100

Таблица 2

Состав Y, компоненты:	Массовая доля (%)
Гиалуроновая кислота (гиалуронат натрия), 1,7кДа	1,6
Аминокислоты:	<0,5
Аргинин	0,00030
Глутаминовая кислота	0,00005
Глицин	0,00010
Метионин	0,00003
Фенилаланин	0,00015
Пролин	0,00005
Треонин	0,00020
Валин	0,00020
Фосфатно-солевой буферный раствор	<1,0
Вода для инъекций	Остальное до 100

Для подтверждения полезных эффектов настоящего изобретения, авторами были проведены соответствующие исследования. Так, при проведении иммуноцитохимического анализа маркер CLOCK визуализировался в цитоплазме фибробластов. В «молодой» культуре - третий пассаж - наблюдался монослой клеток, фибробласты были классической веретеновидной формы; тогда как при старении (далее - «старая» культура) клеточной культуры на четырнадцатом пассаже морфология клеток изменялась, и они хуже фиксировались/распластывались на матриксе.

Установлено статистически достоверное снижение относительной площади экспрессии CLOCK в контрольных образцах при старении клеточной культуры фибробластов (фиг. 1, 2). При добавлении к клеточным культурам состав Y и состав S различия между «молодой» и «старой» культурой сглаживались. Также установлено, что при культивировании фибробластов в среде с состав Y наблюдалось увеличение относительной площади экспрессии на четырнадцатом пассаже по сравнению с контрольной группой в 1,9 раза. Состав S воздействовал на культуру фибробластов следующим образом: на третьем пассаже его введение увеличивало экспрессию CLOCK в 1,5 раза, а на четырнадцатом пассаже в 2 раза.

Экспрессия белка СLOCK в фибробластах при их клеточном старении достоверно повышается по сравнению с контролем при введении в культуральную среду составов Y и S.

Поскольку белок СLOCK является ключевым фактором запуска циркадных ритмов, то активация его экспрессии под действием препаратов составы Y и S позволяет рассматривать их в качестве препаратов, нормализующих биоритмическую функцию клеток, в частности, фибробластов.

Выявление маркерных молекул KLOTHO осуществлялось иммунофлуоресцентным методом на третьем и четырнадцатом пассаже культивирования. В смешанной культуре клеток кожи человека, обогащенной клетками Меркеля, проводилось иммуноцитохимическое выявление экспрессии маркера KLOTHO.

Так как объектом исследование явились уникальные клетки Меркеля кожи, для верификации наличия субпопуляции этих клеток в культуре использовался специальный маркер, цитокератин-20. Применялся метод двойного мечения с использованием антител к цитокератину-20 (зеленая флуоресценция) и антител к KLOTHO (красная флуоресценция). Площадь экспрессии рассчитывалась относительно клеток Меркеля, иммунопозитивных по СК-20 клеток.

При введении состава S на третьем пассаже площадь экспрессии составляла 5,28±0,74%, тогда как на четырнадцатом пассаже она увеличивалась почти в два раза и составляла 9,23±0,89%.

Аналогичная картина наблюдалась в группе с исследованием действия состава Y, где при старении экспрессия KLOTHO увеличивалась в 2 раза.

Таким образом, под действием составов S и Y происходила активация экспрессии KLOTHO при старении смешанной культуры кератиноцитов и клеток Меркеля кожи человека (фиг. 4).

На гистограмме (фиг. 5) приведено сравнение показателей относительной площади экспрессии маркера рецепторов к мелатонину MTNR1А в контрольной группе и группе с применением составов Y и S на первом и третьем пассажах.

Установлено статистически достоверное увеличение площади экспрессии маркера рецептора к мелатонину MTNR1А при добавлении к культивируемым клеткам как состава S, так и состава Y.

Ниже представлены микрофотографии (фиг. 6) с изображением экспрессии маркеров к рецепторам мелатонина MTNR1А. Следует отметить, что красная флуоресценция наблюдается не только в клетках Меркеля, но и в кератиноцитах, хотя наиболее выражена она именно в клетках Меркеля, оказывающих трофическое воздействие на структуры и дериваты эпидермиса.

Применение составов Y и S повышает экспрессию белка KLOTHO в культуре клеток Меркеля и кератиноцитов. Поскольку данный белок повышает устойчивость к окислительному стрессу, а также регулирует клеточный цикл, его повышение является благоприятным фактором и замедляет старение в культуре клеток.

В результате проведения исследования, показано положительное влияние составов Y и S на экспрессию рецепторов к мелатонину MTNR1А и MTNR1B типов в культуре клеток Меркеля и кератиноцитов, при этом, состав Y сильнее стимулировал экспрессию рецепторов к мелатонину MTNR1B (фиг. 7, 8) в стареющей культуре, чем состав S.

Проведенные исследования свидетельствуют о том, что составы Y и S обладают геропротекторным эффектом, стимулируя синтез белка KLOTHO и рецепторов к мелатонину типа MTNR1А и MTNR1B) в клетках в смешанной культуре эпидермиса кожи человека при старении.

Авторами также были получены изображения (фиг. 9), иллюстрирующие состояние кожи лица пациента до и после введения композиции. Композиция вводилась в область лица, микроболюсно (0,01-0,02 мл) иглой 32G 4 мм под углом 90 градусов к поверхности кожи интрадермально, с расстоянием между уколами в 1 см. Курсом в три процедуры с интервалом в две недели между процедурами.

Как видно на представленных изображениях, что касается эффекта на макроуровне, композиция показала высокую эффективность в отношении гидратации, тонуса, цветности, выравнивании микрорельефа кожи.

При проведении исследования на биосовместимость и период биодеградации композиции было проведено исследование на животных, которым интрадермально вводили препарат. В результате проведенных исследований удалось проследить реактивные преобразования, возникающие после введения препарата, а также некоторые особенности динамики самого препарата. После введения препарат распределяется в сетчатом слое дермы и в подкожной жировой клетчатке в виде достаточно обширных скоплений. При этом в клетчатке возникает некроз липоцитов. Через сутки препарат частично смещается в подкожную жировую клетчатку, в виде небольших скоплений оставаясь в дерме, где он и инкапсулируется к седьмым суткам эксперимента и сохраняет стабильное положение. В дерме инкапсуляции не наблюдается. К четырнадцатым суткам происходит утолщение капсулы и наблюдаются признаки организации препарата с замещением жировой ткани и препарата тонковолокнистой соединительной тканью. Фрагменты геля сохраняются в кожном покрове в сетчатом слое дермы и в фиброзноизмененной подкожной жировой клетчатке до тридцатых суток эксперимента.

Изменения кожного покрова к тридцатым суткам эксперимента заключается в утолщении эпидермиса, дермы и замещении подкожной жировой клетчатки соединительной тканью, развивающейся, очевидно, на основе препарата, который подлежит не только инкапсуляции, но и организации. Пучки коллагеновых волокон дермы и подкожной жировой клетчатки незначительно утолщаются по сравнению с контролем, а расположение их уплотняется. Все это приводит к утолщению и уплотнению кожного покрова. Таким образом, композиция, введенная в кожу животных, обладает высокой биосовместимостью, вызывает незначительные реактивные преобразования в кожном покрове, подвергается биодеградации, которая не заканчивается к тридцатым суткам с момента операции. В области введения препарата в дерме и подкожной жировой клетчатке наблюдается утолщение пучков коллагеновых волокон и уплотнение их расположения в дерме и в подкожной жировой клетчатке, а также утолщение кожного покрова.

Раскрытые выше примеры выполнения приведены с целью иллюстрации промышленной применимости композиции и общего впечатления о возможностях предложенного препарата. Объем правовой охраны технического решения определяется формулой изобретения, а не представленным описанием, и все изменения, совершенные с применением эквивалентных признаков, подпадают под правовую охрану настоящего изобретения.

Использованная литература:

1. Doi M., Hirayama J., Sassone-Corsi P. (2006). Circadian Regulator CLOCK Is a Histone Acetyltransferase. Cell, 125(3), 497-508.

2. Nader N., Chrousos G. P., Kino T. (2009). Circadian rhythm transcription factor CLOCK regulates the transcriptional activity of the glucocorticoid receptor by acetylating its hinge region lysine cluster: potential physiological implications. The FASEB Journal, 23(5), 1572-1583.

3. Lin R., Mo Y., Zha H., Qu Z., Xie P. et al. (2017). CLOCK Acetylates ASS1 to Drive Circadian Rhythm of Ureagenesis. MolecularCell, 68(1), 198-209, e1-e6.

4. Tranah G. J., Blackwell T., Ancoli-Israel S., Paudel M. L., Ensrud K. E. et al. (2010). Circadian Activity Rhythms and Mortality: The Study of Osteoporotic Fractures. JournaloftheAmericanGeriatricsSociety, 58(2), 282-291.

5. Kuro-oM., MatsumuraY., AizawaH., KawaguchiH., SugaT., UtsugiT., OhyamaY., KurabayashiM., KanameT., KumeE., IwasakiH., IidaA., Shiraki-IidaT., NishikawaS., NagaiR., NabeshimaY.I. (1997). «Mutation of the mouse klotho gene leads to a syndrome resembling ageing». Nature 390 (6655): 45-51.

6. И.С. Бокша, Т.А. Прохорова, О.К. Савушкина, Е.Б. Терешкина. БИОХИМИЯ, 2017, том 82, вып. 9, с. 1278 - 1295.

7. Takino T., Koshikawa N., Miyamori H. Cleavage of metastasis suppressor gene product KISS1 protein/metastin by matrix metalloproteinase. Oncogene. 2003; 22:4617-26.

1. Инъецируемая композиция для профилактики и лечения проявлений дермоэпидермальной атрофии через создание условий для нормализации биоритмической функции клеток, в частности фибробластов, через повышение экспрессии гена СLOCK, повышение экспрессии белка KLOTHO в смешанной культуре эпидермиса кожи и повышение экспрессии рецепторов к мелатонину MTNR1А и MTNR1В типов, содержащая в качестве активных компонентов гиалуроновую кислоту и смесь аминокислот, включающую: аргинин, глутаминовую кислоту, глицин, метионин, фенилаланин, пролин, треонин, валин, при следующем соотношении активных компонентов, мас.%:

гиалуроновая кислота	1,00000-2,00000
аргинин	0,00025-0,00080
глутаминовая кислота	0,00005-0,00030
глицин	0,00010-0,00050
метионин	0,00001-0,00020
фенилаланин	0,00015-0,00050
пролин	0,00005-0,00050
треонин	0,00010-0,00050
валин	0,00010-0,00050

2. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что дополнительно содержит соль гиалуроновой кислоты, в частности натриевую соль.

3. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что средний молекулярный вес гиалуроновой кислоты составляет от 1,1 до 2,1 кДа.

4. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что содержит фосфатно-солевой буферный раствор, воду для инъекций.

5. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что используется как средство повышения экспрессии клеточных рецепторов к мелатонину MTNR1А и MTNR1B типов, повышения экспрессии белка KLOTHO, повышения экспрессии циркадианного гена CLOCK.