2-((n,n'-дифенилкарбамидимидоил)карбамоил)бензойная кислота, способ ее получения и антигипоксическое средство

Изобретение относится к 2-((N,N'-дифенилкарбамидимидоил)карбамоил)бензойной кислоте формулы I, способу ее получения и антигипоксическому средству на ее основе. Технический результат: получено новое соединение, обладающее выраженной антигипоксической активностью. 3 н.п. ф-лы, 2 ил., 3 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к области органической и медицинской химии, а именно к 2-((N,N'-дифенилкарбамидимидоил)карбамоил)бензойной кислоте формулы I. Изобретение также относится к способу получения соединения формулы I и средству на его основе.

Описан метод синтеза N-фенилфталаминовой кислоты (IV) реакцией фталевого ангидрида (II) с анилином (III) при микроволновом излучении в течение 60 секунд [Vera L.M. Sena; Rajendra М. Srivastava; Shalom P. Oliveira; Vera. L.M. Lima / Microwave assisted synthesis of N-Arylphthalamic acid swith hyperlipidemic activity//2001, Vol. 11, No20, P. 2671-2674. DOI:10.1016/s0960-894x(01)00540-6]:

Описаны методы синтеза метил-2-((N,N'-дифенилкарбамимидоил)(фенил)карбамоил)бензоата (VIII). По первому методу соединение VIII получают алкоголизом 2,4-дифенил-3-(фениламино)-3,4-дигидро-1Н-бензо[1,3]диазепин-1,5(2Н)-диона (V) в среде метанола с добавлением нескольких капель соляной кислоты при кипячении в течение 3-х часов. По второму методу соединение VIII получают взаимодействием трифенилгуанидина (VI) с о-карбометоксибензоилхлоридом (VII) в среде эфира в течение 3-х часов при температуре окружающей среды [Heine, Harold W.; Ludovici, Donald W.; Pardoen, Johannes A.; Weber, Robert C.; Bonsall, Eric; Osterhout, Keith R / Preparation and reactions of some derivatives of 2,4-benzodiazepines and 1,3-diazepines // The Journal of Organic Chemistry. 1979, Vol. 44. No. 22, P. 3843-3847. DOI: 10.1021/jo01336a021]:

Из патентной и научно-технической литературы не выявлены ни структура нового, заявляемого авторами соединения, ни способ синтеза, ни биологическая активность.

Задачей предполагаемой группы изобретений является создание нового неописанного в литературе соединения - 2-((N,N'-дифенилкарбамидимидоил)карбамоил)бензойной кислоты формулы I.

Техническими результатами, на решение которых направлена группа изобретений, является разработка простого способа получения нового соединения I, которое потенциально может быть использовано в медицине.

Согласно предлагаемому способу получение соединения формулы I, осуществляется взаимодействием дифенилгуанидина (IX) с фталевым ангидридом (III) по схеме:

Смесь дифенилгуанидина (IX) и ангидрида фталевой кислоты (Ш) кипятят в этилацетате в течение 2-х часов, затем реакционную массу остужают. Целевой продукт выпадает в виде осадка белого цвета, который отфильтровывают.

Способ получения 2-((N,N'-дифенилкарбамидимидоил)карбамоил)бензойной кислоты (I) изучен и проведен в лабораторных условиях на стандартном товарном сырье.

Пример 1. Получение 2-((N,N'-дифенилкарбамидимидоил)карбамоил)бензойной кислоты (I).

В плоскодонную колбу объемом 250 мл помещают 0,5 г (2,4 ммоль) дифенилгуанидина (IX), 50 мл этилацетата и добавляют 0,42 г (2,8 ммоль) ангидрида фталевой кислоты (III). Реакционную смесь кипятят в течение 2-х часов. Затем остужают реакционную массу и отфильтровывают выпавший осадок целевого продукта. Продукт почти белого цвета, выход составляет 0,74 г, 86,0% от теоретического из расчета на дифенилгуанидин (IX).

Температура плавления 128-130°С. Хроматографическая однородность целевого продукта подтверждалась хроматографированием раствора его в этаноле с использованием в качестве элюента этилового спирта. R_f=0,71. Состав синтезированного соединения подтвержден элементным анализом. Брутто-формула: C₂₁H_l7N₃O₃. Вычислено %: С - 70.18; Н - 4.77; N - 11.69. Найдено %: С - 70.17; Н - 4.82; N - 11.65.

Строение синтезированного вещества было доказано физико-химическими методами идентификации органических соединений: спектроскопией ЯМР ¹Н, ¹³C и масс-спектрометрией.

В спектре ЯМР ¹H соединения I в ДМСО-d₆, 400,13 МГц (фиг. 1) присутствуют сигналы протонов бензольных колец дифенилгуанидина δ 7.43 (t, 4Н, J=7.7 Гц); 7.32 (d, 4Н, J=7.8 Гц); 7.26 (t, 2Н, J=7.3 Гц), протон группы -NH- 9.55 (s, 1Н), а также сигналы протонов фталевого ангидрида 7.52 (dd, J=5.9, 3.4 Гц, 2Н), 8.14 (dd, J=5.9, 3.5 Гц, 2Н) (табл. 1).

Спектр ЯМР ¹³С соединения I характеризуется сигналами ядер углерода бензольных колец (135.38, 132.64, 130.81, 130.05, 126.44, 124.24 м.д.), сигналом атома углерода имино группы (136.76 м.д.), карбоксильной группы (168.92 м.д.) и сигналом атома углерода амидной группы (154.15 м.д.) (табл. 2, фиг. 2).

Масс-спектрометрия MS-ESI: m/z [М+Н]⁺ вычислено для C₂₁H₁₇N₃O₃: 360,38; найдено: 360,37.

При исследовании острой токсичности и биологической активности соединения I, все эксперименты на животных были проведены в соответствии с Решением Совета Евразийской экономической комиссии от 3 ноября 2016 г. №81 «Об утверждении Правил надлежащей лабораторной практики Евразийского экономического союза в сфере обращения лекарственных средств» и Национальным стандартом Российской Федерации ГОСТ Р-53434-2009 «Принципы надлежащей лабораторной практики».

Все опытные и контрольные животные были взяты из одного привоза и прошли карантин в течение 14 суток. Лабораторных животных содержали в стандартных условиях центра экспериментальной фармакологии. Все проводимые манипуляции с лабораторными животными были рассмотрены и одобрены на заседании биоэтической комиссии ФГБОУ ВО СПХФУ Минздрава России.

Пример 2. Острая токсичность 2-((N,N'-дифенилкарбамидимидоил)карбамоил)бензойной кислоты (I).

Определение острой токсичности соединения I проводили на белых аутбредных мышах самцах массой 20±2 г. Соединение I вводили однократно, внутрибрюшинно в интервале доз от 1500 до 50 мг/кг в виде раствора, приготовленного в смеси диметилсульфоксид (ДМСО): вода для инъекций (1:5). Выживаемость животных определяли, наблюдая за ними через 24 и 48 ч от момента инъекции. Наблюдение за животными осуществляли в течение 72 ч. Регистрировали развитие основных симптомов и время гибели животных. Экспериментальная среднелетальная доза (LD₅₀) рассчитана с использованием инсталлированного программного обеспечения «STATISTICA 7.0», которое использует для расчета LD₅₀ метод наименьших квадратов. Токсичность соединения I составила 60±6 мг/кг. Согласно классификации Сидорова К.К., соединение I относится к классу 3 «умеренно токсично».

Пример 3. Изучение антигипоксической активности 2-((N,N'-дифенилкарбамидимидоил)карбамоил)бензойной кислоты (I).

Для изучения антигипоксического действия использовали модель острой гемической гипоксии. Для моделирования острой гемической гипоксии использовали белых аутбредных мышей-самцов массой 20±2 г., из которых были сформированы 3 группы по 10 особей в каждой. Гипоксию у животных вызывали при помощи внутрибрюшинного введения раствора 10% нитрита натрия в дозе 300 мг/кг.

Соединение I суспендировали в воде для инъекций и вводили перорально в дозе 100 мг/кг. В качестве препарата сравнения был выбран мексидол в дозе 100 мг/кг. Животные контрольной группы получали воду очищенную в эквивалентном объеме. Все вещества вводили за 30 мин до моделирования патологии. Регистрировали время жизни животных. Антигипоксическуюактивность исследуемого соединения оценивали по абсолютному и относительному показателям антигипоксической активности.

Антигипоксическую активность выражали в этилметилгидроксипиридинасукцинатных (мексидоловых) единицах (АА_м) по формуле (1):

где:

АА_м - антигипоксическая активность в мексидоловых единицах,

Х - показатель переносимости гипоксической пробы,

Х_пр (группа приема препарата) - при приеме исследуемого препарата,

Х_пл (группа плацебо) - при приеме плацебо,

Х_м - при приеме «эталонного» препарата в стандартной дозе.

Относительную величину показателя антигипоксической активности послевоздействия по отношению к исходному уровню вычисляли по формуле (2):

где:

X - относительная величина показателя послевоздействия по отношению к исходному уровню.

Исследование показало, что соединение I обладает выраженной антигипоксической активностью на модели гемической гипоксии. Исследуемое соединение находится на одном уровне с препаратом сравнения. Результаты оценки антигипоксической активности представлены в табл. 3.

1. 2-((N,N'-Дифенилкарбамидимидоил)карбамоил)бензойная кислота формулы I.

2. Способ получения 2-((N,N'-дифенилкарбамидимидоил)карбамоил)бензойной кислоты формулы I по п. I, заключающийся в том, что дифенилгуанидин кипятят с фталевым ангидридом при мольном соотношении 1:1.2 соответственно в течение 2 ч в среде этилацетата, реакционную массу охлаждают, отделяют кристаллы целевого продукта.

3. Антигипоксическое средство, отличающееся тем, что в качестве активного вещества включает 2-((N,N'-дифенилкарбамидимидоил)карбамоил)бензойную кислоту формулы I по п. 1.