Лечение рака биспецифическими антителами к her2xcd3 в комбинации с моноклональным антителом к her2

Авторы патента:

C07K2317/31 - Пептиды (пептиды в пищевых составах A23, например получение белковых композиций для пищевых составов A23J, препараты для медицинских целей A61K; пептиды, содержащие бета-лактамовые кольца, C07D; циклические дипептиды, не содержащие в молекуле любого другого пептидного звена, кроме образующего их кольцо, например пиперазин-2,5-дионы, C07D; алкалоиды спорыньи циклического пептидного типа C07D519/02; высокомолекулярные соединения, содержащие статистически распределенные аминокислотные единицы в молекулах, т.е. при получении предусматривается не специфическая, а случайная последовательность аминокислотных единиц, гомополиамиды и блоксополиамиды, полученные из аминокислот, C08G 69/00; высокомолекулярные продукты, полученные из протеинов, C08H 1/00; получение

C07K16/32 - против продуктов трансляции из онкогенов

C07K16/2809 - Иммуноглобулины, например моноклональные или поликлональные антитела

C07K16/28 - против рецепторов, клеточных поверхностных антигенов или клеточных поверхностных детерминантов

A61P35/00 - Противоопухолевые средства

A61K45/06 - Лекарственные препараты, содержащие активные ингредиенты, не отнесенные к группам A61K 31/00- A61K 41/00

A61K39/3955 - Лекарственные препараты, содержащие антигены или антитела (материалы для иммунологического анализа G01N 33/53)

A61K39/395 - антитела (агглютинины A61K 38/36); иммуноглобулины; иммунные сыворотки, например антилимфоцитные сыворотки

A61K2039/505 - Лекарства и медикаменты для терапевтических, стоматологических или гигиенических целей (изготовление специальных лекарственных форм A61J; химические аспекты или использование материалов для дезодорации воздуха, для дезинфекции или стерилизации или для бандажей, перевязочных средств, впитывающих прокладок или хирургических приспособлений A61L; соединения как таковые C01, C07,C08,C12N; мыла C11D; микроорганизмы как таковые C12N)

Владельцы патента RU 2793296:

ДЖЕНЕНТЕК, ИНК. (US)

Группа изобретений относится к лечению HER2-положительных видов рака. Предложены способы лечения или замедления прогрессирования HER2-положительного рака у нуждающегося в этом субъекта, включающие назначение субъекту схемы лечения, включающей антитело к HER2, например трастузумаб, и зависимое от Т-клеток биспецифическое (TDB) антитело к HER2. Причем HER2 TDB содержит плечо против HER2 и плечо против CD3, при этом как антитело к HER2, так и HER2 TDB связывают домен IV HER2. Изобретения позволяют ослабить внеопухолевую/целевую токсичность HER2 TDB в экспрессирующих HER2 нормальных тканях, но при этом по существу не влиять на противоопухолевую активность HER2 TDB у пациентов с HER2-положительными опухолями. 6 н. и 86 з.п. ф-лы, 5 ил., 4 табл., 2 пр.

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

В данной заявке содержится перечень последовательностей, который был представлен в электронном виде в формате ASCII и полностью включен в данный документ посредством ссылки. Указанная копия ASCII, созданная 4 марта 2020 г., называется 50474-197WO2_Sequence_Listing_3.4.20_ST25 и имеет размер 8354 байта.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к лечению HER2-положительных видов рака с помощью антител к HER2, таких как комбинация зависимого от Т-клеток биспецифического (HER2 TDB) антитела к HER2 с другим антителом к HER2.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Раковые заболевания характеризуются неконтролируемым ростом субпопуляций клеток. Раковые заболевания являются основной причиной смерти в развитых странах и второй основной причиной смерти в развивающихся странах, при этом каждый год диагностируют более 14 миллионов новых случаев рака и регистрируют восемь миллионов смертей. По оценкам Американского онкологического общества в 2019 г. В Соединенных Штатах будет зарегистрировано 1762450 новых случаев рака и 606880 смертей от рака. Так как численность населения старшего возраста увеличилась, одновременно увеличилась частота заболеваемости раком, так как вероятность развития рака после семидесяти возрастает более чем в два раза. Таким образом, рак представляет существенную и постоянно растущую социальную нагрузку.

Виды рака, положительные в отношении рецептора 2 человеческого эпидермального фактора роста (HER2), такие как рак молочной железы и рак желудка, представляют одни из наиболее распространенных видов рака в мире. Местно-распространенные и метастатические HER2-положительные раки молочной железы и желудка по большей части остаются неизлечимыми заболеваниями, при которых у большинства пациентов наблюдается прогрессирование после получения HER2-таргетной терапии. Хотя с введением новых противораковых агентов были достигнуты значительные успехи, общая выживаемость была улучшена ненамного, а долгосрочный прогноз для пациентов с HER2-положительными видами рака, у которых наблюдалось прогрессирование заболевания во время или после схемы лечения первой линии, остается неутешительным.

Таким образом, в данной области существует неудовлетворенная потребность в разработке безопасных и эффективных схем лечения HER2-положительных видов рака.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к способам лечения субъекта, имеющего HER2-положительный рак, с помощью нацеленных на HER2 зависимых от Т-клеток биспецифических (TDB, от англ. «Т cell-dependent bispecific») антител.

В одном аспекте в изобретении предложен способ лечения или замедления прогрессирования HER2-положительного рака у нуждающегося в этом субъекта, включающий назначение субъекту схемы лечения, включающей антитело к HER2 (например, антитело к HER2, которое не представляет собой зависимое от Т-клеток биспецифическое антитело (TDB) к HER2, такое как моноспецифическое антитело к HER2, например, моноспецифическое двухвалентное антитело к HER2, например, трастузумаб) и HER2 TDB, содержащее плечо против HER2 и плечо против CD3 (например, BTRC4017A), при этом как антитело к HER2, так и HER2 TDB связывают домен IV HER2, и при этом схема лечения приводит к повышению терапевтического индекса HER2 TDB по сравнению с лечением HER2 TDB в отсутствие антитела к HER2. В некоторых вариантах осуществления повышение терапевтического индекса связано со снижением вероятности испытания целевого/внеопухолевого эффекта по сравнению с лечением HER2 TDB в отсутствие антитела к HER2. В некоторых вариантах осуществления целевой/внеопухолевый эффект представляет собой симптом легочной токсичности (например, интерстициальное заболевание легких, острый респираторный дистресс-синдром, одышку, кашель, утомляемость и легочные инфильтраты) и повышенный уровень печеночных ферментов, сухость во рту, сухость глаз, мукозит, эзофагит и симптом со стороны мочевыделительной системы. В некоторых вариантах осуществления повышение терапевтического индекса связано со снижением вероятности испытания иммуногенного побочного эффекта по сравнению с лечением HER2 TDB в отсутствие антитела к HER2. Иммуногенный побочный эффект может включать, например, повышенный уровень антител к лекарственному средству, связанный с инфузией/введением реакцию (ARR, от англ. «administration-related reaction»), дисфункцию сердца, легочную реакцию и синдром высвобождения цитокинов (СВЦ).

В некоторых вариантах осуществления HER2 TDB и антитело к HER2 конкурентно связываются с доменом IV HER2. В некоторых вариантах осуществления антитело к HER2 содержит: (i) определяющую комплементарность область (CDR)-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1; (ii) CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2; (iii) CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3; (iv) CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4; (v) CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; и (vi) CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления антитело к HER2 содержит вариабельный домен тяжелой цепи (V_H), имеющий по меньшей мере 95% идентичности последовательности (например, по меньшей мере 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичности последовательности) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 7, и/или вариабельный домен легкой цепи (V_L), имеющий по меньшей мере 95% идентичности последовательности (например, по меньшей мере 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичности последовательности) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 8. В конкретных вариантах осуществления V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и/или V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8.

В некоторых вариантах осуществления антитело к HER2 (например, дополнительное антитело к HER2, которое не является HER2 TDB) является моноспецифическим и/или двухвалентным в отношении HER2. В некоторых вариантах осуществления антитело к HER2 представляет собой полноразмерное антитело, содержащее Fc-область (например, трастузумаб). В некоторых вариантах осуществления антитело к HER2 представляет собой модифицированный вариант трастузумаба, например, Fc-модифицированный вариант трастузумаба, содержащий одну или более аминокислотных модификаций, которые снижают эффекторную функцию (например, одну или более мутаций замены, например, в аминокислотном остатке L234, L235 и/или Р329 (нумерация EU). Например, в некоторых вариантах осуществления одна или более аминокислотных модификаций включают мутации замены L234A, L235A и P329G (LALAPG).

В некоторых вариантах осуществления любого из предыдущих способов плечо против HER2 в HER2 TDB содержит HER2-связывающий домен, содержащий: (i) CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1; (ii) CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2; (iii) CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3; (iv) CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4; (v) CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; и (vi) CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления HER2-связывающий домен содержит V_H, имеющий по меньшей мере 95% идентичности последовательности (например, по меньшей мере 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичности последовательности) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 7, и/или V_L, имеющий по меньшей мере 95% идентичности последовательности (например, по меньшей мере 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичности последовательности) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 8. В некоторых вариантах осуществления V_H HER2-связывающего домена содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и/или V_L HER2-связывающего домена содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8.

В некоторых вариантах осуществления плечо против CD3 в HER2 TDB содержит CD3-связывающий домен, содержащий: (i) CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (ii) CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; (iii) CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11; (iv) CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12; (v) CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; и (vi) CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14. В некоторых вариантах осуществления CD3-связывающий домен содержит V_H, имеющий по меньшей мере 95% идентичности последовательности (например, по меньшей мере 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичности последовательности) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 15, и/или V_L, имеющий по меньшей мере 95% идентичности последовательности (например, по меньшей мере 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичности последовательности) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 16. В некоторых вариантах осуществления V_H CD3-связывающего домена содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15 и/или V_L CD3-связывающего домена содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16.

В некоторых вариантах осуществления (i) плечо против HER2 в HER2 TDB содержит HER2-связывающий домен, содержащий (a) V_H, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и (б) V_L, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, и (ii) плечо против CD3 в HER2 TDB содержит CD3-связывающий домен, содержащий (a) V_H, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15, и (б) V_L, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16. В некоторых вариантах осуществления HER2 TDB представляет собой BTRC4017A.

В некоторых вариантах осуществления любого из описанных в данном документе способов HER2 TDB представляет собой полноразмерное антитело, содержащее модифицированную Fc-область. Модифицированная Fc-область может содержать одну или более мутаций замены, которые снижают эффекторную функцию HER2 TDB. В некоторых вариантах осуществления одна или более мутаций замены включают мутации в аминокислотных остатках L234, L235 и/или D265 (нумерация EU). В некоторых вариантах осуществления одна или более мутаций замены представляют собой L234A, L235A и D265A. В дополнительном или альтернативном варианте одна или более мутаций замены включают мутацию в сайте агликозилирования (например, мутацию в сайте агликозилирования в аминокислотном остатке N297 (нумерация EU), например, мутацию N297G или N297A в сайте агликозилирования). В некоторых вариантах осуществления модифицированная Fc-область содержит мутации замены N297G, L234A, L235A и D265A. В некоторых вариантах осуществления HER2 TDB содержит один или более константных доменов тяжелой цепи, причем один или более константных доменов тяжелой цепи выбраны из первого домена CHI (CH1₁), первого домена СН2 (СН₂) первого домена СН3 (СН3₁) второго домена СН1 (СН1₂), второго домена СН2 (СН2₂) и второго домена СН3 (СН3₂). В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один или более константных доменов тяжелой цепи спарен с другим константным доменом тяжелой цепи, причем: (i) каждый из доменов СН3₁ и СН3₂ содержит выступ или впадину, и при этом выступ или впадина в домене СН3₁ может размещаться во впадине или выступе, соответственно, в домене СН3₂; или (ii) каждый из доменов CH2₁ и СН2₂ содержит выступ или впадину, и при этом выступ или впадина в домене СН2₁ может размещаться во впадине или выступе, соответственно, в домене СН2₂.

В другом аспекте в изобретении предложен способ лечения или замедления прогрессирования HER2-положительного рака (например, HER2-положительного рака молочной железы или HER2-положительного рака желудка) у нуждающегося в этом субъекта, включающий назначение субъекту схемы лечения, включающей антитело к HER2 и HER2 TDB, причем (а) антитело к HER2 представляет собой трастузумаб или Fc-модифицированный вариант трастузумаба, и (б) HER2 TDB содержит плечо против HER2 и плечо против CD3, при этом плечо против HER2 содержит HER2-связывающий домен, содержащий: (i) CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1; (ii) CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2; (iii) CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3; (iv) CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4; (v) CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; и (vi) CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; и при этом плечо против CD3 содержит CD3-связывающий домен, содержащий: (i) CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (ii) CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; (iii) CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11; (iv) CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12; (v) CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; и (vi) CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; при этом схема лечения приводит к повышению терапевтического индекса HER2 TDB по сравнению с лечением HER2 TDB в отсутствие антитела к HER2. Повышение терапевтического индекса может быть связано со снижением вероятности испытания целевого/внеопухолевого эффекта по сравнению с лечением HER2 TDB в отсутствие антитела к HER2. В некоторых вариантах осуществления целевой/внеопухолевый эффект представляет собой симптом легочной токсичности (например, интерстициальное заболевание легких, острый респираторный дистресс-синдром, одышку, кашель, утомляемость и легочные инфильтраты) и повышенный уровень печеночных ферментов, сухость во рту, сухость глаз, мукозит, эзофагит и симптом со стороны мочевыделительной системы. В некоторых вариантах осуществления повышение терапевтического индекса связано со снижением вероятности испытания иммуногенного побочного эффекта по сравнению с лечением HER2 TDB в отсутствие антитела к HER2. Иммуногенный побочный эффект может включать, например, повышенный уровень антител к лекарственному средству, связанный с инфузией/введением реакцию (ARR, от англ. «administration-related reaction»), дисфункцию сердца, легочную реакцию и синдром высвобождения цитокинов (СВЦ).

В некоторых вариантах осуществления любого из вышеупомянутых аспектов антитело к HER2 вводят до введения HER2 TDB.

В некоторых вариантах осуществления антитело к HER2 вводят в дозе от около 5 мг/кг до около 10 мг/кг (например, 5 мг/кг до 10 мг/кг или от 6 мг/кг до 8 мг/кг, например, около 5 мг/кг, около 6 мг/кг, около 7 мг/кг, около 8 мг/кг, около 9 мг/кг или от около 10 мг/кг). В некоторых вариантах осуществления антитело к HER2 вводят приблизительно один раз каждые три недели (Q3W).

В некоторых вариантах осуществления HER2 TDB вводят в фиксированной дозе от 0,001 мг до 500 мг (например, от 0,003 мг до 250 мг, от 0,005 мг до 200 мг, от 0,01 мг до 150 мг, от 0,05 мг до 120 мг, от 0,1 мг до 100 мг, от 0,5 мг до 80 мг или от 1,0 мг до 50 мг, например, от 0,001 мг до 0,005 мг, от 0,005 мг до 0,01 мг, от 0,01 мг до 0,05 мг, от 0,05 мг до 0,1 мг, от 0,1 мг до 0,5 мг, от 0,5 мг до 1,0 мг, от 1,0 мг до 5 мг, от 5 мг до 10 мг, от 10 мг до 20 мг, от 20 мг до 30 мг, от 30 мг до 40 мг, от 40 мг до 50 мг, от 50 мг до 60 мг, от 60 мг до 70 мг, от 70 мг до 80 мг, от 80 мг до 90 мг, от 90 мг до 100 мг, от 100 мг до 120 мг, от 120 мг до 150 мг, от 150 мг до 200 мг, от 200 мг до 250 мг, от 250 мг до 300 мг, от 300 мг до 350 мг, от 350 мг до 400 мг, от 400 мг до 450 мг или от 450 мг до 500 мг, например, около 0,003 мг, около 0,005 мг, около 0,01 мг, около 0,05 мг, около 0,1 мг, около 0,5 мг, около 1,0 мг, около 2 мг, около 3 мг, около 4 мг, около 5 мг, около 6 мг, около 7 мг, около 8 мг, около 9 мг, около 10 мг, около 11 мг, около 12 мг, около 13 мг, около 14 мг, около 15 мг, около 16 мг, около 17 мг, около 18 мг, около 19 мг, около 20 мг, около 21 мг, около 22 мг, около 23 мг, около 24 мг, около 25 мг, около 30 мг, около 35 мг, около 40 мг, около 45 мг, около 50 мг, около 55 мг, около 60 мг, около 65 мг, около 70 мг, около 75 мг, около 80 мг, около 85 мг, около 90 мг, около 95 мг, около 100 мг, около 150 мг, около 200 мг или около 250 мг, например, 0,003 мг, 0,009 мг, 0,027 мг, 0,081 мг, 0,24 мг, 0,72 мг, 1,08 мг, 1,51 мг, 2,2 мг, 2,3 мг, 4,0 мг, 4,6 мг, 6,6 мг, 8,0 мг, 9,2 мг, 12 мг, 13,2 мг, 14,8 мг, 18,4 мг, 19,8 мг, 26,4 мг, 36,8 мг, 51,5 мг, 52,8 мг, 61,3 мг, 72,1 мг, 105,6 мг, 147,8 мг, 176 мг или 207 мг). В некоторых вариантах осуществления HER2 TDB вводят приблизительно один раз каждые три недели (Q3W).

В некоторых вариантах осуществления любого из описанных выше способов схема лечения включает: (а) первую дозу антитела к HER2; (б) первый цикл дозирования (С1) после первой дозы антитела к HER2, при этом С1 включает первую дозу HER2 TDB (C1D1) и вторую дозу HER2 TDB (C1D2), причем C1D2 больше, чем C1D1; (в) второй цикл дозирования (С2) после С1, причем С2 включает: (i) вторую дозу антитела к HER2; и (ii) дополнительную дозу HER2 TDB (C2D1) после второй дозы антитела к HER2, причем C2D1 эквивалентна наибольшей дозе HER2 TDB - С1.

В другом аспекте изобретения в данном документе предложен способ лечения или замедления прогрессирования HER2-положительного рака у нуждающегося в этом субъекта, включающий назначение субъекту схемы лечения, включающей антитело к HER2 и HER2 TDB, причем HER2 TDB содержит плечо против HER2 и плечо против CD3, при этом как антитело к HER2, так и HER2 TDB связывают домен IV HER2, причем схема лечения включает: (а) первую дозу антитела к HER2; (б) первый цикл дозирования (С1) после первой дозы антитела к HER2, при этом С1 включает первую дозу HER2 TDB (C1D1) и вторую дозу HER2 TDB (C1D2), причем C1D2 больше, чем C1D1; (в) второй цикл дозирования (С2) после С1, причем С2 включает: (i) вторую дозу антитела к HER2; и (ii) дополнительную дозу HER2 TDB (C2D1) после второй дозы антитела к HER2, причем C2D1 эквивалентна наибольшей дозе HER2 TDB - С1.

В некоторых вариантах осуществления первую дозу антитела к HER2 вводят за один день до C1D1, и при этом наблюдение за субъектом проводят в течение периода от 30 минут до 24 часов (например, от 30 минут до 2 часов, например, от 30 минут до 90 минут, например, в течение 30 минут, 60 минут, 90 минут или 120 минут) между первой дозой антитела к HER2 и C1D1.

В некоторых вариантах осуществления первая доза антитела к HER2 составляет от 5 мг/кг до 10 мг/кг (например, около 6 мг/кг или около 8 мг/кг). В некоторых вариантах осуществления первая доза антитела к HER2 составляет 6 мг/кг. В других вариантах осуществления первая доза антитела к HER2 составляет 8 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления вторая доза антитела к HER2 составляет от 5 мг/кг до 10 мг/кг (например, около 6 мг/кг). В некоторых вариантах осуществления вторая доза антитела к HER2 составляет 6 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления первую и/или вторую дозу антитела к HER2 вводят путем инфузии в течение периода по меньшей мере 30 минут.

В некоторых вариантах осуществления вторую дозу антитела к HER2 вводят в тот же день, что и C2D1. В некоторых вариантах осуществления C1D2 по меньшей мере в два раза превышает дозу C1D1 (например, по меньшей мере в три раза превышает дозу C1D1). В некоторых вариантах осуществления C1D1 составляет от 0,003 мг до 50 мг (например, от 0,003 мг до 50 мг, от 0,005 мг до 20 мг, от 0,01 мг до 10 мг, от 0,05 мг до 8 мг или от 0,1 мг до 5 мг, например, от 0,001 мг до 0,005 мг, от 0,005 мг до 0,01 мг, от 0,01 мг до 0,05 мг, от 0,05 мг до 0,1 мг, от 0,1 мг до 0,5 мг, от 0,5 мг до 1,0 мг, от 1,0 мг до 5 мг, от 5 мг до 10 мг, от 10 мг до 20 мг, от 20 мг до 30 мг, от 30 мг до 40 мг или от 40 мг до 50 мг, например, около 0,003 мг, около 0,005 мг, около 0,01 мг, около 0,05 мг, около 0,1 мг, около 0,5 мг, около 1,0 мг, около 2 мг, около 3 мг, около 4 мг, около 5 мг, около 6 мг, около 7 мг, около 8 мг, около 9 мг, около 10 мг, около 11 мг, около 12 мг, около 13 мг, около 14 мг, около 15 мг, около 16 мг, около 17 мг, около 18 мг, около 19 мг, около 20 мг, около 21 мг, около 22 мг, около 23 мг, около 24 мг, около 25 мг, около 30 мг, около 35 мг, около 40 мг, около 45 мг или около 50 мг). В некоторых вариантах осуществления C1D1 составляет 0,003 мг, 0,009 мг, 0,027 мг, 0,081 мг, 0,12 мг, 0,24 мг, 0,48 мг, 0,72 мг, 1,0 мг, 2,0 мг, 2,2 мг, 4,0 мг, 6,6 мг, 8,0 мг, 12 мг, 18 мг, 27 мг или 40,5 мг.

В некоторых вариантах осуществления C1D2 составляет от 0,009 мг до 200 мг (например, от 0,01 мг до 150 мг, от 0,05 мг до 100 мг, от 0,1 мг до 50 мг, от 0,5 мг до 20 мг или от 1 мг до 10 мг, например, от 0,009 мг до 0,01 мг, от 0,01 мг до 0,05 мг, от 0,05 мг до 0,1 мг, от 0,1 мг до 0,5 мг, от 0,5 мг до 1,0 мг, от 1,0 мг до 5 мг, от 5 мг до 10 мг, от 10 мг до 20 мг, от 20 мг до 30 мг, от 30 мг до 40 мг, от 40 мг до 50 мг, от 50 мг до 60 мг, от 60 мг до 70 мг, от 70 мг до 80 мг, от 80 мг до 90 мг, от 90 мг до 100 мг, от 100 мг до 120 мг, от 120 мг до 150 мг или от 150 мг до 200 мг, например, около 0,009 мг, около 0,01 мг, около 0,05 мг, около 0,1 мг, около 0,5 мг, около 1,0 мг, около 2 мг, около 3 мг, около 4 мг, около 5 мг, около 6 мг, около 7 мг, около 8 мг, около 9 мг, около 10 мг, около 11 мг, около 12 мг, около 13 мг, около 14 мг, около 15 мг, около 16 мг, около 17 мг, около 18 мг, около 19 мг, около 20 мг, около 21 мг, около 22 мг, около 23 мг, около 24 мг, около 25 мг, около 30 мг, около 35 мг, около 40 мг, около 45 мг, около 50 мг, около 55 мг, около 60 мг, около 65 мг, около 70 мг, около 75 мг, около 80 мг, около 85 мг, около 90 мг, около 95 мг, около 100 мг, около 150 мг или около 200 мг). В некоторых вариантах осуществления C1D2 составляет 0,009 мг, 0,027 мг, 0,081 мг, 0,24 мг, 0,4 мг, 0,72 мг, 0,08 мг, 1,6 мг, 2,2 мг, 2,3 мг, 3,2 мг, 4,6 мг, 6,4 мг, 6,6 мг, 9,2 мг, 12,8 мг, 14,8 мг, 18,4 мг, 19,8 мг, 25,6 мг, 36,8 мг, 38,4, 51,5 мг, 57,6 мг, 72,1 мг, 86,4 мг, 61,3 мг или 129,6 мг.

В некоторых вариантах осуществления, например, при одноэтапном фракционировании, C2D1 и C1D2 эквивалентны.

В некоторых вариантах осуществления С1 дополнительно включает третью дозу HER2 TDB (C1D3), причем C1D3 больше, чем C1D2. В некоторых вариантах осуществления C1D1, C1D2 и C1D3 вместе превышают наибольшую разрешенную дозу HER2 TDB в первом цикле дозирования в схеме дозирования с одноэтапным фракционированием и увеличением дозы (например, когда наибольшая разрешенная доза составляет от около 0,01 мг до около 30 мг, например, от 0,5 мг до 25 мг, от 1 мг до 20 мг или от 2 мг до 10 мг). В некоторых вариантах осуществления C1D2 в два десять раз (например, в около двух раз, около трех раз, около четырех раз, около пяти раз, около шести раз, около семи раз, около восьми раз, около девяти раз или около десяти раз) превышает дозу C1D1. В некоторых вариантах осуществления C1D3 в два три раза превышает дозу C1D2. В некоторых вариантах осуществления C2D1 и C1D3 эквивалентны.

В некоторых вариантах осуществления C1D1 составляет от 0,01 мг до 20 мг (например, от 0,05 мг до 15 мг, от 0,1 мг до 10 мг или от 0,5 мг до 5 мг, например, от 0,01 мг до 0,05 мг, от 0,05 мг до 0,1 мг, от 0,1 мг до 0,5 мг, от 0,5 мг до 1,0 мг, от 1,0 мг до 5 мг, от 5 мг до 10 мг, от 10 мг до 15 мг или от 15 мг до 20 мг, например, около 0,01 мг, около 0,05 мг, около 0,1 мг, около 0,5 мг, около 1,0 мг, около 2 мг, около 3 мг, около 4 мг, около 5 мг, около 6 мг, около 7 мг, около 8 мг, около 9 мг, около 10 мг, около 11 мг, около 12 мг, около 13 мг, около 14 мг, около 15 мг, около 16 мг, около 17 мг, около 18 мг, около 19 мг или около 20 мг).

В некоторых вариантах осуществления C1D2 составляет от 0,1 мг до 100 мг (например, от 0,1 мг до 80 мг, от 0,5 мг до 50 мг или от 1 мг до 10 мг, например, от 0,1 мг до 0,5 мг, от 0,5 мг до 1,0 мг, от 1,0 мг до 5 мг, от 5 мг до 10 мг, от 10 мг до 20 мг, от 20 мг до 30 мг, от 30 мг до 40 мг, от 40 мг до 50 мг, от 50 мг до 60 мг, от 60 мг до 70 мг, от 70 мг до 80 мг, от 80 мг до 90 мг или от 90 мг до 100 мг, например, около 0,01 мг, около 0,05 мг, около 0,1 мг, около 0,5 мг, около 1,0 мг, около 2 мг, около 3 мг, около 4 мг, около 5 мг, около 6 мг, около 7 мг, около 8 мг, около 9 мг, около 10 мг, около 11 мг, около 12 мг, около 13 мг, около 14 мг, около 15 мг, около 16 мг, около 17 мг, около 18 мг, около 19 мг, около 20 мг, около 21 мг, около 22 мг, около 23 мг, около 24 мг, около 25 мг, около 30 мг, около 35 мг, около 40 мг, около 45 мг, около 50 мг, около 55 мг, около 60 мг, около 65 мг, около 70 мг, около 75 мг, около 80 мг, около 85 мг, около 90 мг, около 95 мг или около 100 мг).

В некоторых вариантах осуществления C1D3 составляет от 1 мг до 400 мг (например, от 10 мг до 300 мг, от 20 мг до 200 мг или от 50 мг до 100 мг, например, от 1,0 мг до 5 мг, от 5 мг до 10 мг, от 10 мг до 20 мг, от 20 мг до 30 мг, от 30 мг до 40 мг, от 40 мг до 50 мг, от 50 мг до 60 мг, от 60 мг до 70 мг, от 70 мг до 80 мг, от 80 мг до 90 мг, от 90 мг до 100 мг, от 100 мг до 120 мг, от 120 мг до 150 мг, от 150 мг до 200 мг, от 200 до 250 мг, от 250 мг до 300 мг, от 300 мг до 350 мг или от 350 мг до 400 мг, например, около 1,0 мг, около 2 мг, около 3 мг, около 4 мг, около 5 мг, около 6 мг, около 7 мг, около 8 мг, около 9 мг, около 10 мг, около 11 мг, около 12 мг, около 13 мг, около 14 мг, около 15 мг, около 16 мг, около 17 мг, около 18 мг, около 19 мг, около 20 мг, около 21 мг, около 22 мг, около 23 мг, около 24 мг, около 25 мг, около 30 мг, около 35 мг, около 40 мг, около 45 мг, около 50 мг, около 55 мг, около 60 мг, около 65 мг, около 70 мг, около 75 мг, около 80 мг, около 85 мг, около 90 мг, около 95 мг, около 100 мг, около 150 мг, около 200 мг, около 250 мг, около 300 мг, около 350 мг или около 400 мг). В некоторых вариантах осуществления C1D3 составляет 1,1 мг, 2,2 мг, 4,4 мг, 6,6 мг, 8,8 мг, 13,2 мг, 17,6 мг, 26,4 мг, 35,2 мг, 52,8 мг, 70,4 мг, 105,6 мг, 147,8 мг, 158,4 мг, 176 мг, 207 мг, 237,6 мг или 356,4 мг.

В некоторых вариантах осуществления способ включает введение субъекту C2D1 в день 1 С2. В некоторых вариантах осуществления схема лечения включает один или более дополнительных циклов дозирования (например, до 15 дополнительных циклов дозирования, например, один, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать или пятнадцать дополнительных циклов дозирования). В некоторых вариантах осуществления продолжительность каждого одного или более дополнительных циклов дозирования составляет 21 день. В некоторых вариантах осуществления каждый из одного или более дополнительных циклов дозирования включает одну дозу антитела к HER2 и одну дозу HER2 TDB (например, при этом антитело к HER2 вводят до HER2 TDB в каждый из дополнительных циклов дозирования, например, в день 1 каждого из дополнительных циклов дозирования). В некоторых вариантах осуществления способ включает введение субъекту антитела к HER2 и HER2 TDB в день 1 каждого из одного или более дополнительных циклов дозирования.

В другом аспекте в изобретении предложен способ лечения или замедления прогрессирования HER2-положительного рака у нуждающегося в этом субъекта, включающий назначение субъекту схемы лечения, включающей HER2 TDB, причем схема лечения включает: (а) первый цикл (С1), включающий первую дозу HER2 TDB (C1D1) и вторую дозу HER2 TDB (C1D2), причем C1D2 больше, чем C1D1; и (б) второй цикл (С2), включающий дополнительную дозу HER2 TDB (C2D1), причем C2D1 эквивалентна наибольшей дозе HER2 TDB - С1. В некоторых вариантах осуществления C1D2 по меньшей мере в два раза превышает дозу C1D1 (например, по меньшей мере в три раза превышает дозу C1D1).

В некоторых вариантах осуществления C1D1 составляет от 0,003 мг до около 10 мг (например, от 0,005 мг до 9 мг, от 0,01 мг до 8 мг, от 0,05 мг до 7 мг или от 0,1 мг до 5 мг, например, от 0,003 мг до 0,005 мг, от 0,005 мг до 0,01 мг, от 0,01 мг до 0,05 мг, от 0,05 мг до 0,1 мг, от 0,1 мг до 0,5 мг, от 0,5 мг до 1,0 мг, от 1,0 мг до 5 мг или от 5 мг до 10 мг, например, около 0,003 мг, около 0,005 мг, около 0,01 мг, около 0,05 мг, около 0,1 мг, около 0,5 мг, около 1,0 мг, около 2 мг, около 3 мг, около 4 мг, около 5 мг, около 6 мг, около 7 мг, около 8 мг, около 9 мг или около 10 мг).

В некоторых вариантах осуществления C1D2 составляет от 0,009 до около 20 мг (например, от 0,01 мг до 15 мг, от 0,05 мг до 10 мг или от 0,1 мг до 5 мг, например, от 0,009 мг до 0,01 мг, от 0,01 мг до 0,05 мг, от 0,05 мг до 0,1 мг, от 0,1 мг до 0,5 мг, от 0,5 мг до 1,0 мг, от 1,0 мг до 5 мг, от 5 мг до 10 мг, от 10 мг до 15 мг или от 15 мг до 20 мг, например, около 0,009 мг, около 0,01 мг, около 0,05 мг, около 0,1 мг, около 0,5 мг, около 1,0 мг, около 2 мг, около 3 мг, около 4 мг, около 5 мг, около 6 мг, около 7 мг, около 8 мг, около 9 мг, около 10 мг, около 11 мг, около 12 мг, около 13 мг, около 14 мг, около 15 мг, около 16 мг, около 17 мг, около 18 мг, около 19 мг или около 20 мг).

В некоторых вариантах осуществления C2D1 и C1D2 эквивалентны. В других вариантах осуществления С1 дополнительно включает третью дозу HER2 TDB (C1D3), которая больше, чем C1D2. В некоторых вариантах осуществления C1D1, C1D2 и C1D3 вместе превышают наибольшую разрешенную дозу HER2 TDB в первом цикле дозирования в схеме дозирования с одноэтапным фракционированием и увеличением дозы. В некоторых вариантах осуществления наибольшая разрешенная доза составляет от около 0,01 мг до около 30 мг. В некоторых вариантах осуществления C1D2 в два-десять раз превышает дозу C1D1 (например, в около трех раз, около четырех раз, около пяти раз, около шести раз, около семи раз, около восьми раз, около девяти раз или около десяти раз превышает дозу C1D1). В некоторых вариантах осуществления C1D3 в два три раза превышает дозу C1D2. В некоторых вариантах осуществления C2D1 и C1D3 эквивалентны.

В некоторых вариантах осуществления C1D1 составляет от 0,01 мг до 20 мг (например, от 0,01 мг до 15 мг, от 0,05 мг до 10 мг или от 0,1 мг до 5 мг, например, от 0,01 мг до 0,05 мг, от 0,05 мг до 0,1 мг, от 0,1 мг до 0,5 мг, от 0,5 мг до 1,0 мг, от 1,0 мг до 5 мг, от 5 мг до 10 мг, от 10 мг до 15 мг или от 15 мг до 20 мг, например, около 0,01 мг, около 0,05 мг, около 0,1 мг, около 0,5 мг, около 1,0 мг, около 2 мг, около 3 мг, около 4 мг, около 5 мг, около 6 мг, около 7 мг, около 8 мг, около 9 мг, около 10 мг, около 11 мг, около 12 мг, около 13 мг, около 14 мг, около 15 мг, около 16 мг, около 17 мг, около 18 мг, около 19 мг или около 20 мг).

В некоторых вариантах осуществления C1D3 составляет от 1 мг до 200 мг (например, от 10 мг до 150 мг, от 20 мг до 120 мг или от 50 мг до 100 мг, например, от 1,0 мг до 5 мг, от 5 мг до 10 мг, от 10 мг до 20 мг, от 20 мг до 30 мг, от 30 мг до 40 мг, от 40 мг до 50 мг, от 50 мг до 60 мг, от 60 мг до 70 мг, от 70 мг до 80 мг, от 80 мг до 90 мг, от 90 мг до 100 мг, от 100 мг до 120 мг, от 120 мг до 150 мг или от 150 мг до 200 мг, например, около 1.0 мг, около 2 мг, около 3 мг, около 4 мг, около 5 мг, около 6 мг, около 7 мг, около 8 мг, около 9 мг, около 10 мг, около 11 мг, около 12 мг, около 13 мг, около 14 мг, около 15 мг, около 16 мг, около 17 мг, около 18 мг, около 19 мг, около 20 мг, около 21 мг, около 22 мг, около 23 мг, около 24 мг, около 25 мг, около 30 мг, около 35 мг, около 40 мг, около 45 мг, около 50 мг, около 55 мг, около 60 мг, около 65 мг, около 70 мг, около 75 мг, около 80 мг, около 85 мг, около 90 мг, около 95 мг, около 100 мг, около 150 мг или около 200 мг).

В некоторых вариантах осуществления способ включает введение субъекту C1D1, C1D2 и C1D3 в дни или приблизительно в дни 1, 8 и 15, соответственно, С1. В некоторых вариантах осуществления С1 составляет около 21 дня. В некоторых дополнительных или альтернативных вариантах осуществления С2 составляет 21 день. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение субъекту C2D1 в день 1 С2. Схема лечения может включать один или более дополнительных циклов дозирования (например, до 15 дополнительных циклов дозирования, например, один, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать или пятнадцать дополнительных циклов дозирования). В некоторых вариантах осуществления каждый из дополнительных циклов дозирования составляет 21 день. В некоторых вариантах осуществления каждый из дополнительных циклов дозирования включает одну дозу HER2 TDB. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение субъекту HER2 TDB в день 1 каждого из одного или более дополнительных циклов дозирования. В некоторых вариантах осуществления любого из предыдущих аспектов антитело к HER2 и/или HER2 TDB вводят путем внутривенной инфузии (например, с помощью в/в пакета). В некоторых вариантах осуществления схема лечения приводит к повышению терапевтического индекса HER2 TDB по сравнению с контрольной схемой лечения (например, лечением HER2 TDB в отсутствие антитела к HER2 или схемой лечения без фракционированного дозирования).

В некоторых вариантах осуществления любого из предыдущих аспектов способ дополнительно включает введение одного или более дополнительных терапевтических агентов. Например, один или более дополнительных терапевтических агентов могут представлять собой тоцилизумаб, кортикостероид, антагонист оси PD-1 и конъюгат антитело - лекарственное средство. В некоторых вариантах осуществления связывающий ось PD-1 антагонист выбран из группы, состоящей из PD-Ll-связывающего антагониста (например, MPDL3280A (атезолизумаб), YW243.55.S70, MDX-1105 или MEDI4736), PD-1-связывающего антагониста (например, MDX-1106 (ниволумаб), MK-3475 (пембролизумаб) и АМР-224) и РВ-L2-связывающего антагониста (например, PD-L1-связывающего антитела или иммуноадгезина).

В некоторых вариантах осуществления в предшествующей схеме лечения субъекту вводили трастузумаб (например, в качестве лечения HER2-положительного рака).

В некоторых вариантах осуществления HER2-положительный рак представляет собой HER2-положительную солидную опухоль. В дополнительном или альтернативном варианте HER2-положительный рак может представлять собой местно-распространенный или метастатический HER2-положительный рак. В некоторых вариантах осуществления HER2-положительный рак представляет собой HER2-положительный рак молочной железы или HER2-положительный рак желудка (например, HER2-положительный рак пищеводно-желудочного перехода или HER2-положительный колоректальный рак). В некоторых вариантах осуществления HER2-положительный рак выбран из группы, состоящей из HER2-положительного рака пищеводно-желудочного перехода, HER2-положительного колоректального рака, HER2-положительного рака легкого (например, HER2-положительной немелкоклеточной карциномы легкого), HER2-положительного рака поджелудочной железы, HER2-положительного колоректального рака, HER2-положительного рака мочевого пузыря, HER2-положительного рака протока слюнной железы, HER2-положительного рака яичника (например, HER2-положительного эпителиального рака яичника) или HER2-положительного рака эндометрия.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

На Фиг. 1 приведено изображение кристаллической структуры внеклеточного домена (ВКД) HER2, связанного HER2-связывающими доменами 4D5 (трастузумаб), 2С4 (пертузумаб) и 7С2.

На Фиг. 2 приведен иммуноблот, иллюстрирующий относительную экспрессию белка HER2 клетками MCF7, клетками НТ55 и клетками KPL4.

На Фиг. 3А приведен график, иллюстрирующий относительное уничтожение клеток KPL4 одним BTRC4017A (красные круги); BTRC4017A + 230 мкг/мл трастузумаба (синие квадраты); и BTRC4017A + 60 мкг/мл трастузумаба (коричневые треугольники) в зависимости от концентрации BTRC4017A (нг/мл).

На Фиг. 3Б приведен график, иллюстрирующий относительное уничтожение клеток НТ55 одним BTRC4017A (красные круги); BTRC4017A + 230 мкг/мл трастузумаба (синие квадраты); и BTRC4017A + 60 мкг/мл трастузумаба (коричневые треугольники) в зависимости от концентрации BTRC4017A (нг/мл). Н/Д = не определено.

На Фиг. 4 приведен график, иллюстрирующий связывание трастузумаба (красные круги) с трастузумаба-LALAPG (синие квадраты) с HER2-экспрессирующими клетками SKBR3 в зависимости от концентрации. Связывание выявляли, используя козье ФИТЦ-конъюгированное вторичное антитело к антителам человека, присутствие которого количественно оценивали по средней интенсивности флуоресценции (СИФ) методом проточной цитометрии.

На Фиг. 5А приведен решетчатый график, иллюстрирующий объем опухолей KPL4 в течение курса различных вариантов лечения в мышиной модели. В верхнем ряду показан эффект контрольных вариантов лечения; на графике слева показан рост опухолей в ответ на ведение носителя; на графике посередине показан рост опухолей в ответ на трастузумаб (ГЕРЦЕПТИН®) без мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК); и на графике справа показан рост опухолей в ответ на трастузумаб (ГЕРЦЕПТИН®) с МКПК. В среднем ряду и нижнем ряду показан рост опухолей в течение курса лечения одним BTRC4017A и в комбинации с трастузумабом (ГЕРЦЕПТИН®), соответственно. В среднем ряду и нижнем ряду на графике слева показан рост опухолей в ответ на 0,05 мг/кг BTRC4017A; на графике посередине показан рост опухолей в ответ на 0,5 мг/кг BTRC4017A; и на графике справа показан рост опухолей в ответ на 5,0 мг/кг BTRC4017A. Жирные сплошные линии представляют аппроксимированный объем опухолей для каждой группы. Пунктирные линии представляют аппроксимированный объем опухолей для контрольной группы носителя. Серые линии представляют отдельных животных.

На Фиг. 5Б приведен решетчатый график, иллюстрирующий объем опухолей НТ55 в течение курса различных вариантов лечения в мышиной модели. В верхнем ряду показан эффект контрольных вариантов лечения; на графике слева показан рост опухолей в ответ на ведение носителя; на графике посередине показан рост опухолей в ответ на трастузумаб (ГЕРЦЕПТИН®) без мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК); и на графике справа показан рост опухолей в ответ на трастузумаб (ГЕРЦЕПТИН®) с МКПК. В среднем ряду и нижнем ряду показан рост опухолей в течение курса лечения одним BTRC4017A и в комбинации с трастузумабом (ГЕРЦЕПТИН®), соответственно. В среднем ряду и нижнем ряду на графике слева показан рост опухолей в ответ на 0,05 мг/кг BTRC4017A; на графике посередине показан рост опухолей в ответ на 0,5 мг/кг BTRC4017A; и на графике справа показан рост опухолей в ответ на 5,0 мг/кг BTRC4017A. Жирные сплошные линии представляют аппроксимированный объем опухолей для каждой группы. Пунктирные линии представляют аппроксимированный объем опухолей для контрольной группы носителя. Серые линии представляют отдельных животных.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

I. ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Если не указано иное, подразумевается, что все термины, обозначения и другая научная терминология, используемые в данном документе, имеют значения, традиционно понимаемые специалистами в области техники, к которой относится данное изобретение. В некоторых случаях термины с традиционно понимаемыми значениями определены в данном документе для ясности и/или в качестве справочного материала, и включение таких определений в данный документ не обязательно следует толковать как представляющее существенную разницу с общепринятыми понятиями в данной области техники.

В контексте данного документа термин «около» относится к обычному диапазону погрешностей для соответствующего значения, хорошо известному специалисту в данной области техники. В контексте данного документа употребление слова «около» в отношении значения или параметра включает (и описывает) варианты осуществления, которые относятся непосредственно к этому значению или параметру.

В контексте данного документа формы единственного числа включают и формы множественного числа, если из контекста явно не следует иное. Например, упоминание «выделенного пептида» означает один или более выделенных пептидов.

В данном описании и формуле изобретения термин «содержать» или его вариации, такие как «содержит» или «содержащий», следует понимать как подразумевающее включение указанного целого числа или группы целых чисел, но не исключение какого-либо другого целого числа или группы целых чисел.

Термин «антитело» в данном документе используется в самом широком смысле и включает различные структуры антител, включая, но не ограничиваясь этим, моноклональные антитела, поликлональные антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифические антитела) и фрагменты антител, при условии, что они проявляют необходимую антигенсвязывающую активность.

«Фрагмент антитела» относится к молекуле, отличной от интактного антитела, которая содержит часть интактного антитела, которая связывает антиген, с которым связывается интактное антитело. Примеры фрагментов антител включают, но не ограничиваются этим, фрагменты Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')₂; диатела; линейные антитела; молекулы одноцепочечных антител (например, scFv); и полиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител.

Под «антигенсвязывающим доменом» подразумевается часть соединения или молекулы, которая специфически связывается с целевым эпитопом, антигеном, лигандом или рецептором. Молекулы, характеризующиеся антигенсвязывающими доменами включают, но не ограничиваются этим, антитела (например, моноклональные, поликлональные, рекомбинантные, гуманизированные и химерные антитела), фрагменты антител или их части (например, Fab-фрагменты, F(ab')2, scFv-антитела, SMIP, доменные антитела, диатела, минитела, scFv-Fc, аффитела, нанотела и VH- и/или VL-домены антител), рецепторы, лиганды, аптамеры и другие молекулы, имеющие идентифицированного партнера по связыванию. Антитело с «созревшей аффинностью» относится к антителу с одним или более изменениями в одной или более гипервариабельных областях (HVR) по сравнению с родительским антителом, которое не содержит такие изменения, при этом такие изменения приводят к улучшению аффинности антитела в отношении антигена.

Под «связывающим доменом» подразумевается часть соединения или молекулы, которая специфически связывается с целевым эпитопом, антигеном, лигандом или рецептором. Связывающие домены могут быть частью молекулы антитела (например, моноклонального, поликлонального, рекомбинантного, гуманизированного или химерного антитела), фрагментом антитела или его частью (например, Fab-фрагментом, F(ab')2, scFv-антителом, SMIP, доменным антителом, диателом, минителом, scFv-Fc, аффителом, нанотелом и VH- и/или VL-доменом антитела), рецептором, лигандом, аптамером или другой молекулой, имеющей идентифицированного партнера по связыванию.

В контексте данного документа термин «определяющие комплементарность области» (CDR; т.е. CDR1, CDR2 и CDR3) относится к аминокислотным остаткам вариабельного домена антитела, присутствие которых необходимо для связывания антигена. Каждый вариабельный домен обычно содержит три области CDR, определяемые как CDR1, CDR2 и CDR3. Каждая определяющая комплементарность область может содержать аминокислотные остатки из «определяющей комплементарность области» по определению Kabat (т.е. примерно остатки 24-34 (L1), 50-56 (L2) и 89-97 (L3) в вариабельном домене легкой цепи (V_L) и 31-35 (H1), 50-65 (Н2) и 95 102 (Н3) в вариабельном домене тяжелой цепи (V_H); Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)) и/или остатки из «гипервариабельной петли» (т.е. примерно остатки 26-32 (L1), 50-52 (L2) и 91-96 (L3) в вариабельном домене легкой цепи (V_L) и 26-32 (H1), 53-55 (Н2) и 96-101 (Н3) в вариабельном домене тяжелой цепи (V_H); Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). В некоторых случаях определяющая комплементарность область может содержать аминокислоты как из области CDR по определению Kabat, так и из гипервариабельной петли. Например, CDRH1 тяжелой цепи антитела 4D5 включает аминокислотные остатки от 26 до 35.

В данном документе термин «Fc-область» используется для определения C-концевой области тяжелой цепи иммуноглобулина, которая содержит по меньшей мере часть константной области. Этот термин включает Fc-области с нативной последовательностью и вариантные Fc-области. В одном варианте осуществления Fc-область тяжелой цепи человеческого IgG простирается от Cys226 или от Pro230 до карбокси-конца тяжелой цепи. При этом С-концевой лизин (Lys447) Fc-области может присутствовать или нет. Если не указано иное, нумерация аминокислотных остатков в Fc-области или константной области соответствует системе нумерации EU, также называемой индексом EU, описанной в Kabat et al., выше.

В данном документе термины «полноразмерное антитело», «интактное антитело» и «цельное антитело» используются взаимозаменяемо для обозначения антитела, имеющего структуру, по существу сходную со структурой нативного антитела, или имеющего тяжелые цепи, которые содержат Fc-область по определению в данном документе.

«Эффекторные функции» относятся к видам биологической активности, характерным для Fc-области антитела, которые варьируются в зависимости от изотипа антитела. Примеры эффекторных функций антител включают: связывание C1q и комплементзависимую цитотоксичность (КЗЦ); связывание с Fc-рецептором; антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность (АЗКЦ); фагоцитоз; понижающую регуляцию рецепторов клеточной поверхности (например, B-клеточного рецептора); и активацию В-клеток.

«Каркасная область» или «FR» относится к остаткам вариабельного домена, отличным от остатков гипервариабельной области (HVR). FR вариабельного домена обычно состоит из четырех FR-доменов: FR1, FR2, FR3 и FR4. Соответственно, последовательности CDR и FR обычно находятся в VH (или VL) в следующем порядке: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.

«Процент (%) идентичности аминокислотной последовательности» или «процент (%) идентичности последовательности» относительно референсной полипептидной последовательности определяется как процентная доля аминокислотных остатков в кандидатной последовательности, которые являются идентичными с аминокислотными остатками в референсной полипептидной последовательности, после выравнивания последовательностей и внесения, в случае необходимости, гэпов для достижения максимального процента идентичности последовательностей, и без учета каких-либо консервативных замен в качестве части идентичности последовательностей. Выравнивание в целях определения процента идентичности аминокислотной последовательности можно осуществлять различными способами, которые известны в данной области техники, например, используя общедоступное компьютерное программное обеспечение, такое как программное обеспечение BLAST, BLAST-2, ALIGN или Megalign (DNASTAR). Специалисты в данной области техники могут определить подходящие параметры для выравнивания последовательностей, включая любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей. При этом в целях данного документа значения процента (%) идентичности аминокислотных последовательностей получают, используя компьютерную программу для сравнения последовательностей ALIGN-2. Компьютерная программа для сравнения последовательностей ALIGN-2 была разработана Genentech, Inc., а исходный код был подан вместе с пользовательской документацией в Бюро регистрации авторских прав США, Вашингтон, округ Колумбия, 20559, где он зарегистрирован под номером регистрации авторского права США TXU510087. Программа ALIGN-2 находится в свободном доступе от Genentech, Inc., Южный Сан-Франциско, Калифорния, или может быть скомпилирована из исходного кода. Программу ALIGN-2 следует компилировать для использования в операционной системе UNIX, включая Digital UNIX V4.0D. Все параметры сравнения последовательностей установлены программой ALIGN-2 и не варьируются.

В тех случаях, когда для сравнения аминокислотных последовательностей используют ALIGN-2, % идентичности аминокислотной последовательности заданной аминокислотной последовательности А с или по сравнению с заданной аминокислотной последовательностью В (что в альтернативном варианте можно сформулировать как заданная аминокислотная последовательность А, которая имеет или содержит определенный % идентичности аминокислотной последовательности с или по сравнению с заданной аминокислотной последовательностью В) рассчитывают следующим образом:

100 умножить на соотношение X/Y,

где X представляет собой число аминокислотных остатков, оцененных программой выравнивания последовательностей ALIGN-2 как идентичные совпадения при программном выравнивании А и В, и где Y представляет общее количество аминокислотных остатков в В. Следует понимать, что в случае, когда длина аминокислотной последовательности А не равна длине аминокислотной последовательности В, % идентичности аминокислотной последовательности А к В не будет равен % идентичности аминокислотной последовательности В к А. Если специально не указано иное, все значения % идентичности аминокислотной последовательности, которые используются в данном документе, получены, как описано в предыдущем абзаце с использованием компьютерной программы ALIGN-2.

Термин «химерное» антитело относится к антителу, в котором часть тяжелой и/или легкой цепи получена из определенного источника или вида, тогда как остальная часть тяжелой и/или легкой цепи получена из другого источника или вида.

«Класс» антитела относится к типу константного домена или константной области, которые содержит его тяжелая цепь. Существует пять основных классов антител: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, а некоторые из них могут быть дополнительно разделены на подклассы (изотипы), например, IgG₁, IgG₂, IgG₃, IgG₄, IgA₁ и IgA₂. Константные домены тяжелой цепи, которые соответствуют разным классам иммуноглобулинов, называются α, δ, ε, γ и μ, соответственно.

«Субъект», «пациент» или «индивид» представляет собой млекопитающее. Млекопитающие включают, но не ограничиваются этим, одомашненных животных (например, коров, овец, кошек, собак и лошадей), приматов (например, людей и нечеловекообразных приматов, таких, как обезьяны), кроликов и грызунов (например, мышей и крыс). В определенных вариантах осуществления субъект, пациент или индивид представляет собой человека.

Термин «HER2-положительный» рак включает раковые клетки, которые имеют уровень HER2 выше нормы. Примеры HER2-положительного рака включают HER2-положительный рак молочной железы и HER2-положительный рак желудка. В некоторых вариантах осуществления HER2-положительный рак выбран из группы, состоящей из HER2-положительного рака пищеводно-желудочного перехода, HER2-положительного колоректального рака, HER2-положительного рака легкого (например, HER2-положительной немелкоклеточной карциномы легкого), HER2-положительного рака поджелудочной железы, HER2-положительного колоректального рака, HER2-положительного рака мочевого пузыря, HER2-положительного рака протока слюнной железы, HER2-положительного рака яичника (например, HER2-положительного эпителиального рака яичника) или HER2-положительного рака эндометрия. В некоторых вариантах осуществления HER2-положительный рак является местно-распространенным или метастатическим. Необязательно, HER2-положительный рак имеет иммуногистохимическую (ИГХ) оценку 2+ или 3+ и/или коэффициент амплификации при in situ гибридизации (ISH) ≥2,0. В некоторых вариантах осуществления HER2-положительный рак молочной железы определен в соответствии с руководством HER2 Testing in Breast Cancer Guideline: 2018 Focused Update (Wolff et al. J. Clin. Oncol. 2018, 36(20):2105-2122).

«Эффективное количество» соединения, например, антитела к HER2 (например, HER2 TDB, трастузумаба или их комбинации) представляет собой по меньшей мере минимальное количество, необходимое для достижения желаемого терапевтического или профилактического результата, такого как измеримое улучшение или предотвращение конкретного нарушения (например, HER2-положительного рака, например, HER2-положительного рака молочной железы или HER2-положительного рака желудка). Эффективное количество в данном документе может варьироваться в зависимости от таких факторов, как состояние заболевания, возраст, пол и масса пациента и от способности антитела вызывать необходимый ответ у индивида. Эффективное количество является таким, для которого любые токсические или вредные эффекты лечения перевешиваются терапевтически благоприятными эффектами. В случае профилактического применения благоприятные или желаемые результаты включают результаты, такие как устранение или снижение риска, уменьшение тяжести или задержка начала заболевания, включая биохимические, гистологические и/или поведенческие симптомы заболевания, его осложнения и промежуточные патологические фенотипы, присутствующие при развитии заболевания. В случае терапевтического применения благоприятные или желаемые результаты включают клинические результаты, такие как уменьшение одного или более симптомов, обусловленных заболеванием, повышение качества жизни имеющих заболевание, снижение дозы других лекарственных средств, необходимых для лечения заболевания, усиление эффекта другого лекарственного средства, например, за счет нацеливания, замедление прогрессирования заболевания и/или продление выживаемости. В случае рака или опухоли эффективное количество лекарственного средства может оказывать эффект, состоящий в снижении количества раковых клеток (например, клеток HER2-положительного рака); уменьшении размера опухоли; ингибировании (т.е. замедлении в некоторой степени или, желательно, прекращении) инфильтрации раковых клеток в периферические органы; ингибировании (т.е. замедлении в некоторой степени или, желательно, прекращении) метастазирования опухоли; ингибировании в некоторой степени роста опухоли; и/или облегчении в некоторой степени одного или более симптомов, связанных с нарушением. Эффективное количество можно вводить за один или более приемов. В целях данного изобретения эффективное количество лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции представляет собой количество, достаточное для обеспечения профилактического или терапевтического лечения прямым или косвенным образом. Как понятно в клиническом контексте, эффективное количество лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции может или не может быть достигнуто в сочетании с другими лекарственным средством, соединением или фармацевтической композицией. Таким образом, «эффективное количество» можно рассматривать в контексте введения одного или более терапевтических агентов, а один агент можно рассматривать как вводимый в эффективном количестве, если в сочетании с одним или более другими агентами может быть достигнут или достигается желаемый результат.

Термин «терапевтический индекс» относится к соотношению между дозой терапевтического агента (например, HER2 TDB, например, BTRC4017A), которая вызывает токсический эффект (например, внеопухолевый эффект), и дозой терапевтического агента (например, HER2 TDB, например, BTRC4017A), достаточной для достижения желаемого терапевтического эффекта. Повышенный терапевтический индекс может быть получен, когда (а) доза, достаточная для достижения желаемого терапевтического эффекта, снижена по сравнению с референсной схемой лечения и/или (б) доза, при которой терапевтический агент вызывает токсический эффект (например, максимальная переносимая доза), повышена по сравнению с референсной схемой лечения. При определении терапевтического индекса дозу, достаточную для достижения желаемого терапевтического эффекта, можно определить в соответствии с объективным ответом субъекта на схему лечения. В некоторых вариантах осуществления объективный ответ представляет собой полный ответ (ПО) или частичный ответ (ЧО) в соответствии с RECIST v.1.1. В дополнительном или альтернативном варианте дозу, достаточную для достижения желаемого терапевтического эффекта, можно определить в соответствии с длительностью ответа (ДО) субъекта. В некоторых вариантах осуществления ДО представляет собой время от первого появления задокументированного объективного ответа до времени первого задокументированного прогрессирования заболевания или смерти по любой причине в зависимости от того, что наступает раньше, в соответствии с RECIST v.1.1. При определении терапевтического индекса дозу, при которой терапевтический агент вызывает токсический эффект, можно определить в соответствии с наличием дозолимитирующей токсичности (ДЛТ), которая оценивается в соответствии с Общими терминологическими критериями нежелательных явлений Национального института рака (NCI СТСАЕ) v5.0, за исключением синдрома высвобождения цитокинов (СВЦ), который оценивается в соответствии с Модифицированной системой оценки синдрома высвобождения цитокинов (смотрите таблицы 1 и 2 в разделе II - Терапевтические методы).

«Выживаемость» относится к сохранению жизни субъекта и включает выживаемость без прогрессирования (ВВП) и общую выживаемость (ОВ). Выживаемость можно оценить по методу Каплана-Мейера, а любые различия в выживаемости вычисляют с помощью стратифицированного лог-рангового критерия.

«Выживаемость без прогрессирования (ВВП)» относится ко времени от начала лечения (или рандомизации) до первого прогрессирования заболевания или смерти. Например, она представляет собой время, в течение которого субъект остается живым без рецидива рака, например, в течение определенного периода времени, такого как около 1 месяца, 1,2 месяца, 2 месяцев, 2,4 месяца, 2,9 месяца, 3 месяцев, 3,5 месяца, 4 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 1 года, около 2 лет, около 3 лет и т.д., от начала лечения или от первоначального диагноза. В одном аспекте изобретения ВВП можно оценить по Критериям оценки ответа при солидных опухолях (RECIST v. 1.1).

«Общая выживаемость (ОВ)» относится к сохранению жизни субъекта в течение определенного периода времени, такого как около 1 года, около 2 лет, около 3 лет, около 4 лет, около 5 лет, около 10 лет и т.д., от начала лечения или от первоначального диагноза.

В контексте данного документа термин «целевой/внеопухолевый эффект» относится к эффекту, ассоциированному со связыванием терапевтического агента с ассоциированной с заболеванием целевой молекулой, которая экспрессируется на здоровой клетке (например, эффекту, ассоциированному со связыванием HER2 TDB (например, BTRC4017A) с молекулой HER2, экспрессируемой на здоровой клетке, например, когда эффект является результатом Т-клеточной цитотоксичности, направленной на здоровую клетку). В некоторых вариантах осуществления целевой/внеопухолевый эффект представляет собой симптом легочной токсичности (например, интерстициальное заболевание легких, острый респираторный дистресс-синдром, одышку, кашель, утомляемость или наличие легочных инфильтратов) и повышенный уровень печеночных ферментов, сухость во рту, сухость глаз, мукозит, эзофагит и симптом со стороны мочевыделительной системы. В дополнительном или альтернативном варианте целевой/внеопухолевый эффект может представлять собой любой эффект, вызванный аберрантной функцией HER2-экспрессирующей здоровой клетки или ткани (т.е. нераковой клетки или ткани), причем аберрантная функция связана с введением антитела к HER2 (например, TDB-антитела к HER2, вводимого в отсутствие дополнительного антитела к HER2 (например, когда TDB-антитело к HER2 и дополнительное антитело к HER2 связывают домен IV в HER2). В некоторых вариантах осуществления целевой/внеопухолевый эффект представляет собой иммуногенный эффект, такой как СВЦ, который оценивается в соответствии с Модифицированной системой оценки синдрома высвобождения цитокинов (смотрите таблицы 1 и 2 в разделе II - Терапевтические методы).

В контексте данного документа термин «кластер дифференцировки 3» или «CD3» относится, к любому нативному CD3 из любого источника, относящегося к позвоночным, включая млекопитающих, таких как приматы (например, люди) и грызуны (например, мыши и крысы), если не указано иное, включая, например, цепи CD3ε, CD3γ, CD3α и CD3β. Данный термин включает «полноразмерный» непроцессированный CD3 (например, непроцессированный или немодифицированный CD3ε или CD3γ), а также любую форму CD3, которая образуется в результате процессинга в клетке. Данный термин также охватывает варианты CD3 природного происхождения, включая, например, сплайс-варианты или аллельные варианты. CD3 включает, например, человеческий белок CD3ε (реф. посл. NCBI № NP_000724), длина которого составляет 207 аминокислот, и человеческий белок CD3γ (реф. поел. NCBI № NP_000064), длина которого составляет 182 аминокислоты.

В контексте данного документа термин «HER2» относится к любому нативному HER2 из любого источника, относящегося к позвоночным, включая млекопитающих, таких как приматы (например, люди) и грызуны (например, мыши и крысы), если не указано иное. Данный термин охватывает «полноразмерный» непроцессированный HER2, а также любую форму HER2, которая образуется в результате процессинга в клетке. Данный термин также охватывает варианты HER2 природного происхождения, включая, например, сплайс-варианты или аллельные варианты. HER2 включает, например, человеческий белок HER2 (смотрите, например, реф. посл. NCBI № NP_001276865), длина которого составляет 1240 аминокислот. Домен IV HER2 представляет собой внеклеточную область белка, которая расположена наиболее близко к клеточной мембране. Домен IV имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17.

В контексте данного документа термин «лечение» (и его грамматические вариации, такие как «лечить» или «лечащий») относится к клиническому вмешательству с целью изменения естественного течения заболевания индивида, подлежащего лечению, и может проводиться как для профилактики, так и во время проявления клинической патологии. Желаемые эффекты лечения включают, но не ограничиваются этим, предотвращение появления или повторного появления заболевания, смягчение симптомов, уменьшение каких-либо прямых или косвенных патологических последствий заболевания, предотвращение метастазирования, снижение скорости прогрессирования заболевания, уменьшение интенсивности или временное облегчение болезненного состояния и ремиссию или улучшение прогноза. В некоторых вариантах осуществления антитела по изобретению используют для задержки развития заболевания или замедления прогрессирования заболевания.

В контексте данного документа «задержка прогрессирования» нарушения или заболевания означает отсрочку, торможение, замедление, задержку, стабилизацию и/или отложение развития заболевания или нарушения (например, HER2-положительного рака, например, HER2-положительного рака молочной железы или HER2-положительного рака желудка). Эта задержка может быть разной по продолжительности, в зависимости от анамнеза и/или индивида, проходящего лечение. Для специалиста в данной области техники очевидно, что достаточная или существенная задержка может, в сущности, включать предотвращение развития заболевания у субъекта. Например, можно задержать наступление поздней стадии рака, такой как развитие метастазов.

Под термином «снижать» или «ингибировать» подразумевается способность вызывать общее снижение, составляющее, например, 20% или более, 50% или более или 75%, 85%, 90%, 95% или более. В определенных вариантах осуществления снижение или ингибирование может относиться к снижению или ингибированию нежелательных явлений (например, целевых/внеопухолевых эффектов или иммуногенных эффектов), таких как вызванная цитокинами цитотоксичность (например, синдром высвобождения цитокинов (СВЦ)), связанные с инфузией реакции (IRR), синдром активации макрофагов (САМ), неврологическая токсичность, тяжелый синдром лизиса опухоли (СЛО), нейтропения, тромбоцитопения, повышенные уровни печеночных ферментов и/или токсичность, связанная с центральной нервной системой (ЦНС), после лечения HER2 TDB и дополнительным антителом к HER2 (например, с помощью схемы дозирования с фракционированием и увеличением дозы по изобретению) по сравнению с лечением HER2 TDB в отсутствие дополнительного антитела к HER2 (например, с применением или без применения фракционированной схемы лечения). В других вариантах осуществления снижение или ингибирование может относиться к эффекторной функции антитела, которая опосредуется Fc-областью антитела, при этом такие эффекторные функции включают, в частности, комплементзависимую цитотоксичность (КЗЦ), антителозависимую клеточную цитотоксичность (АЗКЦ) и антителозависимый клеточный фагоцитоз (АЗКФ).

В контексте данного документа термин «опухоль» относится к любым неопластическим клеточным ростам и пролиферации, как злокачественным, так и доброкачественным, и к любым предраковым и раковым клеткам и тканям. В контексте данного документа термины «рак», «раковый», «клеточно-пролиферативное нарушение», «пролиферативное нарушение» и «опухоль» не являются взаимоисключающими.

В контексте данного документа «неделя» соответствует 7 дням ± 2 дня.

В контексте данного документа термин «введение» означает способ введения субъекту дозировки соединения (например, антитела к HER2 или дополнительного антитела к HER2) или композиции (например, фармацевтической композиции, например, фармацевтической композиции, содержащей антитело к HER2). Соединения и/или композиции, используемые в способах, описанных в данном документе, можно вводить, например, внутривенно (например, путем внутривенной инфузии), подкожно, внутримышечно, интрадермально, чрескожно, внутриартериально, внутрибрюшинно, внутриочагово, внутричерепно, внутрисуставно, внутрипростатично, интраплеврально, интратрахеально, интраназально, интравитреально, интравагинально, интраректально, местно, внутриопухолево, перитонеально, субконъюнктивально, интравезикулярно, мукозально, внутриперикардиально, интраумбиликально, интраокулярно, перорально, местно, локально, путем ингаляции, путем инъекции, путем инфузии, путем непрерывной инфузии, путем локализованной перфузии, непосредственно омывающей целевые клетки, посредством катетера, посредством лаважа, в кремах или в липидных композициях. Способ введения может варьироваться в зависимости от различных факторов (например, вводимых соединения или композиции, степени тяжести патологического состояния, заболевания или нарушения, подлежащего лечению).

Термин «вкладыш в упаковку» используется для обозначения инструкций, обычно включаемых в коммерческие упаковки терапевтических продуктов, которые содержат информацию о показаниях, применении, дозировке, введении, комбинированной терапии, противопоказаниях и/или предостережениях относительно применения таких терапевтических продуктов.

II. ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ СПОСОБЫ

В настоящем изобретении предложены усовершенствованные способы введения антител к HER2 (например, схема лечения, включающая введение HER2 TDB (например, BTRC4017A) и дополнительного антитела к HER2 (например, антитела к HER2, которое не представляет собой TDB, такого как трастузумаб)). Такие способы могут обеспечить повышенную специфичность к HER2-положительным опухолям, тем самым снижая нежелательные эффекты, такие как целевые/внеопухолевые эффекты. Данное изобретение основано, по меньшей мере частично, на открытии, что повышение терапевтического индекса можно обеспечить путем совместного лечения субъекта антителом к HER2 (например, двухвалентным моноспецифическим антителом к HER2, таким как трастузумаб) и HER2 TDB (например, BTRC4017), которое связывается с тем же самым доменом HER2, что и антитело к HER2 (например, домен IV HER2). Повышение терапевтического индекса может быть связано со снижением вероятности испытания целевого/внеопухолевого эффекта по сравнению с лечением HER2 TDB в отсутствие антитела к HER2. В дополнительном или альтернативном варианте повышение терапевтического индекса может быть связано со снижением вероятности испытания иммуногенного побочного эффекта по сравнению с лечением вторым антителом к HER2 в отсутствие первого антитела к HER2.

Целевые/внеопухолевые эффекты могут возникать в результате связывания HER2 TDB с HER2, экспрессируемым неопухолевой клеткой (например, здоровой клеткой). Целевой/внеопухолевый эффект может представлять собой симптом легочной токсичности, такой как интерстициальное заболевание легких, острый респираторный дистресс-синдром, одышка, кашель, утомляемость и наличие легочных инфильтратов. В дополнительном или альтернативном варианте целевые/внеопухолевые эффекты могут быть связаны с дисфункцией здоровых клеток или тканей, имеющих низкую или умеренную экспрессию HER2, таких как эпителиальные клетки в желудочно-кишечном тракте, дыхательных путях, половых путях, мочевыводящих путях, коже, молочной железе и плаценте. Такие целевые/внеопухолевые эффекты, которые можно уменьшать или ингибировать описанными в данном документе способами, включают, например, повышенные уровни печеночных ферментов, сухость во рту, сухость глаз, мукозит, эзофагит или симптомы со стороны мочевыделительной системы.

При определении терапевтического индекса дозу, достаточную для достижения желаемого терапевтического эффекта, можно определить в соответствии с объективным ответом (ОО) субъекта на схему лечения. В некоторых вариантах осуществления ОО представляет собой полный ответ (ПО) или частичный ответ (ЧО) в соответствии с RECIST v.1.1. В дополнительном или альтернативном варианте дозу, достаточную для достижения желаемого терапевтического эффекта, можно определить в соответствии с длительностью ответа (ДО) субъекта. В некоторых вариантах осуществления ДО представляет собой время от первого появления задокументированного объективного ответа до времени первого задокументированного прогрессирования заболевания или смерти по любой причине в зависимости от того, что наступает раньше, в соответствии с RECIST v.1.1. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления способ по настоящему изобретению позволяет увеличить ДО и/или продлить выживаемость субъекта (например, общую выживаемость (ОВ) или выживаемость без прогрессирования (ВВП)).

В некоторых вариантах осуществления повышение терапевтического индекса в результате применения схемы лечения по настоящему изобретению связано со снижением вероятности испытания иммуногенного побочного эффекта по сравнению с лечением (например, повышения уровня антител к лекарственному средству, связанной с инфузией/введением реакции (ARR), дисфункции сердца, легочной реакции и синдрома высвобождения цитокинов).

При определении терапевтического индекса дозу, при которой терапевтический агент вызывает токсический эффект, можно определить в соответствии с наличием дозолимитирующей токсичности (ДЛТ), которая оценивается в соответствии с NCI СТСАЕ v5.0 (за исключением синдрома высвобождения цитокинов (СВЦ)). В некоторых вариантах осуществления ДЛТ представляет собой любое из следующих нежелательных явлений, возникающих во время периода оценки (например, первого цикла дозирования):

(а) ≥ 15% снижение относительно исходного уровня фракции выброса левого желудочка (ФВЛЖ) или ≥ 10% снижение до менее чем 50% ФВЛЖ;

(б) нарушение функции печени, например, определяемое по следующим показателям:

(i) ACT или АЛТ>3 × верхней границы нормы (ВГН) и общий билирубин > 2 × ВГН, за исключением: Если вышеуказанное происходит в контексте СВЦ степени ≤ 2 (по определению с помощью критериев, установленных в Lee et al. Blood 2014, 124:188-195), исправляется до степени ≤ 1 в течение < 3 дней, и ни один из индивидуальных лабораторных показателей не имеет степень > 3, это не считается ДЛТ;

(ii) любое повышение ACT или АЛТ до степени 3 за исключением: Если вышеуказанное происходит в контексте СВЦ степени ≤ 2 (по определению с помощью критериев, установленных в Lee et al. Blood 2014, 124:188-195) или исправляется до степени ≤ 1 в течение < 3 дней, это не считается ДЛТ. У пациентов с метастатическими поражениями печени временное повышение билирубина, трансаминаз и/или гамма-глутамилтрансферазы (ГГТ) до степени 3, которое начинается после инфузии и разрешается до степени ≤ 2 или исходного уровня в течение 1 недели, не считается ДЛТ;

(в) лимфопения степени ≥ 3, длящаяся > 7 дней;

(г) нейтропения степени ≥ 4 (АЧН < 500 клеток/мкл), длящаяся > 7 дней;

(д) фебрильная нейтропения степени ≥ 3;

(е) анемия степени ≥ 4;

(ж) тромбоцитопения степени ≥ 4 или тромбоцитопения степени 3, связанная с клинически значимым кровотечением; и/или

(и) негематологическое, непеченочное нежелательное явление степени ≥ 3, не связанное с другой четко идентифицируемой причиной, за исключением: (i) тошноты или рвоты степени 3, которые разрешаются до степени ≤ 2 с помощью стандартной терапии за ≤ 3 дня; (ii) диарея, колит или энтерит степени 3, которые разрешаются до степени ≤ 1 в течение 7 дней с помощью соответствующего лечения; (iii) утомляемость степени 3, которая разрешается до степени ≤ 2 за ≤ 7 дней; (iv) лихорадка степени 3 (определяемая по температуре > 40°С в течение ≤ 24 часов); (v) аномальные лабораторные показатели степени 3, которые являются асимптоматическими и которые исследователь не считает клинически значимыми; (vi) сыпь степени 3, которая разрешается до степени ≤ 2 за ≤ 7 дней с помощью терапии, эквивалентной дозе преднизона 10 мг/день или менее; (vii) артралгия степени 3, которую можно надлежащим образом контролировать с помощью поддерживающей терапии или которая разрешается до степени ≤ 2 в течение 7 дней; (viii) усугубление клинических проявлений опухоли степени 3, определяемое как локальные боль, раздражение или сыпь, локализованные в участках известного или предполагаемого нахождения опухоли, которое начинается в течение 24 часов после инфузии и разрешается до степени ≤ 2 за ≤ 7 дней; (ix) гипоксия степени 3, которая начинается в течение 24 часов после инфузии и разрешается до степени ≤ 2 в течение 2 дней после начала события; или (х) у пациентов с метастатическими поражениями легких, одышка степени 3 вследствие локализованного отека легких, которая начинается в течение 24 часов после инфузии и разрешается до степени 1 или исходного уровня в течение 2 дней после начала события, и бронхоспазм, который разрешается в течение 24 часов.

СВЦ оценивается в соответствии с Модифицированной системой оценки синдрома высвобождения цитокинов, описанной в Russell et al. N. Engl. J. Med. 2008, 358:877-887 и Lee et al. Blood 2014, 124:188-195, а данные по нему обобщены в таблицах 1 и 2 ниже.

^а Сосудосуживающее средство в низкой дозе: одно сосудосуживающее средство в дозах меньших, чем приведенные в таблице 2 ниже.

^б Сосудосуживающее средство в высокой дозе: по определению в таблице 2 ниже.

В некоторых случаях лечение с использованием описанных в данном документе способов путем введения HER2 TDB (например, комбинации HER2 TDB с дополнительным антителом к HER2 и/или HER2 TDB в контексте схемы дозирования с фракционированием и увеличением дозы) приводит к снижению (например, на 20% или более, 25% или более, 30% или более, 35% или более, 40% или более, 45% или более, 50% или более, 55% или более, 60% или более, 65% или более, 70% или более, 75% или более, 80% или более, 85% или более, 90% или более, 95% или более, 96% или более, 97% или более, 98% или более или 99% или более) или полному ингибированию (100% снижению) нежелательных явлений, таких как любое одно или более из вышеуказанных явлений, после схемы лечения по изобретению по сравнению с контрольной схемой лечения (например, монотерапией HER2 TDB (в отсутствие дополнительного антитела к HER2) или лечением HER2 TDB по схеме дозирования без фракционирования).

В некоторых случаях повышение терапевтического индекса в результате применения способа по изобретению составляет по меньшей мере 1% повышение по сравнению с контрольной группой (например, от 1% до 1000% (10-кратное) повышение, от 2% до 5000% повышение, от 3% до 4000% повышение, от 4% до 3000% повышение, от 5% до 2000% повышение, от 10% до 1000% повышение, от 20% до 500% повышение или от 50% до 100% повышение, например, от 1% до 5% повышение, от 5% до 10% повышение, от 10% до 20% повышение, от 20% до 30% повышение, от 30% до 40% повышение, от 40% до 50% повышение, от 50% до 60% повышение, от 60% до 70% повышение, от 70% до 80% повышение, от 80% до 90% повышение, от 90% до 100% повышение, от 100% до 150% повышение, от 150% до 200% повышение, от 200% до 300% повышение, от 300% до 400% повышение, от 400% до 500% повышение или от 500% до 1000% повышение).

HER2-положительные виды рака

Описанные в данном документе способы можно использовать для лечения HER2-положительных видов рака. В некоторых случаях HER2-положительный рак представляет собой HER2-положительную солидную опухоль. В дополнительном или альтернативном варианте HER2-положительный рак может представлять собой местно-распространенный или метастатический HER2-положительный рак. В некоторых случаях HER2-положительный рак представляет собой HER2-положительный рак молочной железы или HER2-положительный рак желудка. В некоторых вариантах осуществления HER2-положительный рак выбран из группы, состоящей из HER2-положительного рака пищеводно-желудочного перехода, HER2-положительного колоректального рака, HER2-положительного рака легкого (например, HER2-положительной немелкоклеточной карциномы легкого), HER2-положительного рака поджелудочной железы, HER2-положительного колоректального рака, HER2-положительного рака мочевого пузыря, HER2-положительного рака протока слюнной железы, HER2-положительного рака яичника (например, HER2-положительного эпителиального рака яичника) или HER2-положительного рака эндометрия.

Совместное лечение HER2 TDB и дополнительным антителом к HER2

Описанные в данном документе способы включают введение субъекту, имеющему рак (например, HER2-положительный рак), HER2 TDB; например, TDB, которое связывается с HER2 и CD3, такого как BTRC4017, и антитела к HER2 (например, дополнительного антитела, которое связывается с HER2, например, антитела к HER2, которое не представляет собой HER2 TDB, такого как моноспецифическое антитело к HER2 (например, моноспецифическое, двухвалентное антитело к HER2)). В некоторых вариантах осуществления HER2 TDB и антитело к HER2 оба связываются с доменом IV HER2. Например, HER2 TDB и антитело к HER2 могут конкурентно связываться с доменом IV HER2. В некоторых вариантах осуществления HER2 TDB и антитело к HER2 связывают HER2 в одном эпитопе или в перекрывающемся эпитопе (например, одном эпитопе или перекрывающемся эпитопе HER2). В некоторых вариантах осуществления HER2 TDB имеет более низкую аффинность связывания HER2, чем дополнительное антитело к HER2, что может быть обусловлено, по меньшей мере частично, более низкой HER2-валентностью HER2 TDB по сравнению с дополнительным антителом (например, когда HER2 TDB одновалентно связывается с HER2, а дополнительное антитело к HER2 двухвалентно связывается с HER2). В дополнительном или альтернативном варианте HER2-связывающий домен HER2 TDB может иметь приблизительно такую же аффинность связывания HER2, что и дополнительное антитело к HER2 (например, HER2 TDB и дополнительное антитело к HER2 могут иметь одну, две, три, четыре, пять или все шесть одинаковых CDR; или одну или обе вариабельные области). В некоторых вариантах осуществления HER2 TDB имеет V_H и/или V_L, которые имеют по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности с V_H и/или V_L дополнительного антитела к HER2. В некоторых вариантах осуществления HER2 TDB и антитело к HER2 имеют одинаковый HER2-связывающий домен (например, HER2-связывающий домен 4D5 (например, hu4D5), например, как в случае, когда HER2 TDB представляет собой BTRC4017A, а антитело к HER2 представляет собой трастузумаб или его Fc-модифицированный вариант.

В некоторых случаях любые из описанных в данном документе способов могут включать введение HER2 TDB, которое содержит плечо против HER2, имеющее HER2-связывающий домен, содержащий по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть определяющих комплементарность областей (CDR), выбранных из (a) CDR-H1, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 1); (б) CDR-H2, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 2); (в) CDR-H3, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 3); (г) CDR-L1, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 4); (д) CDR-L2, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 5); и (е) CDR-L3, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 6). В некоторых случаях HER2 TDB содержит плечо против HER2, содержащее HER2-связывающий домен, содержащий (а) вариабельный домен тяжелой цепи (V_H), содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности (например, по меньшей мере 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности) с SEQ ID NO: 7 или идентичную ей; (б) вариабельный домен легкой цепи (V_L), содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности (например, по меньшей мере 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности) с SEQ ID NO: 8 или идентичную ей; или (в) VH-домен согласно (а) и VL-домен согласно (б). Соответственно, в некоторых случаях HER2-связывающий домен содержит V_H, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и V_L, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. Типовой HER2-связывающий домен, имеющий последовательности CDR и вариабельных областей, приведенные выше, принадлежит hu4D5, описанному, например, в WO 2015/095392, которая в полном объеме включена в данный документ посредством ссылки.

В некоторых случаях любые из описанных в данном документе способов могут включать введение HER2 TDB, которое содержит плечо против CD3, имеющее CD3-связывающий домен, содержащий по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) CDR-H1, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 9); (б) CDR-H2, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 10); (в) CDR-H3, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 11); (г) CDR-L1, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 12); (д) CDR-L2, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 13); и (е) CDR-L3, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 14). В некоторых случаях биспецифическое антитело содержит плечо против CD3, содержащее CD3-связывающий домен, содержащий (a) V_H, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности (например, по меньшей мере 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности) с SEQ ID NO: 15 или идентичную ей; (б) домен V_L, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности (например, по меньшей мере 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности) с SEQ ID NO: 16 или идентичную ей; или (в) VH-домен согласно (а) и VL-домен согласно (б). Соответственно, в некоторых случаях CD3-связывающий домен содержит домен V_H, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15, и домен V_L, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16. Типовой CD3-связывающий домен, имеющий последовательности CDR и вариабельных областей, приведенные выше, принадлежит 40G5c, описанному, например, в WO 2015/095392, которая в полном объеме включена в данный документ посредством ссылки.

В некоторых случаях любые из описанных в данном документе способов могут включать введение HER2 TDB, которое содержит (i) плечо против HER2, имеющее HER2-связывающий домен, содержащий по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть определяющих комплементарность областей (CDR), выбранных из (a) CDR-H1, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 1); (б) CDR-H2, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 2); (в) CDR-H3, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 3); (г) CDR-L1, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 4); (д) CDR-L2, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 5); и (е) CDR-L3, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 6); и (ii) плечо против CD3, имеющее CD3-связывающий домен, содержащий по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) CDR-H1, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 9); (б) CDR-H2, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 10); (в) CDR-H3, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 11); (г) CDR-L1, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 12); (д) CDR-L2, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 13); и (е) CDR-L3, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 14). В некоторых случаях HER2 TDB содержит (i) плечо против HER2, содержащее HER2-связывающий домен, содержащий (а) вариабельный домен тяжелой цепи (V_H), содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности (например, по меньшей мере 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности) с SEQ ID NO: 7 или идентичную ей; (б) вариабельный домен легкой цепи (V_L), содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности (например, по меньшей мере 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности) с SEQ ID NO: 8 или идентичную ей; или (в) VH-домен согласно (а) и VL-домен согласно (б); и (ii) плечо против CD3, содержащее CD3-связывающий домен, содержащий (a) V_H, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности (например, по меньшей мере 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности) с SEQ ID NO: 15 или идентичную ей; (б) домен V_L, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности (например, по меньшей мере 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности) с SEQ ID NO: 16 или идентичную ей; или (в) VH-домен согласно (а) и VL-домен согласно (б). Соответственно, в некоторых случаях HER2-связывающий домен содержит V_H, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и V_L, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, а CD3-связывающий домен содержит домен V_H, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15, и домен V_L, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16. Типовым таким HER2 TDB является BTRC4017A, полноразмерное антитело по типу «выступ во впадину», которое имеет HER2-связывающий домен hu4D5 в плече против HER2, спаренным с плечом против CD3, имеющим CD3-связывающий домен 40G5c.

В некоторых случаях любые из описанных в данном документе способов могут включать введение HER2 TDB, как описано в WO 2015/063339. В некоторых случаях любые из описанных в данном документе способов могут включать введение HER2 TDB GBR1302.

В некоторых случаях любые из описанных в данном документе способов могут включать введение HER2 TDB, имеющего одновалентное плечо и двухвалентное плечо. Одновалентное плечо может содержать CD3-связывающий домен, а двухвалентное плечо может содержать два HER2-связывающий домена, и каждое плечо может иметь Fc-субъединицу, которая связывается с другой Fc-субъединицей (например, за счет конфигурации типа «выступ во впадину») с образованием Fc-домена. В этом варианте осуществления С-конец CD3-связывающего домена слит с N-концом Fc-субъединицы, С-конец одного HER2 связывающего домена слит с N-концом второго HER2-связывающего домена, а С-конец второго HER2-связывающего домена слит с N-концом другой Fc-субъединицы. В некоторых случаях HER2 TDB, имеющее одновалентное плечо и двухвалентное плечо, связывает домен IV HER2. Например, HER2-связывающие домены могут иметь последовательность hu4D5 (например, трастузумаб) и/или CD3-связывающий домен может иметь последовательность 40G5c. Примеры таких двухвалентных HER2 TDB описаны в международной патентной заявке № PCT/US2019/17251.

Антитела к HER2 для совместного лечения с HER2 TDB включают моноспецифические антитела к HER2 и мультиспецифические (например, биспецифические) антитела к HER2 (например, когда биспецифическое антитело к HER2 не представляет собой зависимое от Т-клеток биспецифическое антитело). В некоторых вариантах осуществления антитело к HER2 является многовалентным (например, двухвалентным) в отношении HER2. В дополнительном или альтернативном варианте антитело к HER2 для применения в описанных в данном документе вариантах совместного лечения включает полноразмерные антитела к HER2 и их HER2-связывающие фрагменты. В случаях, включающих полноразмерные антитела к HER2, Fc-область может содержать одну или более модификаций, например, для снижения эффекторных функций. Типовые Fc-модификации дополнительно обсуждаются в разделе 5.с ниже.

В некоторых случаях любые из описанных в данном документе способов могут включать введение антитела к HER2 (например, в дополнение к HER2 TDB), которое содержит HER2-связывающий домен, содержащий по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть определяющих комплементарность областей (CDR), выбранных из (a) CDR-H1, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 1); (б) CDR-H2, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 2); (в) CDR-H3, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 3); (г) CDR-L1, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 4); (д) CDR-L2, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 5); и (е) CDR-L3, содержащей аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 6). В некоторых случаях антитело к HER2 содержит HER2-связывающий домен, содержащий (а) вариабельный домен тяжелой цепи (V_H), содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности (например, по меньшей мере 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности) с SEQ ID NO: 7 или идентичную ей; (б) вариабельный домен легкой цепи (V_L), содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности (например, по меньшей мере 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности) с SEQ ID NO: 8 или идентичную ей; или (в) VH-домен согласно (а) и VL-домен согласно (б). Соответственно, в некоторых случаях HER2-связывающий домен содержит V_H, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и V_L, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. Типовой HER2-связывающий домен, имеющий последовательности CDR и вариабельных областей, приведенные выше, принадлежит hu4D5. В некоторых вариантах осуществления антитело к HER2 представляет собой трастузумаб. В других вариантах осуществления антитело к HER2 представляет собой Fc-модифицированный вариант трастузумаба (например, трастузумаб-LALAPG).

HER2 TDB и/или дополнительное антитело к HER2 можно получать, используя рекомбинантные методы и композиции, например, как описано в патенте США №4816567, который в полном объеме включен в данный документ посредством ссылки.

В некоторых случаях HER2 TDB и/или дополнительное антитело к HER2 в соответствии с любым из описанных выше вариантов осуществления могут иметь любые характеристики, отдельно или в комбинации, описанные в разделах 1-5 ниже.

1. Аффинность антитела

В определенных вариантах осуществления HER2 TDB и/или дополнительное антитело к HER2 по данному документу имеют константу диссоциации (K_D) ≤ 1 мкМ, ≤ 100 нМ, ≤ 10 нМ, ≤ 1 нМ, ≤ 0,1 нМ, ≤ 0,01 нМ или ≤ 0,001 нМ (например, 10^-8 М или менее, например, от 10^-8 М до 10^-13 М, например, от 10^-9 М до 10^-13 М) в отношении HER2-связывающего домена, CD3-связывающего домена или обоих.

В одном варианте осуществления K_D измеряют с помощью анализа связывания радиоактивно меченного антигена (РИА). В одном варианте осуществления РИА проводят с Fab-версией представляющего интерес антитела и его антигеном. Например, аффинность связывания Fab в отношении антигена в растворе измеряют путем уравновешивания Fab минимальной концентрацией (¹²⁵I)-меченого антигена в присутствии титровального ряда немеченного антигена с последующим захватом связанного антигена на планшете, покрытом антителом к Fab (смотрите, например, Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)). Для определения условий анализа многолуночные планшеты MICROTITER^® (Thermo Scientific) покрывают на ночь 5 мкг/мл захватывающего антитела к Fab (Cappel Labs) в 50 мМ растворе карбоната натрия (рН 9,6), а затем блокируют 2% (масс./об.) бычьим сывороточным альбумином в ФСБ в течение двух пяти часов при комнатной температуре (приблизительно 23°С). В неадсорбентном планшете (Nunc #269620) смешивают 100 пМ или 26 пМ [¹²⁵I]-антигена с серийными разведениями Fab, представляющего интерес (например, в соответствии с оценкой антитела против VEGF, Fab-12, в Presta et al., Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)). Затем представляющий интерес Fab инкубируют в течение ночи; при этом инкубацию можно продолжать в течение более длительного периода (например, около 65 часов), чтобы гарантировать достижение равновесия. После этого смеси переносят в планшет для захвата для инкубации при комнатной температуре (например, в течение одного часа). Затем раствор удаляют и восемь раз промывают планшет 0,1% раствором полисорбата 20 (Твин-20^®) в ФСБ. После того, как планшеты высохнут, добавляют 150 мкл/лунку сцинтиллятора (MICROSCINT-20™; Packard) и проводят подсчет планшетов на гамма-счетчике TOPCOUNT™ (Packard) в течение десяти минут. Концентрации каждого Fab, которые обеспечивают связывание, меньшее или равное 20% от максимального связывания, выбирают для применения в конкурентных анализах связывания.

В соответствии с другим вариантом осуществления K_D измеряют, используя анализ методом поверхностного плазмонного резонанса BIACORE^®. Например, анализ с применением BIACORE^®-2000 или BIACORE^®-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ) проводят при 25°C с чипами СМ5 с иммобилизованным антигеном при ~10 единицах ответа (ЕО). В одном варианте осуществления биосенсорные чипы на основе карбоксиметилированного декстрана (СМ5, BIACORE, Inc.) активируют N-этил-N'-(3-диметиламинопропил)-карбодиимида гидрохлоридом (EDC) и N-гидроксисукцинимидом (NHS) в соответствии с инструкциями поставщика. Антиген разводят в 10 мМ ацетате натрия, рН 4,8, до 5 мкг/мл (~0,2 мкМ) перед введением при скорости потока 5 мкл/минута до достижения приблизительно 10 единиц ответа (ЕО) связанного белка. После введения антигена вводят 1 М этаноламин, чтобы блокировать не вступившие в реакцию группы. Для измерений кинетики двукратные серийные разведения Fab (от 0,78 нМ до 500 нМ) вводят в ФСБ с содержащим 0,05% полисорбат 20 (Твин-20™) поверхностно-активным веществом (ФСБТ) при 25°С при скорости потока приблизительно 25 мкл/мин. Скорости ассоциации (k_on) и скорости диссоциации (k_off) рассчитывают, используя простую один-к-одному модель связывания Лэнгмюра (оценочное программное обеспечение BIACORE^®, версия 3.2), путем одновременной аппроксимации сенсограмм ассоциации и диссоциации. Равновесную константу диссоциации (K_D) рассчитывают как отношение k_off/k_on. Смотрите, например, Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999). Если скорость ассоциации превышает 10⁶ M¹c¹ по данным вышеописанного анализа поверхностного плазмонного резонанса, то скорость ассоциации можно определить, используя метод затухания флуоресценции, в котором измеряют повышение или снижение интенсивности испускания флуоресценции (возбуждение = 295 нм; испускание = 340 нм, 16 нм полоса пропускания) при 25°С для 20 нМ антитела (Fab-формы) к антигену в ФСБ, рН 7,2, в присутствии возрастающих концентраций антигена, с помощью спектрометра, такого как спектрофотометр с остановкой потока (Aviv Instruments) или спектрофотометр серии 8000 SLM-AMINCO™ (ThermoSpectronic) с кюветой с перемешиванием.

2. Фрагменты антител

В определенных вариантах осуществления HER2 TDB и/или дополнительное антитело к HER2 представляют собой фрагмент антитела, например, фрагмент антитела HER2 TDB связывается с HER2 и CD3. Фрагменты антител включают, но не ограничиваются этим, фрагменты Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')₂, Fv и scFv и другие фрагменты, описанные ниже. Обзор некоторых фрагментов антител смотрите в Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003). Обзор фрагментов scFv смотрите, например, в The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994); также смотрите WO 93/16185; и патенты США №№5571894 и 5587458. Обсуждение фрагментов Fab и F(ab')₂, содержащих остатки эпитопа связывания рецептора реутилизации и имеющих увеличенное время полужизни in vivo, смотрите в патенте США №5869046.

Диатела представляют собой фрагменты антител с двумя антигенсвязывающими сайтами, которые могут быть двухвалентными или биспецифическими. Смотрите, например, ЕР 404097; WO 1993/01161; Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003); и Hollinger et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993). Триатела и тетратела также описаны в Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003).

Однодоменные антитела представляют собой фрагменты антител, содержащие весь или часть вариабельного домена тяжелой цепи или весь или часть вариабельного домена легкой цепи антитела. В определенных вариантах осуществления однодоменное антитело представляет собой человеческое однодоменное антитело (Domantis, Inc., Waltham, MA; смотрите, например, патент США №6248516 В1).

Фрагменты антител можно получать различными способами, включая, но не ограничиваясь этим, протеолитическое расщепление интактного антитела, а также выработку рекомбинантными клетками-хозяевами (например, Е. coli или фага), как описано в данном документе.

3. Химерные и гуманизированные антитела

В определенных вариантах осуществления HER2 TDB и/или дополнительное антитело к HER2 для применения в соответствии с описанными в данном документе способами представляют собой химерное антитело. Некоторые химерные антитела описаны, например, в патенте США №4816567; и Morrison et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)). В одном примере химерное антитело содержит отличную от человеческой вариабельную область (например, вариабельную область, полученную из антитела мыши, крысы, хомяка, кролика или нечеловекообразного примата, такого как обезьяна) и человеческую константную область. В дополнительном примере химерное антитело представляет собой антитело с «переключенным классом», класс или подкласс которого был изменен по сравнению с родительским антителом. Химерные антитела включают их антигенсвязывающие фрагменты.

В определенных вариантах осуществления химерное антитело представляет собой гуманизированное антитело. Как правило, отличное от человеческого антитело гуманизируют в целях снижения иммуногенности для человека, сохраняя при этом специфичность и аффинность родительского нечеловеческого антитела. Как правило, гуманизированное антитело содержит один или более вариабельных доменов, в которых HVR, например, CDR (или их части) получены из нечеловеческого антитела, a FR (или их части) получены из последовательностей человеческого антитела. Гуманизированное антитело, необязательно, также содержит по меньшей мере часть человеческой константной области. В некоторых вариантах осуществления некоторые остатки FR в гуманизированном антителе замещены соответствующими остатками нечеловеческого антитела (например, антитела, из которого получены остатки HVR), например, с целью восстановления или улучшения специфичности или аффинности антитела.

Гуманизированные антитела и способы их получения рассмотрены, например, в Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008), и дополнительно описаны, например, в Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989); патентах США №№5821337, 7527791, 6982321 и 7087409; Kashmiri et al, Methods 36:25-34 (2005) (где описано прививание определяющей специфичность области (SDR)); Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) (где описано «изменение поверхности»); Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) (где описана «перетасовка FR»); и Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) и Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) (где описан подход «направленного отбора» при перетасовке FR).

Человеческие каркасные области, которые можно использовать для гуманизации, включают, но не ограничиваются этим: каркасные области, выбранные методом «наилучшего соответствия» (смотрите, например, Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)); каркасные области, полученные из консенсусной последовательности человеческих антител конкретной подгруппы вариабельных областей легкой или тяжелой цепи (смотрите, например, Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); и Presta et al. J. Immunol, 151:2623 (1993)); человеческие зрелые (соматически мутированные) каркасные области или каркасные области зародышевой линии человека (смотрите, например, Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)); и каркасные области, полученные при скрининге библиотек FR (смотрите, например, Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) и Rosok et al.,J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)).

4. Конструирование биспецифических антител no типу «выступ во впадину»

HER2 TDB и/или дополнительное антитело к HER2 можно получать в виде полноразмерного антитела или фрагмента антитела. Технологии получения биспецифических антител включают, но не ограничиваются этим, рекомбинантную коэкспрессию двух пар тяжелая цепь легкая цепь иммуноглобулина, имеющих разную специфичность (смотрите Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)), WO 93/08829 и Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)), и конструирование по типу «выступ во впадину» (смотрите, например, патент США №5731168). Конструирование биспецифических антител по типу «выступ во впадину» можно использовать для получения первого плеча, содержащего выступ, и второго плеча, содержащего впадину, в которой возможно связывание выступа первого плеча. В одном варианте осуществления выступ TDB может находиться в плече против CD3. В альтернативном варианте выступ TDB по изобретению может находиться в плече против HER2. В одном варианте осуществления впадина TDB по изобретению может находиться в плече против CD3. В альтернативном варианте впадина TDB по изобретению может находиться в плече против HER2. В некоторых случаях HER2 TDB и/или дополнительное антитело к HER2, полученные по технологии «выступ во впадину», могут содержать один или более константных доменов тяжелой цепи, причем один или более константных доменов тяжелой цепи выбраны из первого домена СН1 (СН1₁) первого домена СН2 (СН2₁), первого домена СН3 (СН3₁), второго домена СН1 (СН1₂), второго домена СН2 (CH2₂) и второго домена СН3 (СН3₂). В некоторых случаях по меньшей мере один из одного или более константных доменов тяжелой цепи спарен с константным доменом другой тяжелой цепи. В некоторых случаях каждый из доменов СН3₁ и СН3₂ содержит выступ или впадину, и при этом выступ или впадина в домене СН3₁ может размещаться во впадине или выступе, соответственно, в домене СН3₂. В некоторых случаях каждый домены СН3₁ и СН3₂ стыкуются на поверхности контакта между выступом и впадиной. В некоторых случаях каждый из доменов СН2₁ и СН2₂ содержит выступ или впадину, и при этом выступ или впадина в домене СН2₁ может размещаться во впадине или выступе, соответственно, в домене СН2₂. В некоторых случаях каждый домены СН2₁ и СН2₂ стыкуются на поверхности контакта между указанными выступом и впадиной.

Биспецифические антитела (например, TDB) также можно конструировать, используя технологию иммуноглобулинового кроссовера (также известную как обмен Fab-доменов или формат CrossMab) технологии (смотрите, например, WO 2009/080253; Schaefer et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 108:11187-11192 (2011)). Биспецифические антитела также можно получать путем конструирования с использованием эффекта электростатического взаимодействия для получения Fc-гетеродимерных молекул антител (WO 2009/089004 А1); перекрестного сшивания двух или более антител или фрагментов (смотрите, например, патент США №4676980 и Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)); использования лейциновых молний для получения биспецифических антител (смотрите, например, Kostelny et al., J. Immunol., 148(5): 1547-1553 (1992)); использования технологии «диател» для получения фрагментов биспецифических антител (смотрите, например, Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)); и использования димеров одноцепочечных Fv (sFv) (смотрите, например, Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)); и получения триспецифических антител, как описано, например, например, в Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991).

HER2 TDB и/или дополнительное антитело к HER2, или фрагменты этих антител могут также включать «FAb двойного действия» или «DAF», содержащий антигенсвязывающий сайт, который связывается с мишенью, отличной от HER2 (например, CD3 в контексте HER2 TDB), а также HER2 (смотрите, например, публ. США №2008/0069820, которая в полном объеме включена в данный документ посредством ссылки).

5. Варианты

В некоторых случаях предусмотрены варианты описанных выше HER2 TDB и/или дополнительного антитела к HER2 по аминокислотной последовательности. Например, может быть желательно улучшить аффинность связывания и/или биологические свойства одного или обоих из HER2 TDB и/или дополнительного антитела к HER2. Варианты по аминокислотной последовательности антитела можно получать путем внесения соответствующих модификаций в нуклеотидную последовательность, кодирующую антитело, или с помощью пептидного синтеза. Такие модификации включают, например, делеции, и/или вставки, и/или замены остатков в аминокислотных последовательностях антитела. Для получения конечной конструкции можно проводить любые комбинации делеций, вставок и замен, при условии, что конечная конструкция обладает необходимыми характеристиками, например, антигенсвязывающими.

а. Варианты с заменами, вставками и делециями

В определенных вариантах осуществления предложены варианты антитела, содержащие одну или более аминокислотных замен. Сайты, представляющие интерес для заместительного мутагенеза, включают HVR и FR. Консервативные замены приведены в таблице 3 под заголовком «предпочтительные замены». Более существенные изменения приведены в таблице 3 под заголовком «типовые замены» и дополнительно описаны ниже со ссылкой на классы аминокислотных боковых цепей. Аминокислотные замены можно вносить в представляющее интерес антитело и проводить скрининг полученных продуктов в отношении необходимой активности, например, сохранения/улучшения связывания антигена, снижения иммуногенности или улучшения АЗКЦ или КЗЦ.

Аминокислоты можно разделить на группы в соответствии с общими свойствами боковых цепей:

(1) гидрофобные: норлейцин, Met, Ala, Val, Leu, Ile;

(2) нейтральные гидрофильные: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;

(3) кислые: Asp, Glu;

(4) основные: His, Lys, Arg;

(5) остатки, влияющие на ориентацию цепи: Gly, Pro;

(6) ароматические: Trp, Tyr, Phe.

Неконсервативные замены подразумевают замену представителя одного из этих классов представителем другого класса.

Один тип варианта замены включает замену одного или более остатков гипервариабельной области родительского антитела (например, гуманизированного или человеческого антитела). В общем случае полученный вариант(ы), отобранный для дополнительного исследования, будет иметь модификации (например, улучшения) определенных биологических свойств (например, повышенную аффинность, сниженную иммуногенность) по сравнению с родительским антителом и/или в значительной степени будут сохранять определенные биологические свойства родительского антитела. Типовой заместительный вариант представляет собой антитело с созревшей аффинностью, которое удобно получать, например, используя методики созревания аффинности на основе фагового дисплея, такие как описаны в данном документе. Вкратце, один или более аминокислотных остатков CDR подвергают мутации, а вариантные антитела отображают на поверхности фага и проводят их скрининг в отношении конкретного вида биологической активности (например, аффинности связывания).

Изменения (например, замены) можно осуществлять в CVR, например, чтобы улучшить аффинность антитела. Такие изменения можно проводить в «горячих точках» CDR, т.е. в остатках, кодируемых кодонами, которые с высокой частотой подвергаются мутациям во время процесса соматического созревания (смотрите, например, Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)), и/или в остатках, которые контактируют с антигеном, после чего полученный вариант VH или VL исследуют в отношении аффинности связывания. Созревание аффинности путем конструирования и повторного отбора из вторичных библиотек было описано, например, в Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)). В некоторых вариантах осуществления созревания аффинности в вариабельные гены, выбранные для созревания, вносят разнообразие любым из ряда способов (например, ПЦР с внесением ошибок, перетасовки цепей или олигонуклеотид-направленного мутагенеза). Затем создают вторичную библиотеку. После этого библиотеку подвергают скринингу для идентификации любых вариантов антител с необходимой аффинностью. Другой способ внесения разнообразия включает подходы, направленные на HVR, в которых рандомизируют несколько остатков HVR (например, 4-6 остатков за раз). Остатки HVR, вовлеченные в связывание антигена, можно четко идентифицировать, например, используя аланин-сканирующий мутагенез или моделирование. В частности, мишенями часто являются CDR-H3 и CDR-L3.

В некоторых вариантах осуществления замены, вставки или делеции могут находиться в одной или более CDR при условии, что такие изменения по существу не снижают способность антитела связывать антиген. Например, в CDR можно проводить консервативные изменения (например, консервативные замены, предложенные в данном документе), которые существенно не снижают аффинность связывания. Такие изменения могут, например, находиться за пределами контактирующих с антигеном остатков в CDR. В определенных вариантах осуществления вариантных последовательностей VH и VL, представленных выше, каждая CVR остается неизменной или содержит не более одной, двух или трех аминокислотных замен.

Удобный способ идентификации остатков или областей антитела, которые могут быть мишенями для мутагенеза, называется «аланин-сканирующим мутагенезом» и описан Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085. В этом способе идентифицируют аминокислотный остаток или группу целевых аминокислотных остатков (например, заряженных аминокислотных остатков, таких как Arg, Asp, His, Lys и Glu) и заменяют нейтральной или отрицательно заряженной аминокислотой (например, аланином или полиаланином) для определения, повлияло ли это на взаимодействие антитела с антигеном. Дополнительные замены можно вносить в аминокислотные позиции, демонстрирующие функциональную чувствительность к исходным заменам. В альтернативном или дополнительном варианте используют кристаллическую структуру комплекса антиген-антитело, чтобы идентифицировать точки контакта между антителом и антигеном. Такие контактные остатки и соседние остатки можно использовать для нацеливания или удалять из кандидатов для замены. Можно проводить скрининг вариантов для определения наличия у них необходимых свойств.

Вставки аминокислотных последовательностей включают амино- и/или карбокси-концевые слияния с диапазоном длины от одного остатка до полипептидов, содержащих сто или более остатков, а также вставки внутри последовательности одного или некоторого количества аминокислотных остатков. Примеры концевых вставок включают антитело с N-концевым остатком метионила. Другие инсерционные варианты молекул антител включают слияние N- или С-конца антитела с ферментом (например, для ADEPT) или полипептидом, который увеличивает период сывороточного времени полужизни антитела.

б. Варианты по гликозилированию

В некоторых случаях способы по изобретению включают введение субъекту варианта HER2 TDB и/или дополнительного антитела к HER2 (например, в контексте схемы дозирования с фракционированием и увеличением дозы), который был модифицирован для повышения или снижения степени, в которой биспецифическое антитело гликозилировано. Добавление или удаление сайтов гликозилирования в HER2 TDB и/или дополнительное антитело к HER2 по изобретению традиционно можно осуществлять путем изменения аминокислотной последовательности так, чтобы создать или удалить один или более сайтов гликозилирования.

Если HER2 TDB и/или дополнительное антитело к HER2 содержит Fc-область, можно изменять присоединенный к ней углевод. Нативные антитела, вырабатываемые клетками млекопитающих, как правило, содержат разветвленный биантеннарный олигосахарид, который обычно присоединен посредством N-связи к Asn297 СН2-домена Fc-области. Смотрите, например, Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997). Олигосахарид может включать различные углеводы, например, маннозу, N-ацетилглюкозамин (GlcNAc), галактозу и сиаловую кислоту, а также фукозу, присоединенную к GlcNAc в «стволе» биантеннарной олигосахаридной структуры. В некоторых вариантах осуществления модификации олигосахарида в антителе по изобретению можно осуществлять с целью создания вариантов антитела с определенными улучшенными свойствами.

В некоторых случаях способы включают введение варианта HER2 TDB и/или дополнительного антитела к HER2, имеющего углеводную структуру, в которой отсутствует фукоза, присоединенная (прямо или непрямо) к Fc-области. Например, количество фукозы в таком антителе может составлять от 1% до 80%, от 1% до 65%, от 5% до 65% или от 20% до 40%. Количество фукозы определяют путем расчета среднего количества фукозы в сахарной цепи в Asn297 относительно суммарного количества всех гликоструктур, присоединенных к Asn 297 (например, сложных, гибридных структур и структур с высоким содержанием маннозы), согласно результатам измерения методом масс-спектрометрии ВП-МАЛДИ, например, как описано в WO 2008/077546. Asn297 относится к остатку аспарагина, расположенному в позиции 297 в области Fc (согласно нумерации EU остатков Fc области); при этом Asn297 также может быть расположен на около ± 3 аминокислот выше или ниже позиции 297, т.е. между позициями 294 и 300, вследствие незначительных вариаций последовательностей в антителах. Такие варианты по фукозилированию могут иметь улучшенную функцию АЗКЦ. Смотрите, например, патентные публикации США №№ US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd). Примеры публикаций, относящихся к «дефукозилированным» или «фукозодефицитным» вариантам антител, включают: США 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; США 2003/0115614; США 2002/0164328; США 2004/0093621; США 2004/0132140; США 2004/0110704; США 2004/0110282; США 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004). Примеры линий клеток, способных вырабатывать дефукозилированные антитела, включают клетки СНО Lecl3, дефицитные по фукозилированию белка (Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); заявка на патент США № US 2003/0157108 A1, Presta, L; и WO 2004/056312 A1, Adams et al., в особенности пример 11), и нокаутные линии клеток, такие как клетки СНО с нокаутом гена альфа-1,6-фукозилтрансферазы, FUT8 (смотрите, например, Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol Bioeng., 94(4):680-688 (2006); и WO 2003/085107).

Ввиду вышеописанного, в некоторых случаях способы по изобретению включают введение субъекту варианта HER2 TDB и/или дополнительного антитела к HER2 (например, в контексте схемы дозирования с фракционированием и увеличением дозы), который содержит мутацию в сайте агликозилирования. В некоторых случаях мутация в сайте агликозилирования снижает эффекторную функцию HER2 TDB и/или дополнительного антитела к HER2. В некоторых случаях мутация в сайте агликозилирования представляет собой мутацию замены. В некоторых случаях биспецифическое антитело содержит в Fc-области мутацию замены, которая снижает эффекторную функцию. В некоторых случаях мутация замены находится в аминокислотном остатке N297, L234, L235 и/или D265 (нумерация EU). В некоторых случаях мутация замены выбрана из группы, состоящей из N297G, N297A, L234A, L235A, D265A и P329G. В некоторых случаях мутация замены находится в аминокислотном остатке N297. В предпочтительном варианте осуществления мутация замены представляет собой N297A.

В других случаях в соответствии со способами по изобретению используют варианты с разделенными надвое олигосахаридами, например, в которых биантеннарный олигосахарид, присоединенный к Fc-области антитела, разделен надвое GlcNAc. Такие варианты антител могут иметь сниженный уровень фукозилирования и/или улучшенную функцию АЗКЦ. Примеры таких вариантов антител описаны, например, в WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); патенте США №6602684 (Umana et al.); и US 2005/0123546 (Umana et al). Также предложены варианты антител с по меньшей мере одним остатком галактозы в олигосахариде, присоединенном к Fc-области. Такие варианты антител могут иметь улучшенную функцию КЗЦ. Такие варианты антител описаны, например, в WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); и WO 1999/22764 (Raju, S.).

в. Варианты no Fc-области

В некоторых случаях вариант HER2 TDB и/или дополнительного антитела к HER2, который имеет одну или более аминокислотных модификаций, внесенных в Fc-область (т.е. вариант по Fc-области (смотрите, например, US 2012/0251531)) биспецифического антитела, можно вводить субъекту, имеющему HER2-положительный рак, в соответствии со способами по изобретению. Вариант по Fc-области может содержать последовательность человеческой Fc-области (например, Fc-области человеческого IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4), содержащую аминокислотную модификацию (например, замену) в одной или более аминокислотных позициях.

В некоторых случаях вариант по Fc-области обладает некоторыми, но не всеми эффекторными функциями, что делает его желательным кандидатом для применений, в которых важен период полужизни антитела in vivo, но при этом определенные эффекторные функции (такие как КЗЦ и АЗКЦ) не нужны или вредны. Для подтверждения снижения/уменьшения КЗЦ- и/или АЗКЦ-активности можно проводить анализ цитотоксичности in vitro и/или in vivo. Например, можно проводить анализ связывания Fc-рецептора (FcR), чтобы убедиться в том, что антитело не способно связывать FcγR (следовательно, вероятно, не обладает АЗКЦ-активностью), но сохраняет способность связывать FcRn. Первичные клетки для опосредования АЗКЦ, NK-клетки, экспрессируют только Fc(RIII, тогда как моноциты экспрессируют Fc(RI, Fc(RII и Fc(RIII. Экспрессия FcR на гемопоэтических клетках представлена в таблице 3 на странице 464 Ravetch and Kinet, Аппи. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991). Неограничивающие примеры методов in vitro анализа для оценки АЗКЦ-активности представляющей интерес молекулы, описаны в патенте США №5500362 (смотрите, например, Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)) и Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985); 5821337 (смотрите Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)). В альтернативном варианте можно использовать нерадиоактивные методы анализа (смотрите, например, нерадиоактивный анализ цитотоксичности ACTI™ для проточной цитометрии (CellTechnology, Inc. Mountain View, CA; и нерадиоактивный анализ цитотоксичности CytoTox 96^® (Promega, Madison, WI). Эффекторные клетки, подходящие для такого анализа, включают мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) и естественные клетки-киллеры (NK). В альтернативном или дополнительном варианте АЗКЦ-активность представляющей интерес молекулы можно оценивать in vivo, например, в животной модели, например, описанной в Clynes et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998). Также можно проводить анализ связывания C1q, чтобы подтвердить, что антитело не способно связывать C1q и, следовательно, у него отсутствует КЗЦ-активность. Смотрите, например, ELISA-анализ связывания C1q и С3с в WO 2006/029879 и WO 2005/100402. Для оценки активации комплемента можно проводить анализ КЗЦ (смотрите, например, Gazzano-Santoro et al. J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al. Blood. 101:1045-1052 (2003); и Cragg, M.S. and M.J. Glennie Blood. 103:2738-2743 (2004)). Определение связывания с FcRn и in vivo клиренса/времени полужизни также можно проводить, используя методы, известные в данной области техники (смотрите, например, Petkova, S.B. et al. Intl. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)).

Антитела со сниженной эффекторной функцией включают те, которые содержат замены одного или более остатков Fc-области 238, 265, 269, 270, 297, 327 и 329 (патенты США №№6737056 и 8219149). Такие Fc-мутанты включают Fc-мутантов с заменами в двух или более аминокислотных позициях 265, 269, 270, 297 и 327, включая так называемый Fc-мутант «DANA» с заменой остатков 265 и 297 аланином (патенты США №№7332581 и 8219149).

В определенных случаях пролин в позиции 329 человеческой Fc-области дикого типа в антителе заменен глицином или аргинином или аминокислотным остатком, достаточно крупным, чтобы разрушить пролиновый «сандвич» в области контакта Fc/Fcγ-рецептор, который образуется между пролином 329 из Fc и остатками триптофана Trp87 и Trp110 из FcgRIII (Sondermann et al. Nature. 406, 267-273 (2000)). В определенных вариантах осуществления биспецифическое антитело содержит по меньшей мере одну дополнительную аминокислотную замену. В одном варианте осуществления дополнительная аминокислотная замена представляет собой S228P, Е233Р, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D или P331S, а в другом варианте осуществления по меньшей мере одна дополнительная аминокислотная замена представляет собой L234A и L235A Fc-области человеческого IgGl или S228P и L235E Fc-области человеческого IgG4 (смотрите, например, US 2012/0251531), и в другом варианте осуществления по меньшей мере одна дополнительная аминокислотная замена представляет собой L234A и L235A и P329G Fc-области человеческого IgG1.

Описаны некоторые варианты антител с улучшенным или уменьшенным связыванием с FcR. (Смотрите, например, патент США №6737056; WO 2004/056312, и Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)).

В определенных случаях HER2 TDB и/или дополнительное антитело к HER2 содержат Fc-домен с одной или более аминокислотными заменами, которые улучшают АЗКЦ, например, с заменами в позициях 298, 333 и/или 334 Fc-области (нумерация остатков по системе EU).

В некоторых вариантах осуществления изменения проводят в Fc-области, что приводит к изменению (т.е. улучшению или ухудшению) связывания C1q и/или комплементзависимой цитотоксичности (КЗЦ), например, как описано в патенте США №6194551, WO 99/51642 и Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000).

Антитела с увеличенным временем полужизни и улучшенным связыванием с неонатальным Fc-рецептором (FcRn), который отвечает за перенос материнских IgG в плод (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) и Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)), описаны в US 2005/0014934 A1 (Hinton et al.). Эти антитела содержат Fc-домен с одной или более заменами, которые улучшают связывание Fc-области с FcRn. Такие Fc-варианты включают варианты с заменами в одном или более остатках Fc-области: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 или 434, например, замену остатка 434 Fc-области (патент США №7371826).

Смотрите также Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988); патент США №5648260; патент США №5624821; и WO 94/29351 в отношении других примеров вариантов по Fc-области.

г. Цистеин-сконструированные варианты антител

В определенных вариантах осуществления может быть желательно создать цистеин-сконструированные HER2 TDB и/или дополнительные антитела к HER2, в которых один или более остатков биспецифического антитела замещены остатками цистеина. В конкретных вариантах осуществления замещенные остатки находятся в доступных сайтах антитела. За счет замены этих остатков цистеином реакционноспособные тиоловые группы располагаются в доступных сайтах биспецифического антитела и могут быть использованы для конъюгации антитела с другими фрагментами, такими как лекарственные фрагменты или фрагменты линкер - лекарственное средство, для создания иммуноконъюгата. В определенных вариантах осуществления цистеином может быть замещен любой из следующих остатков: V205 (нумерация Kabat) легкой цепи; А118 (нумерация EU) тяжелой цепи; и S400 (нумерация EU) Fc-области тяжелой цепи. Цистеин-сконструированные антитела можно получить, как описано, например, в патенте США №7521541.

Следовательно, явным образом предусмотрены иммуноконъюгаты HER2 TDB и/или дополнительного антитела к HER2, конъюгированное с одним или более цитотоксическими агентами, таким как химиотерапевтические агенты или лекарственные средства, ингибиторы роста, токсины (например, белковые токсины, ферментативно активные токсины бактериального, грибкового, растительного или животного происхождения или их фрагменты) или радиоактивные изотопы.

В некоторых случаях иммуноконъюгат представляет собой конъюгат антитело - лекарственное средство (ADC), в котором биспецифическое антитело конъюгировано с одним или более лекарственными средствами, включая, но не ограничиваясь этим, майтанзиноид (смотрите патенты США №№5208020, 5416064 и Европейский патент ЕР 0425235 В1); ауристатин, такой как фрагменты DE и DF препарата монометилауристатина (ММАЕ и MMAF) (смотрите патенты США №№5635483 и 5780588 и 7498298); доластатин; калихеамицин или его производное (смотрите патенты США №№5712374, 5714586, 5739116, 5767285, 5770701, 5770710, 5773001 и 5877296; Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993); и Lode et al., Cancer Res. 58:2925-2928 (1998)); антрациклин, такой как дауномицин или доксорубицин (смотрите Kratz et al., Current Med. Chem. 13:477-523 (2006); Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006); Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005); Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000); Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532(2002); King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002); и патент США №6630579); метотрексат; виндезин; таксан, такой как доцетаксел, паклитаксел, ларотаксел, тезетаксел и ортатаксел; трихотецен; и СС1065.

В некоторых случаях иммуноконъюгат содержит HER2 TDB и/или дополнительное антитело к HER2, конъюгированное с ферментативно активным токсином или его фрагментом, включая, но не ограничиваясь этим, цепь А дифтерийного токсина, несвязывающиеся активные фрагменты дифтерийного токсина, цепь А экзотоксина (из Pseudomonas aeruginosa), цепь А рицина, цепь А абрина, цепь А модецина, альфа-сарцин, белки Aleurites fordii, диантиновые белки, белки Phytolaca americana (PAPI, PAPII и PAP-S), ингибитор из момордики харантской, курцин, кротин, ингибитор из Saponaria officinalis, гелонин, митогеллин, рестриктоцин, феномицин, эномицин и трикотецены.

В другом варианте осуществления иммуноконъюгат содержит HER2 TDB и/или дополнительное антитело к HER2, конъюгированное с радиоактивным атомом с образованием радиоконъюгата. Для получения радиоконъюгатов доступен ряд радиоактивных изотопов. Примеры включают At²¹¹, I¹³¹, I¹²⁵, Y⁹⁰, Re¹⁸⁶, Re¹⁸⁸, Sm¹⁵³, Bi²¹², P³², Pb²¹² и радиоактивные изотопы Lu. Если радиоконъюгат используют в целях обнаружения, он может содержать радиоактивный атом для сцинтиграфических исследований, например, tc99m или I123, или спиновую метку для ядерного магнитного резонанса (ЯМР) (также известного как магнитно-резонансная томография, МРТ), такую как снова йод-123, йод-131, индий-111, фтор-19, углерод-13, азот-15, кислород-17, гадолиний, марганец или железо.

Конъюгаты HER2 TDB и/или дополнительного антитела к HER2 и цитотоксического агента можно создавать, используя ряд бифункциональных агентов, связывающих белок, таких как N-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионат (SPDP), сукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (SMCC), иминотиолан (IT), бифункциональные производные сложных имидоэфиров (такие как диметиладипимидат HCl), активные сложные эфиры (такие, как дисукцинимидилсуберат), альдегиды (такие, как глутаральдегид), бис-азидо соединения (такие, как бис(п-азидобензоил)гександиамин), производные бис-диазония (такие, как бис(п-диазоний бензоил)этилендиамин), диизоцианаты (такие, как толуол 2,6-диизоцианат) и бис-активные соединения фтора (такие, как 1,5-дифтор-2,4-динитробензол). Например, иммунотоксин рицин может быть получен, как описано в Vitetta et al., Science 238:1098 (1987). Меченная углеродом-14 1-изотиоцианатобензил-3-метилдиэтилентриаминпентауксусная кислота (MX-DTPA) представляет собой типовой хелатирующий агент для конъюгации радионуклида с антителом. Смотрите WO 94/11026. Линкер может представлять собой «расщепляемый линкер», облегчающий высвобождение цитотоксического лекарственного средства в клетке. Например, можно использовать кислотно-лабильный линкер, чувствительный к пептидазе линкер, фотолабильный линкер, диметиловый линкер или дисульфид-содержащий линкер (Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992); патент США №5208020).

В данном документе иммуноконъюгаты или ADC прямо подразумевают, но не ограничены этим, такие конъюгаты, полученные с помощью перекрестно-сшивающих реагентов, включая, но не ограничиваясь этим, BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, МРВН, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, сульфо-EMCS, сульфо-GMBS, сульфо-KMUS, сульфо-MBS, сульфо-SIAB, сульфо-SMCC и сульфо-SMPB, а также SVSB (сукцинимидил-(4-винилсульфон)бензоат), которые являются коммерчески доступными (например, от Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., U.S.A).

д. Другие производные антител

В некоторых случаях HER2 TDB и/или дополнительное антитело к HER2 может быть модифицировано так, чтобы содержать дополнительные небелковые фрагменты, которые известны в данной области техники и легко доступны, и которые вводят субъекту в соответствии с описанными в данном документе способами. Фрагменты, подходящие для дериватизации антитела, включают, но не ограничиваются этим, водорастворимые полимеры. Неограничивающие примеры водорастворимых полимеров включают, но не ограничиваются этим, полиэтиленгликоль (ПЭГ), сополимеры этиленгликоля/пропиленгликоля, карбоксиметилцеллюлозу, декстран, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, поли-1,3-диоксолан, поли-1,3,6-триоксан, сополимер этилена/малеинового ангидрида, полиаминокислоты (гомополимеры или случайные сополимеры) и декстран или поли(п-винилпирролидон)полиэтиленгликоль, гомополимеры пропропиленгликоля, сополимеры пропропиленоксида/этиленоксида, полиоксиэтилированные полиолы (например, глицерин), поливиниловый спирт и их смеси. Пропиональдегид полиэтиленгликоля может иметь преимущества при производстве благодаря его стабильности в воде. Полимер может иметь любую молекулярную массу и может быть разветвленным или неразветвленным. Количество молекул полимера, присоединенных к антителу, может варьироваться, и в случае присоединении более чем одного полимера они могут представлять собой одинаковые или разные молекулы. В целом, количество и/или тип полимеров, применяемых для дериватизации, можно определить на основании соображений, которые включают, но не ограничиваются этим, конкретные свойства или функции антитела, которые нужно улучшить, то, будет ли производное антитела применяться в терапии в определенных условиях и т.д.

В некоторых случаях предложены конъюгаты антитела и небелкового фрагмента, которые могут избирательно нагреваться путем облучения. В одном случае небелковый фрагмент представляет собой углеродную нанотрубку (Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)). Излучение может иметь любую длину волны и включает, но не ограничивается этим, длины волн, которые не вредят обычным клеткам, но которые нагревают небелковый компонент до температуры, при которой погибают клетки, расположенные вблизи конъюгата антитело небелковый компонент.

Дозирование

HER2 TDB и дополнительные антитела к HER2 дозируют и вводят образом, соответствующим надлежащей медицинской практике. Предложенные в данном документе схемы лечения включают совместное лечение любым из описанных в данном документе HER2 TDB с дополнительным антителом к HER2 (например, антителом к HER2, которое не представляет собой TDB, например, трастузумабом), причем дополнительное антитело к HER2 вводят до введения HER2 TDB (например, до первого введения HER2 TDB и/или до любых последующих введений HER2 TDB).

В некоторых вариантах осуществления антитело к HER2 (например, антитело к HER2, которое не представляет собой TDB, например, трастузумаб) можно вводить в дозе от около 5 мг/кг до около 10 мг/кг (например, 5 мг/кг до 10 мг/кг или от 6 мг/кг до 8 мг/кг, например, около 5 мг/кг, около 6 мг/кг, около 7 мг/кг, около 8 мг/кг, около 9 мг/кг или от около 10 мг/кг). В некоторых вариантах осуществления антитело к HER2 (например, антитело к HER2, которое не представляет собой TDB, например, трастузумаб) вводят приблизительно один раз каждые три недели (Q3W). Антитело к HER2 можно вводить с помощью инфузии (например, внутривенной) в течение по меньшей мере около 30 минут (например, 30-90 минут). В некоторых случаях, например, при первом введении антитела к HER2, антитело к HER2 можно вводить с помощью инфузии (например, внутривенной) в течение по меньшей мере около 90 минут и проводить наблюдение за субъектом в отношении нежелательных реакций от антитела к HER2 в течение 4 24 часов, например, до введения HER2 TDB. В альтернативном варианте антитело к HER2 можно вводить в тот же день, что и HER2 TDB (например, приблизительно через 30-120 минут после инфузии антитела к HER2). В некоторых вариантах осуществления время между первой дозой антитела к HER2 и первой дозой HER2 TDB больше для первого цикла дозирования, чем для последующих циклов дозирования. Например, первую дозу антитела к HER2 можно вводить за 24 часа до начала первого цикла дозирования путем введения первой дозы HER2 TDB, тогда как последующие циклы дозирования включают дозу антитела к HER2 в один день с дозой HER2 TDB (например, за 30 120 минут до дозы HER2 TDB).

В некоторых случаях HER2 TDB (например, BTRC4017A) вводят в фиксированной дозе. Например, HER2 TDB можно вводить в фиксированной дозе от 0,001 мг до 500 мг (например, от 0,003 мг до 250 мг, от 0,005 мг до 200 мг, от 0,01 мг до 150 мг, от 0,05 мг до 120 мг, от 0,1 мг до 100 мг, от 0,5 мг до 80 мг или от 1,0 мг до 50 мг, например, от 0,001 мг до 0,005 мг, от 0,005 мг до 0,01 мг, от 0,01 мг до 0,05 мг, от 0,05 мг до 0,1 мг, от 0,1 мг до 0,5 мг, от 0,5 мг до 1,0 мг, от 1,0 мг до 5 мг, от 5 мг до 10 мг, от 10 мг до 20 мг, от 20 мг до 30 мг, от 30 мг до 40 мг, от 40 мг до 50 мг, от 50 мг до 60 мг, от 60 мг до 70 мг, от 70 мг до 80 мг, от 80 мг до 90 мг, от 90 мг до 100 мг, от 100 мг до 120 мг, от 120 мг до 150 мг, от 150 мг до 200 мг, от 200 мг до 250 мг, от 250 мг до 300 мг, от 300 мг до 350 мг, от 350 мг до 400 мг, от 400 мг до 450 мг или от 450 мг до 500 мг, например, около 0,003 мг, около 0,005 мг, около 0,01 мг, около 0,05 мг, около 0,1 мг, около 0,5 мг, около 1,0 мг, около 2 мг, около 3 мг, около 4 мг, около 5 мг, около 6 мг, около 7 мг, около 8 мг, около 9 мг, около 10 мг, около 11 мг, около 12 мг, около 13 мг, около 14 мг, около 15 мг, около 16 мг, около 17 мг, около 18 мг, около 19 мг, около 20 мг, около 21 мг, около 22 мг, около 23 мг, около 24 мг, около 25 мг, около 30 мг, около 35 мг, около 40 мг, около 45 мг, около 50 мг, около 55 мг, около 60 мг, около 65 мг, около 70 мг, около 75 мг, около 80 мг, около 85 мг, около 90 мг, около 95 мг, около 100 мг, около 150 мг, около 200 мг или около 250 мг, например, 0,003 мг, 0,009 мг, 0,027 мг, 0,081 мг, 0,24 мг, 0,72 мг, 1,08 мг, 1,51 мг, 2,2 мг, 2,3 мг, 4,0 мг, 4,6 мг, 6,6 мг, 8,0 мг, 9,2 мг, 12 мг, 13,2 мг, 14,8 мг, 18,4 мг, 19,8 мг, 26,4 мг, 36,8 мг, 51,5 мг, 52,8 мг, 61,3 мг, 72,1 мг, 105,6 мг, 147,8 мг, 176 мг или 207 мг). В некоторых вариантах осуществления HER2 TDB (например, BTRC4017A) вводят приблизительно один раз каждые три недели (Q3W).

Предложенные в данном документе способы включают схемы лечения с одноэтапным фракционированием. В конкретном случае схема лечения с одноэтапным фракционированием включает первую дозу антитела к HER2 (например, трастузумаба) и после этого первый цикл дозирования (C1). С1 включает первую дозу HER2 TDB (например, BTRC2017A) (C1D1) и вторую дозу HER2 TDB (C1D2), причем C1D2 превышает C1D1 (например, по меньшей мере в два раза превышает C1D1, например, в около двух пяти раз превышает C1D1, например, в около двух-трех раз превышает C1D1). Второй цикл дозирования (С2) проводят после С1, причем С2 включает вторую дозу антитела к HER2 (например, в день 1 С1) и после этого (например, через 30 120 минут после второй дозы антитела к HER2) дополнительную дозу HER2 TDB (C2D1). При таком одноэтапном фракционировании C2D1 может быть эквивалентна C1D2.

В некоторых случаях C1D1 составляет от 0,003 мг до 50 мг (например, от 0,003 мг до 50 мг, от 0,005 мг до 20 мг, от 0,01 мг до 10 мг, от 0,05 мг до 8 мг или от 0,1 мг до 5 мг, например, от 0,001 мг до 0,005 мг, от 0,005 мг до 0,01 мг, от 0,01 мг до 0,05 мг, от 0,05 мг до 0,1 мг, от 0,1 мг до 0,5 мг, от 0,5 мг до 1,0 мг, от 1,0 мг до 5 мг, от 5 мг до 10 мг, от 10 мг до 20 мг, от 20 мг до 30 мг, от 30 мг до 40 мг или от 40 мг до 50 мг, например, около 0,003 мг, около 0,005 мг, около 0,01 мг, около 0,05 мг, около 0,1 мг, около 0,5 мг, около 1,0 мг, около 2 мг, около 3 мг, около 4 мг, около 5 мг, около 6 мг, около 7 мг, около 8 мг, около 9 мг, около 10 мг, около 11 мг, около 12 мг, около 13 мг, около 14 мг, около 15 мг, около 16 мг, около 17 мг, около 18 мг, около 19 мг, около 20 мг, около 21 мг, около 22 мг, около 23 мг, около 24 мг, около 25 мг, около 30 мг, около 35 мг, около 40 мг, около 45 мг или около 50 мг). В некоторых вариантах осуществления C1D1 составляет 0,003 мг, 0,009 мг, 0,027 мг, 0,081 мг, 0,12 мг, 0,24 мг, 0,48 мг, 0,72 мг, 1,0 мг, 2,0 мг, 2,2 мг, 4,0 мг, 6,6 мг, 8,0 мг, 12 мг, 18 мг, 27 мг или 40,5 мг.C1D2 может составлять от 0,009 мг до 200 мг (например, от 0,01 мг до 150 мг, от 0,05 мг до 100 мг, от 0,1 мг до 50 мг, от 0,5 мг до 20 мг или от 1 мг до 10 мг, например, от 0,009 мг до 0,01 мг, от 0,01 мг до 0,05 мг, от 0,05 мг до 0,1 мг, от 0,1 мг до 0,5 мг, от 0,5 мг до 1,0 мг, от 1,0 мг до 5 мг, от 5 мг до 10 мг, от 10 мг до 20 мг, от 20 мг до 30 мг, от 30 мг до 40 мг, от 40 мг до 50 мг, от 50 мг до 60 мг, от 60 мг до 70 мг, от 70 мг до 80 мг, от 80 мг до 90 мг, от 90 мг до 100 мг, от 100 мг до 120 мг, от 120 мг до 150 мг, или от 150 мг до 200 мг, например, около 0,009 мг, около 0,01 мг, около 0,05 мг, около 0,1 мг, около 0,5 мг, около 1,0 мг, около 2 мг, около 3 мг, около 4 мг, около 5 мг, около 6 мг, около 7 мг, около 8 мг, около 9 мг, около 10 мг, около 11 мг, около 12 мг, около 13 мг, около 14 мг, около 15 мг, около 16 мг, около 17 мг, около 18 мг, около 19 мг, около 20 мг, около 21 мг, около 22 мг, около 23 мг, около 24 мг, около 25 мг, около 30 мг, около 35 мг, около 40 мг, около 45 мг, около 50 мг, около 55 мг, около 60 мг, около 65 мг, около 70 мг, около 75 мг, около 80 мг, около 85 мг, около 90 мг, около 95 мг, около 100 мг, около 150 мг или около 200 мг). В некоторых вариантах осуществления C1D2 составляет 0,009 мг, 0,027 мг, 0,081 мг, 0,24 мг, 0,4 мг, 0,72 мг, 0,08 мг, 1,6 мг, 2,2 мг, 2,3 мг, 3,2 мг, 4,6 мг, 6,4 мг, 6,6 мг, 9,2 мг, 12,8 мг, 14,8 мг, 18,4 мг, 19,8 мг, 25,6 мг, 36,8 мг, 38,4, 51,5 мг, 57,6 мг, 72,1 мг, 86,4 мг, 61,3 мг или 129,6 мг.

В схеме лечения с одноэтапным фракционированием C1D1 и C1D2 вводят в разные дни в С1. В некоторых вариантах осуществления, например, в которых С1 составляет 21 день, C1D1 вводят в день 1 C1, a C1D2 вводят в день 8 С1.

Дополнительно в данном документе предложены схемы с двухэтапным фракционированием, которые включают третью дозу HER2 TDB в первом цикле дозирования (C1D3). C1D3 больше чем C1D2, которая больше чем C1D1. В некоторых вариантах осуществления C1D1, C1D2 и C1D3 вместе превышают наибольшую разрешенную дозу HER2 TDB в первом цикле дозирования в схеме дозирования с одноэтапным фракционированием и увеличением дозы. Например, в исследовании со схемой дозирования с одноэтапным фракционированием и повышением дозы, в котором наибольшая разрешенная доза по определению составляет 20 мг в С1, суммарная доза C1D1, C1D2 и C1D3 в схеме лечения с двухэтапным фракционированием может превышать 20 мг (например, около 25 мг). В таких схемах лечения с двухэтапным фракционированием C1D2 может в два-десять раз (например, в около двух раз, около трех раз, около четырех раз, около пяти раз, около шести раз, около семи раз, около восьми раз, около девяти раз или около десяти раз) превышать дозу C1D1. В дополнительном или альтернативном варианте C1D3 может в два-три раза превышать дозу C1D2. В некоторых случаях C2D1 эквивалентна C1D3.

В конкретных случаях схемы лечения с двухэтапным фракционированием C1D1 может составлять от 0,01 мг до 20 мг (например, от 0,05 мг до 15 мг, от 0,1 мг до 10 мг или от 0,5 мг до 5 мг, например, от 0,01 мг до 0,05 мг, от 0,05 мг до 0,1 мг, от 0,1 мг до 0,5 мг, от 0,5 мг до 1,0 мг, от 1,0 мг до 5 мг, от 5 мг до 10 мг, от 10 мг до 15 мг или от 15 мг до 20 мг, например, около 0,01 мг, около 0,05 мг, около 0,1 мг, около 0,5 мг, около 1,0 мг, около 2 мг, около 3 мг, около 4 мг, около 5 мг, около 6 мг, около 7 мг, около 8 мг, около 9 мг, около 10 мг, около 11 мг, около 12 мг, около 13 мг, около 14 мг, около 15 мг, около 16 мг, около 17 мг, около 18 мг, около 19 мг или около 20 мг). В дополнительном или альтернативном варианте C1D2 может составлять от 0,1 мг до 100 мг (например, от 0,1 мг до 80 мг, от 0,5 мг до 50 мг или от 1 мг до 10 мг, например, от 0,1 мг до 0,5 мг, от 0,5 мг до 1,0 мг, от 1,0 мг до 5 мг, от 5 мг до 10 мг, от 10 мг до 20 мг, от 20 мг до 30 мг, от 30 мг до 40 мг, от 40 мг до 50 мг, от 50 мг до 60 мг, от 60 мг до 70 мг, от 70 мг до 80 мг, от 80 мг до 90 мг или от 90 мг до 100 мг, например, около 0,01 мг, около 0,05 мг, около 0,1 мг, около 0,5 мг, около 1,0 мг, около 2 мг, около 3 мг, около 4 мг, около 5 мг, около 6 мг, около 7 мг, около 8 мг, около 9 мг, около 10 мг, около 11 мг, около 12 мг, около 13 мг, около 14 мг, около 15 мг, около 16 мг, около 17 мг, около 18 мг, около 19 мг, около 20 мг, около 21 мг, около 22 мг, около 23 мг, около 24 мг, около 25 мг, около 30 мг, около 35 мг, около 40 мг, около 45 мг, около 50 мг, около 55 мг, около 60 мг, около 65 мг, около 70 мг, около 75 мг, около 80 мг, около 85 мг, около 90 мг, около 95 мг или около 100 мг). Таким образом, C1D3 может находиться в диапазоне от 1 мг до 400 мг (например, от 10 мг до 300 мг, от 20 мг до 200 мг или от 50 мг до 100 мг, например, от 1,0 мг до 5 мг, от 5 мг до 10 мг, от 10 мг до 20 мг, от 20 мг до 30 мг, от 30 мг до 40 мг, от 40 мг до 50 мг, от 50 мг до 60 мг, от 60 мг до 70 мг, от 70 мг до 80 мг, от 80 мг до 90 мг, от 90 мг до 100 мг, от 100 мг до 120 мг, от 120 мг до 150 мг, от 150 мг до 200 мг, от 200 до 250 мг, от 250 мг до 300 мг, от 300 мг до 350 мг или от 350 мг до 400 мг, например, около 1,0 мг, около 2 мг, около 3 мг, около 4 мг, около 5 мг, около 6 мг, около 7 мг, около 8 мг, около 9 мг, около 10 мг, около 11 мг, около 12 мг, около 13 мг, около 14 мг, около 15 мг, около 16 мг, около 17 мг, около 18 мг, около 19 мг, около 20 мг, около 21 мг, около 22 мг, около 23 мг, около 24 мг, около 25 мг, около 30 мг, около 35 мг, около 40 мг, около 45 мг, около 50 мг, около 55 мг, около 60 мг, около 65 мг, около 70 мг, около 75 мг, около 80 мг, около 85 мг, около 90 мг, около 95 мг, около 100 мг, около 150 мг, около 200 мг, около 250 мг, около 300 мг, около 350 мг или около 400 мг). В некоторых вариантах осуществления C1D3 составляет 1,1 мг, 2,2 мг, 4,4 мг, 6,6 мг, 8,8 мг, 13,2 мг, 17,6 мг, 26,4 мг, 35,2 мг, 52,8 мг, 70,4 мг, 105,6 мг, 147,8 мг, 158,4 мг, 176 мг, 207 мг, 237,6 мг или 356,4 мг.

В схеме лечения с двухэтапным фракционированием C1D1, C1D2 и C1D3 вводят в разные дни в С1. В некоторых вариантах осуществления, например, в которых С1 составляет 21 день, C1D1 вводят в день 1 C1, C1D2 вводят в день 8 С1, a C1D3 вводят в день 15.

В некоторых случаях любой из вышеописанных схем лечения второй и последующие циклы дозирования равны по продолжительности первому циклу дозирования (например, 7-42 дня, 14-35 дней или 21-28 дней, например, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42 дней или более). В некоторых вариантах осуществления C1, C2, С3 и все последующие циклы (например, С4, С5, С6 и т.д.) каждый составляют около 21 дня. HER2 TDB и антитело к HER2 оба можно вводить в день 1 каждого цикла после С1.

Продолжительность терапии можно продлить в соответствии с медицинскими показаниями или до достижения желаемого терапевтического эффекта (например, описанных в данном документе). В некоторых вариантах осуществления лечение продолжают в течение 1 месяца, 2 месяцев, 4 месяцев, 6 месяцев, 8 месяцев, 10 месяцев, 1 года, 2 лет, 3 лет, 4 лет, 5 лет или в течение всей жизни субъекта.

Для всех описанных в данном документе способов одно или более антител к HER2 составляют, дозируют и вводят образом, соответствующим надлежащей медицинской практике. Факторы, которые необходимо учитывать в этом контексте, включают конкретное нарушение, подлежащее лечению, конкретное млекопитающее, подлежащее лечению, клиническое состояние отдельного пациента, причину нарушения, место доставки агента, способ введения, график введения и другие факторы, известные практикующим врачам. Одно или более антител к HER2 необязательно составляют с одним или более агентами, применяемыми в настоящее время для предотвращения или лечения рассматриваемого нарушения. Эффективное количество таких других агентов зависит от количества антитела к HER2, присутствующего в составе, типа нарушения или лечения и других факторов, которые обсуждались выше. Одно или более антител к HER2 предпочтительно можно вводить пациенту в серии сеансов лечения.

Дополнительные терапевтические агенты

В некоторых случаях любых описанных способов лечения субъекта, имеющего НЕР2-положительный рак, схема лечения может включать введение одного или более дополнительных терапевтических агентов.

В одном случае дополнительный терапевтический агент представляет собой кортикостероид, который можно вводить в качестве предварительного лечения до (например, приблизительно за 1 час до) введения HER2 TDB или дополнительного антитела к HER2. Премедикация кортикостероидом может включать введение дексаметазона или метилпреднизолона. В дополнительном или альтернативном варианте описанные в данном документе схемы лечения могут включать введение (например, предварительное лечение) ацетаминофена, парацетамола или дифенгидрамина.

В некоторых случаях вводят антагонист IL-6R, такой как тоцилизумаб (АКТЕМРА® / РоАКТЕМРА®), например, при необходимости контроля события СВЦ. В конкретных вариантах осуществления антагонист IL-6R (например, тоцилизумаб) вводят внутривенно, например, в дозе от 1 мг/кг до 25 мг/кг (например, от 5 мг/кг до 10 мг/кг, например, около 8 мг/кг), при необходимости.

В некоторых случаях любые из описанных в данном документе схем лечения включают введение связывающего ось PD-1 антагониста (например, PD-L1-связывающего антагониста, PD-1-связывающего антагониста или PD-L2-связывающего антагониста).

В некоторых случаях PD-L1 -связывающий антагонист представляет собой антитело к PD-L1, выбранное из MPDL3280A (атезолизумаб), YW243.55.S70, MDX-1105, и MEDI4736 (дурвалумаб), и MSB0010718C (авелумаб). Антитело YW243.55.S70 представляет собой антитело к PD-L1, описанное в публикации РСТ № WO 2010/077634. MDX-1105, также известное как BMS-936559, представляет собой антитело к PD-L1, описанное в публикации РСТ № WO2007/005874. MEDI4736 (дурвалумаб) представляет собой моноклональное антитело к PD-L1, описанное в публикации РСТ № WO 2011/066389 и публикации США №2013/034559. Примеры антител к PD-L1, применимых в способах по данному изобретению, и способы их получения описаны в публикациях РСТ №№ WO 2010/077634, WO 2007/005874 и WO 2011/066389, и также в патенте США №8217149 и публикации США №2013/034559, которые включены в данный документ посредством ссылки.

В некоторых случаях PD-1-связывающий антагонист представляет собой другое антитело к PD-1, такое как антитело к PD-1, выбранное из группы, состоящей из MDX-1106 (ниволумаб), МК-3475 (пембролизумаб), MEDI-0680 (АМР-514), PDR001, REGN2810 и BGB-108. MDX-1106, также известное как MDX- 1106-04, ONO-4538, BMS-936558 или ниволумаб, представляет собой антитело к PD-1, описанное в публикации РСТ № WO 2006/121168. МК-3475, также известное как пембролизумаб или ламбролизумаб, представляет собой антитело к PD-1, описанное в публикации РСТ № WO 2009/114335. В других случаях PD-1-связывающий антагонист представляет собой иммуноадгезин (например, иммуноадгезин, содержащий внеклеточную или PD-1-связывающую часть PD-L1 или PD-L2, слитую с константной областью (например, Fc-областью последовательности иммуноглобулина). В других случаях PD-1-связывающий антагонист представляет собой АМР-224. АМР-224, также известное как B7-DCIg, представляет собой PD-L2-Fc-слитый растворимый рецептор, описанный в публикациях РСТ №№ WO 2010/027827 и WO 2011/066342.

В других случаях РВ-L2-связывающий антагонист представляет собой антитело к PD-L2 (например, человеческое, гуманизированное или химерное антитело к PD-L2). В некоторых случаях PD-L2-связывающий антагонист представляет собой иммуноадгезин.

В дополнительном варианте осуществления дополнительный терапевтический агент представляет собой дополнительный химиотерапевтический агент и/или конъюгат антитело лекарственное средство (ADC). В одном варианте осуществления HER2 TDB и/или антитело к HER2 вводят вместе с одним или более дополнительными химиотерапевтическими агентами, выбранными из циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизолона (CHOP). В одном варианте осуществления HER2 TDB и/или антитело к HER2 вводят вместе с ADC, выбранным из конъюгана антитела к CD79b и лекарственного средства (такого как анти-CD79b-MC-vc-PAB-MMAE или анти-CD79b конъюгат антитело - лекарственное средство, описанные в любой из работ U.S. 8088378 и/или US 2014/0030280, или полатузумаб ведотин).

В некоторых случаях дополнительная терапия включает алкилирующий агент. В одном случае алкилирующий агент представляет собой 4-[5-[бис(2-хлорэтил)амино]-1-метилбензимидазол-2-ил]бутановую кислоту и ее соли. В одном случае алкилирующий агент представляет собой бендамустин.

В некоторых случаях дополнительная терапия включает ингибитор BCL-2. В одном варианте осуществления ингибитор BCL-2 представляет собой 4-(4-{[2-(4-хлорфенил)-4,4-диметилциклогекс-1-ен-1-ил]метил}пиперазин-1-ил)-N-({3-нитро-4-[(тетрагидро-2Н-пиран-4-илметил)амино]фенил}сульфонил)-2-(1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илокси)бензамид и его соли. В одном случае ингибитор BCL-2 представляет собой венетоклакс (CAS №: 1257044-40-8).

В некоторых случаях дополнительная терапия включает ингибитор фосфоинозитид-3-киназы (PI3K). В одном случае ингибитор PI3K ингибирует дельта-изоформу PI3K (т.е. Р1105). В некоторых случаях ингибитор PI3K представляет собой 5-фтор-3-фенил-2-[(1S)-1-(7Н-пурин-6-иламино)пропил]-4(3Н)-хиназолинон и его соли. В некоторых случаях ингибитор PI3K представляет собой иделалисиб (CAS №:870281-82-6). В одном случае ингибитор PI3K ингибирует альфа- и дельта-изоформы PI3K. В некоторых случаях ингибитор PI3K представляет собой 2-{3-[2-(1-изопропил-3-метил-1Н-1,2-4-триазол-5-ил)-5,6-дигидробензо [f]имидазо[1,2-d][1,4]оксазепин-9-ил]-1H-пиразол-1-ил}-2-метилпропанамид и его соли.

В дополнительном аспекте изобретения дополнительная терапия включает ингибитор тирозинкиназы Брутона (ВТК). В одном случае ингибитор ВТК представляет собой 1-[(3R)-3-[4-амино-3-(4-феноксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]пиперидин-1-ил]проп-2-ен-1-он и его соли. В одном случае ингибитор ВТК представляет собой ибрутиниб (CAS №: 936563-96-1).

В некоторых случаях дополнительная терапия включает талидомид или его производное. В одном случае талидомид или его производное представляет собой (RS)-3-(4-aMHHO-1-оксо-1,3-дигидро-2Н-изоиндол- 2-ил)пиперидин-2,6-дион и его соли. В одном случае талидомид или его производное представляет собой леналидомид (CAS №: 191732-72-6).

Фармацевтические композиции и составы

Фармацевтические композиции и составы HER2 TDB и/или антител к HER2, описанных выше, можно получать, смешивая такие агенты, имеющие необходимую степень чистоты, с одним или более необязательными фармацевтически приемлемыми носителями (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)), в форме лиофилизированных составов или водных растворов. Фармацевтически приемлемые носители в общем случае являются нетоксичными для реципиентов в применяемых дозировках и концентрациях и включают, но не ограничиваются этим: буферы, такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как хлорид октадецилдиметилбензил аммония; хлорид гексаметония; хлорид бензалкония; хлорид бензетония; фенол; бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехол; резорцин; циклогексанол; 3-пентанол; и м-крезол); низкомолекулярные (содержащие менее 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как ЭДТА; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; металлсодержащие комплексы (например, комплексы Zn-белок) и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как полиэтиленгликоль (ПЭГ). Типовые фармацевтически приемлемые носители по данному документу дополнительно включают агенты для диспергирования лекарственных препаратов в интерстициальном пространстве, такие как растворимые нейтрально-активные гликопротеины гиалуронидазы (sHASEGP), например, растворимые гликопротеины гиалуронидазы РН-20 человека, такие как rHuPH20 (HYLENEX^®, Baxter International, Inc.). Некоторые типовые sHASEGP и способы их применения, включая rHuPH20, описаны в патентных публикациях США №№2005/0260186 и 2006/0104968. В одном аспекте sHASEGP комбинируют с одной или более дополнительными гликозаминогликаназами, такими как хондроитиназы.

Типовые лиофилизированные составы антител описаны в патенте США №6267958. Водные составы антител включают описанные в патенте США №6171586 и WO 2006/044908, причем последние составы содержат гистидин-ацетатный буфер.

Состав по данному изобретению также может содержать более одного активного ингредиента, если это необходимо для конкретного показания, которое лечат, предпочтительно те, которые обладают дополняющими видами активности и не оказывают отрицательного влияния друг на друга. Например, может существовать потребность в дополнительном терапевтическом агенте (например, химиотерапевтическом агенте, цитотоксическом агенте, агенте, ингибирующем рост, и/или антигормональном агенте, таком как те, что перечислены выше). Такие активные ингредиенты приемлемо присутствуют в комбинации в количествах, которые эффективны для предполагаемой цели.

Активные ингредиенты также могут быть заключены в микрокапсулах, полученных, например, с помощью методик коацервации или путем межфазной полимеризации, например, гидроксиметилцеллюлозные или желатиновые микрокапсулы и полиметилметакрилатные микрокапсулы, соответственно, в коллоидных системах для доставки лекарственных средств (например, липосомах, альбуминовых микросферах, микроэмульсиях, наночастицах и нанокапсулах) или в макроэмульсиях. Такие методики описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980).

Можно получать препараты с замедленным высвобождением. Подходящие примеры препаратов с замедленным высвобождением включают полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, содержащие антитело, при этом матрицы представлены в виде формованных изделий, например, пленок или микрокапсул.

Составы, предназначенные для введения in vivo, в общем случае являются стерильными. Стерильность можно легко обеспечить, например, путем фильтрации через стерильные фильтровальные мембраны.

III. ГОТОВЫЕ ИЗДЕЛИЯ

В изобретении дополнительно предложены готовые изделия, содержащие материалы, применимые для лечения или предотвращения HER2-положительного рака. Готовое изделие содержит контейнер и этикетку или вкладыш в упаковку на нем или связанные с ним. Подходящие контейнеры включают, например, бутылки, флаконы, шприцы, пакеты для в/в растворов и т.д. Контейнеры могут быть выполнены из ряда материалов, таких как стекло или пластик. Контейнер содержит композицию, которая сама по себе или в комбинации с другой композицией эффективна для лечения или предотвращения патологического состояния, и может иметь стерильное входное отверстие (например, контейнер может представлять собой пакет для внутривенного раствора или флакон с пробкой, прокалываемой гиподермической иглой для инъекций). По меньшей мере один активный агент в композиции представляет собой описанное в данном документе HER TDB. На этикетке или вкладыше в упаковку указано, что композицию используют для лечения выбранного HER2-положительного рака (например, HER2-положительного рака молочной железы или HER2-положительного рака желудка), и дополнительно приведена информацию касательно по меньшей мере одной из схем дозирования, описанных в данном документе. Кроме того, промышленное изделие может содержать (а) первый контейнер с содержащейся в нем композицией, причем композиция содержит HER2 TDB; и (б) второй контейнер с содержащейся в нем композицией, причем композиция содержит дополнительное антитело к HER (например, многовалентное (например, двухвалентное) HER2-связывающее антитело, например, трастузумаб). В альтернативном или дополнительном варианте готовое изделие может дополнительно содержать один или более дополнительных контейнеров, содержащих (а) дополнительный терапевтический агент; и/или (б) фармацевтически приемлемый буфер, такой как бактериостатическая вода для инъекций (БВДИ), фосфатно-солевой буферный раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Контейнеры могут дополнительно содержать другие материалы, необходимые с коммерческой и потребительской точки зрения, включая другие буферы, растворители, фильтры, иглы и шприцы.

IV. ПРИМЕРЫ

Ниже приведены примеры способов по изобретению. Следует понимать, что на практике можно реализовать ряд других вариантов осуществления с учетом общего описания, приведенного выше.

Пример 1. Доклиническая эффективность совместного лечения BTRC4017A и трастузумабом

Создавали полноразмерное IgG1 TDB, BTRC4017A, которое связывает как HER2, так и CD3, используя конструирование по типу «выступ во впадину» (смотрите, например, патент США №5731168), и имеет плечо против HER2, содержащее HER2-связывающий сайт 4D5, и плечо против CD3, содержащее CD3-связывающий сайт 40G5c (смотрите, например, WO 2015/095392). HER2-связывающий сайт 4D5 из BTRC4017A получен из трастузумаба (ГЕРЦЕПТИН®) и связывает тот же эпитоп в домене IV HER2, как проиллюстрировано на Фиг. 1. Трастузумаб конкурирует с BTRC4017A за связывание с HER2 и, следовательно, может препятствовать активности BTRC4017A.

In Vitro фармакология BTRC4017A в комбинации с трастузумабом (герцептин)

Исследовали влияние трастузумаба на активность BTRC4017A in vitro и in vivo, используя HER2-амплифицированную линию клеток KPL4, которая представляет НЕР2-положительный рак. Влияние комбинации также моделировали, используя линию клеток НТ55, которая экспрессирует низкие уровни HER2, сходные с нормальными уровнями HER2 в человеческих тканях. Опухоли НТ55 использовали для моделирования целевой активности в отношении нормальных клеток/тканей, которые экспрессируют низкие уровни HER2, тогда как опухолевые клетки KPL4 представляли опухоль со сверхэкспрессией HER2. MCF7 представляет собой линию клеток рака молочной железы HER2 ШСО, включенную в качестве отрицательного контроля. Уровни экспрессии HER2 в модельных линиях клеток приведены на Фиг. 2.

Чтобы оценить эффект трастузумаба на in vitro активность BTRC4017A, проводили эксперименты доза - ответ в присутствии 230 мкг/мл и 60 мкг/мл трастузумаба. Эти концентрации трастузумаба представляют клинические максимальную сывороточную концентрацию (С_макс) и минимальную сывороточную концентрацию (С_мин) при раке молочной железы при рекомендованных дозах (8 или 6 мг/кг каждые 3 недели [Q3W]). Очищенные человеческие CD8⁺ Т-клетки использовали в качестве эффекторов, чтобы свести к минимуму целевое уничтожение клеток трастузумабом посредством клеточноопосредованной АЗКЦ. Трастузумаб ингибировал активность BTRC4017A в обеих линиях клеток (Фиг. 3А и 3Б), а для достижения 50% эффективной концентрации уничтожения KPL4 (Фиг. 3А) в присутствии трастузумаба требовалось в 600-2000 раз больше BTRC4017A. Ингибирующий эффект трастузумаба на активность BTRC4017A соответствовал такому же диапазону, когда мишенями служили клетки НТ55, но при более высоких концентрациях BTRC4017A был способен преодолевать ингибирующий эффект трастузумаба в обеих линиях клеток.

In Vivo фармакология BTRC4017A в комбинации с трастузумабом-LALAPG

Опосредованные Fc-рецепторами эффекторные функции играют основную роль в in vivo активности трастузумаба и могут мешать экспериментам in vivo, направляя ингибирующий эффект трастузумаба на активность BTRC4017A. Поэтому Fc-область трастузумаба модифицировали путем внесения ряда аминокислотных замен, которые ослабляют эффекторные функции человеческого IgG₁, чтобы создать вариант трастузумаб-LALAPG. Мутации LALAPG представляю собой L234A, L235A и P329G. Fab против HER2 в трастузумабе не был модифицирован в варианте трастузумаб-LALAPG, эта модификация не изменяла связывание HER2, что подтвердил анализ связывания HER2 методом проточной цитометрии (Фиг. 4).

Чтобы исследовать эффект трастузумаба/LALAPG на активность BTRC4017A, использовали мышиную модель с двойной опухолью с мышами с сильно ослабленным иммунитетом NOD scid-гамма (NSG). Мышам NSG дополнительно вводили человеческие Т-клетки путем внутрибрюшинной инъекции человеческих мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС). Каждой мыши прививали в один бок опухоль KPL4, а опухоль НТ55 прививали в противоположный бок. KPL4 представляет собой HER2-амплифицированную линию клеток и представляет опухоль со сверхэкспрессией HER2, тогда как опухоли НТ55 использовали для моделирования целевой/внеопухолевой активности в нормальных клетках/тканях, которые экспрессируют низкие уровни HER2 (Фиг. 2).

Как показано на Фиг. 5А, одна доза BTRC4017A индуцировала регрессию опухолей KPL4 при ≥ 0,05 мг/кг. Для индукции регрессии опухолей НТ55 требовалась в десять раз большая доза BTRC4017A (Фиг. 5Б), что указывает на то, что терапевтический индекс можно повысить на основе высокой экспрессии HER2 в НЕР2-положительных опухолях.

В группах совместной обработки 5,0 мг/кг трастузумаба-LALAPG вводили за четыре часа до введения BTRC4017A. Трастузумаб-LALAPG не влиял на эффективность BTRC4017A при нацеливании на опухоли KPL4 при любом исследуемом уровне дозы BTRC4017A. В отличие от этого, предварительная обработка трастузумабом-LALAPG устраняла активность BTRC4017A при всех уровнях дозы BTRC4017A в опухолях НТ55. Эти данные демонстрируют, что влияние предварительной обработки трастузумабом-LALAPG на активность BTRC4017A очень отличается между опухолями, которые экспрессируют разные уровни HER2. В частности, активность сохранялась в опухолях KPL4 (HER2-амплифицированных), но была устранена в опухолях НТ55, которые экспрессируют HER2 на таком же уровне, что и нормальные человеческие ткани.

Эти данные позволяют предположить, что обработка трастузумабом перед введением BTRC4017A может снизить риск целевой/внеопухолевой токсичности BTRC4017A в нормальных тканях, которые экспрессируют низкие уровни HER2, с сохранением противоопухолевой активности в опухолях со сверхэкспрессией HER2. Совместное введение трастузумаба с BTRC4017A в in vivo исследовании на мышах не нарушило противоопухолевую активность BTRC4017A в HER2-положительных опухолях, но полностью устранило противоопухолевую активность BTRC4017A в опухолях с низкой экспрессией HER2, которые были репрезентативными для уровней экспрессии HER2 в нормальных тканях. Не ограничиваясь теорией, трастузумаб может насыщать HER2 (тем самым предотвращая связывание BTRC4017A) в нормальных тканях с низкой экспрессией HER2, но при этом не способен насыщать HER2 в опухолях, которые экспрессируют большие плотности HER2. Таким образом, совместное введение трастузумаба перед каждой дозой BTRC4017A может ослабить внеопухолевую/ целевую токсичность BTRC4017A в экспрессирующих HER2 нормальных тканях, но при этом по существу не влиять на противоопухолевую активность BTRC4017A у пациентов с HER2-положительными опухолями. Таким образом, совместное введение трастузумаба может повысить терапевтический индекс BTRC4017A.

Пример 2. Схемы дозирования с фракционированием и увеличением дозы для лечения НЕК2-положительных видов рака BTRC4017A и трастузумабом

Чтобы ослабить потенциальную связанную с цитокинами токсичность, BTRC4017A вводят по фракционированной схеме дозирования в цикле 1 (С1), в котором первая доза меньше второй дозы. В двухэтапной фракционированной схеме дозирования вторая доза в С1 меньше третьей дозы. Цикл 2 и любые необходимые последующие циклы включают одно введение дозы BTRC4017A, эквивалентной наибольшей дозе BTRC4017A в С1.

Трастузумаб вводят в день -1 С1, чтобы надлежащим образом разделить любые связанные с инфузией реакции (IRR), которые могут быть связаны с BTRC4017A и с трастузумабом. Все последующие дозы трастузумаба для цикла 2 (С2) и далее вводят в день 1 цикла до введения BTRC4017A. Обобщенные данные по процедурам введения трастузумаба приведены в таблице 4 ниже:

BTRC4017A вводят посредством фракционированного дозирования во время первого 21-дневного цикла и в первый день каждого последующего цикла, вплоть до 17 циклов. Введение BTRC4017A осуществляют в постоянной (фиксированной) дозе, независимо от массы тела, путем внутривенной инфузии, используя стандартные медицинские шприцы и шприцевые насосы или пакеты для внутривенных растворов в зависимости от ситуации. Лекарственный продукт доставляют с помощью шприцевого насоса с помощью инфузионного устройства или пакета для внутривенных растворов, причем конечный объем BTRC4017A определяется дозой. В случае начальных низких доз BTRC4017A будут вводить только через периферический катетер. Конкретная доза BTRC4017A определяет соответствующие концентрации, объемы дозирования, время инфузии и также подразумевает применение конкретного устройства для введения (например, периферического катетера, или шприцевого насоса, или в/в пакета).

Начиная с дня 1 С1, субъекты получают возрастающие дозы BTRC4017A в дни 1 и 8 или в дни 1, 8 и 15 для одноэтапной и двухэтапной фракционированной схемы, соответственно. В цикле 2 и далее BTRC4017A вводят в виде одной дозы только в день 1 каждого 21-дневного цикла. BTRC4017A можно вводить на±2 дня от запланированной даты (т.е. с минимум 19 днями между дозами) по причинам логистики/планирования.

Премедикацию кортикостероидами, состоящую из дексаметазона (20 мг внутривенно) или метилпреднизолона (80 мг внутривенно), вводят за один час до введения каждой дозы BTRC4017A в цикле 1. Кроме того, премедикацию пероральным ацетаминофеном или парацетамолом (например, 500-1000 мг) и/или 25-50 мг дифенгидрамина вводят в соответствии со стандартной институциональной практикой до введения BTRC4017A, если отсутствуют противопоказания. При необходимости пациентам можно внутривенно вводить тоцилизумаб в дозе 8 мг/кг.

В отсутствие дозолимитирующей токсичности (ДЛТ), неприемлемой токсичности или прогрессирования заболевания, пациентам, испытывающим клиническую пользу, предлагают продолжить лечение BTRC4017A в виде единственного агента или в комбинации с трастузумабом каждые 21 день, вплоть до максимум 17 циклов, до прогрессирования или непереносимой токсичности, в зависимости от того, что наступит раньше.

Статус заболевания оценивают, используя Критерии оценки ответа при солидных опухолях (RECIST v1.1). Пациенты проходят оценки опухолей при скрининге, во время исследования до прекращения лечения, и при завершении исследования. Иммуно-модифицированные критерии RECIST также используют для характеристики профилей ответов, связанных с иммунотерапией рака. Иммуно-модифицированные критерии RECIST могут дополнить стандартные критерии RECIST v1.1 и позволить провести интегрированную оценку пользы и риска для пациентов. В целом в контексте BTRC4017A и биспецифических антител может наблюдаться псевдопрогрессирование. Следовательно, пациенты, которые испытывают клиническую пользу, несмотря на рентгенографические свидетельства прогрессирующего заболевания по определению по стандартным критериям RECIST v1.1, могут продолжать лечение.

Нежелательные явления оценивают в соответствии с Общими терминологическими критериями нежелательных явлений Национального института рака, версия 5.0 (NCI СТСАЕ v5.0), за исключением синдрома высвобождения цитокинов (СВЦ), который оценивают в соответствии с Модифицированной системой оценки синдрома высвобождения цитокинов (смотрите таблицы 1 и 2 выше).

Другие варианты осуществления

Хотя вышеизложенное изобретение было подробно описано посредством иллюстрации и примеров в целях ясности понимания, описания и примеры не следует воспринимать как ограничивающие объем данного изобретения. Раскрытие всех патентов и научной литературы, цитируемых в данном документе, в полном объеме и явным образом включено посредством ссылки.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Genentech, Inc.

<120> ЛЕЧЕНИЕ РАКА БИСПЕЦИФИЧЕСКИМИ АНТИТЕЛАМИ К HER2XCD3

В КОМБИНАЦИИ С МОНОКЛОНАЛЬНЫМ АНТИТЕЛОМ К HER2

<130> 50474-197WO2

<150> US 62/818556

<151> 2019-03-14

<160> 17

<170> PatentIn, версия 3.5

<210> 1

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 1

Asp Thr Tyr Ile His

1 5

<210> 2

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 2

Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 3

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 3

Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 4

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 4

Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala

1 5 10

<210> 5

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 5

Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 6

Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr

1 5

<210> 7

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 7

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 8

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 8

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 9

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 9

Asn Tyr Tyr Ile His

1 5

<210> 10

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 10

Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 11

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 11

Asp Ser Tyr Ser Asn Tyr Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 12

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 12

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 13

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 13

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 14

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 14

Thr Gln Ser Phe Ile Leu Arg Thr

1 5

<210> 15

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 15

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Ser Tyr Ser Asn Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 16

<211> 112

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 16

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Gln

85 90 95

Ser Phe Ile Leu Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 17

<211> 142

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 17

Cys His Gln Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr

1 5 10 15

Gln Cys Val Asn Cys Ser Gln Phe Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu

20 25 30

Glu Cys Arg Val Leu Gln Gly Leu Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg

35 40 45

His Cys Leu Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val

50 55 60

Thr Cys Phe Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr

65 70 75 80

Lys Asp Pro Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro

85 90 95

Asp Leu Ser Tyr Met Pro Ile Trp Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala

100 105 110

Cys Gln Pro Cys Pro Ile Asn Cys Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp

115 120 125

Asp Lys Gly Cys Pro Ala Glu Gln Arg Ala Ser Pro Leu Thr

130 135 140

<---

1. Способ лечения или замедления прогрессирования HER2-положительного рака у нуждающегося в этом субъекта, включающий назначение субъекту схемы лечения, включающей антитело к HER2 и зависимое от T-клеток биспецифическое антитело (TDB) к HER2, причем HER2 TDB содержит плечо против HER2 и плечо против CD3, при этом как антитело к HER2, так и HER2 TDB связывают домен IV HER2, и при этом схема лечения приводит к повышению терапевтического индекса HER2 TDB по сравнению с лечением HER2 TDB в отсутствие антитела к HER2, где антитело к HER2 содержит:

(i) определяющую комплементарность область (CDR)-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1;

(ii) CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2;

(iii) CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3;

(iv) CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4;

(v) CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; и

(vi) CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6,

где плечо против HER2 в HER2 TDB содержит HER2-связывающий домен, содержащий:

(i) CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1;

(ii) CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2;

(iii) CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3;

(iv) CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4;

(v) CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; и

(vi) CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6,

и где плечо против CD3 в HER2 TDB содержит CD3-связывающий домен, содержащий:

(i) CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9;

(ii) CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10;

(iii) CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11;

(iv) CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12;

(v) CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13;

(vi) CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14.

2. Способ по п. 1, в котором повышение терапевтического индекса связано со снижением вероятности испытания целевого/внеопухолевого эффекта по сравнению с лечением HER2 TDB в отсутствие антитела к HER2.

3. Способ по п. 2, в котором целевой/внеопухолевый эффект представляет собой симптом легочной токсичности.

4. Способ по п. 3, в котором симптом легочной токсичности выбран из группы, состоящей из интерстициального заболевания легких, острого респираторного дистресс-синдрома, одышки, кашля, утомляемости и легочных инфильтратов.

5. Способ по п. 2, в котором целевой/внеопухолевый эффект выбран из группы, состоящей из повышенного уровня печеночных ферментов, сухости во рту, сухости глаз, мукозита, эзофагита и симптомов со стороны мочевыделительной системы.

6. Способ по любому из пп. 1-5, в котором повышение терапевтического индекса связано со снижением вероятности испытания иммуногенного побочного эффекта по сравнению с лечением HER2 TDB в отсутствие антитела к HER2.

7. Способ по п. 6, в котором иммуногенный побочный эффект выбран из группы, состоящей из повышенного уровня антител к лекарственному средству, связанной с инфузией/введением реакции (ARR), дисфункции сердца, легочной реакции и синдрома высвобождения цитокинов.

8. Способ по любому из пп. 1-7, в котором HER2 TDB и антитело к HER2 конкурентно связываются с доменом IV HER2.

9. Способ по любому из пп. 1-8, в котором антитело к HER2 содержит вариабельный домен тяжелой цепи (V_H), имеющий по меньшей мере 95% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 7, и/или вариабельный домен легкой цепи (V_L), имеющий по меньшей мере 95% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 8.

10. Способ по п. 9, в котором V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и/или V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8.

11. Способ по любому из пп. 1-10, в котором антитело к HER2 является моноспецифическим.

12. Способ по любому из пп. 1-11, в котором антитело к HER2 представляет собой полноразмерное антитело, содержащее Fc-область.

13. Способ по любому из пп. 1-12, в котором антитело к HER2 представляет собой трастузумаб.

14. Способ по любому из пп. 1-12, в котором антитело к HER2 представляет собой Fc-модифицированный вариант трастузумаба.

15. Способ по п. 14, в котором Fc-модифицированный вариант трастузумаба содержит одну или более аминокислотных модификаций, которые снижают эффекторную функцию.

16. Способ по п. 15, в котором одна или более аминокислотных модификаций представляют собой мутацию замены.

17. Способ по п. 16, в котором мутация замены находится в аминокислотном остатке L234, L235 и/или P329 (нумерация EU).

18. Способ по п. 17, в котором одна или более аминокислотных модификаций включают мутации замены L234A, L235A и P329G (LALAPG).

19. Способ по любому из пп. 1-18, в котором HER2-связывающий домен содержит V_H, имеющий по меньшей мере 95% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 7, и/или V_L, имеющий по меньшей мере 95% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 8.

20. Способ по п. 19, в котором V_H HER2-связывающего домена содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и/или V_L HER2-связывающего домена содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8.

21. Способ по любому из пп. 1-20, в котором CD3-связывающий домен содержит V_H, имеющий по меньшей мере 95% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 15, и/или V_L, имеющий по меньшей мере 95% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 16.

22. Способ по п. 21, в котором V_H CD3-связывающего домена содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15 и/или V_L CD3-связывающего домена содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16.

23. Способ по п. 1, в котором (i) плечо против HER2 в HER2 TDB содержит HER2-связывающий домен, содержащий (а) VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и (б) VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, и (ii) плечо против CD3 в HER2 TDB содержит CD3-связывающий домен, содержащий (а) VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15, и (б) VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16.

24. Способ по любому из пп. 1-23, в котором HER2 TDB представляет собой полноразмерное антитело, содержащее модифицированную Fc-область.

25. Способ по п. 24, в котором модифицированная Fc-область содержит одну или более мутаций замены, которые снижают эффекторную функцию HER2 TDB.

26. Способ по п. 25, в котором одна или более мутаций замены включают мутации в аминокислотных остатках L234, L235 и/или D265 (нумерация EU).

27. Способ по п. 26, в котором одна или более мутаций замены представляют собой L234A, L235A и D265A.

28. Способ по п. 25, в котором одна или более мутаций замены включают мутацию в сайте агликозилирования.

29. Способ по п. 28, в котором мутация в сайте агликозилирования находится в аминокислотном остатке N297 (нумерация EU).

30. Способ по п. 28, в котором мутация в сайте агликозилирования представляет собой N297G.

31. Способ по п. 28, в котором мутация в сайте агликозилирования представляет собой N297A.

32. Способ по любому из пп. 24-30, в котором модифицированная Fc-область содержит мутации замены N297G, L234A, L23 5A и D265A.

33. Способ по любому из пп. 1-32, в котором HER2 TDB содержит один или более константных доменов тяжелой цепи, причем один или более константных доменов тяжелой цепи выбраны из первого домена CH1 (CH1₁), первого домена CH2 (CH2₁), первого домена CH3 (СН3₁) второго домена CH1 (СН1₂), второго домена CH2 (CH2₂) и второго домена CH3 (СH3₂).

34. Способ по п. 33, в котором по меньшей мере один или более константных доменов тяжелой цепи спарен с другим константным доменом тяжелой цепи, причем:

каждый из доменов CH3₁ и CH3₂ содержит выступ или впадину, и при этом выступ или впадина в домене CH3₁ может размещаться во впадине или выступе, соответственно, в домене CH3₂; или

каждый из доменов CH2₁ и CH2₂ содержит выступ или впадину, и при этом выступ или впадина в домене CH2₁ может размещаться во впадине или выступе, соответственно, в домене CH2₂.

35. Способ лечения или замедления прогрессирования HER2-положительного рака у нуждающегося в этом субъекта, включающий назначение субъекту схемы лечения, включающей антитело к HER2 и HER2 TDB, причем (а) антитело к HER2 представляет собой трастузумаб или Fc-модифицированный вариант трастузумаба, и (б) HER2 TDB содержит плечо против HER2 и плечо против CD3,

при этом плечо против HER2 содержит HER2-связывающий домен, содержащий: