Патент ссср 281478

 

ОПИСАНИ Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

И АВТОРСИОМУ СВИДЕТЕЯЬСТВУ

Вогез Соеетскиз

6оциалистическиз

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 19. 1/.1969 (№ 1331094/23-4) Кл. 12q, 6/01 с присоединением заявки №

Приоритет

МПК С 07с 103/52

УДК 547.964.4.07(088.8) Комитет по делам изобретений и открытий при Совете ббинистрое

СССР

Опубликовано 14.1Х.19?О. Бюллетень № 29

Дата опубликования описания 23.Х11.1970

,. ф

Е. A. Морозова и М. A. Зеваиль

Московский ордена Ленина и Трудового Красного Знаме.и государственный университет им. Ломоносова

Авторы изобретения

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕПТАПЕПТИДА

Синтез аналогов антибиотика полимиксина

М с .природной незаменимой аминокислотойлизином (вместо диаминомасляной кислоты) представляет большой интерес, так как известно, что такая замена в низших пептидах приводит к повышению биологической активности, а возможно, и уменьшению токсичности.

Известный классический метод получения пептидов, особенно полифуH1

Меррифилда на хлорметилированном полимере.

Предложен способ получения гептапептида

N" -БОК-N -КБЗ-1-лизил-1 - треонил - N" - пеларгонил-1 -лизил-N- -КБЗ-1 -лизил-1 -треонилN- -КБЗ-лизил-D-лейцина, заключающийся в том, что трет-бутоксикарбонил (БОК) -D-лейцин вводят в реакцию с хлорметилированным полимером и к полученному после снятия защитной группы D-лейцилполимеру присоединяюг в присутствии дициклогексилкарбодиимида последовательно аминокислоты: N"БОК, N- -карбобензокси (КБЗ) -1 -лпз|ин; БОК1-треонин; N= -БОК, N- -КБЗ-1-лизин; N" -пеларгонил, N -БОК-1 -лизин; БОК-1 -треонин;

5 N- -БОК, N" -КБЗ-лизин.

Для получения высокого выхода в каждом цикле оерут 1,5 гиоль последующей аминокислоты. Все побочные продукты реакции и избыток исходных аминокислот отделяют от не10 растворимого пептидполимера промыванием растворителями (например, спиртом, днокса.ном, тетрагидрофураном и др.). Гептапептид отделяют от смолы обработкой водноспиртоBbDI раствором щелочи, например водномета15 нольным раствором NaOI- После подкисления лимонной кислотой и соответствующей обработки получают гептапептид с выходом 77%, считая па D-лейцин, присоединенный к полимеру.

20 Пример. 5 г хлорметнлированного полимера и 3 г БОК-лейцина кипятят 48 час в абсолютном этилацетате с 1,8 игл абсолютного трнэтиламина. БОК-1г-лейцил-полимер переносят в реакционный сосуд, в котором .прово25 дят все операции, связанные с наращиванием пептндной цепи. БК-защитную группу удаляют 10%-ным раствором HCI в абсолютном диоксане. Смолу промывают абсолютным диоксаном и спиртом, нейтрализуют полученный

30 хлоргндрат 10%-ным раствором триэтиламина

281478

Составитель А. Акимова

Редактор Л. Г, Герасимова Техрд Л. В. Куклина

Корректоры: М. Коробова и А, Николаева

Заказ 3514j2 Тираж 480 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Ж-35, Раушская наб„д. 4j5

Типография, пр. Сапунова, 2 в диоксане и снова промывают смолу диоксаном и метаном. По весу полученного хлоргидрата триэтиламина определяют, что к 5 г смолы присоединилось 43% БОК-D-лейцина (0,006 моль) .

Гептапептид получают последовательным присоединением к лейцилполимеру аминокислот: БОК, КБЗ-L-лизина; БОК-треонина; БОК, КБЗ-L-лизина; N" -пеларгонил, БОК-лизина;

БОК-L-треонина; N" -БОК, N- -КБЗ-1 -лизина.

Раствор 0,01 ноль N" -БОК, ¹ -КБЗ-1-лизина в 20 лл тетрагидрофурана (ТГФ) и

0,01 моль дициклогексилкароодиимида в 10лл

ТГФ смешивают при — 20 С и быстро добавляют к D-лейцилполимеру. Реакционную смесь перемешивают до полного набухания полимера и оставляют на ночь при 20, после чего. раствор фильтруют (с насосом) и пептидполимер промыва я-бутанолом, нагретым до 50 С, для извлечения дпциклогексилмочевины.

Гептапептид отделяют от смолы обработкой метанольным раствором NQOH. После подкисления лимонной кислотой и соответствующей обработки получают и-гептапептид N" -БОКN - КБЗ-L-лизил-1 -треонил-N" - пеларгонил?.-лизил-N- -КБЗ-1 -лизил-L-треонил-N -КБЗL-лизил-D-лейцин с 77%-ным выходом, считая на D-лейцин, присоединенный к полимеру; т. пл, 108 С (метанол — эфир); (a)» — 17,0 С; хроматографически однородное соединение.

Найдено, %: С 59,46; Н 7,89; N 10,07.

С-„Н„-,Ы„О„. 2Нво, Вычислено %: С,59,88; Н 7,94; N 10,11.

Предмет |изобретения

1. Способ получения гептапептида N" -БОК, 10 N= -КБЗ-L-лизил-1 -треонилМ -пеларгонил-1лизил-N- -КБЗ-1 -лизил-1 -треонил-N -КБЗ-1лизил-D-лейцина, отличающийся тем, что Nзащищенный D-лейцин подвергают взаимодействию с хлорметилированным полимером и

15 далее присоединяют последовательно соответствующие аминокислоты известным методом, например карбодиимидным, с последующим отделением целевого продукта от полимера обработкой щелочью.

20 2, Способ по п. 1, отличающийся тем, что присоединяемые:к D-лейцилполимеру аминокислоты берут в количестве 1,5 моль.

3. Способ по,пп. 1 и 2, отличающийся тем, что N-защитные БОК-группы удаляют обра25 боткой 10%-ным раствором НС1 в абсолютном диоксане.

4. Способ по пп. 1 — 3, отличающийся тем, что целевой продукт отделяют от полимера обработкой метанольным раствором щелочи.