Способ получения комплекса пектолитических и целлюлолитических ферментных препаратов

 

О П И С А Н И Е 29384б

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 16.1!1.1970 (№ 1412202/28-13) с присоединением заявки № 1411438/28-13

Приоритет

Опубликовано:13.IX.1972. Бюллетень № 27

Дата опубликования описания 9.Х.1972

М. Кл. С 12d 13/10

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

УДК 577.15,07(088.8) ВСЕСОЮЗНАЯ а Т -хЕИИьЕ"ИАЙ

Авторы ЬИБЛИО ° ЕКА изобретения Н, М. Трофименко, Н. П. Тихонова, Х. В. Альман, М. А. Кублицкая и H. А. Рябцева

Заявители Отдел микробиологии АН Молдавской ССР и Всесоюзный научноисследовательский институт виноделия и виноградарства «Магарач»

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСА ПЕКТОЛИТИЧЕСКИХ

И ЦЕЛЛЮЛОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ

Изобретение относится к ферментной промышленности, а именно к способу получения комплекса пектолитических и целлюлолитических ферментных препаратов.

Известен способ получения комплекса пектолитических и целлюлолитических ферментных препаратов путем выращивания продуцентов Botrytis cinerea на питательной среде, содержащей свекловичный жом и отруби, с последуюгцим выделением ферментов и их сушкой.

Целью изобретения является ускорение процесса получения ферментных препаратов.

Для этого в качестве продуцента используется штамм Botrytis cinerea № 20.

Выращивание штамма Botrytis cinerea № 20 можно осуществлять глубинным способом на среде, содержащей 2% свекловичного жома и 1% отрубей.

В питательную среду можно дополнительно вводить 0,5% кукурузного экстракта, 0,6% сернокислого аммония и 0,2% однозамещенного фосфорнокислого калия.

Выращивают гриб Botrytis cinerea № 20 на питательной среде следующего состава %: свекловичный жом 2, отруби 1, кукурузный экстракт 0,5, сернокислый аммоний 0,6, однозамещенный фосфорнокислый калий 0,2. Первичную расплодку готовят в колбах на качалке при 280 об/лтин при 28 С в течение 48 час.

Этой расплодкой в количестве 5% засевают инокулятор-фермент емкостью 100 л. Здесь выращивание продолжается еще 24 «ас при тех же условиях с принудительной подачей воздуха в количестве 1 объема на 1 объем питательной среды в час.

Полученным посевным материалом в количестве 5% засевают производственные ферментеры емкостью 500 л, в которых процесс выращивания гриба длится 72 час. При этом в культуральной жидкости идет накопление пектолитических ферментов. Состав питательной среды и условия выращивания остаются теми же.

15 Культуральную жидкость отделяют от мицелия на путч-фильтре и затем сепарируют для лучшей очистки. Полученный фильтрат охлаждают от 10 до 12 С (чем ниже температура, тем лучше). Одновременно охлаж20 дают и спирт ректификат, который используется в качестве осадителя. Затем обе жидкости смешивают в пропорции 1: 4 (крепость смеси 76 ) при естественном рН культуральной жидкости, т. е. 4,5. Через несколько ча25 сов образовавшийся осадок отделяют сепарированпем, промывают спиртом и окончательно выделяют на нутч-фильтре. Сушку производят на открытом воздухе при комнатной температуре. Выход препарата 0,5%. По внешнему

ЗО виду это порошок серого цвета с пектолитиче293846

Таб чипа 1

Размер м а кро кониди й, мк

Количество конидий, OO

Средний размер из 200 конидий

Средний

Минимальный

Максимальный

Форма конидий ширина длина длина ширина длина ширина

6,7

4,5

9,0

11,2

9,0

9,0

31,5

14,5

21,5

32,5

9,0

7,6

10,0

10,8

6,9

7,6

5,5

6,3

3,4

4,5

4,5

4,5

11,2

11,2

13,5

15,7

Овальные

9,69

6,52

Шаровидные

Эллипсоидальпые

7,8

9,0

Яйцевидные

Таблица 2

Питательные среды

Мясо-пептонный агар

Показатель

Солодовый сусло-агар

Среда

Чапека

Голодный агар

Слабое

Обильное

Очень слабое

Слабое

Слабое

Обильное

Слабое

Обильное

До 200

Много

До 150

МзлО

4,5 — 13,5

Нет

До 50

Иного

До 150

Много

4,5 — 11,2

Нет

7,7 — 13,5

Нет

Нет ской активностью 4600 ед/г (объемный медный метод Херсона Л. А., 1965 г.), с активностью пектинэстеразы 34,6 ед. (метод Лившиц), активностью полигалактуроназы 103 ед (метод Лившиц), протеолитической активностью, равной 13,2 ед/г (по гамма-глобулину) и целлюлолитической активностью (Ст и С,-) соответственно равной 28 и 300мг/г (радуцирующие сахара определяют по методике Шомодьи Нельсона).

Полученный препарат представляет комплекс ферментов, который был использован в винодельческой промышленности при изготовлении красных столовых, десертных и белых десертных виноматериалов. Штамм № 20 выделен из пораженных серой гнилью ягод сорта Зант белый в 1962 г. в колхозе «Россия» Советского района Крымской области.

Культивирование гриба проводят на агаризованном солодовом сусле.

Штамм характеризуется следующими морфологическими и физиологическими свойствами. Окраска колоний темно-серая. Мицелий относительно слабо развит. Конидиеносцы невысокие (2 — 4 мм), плотно и равномерно расположены по всей поверхности колонии. Спороношение очень обильное. Склероции в культуре отсутствуют. Аппрессории средне развиты, в виде черного тонкого окаймления у стекла по краям колонии, Макроконидии чеРазвитие мицелия

Спороношение (макроконидии)

Количество спор в головках

Микроконидии

Толщина конидиеносцев

С клероци и тырех форм: овальные, шаровидные, яйцевидные и эллипсоидальные, собраны в кистевидные головки.

В табл, 1 показаны форма и размер микроконидий (на солодовом сусле-агаре).

Кроме макроконидий, выполняющих основную роль в распространении заболевания, штамм Botrytis cinerea № 20 формирует микроконидии до 2 — 3 мк диаметром, собран10 ные в головки различной формы и величины, которые крепятся на конидиеносцах пенициллоидного типа.

При выращивании культуры гриба штамма

15 № 20 на разных питательных средах выявились некоторые различия в культурально-морфологических признаках. В табл. 2 показано влияние условий питания на морфологические признаки штамма № 20.

20 Биологические особенности штамма. Установлено, что очень интенсивное развитие штамма № 20 наблюдается при 16 — 27 С н по сравнению с другими разновидностями штамм № 20 является наиболее термофиль25 ным. Кроме того, он является единственным штаммом, который при низкой температуре (3 С) образует конидиеносцы с конидиями, а при оптимальных для его развития условиях дает очень обильное спороношение. Развитие

30 гриба прекращается при 29 С.

293846

Предмет изобретения

Составитель В. Дунье

Редактор 3. Твердохлебова Техред Л. Богданова Корректор В. )Колудева, Заказ 3033, 3 Изд. № 1262 Тираж 406 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретспий и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4,/5

Типография, пр. Сапунова, 2

1. Способ получения комплекса пектолитических и целлюлолитических ферментных препаратов путем выращивания продуцентов

Botrytis cinerea на питательной среде, содержащей свекловичный жом и отруби, с последующим выделением ферментов и их сушкой, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса, в качестве продуцепта используется штамм Botrytis cinerea № 20.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что выращивание штамма Botrytis cinerea № 20 осуществляют глубинным способом.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что среда содержит 2% свекловичного жома и

% отрубеи

4, Способ по llH. 1 и 3, отличающийся тем, что в питательную среду дополнительно введено 0,5 ф куку 1)узного экст1)акта, 0,6% сер

10 нокнслого аммония н 0,2% однозамещс нного фосфорнокнслого калия.