Способ количественного определения я-парафиновых углеводородов в биоматериалв

 

ОП КСАН И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

332134

Союз Совейких

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства ¹

Заявлено 21.XI I.1966 (¹ 1122156!23-4) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 14.111.1972. Бюллетень № 10

Дата опубликования описания 18.IV.1972

М. Кл. С 12k 1/00

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

УДК 661.715.2:54.3.062 (088.8) Авторы изобретения

Д. И. Кузнецов и Н. Л. Гришина

Институт питания Академии Медицинских Наук СССР

Заявитель

СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Н-ПАРАФИНОВЫХ УГЛЕВОДОРОДОВ В БИОМАТЕРИАЛЕ

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к методам количественного определения и-парафиновых углеводородов в биоматериалах, пищевых продуктах, нефтепродуктах, сточных и природных водах.

Известен способ количественного определения углеводородов в биоматериале путем экстрагирования их растворителем, упаривания выделенной фракции, хроматографического выделения углеводородной фракции на силикагеле вымыванием ее, например, четыреххлористым углеродом и последующего определения количества углеводородов в упаренном фильтрате взвешиванием. Такой способ длителен; при использовании его не происходит полного выделения н-парафинов, так как клеточный материал перед экстракцией растворителем не разрушается. Кроме того, применение взвешивания при количественном определении углеводородов приводит к потере при высушивании углеводородов до 5,0++ 0,9% за счет улетучивания низкомолекулярных углеводородов.

С целью интенсификации процесса и повышения точности определения предложено биоматериал предварительно обрабатывать азотной кислотой и полученный хроматографическим разделением слой и-парафиновых углеводородов элюировать ацетоном.

Количество и-парафпновых углеводородов может быть определено нефелометрическнм способом.

Пример. 1 — 10 г биологического образца помещают в коническую колбу на 150,чл с обратным воздушным холодильником (100—

200 (14 лтл) на шлифе, затем добавляют 20—

25 лтл 11,5 и. раствора азотной кислоты (уд. вес 1,35) и осторожно подогревают на водят0 ной бане при периодическом перемешивании содержимого колбы вращением. В первые минуты наблюдается слабое вспениванше, которое далее становится бурным. При появлении вспенивания колбу снимают с водяной бани на

15 5 — 10 лтин или даже охлаждают водой, а затем продолжают нагревание до просветления раствора и прекращения бурного образования маленьких пузырьков на поверхности жидкости.

Разрушение биоматериала продолжается 20—

20 40 лтин.

Затем раствор охлаждают, разбавляют водой в 2 — 3 разя и экстрагируют 25 лтл гексана (встряхиванпе в течение 3 лтин). Водную фазу отбрасывают, а экстракт промывают 25 лтл во25 ды (встряхивание в течение 3 мин). Аликвотную часть промытого экстракта или весь экстракт (в зависимости от ожидаемого абсолютного содержания н-парафинов в навеске образца), предварительно упаренный до мини30 мального объема на роторном испарителе в

3321,34

Таблица 1

Навеска кормовых дрожжей, г

Навеска кормовых дрожжей, г среднее из двух проб среднее из двух проб1 проба

1, мг проба

2, л г проба

2, мг

% лег мг

0,9994

1,0020

0,9994

0,9995

12,4

12,6

12,4

13,80

1,24

1,25

1,24

1,30

1,0015

1,0042

1,0014

0,9963

12,5

12,6

12,5

13,0

12,4

12,5

12,4

13,0

15,9

15,4

15,8

15,4

15,9

15,4

15,8

15,8

15,9

15,4

15,8

15,6

1,59

1,54

1,58

1,56

1 25. 0 03%

1 57+0 02% вакууме, создаваемом водоструйным насосом, наносят на пластину (18+13 см) с силикагелем КСК, содержащим 5% очищенного гипса (пластину с силикагелем очищают предварительным пропусканием СС!а или смеси диэтиловый эфир — петролейный эфир (1: 1) через слой адсорбепта), и производят распределение в СС1„ за фронтом распространения которого движутся только углеводороды. Проявленную в парах йода полосу углеводородов на хроматограмме очерчивают, а силикагель с углеводородами после испарения йода соскабливают и смешивают с 5 — 10 мл ацетона, после чего слой органического растворителя отделяют фильтрованием через стеклянный фильтр № 3 или 4, промывают силикагель на фильтре ацетоном (2+2 мл), фильтрат переносят в мерную колбу на 10 — 25 мл, доводят объем раствора до метки ацетоном и производят нефелометрпческое определение углеводородов по модифицированному методу Лурье и Щербакова, предложенному для определения нефтепродуктов.

В колбу объемом 10 — 15 л л, содержащую соответственно 6 илп 15 мл раствора пищевого желатина (1 мг/мл) в 0,5%-ном растворе

СНзСООН, вводят 0,5 или 1,0 мл ацетопового испытуемого раствора и тем же раствором желатина доводят объем до метки. Далее содержимое колбы взбалтывают и через 15 них производят измерение на ФЭК (светофильтр

На йдено углев одородов в дрожжах без добавки

Таким образом, в случае введения добавки — 0,3% смеси углеводордов в кормовые дрожжи, содержащие 1,25 +- 0,03% углеводородов, при разрушении кормовых дрожжей азотной кислотой обнаруживают 1,57+- 0,02% углеводородов.

Газохроматографическое сравнение состава смеси углеводородов до Il после нагревания с азотной кислотой дано в табл. 2.

¹2,,толщина кюветы 1 см) . Концентрацию углеводородов находят по стандартной калибровочной кривой, построенной в координатах (100 †) % — С, Калибровочную кривую получают для концентраций смеси углеводородов

25, 50, 100, 200, 300, 400, 500 л кг, вводимых в ацетоновом растворе в колбу на 25 л л в том же порядке, что и испытуемый раствор, причем содержание ацетона в каждом стандарте

10 должно быть одинаковым.

Найденное по стандартной калибровочной кривой значение концентрации углеводородов делят на 0,8 для того, чтобы учесть потери прн

15 хроматографическом отделении углеводородов и объективные ошибки метода нефелометрии.

Чувствительность пефелометрического метода определения углеводородов 2 л(кг/л л.

20 Продолжительность анализа по предлагаемому способу не больше 4 час. Ни>кний предел определения абсолютного количества н-парафинов в образце составляет 250 мкг, если вымытую с пластины смесь н-парафинов раст25 ворнть в 10 мл ацетона, отобрать 1 мл этого раствора и приготовить исследуемый раствор с >келатином B мерной колбе на 10 л л нли пикномстре.

30 Результаты определения количества я-парафинов в искусственных смесях с кормовыми дрожжами представлены в табл. 1.

Найдено углеводородов в дрожжах с добавкой 0,3%

Как видно из таблицы, при обработке азотной кислотой разрушения отдельных углево35 дородов не происходит.

Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает полное выделение н-парафиновых углеводородов из растительных и животных

40 клеток, является быстрым, эффективным и чувствительным, не требует специальной подготовки образца к анализу.

332134

Предмет изобретения

Таблица 2

Состав смеси углеводородов, используемых в процессе биосинтеза, Углеводород до нагревания после нагревания

Составитель Л. Русанова

Техред Е. Борисова

Редактор 3. Горбунова

Корректор О. Тюрина

Заказ 930(5 Изд. № 405 Тираж 443 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, 7К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

c„

c„ с„,Сы

c„

С а

С г

Сг

Сг1

Сгг

Сгз

Изо-С о

Изо-Сг

Изо-Сгг

3,2

9,8

14,5

15,5

15,2

12,3

10,7

7,8

5,8

3,7

1,6

2,0

8,7

14,3

15,6

15,4

12,4

11,1

7,4

4,2

0,9

Следы

Возможные отклонения при газохроматографическом определении содержания индивидуальных углеводородов, 35,5

10,0

8,5

9,0

6,0

3,5

2,0

4,0

10,0

11,5

27,5

9,0

12,0

12,5

1. Способ количественного определения я-|парафиновых углеводородов в биоматериале путем экстрагирования их растворителем, упаривания выделенной фракции, хроматографического разделения четыреххлористым углеродом на силикагеле и последующего определения количества н-парафиновых углеводо10 родов известными способами, отличающийся тем, что, с целью интенсификации процесса и повышения точности определения, биоматериал предварительно обрабатывают азотной кислотой и полученный хроматографическим разде15 лением слой н-парафиновых углеводородов элюируют ацетоном.

2. Способ ио и. 1, отличающийся тем, что количество н-иарафиновых углеводородов оп20 ределяют нефелометрическим способом.