Способ получения инсулина

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

32832

Союз Соеетских

Социзлистичесних

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 05.VI II.1969 (№ 1356889/31-16) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 21.1ll.1972. Бюллетень № 11

Дата опубликования описания 271Ч.1972

Кл. А 61k 17/04

Комитет оо лелем изобретеиий и отнрытий рри Сосете Мииистроо

GCCP

К 615.361.37(088.8}

Авторы изобретения

С. Б. Катковский, С. И. Шварц, Э. С. Шубинская, Г. Е. Турецкая, Г. В, Волкова, Л. А. Белоцерковская, П. П. Неугодов, Г. А. Рябцев, В, М. Царенков, Н. М. Рукина, А. Б. Зарецкая, Г. К. Фролова, Г. И. Губская и А. В. Юк

Всесоюзный научно-исследовательский институт антибиотиков и Минский завод эндокринных препаратов

Заявители

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНСУЛИНА

Изобретение относится к .производству терапевтически активных препаратов.

Известны способы получения инсулина экстракцией поджелудочной железы подкисленным спиртом, осаждением балластных веществ и их отделением с последующим высаливанием и кристаллизацией конечного продукта.

Цель изобретения — повышение активности и увеличение выхода инсулина. Это достигается тем, что экстракт обрабатывают хлористым кальцием при рН 3,3 — 3,5, осаждают балластные вещества при рН 4,3 — 5,3 и далее процесс ведут известными приемами.

Пример 1. 1 кг измельченной поджелудочной железы заливают 3 л 82 -ного спирта, подкисленного 30 мл ортофосф орной кислоты (уд. вес 1,67) до рН 2,8 — 3,2, и экстрагируют при перемешивании и температуре 16 С в течение 3 час. Экстракт отделяют центрифугированием, а остаток повторно экстрагируют

1,5 л 65 -ного спирта, подкисленного 3 мл ортофосфорной кислоты, в течение 2 час. К экстрактам добавляют 12,5%-ный аммиак до рН

3 5, а затем 20%-ный раствор хлористого кальция (по 15 мл на 1 л экстракта). Через 10—

15 мин раствор подвергают разделительной фильтрации. В фильтрате устанавливают значение рН 4,3 — 4,7 добавлением 12,5%-ного раствора аммиака или 5 н. раствора едкого натра, оставляют на 2 час, отделяют прозрачный раствор сифонированием и отфильтровывают осадок. В прозрачном растворе добавлением

5 30%-ной серной кислоты устанавливают значение рН 3,2 — 3,5 и после отстаивания в течение 2 — 3 час упаривают в вакууме. Водный концентрат обезжиривают и высаливают инсулин — сырец, очистку которого осуществляют

10 известными приемами. Выход 2556 ед/кг, активность 24,7 ед/мг.

Пр и мер 2. Экстракцию и обработку экстрактов до установления рН 3,2 — 3,5 ведут, 1s как.в примере 1. Полученный раствор со скоростью 150 мл/час/см фильтруют через колзнку с катионитом СДВ-3Т в Н-форме (на 1 л экстракта 20 мл набухшей смолы). Катионит промывают 65 -ным спиртом и водой, урав20 новешивают аммонийацетатным буферным раствором при рН 6 5 и элюируют инсулин 0,25н. раствором аммиака, содержащим ацетон. Элюат подкисляют до рН 26, добавляют ацетон до концентрации 33%, доводят рН до 4,5 — 4,8, 25 фильтруют и вновь повышают рН до 6,1 — 6,2.

К раствору добавляют уксуснокислый цинк. устанавливают рН 5,9, отделяют осадок и кристаллизуют его в 0,05 М цитратном буферном

332832

Составитель В. Таратута

Редактор И. Михайлова

Техред 3. Тараненко Корректор В. Жолудева

Заказ 1034/5 Изд. Ко 471 Тираж 448 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр, Сапунова, 2

3 растворе. Выход 3100 ед/кг, активность

25,5 ед/мг.

Предмет изобретения

Способ, получения инсулина экстр акцией поджелудочной железы подкисленным спиртом, осаждением балластных веществ и их отделением с последующим высаливанием и кри.сталлизацией конечного продукта, отличаюи ийся тем, что, с целью повышения активности инсулина и увеличения его выхода, экстракт обрабатывают хлористым кальцием при рН

s 3,3 — 3,5, осаждают балластные вещества при рН 4,3 — 5,3 и далее процесс ведут известными приемами.