Прибор для электрофореза биологического материала в полиакриламидном геле

 

оюз„„ Ее

ОПИС

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

337684

Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 15 1Ъ,1970 (№ 1427690.28-13) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 05 V1972 Бюллетень № 15

Дата опубликования описания 7Х1.1972

М. Кл. G 01п 1/18

Хамитет по делам изобретеиий и открытий при Совете Министров

СССР

УДК 663.14.033 (088.8) Авторы изобретения Б. А. Устинников, В. Л. Яровенко и Г. А. Ермолин

Заявители Всесоюзный научно-исследовательский институт продуктов брожения и

Всесоюзный институт гельминтологии им. акад. К. И, Скрябина

ПРИБОР ДЛЯ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА БИОЛОГИЧЕСКОГО

МАТЕРИАЛА В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ

Изобретение относится к области исследований методом фракционирования биологического материала.

Известен прибор, содержащий концентрично размещенные цилиндр ические стеклянные сосуды с расположенным между ними полиакрил а мидным гелем, д ве кюветы с буфер1ным

ipBcTBopoM и cHlcIåìó охлаждения.

Детал и этого прибора связаны с помощью резьбового соединения. Однако такое соединение на стеклянных деталях ненадежно, сложно в изготовлении и неудобно при частой разборке и сборке.

Цель изобретения †ускорен сборки и разборки прибора, а также упрощение его конструкции.

Это достигается тем, что прибор снабжен двумя фасонными крышками и стягивающимися болтами. Крышки имеют отверстия для прохождения буферного раствора в гель и канавки для циркуляции охлаждающей жидкости.

Кюветы расположены таким образом, что одна из них непосредственно укреплена на верхней крышке, а другая, заполненная буферным расствором, сообщена с нижней.

Кроме того, систему охлаждения выполняют в виде змеевиков, смонтированных на крышках.

На чертеже показан прибор, продольный разрез и сечение по А — А.

Концентрические стеклянные цилиндры 1, 2 и 8 прибора расположены между двумя фасонными крышками 4 и 5, которые стягиваются болтами б. Диаметры внутреннего цилиндра

1 и цилиндра 2 подбирают таким образом, чтобы толщина кольцевого пространства 7 между ними была не более 8 лтл. Это пространство заполняют полиакриламидным гелем, который и является рабочим слоем, где про1О изводится электрофорез и фракционированпе белков как по электрофоретической подвижности, так и по величине молекул.

Гель во время работы охлаждается водой, поступающей в цилиндр 1 по каналу 8 и ухо15 дящей по каналу 9, которые расположены в крышках 4 и 5. Омывая внутреннюю поверхность цилиндра 1, вода охлаждает кольцо гсля с внутренней стороны. Для охлаждения геля с наружной стороны воду подают в кольце20 вое пространство между цилиндрами 2 и 8 по каналу 10, а отводят по каналу 11 в крышках

4 и 5. В последних имеются сквозные отверстия 12, через которые гель контактирует с верхним и нижним буферным раствором.

25 Буферные растворы находятся в верхней 13 и нижней 14 кюветах, выполненных из оргстекла. Прозрачность всего прибора необходима для того, чтобы можно было наблюдать движение свидетеля-маркера сквозь слой геля сверху

30 вниз под действием разгпщы потенциалов, 337684

Кювета 18 прикреплена к крышке 4 прибора болтами 15, а кювета 14 стоит на столе и ее горизонтальное положение регулируют установочными винтами. Кювета 18 имеет крышку

1б, к которой прикреплена стойка 17. На стойке закреплен электрод из платиновой проволоки. В кювете 14 имеется также платиновый электрод, укрепленный на подставке 18 из оргстекла. В кюветы при работе прибора заливается буферный раствор. Уровечь буферного раствора в нижней кювете таков, что прибор погружен в него на 1/3.

Так как металлические части не должны соприкасаться с буферным раствором, то нижняя часть болтов б окружена специальными втулками 19 из оргстекла, которые приклеены к крышке 5. Уплотнение между крышками и цилиндрами создается прокладками из пористой резины, вставленными в пазы. Для охлаждения буферного раствора во время работы установлен змеевик 20 из стекла, аналогичный змеевик расположен и в нижней кювете.

Прибор ратотает следующим образом.

Сначала заливают рабочие растворы геля, рабочие растворы с катализаторами по методике, аналогичной а нал итическому д иековому эле ктрофорезу, но только в больших объемах. Так, при наружном диаметре внутреннепо цилиндра 100 мм, .вы соте рабочего слоя гQJIH 100 irb1t H TOJII+HHe eI O 8 AAf, объем геля составляет около 280 с», После полимеризации растворов на крышке

4 закрепляют кювету 18 и заливают буферные растворы в верхнюю и нижнюю кюветы. Через отверстия 12 с помощью шприцев наносят испытуемый раствор и подают воду для охлаждения в цилиндр 1, в кольцевое пространство между цилиндрами 2 и 8 и в змеевики верхней и нижней кювет. После этого подают напряжение на электроды соответствующих кювет и проводят электрофорез по методике, а налогичной аналитичес ко му диоково му электр оф орезу.

После проведения опыта прибор разбирают и из него извлекают весь кольцевой пласт полиакриламидного геля, который разрезают.

Можно вырезать один или несколько столбиков и окрасить их на белок. Полученные зоны

1р вырезают, элюируют и затем подвергают исследованию.

С помощью такого прибора можно в течение одного опыта разделить около 1 г белка

НВ фракции, различающиеся как по электро15 форетической подвижности, так и по величине молекул.

Предмет изобретения

20 1. Прибор для электрофореза биологического материала в полиакриламидном геле, содержащий концентрично размещенные цилиндрические сосуды с расположенным между ними полиакриламидным гелем, две кюве25 ты с буферным раствором и систему охлаждения, отличающийся тем, что, с целью ускорения сборки и разборки прибора, а также упрощения его конструкции, он снабжен двумя фасонными крышками, стягивающимися

30 болтами и имеющими отверстия для прохождения буферного раствора в гель, а также каналами для циркуляции охлаждающей жид:KQIcTH, .при этосом кнхветы раоположены так, ччо одна из них непосредственно укреплена

35 на верхней ирыыке, а др утая, за полненная буферным;ра ст вором, сообщена с нижней.

2. Прибор по п. 1, отличающийся тем, что система охлаждения представляет собой змеевики, смонтированные на крышках.

337684

А — А

Составитель С. Могилевский

Техред Л. Богданова

Корректор Л. Бадылама

Редактор T. Рыбалова

Типография, пр. Сапунова, 2

Заказ 1536/12 Изд. № 675 Тираж 448 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий прн Совете Министров СССР

Москва, K-38, Раушская наб., д. 4/5