Питательная среда для выращивания serratia marcescens 44 — продуцента нуклеазы

 

О П И С А Н И Е 340691

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 12.Х.1970 (Мв 1489366!i28-13) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 05Х1.1972. Бюллетень № 18

Дата опубликования описания 23.VI.1972

М. Кл. С 12d 13, 10

С 12о 3100

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

УДК 577.15.08(088.8)

С 1ОР1-г1 АЯ т.т

,ЯрД »Авторы изобретения

М. И. Беляева, Д. В. Юсупова и А. 3. Гарейшин

Заявитель Казанский государственный университет им. В. И. Ульянова-Ленина

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ

SERRATIA MARCESCENS 44 — ПРОДУЦЕНТА НУКЛЕАЗЫ исходный рН среды температур а культивирования, С оптимальная аэрация и перемешивание среды (время ферментации) 7,6

27+ 0,5

48 час

Изобретение относится к ферментной промышленностисти.

Известна питательная среда для выращивания Serratia marcescens 44 — продуцента иуклеазы, содержащая воду и хлористый натрий.

Кроме того, она содержит: глюкозу, сернокислый аммоний, кислотный гидролизат казеина, дрожжевой экстракт, двузамещенный фосфорнокислый калий, ма гний сернокислый и железо сернокислое.

Цель изобретения †увеличение выхо и повышение активности готового препарата.

Предложенная питательная среда для получения препарата нуклеазы содержит воду и хлористый натрий в количестве 0,5 г, глицерин, iHTpaT аммония, одпозамещBHHbIH фосфорнокислый калий, сернокислый магний,сернокислое железо, гидролизат казеина, дрожжевой автолизат.

Среда прозрачная, имеет светло-коричневый цвет.

У казанные компоненты введены в количестве, соответспвен о равном, 5; 5; 10; 0,5; 0,05;

1; 3 на 1000 мл воды. Причем рН среды равно

7,6.

Подготовка, посевного, материала.

Культуру Serratia marcescens 44 выращивают сутки в пробирках со окошенной агар изованной средой вышеуказанного состава, смывают 0,5 /о-,ньпл физиологическим раствором, засевают в объеме 1 мл в колбах со 100 мл жидкой среды вышеуказанного состава и выращивают |при постоянном встряхивании

5 (200 об/мин) в течение 10 — 12 час.

Подготовленный таким образом посевной материал засевают в ферментер из расчета

500 тысяч — 1 млн. микробных клеток на 1 мл среды.

10 Количество клеток в среде определяют на

ФЭК-М54 с красным фильтром в 3-миллиметровых кюветах; 0,2 единицы оптической плотности соответствует 1 млрд микробных клеток в 1мл.

15 Условия культивирования, оптимальные для образования нуклеазы:

25 По окончании ферментаци и культур альную жидкость подвергают ценцрифу ги рованию для отделения от микробных клеток. Нуклеазу очищaIcT методом фракционного насыщения сульфатом аммония с |последующей хроматогра30 фией.

340691

Предмет изобретения

Составитель М. Ларина

Текред 3. Тараненко

Корректор Т. Китаева

Редактор А. Бер

Заказ 1843/18 Изд. № 824 Т ира>к 448 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

При м ер. Соответствующим образом подготовленный посевной материал засевается из расчета 500 тыс.— 1 млн. микробных клеток на

1 мл среды.

Ферментация проводится 48 час при 27 С при постоя ином перемешивании и интенсивной аэрации. Оптическая плотность среды, измененная на ФЭК-М54 с красным фильтром в

3-миллиметровых кюветах, за 48 час инкубации достигает 1,8 — 2,0 оптических единиц, дезоксирибонуклеазная (ДНК) активность 50—

60 тысяч виокозиметричеоких единиц на 1 мл или 7,5 мкм расщепленного субстрата ДНК в мин/мл.

Бактериальные клетки отделяются центрифутированием. Фермент из надосадочной жидкости очищается осаждением сульфатом аммония с последую щей хроматографией на колон|ке с ДЭАЭ целлюлозой и сефадексом У-100.

1. Питательная среда для выращивания Serratia marcescens 44- продуцента нуклеазы, содержащая воду и хлористый натрий в количестве 0,5 г, отличающаяся тем, что, с целью yiaeличения выхода и активности фермента,:продуцируемого Serratia marcescens, питательная среда дополнительно содержит глицерин, цитрат аммония, однозамещенный фосфорнокислый калий, серно кислый магний, сернокислое железо, гидролизат казеина, дрожжевой автолизат.

2. Питательная среда по,п. 1, отличающаяся тем, что указанные компоненты введены в количестве, соответственно равном, 5; 5; 10; 0,5;

0,05; 1; З,г на 1000 мл воды.

3. Питательная среда по п. 1, отличающаяся тем, что рН среды равно 7,б.