Способ выращивания листерий

 

и с сMh . . и

1 тзл1 .. би6 и н., „, ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскик

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства № ь ,.-= сф т,"Фг "i --

М. Кл. С 12ê 3/00

Заявлено 08.V1.1971 (№ 1667141/30-15) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 20.III.1973. Бюллетень № 15

Дата опубликования описания 9Х1.1973

Комитет по делает изобретений и открытий

l1pN Совете Министров

СССР

УДК 576.8.093.3(088.8) Авторы изобретения

Л. И. Трусова и Л. Я. Телишевская

Заявитель

СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ JlHCTEPHA

Изобретение относится к спосооам культивирования микроорганизмов.

Изгестпы способы выращивания листерий на мясо-пептонном бульоне, бульоне Хоттингсра, мясо-пептонно-печепочно-сахаро-глицериновом бульоне и мясо-пептонно-печеночносахаро-глицериновом агаре.

Однако эти питательные среды дают сравнительно невысокое накопление бактериальной массы.

Цель изобретения — увеличение накопления бактериальной массы в IIHTBTcëüíîé среде.

Для осуществления предложенного способа в мясную питательную среду вводят соединения, выбранные пз ряда органических кислот (лимонная, малеиповая, малоновая, трансаконптовая и пировиноградпая).

Способ осуществляется следующим образом. Л стерильные колбы с питательной средой (МППСГБ и й!ППСГЛ) перед засевом культуры, например Listeria monocytogenes штамм АЗНИВИ, стерильно вносят добавки органических соединений в следующих концентрациях (на 100 мл среды), %: лимоннокислого натрия 0,7 — 2,7; малеиновой кислоты

0,4 — 1,2; малоновой кислоты 0,4 — 1,2; трансаконитовой кислоты 0,7 — 2,7; пировиноградной кислоты 0,45 — 0,.90.

Добавки органических кислот готовят следую11им образом: 1) 33%-пый раствор IHмоннокислого 3-замещенного — 20 г натрия лимоннокислого (чд.а или х.ч.) растворяют в 40 мл дистиллированной воды;

5 2) 20%-ный раствор малеиновой кислоты—

1О г малеиновой кислоты растворяют в 20 мл дистиллированной воды и нейтрализуют примерно 20 мл 30%-ной ХаОН до нейтральной реакции (по индикаторной бумаге);

10 3) 20% -| ыЙ рВсТВОр малоповой

10 г малоповой кислоты растворяют в 20 ил дистиллированной воды и нейтрализуют примерно 20 лтл 30%-пого раствора NaOH до нейтральной реа«ции;

15 4) 33%-ный раствор трансаконптовой кислоты — 10 г трансаконитовой кислоты нейтрализуют примерно 24 мл 30%-ного раствора АаОН до нейтральной реакции;

5) 43% -ный раствор пировиноградной «ис20 лоты — 30 мл пировинсоградной кислоты нейтрализуют примерно 40 лил 30%-ного р",ñòâîра ХаОН до нейтральной реакции.

Все растворы кислот стерилизуют в течение 30 мии при 0,5 атм.

25 .(ультуру лпстсрпй засевают во флаконы из расчета 1 мл культуры па 100 лтл среды.

Культивирование проводят прп 37 С в течение 22 — 24 час.

Сращкительные определения накопления

30 бактериальной массы листерий в контроле и

374373

МППСГА

МППСГБ

Концентрация, %

Добавки

0,561+0,277

0,757+0,473

0,447+0,163

0,610+0,326

1,98

2,64

0,439+0,218

0,565-+0,344

0,386 вЂ,165

0,552-1-0,331

Натрий лимоннокислый

1,20

Малеиновая кислота

Малоновая кислота

1,20

1,32

2,64

Трансаконитовая кислота

Контроль

Пировиноградная кислота

Контроль

0,221

0,284

0,462+0,212

0,90

0,250

Примечание. Š— экстинкция и ЬŠ†увеличен экстинкции о сравнению с контролем, флаконах с добавками органических кислот показали увеличение накопления этой массы в среднем в 2 — 2,5 раза.

Пр имер 1. Во флаконы с МППСГБ перед культивированием листерий добавляют стерильно 20%-ный раствор малеиновой кислоты из расчета 6 мл раствора на 100 мл среды (1,2%). В полученную среду вносят 1 мл бульонн ой культуры листерий, После культивирования в течение 24 час при 37 С определяли оптическую плотность выросшей культуры на нефелометре ФЭК-М (кювета 5 мм) против контроля состоящего из 5л л МППСГБ и 0,3 мл 20%-ного раствора малеиновой кислоты (1,2%).

Полученную оптическую плотность сравнивали с оптической плотностью контрольной среды без добавок. Контрольную культуру колориметрировали против МППСГБ без добавок:

E — опыта — 0,757

Е контроль — 0,284

ЛŠ— 0,473, т, е. добавление в МППСГБ

1,2% малеиновой кислоты увеличивает накопление биомассы на 166,6% или в 2,66 раза.

Пример 2 для трансаконитовой кислоты.

Во флаконы с МППСГБ перед культивированием листерий добавляли стерильно 33%ный раствор трансаконитовой кислоты из расчета 4 мл раствора на 100 мл среды (1,32%). В полученную среду вносили 1 мл бульонной культуры листерий. После культивирован ия в течение 24 час в термостате при

37 С определяли оптическую плотность выросшей культуры на нефелометре ФЭК-М (кювета 5 мм1 против контроля, состоящего из 5 мл МППСГБ и 0,2 мл 33%-ного раствора трансаконитовой кислоты (1,32%). Полученную оптическую плотность сравнивали с оптической плотностью контрольной среды без добавок, на которой листерии выращивались в тех же условиях. Контрольную культуру колориметрировали против МППСГБ без добавок.

Максимальное накопление биомассы наблюда. ется при концентрациях добавок, приведенных в таблице.

Е опыта — 0,610

E контроля — 0,284

ЛЕ=0,326, т. е. добавление в МППСГБ

1,32% трансакопитовой кислоты увеличивает накопление биомассы на 114,8%

Пример 3. для иировиноградной кислоты.

Во флаконы с МППСГА перед культивированием листерий добавляли стерильно 43%ный раствор пировиноградной кислоты из

35 расчета 2,1 мл на 100 мл среды (0,91%). Затем в среду вносили 1 мл бульонной культуры листерий. После культивирования в течение 24 час в термостате при 37 С определяли оптическую плотность выросшей культуры

40 на нефелометре ФЭК-М (кювета 5 мм) против контроля, состоящего из 5 мл МППСГА и 0,1 мл 43%-ного раствора пировиноградной кислоты (0,91% ) . Полученную оптическую плотность сравнивали с оптической плотно45 стью контрольной среды без добавок, на которой листерии выращивались в тех ке условиях. Контрольную культуру колориметрировали против МППСГА без добавок:

Е опыта — 0,462

50 Е контроля — 0,2оО

ЛЕ =0,212, т. е. добавление в МППСГА

0,91% пировиноградн ой кислоты увеличивает накопление биомассы на 84,8%.

55 Предмет изобретения

1. Способ выращивания листерий, включающий культивирование их на мясных питательных средах, отличающийся тем, что, с це60 лью увеличения накопления бактериальной массы листерий, в питательную среду вводят соединения, выбранные из ряда органических кислот, таких как лимонная, малеиновая, ма-. лоновая, трапсакоцитовая и пировиноградная, 65 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, Составитель Р. Махнюк

Техред Е. Борисова

Редактор H. Данилович

Корректор Г. Запорожец

Заказ 1657/18 Изд. № 357 Тираж 467 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 что органические кислоты берут в следующих концентрациях из расчета на 100 ил среды, в %:,:

Лимоннокислый натрий 0,7 — 2,7

Малеиновая кислота

Малоновая кислота

Трансаканитовая кислота

Пировиноградная кислота

0,4 в 1,2

0,4 в 1,2

0,7 — 2,7

0,45 — 0,00