Питательная среда для выращивания продуцента витамина bis propionibacterium shermanii

Авторы патента:

C12P19/42 - кобаламиныв, т.е. витамин B₁₂, LLD фактор

C12N1/20 - бактерии; питательные среды для них

366739

ОП ИСАНИ Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советсних

Социалистинесних

Республин тГт 2 т, 1-г;:

J i

Ч. Кл. С 12d 5/06

Зависимое от авт. свидетельства %в

Заявлено 1?.111.1971 (Xp 1636055/28-13) .- -ф афр@ф» с присоединением заявки . Й

Приоритет

Опубликовано 22Х.1973. Бюллетень Хе 22

Дата опубликования описания 8Л2111.1973

Комитет по делам изобретений и отнрытий при Совете Министров

СССР

УДК 663.11(088.8) Авторы изобретен»я

Г. А. Бонаруева, Л. И. Воробьева, В. Н. Максимов и Н. С. Егоров

Московский государственный университет им. М. В. Ломоносова

Заявитель

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ ПРОДУЦЕНТА

ВИТАМИНА В,g PROPIONIBACTERIUA1 SHERMANII

Изобретение относится к области микробиологической промьппленности, а точнеевЂ” к питательным средам для выращивания продуцента витамина B» Propionibacterium shermanii.

Известна питательная среда для выращивания продуцента витамина В» Propionibacterium shermanii, содержащая глюкозу, сернокислый аммоний, кукурузный экстракт, хлористый кобальт.

Предлагаемая питательная среда содействует увеличению выхода продукта и стабилизации рН среды. Это достигается тем, что питательная среда дополнительно содержит фосфат-лимонный буфер в концентрации

0,1 вЂ” 0,8 М.

Пример. К 16,47 лт г 0,8 М ХаеНРОе 2Н О (142,4 г/л) приливают 3,53,ил 0,4 М (84 г/л) лимоннои кислоты (СоНв07НеО), рН при этом 7.

Любую питательную среду, например, следующего состава (в /о): глюкоза 4, кукурузный экстракт 4 (по сырому весу), (NH<)>SO„

0,3, NaHPO4.2Í20 11,75, лимонная кислота (СоНвОтНеО) 1,48, СоС12 10 (мг/л), готовят, взяв все компоненты среды в двойной концентрации; затем их растворяют в воде, нейтрализуют и сливают с приготовленным буфером в соотношении 1: 1. При этом получают среду, содержащую 0,4 М фосфат-лпмонный буфер. Применяемая концентрация лимонной кислоты обеспечивает элективность среды.

Культивирование бактерий проводят на среде, принятой в производстве витамина Виь но приготовленной на фосфат-лимонном буфере (0,4 М) как описано выше. Состав среды следующий (в p): глюкоза 4, (ХН4) в804 3, кукурузный экстракт 4, СоС1

M 10 (лг/л).

Образование витамина В» и биомассы сравнивают при развитии культуры на этой же среде (но приготовленной на водопроводной воде) с нейтрализацией кислот бикарбонатом натрия и без нейтрализации кислот.

Полученные результаты представлены в табл. 1.

Из данных. представленных в табл. 1, следует, что использование буфера приводит к накоплению биомассы и витамина В» в том же и даже большем количестве, чем на производственной среде с нейтрализацией кислот. Так, при нейтрализации кислот образуется 10,9 лткг/лтлг витамина В», а при

25 использовании фосфат-лимонного буфера

1 3 лгк2/ли 1.

В случае необходимости емкость буфера может быть изменена путем изменения концентраций входящих в него компонентов (см.

30 табл. 2) .

366739

Т 5блппа 1

Накопление витамина В, и биомассы в зависимосг55 от условий культивирования бактерий

Вптамп5 Впп .5пгг, л.7

Б5!Омясса

„jID1llческпй метод

Микроб".оло5В5ческ; и метод определен я,5 С Л О В! 1 55 I< i ll h T f I II I I P 0 B 3 i I l I 51

2,7,7 определения

13,1

Прп добавлении 0,4 N фосфат-лимонного буфера

10,7

10,1

Прп нейтрализации бпкарбонатом натрия

9,7

10,9

10,3

Без добавления буфера и бпкарбоната натрия

1,8

5,6 пе определено

Данные табл. 2 показывают, что при увеличении концентрации буфера до 0,6 М рН не падает ниже 6,5 в течение трех суток. При использовании 0,4 М буфера рН не падает ниже

6, следовательно, нет необходимости в добавлении щелочи, как по известному способу.

Количество биомассы и витамина В5., образованное к пятым суткам развития культуры во всех вариантах опыта и в контроле примерно одинаковое (количество биомассы в контроле 7,41 г/г и вита5мина В5г 9,0 лгкг/л,г).

5 Буфер 0,6 N несколько удлиняет лаг-фазу, поэто5му лучше использовать буфер ОА М концентрации.

Таблица 2

Изменение рН, накопление витамина В,, и биомассы в зависимости от концентрации буфера рН за гас

Б. :тамии

В ип л7кг/ль 7

Биомасса, Концентрация буфера

2 7

При добавлении буфера ни разу не наблюдалось зара>кения культуры посторонней микрофлорой. Более того, при инокулировании различных сред смешанной культурой пропионовых бактерий и споровой микрофлорой наблюдалось развитие только пропионовых бактерий. Рост споровых форм был подавлен.

На производственной среде состава, описанного выше, приготовленной на фосфат-лимон10 ном буфере 0,4 М, получены результаты, приведенные в табл. 3.

Таблипа 3

Изменение рН, накопление витамина В„ и биомассы в зависимости от условий культивирования бактерий

Витамин В„, .57к27 .5ьг рН за вас

Биомасса за час

VC.IGBII 55 культивирования

24 48

120 0

96 120

120

Прп нейтрализации бикарбонатом натрия

6,9

6,2

6,05

5,25

5,55

5,0

0,99

1,86 6,36

8,26

9,7

8,7

10,9

При добавлении буфера

6,9

6,5

5,25 0,91

5,4

5,9

1,28 5,2

8,15

9,45 10,1

1,13

Без добавления буфера и бикарбоната натрия

6,9

4,8 0,91

4,9

6,5

4,85

4,8

1,70 4,88

5,3 5,66

5,25

1,8

0,3 М

0,5 М

0,4 М

0,5 М

0,6 N

Контроль

6,8

6,4

6,5

6,6

6,7

5,5

5,7

6,0

6,2

6,5

7,25

7,41

7,35

7,25

7,41

9,0

10,6

10,2

10,5

9,0

366739

Предме г изобретения

Составитель Г. Субботина

Техред Г. Дворина

Редактор P. Киселева

Корректор Н. Стельмах

Заказ 2148/1 Изд. № 1517 Тираня 467 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, 5К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

Как видно из табл. 3. фосфат-лимонный буфер создает благоприятные условия для развития культуры и образования витамина В».

В течение первых трех суток рН не падает ниже 6,0, в то время как в варианте без добавления буфера и щелочи рН падает до 4,8, что приостанавливает развитие культуры. Выход витамина В» и биомассы на среде с добавлением буфера выше, чем в случае нейтрализации кислот бикарбонатом.

Питательная среда для выращивания продуцента витамина B» Propionibacterium shermaпй, содержащая, вес. %: глюкозу 4, сернокислый аммоний 0,3, кукурузный экстракт 4, хлористый кобальт 10 (лг/.1), остальное вода, отличаюи1аяся тем, что, с целью увеличения выхода продукта и стабилизации рН среды, она

10 дополнительно содержит фосфат-лимонный буфер в концентрации 0,1 вЂ” 0,8 Ч.