Способ выделения комплекса бацитрацина

Авторы патента:

витель Иностранцы Ласло Жарка, Ева Мадь Иштван Хорват, Габор Амбрус, Гула Колар, Иштван Иншефи, Иштваи Шандор, Ласло Гоша, Ференц Варга , Ласло Белла Венгерска Народна Республика

C12P21/04 - циклические или мостиковые структуры пептидов или полипептидов, например бацитрацина (содержащих только циклические -S-S- связи C12P 21/02)

Сок1з саветскик

Социалистических

Республик

М ПАТЕНТУ

Зависимый от патента ¹

М. Кл. С 120 9 12

С 07О 11/00

Заявлено 06.1Ч.1970 (№ 1426995/3i0-15) Приоритет

Комитет по делам

УДК 615.779.9(OSS.8) Опубликовано 15.Ч.1973. Бюллетень ¹ 21

Дата опубликования описания 20.Ч11.1973 изобретений и открытии при Совете Министров

СССР

Авторы изобретения Иностранцы

Ласло Жарка, Ева Мадьяр, Иштван Хорват, Габор Амбрус, Гула Колар, Иштван Иншефи, Иштван Шандор, Ласло Гоша, Ференц Варга и Ласло Белла (Венгерская Народная Республика) Иностранное предприятие

«Хииоин джогишер еш вегьежети термекек гьяра» (Венгерская Народная Республика) 1

Заявитель

СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ КОМПЛЕКСА БАЦИТРАЦИНА

ИЗ ФИЛЪТРАТА КУЛЬТУРАЛЪНОЙ ЖИДКОСТИ

БАКТЕРИИ-ПРОДУЦЕНТА

Изобретение относится к способам выделения антибиотика бацитрацина, синтезируемого микроорганизмами Вас. subtilis и Вас. lichenformis, в особенности к способам, при которых комплекс бацитрацина выделяют путем осаждения.

Известен способ выделения комплекса оацитрацина из фильтрата культуральной жидкости бактерии-продуцента, при котором комплекс бацитрацина осаждают алкил- или арилсульфонатом или диизонафтилсульфонатом. При этом получают продукт с содержанием бацитрацина от 14 до 20%. Кроме того, для выделения бацитрацина требуется применить вспомогательное фильтрующее вещесгво.

Для повышения выхода бацитрацина по предлагаемому способу осаждение производят воднорастворимой солью конденсата формальдегиднафтилинсульфокислоты, причем, при значении рН от 2 до 9 вЂ” предпочтительно ее щелочной солью, а при значении рН от 5,5 до

9 вЂ” в присутствии солей двухвалентных металлов.

Бацитрацин, легко растворимый в воде, с конденсатами формальдегиднафталинсульфокислоты образует в кислой водной среде нерастворимый комплекс, и этот комплекс в присутствии двухвалентных солей металлов также нерастворим н водной среде. Выгоднее выделять бацитрацин из нодных растворов, чем известными средствами осаждеш1я. Для этого образуют с кондепсатами 1рормальдепзднафталинсульфокислоты трудно растворимый, но легко осаждаем ы!1 ост1док с содержанием C)i3цитрацина значительно большим, чем н известных осадках. B качестве осадителя берут смесь конденсатов формальдеп1днафталин10 сульфокислоты с различным числом знеш ен, причем, степень конденсации находится н интервале числа звеньев от 2 до 9.

Большим преимуществом изобретения яв15 ляется образование осадка без добавлен»1 двухналентного металла 13 кислой среде в интервале значений рН от 2 до 5,5. Можно также конденсат формальдеп1днафталинсульфокислоты и соль двухвалентного металла одно20 временно вводить н раствор бацитрацина. В этом случае лучше устанавливать значение рН выше 5,5, предпочтительно между 7 и 8.

Выпавший осадок отделяют фильтрованием и высушивают, Содержание бацитрацина н по25 лученном таким способом продукте почти совпадает с количеством бацитраципа, находившимся н фильтрате.

Этот продукт можно непосредственно использовать для кормления животных, 381227

Составитель М. Дранишников

Редактор О. Филиппова Техред Е. Борисова Корректор Н, Аук

Заказ 2028/14 Изд. Ке 532 Тираж 467 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, )K-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

Пример 1. В 500 мл фильтрата, содержащего 232 ед./мл бацитрацина со значением рН 3,5, вводят 6 мл 33%-ного водного раствора конденсата формальдегиднафталинсульфокислоты (тамол 1U.N.O.) и 1 г сульфата цинка.

При помощи 40 /о-ного раствора едкого патра рН раствора доводят до 7,5 .Смесь, содержащую осадок, перемешивают 30 мин и фильтруют. Осадок сушат в вакуумсушильном шкафу при 45"С. Получают 5,3 г продукта, содер кащего 41,8 /о бацитрацина, что составляет

95,7 /, содер>кания бацитрацина в исход |ом фильтрате.

Пример 2. В 500 мл фильтрата, содер>кащего 321 гд/мл бацитрацина со значением рН 3,5, добавляют 6 мл 33%-ного водного раствора конденсата формальдегиднафталинсульфокислоты (кортамол iU.N.Î.) и 1 г сульфата цинка. При помощи 40 /о-ного раствора едкого натра устанавливают значение рН раствора на уровне 7,6. После 30 мин переме шивания осадок отфильтровывают и сушат в вакуумсушильном шкафу при 45 С. В результате получают 7 г продукта, содержащего 47 /о бацитрацина. Этот продукт сохраняет 100% активность исходного фильтрата.

Пример 3. В 500 мл фильтрата, содержащего 321 ед./мл бацитрацина, полученного ферментацией (рН 6), добавляют 6 мл ЗЗо/оного водного раствора конденсата формальдегиднафталинсульфокислоты (кутамол N.N.O.) и 1 г сульфата цинка. Затем при помощи 40 ного раствора едкого натра рН раствора доводят до 7,7 и после 30 мин перемешивания отфильтровывают осадок. Осадок сушат в вакуумсушилке при 45 C. Получают 7,75 г продукта, содер>кащего 41 /, бацитрацина, что сп4 ставляет 98,7о/о бацитрацина, содержащегося в исходном фильтрате.

Пример 4. В 500 мл фильтрата, содержащего 321 ед./мл бацитрацина, имеющего ферментационное происхо>кдение, добавляют

6 мл 33 /о-ного водного раствора конденсата формальдегидчафталинсульфокислоты (кутамол N.N.O.). Затем при помощи 25о/о-ного раствора серной кислоты рН доводят до 3. Вы10 павший осадок фильтруют и затем сушат в вакуумсушилке при 45 С. Получают 7,55 г продукта, содержащего 42 /о бацитрацина. В этом продукте содержится 98,7% бацитрацина исходного раствора.

15 Пример 5. В 2500 мл раствора, содержащего 157 ед./мл бацитрацина, имеющего ферментационное происхождение, добавляют

43 мл 33%-ного водного раствора конденсата формальдегиднафталинсульфокислоты (тамол

20 N.N.Î.). Затем при помощи 10/о-ной соляной кислоты рН доводят до 3,5 н отфильтровывают осадок. Получают 22,2 г продукта, содер>кащего 35,3% бацитрацина. В этом продукте содержится 100 /о бацитрацина, содержавше25 гося в исходном растворе.

Предмет изобретения

Способ выделения комплекса бацитрацина из фильтрата культуральной жидкости бакге30 рии-продуцента путем осаждения, отлича ои1ийся тем, что, с целью получения более высокого выхода бацитрацина, осаждение осуществляют солью конденсата формальдегиднафталинсульфокислоты, причем в интервале

35 рН от 2 до 9 вЂ” предпочтительно ее щелочной солью, а в интервале рН от 5,5 до 9 вЂ” в присутствии солей двухвалентных металлов,

Способ получения иммунодепрессанта циклоспорина а и штамм tolypocladium species свs630.92, продуцирующий циклоспорин // 2112807

Способ получения циклоспорина a высокой чистоты из сырого продукта, содержащего циклоспориновый комплекс // 2182577

Изобретение относится к способу получения циклоспорина А высокой чистоты путем очистки сырого продукта, содержащего циклоспориновый комплекс, путем многоступенчатой хроматографии на силикагеле при высокой загрузке колонны от 10 до 52%, с использованием в качестве элюента смеси толуола с ацетоном в количестве от 10 до 30 об.% или толуола с этилацетатом в количестве от 10 до 35 об.%, циклоспорина А высокой чистоты с содержанием в нем циклоспорина L, U и D менее 0,05% и содержанием в нем циклоспорина В и С < 0,02 об.%, промышленного способа очистки циклоспорина А от сырого продукта, содержащего циклоспориновый комплекс

Гуманизированные антитела, которые распознают веротоксин ii, и продуцирующая их линия клеток // 2217166

Изобретение относится к медицине и касается гуманизированных антител, которые распознают веротоксин II, и продуцирующей их линии клеток

Штамм бактерий b. subtilis - продуцент сурфактина // 2270858

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения биогенного поверхностно-активного вещества сурфактина, обладающего множественной биологической активностью

Светодиодная матрица для освещения планшетов с лунками для клеток и автоматизированная стеллажная система для их обработки // 2315093

Изобретение относится к технике для выращивания тканей растений

Способ и устройство для получения фикоэритрина с высокой оптической плотностью // 2315094

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способам и устройствам для получения окрашивающих веществ, и может быть использовано в пищевой и косметической промышленности, а также при проведении различного рода биологических исследований

Гонадотропный гормон, полученный из беспозвоночных, и его синтез // 2349601

Изобретение относится к биотехнологии, конкретно к получению гормонов, и может быть использовано в разведении беспозвоночных

Рекомбинантная экспрессия белков в двухцепочечной форме с дисульфидным мостиком // 2412253

Пептидный антибиотик бактериального происхождения латероцин, подавляющий развитие микроскопических водорослей // 2430966

Изобретение относится к микробиологии и биохимии, в частности к выделению биологически активных соединений - антибиотиков для борьбы с микроскопическими водорослями

Способ получения циклоспорина а, штаммы гриба sesquicilliopsis rosariensis g.arnold - продуценты циклоспорина а, штамм гриба tolypocladium inflatum - продуцент циклоспорина а // 2066687