Способ получения декстраназы

 

Ь:.

63L:. - 9т:: о) ый > .- t!

О П И С А Н И Е 388408

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К ПАТЕНТУ

Зависимый от патента №вЂ”

Заявлено 19.11.1971 (М 1625616/31-16)

Приоритет 20.П,1970, № 15057/70, Япония

Опубликовано 22,VI.1973. Бюллетень ¹ 28

М. Кл. С 07g 7/028

Государствениый комитет

Совета Мииистров СССР по делам изобретеиий и открытий

УДК 615.779.94 (088.8) Дата опубликования описания 25.Х.1973

Авторы изобретения

Иностранцы

Инносуке Абе, Тетсуо Ватанабе, Тсутому Ямадучи н Шинобу Гочо (Япония) Заявитель

Иностранная фирма

«Тойо Дзозо Кабусики Кайся» (Япония) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДЕКСТРАНАЗЫ

Изобретение относится к способам получения ферментов, которые могут найти применение в медицинской практике, Известен способ получения декстраназы, имеющей оптимум осахаривающего действия в слабощелочной зоне (рН 7,0 — 75) и оптимум разжижающего действия .при рН 5,0—

5,4, путем выращивания культуры из рода

Bacteriodes на среде с декстраном с последующим, выделением фермента из культуральной жидкости известными приемами.

Предложен способ получения декстраназы, имеющей оптимум действия в слабощелочной зоне, заключающийся в том, что культуру

Brevibacterium fuseum var. dextranlyticum выращивают в аэробных условиях на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, .при температуре 20 — 30 С и начальном рН среды 8,0 — 9,0 в течение 2—

4 дней, из фильтрата культуральной жидкости целевой продукт выделяют фракционированием ацетоном и очищают хроматографически.

Пример 1. 50 мл среды (рН 85), содержащей (%): декстран 1, полипептон 1, дрожжевой экстракт 0,05, монокалийфосфат 0,1, дикалийфосфат 0,1, гептагидрат сульфата магния 0,1, гексагидрат сульфата марганца

0,005, хлористый кальций 0,002, загружают в колбу Сакагучи и стерилизуют паром при

120 С в течение 20 мин. Затем колбы заливают культурой Brevibacterium fuseum var.

dextranlyticum в количестве 3%, выращенной на той же среде при 30 С в течение 20 час.

Инкубацию ведут при 26 С в течение 60 час при постоянном встряхивании.

10 Культуральную жидкость десяти колб сливают, центрифугируют и получают 450 л1л фильтрата с активностью декстраназы

200 ед/мл.

Фильтрат сгущают под вакуумом до /,15 объема при 40 С и добавляют /2 объема ацетона. Затем полученную смесь центрифугируют. К надосадочной жидкости добавляют

1,5 объема ацетона и снова центрифугируют, Осажденные продукты сушат ацетоном и по2о лучают 2,4 г порошкообразного фермента (выход активного продукта 75% ).

Степень активности полученной лорошкообразной декстраназы 30 ед/л г.

Пример 2. 80 г Биогеля P-30, набухшего при добавлении дистиллированной воды, загружают в колонку с наружным диаметром

3,2 сл .

388408 >

Составитель С. Щенева

Техред Л. Грачева Корректор Л. Новожилова

Редактор Н. Спиридонова

Заказ 2824/13 Изд. Ко 1666 Тираж 523 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открызий прп Совете Министров СССР

Москва, )К-35, Раушская наб., д. 4, 5

Типография, пр. Сапунова, 2

Водный раствор 1 г порошкообразного фермента, полученного по примеру 1, растворяют в 10 мл дистиллированной воды, заливают в указанную колонку и проводят хроматографирование на колонке; в каждой фракции определяют активность декстраназы. Фермент собирают из фракций с высским содержанием фермента и лиофилизируют.

Получают 63 мг порошкообразного фермента (выход 95,5 /p) с активностью декстраназы 455 ед/мг.

Предмет изобретения

Способ получения декстраназы, отличающийся тем, что, культуру Brevibacterium fuseum var. dextranlyticum выращивают в

5 аэробных условиях на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, при 20 — 30 С и на чальной рН среды 8,0 — 9,0 в течение 2 — 4 дней, целевой продукт из фильтрата культуральной жидкости выделяют фракциони ро ваннем ацетоном и очищают хром атогр а фически.