Способ определения противоопухолевой активности лимфоцитов

 

t. I

5IО П И С А Н И Е (и) 420259

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Своз Соейпеееез|

СоциапнстическЮ(Респубпик (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 25.07.72 (21) 1813978/31-16 с присоединением заявки № (32) Приоритет

Опубликовано 05.07,74. Бюллетень ¹ 25

Дата опубликования описания 15.11.74 (51) М. Кл. С 12k 7 00

Государственный квинтет

Соввта Министров СССР по делам нзооретений н открытий (эЗ) Ъ ДК 576 8 097(088 8) (72) Авторы изобретения

Ю. А. Уманский, P. А. Семенова-Кобзарь и Л. Я. Кушко

Институт проблем онкологии АН Украинской ССР (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ

АКТИ ВНОСТИ Л ИМФОЦИТОВ

Изобретение относится к области медицины и касается способов определения противоопухолевой активности лимфоцитов.

Известен способ определения противоопухолевой активности лимфоцитов путем их инкубации с опухолевыми клетками в соответствующих условиях.

Однако необходимым условием осуществления данного способа является предварительная адаптация опухолевых клеток к условиям культуры в течение 1 — 2 месяцев, что делает способ практически не применимым в клинике.

Цель изобретения †ускорен способа.

Для достижения поставленной цели опухолевые клетки и лимфоциты в соотношении не ниже 1: 1 инкубируют в диффузионной камере, которую имплантируют в брюшную полость лабораторного животного.

Существует два варианта предлагаемого способа.

1. Опухолевые клетки и лимфоциты помещают вместе в диффузионную камеру.

II. Опухолевые клетки помещают в один отсек диффузионной камеры, а лимфоциты в другой отсек, отделенный от первого непроницаемым для них фильтром.

Пример. Для опыта берут мышь линии

BALB/С с индуцированной метилхолантреном саркомой. Одновременно с удалением опухоли извлекают регионарные и отдаленные от места развития опухоли лимфоузлы, а также селезенку. Лимфоидные органы помещают в культур альную среду, состоящую из 45% среды 199,45% гидролизата лактальбумина и 10% бычьей сыворотки.

Лимфоциты получают измельчен нем лимфоидных органов в гомогенизаторе Поттера.

Из удаленной опухоли путем трипсинизации 0,05% раствором трипсина на среде

Хенкса получают жизнеспособные изолированные опухолевые клетки.

Полученные клетки — как опухолевые, так и лимфоциты фильтруют через 4 слоя капрона и подсчитывают.

Для опыта применяют диффузионные камеры, состоящие из двух отсеков. На каждое кольцо (диаметр — 0,5; 1,0 и 1,5 см) наклеи20 вают мембранные фильтры (размер пор

0,45 м), которые предварительно трижды кипятят в дистиллированной воде для детоксикации. Приготовленные вышеописанным способом диффузионные камеры стерилизуют

25 кипячением.

В один отсек камеры помещают взвесь опухолевых клеток, а в другой — взвесь лимфоцитов. Таким образом лимфоциты отделены от опухолевых клеток непроницаемым для

30 клеток мембранным фильтром.

420259

Предмет изобретения

Составитель С. Шенева

Техред Л. Богданова

Корректор Л. Орлова

Редактор В. Емельянова

Заказ 3121/2 Изд. М 57 Тираж 456 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр, Сапунова, Z

Камеры тщательно проклеивают (раствор фильтров в ацетоне) по линии соприкосновения колец и имплантируют в брюшную полостьь ж и воти ых.

Все стадии опыта проводят в асептических условиях.

На третьи сутки животных забивают, извлекают камеры и срезанные с колец камеры фильтры фиксируют в течение 20 мин в спиртформоле и хранят в 70о/о-ном спирте, после чего их окрашивают гематоксилином Карр ацци.

В окрашенных, как опытных, так и контрольных препаратах подсчитывают число образовавшихся колоний.

Предложенный способ позволяет определить противоопухолевую активность лимфоцитов в короткие сроки (до 3 суток), что очень важно для определения прогноза и выбора тактики лечения.

Способ определения противоопухолевой активности лимфоцитов путем инкубации коло10 ний опухолевых клеток с лимфоцитами и определения эффективности колониеобразования, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, опухолевые клетки и лимфоциты в соотношении не ниже 1: 1 инкуби15 руют в диффузионной камере, которую имплантируют в брюшную полость лабораторного животного.