Способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты

 

496279

Составитель .В.Жестков

Ре акто дактор H.джа агеттиТехред I Карандашова КоРРектоР Zi.Còåïaíîâ а

Заказ g4 4

Изд. Ж Щ) Тираж 529 Подписное

Ц1111ИГ1И Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, 113035, Раушская наб., 4

11реднрнятне «11атеит», Москва, l -о9, Бережковская наб., 24 еше час. Раствор центрифугируют и те- чение 40 мин при 2500 об/мин. ДНК выделяют из центрифугата осаждением этиловым спиртом;:

Получают 33-38 r ДНК с содержанием 5 основного вещества 90-94% и мол. вес. 10-14 х 10

Пример 2. K 40 л раствора

ДНП в 2 М раствора хлористого натрия, полученного по 1 примеру, при комнатной 10 температуре и интенсивном перемешивании добавляют 0,4 кг размельченного естественного бентонита (заранее суспендированного в 1 л демин, воды) и пере мешивают в течение часа. В реактор 15 загружают 10 кг хлороформа и перемешивание продолжают еше час, после чего раствор центрифугируют при 2500 об/мин в течение 30 мин. ДНК выделяют по примеру 1. 20

Получают 30-34 г ДНК с содержани- ем основного вещества 89-91% и мол. в.

10-12 х 10

Ъ

Пример 3. 1 кг размельченной селезенки перемешивают с 4,0 л дистиллированной воды, добавляют 1,0 кг хлористого натрия и 0,4 кг цитрата натрия.

Экстракцию ДНП проводят при 65-70 С, и непрерывном перемешивании в течение

0,5 час. Раствор охлаждают до 15-20 С д бавляют 1,0 кг хлороформа, перемешио

7 вают в течение часа и центрифугируют

30 мин при 2500 об/мин. Из центрифугата добавлением этанола осаждают сырую ДНК. О адок собирают, растворя 35 ют в 2,5 л 2М раствора хлористого натрия, содержащего цитрат натрия. о

К раствору при 15-20 С добавляют

25 r размельченного естественного бентонита (заранее суспендированного в

30 мл демин. воды) и интенсивно пере- мешивают в течение 1 часа; Добавляют

1 кг хлороформа и перемешивание продолжают еше час. Массу центрифугируют

40 мин при 2500 об/мин. ДНК выделяют из центрифугата осаждением этиловым спиртом. Получают 3,5-4,0 г flHK с содержанием основного вещества 82-85% и мол. в. 6-7х106.

Пример 4. Сырую ДНК, полученную . по примеру 3, растворяют в 2 л

2М раствора хлористого натрия, содержащего цитрат натрия. При комнатной температуре и интенсивном перемешивании до|бавляют 20 г размельченного естественно-!

ro бентонита и перемешивают в течение часа. Добавляют 0,7 кг хлороформа и перемешивают еще час, после чего полученную массу центрифугируют в течение

30 мин при 2500 об/мин.

j1HK выделяют из центрифугата по примеру 3. Получают 3,8-4,5 r ДНК с содержанием основного вещества 80-85% и мол. в. 5-7х106.

Формула изобретения

Способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты из ДНК-содержащего сырья солевой экстракцией с последующим высаливанием белка, депротеинизацией раствора природным бентонитом и хлороформом и выделением целевого продукта известным способом, о т л и ч а ю ш и и с я тем, что, с целью упрощения процесса и повышения выхода целевого продукта, депротеинизацию проводят одновременной обработкой природным неактивированным бептонитом и хлороформом при РН 6,0-7,О в весовом соотношении от 1:25 до 1 40.