Способ получения австралийского антигена

 

О Il И С А Н И Е (и) 545356

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Свез Советскик

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 18.02.76 (21) 2323874/13 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 05.02.77. Бюллетень № 5

Дата опубликования описания 03.03.77 (51) М. Кл. А 61К 35/16

Гасударственный комитет

Сове1а Министров СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 576.8.097.2 (088.8) (72) Авторы изобретения

А. Ф. Блюгер, Е. К. Яворковская и Р. Я. Салениеце

Рижский медицинский институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АВСТРАЛИЙСКОГО АНТИГЕНА

Изобретение относится к области медицины и касается получения чистого австралийского антигена из сыворотки крови доноров, содержащей австралийский антиген.

Известен способ получения очищенной суспензией австралийского антигена, при котором очищаемый образец подвергают два раза ультрацентрифугированию, между которыми проводят ультрафильтрацию (1).

Известен также способ получения австралийского антигена из сыворотки крови, изопикническим связыванием, ио которому сыворотку, содержащую антиген, контактируют с фракцией жидкой среды высокой плотности, затем смесь центрифугируют, отделяют фракцию, содержащую антиген, проводят диализ от солей, после чего снова центрифугируют в константе раствора сахарозы, определяют требуемую фракцию, из которой мо кет быть выделен антиген (2).

Из известных способов наиболее близким к изобретению является способ получения очищенного австралийского антигена из сыворотки крови, включающий предварительную очистку сыворотки высаливанием сульфатом аммония до 50% насыщения, нагревание полученной в осадке смеси до 80 С и центрифугирование в течение 20 мин и окончательное выделение австралийского антигена хроматографией и диализом (3).

Однако все известные способы трудоемки и не обеспечивают высокого выхода целевого продукта.

Цель изобретения — увеличение выхода целевого продукта. Эта цель достигается тем, что высаливание ведут при насыщении 25—

35%, хроматографшо проводят на сефадексе, отбор элюатов осуществляют из восходящей части пика М, а диалпз ведут против дистил10 лированной воды прп температуре 2 — 6 С в течение 48 — 72 час.

Способ получения австралийского антигена осуществляют следующим образом.

15 Сначала проводят высаливание сульфатом аммония при насыщении до 31%. при этом происходит лучшее осаждение глобулинов, которые увлекают с собой австралийский антиген. Затем центрпфугируют смесь при

20 3000 об/мин в течение 40 мин. Полученный осадок, предварительно растворенный в дистиллированной воде, нагревают при температуре 80 С в течение 1 час. Подогретый осадок вновь растворяют в дистиллированной воде

25 для того, чтооы австралийский антиген перешел в воду. Для этого осадок с водой перемешивают в магнитной мешалке в течение

10 мин и снова центрифугируют 1 час. B надосадочной жидкости получают частично очи30 щенный австралийский антиген.

545356

Сост1и1итсд1, С. Над стива

Техред В. Рыбакова Корректор И. Познвковскаи

Редактор Л. Ушакова

Заказ 242/11 Изд. № 407 Тираж 654 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по дедам Il::îoðñòeïèè и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушскаи нао., д. 4/5

ТиповpII(1IIIи. II ). Са1!унова, Выделение австралийского антигена проводят методом хроматографии на колонке сефадекса Г-200. Австралийский антиген присутствует во всех фракциях 1 пика М, причем наиболее чистый антиген и в более высокой концентрации находится в элюатах выходящей части пика М, которые используют для окончательного выделения. В этих э;поатах, кроме австралийского антигена, содержится иммуноглобулин М и а-2-макроглобу.,1ип.

Отделение иммуноглобулина М и J.-2-макроглобулина от австралийского анти. с«а lipoизводят диализом при 4 С в li. icIIIie 48—

72 час (против дистиллированной воды) . При этом в осадок выпадает иммуноглобулин,М и а-2-макроглобулин, а австралийск1ш антпген остается в надосадочной жидкости.

Чистоту полученного препарата австралийского аптигена проверяют любым пз трех методов; методо II и. i муноэлсктрофopеза с iG 10щыо моноспецифическпх антисывороток, "iñтодом дискэлектрофореза в полиакрнлампдном геле, методом изоэлсктрического фокусирования в градиенте рН полпакриламидного геля.

Выделенный антиген после проверки на чистоту не содержит примесей сывороточных белков.

Предлагаемый способ обеспечивает увеличение выхода целевого продукта, а также упрощение технологии получения австралийского антигепа.

Формула изобретения

Способ получения австралийского антигена пз сыворотки крови путем очистки сыворотки высаливанием сульфатом аммония, нагрева10 нпя осадка, центрифугпрования и выделения целевого продукта хроматографией и диализом, оT;Iича ющийся тем, что, с целью уве;;iiчеппя выхода целевого продукта, высаливанпс ве;1ут прп насьпценпп 25 — 35,о, хромато15 графи1о проводят на сефадексе, отбор эл1оатов осуществляют из восходящей части пика М, а дпа Iii; ведут против дистиллированной воды при температуре 2 — б С в течение 48—

72 час. 0

Исто IHIIKII п1 формации, принятые Во внимание при экспергпзе:

1. Заявка Франции М 2150559, кл. А б1К

23, 00, 1973 (аналог) .

25 2. Патент Великобритании М 1356413, кл А 5В 1974 (аналог).

3. J. 1п1ес1. Dis. 4, V 129, р.р. 371 375, 1974 (ilPOTOTIIII) .