Способ отбора животных-доноров клеток красного костного мозга

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ!

1!! 5879! 6

Союз Созетскпк

Социалистических

Республик (б1) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 08.08.74 (21) 2053508/28-15 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 15.01.78. Бюллетень № 2 (45) Дата опубликования описания 23.01.78 (51) М. Кл. А 01К 67/00

Государственный «омитет

Совета Министров СССР (53) УДК 636.4:636.082. . 11 (088.8) па делам изобрете 1ий и OTKpblTNN (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

А. В. Пересадин, Е. В. Михайловская и В. А. Зуев

Всесоюзный научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии (54) СПОСОБ ОТБОРА ЖИВОТНЫХ-ДОНОРОВ

КЛЕТОК КРАСНОГО КОСТНОГО МОЗГА

Изобрстенис относится к области животноводства и ветеринарии, в частности к способам отбора сельскохозяйственных животных, преимущественно свиней.

Известен способ отбора по специфическим белкам сыворотки крови (1). Этот способ рекомендуется использовать с целью установления истинного происхождения животных, и он не позволяет производить отбор доноров клеток красного костного мозга с повышенiIbIM содержанием таких клеток.

Целью изобретения является разработка способа, позволяющего делать отбор при жизни наиболее продуктивных свиней-доноров клеток красного костного мозга для увеличения выхода указанных клеток на 22—

180%.

Цель достигается тем, что производится установление генотипа животных с учетом сочетания медленных типов гаптоглобина с быстрыми типами амилазы и использование таких животных для получения клеток красного костного мозга свиньи.

Установленная зависимость между генетически контролируемыми типами амилазы и гаптоглобинов и выходом клеток красного костного мозга свиней позволяет в течение суток из имеющегося поголовья при жизни животных отобрать наиболее высокопродуктивных доноров, увеличить на 22 — 180% выход указанных выше клеток, уменьшить потребность в животных-донорах, исключать пз убоя низкопродуктивпых по выходу клеток красного костного мозга животных и снизить за счет этого себестоимость получаемой суспензии или культуры клеток.

В результате анализа выхода клеток красного костного мозга (при концентрации

4Х 10 клеток/мл) и генотипа животных по амилазе и гаптоглобину (у 240 подсвинков трехмесячного возраста крупной белой и муромской пород) установлена линейная зависимость между изученными показателями.

От ж11вот11ых, подле кап!1!к сортировке, из хвостовой нли ушной, нлп передней полой вены берется 5 мл крови. После се свертывания сгусток обводится пастеровской петлей или пипеткой, и пробирка со свернувшейся кровью помещается на 1 час в термостат при 37 С, затем на 1 час в бытовой холодильник при

+4 С. Центрифугированпем при 3000 об/мин в течение 5 минут отделяется сыворотка крови, в которой методом электрофореза в 14,5% крахмальном геле (Смитпс, 1955) определяются типы гаптоглобинов и амилазы. Режим электрофореза: 2 — 2,5 v/ñì, б часов, крахмал по Смитису, трис-цитратный гель — буфер и боратно-литиевый электролит по Остергофу (19б3) . После электрофореза гелевую пластин30 ку разрезают на 3 части — фореграммы.

887916

Верхнюю и нижнюю фореграммы окрашивают на гаптоглобины в бензидиновом реактиве (2 г бензидина растворяют в 1 л дистиллированной воды при нагревании до кипения, раствор охлаждают до появления хлопьев и добавляют 5 мл ледяной уксусной кислоты, а перед проявлением гаптоглобинов добавляют

2 мл 33 /о перекиси водорода) в темноте 2—

3 часа. Через 2 — 3 часа читают полосы проявления типов гаптоглобина по скорости движения в геле от анода (— ) к катоду (+).

Самый быстрый тип гаптоглобина (Hp)

Hp 0 — О, затем в порядке убывания скорости движения Hp 1F — 1F, Hp 1 — 1, Hp 2 — 2 и

Нр 3 — 3.

Средняя фореграмма параллельно с первыми двумя инкубируется в термостате при

37 — 38,5 С в течение 3, но не более 18 часов, в 0,1М ацетатном буфере, рН 5,7, на проявление амилазы. После этого гелевую пластинку помещают на 1 час в бытовой холодильник при +4 С в охлажденный 15О/о-ный этанол (этиловый спирт). От этанола фореграмму отмывают теплой водопроводной водой (35—

40 С) и через 15 — 20 минут в проходящем свете читают полосы типов амилазы по скорости движения в крахмальном геле от анода (— ) к катоду (+). Самый быстрый тип амилазы (Am) — Am 1 — 1, затем следуют в порядке убывания скорости: Am 2 — 2, Агп 3 — 3.

После установления генотипа животного по гаптоглобину и амилазе отбираются доноры, содержащие сочетание медленных типов гаптоглобина и быстрых типов амилазы (Hp 3 — 3/Am 1 — 1, Hp 3 — 3 Am 1 — 2, Hp 3 — 3/Am 2 — 2; Hp 2 — 3/Aml — 1; Hp 2 — 3/

Am 1 — 2, Hp 2 — 3/Am 2 — 2, Hp 3 — 1/Am 1 — 1, Hp 3 — 1Am 1 — 2; Hp 3 — 1Am 2 — 2, Hp 3 — 1F/Am 1 — 1, Hp 3 — 1F/Am 1 — 2;

Hp 3 — 1F/Am 2 — 2), для получения указанных клеток. Средний объем клеток красного костного мозга от свиней, содержащих сочетание медленных типов гаптоглобинов с быстрыми типами амилазы, составил 10,0 — 14,0 литров на животное (Р(0,01 — 0,001).

4 животные с сочетанием быстрых типов гаптоглобина с медленными типами амил азы (Hp 0 — О/Am 2 — 3, Hp 0 — О/Am 3 — 3, Нр 0 — 1F/Am 2 — 3, Hp 0 — 1F/Am 3 — 3, 5 Hp 1F — 1F/Am 2 — 3, Hp 1F — 1F/Am 3 — 3, Нр 1F — 1/Am 2 — 3, Hp 1F — 1/Am 3 — 3, Нр 1F — 2/Am 2 — 3, Hp 1F — 2 Am 3 — 3, Hp 1 — 1 Am 2 — 3, Hp 1 — 1 Am 3 — 3; Hp 1 — 2/

Am 2 — 3; Hp 1 — 2/Am 3 — 3, Hp 2 — 2/Am2 — 3;

10 Hp 2 — 2/Am 3 — 3), or которых получают на

22 — 180 /О (от 5,0 до 8,2 литров на животное) клеток меньше (Р(0,01 — 0,002), выбраковываются и используются для других целей.

На чертеже приведена зависимость выхода

15 клеток красного костного мозга от генотипа свиней по гаптоглобину и амилазе крови. Объем клеток в литрах (4Х106 клеток/мл).

Для проведения исследований по установлению генетичносги контролируемых типов

20 амилазы и гаптоглобинов требуется в общей сложности 0,5 мл сыворотки крови свиней, срок определения около 24 час.

Способ рекомендуется для использования в условиях научно-исследовательских учрежде25 ний и хозяйств репродукторов свиней-доноров клеток красного костного мозга.

Формула изобретения

Способ отбора животных-доноров клеток красного костного мозга, преимущественно свиней, включающий установление генотипа животных по специфическим показателям

35 крови, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности отбора доноров, генотип животных устанавливают по сочетанию быстрых типов амилазы крови Am 1 — 1, Am 1 — 2 и Am 2 — 2 с медленными типами ran40 тоглобина крови Hp 3 — 3, Hp 3 — 2, Hp 3 — 1, Нр 3 — 1F.

Источники информации, принятые во внимание при эк".пертизе

1. Авторское свидетельство СССР ХО330842, 45 А 01К б7/00, 1973.

)879) 6

10

0 .4 m 2-2 1-2 2-2 2-2 2 — 2 2 — 2 2 — 2 1 — 2 2 — о

Уб 9 93 13 б 3 б7 8 5

Составитель А. Макаров

Техред А. Камышникова Корректор Е. Жаворонкова

Редактор Н. Аристова

Заказ 2992/11 Изд. № 127 Тираж 778

НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Типография, пр. Сапунова, 2

НР 3-3 3-3 0-1 1 — 2 0-3 1-1 — 1-! 1-1

Генотпипы гаптоглооиноо и амилазы сы3вротки кро3и с3инеи