Способ постановки непрямой гемоагглютинации

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН Ия

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

< >60I003

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 04.06.73 (21) 1931285/28-15 с присоединением заявки ¹â€” (23) Приоритет— (43) Опубликовано 05.04.78. Бюллетень ¹ 13 (45) Дата о публикования .описания 31.05.78 (51) М Кл А 61 В 10/00

Государственный комитет

Совета Министров СССР ло делам изобретений и открытий (53) УДК 576.8.097.34 (088.8) (72) Авторы изобретения

В. А. Клименко и Н. В. Софронов (71) Заявитель Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт (54) СПОСОБ ПОСТАНОВКИ

РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМОАГГЛЮТИ НАЦИ И

Изобретение относится к микробиолог;ш, в ча "тности к способу постановки реакции непрямой гемо аггл1отинации, и может быть ис пользо вано для серологической диагностики инфекционных заболеваний, в частности бруцеллеза.

Известен снособ постановки реакции непрямой гемоа гглютинации (РНГА) по оощепринятой методике, включающий разведение исследуемых сывороток крови забуференным физиологическим раствором с обязательным доба влением к нему стабилизатора — свежей сыворотки здорового кролика для придания среде определенной вязкости (11.

Недостатком извесгного способа является го, что подготовка к постановке реакции требует больших затрат времени на содержание . к роликов и получение от них свежей сыворотки. Кроме того, невозможно стандартизировать этот компонент.

Цель изобретения — удешевление постаН0ВКН pGBKIlHè,è повышение стабильности ее результатов.

Это достигается тем, что в способе постано вки реакции непрямой гемоагглютинации, включающем разведение исследуемых сывороток забуференным физиологическим раствором со стабилизатором, внесение сенсибилизированных эритроцитюв с последующим тщательным перемешиванием и выдерживанием смеси в течение двух часов,при комнатной температуре, в качестве стабилизатора используют глицерин, который добавляют к физиологическому раствору в соотношении 1: 200.

5 Пример Ocуществле1п!Я этого способа.

Реакцию ставят в полистироловых пластинах с луночками. Для реакции необходимы следующие компоненты: формалинизированные эритроциты, сенсибплпзированные антигеном; 50 /о-ные формалинпзированные эритропиты для адсороцпп нормальных агглютининов; контрольные формалинпзпрованные, танизпрованные эритроциты, испытуемые и контрольные сыворотки крови и физиологический

15 забуференный раствор с дооавленпем глицерина в соотношении 1: 200.

Б "е сыворотки, предназначенные для реакции, предварительно разведенные 1: 20, инактивируют при 56" С в течение 30 лик, затем адсорбируют 50%-ными формалинизированными эритроцитами путем смешивания двух капель эритроцптов, на 1 л1л разведенной сыворотки и выдержпвания в термостате при температуре 37 — 38 С в течение часа, с по25 следующим центрпфугированием или отставанием в рефрижераторе 15 — 20 ч.

Отценгрифугированные или отстоявш>иеся

cbIIBopîòêè разливают з лунки .полистироловых пластин в разведениях 1: 20, 1: 40, 1: 80 н т. д.

ЗО до предельного титра. Разведение производят

60IC03

Формула изоб ретесния

Составитель В. Радькова

Редактор Н. Скворцова Текред И, Рыбкина Корректор В. Гутман

Заказ 184/3!5 Изд о 1 11 Тираж 708

НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открыт вй

Москва, 7К-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Тип. Харьк. фил. пред. «Патент» забуференным физиологсическим,раствором с добавление м глицерина в соотношении 1: 200.

В последней лунке пер во41ачальное разведение сыворотки (1: 20) е изменяется.

Во все лунки, кроме послодней, вносят по 5 одной калле сенссибилизированных эритроцитов, а в последнюю — по одной калле контрольных эрнтроцитов.

После тщательного перемешивания пластины оставляют на д|за часа при комнатной тем- 1О пературе. Учет результатов реакции |проводят не ранее чем через два часа. Оценку результато»з реакции проводят IIo четырехкрестовой системе в зависимости от диаметра агглюти национного зонтика. Контролем служит зазе- 15 домо отрицательная и положительная с известным предельным титром сыворотка.

Применение глицерина вместо нормальной кр оличьей сыворотки имеет следующие преимущества: сокращается время на проведение 20 реакции; Ipазница в стоимости нормpëüной кроличьей сыворотки и глицерина медицинского удешевляет массовое исследование сыворотки крови методом РНГЛ.в сотни раз; использование химически стандартного вещестза позво- 25 ляет получить большую степень достоверности и Со IOCTaLIIIIOCTII.

Исследования, проведенные на 984 пробах сыворотки крови крупного рогатого скота на бруцеллез методом РНГЛ с антигеном 1Саз- 30

НИВИ в двух вариантах: в первом г. добавлепнем в качестве стабилизатора нормальной кроличьей сыворотки (1: 100) и во втором— но данному способу- К".çàõñêîãî НИВИ с збазлением стабилизатора глицерииа (1: 200), показали почти полное совпадение реакций в перовом и во .втором вариантах. Всего реагировало в разных титрах 22 пробы, причем у 6 проб имело" ü .расхождение в титрах на одно разведение в сторону увеличения чувствительности в варианте с глицерином.

Способ постановки реакции непрямой гемо:.ããëþòIIíàöèè, включающий разведение исследуемых сывороток забуференным физиологическим ipаствором со стабилизатором, внесение сенси бнлизированных эритроцитов с последующим тщательным персмешиванием и выдерживанием смеси,в течение двух часов при комнатной температуре, отличающийся тем, что, с целью удешсвления постановки реакции и повышения стабильности ее результатов, в качестве стабилизатора используют глицерин, который дооавляют к физиологическому раствору B соотношении 1: 200.

Источник информации, принятый во внимание при экспертизе:

1. Ветеринарная энциклопедия, т. 2, 1969, с. 330 — 331.