Способ биосинтеза микробного инсектицида
ОП ИСАНИ Е
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
К ПАТЕНТУ
Сеюз Советсиик
Сецлаллстмчесинк
Раслублли (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 200576 (21) 2362353/30-15 (51) М. Кл, A 01 И 15/00 (31) (33)
Опубликовано2Ь0579. Бюллетень )) 19
Государственный комитет
СССР но делам изобретений и открытий (ЬЗ) УДК 632 ° 937 °. 15 (088 ° 8) Дата опубликования описания 250Ь79
Иностранцы
Замала Бранимир и Кайфес франйо (Югославия) (72) Авторы изобретения (71} Заявитель
Иностранная фирма
"КРК Компания ди Ричерна Химика С,A. ,(Швейцария) (54) СПОСОБ БИОСИН1 ЕЗА МИКРОБНОГО ИНСЕКТИЦ Д1
16 (23) Приоритет - (32) 3
Изобретение относится к получению микробиологических средстВ защиты растений на основе Bacillus lhuringiengjg, Известно использование укаэанных микроорганизмов для получения инсектицидов. Изучено образование токоинов и кристаллов и их биологическое дей-
;ствие 11) и (2).
Недостатком известных способов получения инсектицидов на основе Бас1 Ьа 10
thu ng ensis является отсутствие строгого контроля процесса ферментации и связанная с этим высокая токсичность готового препарата.
Предлагаемый способ обеспечивает получение спор и кристаллов 3oc.tha nf46fls1s не содержащих экзотоксин, и пОэволяет предотвратить ранний ливис микробных клеток. При реализации спо- 20 соба культуру бактерий для инокуляции получают в качалочных колбах на среде, содержащей (вес.%):
Бакто-TpHnTQH (т пифко1 ю ) 08.25
Глюкоз а 2,5
МАМБО " 7Н20, 0,2
XnSOg 7НтО 0,2
Ре (БО4 )s 0,2
Мп 804 5Нд О 0,1 30
Среда для культивирования на косяках имеет тот же состав, что и описанный выше, йо с добавлением 2% агара.
Хорошие результаты- получают при ферментации на, следующих средах.
Среда 1. Меласса (50% тверцого вещества) 1.4%; дрожжи 0,3%; (ИНе)> S04
0,1%; С.S.L.(жидкость от замоченной) кукурузы) 0,1%; СаСО> 0,1%. Величи на рН после стерилизации 6,8.
Среда 2. Крахмал 1,3; дрожжи 1,0%т
КНаНРОе 0,4%;- С.S.L. 0,2%) СаСО
6,8%1 величина рН после стерилизации
6,8.
Культивирование проводят в ферментерах из нержавеющей стали прн перемещивании 150 об/мин, а аэрацию - с
0;5 л/л/мин. Оптимальная температура» культивирования 28-30 C. Для предотвращения раннего лизиса клеток на (12-ом часу роста прекращают аэрацию на 3-6 час. Культивирование можно проводить и беэ прекращения аэрации, если строго регулировать величину рН и поддерживать ее на уровне не ниже
6, 3 .
Образование спор с освобождением кристаллов э ндотокси на заканчивается, через 3 5 - 4 О ч ас .
664531
Формула йзобретения
После полного выхода спор и эндотоксина проводят отпеление от гаях экзотоксина. Водорастворимый экзоток- син удалявт диализом через полупроницаемую пленку.. освобожденный от экзотоксина про цукт высушивают известными способамиг,5 во вращающейся или пневматической сушилке. путем перемешивания спор и кристаллов с бентонитными глинами и
=введения в сушилку с пластинками при 40-45 С или распыпительным-спосо- 0 бом.
После сушки на пластинчатых установках препарат измельчают в устройст- ве тяпа.Альпина и просеивают через сито с ячейками 9 180. 15
Активность препарата определяют путем вычисления живых спор и при помощи подопытных насекомых.
Пример 1. Культуру Зас.Оипчбгфends var. 3erfinei» культивируют на сре30 де l при 28 С,перемешивании 150 об/мин и скорости аэрации 0,5 л/л/мин. Через
12-14 час . после начала ферментации прекращают азрацию на 3-6 час. Время
" прекращения аэрации определяют с помощью кислородного анализатора и аэрациго прекращают как только уменьшится процесс растворимости и расхода кислорода и рН понизится до 5,8. Через 3-6 час аэрацию возобновляют..
Ферментацию продолжают до тех пор, пока споры и кристаллы не выделяются в среду (35-40 час, ). Далее среду загружают в сборник и очищают от экзотоксина диализом. Культурйгьная жирность переливается в сборник A снабженный смесителем с диализной мембраной. Мембрана:может быть коллоидальной или .иметь другой вид. Диализ ускоряется, если в сборйик.В прибавляют деионизированную воду. К полученной 40 смеси спор и кристаллов добавляют rioрошкообразный наполнитель и высушивают на"пластийках в сушильной печи.Да-
"лее продукт размалывают, размельчают:. в устройстве типа Альпийа и просеива- 45 ют, получая порошок.
Пример 4 2. Способ проводят, как в примере l, однако,3 для фермента-.
:ции используют среду 2.
Пример 3. Способ осуществля- 50 ют, как в примере 1, однако, после
4 ферментации и диализа полученный про дукт сушат в центробежной сушилке и размалывают в устройстве типа Альпина.
Пример 4. Способ проводят, как в примере 1, однако, после ферментации и диалйза продукт опять суспендируют в воде и эту суспензию распыяительно сушат при 90-100 С. Для этой цели используют распылительные сушилки, имеющие диски, вращающиеся со скоростью 10-15 тыс. об/мин.
Преимущества предлагаемого способа состоят s том, что он позволяет получать препарат с повыиенной активностью при высоком содержании спор и эндотоксина, но без,с3 -экзотоксина.
1. Способ биосинтеза микробного инсектицида, включающий культивирование
5acitPus thv3 ingiensis в глубинных условиях, отличающийся тем, что, с целью предотвращения раннего лизйса клеток бактерий, ферментацию временно проводят в анаэробных Условиях, а препарат очищают от экзотоксина дижизом.
2. Способ по п ° 1, отличаюшийся тем, что ферментацию в анаэробыых условиях проводят прекра« щением аэрации на 4-6 час после 12 час с начала ферментации.
3. Способ по пп. 1 и 2, о т л ич а ю шийся тем, что ферментацию бактерий до окончания образования. спор проводят при рН 6,3-7.
4. Способ;по пп. 1, 2 и 3, о т л и ч а ю шийся тем, что инсектицид очйщают от аводорастворимого экзотоксина путем диализа через Фголупро- ницаемую мембрану.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
f. Sebesta K.ef.a_#_ Inhibition of de novo
ЯК34 Synthesis bythe inse4 ticidaC exotox iï
of Sac.t.h53r433g ensis va5 фбЫе3 5ое . СоИее-.
ion Се ЛоС Cheni, Commas . vof.,34, 196 9, р. 1786-1791.
2. Авторское свидетельство СССР
Р 144579 кл, A Ol Н 15/00, 1961.
Составитель М, Мирзаев
Редакто ° Пинч к 2expw Н. Андрейчук Корректор С. Патрушева
Заказ 2824/55 Тираж 754 Подписное.
ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035 Москва Ж-35 Ра скак ааб.. 4 5
Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4
