Штамм н1вт-2

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (áI) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено0 06.78 (21) 2576039/30-15 (5f)hh. Кл.

А 01 N 15/00 с присоединением заявки ¹â€”

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (23) Приоритет— (53) УДЫ 6 3.5 76,8., (088.8) Опубликовано 250979. Бюллетень № 35

Дата опубликования описания 280979 (72) Авторы изобретения

A.И. Козлов, Г. С. Смолин а .и Н. Г. Коваль (Всесоюзный научно-исследовательский институт

7") Зайвитепь микробиологических средств защиты растений и бактери альных препаратов (54) ШТАММ BACILLUS THURIHGIENSIS VAR.

7КЭИЙЧЫЙ315 Н1ВТ вЂ” 2

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и представляет собой новый штамм Bacillus ,Q g pic) yj6vISiQ ОМ Ь Ц Ь п У е и 8 З,,используемый для производства энтомопатогенных бактериальных препаратов инсектина и Комби, основанных на культивировании Вс с1 им s 1иии1ng1en ss 6

1-го серотипа.

В производстве бактериальных энтоиопатогенных препаратов широко ис-пользуют различные штаммы Bacifpug t4lJЬлф6п у3(1) .

В настоящее время микробиологичес<ой промышленностью для наработки ин-15 аектина и Комби используется единственный интродуктивный штамм

Baci0guS thuZingierI Si3 1-го серотипа,который был выделен иэ погибших гусениц чешуекрылых (2).

Дикий штамм Р 1 1 укасяна не соответствует требованиям крупнотоннажного производства, так как в процессе глубинного культивирования проду- 25 цирует вирулентный фаг типа Fi=-13 и дает продукцию низкого качества.

Целью изобретения является штамм

Baciffuc тлийифмба Оа thuzingrensis

Н1ВТ-2, отвечающий всем необходимым требованиям крупнотоннажного стаци/

2 онарного и непрерывно-циклического способов производства инсектина, а также нового энтомопатогенного препарата Комби, который в настоящее время успешно проходит предварительные испытания против многих вредителей сельскохозяйственных культур и леса, в том числе против личинок колорадского жука.

Штамм BaciEPuS thuwrngrenaig pa $hugirryensigH1BT-2 имеет следующие морфологическую и физиологическую характеристики.

Морфологические признаки, Величина клеток в экспоненциальной фазе развития на агаре типа CIIA равна

4,5х2,0 мк. Преобладающая форма палочковидная. На жидких питательных средах в условиях глубинного культивирования клетки подвижные, встречартся в виде коротких и длинных цепей.

Перитрихи грамположительны. В стационарной фазе развития образуют овальные споры размером 2,0 х 1,5 мк и такого же размера белковые кристаллы в виде правильных ромбов.

По Н-антигену штамм Н1ВТ-2 относится к 1-му серотипу BaciP0US 4hu лп— фбл6|Я.:

686708

Сравнительная характеристика продуктивности штамма Н1ВТ-2 и штаммов 69/б (родитель) и E-61 (международный эталон) Н1ВТ-,2 (!

b9/Ф {родитель) 3,0-4,0

1,2-1,8

+ О, 008

Ромб

Лу ковица

Чувстви- . 0, 5 телен

Р9=1А

Ромб

То же

Е-61 (этанол) 1

0,3

1 5-2,0

Не проверяли

Э 1 ВасМщ 1

ingectus Kuk (прототип) 1, 2-1,8

То же

0,9 Физиологические признаки. Оргаиическая среда для размножения— сухой питательный агар (CIIA) в концентрации 3,5-5,0%. Колонии в

R-форме, слегка выпуклые кремового ,цвета. Диаметры колоний 5-суточной культуры могут достигать 0,8-1,2 см.

Пигмента не образует.

Питательный бульон ° Помутнение слабой, затем просветление с образованием вуали через 48 ч, иногда на четвертые-шестые сутки.

Молоко лакмусовое. Пептониэация с. подшелачиванием на поверхности (25-48 ч), затем подкисление и редукция цвета ° Коагуляция непостоянная, на третьи-четвертые сутки с частичным перевариванием. Переваривание сильное на шестые-восьмые сутки °

Картофель ломтиками. Культура сухая серо-кремовая.

Агар-желатина. Зона гидролиза

2-3 см через 48 ч.

Arap-казеин. Через 24 ч зона просветления частичная, но хорошо заметная.

Регламентная дрожжеполисахаридная (ДПС) жидкая питательная среда, используемая для производства энтомопатогенных бактериальных препаратов.Интенсивный рост наблюдается к

10-14 ч культивирования при 28-30 С..

Спорообразование наблюдается к 28-г

32 ч роста. Высыпание завершается к 36 ч роста беэ снижения подачи в ферментер воздуха. Титр жизнеспособных Спор в культуральной жидкости к концу культивирования на обедненO ной ДПС (2% БВК + 1Ъ кукурузной Муки) достигает 2-4 млрд/мл.

Отношение к и сточн икам угле рода.

Усваивает глюкозу,сахароэу,манноэу, целлобиоэу,глицерин,цитраты,оксалаты

5 с выделением газа.Не усваивает маннит, дульцит, инулин, арабийозу, лактозу, сорбит, ацетаты.

Отношение к фагам. Собственные фаги не продуцирует. Устойчив.к (() 5 основным производственным фагам, а также к вирулентным фагам типа

01=13, F9=7, FD=2, Fg =4,Р8 =б и Р9

Проявляет антог они зм к Вас(3 5 5

Qua v iew Si e уаЬ thu6 )i«серотипам

2 4 и 5

Для получения штамма Н1ВТ-2 использовали принцип фаговой конверсии.

Й качестве исходного штамма применяли интродуктивный штамм 5-ro серотипа 69/б, на который воздействовали гомологичньм фагом F =ld методом четырехкратной суперинфекции, следующих друг за другом четырех клеточных поколений. Суперинфицировани осуществляли в условиях глу25 бинного культивирования в качалочных колбах с ДПС, Заражение фагом вели из расчета 2 фаговые частицы на 1 клетку в первом поколении, 20 фаговых частиц на 1 клетку во втором

30 поколении, 50 фаговых частиц в третьем поколении и 70 фаговых частиц в четвертом поколении.

В таблице представлены данные по .продуктивности штамма Н1ВТ-2 в сравнении с данными по продуктивности штам мов 69/б (родитель) и Е-61 (международный. эталон).

686708

Формула изобретения

Составитель М,Мирзаев

Редактор О.Кузнецова Техред С.Мигай Корректор M.Ïoæo

Заказ 5579/4 Тираж 755 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.,д.4/5

Филиал ППП Патент, r.Óæãîðoä, ул. Проектная, 4

Как видно из таблицы, штамм

Н1ВТ-2 отличается от родителя при.надлежностью к серотипу по Н-антигену и формой белковых кристаллов.

Кроме того, штамм Н1ВТ-2 продуцирует на обедненной дрожжеполисахаридной 5 среде до 3,0-4,0 млрд/мл КЖ жиэнеспособйых спор, т.е. вдвое более чем родитель-прототип и эталон. Штамм

Н2ВТ-2 является фагоустойчивым, не продуцирует собственный вирулентный фаг и активнее штамма-эталона в 37 раэ.

@там .. Вос1Ииз . Ис4 йфепЗ Ь цр(ОИИПффщ Н1ВТ-2 используется для Изготовления энтомопатогенных бактериальных препаратов инсектина и Комби,применяемых против насе- 20 комых-вредителей сельскохозяйственных культур и леса. Хранится в коллекции ВНИИбакпрепарат.

Морфологические признаки. Величина клеток в экспоиенциальной фазе 25 развития на агаре типа СПА равна

4,5х2,0 мк. Преобладаюшая форма палочковидная. На жидких питательных средах в условиях глубинного культивирования клетки подвижны, вскоре- 30 чаются в виде коротких и длинных цепей. Перитрихи грамположительны. В стационарной фазе развития образуют овальные споры размером 2,0х0,15 мк и такого же размера белковые крис- 35 таллы в виде правильных ромбов. По

Н-антигену штамм HlBT-2 относится к 1"му серотипу Ьосйбиз Ьа(пфЕпй$ МаГАЬии Пд1ЕтО.

Физиологические признаки, Органи4О ческая среда для размножения-сухой питательный агар (CIIA в концентрации 3,5-5,0В) . Колонии в R-форме, выпуклые кремового цвета „ диаметр колоний 5-суточной культуры может дос- 45 тигать 0,8 1,2 см.Пигмента не образует.

Пйтательный бульон. Помутнение слабое, затем просветление с образованием вуали через 48 ч, иногда на четвертые-шестые сутки.

Молоко лакмусовое. Пептонизация с подшелачиванием на поверхности (24-48 ч), затем подкисление и редукция цвета. Коагуляция непостоянная, на третьи-четвертые сутки с частичным перевариванием. Переваривание сильное на шестые-восьмые сутки.

Картофель ломтиками. Культура сухая серо-кремовая.

Агар желатина. Зона гидролиза

2-3 мм через 48 ч.

Агар-казеин. Через 24 ч зона просветления частичная, хорошо заметная.

Регламентная дрожжеполисахаридная жидкая питательная среда, используемая для производства энтонопатогенных бактериальных препаратов. Интенсивный рост наблюдается к 10-14 ч. культивирования при 28-30 С.

Спорообразование наблюдается к

28-32 ч роста. Высыпание завершается к 36 ч роста без снижения подачи в ферментер воздуха. Титр жизнеспособных спор в культуральной жидкости к концу культивирования на обедненной

ДПС (.2Ъ БВК+1Ъ кукурузной муки) достигает 2-4 млрд/мл.

Отношение к источникам углерода.

Усваивает глюкозу, сахарозу, маннозу, целлобиоэу, глицерин, цитраты, окса.латы с выделением газа. Не усваивает маннит,рамнозу,дульцит,инулин,арабинозу, лактоэу, сорбит и ацетаты.

Отношение к фагам. Собственные фаги не продуцирует. Устойчив к 5 основным производственным фагам, а также к вирулентным фагам типа

F1=13, РР=7, РП=2, F =6, Fg =4 и

Fg =1.

Проявляет антогонизм к Вас Р и5

thun nubian S .5 серотилам 2,4 и 5.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1.Алешина О.A. и др. Биологический метод борьбы с вредителями и болезнями сельскохозяйственных растений, М.: Знание, 1975, с.33-37.

2. Авторское свидетельство СССР

9343674 кл.A 01 N 15/00, 1963.