Способ получения ингибитора трипсина

 

" " о - : а н пата нс г(. ля

Союз Советских

СО4иапистннюсиих

Республик

ОП И

ИЗОБ ц, 698623 (61) Дополнительно (У)м. кл.

А 61 К 37/64 (22)Заявлено 22 05 с присоединением з

Гощдарстввииый комитет

СССР ио делам изобрвтвиий и открытий (23) П риоритет

Опубликовано

Дата опублик (53) УДЬ, 615 45:

:615 5 (088.8) (72) Автор изобретения

И. М. Вайсблай (71) Заявитель

Кишиневский ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им. В. И. Ленина (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНГИБИТОРА ТРИПСИНА

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается получения ингибитора трипсина.

Известен способ получения ингнбитора трипсина из семян гороха путем экстракции раст5 вором серной кислоты, подшелачивания до рН 7, 6, высаливания сульфатом аммония от

20 до 80% насышения, хроматографии на трипсшювой смоле диализом и высушивання (11.

Однако этот способ не обеспечивает высокого выхода ингибитора трипсина (иэ 150 г муки — 1,2 мг).

Пелью изобретения является увеличение выхода целевого продукта.

Эта цель достигается тем, что экстрагирование проводят из семян гороха абиссинского дистиллированной водой„экстракт подкисляют до рН 4,0 — 4,3 и хроматографируют на диэтиламиноэтил целлюлозе при рН 8,15 — 8,28.

На чертеже приведена хроматограмма, поясняюшая предлагаемый способ.

Пример. 150 r гороха абиссинского экстрагируют 1,5 л дистиллированной воды в течение 1 ч при перемешивании. Полученную суспензию цснтрифугируют 30 мин при 5500 g.

Экстракт подкисляют 0,5 Н НС1 до рН 4,0 и снова таким же образом центрифугируют.

Из полученной надосацочной жидкости высаливают сульфатом аммония фракцшо 0-75,Осадок суспендируют в 29 — 53 мл 0,1 í NaC1, рН 8,20, вносят в целлофановые мешки диаметром

2,0 — 2,5 см и диализуют; против дистиллиро. ванной воды рН 8,2 до отрицательной реакщп на сульфат-ион. Ретентат (содержимое целлофановых мешков) центрнфугируют, осадок отбрасывают, а надосэдочную жидкость наносят на колонку с диэтиламиноэтил-целлюлозой (32 х х 40 см), уравновешенной предварительно трис-НС1 буфером 0,025 М, рН 8,20 с ионной силой 0,0135.

Белки элюируют этим же буфером на коллекторе. На полученной хроматограмме видно, что ингибирует трипсин только белок второго пика. Этот белок высаливают, диализуют и ретентат лиофилизуют. Все операции с белками проводят на холоде (4 — 5 С), а хроматографиюпри комнатной температуре (17 — 20 С). Иэ указанного выше количества муки при рН буфера

3 698623

8,20 и ионной силе (,б) соответственно 0,135 выход ингнбитора (из 150 г муки — 35,5 мгполучают 35 мг препарата ингибитора с удель- препарата ингибитора трипсина). ной активностью 1050 мИЕ/мг белка. Злектро Формула изобретения форез и локализация показывают наличие в Способ получения ингибитора трипсина путем нем одного ингибитора. экстрагироваиия измельченных семян гороха, В несколько иных условиях — прн рН 8,15 высаливапня сульфатом аммония, хроматогра(,6=0,0130) получают всего 20 мг препарата фии и диализа, отличающийся с такой же удельной активностью, а при рН тем, что, с целью увеличения выхода целевого

8,28 (4= 0,0141)-20,5 мг препарата, но его продукта, экстрагирование проводят из семян удельная активность 502 мИЕ/мг белка, При рН О гороха абиссинского дистиллированной водой, меньше 8,00 ингибитор не элюируется, а при экстракт подкисляют до рН 4,0 — 4,3 и хромато

8,30 и более он элюируется вместе с основной графируют на диэтиламиноэтил целлюлозе при массой белков экстракта. В прототипе из тако- рН 8,15 — 8,28.

ro же количества муки получают всего 1,2 мг Источники информации, сырого препарата. >5 принятые во внимание при экспертизе

Предлагаемый способ получения ингибитора 1. Weder J. Ногу H„Lebens-Wiss Technoi трилсина из семян гороха обеспечивает высокий 1972, 5, 2, рр. 54 — 63.

mrna

Составитель С. Малютина

7ехред H.Áàáóðêà

Редактор Т. Иванова

Корректор М. Селехман

Тираж 672 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 7121/7

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4