Способ получения поверхностногоантигена гепатита b

 

рц SI862I

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКЬМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Соеетских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 24.05.79 (21) 2770439/28-13 (51) М. Кл.

А 61К 39/29 с присоединением заявки №

1осударстееиный комитет

СССР йо делам изобретений и открытий (23) Приоритет (43) Опубликовано 07.04.81. Бюллетень № 13 (45) Дата опубликования описания 07.04.81 (53) УДК 616-097 (088.8) (72) Авторы изобретения Т. В. Голосова, В. А. Бурлев, E. М. Власихина, А. М. Пф и Ю. А. Семин

Центральный ордена Ленина и ордена Трудового Кр

Знамени научно-исследовательский институт гемат и переливания крови (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОВЕРХЫОСТНОГО АНТИГОНА

ГЕПАТИТ А В

Изобретение относится к области медицины и касается получения препаратов для диагностических исследований.

Известен способ получения поверхностного антигена гепатита В путем обработки плазмы крови соляной кислотой, отделения осадка, обработки надосадочной жидкости полиэтиленгликолем с последующим выделением целевого продукта из полученного осадка и его очисткой путем концентрирования в градиенте плотности сахарозы и диализа (1).

Однако известный способ не обеспечивает высокой стабильности целевого продукта в процессе хранения.

Целью изобретения является повышение стабильности целевого продукта в процессе хранения

Эта цель достигается тем, что полученный после обработки полиэтиленгликолем осадок экстрагируют хлористым натрием, экстракт диализуют, затем подвергают гель-хроматографическому фракционированию, отбирают активные фракции, подвергают их ультрафильтрации, ультрацентрифугированию в хлористом цезии, затем посел диализа подвергают афинной хроматографии, полученный элюат концентрируют, диализуют и обрабатывают аминометилольным соединением формальдегида и е-лейцина.

Способ осуществляют следующим образом.

5 Плазму крови, выбракованную по иммунологическому тесту на НВ,-антиген, с титром 1: 2 — 1: 8 и выше (по данным метода

ВИЭОФ), отделяют от форменных элементов крови при 1500 об/мин в течение 30 мин. ю В случае использования замороженной плазмы ее размораживают и центрифугируют при 8000 об/мин для удаления выпавших нитей фибрина.

Для перевода плазмы в сыворотку ее на1о гревают на водяной бане до 37 С и добавляют тромбин или 2,7%-ный раствор хлористого кальция. Тромбин прибавляют из расчета 1 ед. активности — 1 мл плазмы.

2,7%-ный раствор хлористого кальция смело шивают с плазмой при соотношении 9:1, т. е. на 9 частей плазмы — 1 часть хлористого кальция.

После образования сгустка фибрина его отделяют фильтрованием. К полученной

25 сыворотке добавляют 0,5 н. раствор соляной кислоты до рН 4,5. Выпавший осадой удаляют центрифугированием при

8000 об/мин в течение 15 -20 мин. В последующей работе используют супернатант. К

„о нему при активном перемешивании вносят

878627

Состави ель С. Малютина

Техред А. Камышникова Корректор Р. Беркович

Редактор О. Иванова

Заказ 741 18 Изд. Л. 283 Тираж 694 Подписное

НПО «Поиск» i осударствеиного комитета СССР по дачам изобрегений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

Препарат, обработанный ами ометилольным e !>с.lпнс !!ем форм аль дегида . е-лей-!

ll. . ;i,,» 1>! liяс Ii > .,ун! ",åi!!I÷ñ .вой тва вне ;1 В!!симовTII OT c(IÎI. I>áа I>HC.>он!!я, по (>TliO !!сн!1!!> ° н» Нвн >у белку, не пс>двергн1ему, я»о.«I<1>!! au!III (!!особ позв ляет выделять препарат по-!

>ср !! >ст>:ого антиген;1 гепатита В и! сырья, «(> 1ср>к !11!If > н !!.1 к не !! В ь>сок!!е титры Н Вс анги>сна

11ренарат стаб!>лсп при хранении и 1103воляет хранить его в условиях бь>тового холодиa»;II! a i 4=С) без изменения его антигс>1Н1.1х и иммуногенных свойств и исключаст необхо Ii »:>còü хранения препарата прн н>чзкп . температурах (— 20, — 40, — 196 С, требующих специального оборудования и э>.:1ргоресурсов.

Использование в качестве сырья для получения препарата поверхностного антигена гепат:>та В в! !брак! ванной крови, ñîдержащей ИВ,-антиген, позв>>ляет эконо»1!ть в год от 50 до 100 тыс руб.

Фор»улз Il.>oáðåòñk>ия

Способ и!>луче пя пов! рхно, тного антигена гепатита В путем > бработки плазмы крови соляной кислотой, отделения осадка, обработки надосадочной жидкости полиэт!!с!енгс!икр чем с последующим выделением целевого про 1укта из полученного осад5 !.» и его < >псткой путеч концентрирования в градиенте плотности сахарозы и днализа, отл и ча к>щ и йс я тем, что, с целью повыщения стаби,>ьности целевого продукта и процессе хранения. полученный после об10 работки полиэти !енгликолем осадок экстрагнруют xëîðèñTI k» натрием, экстракт диа.!нзу!1>т, затем подвергают гель-хроматограф1!ческому фракционированию, отбирают активные фракции, подвергают их ультра15 фильтрации, ультрацентрифугированию в в хлористом цезии, затем после диализа подвергают афинной хроматографии, полученный элюат концентрируют, диализуют и обрабатывают аминометилольным соедине20 нием формальдегпда и е-лейци "a.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

25 1. Методические рекомендации «Исследование крови доноров на антиген гепатита В», утвер кд МЗ СССР 11.07.74 г.