Способ получения тромбоконцентрата

 

Сетез Севвтекмк

Сецмалмстмческмк

Рклубллк

ОП ИСАНИ Е

ИЗЬВРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕ ИЛЬ СТВУ (iii833246 (61) Дополнительное к авт. сеид-hy— (22) Заявлено 01.10.79 (21) 2823541 28-13 с присоединением заявки №вЂ” (51) М. Кл.

А61 К35/!4

Веударвтеевй кеавтет

CCC ° ю «аеа вмврвтввк!! к етармта1. (23) Приоритет— (53) УДК 612.111..7 (088.8) Опубликовано 30.05,81. Бюллетень №20

Дата опубликования описания 31.05.81 (72) Авторы мзобрстеиня

И. Л. Лисовская и В. А. Аграиенко

Центральный ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательсйий институт гематологии и переливания крови (7!) Заявлтель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРОМБОКОНЦЕНТРАТА

Изобретение относится к медицине, а именно гематологии и касается получения препаратов из крови для лечения нарушений гемостаза.

Известен способ получения тромбокон-, -центрата путем смешивания крови с антиагрегатом и центрифугирования f1).

Однако известный способ позволяет получить тромбоконцентрат с повышенной адгезивно-агрегационной активностью тромбоцитов.

Цель изобретения — снижение адгезивно. агрегационной активности тромбоцитов.

Указанная цель достигается тем, что способ получения тромбоконцентрата осуществляют путем смешивания сырья с антиагрегантом и центрифугирования, кровь или обогащенную тромбоцитами плазму смешивают с тетрациклином гидрохлоридом в конечной концентрации 100 — 300 мкМ, Способ осуществляют следующим образом.

Кровь или обогащенную тромбоцитами плазму (ОТП) перед центрифугированием обрабатывают тетрацикл ином гидрохлоридом в конечной концентрации !00 — 300 мкМ

2 в течение 05 — 1 ч. 150 мг кристаллического тетрациклина . гидрохлорида растворяют в

50 мл физиологического раствора, а затем к полученному раствору добавляют еще

50 мл 1/15 N раствора N HPO». Раствор тетрациклина гидрохлорида концентрации . 1,5 мг/мл, рН 7,2 добавляют в пластикатные мешки с цельной кровью или ОТП, добиваясь конечной концентрации тетрациклина от 0,07 до 0,2 мг/мл (100 — 300 мкМ). Время преинкубации тромбоцитов с тетрациклином

10 до начала центрифугирования составляет от 30 мин до 1 ч, Центрифугирование производят при обычном режиме. Осажденные тромбоциты не размазываются по стенкам мешка, не слипаются между собой и легко ресуспендируются в оставшейся плазме. !

З Оставляя малые объемы плазмы, можно .получать очень высокие концентрации тромбоцитов (например, !О в кл/мл). Выход клеток составляет 75 — 100 /о. Способ позволяет готовить тромббконцентраты из крови, хранившейся в холодильнике до 6-ти сут. При этом выход клеток составляет 50 — 100 % от количества, содержащегося в OTIl, а зависимости от срока хранения крови и применяемой концентрации тетрациклина.

833246

Таблица 1

Индуктор

ОТП в присутствии 0,2 мт-/мл те трац иклнн à-H CE,9o

ОТП перед обавлением

ОТП, полученная ресуспендированием тромбоцитов, осажденных с тетрациклииом-HCE,%

ОТП, полученная ресуспендированием тромбоцитов, осажденных без те трацикл ина-HC8,% те трал иклина-НС1 контроля, ь

АДФ 200 МКМ

АДФ

2 мкМ

АДФ

2 мкМ

77

52

21.

21

Арахидоновая к-та 160 мкМ 77

70

Пример 1. 250 мл свежей крови, заготовленной на растворе ЯГф, центрифугируют 10 мин при 200 g . К 100 мл ОТП (350000 кл/мм ) добавляют !6 мл раствора тетрациклина гидрохлорида., Конечная концентрация тетрациклина равняется.0,20 мг/М; или 300 мкМ. После 40-минутн ой инкубации при комнатной температуре тромбоциты осаждают центрифугированием при 1200 g в течение 8 мин. Для сравнения из той же крови готовят контрольный тромбоконцентрат по обычной методике, при тех же . режимах центрифугирования, но без применения тетрациклина. Выход клеток составляет с тетрациклином 80%, а без него 60%.

Для исследования агрегации, реакции на гипотонический шок и ретракции сгустка.. оба тромбоконцентрата разбавляют аутологичной плазмой, не содержащей тетрациклина, до концентрации 350000 кл/ммз и инкубируют в течение 1 ч при 37 С.

Агрегация тромбоцитов, индуцированная различными концентрациями АДФ и арахидоновой кислотой (свежая кровь), приведена в табл. 1.

Ретракция сгустка после ресуспендирования выделенных с помощью тетрациклина тромбоцитов сохраняется полностью. Реакция на гипотонический шок снижается на

20 — 30%. Процедура приготовления тромбоконцентратов с помощью тетрациклина не влияет на количество малонового диальдегида, образующегося под действием тромбина (1 ед/мл), а также на ПОЛ (перекисное окисление липидов), индуцированное ге". Исследование формы тромбоцитов пос-, ле их выделения в присутствии тетрациклина и последующего ресуспенфирования методом фазовоконтрастной микроскопии показало, что клетки остаются, в основном, дисковидными.

Пример 2. Кровь, заготовленная на кои.серванте ЦОЛИПК 7б, хранится во флаконах при 4 С в течение 5 сут.,Надосадочную ОТП (450000 кл/мм ) отсасывают водоструйным насосом, переводят в пластикат-. ный мешок и добавляют тетрациклин гидрохлорид в конечной концентрации 0,07 мг/м (100 мкМ). Инкубируют 1 ч, центрифугируют при !200 g в течение 8 мин, удаляют бесклеточную плазму и ресуспендируют клет1S ко в аутологичной плазме, не содержащей тетрациклина до концентрации 420000 мл/мм

Выход тромбоцитов составляет 60%

Агрегация тромбоцитов, индуцированная различными концентрациями АДФ (кровь, хранившаяся при 4 С в течение 5 сут) приведена в табл. 2.

Ретрация сгустка до и после осаждения тромбоцитов составляет 80%, Реакция на гипотонический шок в обоих случаях отсутствует. ПОЛ, индуцированное тромбином н Fe++ не изменяется форма тромбоцитов, согласнО оценке методом фазовоконтрастной микроскопии, Q обоих случаях сферическая.

Предлагаемый способ позволяет значительно снизить адгезивно-агрегационную акЗВ тивность тромбоцитов, увеличить выход кле ток и улучшить их качество.

833246

Таблица 2

ОТП перед добавлениемм те трациклина- .

-HC8,%

1Индукгор

АДФ

200 мкМ

75

АДФ

20 мкМ

АДФ

4 мкМ

АДФ

2 мкМ

42 с тетрациклином гидрохлоридом в конечной концентрации 100 — 300 мкМ:

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Becker G. А. et al. Pros tagl and in

E„ in preparation and stor.age of platelet

concentrates.— «Science», 1972, 175, р. 538-—

539.

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Техред А. Бойкас Корректор С. Щомак

Ги раж.687 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытнй

1 I 3035, Москва, )К вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Редактор Е. Кииив

Заказ 3845!4. Способ получения тромбоконцентрата пу тем смешивания сырья с антиагрегантом и центрифугировання, отлачающййся тем, что с целью снижения адгезивно-агрегационной. активности тромбоцитов, кровь или обогагценную тромбоцитами плазму смешивают . в присут ,07 мгlм ациклинанс6,ж олученная ресуованием тромосажденных с лином-HCE,%