Способ количественного определенияникотинамида
Союз Севетскик
Социалистических республик
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТВЛЬСТВУ
< 834468 (61) Дополнительное к авт, свид-ву— (22) Заявлено 3007,79 (21) 2809393/23-04 (51)М. Кл З с присоединением заявки ¹ (23) ПриоритетG 01 N 21/64
Государственный комитет
СССР по делам изобретений и открытий
Опубликовано 300581, Бюллетень й9 20 (53) УДК 543. 544 (088.8) Дата опубликования описания 300581 (72) Авторы изобретения
В. П. Баранов и A. A. Хабаров
Читинский государственный медицинский институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ НИКОТИНАМИДА
Таблица 1
Концентрация никотинамида, мкг/мл
) 8
1 2 3 4
5 6 (7
16 22 16 100
14 32 35 74
10 100
20 50
0,1
0,2
Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам количественного определения никотинамида.
Известен способ количественного определения никотинамида, путем титрования анализируемой пробы, растворенной в уксусной безводной кислоте раствором хлорной кислоты в присутствии индикатора (11.
Недостаток способа — низкая избирательность определения.
Наиболее близким к описываемому изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ количественного определения никотинамида путем обработки анализируемой пробы в щелочной среде смесью раствора синильной кислоты и хлорамина Т с последующим измерением флуоресценции полученного при этом раствора (2).
Недостаток способа состоит в низкой чувствительности (50мкг/мл1.
Цель изобретения — повышение чувствительности определения.
Поставленная цель достигается тем, что в способе количественного определения никотинамкда обработку анализируемой. пробы в щелочной среде проводят хлоральгидфатрм при 99
100оС с последующим измерением флурресценции полученного раствора.
15 При излучении оптимальных условий реакции найдена линейная зависимость интенсивности флуоресценции от концентрации препарата, которая лежит в интервале 0,7-50 мкг/мл
20 и приведена в табл. 1.
Относительная интенсивность флуоресценции, Ф
834468
4 Б 6 7 8
30 20 12 38 45 37
40 10 16 42 56 22
12 48 62 10
14 56 74 4
30 64 77
38 80 74
48 86 80
50 100 80
5
100
10 фильтрами .ФК-1 и
Чувствительность реакции, описываемой в изобретении составляет
0,7 мкг/мл, что позволяет проводить определение препарата в лекарственных смесях.
Определение проводится на отечественном электронном флуориметТаблица 2
Концентрация раствора хлоральгидрата, ф
Концентрация раствора едкого натра, Ф
2 ) 5 ) 0,1 0 5 1 10
i.l
4 4 4 4 4 . 4
0,1
0,5
4 10 б 4
4 4
4 4
37 16
1,0
4 4 4
4 12 20 30
3,0
5,0
4 14 22 37 52 45 б . 12 29 28
10,0
37 40
20 18 24 36 30
28 26 26 28 27
20,0
30
Насыщение
Оптимальньвюи концентрациями реактивов являются- 5%-ный раствор едкого натра и 5%-ный раствор хлоральгидрата по 2 мл на обработку одной анализируемой пробы объемом
1 мл.
Определено оптимальное время кипячения исследуемых растворов на кипящей водяной бане. ависимость относительной интен- си ости флуоресценции от времени кипячения на водяной бане, приведена в табл. 3.
Таблица 3
Время кипячения мин
Отцосительная интенсивность флуоресценции,% 1 7 27 62 60 64 58
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
1,0 Продолжение табл. 1
1 ре ЭФ-3NA с
В1 — 2.
При изучении оптимальных условий
2О проведения флуоресцентной реакции на никотинамид найдены оптимальные концентрации едкого натра и хлоральгидрата, которые . приведены в табл. 2.
Время обработки анализируемой пробы на кипящей водяной бане составляет 0,2-10 мин. Оптимальные значения этого интервала 2-10 мин. При определении использовалось время кипячения равное 5 мин.
Определению никотинамида в лекарственных смесях не мешают цианкобаламин, тиамин, фолиевая кислота, аскорбиновая кислота. Никотиновая.кислота
55 обработанная по методике не дает флуоресценции характерной для никотинамида.
П р .и м е р 1. Определение никотинамида в инъекционном 1%-ном растgp воре °
1 мл 1%-ного раствора из ампулы переносят в мерную колбу на 100 мл, доводят водой до метки и перемешивают. К 1 мл полученного раствора 5 прибавляют поочередно 2 мл 5%-ного
0,2 0,5 1 2 3 5 10
834468
Таблица 4
Метрологические характеристики
Никотинамид
По калибровочному графику, мкг/мл
В 1 мл 1%-ного раствора, г/мл х = 0,01057
18,7
0,00935
0,01035
0,00965
0,01150
0,01153
0,01100
0,01100
0,01035
0,01050
0,01065
20,7
19,3 б = + 0,00241
23,0
22,7
95 + 0 0
22,0
22,0
20,7
Истинное значение определяемой величины: а
0,01057+0,000765
21,0
21,3 по стандартному раствору, для приготовления которого к 1 мл стандартного водного раствора никотинамида с содержанием препарата 100 мкг/мл поочередно прибавляют 2 мл 5%-ного раствора едкого натра и 2 мл 5%-ного раствора хлоральгидрата. Стандарт45 ный образец помещают на кипящую водяную баню на 5 мин и после охлаждения раствор флуориметрируют одновременно с исследуемыми образцами.
Результаты определения никотин50 амида в таблетках представлены в табл. 5.
Т а б л и ц а .5
Метрологические характеристики
Никотинамид
Навеска измельченных таблеток, r по калибровочному графику, глкr /мл иэ расчета на одну таблетку, г
0,096
0,096
19,3
0,01458
0,01404
18,6 х = 0,0139 раствора едкого натра и 2 мл 5%-ного раствора хлоральгидрата. Анализируемую пробу йомещают на водяную кипящую баню на 5 мин. После охлаждения раствор переносят в кювету и флуориметрируют. Содержание никотинамида определяют по стандартному раствору, для приготовления которого к 1 мл стандартного водного раствора никотинамида с содержанием препарата
Пример 2. Определение никотинамида в таблетках по 0,015 г.
0,1 г (точная навеска) мелкоизмельченных таблеток никотинамида помещают, в колбу на 100 мл, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.
К 1 мл полученного раствора приливают поочередно 2 мл 5%-ного раствора едкого натра и 2 мл 5%-ного раствора хлоральгидрата. Пробу помещают на водяную кипящую баню на 5 мин. После охлаждения раствор переносят в кювету и флуориметрируют. Содержание никотинамида в таблетках рассчитывают
100 мкг/мл приливают поочередно 2 мл
5%-ного раствора едкого натра и 2 мл
5%-ного раствора хлоральгидрата. Полученный раствор помещают на 5 мин на кипящую водяную баню и после охлаждения флуориметрируют одновременно с растворами исследуемых образцов.
Результаты.флуориметрического определения никотинамида в 1%-ном раствор приведены в табл. 4.
834468
Продолжение табл. 5
0,093 17,6
0,01372
0,093 17,0 0,01325
0,091 17,0 0,01354
0,093 17,6 0,01372
0,100 19,6 0,01421 д = +0,000332
Е< 9 =+0,000237
0,094
0,096
0,096
18,0
0,01388
0,01435
0,01404
Истинное значение определяемой величины: 0,0139 +
+0,00024 = а
19,0
18,6
Пример 3, .Определение никотинамида в драже "Декамевит-2".
0,08 г (точная навеска) мелкоизмельченных драже переносят в мерную колбу на 50 мл, растворяют в дистиллнрованной воде и доводят до метки.
Полученный рЫствор фильтруют через . бумажный фильтр. К 1 мл фильтрата добавляют поочередно 2 мл 5%-ного раствора едкого натра и 2 мл 53-ного раствора хлоральгидрата. Пробирку помещают на водяную кипящую баню, где проба находится 5 мин. После охлаждения раствор переносят в кювету и флуориметрируют одновременно со станТаблица 6
Никотинамид
Навеска измельченных драже, г
Метрологические характеристики
I по калибровоч- из расчет ному графику, на одну мкг/мл драже, г
18,0 х = 0,0495
0,045
0,044
0,045
0,048
17,6 (Р = +0,0071
18,0
19,2
Е =+0,00508 о,95 "
19,2
0,047
23,6
0,059
0,048
0,058
0,048
0,052
19,2
Инстинное значение определяемой величины: а = 0,0495+
+0 00508
23,2
19,2
0,08144
20,8
0,06608
0,06480
0,06576
0,075722
0,07235
0,09392
0,07040
0,09056
0,07360 дартными образцами. Количество нико тинамида в исследуемом растворе рас-. считывают по калибровочному графику, для построения которого в пробирку .вносят 1,0; 0,5; 0,,25 мл стандартного водного раствора никотинамида с концентрацией препарата 100 мкг/мл, доливают поочередно 0,0; 0,5 и 0,75мл дистиллированной воды, в каждую пробирку приливают реактивы как указано выше и флуориметрируют одновременно с растворами исследуемых образцов.
Данные по определению никотинамида в драже "Декамевит-2" представлены в табл. 6.
834468
Пример 4. Определение никотинамида в драже "Пентонит".
0,075 г (точная навеска) мелкоизмельченных драже переносят в мерную колбу на 50 мл, растворяют в дистиллированной воде и доводят водой до метки. К 1 мл полученного раствора добавляют псочередно по 2 мл 5В-ного раствора едкого натра и 5Ъ-ного раствора хлоральгидрата, перемешивают, помещают пробу на водяную кипящую баню на 5 мин.. После охлаждения растТаблица 7
Найдено никотинамида
Навеска измельченных драже, r
Метрологические характеристики по калибровоч- иэ расчет ному графику, на одну д мкг/мл же, r
0,0197
19,7
0,07225 х = 0,01863
19,7
18,7
+0,0021
20,3
19,7 с .= +0,0015
16 3
19,7
18,8
Истинное значение определяемой величины: а = 0,01863+
+0,0015
0,07750
17,1
0,07750
16,3
Чувствительность предлагаемого способа 0,7 мкг/мл, а известного—
5,0 мкг/мп.
Формула изобретения
Способ количественного определения никотинамида путем обработки анализируемой пробы хлорсодержащим органическим реагентом в щелочной среде с последующим измерением флуоресценции полученного при этом раствора, отличающийся
Составитель Л. Соломенцева
Техред H. Келушак Корректор .О. Билак
Редактор Е. Кинив
Заказ 4056/64 Тираж 907 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП "Патент",г. Ужгород, ул. Проектная, 4
0,07750
0,07975
0,07875
0,07675
0,08275
0,08100
0,07325 вор переносят в кювету и флуориметрируют одновременно со стандартными образцами. Количество никотинамида в исследуемом растворе рассчитывают по калибровочному графику, для построения которого готовят стандартные образцы с содержанием никотинамида 5, 10 и 20 мкг/мл по описанной выше методике.
Данные по определению никотинамида в драже "Пентонит" представлены в табл.7.
0,0197
0,0187
0,0203
0,0197
0,0163
0,0197
0,0188
0,0171
0,0163 тем, что, с целью повышения чувствительности определения, в качестве хлорсодержащего органического реагента используют хлоральгидрат и
45 обработку ведут прч температуре
99-100 С.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Государственная фармакология
5Р СССР. 10-е изд. М., 1968, с. 463.
2. Франке 3 и др. Химия отравляющих веществ ° М., 1973., т. 2, с. 110 (прототип).
