Изобретение относится к способу получения новых производных дипептидных эфиров вЂ” биологически активных соединений, которые могут найти применение в качестве промежуточных продуктов при получении сахаристых веществ.

Известен способ получения й-защи-

10 щенных или незащищенных дипептидных эфиров путем взаимодействия ангидрида аминокислоты, имеющего защищенную или незащищенную аминогруппу, с алкильным сложным эфиром аминокис- лоты (1 j.

Недостаток этого способа состоит в том, что наряду с целевыми дипептидными эфирами образуются дипептидные эфиры, имеющие пептидные связи по карбоксильной группе боковой цепи аминокислоты.

Цель изобретения вЂ” создание спосо-25 ба получения новых производных дипептидных эфиров, позволяющего получить дипептидный эфир со свободной в боковой цепи карбоксильной группой без образования побочных продуктов. 30

Поставленная цель достигается способом получения дипептидных эфиров общей формулы

eSR„g 0

HOI-(CH lq -lH-C-flH-CH-C-Il I

2 где R -бе н зилок си к арбо нил или и -ме токсибензилоксикарбонил;

R -бензил;

R -низший алкоксил.

3 л -1 или 2, заключающийся в том, что соединения формулы

0 0 NHR0 0 н 1 tf н к -с-"„н-ин нос-(сн )„-сн-с-нн-сн-с-R

3 Т й2

К2 rl где R„, R®, R> n имеют указанные значения, обрабатывают водным раствором кислоты и отделяют полученный целево дипептидный эфир в виде твердого продукта;

Способ состоит в разложении продукта присоединения дипептидного сло. ного эфира и соли сложного эфира аминокислоты под действием водного раствора кислоты. Существенная часть дипептидного сложного эфира находится в твердом состоянии после оконча841583 ния реакции, поскольку он обладает низкой растворимостью в кислом водном растворе. В силу того, что соль хорошо растворима в растворе, реакционная система становится .смесью твердого дипептидного сложного эфира и раствора соли, который может содержать избыток кислотного компонента.

Полученный твердый дипептидный слож- . ный эфир отделяют обычным способом, например фильтрованием или центрифугированием. Для выделения из отде- 10 . ленного солевого раствора сложного эфира аминокислоты используют кристаллизацию или экстракцию, после освобождения сложного эфира аминокислоты. 15

Согласно предлагаемому способу дипептидный сложный эфир может быть легко получен и выделен путем разложения продукта присоединения без ус» ложненной стадии экстракции и обработки ионообменной смолой. Выход и чистота дипептидного сложного эфира высокие.

Пример 1. К раствору

1335 мг (5 ммоль) N-бензилоксикарбонил-L-аспарагиновой кихоты и

1078 мг (5 ммоль) хлоргидрата метилового эфира L-фенилаланина в 20 мл воды с рН б (доводят с помощью 7Ъ вЂ” ой аммиачной воды) прибавляют 50 мг термолизина и смесь встряхивают при ЗО температуре 38 вЂ” 40ОС в течение ночи. Выпавший в осадок продукт отделяют, промывают 40 мл воды, сушат, получают 1145 мг тонких игольчатых кристаллов, имеющих точку плавления 35

117 вЂ” 120 С (продукт присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил- L-аспартил- -фенилаланина и метилового эфира L-ôåíèëàëàíèíà (1:1); выход : 75,5Ъ в расчете на хлоргидрит метиловго эфира L-фенилаланина).

Продукт перекристаллизовывают из смеси этилацетата и п-гексана.

Точка плавления .120 вЂ” 124 С.

1с + 7, 1 (С = 1, метанол) .

Элеме йт ный ан али з .

Найдено, Ъ: С 63,15; Н 6,15; и 7,00.

М З7 З92

Вычислено,. Ъ: С 63,24; Н 6,13; и 6,97. 50

1145 мг полученного продукта растворяют в 40 мл 1 н НС1 и трижды экстрагируют 30 мл этилацетата. Экстраты смешивают и промывают порциями по 20 мл воды (3 раза) и сушат 55 над безводным сульфатом магния.

Раствор концентрируют в вакууме, остаток кристаллизуют при добавлении п-гексана, получают 640 мг кристаллического продукта. ф0

Точка плавления 11 5 вЂ” 125 С.

gg ) g- 15, 3 (C=1, метанол) .

Элементный а н али э .

Найдено, Ъ: С 61,52; Н 5,65;

N 6 57. у С2.Д н24 Nial 65

Вычислено, Ъ: С 61,67; Н 5,65;вЂ”

N 6,54.

Метиловый эфир L-фенилаланина выделяют из смеси соляноки слой фазы и фракции промывочной воды, отделенной при экстракции из этилацетатной фазы.

Соединение, полученное посредством первой реакции, является продуктом присоединения метилового эфира

N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-Lâ€”

-фенилаланина и метилового эфира

-фенилаланина. Иэ спектра ЯМР подтверждено, что их молярное отношение составляет 1:1

Пример 2. К раствору

267,2 мг (1 ммоль) Н-бензилоксикарбонил-L-аспарагиновой кислоты и

537,6 мг (3 ммоль) метиловго эфира

L-фенилаланина в 5 мл буферного раствора Мак-Илвайна (рН 7,0) добавляют 100 мг термоазы и 100 мг картофельного ингибитора и смесь встряхивают в течение 20 ч при 38 С. Осадок собирают, промывают водой, сушат, получают 580 мг неочищенного кристаллического продукта присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1) (точка плавления 123 вЂ” 125 С, выход

35,5Ъ в расчете на М-бензилоксикарбонил-L â€” аспарагиновую кислоту).

Продукт растворяют в 40 мл смеси из диметилформамида и воды (1:1) и к раствору добавляют при перемешивании Н-форму сильнокислотной катионообменной смолы, смолу отделяют, фильтрат концентрируют при пониженном давлении . Остаток растворяют в диметилформамиде и к раствору добавляют воду. Выпавший. осадок собирают, получают 330 мг метилового эфира К-бензилоксикарбонил-L àñïàðòèë-L-фенилаланина (выход 77,0Ъ в расчете на N-бензилоксикарбонил-L-аспарагиновую кислоту, точка плавления

123 вЂ” 125 С).

Пример 3. К раствору

267,2 мг (1 ммоль) N-бензилоксикарбонил-L-аспарагиновой кислоты и

359,4 мг (2 ммоль) метилового эфира

L-фенилаланина в 5 мп буферного раствора Мак-Илвайна (pH 7,0) добавляют

100 мг тациназы-N и 100 мг картофельного ингибитора и смесь встряхивают в течение б ч при 38 С. Выпавший в осадок продукт отделяют, промывают водой, получают 120 мг неочищенного кристаллического продукта присоединения метилового эфира Мбенэилоксикарбонил- -аспартил-(.-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1) (точка плавления

119 вЂ” 123 С выход 19,7Ъ).

Продукт обрабатывают по примеру

2 Н-формой сильнокислотной катионообменной смолой, в Н-форме получают

50 мг метилового эфира N-бенэилоксиг

841583

40 карбонил-L-аспартил- -фенилаланина (точка плавления 95 вЂ” 105ОС, выход

11,7%).

Пример 4. К раствору

133,6 мг (0,5 ммоль) N-бензилоксикарбонил- -аспарагиновой кислоты и

89,6 мг 0,5 ммоль) метилового эфира L-фенилаланина в 2,5 мп буферного раствора Мак-Илвайна (рН 7,0) с

0,07 мл триэтиламина при рН 6,7 добавляют 50,мг термоазы и 50 мг картофельного ингибитора, смесь перемешивают путем встряхивания при 38 C е в течение 20 ч. Осадок отфильтровывают, промывают водой, получают

130 мг неочищенного продукта присоединения метилового эфира М-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1)(точка плавления 115 вЂ” 124 С, выход 85,5.% в расчете на метиловый эфир L-фенилаланина).

Полученный продукт растворяют в

20 мл смеси диметилформамида и воды (1:1) и обрабатывают сильнокислотной катионообменной смолой в Н-форме (по примеру 5), получают 75 мг метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-фенилаланина (полный выход 70% в расчете на исходный метиловый эфир L-фенилаланина).

Пример 5. Процесс проводят по примеру 4, за тем исключением, что используют 0,05 мл N-метилморфолина вместо 0,07 мл триэтиламина, п начальном рН 6,4.Получают 120 мг неочищенного кристаллического продукта присоединения метилового эфира

N-бензилоксикарбонил-L-аспартил- вЂ”

-фенилаланина и метилового эфира Lфенилаланина (1:1) (точка плавления

118 вЂ” 124О С, выход . 78, 9% в расчете на метиловый эфир L ôåíèëàëàíèíà) .

Продукт обрабатывают сильнокислотной катионообменной смолой в Нформе. Получают 70 мг кристаллического метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-фениланина (полный выход

66% в расчете на исходный метиловый эфир L-фенилаланина с учетом его

50%-го использования).

Пример б. 534 мг (2 ммоль)

N-бензилоксикарбонил-L-аспарагиновой кислоты и 863 мг (4 ммоль) хлоргидрата метилового эфира DL-фенилаланина помещают в колбу емкостью 30 мл и растворяют в 7 мл воды, значение рН доводят до 6,2 с помощью 7%-ой аммиачной воды.

Полученный раствор смешивают с

50 мг термолизина и встряхивают при температуре 38 вЂ” 40 С в течение ночи. Осадок отфильтровывают, сушат, получают 1045 мг кристаллов продукта присоединения метилового э ира

N- бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира L

-фенилаланина (1:1) (точка плавления

104 вЂ” 108ОС, выход 86,1% в расчете

65 на N-бензилкарбонил-L-аспарагиновую кислоту).

После перекристаллизации из смеси этилацетата и и-гексана получают продукт, имеющий следующие физические свойства и результаты элементного анализа. Точка плавления 127 вЂ” 135 C. о 3 6,4 (С=1, метанол).

Элементный анализ.

Найдено, %: С 63,52; Н 6,19;

N 6,92.

С9у НЭ NSOy

Вычислено, %: С 63,24; Н 6,13;

К 6,97.

Продукт тождественен с продуктом присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Е-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1), поскольку инфракрасный спектр и спектр ЯИР продукта идентичны со спектрами соединения, полученного по примеру 1.

800 мг продукта растворяют в 40 м

1н НС1 и раствор экстрагируют хлорис тым метиленом (Зх30 мл), органическую фазу отделяют, промывают водой, сушат над фильтратом магния, хлористый метилен отгоняют, твердый остаток перекристаллизовывают из смеси этилацетета и п-гексана, получают

450 мг кристаллического продукта. .Точка плавления 124 вЂ” 132 С.

15,3 (C=1, метанол).

Элементный анализ.

Найдено, %: С 61,38; Н 5,58;

N 6,29.

22. 24 и 7

Вычислено, %: С 61,67; Н 5,65;

N 6,54.

Продукт представляет собой метиловый эфир Р-бензилоксикарбонил-бвЂ” аспартил-L-фенилаланина.

Водный слой, оставшийся после экстракции хлористым метиленом, обрабатывают бикарбонатом натрия, рН доводят до 8,7 и продукт трижды экстрагируют хлористым метиленом смешивают с бикарбонатом натрия, величину рН доводят до 8,7 и продукт трижды экстрагируют хлористым метиленом, беря порции по 50 мл. Экстракты сушат над сульфатом магния, пропускают через раствор газообразный хлористый водород в течение 10 мин, раствор концентрируют, к остатку добавляют этиловый эфир, выпавший осадок отфильтровывают, получают 29,0 мг метилового эфира D-фенилаланина. о

Точка плавления 149 вЂ” 151 С. (g3 > - 15, 1 (C=1, метанол) .

Инфракрасный спектр и спектр ЯМР сс падает со спектрами Ь -формы.

Проведенный анализ показывает, что полученный продукт вЂ” продукт присоединения метйлового эфира N-бензилоксикарбоиил-Ь-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира фенилаланина .(1: 12 .

841583

П р и, м е р 7. В колбе емкостью100 мл в 70. мл воды растворяют

5,34 r (20 ммоль) N-бензилоксикарбонил-L-аспарагиновой кислоты и 7,32 г (42 ммоль) метилового эфира L-фенилаланина. К полученному раствору с рН

6,2 - 6,3 добавляют 200 мг термолизина и смесь встряхивают при температуре 38 вЂ” 40 С в течение 4 ч. Осадок отфильтровывают, промывают в

70 мл воды, сушат, получают 10,11 г кристаллов (точка плавления 117

120 С). Проведенный анализ показыва-. ет, что продукт есть продукт присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1). После перекристаллизации. продукта из смеси этилацетата и п-, гексана получают следующие значения.

Точка плавления 120 вЂ” 124 С.

fo(l> + 7, 2 (С= 1, метанол) .

Элемейтный анализ .

Найдено, Ъ: С,63, 16; Н 6, 14;.

N 6,99. (О

С Н 7 Н 09

Вычислено, -.: С б 3, 24; Н б, 13;

N 6,97. о

Инфракрасный спектр и спектр ЯМР проявляют те же характеристики, которые указаны для продукта присоединения (1:1) метилового эфира N áåíçèëоксикарбонил-L-àñïàðòèë-L ôåíèëàëàíèна и метилового эфира L-фенилаланина.

После обработки сильной кислотой продукт экстрагируют этилацетатом, после отгонки которого получают в остатке метиловый эфир N-бензилоксикарбо- 35 нил-L-аспартил-L-фенилаланина.

К 1,00 г (1,65 ммоль) полученного продукта. присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина и сложного эфира 40

L-фенилаланина добавляют 2 мл и

2,0 мл 1 н НС1, смесь перемешивают при комнатной температуре в течение

10 мин. Полученную суспензию фильтруют и осадок промывают 4 мл воды, получают 0,72 r кристаллического метилового эфира N-бензилоксикарбонила- -аспартил- -фенилаланина (выход

98,8Ъ).

Полученные кристаллы перекристаллиэовывают из смеси этилацетата и п-гексана.

Точка плавления 121 вЂ” 124 С. с(1Я- 15,4 (C=1, метанол).

Элементный анализ.

Найдено, Ъ: С 61,58; Н 5,64;

N 6,56. . Од 4 Н О-, Вычислено, Ъ: С 61,67; Н 5,65;

N 6,54.

Инфракрасный спектр продукта совпадает со спектром стандартного продукта.

Идентичность продукта ro стандартным подтверждена посредством сравнения водного раствора продукта с вод- 65 ным раствором стандартного соединения в высокоскоростной жидкостной хроматографии. Чистота, измеренная этим способом, составляет 100Ъ.

Этот способ использован также для оценки чистоты продуктов разложения прйсоединения в следующих примерах (если это не оговорено иначе).

Устройство для высокоскоростной жидкостной хроматографии (TSK вЂ” HLC

801, поставляемой Тоуо Soda К.К.) включает колонку, внутренний диаметр которой 7,5 ммк, длина 30 см, детектор (дифференциальный рефрактометр).

В качестВе наполнителя используют крахмальный геЛь с размером частиц

5 мк (TSK вЂ” GELLS 170, поставляемый

Toyo Soda К.К.) . Элюентом служит 0,5Ъный водный раствор ацетата натрия.

Измерения проводят при комнатной температуре, скорости потока 0,8 мл/мин, перепаде давления 20 кг/см

Пример 8. К 1,00 r (1,65 ммоль)продуктов присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L L фенилаланина и метилового эфира L -фенилаланинадобавляют

2 мл воды и 1,32 мл 1н НС1 и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин. Реакционную массу обрабатывают по примеру 7. Получают 0,70 r тонких призматических кристаллов, имеющих точку плавления

100 вЂ” 126 C (содержание метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил- -фенилаланина 96,8Ъ).

Пример 9. 0,534 г (2 ммоль)

N-бензилоксикарбонил-L-аспарагиновой кислоты и 0,863 г (4 ммоль) хлоргидрата метилового эфира DL-фенилаланина растворяют в 10 мл воды, значение рН доводят до 6,0 с помощью 7Ъ-ой аммиачной воды.

Полученный раствор смешивают с

50.мг термолизина, смесь встряхивают. в течение ночи при температуре 38

40 С. Осадок отфильтровывают, промыо вают 10 мл воды, сушат, получают

0,90 г кристаллов, имеющих точку плавления 120 вЂ” 126 С.

Часть кристаллов перекристаллизовывают из смеси этилацетата и ll-råêñàна, получают продукт с точкой плавления 128 вЂ” 134 С и 1 с ) Я равный -6,3 (C=1, метанол).,Этот продукт имеет инфракрасный спектр и спектр ЯМР, которые.идентичны этим же спектрам продукта присоединения метилового эфира

М-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланила и метилового эфира L-фенилаланина (1:1).

Элементный анализ.

Найдено, Ъ: С 63,42; H 6,17; и 6,95.

3aР7 39

Н Й

Вычислено, Ъ: С 63,24; Н 6,13;

N 6,97.

Затем продукт обрабатывают кислотой, получают метиловый эфир N-бензил841583

10 оксикарбонил-L-аспартил-L-фенилалани- на и метиловый эфир D-фенилаланина..;. в мольном отношении 1:1. Эти результаты позволяют сделать вывод, что полученные кристаллы есть продукты присоединения метилового эфира М-бензилоксикарбонила-L-аспартил-L-фенилалани5 на и метилового эфира 0-фенилаланина (1:1).

0,50 г (0,82 ммоль) продукта присоединения смешивают с 4 мл воды и

0,26 r лимонной кислоты, смеси перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин и обрабатывают по примеру 7, получают 0,35 г кристаллов метилового эфира М-бензилоксикарбонил -(-аспартил-).-фенилаланина (чистота 15

100%, выход 99,3%).

Пример 10. К 0,50 г (0,82 ммоль) .продукта присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина и мети- 2р лового эфира L. â€” ôåíèëàëàíèíà, полученного по примеру 7, добавляют 4 мл воды и 0,24 г (1,2 ммоль) р-толуолсульфокислоты моногидрата. Смесь обрабатывают в условиях примера 7. Получают 0,33 г- кристаллов метилового эфира N-бензилоксикарбонила-L-аспартил-L-фенилаланина (чистота 100%, выход

93,6%).

Пример 11. В колбу емкостью

30 мл помещают 0,45 r (3,2 ммоль)

853 муравьиной кислоты и 8 мл воды и к смеси добавляют 0,50 г (О;82 ммоль) продукта присоединения метилового э@ира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира

Е-фенилаланина, полученного в примере 7. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 мин, продукт отфильтровывают, промывают

10 мл воды, сушат, получают 0,312 г 40 белых кристаллов метилового эфира

N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина (чистота 100%, выход

88,6Ъ).

Пример 12. К 0,47 г (8,2 ммоль) ледяной уксусной кислоты и 8 мл воды добавляют 0,50 r (0,82 ммоль) продукта присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина и мети= лового эфира L-фенилаланина, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин, продукт отфильтровывают, промывают 10 мл воды, сушат. Получают 0,308 г белых кристаллов метилового эфира N-бензилоксикарбонила-L-аспартил-L-фенилаланина (чистота 100%, выход 87,2%).

Пример 13. 1,00 r (1,65ммоль) продукта присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспар- ЬО тил- -фенилаланина и метилово-о эфира (.-фенилаланина, полученного в примере 7, загружают в колбу емкостью

30 мл и добавляют 2 мл воды и 0,2 мп

1 н НС1. Смесь перемешивают при 60 С 65 в течение 3 мин, а затем обрабатыва ют по примеру 7. Получают 0,35 г кристаллов метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина (чистота 100%, выход 100%).

Пример . 14., В колбу емкостью

30 мл помещают 0,594 г (2 ммоль)

N-p-.метоксибензилоксикарбонил-L-аспарагиновой кислоты и 0,860 r (4 ммоль) хлоргидрата метилового эфира L-фенилаланина и растворяют в небольшом количестве 1н NaOH, величину рН доводят до 6,0.

Полученный раствор смешивают с

50 мг термолизина и встряхивают при температуре от 38 до 40 С в течение ночи, Осадок отфильтровывают, промывают 10 мл воды и сушат. Получают

0,928 г кристаллов, имеющих точку плавления 68 вЂ” 74 C.

Полученный продукт представляет собой присоединение метилового эфира М-р-метоксибензилоксикарбонил-L-аспартил- -фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1). Продукт перекристаллизовывают из смеси этилацетата и n""гексана.

Точка плавления 72 вЂ” 76 С.

Го(1 + 6,5 (С=1, метанол). .Элементный анализ.

Найдено, В: С 61,85; H 6,04;

N g,46.

33 39 3 1о

Вычислено, В: С 62,15; Н 6,16;

М 6,59.

Инфракрасный спектр:

° 3280 см " (колебания растяжения связи М-Н ; 3020 и 2930 см-" (колебания растяжения С-Н); 1735 см -" (сложный эфир С=О); 1700 см "(С=О уретан); 1640 см- (1-ое амидное поглощение); 1500 до 1540 см " (2-е амидное поглощение); 1435 см " (С-Н деформационное колебание); 1380 см- (карбоксилат); 1210 до 1240 см-" (колебание растяжения связи С-О-С и 3-е амидное. поглощение); 1030 см-" (колебание фенила в плоскости) и 690, 740 и 810 см-" .(колебание фенила вне плоскости).

Спектр ЯИР: (1). 2,7 частей на миллион (2Н); (2) 3,1 частей на миллион (4Н); (3 )3,6 частей на миллион (ЗН)и

3,7 частей на миллион (ЗН); (4) 3,8 частей на миллион (ЗН); (5) 4,0 частей на миллион (1Н); (6) 4,5 частей иа миллион (1Н); (7) 4,8»частей на миллион (1Н); (8) 5,0. частей на миллион (2Н)р (9) 5,65 частей на миллион (ЗН); (10) 5,65 частей на миллион (1H) (11) 6,2 частей на миллион (1Н); (12) 6,8 до 7,3 частей на миллио» (14Н).

Эти результаты показывают, что продукт является продуктом присоединения формулы (1), где R4I R2I Я 3 и и означает р-метоксибензилоксикарбо841583 .

12 нил, бензил, метокси и 1; соответственно.

0,500 r ((00,78 ммоль) продукта присоединения метилового эфира М-р-метоксибензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина, полученного таким образом, помещают в колбу емкостью 30 мп,добавляют 2 мл воды и .0,94 мл .(0,94 ммоль)

1 и НС1, смесь перемешивают при 60 C в течение 3 мин, фильтруют, осадок промывают б мл воды и сушат, получают 0,32 r кристаллов.

Следующие результаты подтверждают,. что продукт является сложным эфиром

N-p-метоксибензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина (чистота 100%, вы- 1$ ход 89,1Ъ).

Кристаллы растворяют в этилацетате и высаживают при добавлении и-гексана.

Точка плавления 128 - 130 С. 20 (о(Д вЂ” 15, 1 (C=1 метанол) .

Элементный анализ.

Найдено, Ъ: С 60,30; Н 5,74; и 5,99.

С25 Н2, М 08

Вычислено, В: С 60,25у Н 5,72>

М 6,11.

Инфракрасный спектр:

3280 см-" (растяжение М-Н).; 2930 и 3020 см- (колебание растяжения

С-Н); 1735 см- (С=О сложный эфир); 30

1700 cM " (C=Î уретан); 1650 см-" (1-ое амидное поглощение); 1510

1540 см ".(2-е амидное поглощение);

1440 cM " (деформация С-H ): 1220 вЂ”

1270 см (колебание растяжения С-О-С, 35

3-е амидное поглощение); 1030 и

1050 см- (колебание фенила в плоскости ); 690 и 810 см (колебание фени-4 ла вне плоскости).

ЯМР спектр: 40 (1) 2,8 частей на миллион (2H); (2) 3, О частей на миллион (2Н); (3) З,б частей на миллион (ЗН); (4) 3,8 частей на миллион (ЗН); (5) 4,5 частей на миллион (1Н); (6) 4,8 частей на миллион (1Н); (7) 5,0 частей на миллион (2Н); (8) 6,0 частей на миллион (1Н); (9) б,б частей на миллион (1Н); (10) 6,6 частей на миллион (1Н); (11) 6,8 частей на миллион до 7,8 частей на миллион (9Н);

Эти результаты показывают, что конечным продуктом является соединение формулы (М ), в котором й,(, К

Й и и означают р-метоксибензилокси- 55 5 карбонил, бензил, метокси и 1, соотч ветственно.

0,2 вес.ч. полученного метилового эфира N-p-метоксибензилоксикарбонил-L"àñïàðòèë-L-фенилаланина растворя- 60, ют в 2 вес.ч. ацетона и к полученному раствору добавляют 1 вес.ч. 4н .НС1. Смесь нагревают на водяной бане со слабым противотоком в течение

1,5 ч до полного разложения и получе-) 65 ния раствора, содержащего в качестве основных компонентов метиловый сложный эфир L-аспартил- -фенилаланина, метиловый эфир L-фенилаланина и анисовый спирт, Из указанного раствора получают метиловый эфир 1.-аспартил-1.-фенилаланина.

Пример 15. 0,562 г(2 ммоль) й-бензилоксикарбонил-L-глутаминовой кислоты и 0,862 г (4 ммоль) хлоргидрата метилового эфира L-.ôåíèëàëàíèíà помещают в колбу емкостью 30 мл и добавляют 1 í NaOH до их полного растворения, рН доводят до 6,0.

Полученный раствор смешивают с

50 мг термолизина, встряхивают при температуре 38 вЂ” 40 С в течение ночи.

Осадок отфильтровывают, промывают

10 мл воды, сушат. Получают 0,510 r кристаллов, имеющих точку плавления

80 вЂ” 85 C.

Следующие результаты подтверждают, что вещество представляет собой продукт присоединения метилового эфира й-бензилоксикарбонил-L-глутамил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1).

Продукт перекристаллизовывают из смеси атилацетата и п-гексана.

Точка плавления 92 вЂ” 97 С. (а Я- 0,1 (C=1, метанол).

Элементный анализ.

Найдено, Ъ: С 63,61; Н 6,31; и 6,65.

С9Ъ Н99 Мэ 09

Вычислено Ъ: С 63,75; Н 6,32; и 6,76.

Инфракрасный спектр:

3340 см " (колебание растяжения связи N-H); 2950 и 3030 см-< (колебание растяжения связи С-Н); 1730 и

1745 см " (С=О сложный эфир); 1690см (C=0 уретан); 1660 см " (1-ое амидное поглощение); 1620 см (карбоксилат) (2-ое амидное поглощение);1440см

-4 (С-Н деформационное колебание) 1405см (карбоксилат),1240 до 1310 см С-О-С колебание растяжения и 3-е амидное ., поглощение); 1440 см-" (C-H деформационное .колебание); 1405 см " (карбоксилат), 1240 до 1310 см " (С-О-С колебание растяжения и 3-е амидное поглощение); 1050 cM " (колебание фенила в плоскости); 700 и 750 см 4.(колебание фенила вне плоскости).

Спектр ЯМР: (1) 2,0 частей на миллион (2Н); (2) 2,3 частей на миллион (2Н); (3) 3,0 частей на миллион (4Н)(4) 3,6 частей на миллион и 3,7 частей на миллион (ЗН); (5) 3,8 частей на миллион (1Н); (6) 4,3 частей на миллион (1Н); (7) 4,8 частей на миллион (1Н); (8) 5,0 частей на миллион (2Н); (9) 5,8 частей на миллион (ЗН); (10) 5,8 частей на миллион (1Н); (11) 7,2 частей на миллион (1Н);

841583 (12) 7,2 частей на миллион (10Н) р (13) 7,3 частей на миллион (5Н) .

Эти результаты показывают, что продукт является продуктом присоединения формулы ;(I),где R4, й, R> и

Il ..означают бензилоксикарбонйл, бензил, метокси и 2, соответственно.

0,001 r продукта присоединения метилового эфира Й -бензилоксикарбонил-L-глутамил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина добавляют к 2,3 мл (0,32 ммоль) 0,14 í НС1 при перемешивании в пробирке емкостью

15 мл. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 мин.

Полученный белый осадок отфильтровывают, промывают 3 мл воды, сушат, получают 0,683 г кристаллов.

Следующие результаты подтверждают, что продукт представляет собой этиловый. эфир N-бензилоксикарбонил-L-глутамин-L-фенилаланина (чистота 100%, выход 95,8%).

Кристаллы растворяют- в этилацетате и переосаждают при добавлении игексана.

Точка плавления 97 вЂ” 99 С.

Pd j - 11,0 (C=1, метанол) .

Элементный анализ.

Найдено, %: С 62,63; Н 5,94;

N 6,24.

Са Нъб Ng07

Вычислено, %: С 62,43; Н 5,921

N 6,33.

Инфракрасный спектр:

3300 см-" (колебание растяжения

N-Н); 2930 и 3030 см -1 (колебание растяжения С-Н); 1735 см " (C 0 сложный эфир); 1690 см " (С=О уретан);

1650 см-" (1-ое амидное поглощение);

1530 см-" (2-ое амидное поглощение);

1440 см-" (колебание деформации С-Н); от 1220 до 1280 см-" (колебание растяжения С-О-С g 3-е амидное поглощение); 1050 см- (колебание фенила в плоскости) и 695 и 735 см-" (колебание фенила вне плоскости).

Спектр ЯМР: (1) 2,0 части на миллион (2Н)у (2) 2,4 части на миллион (2Н); (3) 3,1 части на миллион (2Н); (4) 3,7 части на миллион (ЗН); (5) 4,3 части на миллион (1Н); (6) 4,8.части на миллион (1Н); (7) 5,1 части на миллион (2Н); (8) 5,9 части на миллион (1Н); (9), 7,2 части на миллион (1Н); (10) 7,2 части на миллион (5Н); (11) 7,3 части на миллион (5Н), (12) 8,1 части на миллион (1Н).

Эти результаты показывают, что конечный продукт представляет собой соединение формулы (Н ), где К.,, Й

R и и означают бензилоксикарбонил, бензил,, метокси и 2, соответственно.

Полученный метиловый эфир N-беизилоксикарбонил-L-глутамил-1 -фенилаланина можно превратить посредством восстановления водородом в метиловый эфир L-глутамил-L-фенилаланина, и его также можно превратить гидролизом в Й-бензилоксикарбонил- -глутамил-L»

-фенилаланин.

П р и м е. р 16. В колбу емкостью

100 мл помещают 0,686 г (3,12 ммоль) хлоргидрата метилового эфира L-фенилаланина, 25 мл воды, к полученному раствору добавляют водный 2н NaOH при охлаждении льдом и при еремешивании рН доводят до 7,5. Продолжая перемешивания к раствору постепенно добавляют 0,360 г (1,44 ммоль) ангидрида N-бензилоксикарбонил-L-аспарагиновой кислоты и поддерживают рН от

7,0 до 7,5 с йомощью -2н водного рас15 твора NaÎÍ. Продолжают перемешивание в течение ? ч и к .реакционной смеси добавляют водную 1н НС1 и доводят рН до б. Выпавший в осадок продукт отфильтровывают, промывают 50 мл воg0 ды, сушат, получают 0,416 г продукта присоединения, метилового эфира

N-,áåíýèëîêñèêàðáîíèë-L-аспартил-L-фенилаланина (смесь 86% метилового эфира Й-бензилоксикарбонил-L-аспартил- .(С, )-L-фенилаланина и 14% метилового эфира Й-бензилаксикарбонил- -аспартил.вЂ” (Ср)-Е-фенилаланина) и метилового эфира L-фенилаланина (1:1)(точка плавления от 108 до

115 С). В процессе реакции образуется значительное количество метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил- (С р )-L â€” ôåíèëàëàíèíà, но большая часть этого соединения остается в фильтре.,и в промывочной воде.

В химическом стакане емкостью

12 мл при перемешивании к полученному продукту присоединения метилового эфира N-бен.".илоксикарбонил-L-аспартил- (С (и Ср)-L-фенилаланина и мети4Q лового эфира L-фенилаланина добавляют 1,7 мл (0,7 ммоль) 0,4 HCl водного раствора и смесь продолжают перемешивать при комнатной температуре в течение 15 мин.

45 Белый осадок отфильтровывают, промывают 3 мл воды, сушат. Получают

0,136 г (выход 96,3%) кристаллов. Nметилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина (со50 держащий 17% Й-бензилоксикарбонил-L-аспартил- (Сд)-1.-фенилаланина

1 Точка плавления 110 . вЂ” 118 С.

Пример 17. В колбе ем костью 30 мл 0,543 г (2 ммоль) N-бензилоксикарбонил-.L-аспарагиновой кисАоты и 0,918 r (4 ммоль) хлоргидрата этилового эфира L-фенилаланина растворяют в 5 мл воды, к раствору добавляют 4н,водный NaOH, рН доводят. до б. бО

В полученный раствор вводят 50 мг термолизина и смесь встряхивают при температуре 38 вЂ” 40 С в течение ночи.

Осадок отфильтровывают, промывают

30 мл воды, сушат. Получают 0,913 г

841583 кристаллов, имеющих точку плавления

85 вЂ” 90 С.

Продукт тождественен с продуктом присоединения этилового эфира Й-бензилоксикарбонил-L-аспартил-! -фенилаланина и этилового эфира L-фенилаланина (1:1).

Продукт перекристаллизовывают из смеси этилацетата и п-гексана.

Точка плавления 93 вЂ” 95ОС.

ГЫ,) > + 6,0 (С=1, метанол).

Элемейтный анализ.

Найдено, Ъ: С 64,50; Н 6,56;

N 6,63.

Ъ444 э 9

Вычислено, Ъ: С 64,23; Н 6,50;

N 6,61.

Инфракрасный спектр:

3300 см-" (колебание растяжения связи N-Н); 2900 вЂ” 3050 см " (коле-! бание растяжения С-Н); 1710 вЂ” 1740см (C=O сложный эфир и С = О уретан);

1640 .см-1 (1-ое амидное поглощение);

1585 см-" (карбоксилат); 1520 см " (,2-ое амидное поглощение); 1440 см(деформационное колебание С-Н);

1380 см " (кррбоксилат); 1200 и

1270 см (колебание растяжения С-О-С и 3-е амидное поглощение); 1055 см

-М (колебание фенила в плоскости); 700, 730 и 750 см -" (колебание фенила вне плоскости).

Спектр ЯМР: (1) 1,1 части на миллион (6Н); (2) 2,7 части на миллион (2Н); (3) 3,0 части на миллион (4Н); (4) 4,0 части на миллион (4Н); (5) 4,1 части на миллион (1Н); (6) 4,5 части на миллион (1Н); (7) 4,0 части на миллион (1Н); (8) 5,0 части на миллион (2Н); (9) 6,2 части на миллион (1Н); (10) 6,7 части на миллион (ЗН); (11) 7,2 части на миллион (1Н); (12) 7,2 части на миллион (10Н); (13) 7,3 части на миллион (5Н).

Эти результаты подтверждают, что продукт является продуктом присоединения формулы (I),ãäå К!, R<, R> и и означают бензилоксикарбонил, бензил этокси и 1 соответственно.

В колбе емкостью 30 мл 0,125 r (0,197 ммоль) полученного продукта присоединения метиловогo эфира Nâ€” бензилоксикарбонил-L-аспартил-L ôåнилаланина и этилового. эфира L-фенилаланина смешивают с 2 мл воды и

0,24 мл 1н НС1 (0,24 ммоль), смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. Полученную суспензию филь-.руют, осадок промывают

5 мл воды, сушат, получают 0,0807 r кристаллов этилового эфира N-бензилоксикарбонил-Е-аспартил-I -фенилаланина (чистота 100Ъ, выход 92,6Ъ). Кристаллы перекристаллизовывают из смеси этилацетата и п-гексана.

Точка плавления 128 вЂ” 135 С.

t.0(3 в- 17,3 (С=1, метанол).

Элементный анализ.

Найдено, Ъ: С 62,82; H 5,96; и 6,40.

23 26 2 7

Вычислено, Ъ: С 62,43; Н 5,92;

N 6,33.

Инфракрасный спектр:

3300 р 2900 вЂ” 3100; 1730; 1690 р

1665; 1530; 1440; 1280; 1030; б 20; 740 см

Спектр ЯМР, д: .

1,1 части на миллион; 2,8 части на миллион, 3,0 части на миллион, 4,1 части на миллион; 4,6 части на миллион, 4,8 части на миллион; 5,1 части на миллион; 6,0 части на мил-!

5 лион; 7,1 части на миллион; 7,3 части на миллион; 9,6 части на миллион.

Пример 18. 1,189 r (4ммоль)

N-p-метоксибензилоксикарбонил-L-аспарагиновой кислоты и 1,837 г (8 ммоль)

2р хлоргидрата этилового эфира L-фенилаланина помещают в колбу емкостью

30 мл и растворяют в 1н водном NaOH, рН доводят до 6,0.

Раствор разбавляют водой до 15 мл и смешивают с 0,1 г термолизина.Смесь перемешивают при температуре 38-40 С в течение 7 ч.

Полученный осадок отфильтровывают, промывают 30 мл воды, сушат. Получают 2,401 г (выход 90,2Ъ) продукта присоединения этилового эфира й-р-метоксибензилоксикарбонил- -аспартил -L-фенилаланина и этилового эфира .L-фенилаланина (1:1).

Продукт перекристаллизовывают из смеси метанола и диэтилового эфира.

Точка плавления 82 вЂ” 87 С. (83 + 6, О (C=1, метанол) .

Элементный анализ .

Найдено, Ъ: С 63 52; Н 6, 77;

40 N 5,54.

М 4Ú 3 1о

Вычислено, Ъ: С 63,14; Н 6,51; и 6,31.

Спектр инфракрасного поглощения и ЯМР дают следующие характеристические максимумы.

Инфракрасный спектр:

3300 см " (колебания растяжения

N-Н); 2900 . вЂ” 3050 см -" (колебание растяжения С-Н); 1720, 1730 и 1740см (C=O сложные эфиры и уретан); 1650см (1-ое амидное поглощение); 1510 ,1540 см-" (2-ое амидное поглощение);

1440 см-1 (деформационное колебание

С-Н); 1390 см -" (карбоксилат); 1220

1280 см -" (С-О-С) растяжение и 3-е амидное поглощение); 1030 см 1 (деформация фенила в плоскости); 690, 760 и 810 см (колебание фенила вне

60 плоскости).

Спектр .ЯМР (g значение): (1) 1,2 части на миллион (6Н); (2) 2,7 части на миллион (2Н); .(3) 3,1 части на миллион (4Н);

841583

Составитель В.Волкова

Редактор А.Шишкина Техред.H.Áàáèíåö Корректор О.Билак

Заказ 4875/84 Тираж 443 : Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 ф анап ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 (4) 3,8 части на миллион (ЗН) у (5) 4,0 части на миллион (4H) l (б) 4,1 части на миллион (1Н); (7) 4,5 части на миллион (1Н); (8) 4,7 части на миллион (1Н); (9) 5,0 части.на миллион (1Н); (10) 5,5 части на миллион (4Н); (11) б,1 части на миллион (1Н);

° (12) 6,8-7,4 части на миллион (14Н).

Эти результаты показывают, что

10 продукт представляет собой продукт присоединения формулй (Х), где R4, R . R H n o3H T р-метоксибензил2 3 оксикарбонил, бензил, этокси и 1, соответственно. 15

Повторяют процесс описанный в примере 22, за тем исключением, что используют полученный продукт присоединения вместо продукта присоединения метилового эфира N-p-метоксикарбонил-L-аспартил-)-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина. Получают этиловый эфир L-аспартил-Lфенилаланина. Выход эфира 95,5Ъ. формула изобретения

Способ получения дипептидных эфиров формулы .

1 но -(сн i Ь - с-NH- н-с -R

2Ь

2 где R бенэилоксикарбонил, и-метоксибензилоксикарбонил;

R 2 вЂ” бензил;

R > вЂ” низший алкоксил;

n вЂ” 1 или 2, отличающийся тем, что соединение формулы

О О мн о

И R II к -с-сн-мн - нос вЂ (сн ) -сн-с-мн-сн-с-R

Ъ 2 а и ю 3

Я2 fl где В4., и 2, R>, n имеют указанные знаяения, обрабатывают водным раствором кислоты и бтделяют полученный ,целевой дипептидный эфир в виде твер, дого продукта.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент Японии р 14217, . кл. 16 С 64, 1974.

Способ получения метилового эфира -аспартил фенилаланина // 713862

Способ получения алкиловых эфиров -аспарагил- -фенилаланина или их солей // 544367

Производные аспартама или их физиологически приемлемые соли, способ их получения, подслащивающее средство // 2107071

Способ извлечения исходных материалов в процессе изготовления аспартама и устройство для его осуществления // 2128187

Изобретение относится к способу извлечения исходных материалов в процессе получения аспартама с использованием мембранной нанофильтрации водных процессовых потоков, содержащих также растворенную соль, путем обработки каждого из водных процессовых потоков или сочетания двух или нескольких таких потоков, нанофильтрацией с помощью композитной мембраны с удельным удержанием компонентов выше 100Д и одновалентных солей, при этом исходные материалы, присутствующие в ретентате, полученном таким образом, извлекают способами, известными в данной области, или ретентат возвращают в процесс получения аспартама без дополнительной обработки

1-метиловый эфир n-[n-(3,3-диметилбутил)-l--аспартил]-l- гексагидрофенилаланина в качестве подслащивающего агента и способ его получения // 2138511

Способ антимутагенного воздействия на организм // 2145869

Изобретение относится к области медицинской экологии, в частности к способу защиты от мутагенного действия химических агентов окружающей среды

Способ кристаллизации -l-аспартил-l-фенилаланин метилового эфира из водного раствора и устройство // 2155635

Изобретение относится к способу охлаждения водного раствора аспартама и кристаллизации из него аспартама, исключая тубулизацию в водной кристаллизационной системе путем (i) подачи горячего водного раствора аспартама в средство для диспергирования капель; (ii) диспергирования капель в несмешиваемую с водой жидкость, температура которой по крайней мере на 20°С ниже для того, чтобы в каплях не происходило образования центров кристаллизации во время прохождения их через несмешиваемую с водой жидкость; (iii) охлаждения упомянутой несмешиваемой с водой жидкости с тем, чтобы упомянутые капли эффективно охлаждались для достижения исходного пересыщения -L-аспартил-L-фенилаланин метилового эфира внутри капли в пределах от 1 до 6, предпочтительнее от 1,2 до 4; (iv) сбора охлажденных капель для кристаллизации аспартама; и (v) обеспечения достаточного времени для этого

Способ кристаллизации метилового эфира -l-аспартил-l- фенилаланина из водного раствора // 2155771

Сложноэфирные производные аспартилдипептидов и подслащивающие вещества // 2179979

Изобретение относится к соединениям формулы (1), включая их соли, в которой R1, R2, R3, R4 и R5 независимо друг от друга обозначают заместитель, выбранный из атома водорода, гидроксильной группы, алкоксигруппы с 1-3 атомами углерода, алкильной группы с числом атомов углерода от 1 до 3 и гидроксиалкилоксигруппы с 2-или 3-мя атомами углерода или R1 и R2, или R2 и R3 вместе образуют метилендиоксигруппу, где R4, R5 и R1 или R3, не образующие метилендиоксигруппы, являются их частью и независимо друг от друга являются любыми заместителями, обозначенными для R1, R3, R4 и R5 соответственно так, как указано выше; R6 означает атом водорода или гидроксильную группу и R7 означает заместитель, выбранный из метильной группы, этильной группы, изопропильной группы, н-пропильной группы и трет-бутильной группы, при условии, что производные, в которых заместители от R1 до R5 все являются атомами водорода, и производные, в которых R2 или R4 является метоксигруппой, а R3 является гидроксильной группой, исключаются

Смешанные кристаллы, содержащие аспартам и производное аспартама, и способ их получения // 2189988

Изобретение относится к новому смешанному кристаллу, содержащему сложный метиловый эфир N-[N-(3,3-диметилбутил)-L--аспартил]-L-фенилаланина, который может применяться в качестве подсластителя, обладающего улучшенным качеством сладости и гомогенной структурой

Новые производные аспартилового дипептидного эфира и подсластители // 2192430

Гранулированный подсластитель // 2205548

Изобретение относится к гранулированному подсластителю, представляющему собой гранулы смеси аспартама и ацесульфама-К в качестве активных ингредиентов, в котором количество ацесульфама-К составляет 20-90 вес.% от общего веса обоих компонентов, а максимальный размер гранул составляет 1400 мкм или менее