Способ получения молокосвертывающего ферментного препарата

 

В. Аравййская

,/ (72) Авторы изобретения

В. Ф. Мьшанский, Ю. Е. Конев, 3. A. Жилина, С и И. М. Терешин (7!) Заявитель

Всесоюзный научно-исследовательский технологический ин антибиотиков и ферментов медицинского назначения (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОЛОКОСВЕРТЫВАВЩЕГО

ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА

Изобретение относится к медицинской промышленности, в частности к производству ферментов медицинского назначения, н касается повышения активности продуцента молокосвертывающего фермента руделина.

По основному авт.св. N 522230 известен способ получения молокосвертывающего ферментного препарата, используемого дяя получения молокосвертывающего препарата "PyccyIO лин", который может заменить ферментный препарат аналогичного действия "Репнин" животного происхождения. Этог способ характеризуется тем, что в качестве продуцентов фермента используют базидальные грибы вида Russute

1j

deaoloraus, а именно штамм Russula dam@raus штамм 2, культивирование которого ведут на питательной среде, содержащей необходимые источники для роста продуцента при 25-26 С до достижения максимальной активности в куль туральной жидкости. После чего мицелнй отделяют, фильтрат охлаждают, осаждают белки охлажденным этиловым спиртом, смесь выдерживают сутки при --15 С, декантируют надосадочную жидкость, осадок отделяют и высушивают. Активность препарата 500000 ед. (1).

Однако данный способ не позволяет получить фермент, обладающий активностью, выше указанной в известном способе.

Цель изобретения -- повышение активности и выхода целевого продукта фермента.

Поставленная цель достигается тем, что культуральную жидкость на б — 7 сутки культивирования в период максимальной активности продуцента подвергают тепловой обработке в субэкстремальном интервале температур 37,5-38,5 С в течение 30 — 75 мин.

Сущность способа состоит в том, по для осуществления этого процесса колбы, содержащие культуру в период максимальной продукции фермента, т.е. на 6 — 7 сутки фермеитации в обычных условиях, подвергали воздействию повышенной температуры 37,5 — 38,5 С в течение различного времени для определения тех сроков, в которые, происходит максимальный выход фермента. Опыты с интервалами в

15 мин показали, что имеет место фазный характер увеличения выхода фермента: в частнос54983 4 ординат — активность куя ьтуральиой жидкости. соответствующая количеству фсрменга и ней (в процентах к контролю), на оси абцисс время прогревания.

В таблице приведены розу)п гиты статистической обработки полученных дгпщых. нри определении зависимости молокосвер ывающей активности культуральной жидкости от температурной обработки в интервале субэкстрсмальной температуры.

Время экспозиции, мин

Активность (средняя арифметическая), l

2030

118

)3,6

123

7930

26,9

103

3510

17,9

113

4190

l7,3

133

2490

22Ä3

6360!!4

24,1

8080

105

28,4

105

120

2400

13,1

109

14,4

2290

135

112

7570

150

109

9320

30,5

165

123

3670

16,2

180

107

3860

19,7

105

195

2910

16,3

210

29,8

5660

225

100

115

2 l,4

6420

240

Пример. Ферментацию проводят в качалочных колбах емкостью 750 мл (со 100 мл питательной среды) на качалках при 140 об/мин при 26 С в течение 7 сут. В результате периодической проверки молокосвертывающей активности культуральной жидкости (контроль) и той же жидкости после очередной температурной обработки (опыт) отмечено значительное (в среднем, на 33%) пЬвышение уровня активности культуральной жидкости через

1 ч 15 мин выдержки в термостате при 38 С (данные ряда опь тов суммированы в таблице

3 8 ти, наиболее высокое значение наблюдается в сроки 30 мин и 1 ч 15 мин. Последний срок является OIITHMBJll цым в больщенстве опытов и при этом в среднем активность превьппает активность культуральной жидкости в контроле на 33%. Активность культуральной жидкости без температурной обработки (контроль) не меняется на протяжении 24 ч.

На чертеже представлен график результатов проведенных экспериментов, причем на оси

Дисперсия Среднее квадрати(сумма квадратов) ческос отклонение и на графике). Молокосвертывающая активность культуральной жидкости, достигнутая в конце ферментации, служит контролем для дальнейшего эксперимента. Колбы с культуральной жидкостью помещают в ультратермостат, обеспечивающий быстрый нагрев и дальнейшее поддержание температуры «а уровне 38 С.

Каждые 15 мин в течение 4-х часов проводят очередную проверку молокосвертываюшей активности культуральных. жидкостей. Определение активности фермента проводят по следующей методике: в 100.мг молока вносят!

7/Отп/Аюс ь е /рему

0 миг/

Составитель И. Привалова

Техред С. Мигунова Корректор С. Шомак

Редактор М. Келемеш

Тираж 528 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская иаб., д. 4/5

Заказ 6831/35

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

1 мл 15 -ного раствора СаС12, берут !О мл в пробирку, нагревают цо 35 (и вносят

1 мл активной культуральной жидкости. В момент внесения культуральной жидкости включают секундомер и активность фермента определяют по времени образования плотного сгустка.

1!реимущества предлагаемого способа заключаются в том, что кратковрсменная тепловая 10 обработка позволяет сугцественно увеличить выход и активность фермента, а также экономический эффект при промышленном получении указанного продукта.

Формула изобретения

Способ получения молокосвертывающего ферментного препарата по авт.св. Н 522230, .отличающийся тем, гто,сцелью повьннения активности и выхода целевого продукта, культурапьную жидкость на 6-7 сутки культивирования в период максимальной активности продуцента подвергают тепловой обработке в субэкстремальном интервале температур 37,5 — 38.5 C в течение 30-75 мин.

Источники информапии. принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР 11 522230, кл. C 12 О 13/10, 1972.