Способ отбора клеток инсулярных островков для трансплантации

 

Союз Советских

Социалистических

Рескубпик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К . АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

«i )907433 (6I ) Дополнительное к авт. свив-ву (22) Заявлено 26. 05. 78 (21)26143 1/28-13 с присоединением заявки И (23) Приоритет (5I)M. Кл.

6 01 и 33/48

Гаауйаратееаый какнтет

СССР па делен изобретений и открытей (53) ÂÊ 612 34 (088. 8) Опубликовано 23.02 ° 82 ° Бктллетень № 7

Дата опубликования описания 25. 02. 82 (72) Авторы изобретения

Л. Л. Вахрушева, 3. И. Котан и И. И

2-й Московский ордена Ленина государ тв институт им. Н. И. Пирогов1 (7l ) Заявитель (54) СПОСОБ ОТБОРА КЛЕТОК ИНСУЛИНОВИХ

ОСТРОВКОВ ДЛЯ ТРАНСПЛАНТАЦИИ

Изобретение относится к медицине, а именно к способам определения жизнеспособности клеток инсулиновых островков для трансплантации при лечении диабета.

Известен способ отбора клеток инсулиновых островков для трансплантации путем обработки их акридиновым оранжевым с последующим определением появления люминисценции (1).

Однако при осуществлении извест1О ного способа инсулиновые островки, отобранные для трансплантации как жизнеспособные и дающие зеленую люминисценцию, в значительном числе

15 случаев на практике оказывались нежизнеспособными и не давали эффекта при тоансплантации.

Цель изобретения - повышение точности способа.

Укаэанная цель достигается тем, что при осуществлении способа отбора клеток инсулиновых островков для

, сплантации путем обработки их акридиновым оранжевым с последующим определением появления люминисценции определяют время появления люминисценции, при величине которого 5-12 мин клетки отбирают для трансплантации.

Способ осуществляют следующим образом.

К суспензии изолированных с помощью коллагеназы визуально полноценных островков поджелудочной железы добав" ляют равный обьем раствора акридинового оранжевого в концентрации

0,01 мг/мл, рН-7,4, накрывают покровным стеклом и фиксируют время появле" ния бледнозеленого свечения ядер клеток в видимом спектре люминисцент" ного микроскопа. При появлении свече" ния ядер клеток через 5-12 мин после добавления фруорохрома клетки остров" ков можно считать жизнеспособными и пригодными для трансплантации. При более раннем появлении люминисцен" ции ядер клеток, независимо от ее цве907433 формула и зобретения

Составитель Ю. Алмазов

Редактор А. Шандор Техред E. Харитончик Корректор М. Пожо

Заказ 581/52 Тираж 883 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035 Москва, 8-35, Раушская наб.z g. 4/5 филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, та, партию островков считают непригодной для трансплантации.

ll р и и е р 1. К 0,2 мм суспензии инсулиновых островков добавили 0,2 мл раствора акридинового оранжевого в концентрации 0,01 мпlмг, рН - 7,4.

При люминисцентной микроскопии бледнозеленое свечение появилось через

10 мин, Клетки этих островков были признаны жизнеспособными ° 80 инсулиновых островков этой партии было введено внутрибрюшинно крысе И ster массой тела 142 г с аллоксановым диабетом. На 3-й сут состояние животного улучшилось: появился аппетит, исчезла вялость, жажда, сухость шерсти, часса тела увеличилась на 100 r, уровень гликемии постепенно нормализовался к 10 сут после введения инсулиновых островков. 6 l

П р и. м е д 2. По предлагаемому е r способу отобраны инсулиновые островки. Отмечено появление бледнозеле" ной люминисценции ядер клеток островков через 7 мин. Крысе Hister массой 130 г, введено 100 инсулиновь1х ocTpoBt

18-е сут до нормального с 414 мг i перед трансплантацией. 4 контрольные крысы погибли через 2-7 сут после введения диабеточенного препарата аллоксангидрата.

Пример 3. По предлагаемому способу отобраны инсулиновые остров:;и. Отмечено появление зеленой люиинисценции ядер клеток в первые сек. после добавления флуорохрома. Клетки признаны нежизнеспособными. После введения 80 инсулиновых островков крысе с диабетом массо" тела 136 г, состояние животного продолжало прогрессивно ухудшаться, гликемия увеличилась с 460 мг 3 до 800 мг 3 в день. гибели . Крыса погибла через

1О

8 сут после введения аллоксангидрата и через 5 сут после введения островков.

П р и и е р 4. Немедленная зеленая люминисценция ядер клеток появилась у отобранных инсулиновых островков по предлагаемому способу, но предварительно инкубированных с ал- локсаном, который повреждает В-клетки, составляющие 90 всего клеточного состава островков. Клетки островков признаны нежизнеспособными.

Пример 5. По предлагаемому способу отобраны инсулиновые островки. Отмечено появление яркозеленого и оранжевого цвета люминисценции в первые две мин после добавления флуорохрома, Клетки островков при" знаны нежизнеспособными, Изогенная трансплантация островков крысе с аллоксановым сахарным диабетом не спасла животное. Крыса погибла на 5-е сут после введения аллоксангидрата и

3-е сут после введения островков

Предлагаемый способ позволяет выявить партии инсулиновых островков поджелудочной железы, пригодные для трансплантации и повысить точность отбраковки непригодных, причем способ прост в осуществлении.

Способ отбора клеток инсулиновых островков для трансплантации путем обработки их акридиновым оранжевым с последующим определением появления люминисценции, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности способа, определяют время появления люминисценции, при величине которого 5-12 мин клетки отбирают для трансплантации.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Лопухин И.M., Коган 3.М. Критсрии жизнеспособности органов и тканей перед трансплантацией. М., "Медицина, 1975, с. 187, 188, 192.