Способ дифференциальной диагностики фибринолиза и фибриногенолиза

 

СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ФИБРИНОЛИЗА И ФИБРИНОГЕНО- ,. ЛИЗА путем иммунохимического исследования сыворотки крови, о-т л и ч аю щ и и с я тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, исследуемую пробу сыворотки крови делят на две части, одну из них прогревают при 55-57°С ,в течение 18-22 мин, определяют в. ней концентрацию D-фрагмента фибрина и при наличии его диагносцируют фибринолиз, в другой части определяют концентрацию D-фрагментой фибрина и фибриногена и при. налич:ии D.-фрагмента фибриногена в отсутствие D-фрагмента фибрина диагносцируют фибриногенолиз. ю О vj 00

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

P D А 61 В 10/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

- СР

h4

Ж 00 (21) 3320139/28-13 (22) 04. 06. 81 (.46) 07. 07 . 83. Бюл. Р 25 (72) И.В.Полынская, З.Д.Федорова и Л.Н.Панфилова (71 ) Ленинградский ордена Трудового

Красного Знамени научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови (53) .612.115(088.8) (56) 1. Елизарова А.И. Федорова З.Д.

Получение антифибриногеновых сывороток, применяемых для определения распада фибриногена и фибрина. — "Лабораторное дело", 1971, Р 12, с.23-26..

2. Парадеева И.К., Жукова И.В. Определение продуктов деградации фибриногена и фибрина методом иммунодиффузии. ",Пабораторное дело", 1979, 9.10, с ° 590-592.

3 Heene D.D. DifferentiaI Diagnosis between the Primary and the Secondary Rise of fibrinogen.-"Fî1ià

Haemato3," 1970, v..94, 9 2, р.186-195.

4.. Bick R.Z. Disseminated Intraхазси1аг CoaguIation апй ReIated

Syndromes:Etio1ogy> PathoIogy, Patho- .

phys2oIogy, Diagnosis and Management. йпег J. Hemat„ 1978,5, 93, р.265-282.

5. Lasch Й.G. Verbrauchskoagu-;, Iopathie und fibronoIise.FoIia HaematoI„ 1977, В.104, 96, s.794-800.

6. Варецкая Т.В. Строение и свойства фибриногена и фибрина, самосборка волокон фибрина. Дис. д-ра биол. наук, 1977,Киев...SU„„.1 026778 A (54)(57) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ФИБРИНОЛИЗА И ФИВРИНОГЕНО- ..

ЛИЗА путем иммунохимического..исследо- вания сыворотки крови, о т л и ч аю ц и и с я тем, что, с целью ускорения и упроцения способа, исследуемую пробу сыворотки крови делят на две части, одну из них прогревают при 55-57 С в течение 18-22 мин, опрецеляют в.. ней концентрацию D-фрагмента фибрина и при наличии его диагносцируют фибринолиз, в другой части определяют концентрацию D-фрагментоВ фибрина и фибриногена и при. наличии П;фрагмента фибриногена в отсутствие D-фрагмента фибрина диагносцируют фибриногенолиз.

1026778

Изобретение относитак к медицине, а именно гематологии, и касается способа дифференциальной диагностики фибринолиэа и фибриногенолиза.

Известны способы дифференциальной диагностики фибринолиза и фиб- 5 риногенолиза путем определения показателей свертывающей и противосвертывающей системы: определение концентрации фибриногена, числа и функции тромбоцитон; парциального тромбопластиноного, тромбиноного, протром« бинового и рептилазного .времени, антитромбина Я, этанолоного и протамин-:., сульфатного теста; g, УП, ХЦ и ХЯ факторов свертывания крови, степени

Фибринолитической активности крови, глубины распада фибриногена и фибрина (Ц вЂ” (5) .

Однако определение перечисленных показателей недостаточно для конкретной дифференциальной диагностики Фиб-30 ринолиза. и фибриногенолиза. Кроме того, необходимо отметить сложность и трудоемкость выполнения требуемого комплекса исследований, которые до настоящего времени мало доступны для 25 повседневной гематологической практи-. ки.

Известен способ дифференциальной диагностики фибринолиза и фибриногенолиэа путем иммунохимического иссле-З0 дования сыворотки крови (6) .

Недостатком способа является его длительность и трудоемкость.

Целью изобретения является ускорение и упрощение способа.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу дифференциальной диагностики фибринолиза и фиб.— риногенолиза путем иммунохимического исследования сыворотки крови исследуемую пробу сыворотки крови де-40 лят на две части, одну из них прогренают прр 55-570С н теченйе 18-22 мин далее определяют в ней концентрацию

D-Фрагмента фибрина и при наличии его диагносцируют фибринолиз, во второй 45 пробе определяют концентрацию

D-фрагментов Фибрина и фибриногена и при наличии D-фрагмента фибриноге- . на в отсутствии D-фрагмента фибрина, диагносцируют Фибриногенолиз. 50

Способ осуществляют следующим образом.

Навеску агар-агара растворяют в веронал-ацетатном буфере, доводят .до полного набухания на кипящей водяной. бане, фильтруют и готовят плен5 ки агара. В застывшей пленке специальным перфоратором делают отверстия по 6 вокруг 1 центрального.

В центральные отверстия вносят моноспецифическую сыворотку к Q -фраг- 60 менту Фибриногена (АДС). В периферические отверстия по часоной стрелке вносят разведенную в геометрической прогрессии веронал-ацетатным буфером непрогретую и прогретую сыворотку 5 исследуемОго больноГо. Пленки агара оставляют на 24 часа во влажной камере при комнатной температуре для образования осадка, который проявляется в виде линий преципитации. После

Формирования дуг преципитации на основании чувствительности используемых АДС производят подсчет-расшифровку результатов исследонанияи осуществ ляют дифференциальную диагностику. f

Пример 1.. Вольная 32 лет, обследована по поводу острого промиело.цитарного лейкоза.

В крови больной определяют.содержание продуктов деградации фибрина и фибриногена, для чего 15 г агарагара растворяют в 1 л веронал"ацетат-, ного буфера рН 8,6 .ионной силой.

0,5 на кипящей нодяной бане. После полного набухания агара, его фильтруют и готовят пленки толщиной 11,5 мм.

После полного застывания в пленке агарового геля, специальным металлическим перфоратором делают 12 отверстий по 6 вокрг 2 центральных.

Таким образом получается 2 звезды.

Диаметр всех отверстий и расстояние между ними равно 5 мм. В центральные отверстия 1 и 2 звезды вносят по

0,05 мл АДС. В периферические отверстия 1 звезды вносят непрогретую сыворотку крови больной, .разведенную в геометрической прогрессии вероналацетатным буфером рН 8,6, ионной силой 0,3. Соотношение исследуемогО материала и буфера следующеег 1;

1:1,. 1:2; 1:4 и т.д.

В периферические отверстия 2 звезды вносят разведенную укаэанным спо" собом прогретую сыворотку исследуемого больного. Прогревание сыворот" ки осуществляют 20 мин при 56 С.

Через 24 ч инкубации агаровой Плен" ки но влажной камере при комнатной температуре в ней .образуется осадок, который выявляется в виде дуг пре". ципитации. На основании чувствительности антисыворотки. (наименьшая концентрация антигена, улавливаемая используемой АДС) производят подсчет ,,(мг.%)i количества суммарной концентрации продуктов деградации фибриногена {фибрина) (1 звезда), количество дубль- 9 -фрагмента фибрина {2 звезда} по формуле

A=ВхС где А - количество исследуемого параметра, мг.Ъ; в — чувстнительность иммунной сы-, воротки, С вЂ” количество линий иммунопреципитации в пленке arapa (разведение).

При лабораторном обследовании выявлено наличие фрагмента D -фибриногена (12,5 Mr%) при отсутствии

1026778 0«фрагмента фибрина. Йа основании мента фибриногена - отсутствует). полученных данных был диагностирован Состояние больного улучшилось. фибриногенолиз. Клинически отмечались

;единичные геморрагии на коже канеч- Пример 3. Больная перенес ностей. В связи с лабораторными приз- ла операцию кесарева сечения на оснаками дВС больная получала цитоста- новании следующих клинических дантическую терапию и гепарин, который ных: узкий таз 1-й степени, рубец назначали внутривенно капельно мед- на матке, пиелонефрит. до операции ленно в дозе 2-5 000 ед,по схеме. иммунологические исследования конКонтролем лечения служили данные . статировали фибриногенолиэ (конценткоагулограммы и иммунохимическйе тес- о рация фибриногена 300 мгЪ, D-фраг1. ты, которые позволили регулировать мент фибриногена - 25 мгЪ, D-фрагдозировку препарата и показали в кон- мент фибрина отсутствует) после леце лечения отсутствие .распада как чения И операции отмечали фибринолиэ фнбриногена, так и фибрина. Больная @олиЧество Фибриногена — 300 мгЪ, после лечения находилась.в состоянии 15 6-фрагмента фибрина - 25 мгЪ, D-фрагремиссии. мент.фибриногена отсутствует). У беПример 2. Больной 46 лет поступил ременных во время операции кесарева с диагнозом остры тромбоз глубоких .сечения нередко .возникают серьезные веи левой нижней..конечности. Клини- нарушения свертывания. крови, прочески отмечалось покраснение, отек .gg являющиеся в виде .послеоперационных и резкая боль в пораженной конечнос- тромбоэов магистральных сосудов или ти. Первичное лабораторное обследо- массивных кровотечений. С целью ванне подтвердило клинический диаг- .предотвращения этих осложнений, ноэ острого тромбоза (увеличение . которые подтверждались иммунологическонцентрации фибриногена до 400 мгЪ, 25 кими. тестами, в конце операции внутD-фрагменты фибрина и фибриногеиа от- : ривенно одноразово введено 5 000 ед, . сутствовали)Лечение проводили уро- гепарина. После проведенного лечения кинином бдноразово внутривенно ка- и операции у беременной по всем ис.пельио в дозе 20000 ед. с добавле- следуемым показателям констатиронием Гепарина по схеме. 8 процессе вана конечная стадия фибринолиэа лечения больного с помощью иммунохи- (концентрация фибриногена - 300 мгВ, мических тестов выявлена активная,D-фрагмент фибрина - 25 мгЪ, D-фраГ.фибриногенолиза (количество фибрино- .мент фибриногена отсутствовал). Кро гена 150 мгВ, 0-фрагмент фибриногена - вотечения и тромбоза не наблюдали.

100.мгВ, D-фрагмент фибрина - от-, B таблице представлены результаты ,сутствует ), а в конце лечения заре- ",.35:исследования фибринолиза и фибриногегистрировали фибринолиз {концентра-. : нолиза в крови здоровых лиц и больных ция фибриногена - 100 май%, D-.ôðàã- различными заболеваниями. у

I I 1

l !

I

LA

ГЧ

1 I

I ь

$ !ч о е

I O

19О

1 Я И

1 1 х

1 1 Х

1О9

1 90l

1 Ф 9

I Х 4

14О ! ОО

t: 1

I

1

I.

I ь ь

М

I о о

С4.1

1! о

ow х

Х It

Р л х х ее о

Ю ч

1 9

6 Х 3

I

1

I

I

1 с

1 Х! И

I 9

6l! о х! ао

I 4г1

Ф 11! И

l Ok

-"1 М

1 Х II

3 Х

I I C C

I 1 и

1 . I 9

I 1 L Х ! оа

3 ! ! 9 I 9 ! о

1 3 1 О

1 И ! Х1О

I Oie

1,а!и

1 I И

1 . I

1 М 1 U

1 I О ! о

6) ! о ! 4

I eo

3 gCh

3 I

I 3

1 I gll 1 1РФ

1 Н

I Q

1О

1 Х

l Oa11

1 Ц Х

INK

1 !

1 I Х

I Х.ЦЙ3в

1026778

Х 1 Я

Р а ХMI е 4 !ill хоо

9 х х

Х 6I CO 1

О 5 Il хо .

Вх I

cOl ! о

ХХ. I

Р 9 III

О4Я хо! Охб

1

l 1

1 Х 9 1

РiХiЧ I

О Цх-3 1 ! aO1I ! ех г

I !

1 (Ч

1ОЧ хх и

1. Ра

I О4Я I ии хо:х ч в х х

II 1

Cl I ..

19 5 1! Ю

1 Х ! ах

1 3 9(") ! oy

1oe11 ! 3=!!АЙ

I (—. 1

l I

I, I 1

I аm.1

I Ф. I

I 9 11

1 °

1ОХ

1 Om ! хх

g 3Ь ! Р,ОЮ !

ОХ

I Хан в их!

1 Х

Ф 1 &

Qs4 I Ю

8 gA L

9&(6 494

I O ххххх

Р453й

ОРР

I!I 9 О 1 е х оде

9 I

5 1

ЦОХ 1

О 3»9

34ЦЯ 1, .1026778

Составитель Е.Житникова

Техред С. Мигунова Корректор .Г. Огар

Редактор М.Товтин ююююе ею ююмююмюююмюмю в

° » »

Заказ 4609/6 Тираж 713 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул.. Проектная, 4

Таким образом, используя предлагаемый иммунохимический тест можно осу. ществить одновременное исследование и с, высокой степенью достоверности, проводить дифференциальную диагности, ку мещду фибринолизом и фибриногено- 5 лизом

Использование предлагаемого иссле дования исключает из практики.лаборато" рии комплекс длительных и трудоемких методов,что дает возможность с наимень шей затратой времени, материалов и аппа. ратуры получить достоверную информацию о фибринолизе и фибриногенолизе.