Питательная среда для культивирования @

Авторы патента:

СОЛОМАТИНА ПРАСКОВЬЯ СЕРГЕЕВНА

ФРЕЙМАН ВАЛЕРИЙ БОРИСОВИЧ

ГЛУЩЕНКО НИНА ВАСИЛЬЕВНА

ПАВЛОВА ТАМАРА АЛЕКСЕЕВНА

КУЗЬМИНА МАРИЯ АЛЕКСАНДРОВНА

ФЕДОРОВА ТАТЬЯНА МИХАЙЛОВНА

ФЕДОСОВА ЗОЯ ПАВЛОВНА

C12N1/20 - бактерии; питательные среды для них

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ Bacillus thuringiensis , содержащая дрожжи, источник углеводов, магний сернокислый или марганец сернокислый , кальциевую соль и воду водопроводную, отличающаяся тем, что, с целью ускорения спорообразования Bacillus thuringiensis, о«а дополнительно содержит аммоний фосфорнокислый или аммоний сернокислый, в качестве кальциевой соли - кальций хлористый или кальций углекислый, а в качестве источника углеводов - гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа при следующем соотношении компонентов, мас.%: Гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа, % по саха (С ру0,7-1,25 (Л Дрожжи БВК0,8-1,0 Аммоний фосфорнокислый или аммоний сернокислый 0,15-0,25 Кальций углекислый или кальций хлористый 0,15-0,2 Магний сернокислый или марганец сернокислый0 ,1-0,15 Вода водопроводная Остальное

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) 7 А, 1(,51) С 12 N 1/20

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

Н ABTOPCHGMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3417984/28-13 (22) 06.04.82 (46) 23.03 84. Бюл. № 11 (72) П.С.Соломатина, В.Б.Фрейман, Н.В.Глущенко, Т.А.Павлова, М.А.Кузьмина, Т.M.Ôåäîðîâà и З.П.Федосова или марганец сернокислый, кальциевую соль и воду водопроводную, о т л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью ускорения спорообразования Bacillus thuringiensis, она дополнительно содержит аммоний фосфорнокислый или аммоний сернокислый, в качестве кальциевой соли вЂ” кальций хлористый или кальций углекислый, а в качестве источника углеводов вЂ” гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа при следующем соотношении компонентов, мас.X:

Гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа, Е по сахару 0,7-1,25

Дрожжи БВК 0,8-1,0

Аммоний фосфорнокислый или аммоний сернокислый 0,15-0,25

Кальций углекислый или кальций хлористый 0,15-0,2

Магний сернокислый или марганец сернокислый 0,1 вЂ” 0,15

Вода водопроводная Остальное (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт микробиологических средств защиты растений и бактериальных препаратов и Научно-производственное гидролизное объединение

Главного управления микробиологической промышленности при Совете

Министпов СССР (53) 576.8.093.1(088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР №- 144579, кл. A 01 N 63/00, 1960

2. Авторское свидетельство СССР № 362048, кл. С 12 N 1/00, 1970 (прототип) (54)(57) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ

КУЛЬТИВИРОВАНИЯ Bacillus thuringiensis содержащая дрожжи, источник углеводов, магний сернокислый

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

1081207

Изобретение относится к микробиологической промышленнссти и может быть использовано при производстве энтомопатогенных бактериальных препаратов на основе Bacillus thuringiensis.

Известна кукурузно-глюкозная питательная среда для культивирования Bacillus thuringiensis (1) .

Однако известная среда малопродук тивна.

Известна также питательная среда для культивирования Bacillus thuringiensis, содержащая дрожжи кормовые, источник углеводов (кукурузную муку, крахмал, отруби или другие), хлористый натрий, хлористый кальций, сернокислый магний или сернокислый марганец и воду водопроводную (2) .

Однако известная среда не обеспе. чивает спорообразование в короткие сроки.

Целью изобретения является ускорение спорообразования Bacillus

thuringiensis.

Указанная цель достигается тем, что питательная среда для культивирвания Bacillus thuringiensis, со30 держащая дрожжи, источник углеводов, магний сернокислый или марганец сернокислый, кальциевую соль и воду водопроводную, дополнительно содержит аммоний фосфорнокислый или аммоний сернокислый, в качестве кальциевой соли вЂ” кальций хлористый или кальций углекислый, а в качестве источника углеводов вЂ” гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа при сле7.40 дующем соотношении компонентов,мас, Х:

Гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа, Х по сахару 0,7-1,25

Дрожжи БВК 0,8- 1,0

Аммоний фосфорнокислый или аммоний сернокислый О, 15-0,25

Кальций углекислый или кальций хлористый О, 15-0,2

Магний сернокислыи

50 или марганец сернокислый О, 1-0, 15

Вода водопроводная Остальное

Среду готовят следующим образом.

1Х-ную водную суспензию дрожжей

БВК нагревают до 80 С, выдерживают о при этой температуре в течение 30о

60 мин, затем охлаждают до 50 С и вводят в нее остальные компоненты.

Соль кальция вводят последней. Среду перемешивают, рН до стерилизации устанавливают в пределах 7,4-7,6, стерилизуют при 120-130 С в течение

30-40 мин. рН после стерилизации

6,8-7,2.

Пример 1. Готовят среду следующего состава, мас.7:

Гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа, 7 по сахару 0,7

Дрожжи БВК 0,8

Аммоний фосфорнокислый или сернокислый

Кальций углекислый (мел) или хлористый 0,15

Сернокислый магний или марганец 0,1

Вода водопроводная Остальное

Среду после стерилизации и охлаждения засевают Bacillus thurin0,15

0,2

0,18

Пример 3. Готовят среду следующего состава, вас.7:

Гексозосодержащий гидролизат древе81ensis культивируют в течение

У о

37 ч при 29+1 С. На среде с указанной минимальной концентрацией компонентов выход целевого продукта (концентрация спор и кристаллов) составляет 3,2 млд. в 1 мл культуральной жидкости с вирулентностью по

ЛК = 0,0037.

Пример 2. Готовят среду следующего состава, мас.7:

Гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа, Х по сахару 1,0

Дрожжи БВК 0,9

Аммоний фосфорнокислый или сернокислый

Калий фосфорнокислый 0,07

Кальций углекислый (мел) или хлористый

Сернокислый магний или марганец 0,13

Вода водопроводная Остальное

На среде с указанной оптимальной концентрацией компонентов выход целевого продукта (концентрация спор и кристаллов) составляет 3,7 млрд. в

1 мл культуральной жидкости с вирулентностью по ЛК О = 0,001Х..

1081207

0,25

0,1

0,2

Таблица 1 Морфология био-! массы в культуральной жидкости

Концентрация спор в культуральной жидкости млрд/мл

Вирулентность по

ЛК,Х

Штамм

Среда

С древесным гидролиэатом

0,001

Споры, кристаллы (1: 1), заспорованные кл.

5Х, вегетативные кл. 1Х

3,7

С торфяным гидролизатом

0,003

2,6

То же

49 сины или торфа, Х по сахару 1,25

Дрожжи БВК 1,0

Аммоний фосфорнокислый или сернокислый

Калий фосфорнокислый

Кальций углекислый (мел) или хлористый

Сернокислый магний или марганец 0,15

Вода водопроводная Остальное

На среде с указанной максимальной концентрацией компонентов выход целевого продукта (концентрация спор и кристаллов) составляет

3,3 млд в 1 мл культуральной жидкости с вирулентностью 0,002Х.

П р и м е .р 4. Гексозосодержащий гидролизат древесины готовят из древесной стружки путем обработки ее 0,5Х-ной серной кислотой .сначала при 140-160вС, за-.åì при 180-190 С.

По окончании гидролиза избыток серДанные табл,1 показывают, что на среде с торфяным гидролизатом культура штамма 49 растет и развивается нормально с обРазованием спор и кристаллов. Культуральная жидкость обладает высокой инсектицидной способностью. Некоторое снижение продуктивной кислоты нейтрализуют известковым молоком . После фильтрации гидролиэат очищают от летучих и нелетучих примесей (формальдегид, фурфу рол, гуминовые вещества и другие) и затем упаривают в вакуумной упаривательной установке при 70-80 С.

После упаривания в гидролиэате должно содержаться не менее 20-25Х редуцирующих веществ, которые представлены глюкозой (80-90X) и незначительным количеством других сахаров: галактозой, маннозой, ксилозой, арабинозой. Кроме сехаров в гидролизате содержатся минеральные компоненты: соли калия, натрия, магния, железа, меди и другие в микроколичествах.

Гидролизат торфа, получаемый с гидролизного завода, содержит 16,3Х редуцирующих веществ.

Данные по использованию гидролиэатов для выращивания Bacillus

thuringiensis представлены в табл.1 ности культуры на среде с торфяным гидролизатом связано с менее тщательной очисткой гидролизата.

Сравнительные данные по времени ферментации и спорообразованию приведены в Фабл. 2.

1081207

Т а б л и ц а 2

Содержание компонентов

Время ферментаСпорообСреда разонанне, 7. ции, ч

3,4

Оптимальное

3,0

100

Минимальное

100

3,5

Оптимальное

100

3,2

Максимальное 37

Составитель Г. Смирнова

РедактоР Н. РогУлич ТехРед M.Tenep Корректор В. Синицкая

Заказ 1477/22 Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ПГП! "Патент", г. Ужгород, ул. Проек гнея, Дрожжеполисахаридная (известная) Полусинтетическая (предлагаемая) Данные табл. 2 показывают, что предлагаемая среда позволяет за более корот

25 кое время достичь 100X вЂ” Hîão спорообразования культуры Bacillus thuringiensis.

Концентрация спор в культуральной жидкости млрд/мл

Использование питательной среды позволяет ускорить спорообразование

Bacillus thuringiensis, интенсифицировать производство, улучшить качество биомассы, удешевить производство.

Способ получения белкового гидролизата из коллагенсодержащих отходов производства белковой колбасной оболочки // 1074901

Способ получения биомассы метанокисляющих микроорганизмов // 1072815

Штамм ацидофильных метилотрофных бактерий acetobacter methylovorans всб-914-продуцент биомассы // 1070916

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается нового штамма ацидофильных метилотрофных бактерий продуцента биомассы на основе метанола

Штамм @ @ @ используемый для очистки сточных вод от сульфоэтоксилатов // 1068478

Питательная среда для культивирования коринебактерий дифтерии // 1065475

Питательная среда для получения сферопластов микобактерий туберкулеза // 1057533

Среда для дифференциации энтеробактерий // 1049541

Штамм @ @ n3,используемый для очистки промышленных сточных вод от @ -метилстирола // 1033542

Штамм @ инми-кз-2,используемый для очистки сточных вод от 2- хлорбензойной кислоты // 1028720

Среда для культивирования бактерии-симбионта bacillus pulvifaciens или bacillus subtilis - продуцента пробиотика // 2100029

Способ получения равномерно изотопомодифицированных природных l аминокислот // 2100434

Изобретение относится к области биотехнологии и органической химии, к способам получения изотопомодифицированных природных соединений, а именно: L--аминокислот, и может найти применение в экспериментальной биологии, медицине, ветеринарии, сельском хозяйстве

Дифференциально-диагностическая питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза // 2101342

Способ дифференциации штаммов сибиреязвенного микроба по вирулентности in vitro // 2101351

Штамм rhodococcus species 56д, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов // 2101352

Изобретение относится к микробиологии и касается получения нового штамма бактерий, пригодного для очистки почвы, пресной и морской воды от нефти и нефтепродуктов в течение 7-14 суток, в широком диапазоне температур 12-30oC

Способ отбора иммуногенных штаммов и субкультур живых сибиреязвенных вакцин // 2101355

Изобретение относится к медицинской микробиологии и иммунологии, в частности, к разработке, производству и контролю качества живых сибиреязвенных вакцин

Питательная среда для выделения и культивирования коклюшного микроба // 2101357

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике коклюша

Способ получения биомассы чумного микроба // 2102472

Штамм lactobacillus plantarum 435, используемый при производстве мясопродуктов // 2102473

Штамм бактерий pseudomonas species, используемый для утилизации формальдегида и способный при этом потреблять формальдегид в качестве единственного источника углерода и энергии в бедной минеральной среде // 2102474

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается нового штамма бактерий, используемых для биологической утилизации формальдегида, а также сопутствующих ему метанола и формиата в сточных водах химических производств (нефтехимзаводы, производства карбамидных смол, пластмасс и т.д.)