Штамм @ @ 36,используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов

 

Штамм Pseudomonas putida 36. (депонирован в Центральном музее промышленных микроорганизмов Института ВНИИгенетика, коллекционный номер ЦМПМ В-2443), используемый для очистки воды и почвы от -нефти и нефтепродуктов . (Л / S1 Од 4 4 да f 8 Время,ffH

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦ)4АЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН ч с (ОЛИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ:-

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Ю 3

Ф

«Вь

С5 ф .g g

Вреня, дн:

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И.ОТНРЫТИЙ (21) 3474745/28-13 (22) 22. 07. 82 (46) 28 02 ° 84 ° Бюл М 8 (72) В.Н. Дядечко, Л.Е. Толстокорова и Т.Н. Морозова (71) Западно-Сибирский научно-исследовательский геологоразведочный. нефтяной институт (53) 663.18(088.8) (56) 1.. Патент CIGA М 3813316, кл. 195-28, опублик. 1974.

2. Штамм Pseudomonas aeruginosa

121. Коллекция музея лаборатории внехромосомной наследственности

ИБФМ AH C (. P 1976

3. Авторское свидетельство СССР

В 612958, .кл. С 12 N 15/09, 1978 (прототип) .,SU„„A

M59 C 12 N 15/00 //.,С 02 Р 3/341 . С 12 R 1740 (54) MTANM РБЕЦРОМОНАЯ PUTIDA 36 g

ИСПОЛЬЗУЕМЫИ ДЛЯ ОЧИСТКИ ВОДЫ И ПОЧВЫ ОТ НКФТИ И НЕФТКПРОДУКТОВ (57) Штамм Pseudomonas putida 36 (депонирован в Центральном музее промышленных микроорганизмов Института ВНИИгенетика, коллекционный номер ЦМПМ В-2443), используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов.

1076446

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается штамма, используемого при биологической обработке воды от нефтепродуктов и почвы от остаточной замазученности.

Известен штамм Pseudomonas aeruginosa PAO, содержащий плазмиды CAN, ОСТ, NAH, SAL, контролирующие утилизацию углеводородов, используемый для микробиологической деградации 10 нефти и нефтепродуктов tlj .

Недостатком мультиплазмидного штамма Pseudomonas aeruginosa PAO является низкая скорость утилизации неочищенной нефти. 15

Известен также штамм Pseudomonas

aeruginosa 121, способный утилизировать октан f2) .

Недостатками данного штамма являются невысокая скорость утилизации и узкий спектр избирательного. действия.

Наиболее близким по достигаемому результату к предлагаемому является штамм Pseudomonas aeruginosa 123, несущий 0CT, CAN, НАН плазмиды, используемый при биологической очистке воды от нефти и нефтепродуктов

p).

Недостатком иззестного штамма является узкий спектр избирательного действия; он осуществляет резорб- . цию только нефтяной пленки и, не способен осуществлять утилизацию остаточной замазученности почвы.

Цель изобретения -. получение З5 штамма, способного осуществлять деградацию нефти, остаточной эамазученности, который может быть использован при очистке воды и почвы от загрязнений нефтепродуктами. . 40

Полученный штамм Pseudomonas puti-.

da 36 выделен иэ отработанного бурового раствора на органической. основе (нефть), хранящегося в шламовом амбаре открытого типа,(скважина 13100, 45 куст 1030, Белозерское нефтяное месторождение Тюменской области, 13 октября 1980 r) и депонирован во ВНИИгенетика, коллекционный номер ЦМПМ В-2443.

Полученный штамм Pseudomonas putida 36 (коллекция музея лаборато. рии микробиологии ЗапсибНИГНИ Мингео, РСФСР) имеет следующую характеристику.

Морфологические и культуральные признаки. Величина клеток односуточной культуры 1,7-2,4х0,3-0,5 мкм.

Преобладающая форма клеток — прямые, палочковидные. Грамотрицательные. 60

На мясопептонном агаре образуются колонии выпуклые, круглые, бесцветные. Размер 3-7 мм.

Мясопептонный бульон — образуется муть с выделением Газа. Картофель — 65 обильный рост, штрих выпуклый, сплошной, с образованием слизи. Желатину не разжижает. Молоко свертывает, подкисляет.

Физиологические признаки. Аэроб.

Растет при 28-42 С, при 4 С не растет.

Отношение к углеводам. Использует лактозу, глюкозу и мальтозу с выделением газа. Не усваивает арабинозу.

Отношение к углеводородам. Использует нафталин, камфору, октан, гексан, бенэол, толуол, ксилол, парафин, асфальтены. Парафинистые нефти ассимилируются активнее, чем ароматические.

Отношение к источникам питания.

Ассимилирует нитратный азот.

На чертеже приведен график, отображающий кривые прироста биомассы штаммов Р. putida 36 и Р. aeruginosa

123 на неочищенной нефти.

Пример. Штамм Pseudomonas

putida 36 выращивают на минеральной среде следующего состава, г:

К НР04 10,0

КНдРО 1,0

НН 4@ОЗ 2,0

И О 1000,0

В 250 мл колбу вносят 50 мл минеральной среды, 2,5 мл источника углеводородного питания (неочищенная нефть) и 1,5 ° 10 клеток. Культивирование производят на качалке при 30 С. Ежесуточно берут пробы, количество жизнеспособных клеток определяют высевбм разведений на среду МПА. Подсчет колоний производят через 24 ч. Окислительную активность штамма определяют по количест- ву выделяемого углекислого газа.

На графике кривые окислительной активности штаммов Pseudomonas putida 36 и Рэецйсипопаэ аегид1поза 123 на неочищенной нефти демонстрируют различную .способность этих штаммов деградировать неочищенную нефть.

Кривая а показывает изменение плотности клеток.(количества бактериальных клеток в 1 мл среды штамма) штамма Pseudomonas aeruginosa 123 во времени при концентрации нефти до 5% в среде.

Кривая Б показывает прирост биомассы штамма Р.putida 36.Максимальную плотность (1,5 ° 10 кл./мл) штамм P. putida 36 достигает на 56 сут, а штамм P °, aeruginosa 123 максимальную плотность 1,5 10 кл./мл

9 достигает на 2-4 сут.

Окислительная активность предлагаемого и известного штаммов на нефти представлена в таблице.

1076

Утилизация нефти, %

Штамм

Выделение СО, мг, при окислении нефти пара- аромафинис- тичестой кой парафинистой ароматической

P.puti

da 36

264,0 240,5 74,5 68,4

Составитель М. Ларина

Редактор В. Петраш Техред А.Вабинец КоРРектоР В. Бутяга

Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ. Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 651/23

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

P. aeruginosa 123 145,2 187,0 33,7 37,1

Как видно из таблицы, при практически равной скорости роста окислительная активность штамма P.puti.da 36 на неочищенной нефти значительно превосходит окислительную способность штамма P. aeruginosa 123. 25

Так, штамм P. putida 36 выделяет

446 4 при окислении парафинистой и ароматической нефтей соответственно 264,0 и 240, 5 СОу мг íà 100 г почвы, а штамм P ° aeruginosa 123-145,2 и

187,0 мг СО соответственно.

Данные таблицы показывают, что за 30 сут количество нефти, утилизированной штаммом P. putida 36, достигает 68,4-74,.5% от исходной, а штаммом P. aeruginosa 123 33,737,1% °

Таким образом, преимуществом предлагаемого штамма, P..putida 36 является способность расти даже на обедненной среде (можно использовать пластовую воду с минерализа-. цией не выше 10%), способность утилизировать парафин, нафталин, октан, гексан, бензол, толуол, ксилол, асфальтены, а также способность деградировать нефть и нефтепродукты с высокой скоростью при содержании нефти до 10% к объему загрязненного субстрата (почвы, воды), что позволяет испольэовать его при биологической очистке воды от нефти и почвы от остаточной замаэученности.