Способ получения антительного чумного диагностикума

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИТЕЛЬНбгО ЧУМНОГО У АГНОСТИКУНА путем гфедвзрительной обработки частиц кар ксйльного катионита с послелующей сенсибилизацией иммунным гамма-глобулином и отмыванием целевого пролукта, о т л ич а ю щ и и с я тем, что, с целью упрощения сп(Уеоба, п релварител ьную обработку частиц карбоксильного катионита осуществляют красителем нейтральным красным в соотношении tDO:1, затем раствором бйсульфитного аллукта полиакррлеина при рН

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ Н305РЕТЕ .И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬС Г9У 1С ° - д ч

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

flO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 3449301/13 (22) 22.06.82 . (46) 15.06.92. Бюл. Р 22 (71) Ростовский-на-Лону государственный научно-исследовательский противочумный институт (72) А.H. Наркевич, Е.В. Безуглова, А.П. Кочеткова, В.В. / ервоед, В.А. Козлова и В.Н. Иилютин (53) 6616-07(088. 8) (56) Имутер И.h., Басова Н.Н ., Кана-, тов,Р.В. Иеньшов П.И. Чумной эритроцитарный диагностикум. Нетод произ" водственного изготовления и определе; иия годности препарата. В с6. Иатериалы VI научной конференции противо=

-чумных учреждений Средней Азии и Казахстана, вып..1, Алма-Ата, 1969, с. 135-136.

Авторское свидетельство СССР

М 102103о, кл. А 61 t 39/395, 1980.

Изобретение относится к микробиоло" гии, в частности к серологическим методам лабораторной диагностики чумы..

Известен способ получения антительного чумного диагностикума путем пред" варительной обработки носителя с последующей .сенсибилизацией имунным гамма-глобулином и .отмыванием целевого продукта °

Однако получаемый диагностикум является недостаточно стабильным.

Наиболее близким по достигаемому результату является способ получения,5U 1085041 А1 (1)g А 61 к 39/395; А 61 к 39/44

2(Ф (57) спосоБ получения АнтительногО

ЧУИНпГО ДИАГНОСТИКУИА путемлредвари- тельной обработки частиц карбоксильного катионита с последующей,сенсибилизацией иммунным гамма-глобулимои и отмыванием целевого продукта, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью уп" рощенйя способа,: предварительную:обработку частиц карбоксильного катионита осуществляют красителем нейтральным красным. в соотношении 1ОО: 1, затем раствором бисульфитногь аддукта полиакролеина при рн 7-8, Q3 антительного чумного диагности кума, которйй заключается в том, что час- фь, тицы карбоксильного катионита обраба- ° тывают раствором.альбумина в течение

18 ч в соотношении 4: 1, затем связавшийся с катионитом белок денатурируют нагреванием взвеси в водном спирте АВИВ

О при 75 С, покрытые белком частицы полимера отмывают буйерным раствором и обрабатывают последовательно раство" рами глутарового диальдегида, после чего сенсибилизируют иммунным гаммаглобулином. Взвесь целевого продук-"

1085041 4 та в физиологическом растворе исполь= рительной.обработки частиц карбоксильзуют в серологических реакциях, ного катионита с последующей сенсиУказанный способ имеет ряд недос- билизацией иммунным .гамма"глобулином татков. активность диагностикума зави- и отмыванием целевого продукта предва5 сит от качества препарата.альбумина, рительную обработку частиц карбоксильобработка катионита альбумином длит- ного катионита осуществляют красителем ся 18 ч и включает стадию нагревания нейтральным красным в соотношении

В водном спирте. . . 100 . 1, затем раствором бисульфитного

Целью изобретения является упроще- 10 аддукта полиакролеина при рн 7-8. ние способа получения антительного Используемый бисупьфитный аддукт чумного диагностикума. полиакролеина образуется при раствореПоставленная цель достигается тем, нии попиакролеина в 10,>-ном водном что в способе получения антительного растворе двуокиси серы. Реакцию можно чумного диагностикума путем предва- 1 -представить следующим. образом

f. (СНГСН-С<0)Н вЂ” — Сн,-сн-сн(он)-яп,н

+ БО + Н Я-+

Диагностический препарат имеет та" мешивании прибавляют к суспензии 2 мл кую же чувствительность и специфич- О,ОЯ-ного раствора ..нейтрального красность, что и препарат, полученный по ного .(3-амино-6-диметиламино-2-метилизвестному способу. Это было установ- феназин гидрохлорид), перемешивают дено в одномоментной проверке препон- ; 15. мин,,центрифугируют и отмывают осаратов в равных условиях на одних и док 3 раза 5 мл дистиллированной воды. тех же бактериальных Взвесях. Оба пре". Полученный ярко-красный осадок отмыпарата обладали специФичностью и. не вают 3 раза 10 мл 0,2 И фосфатного давали перекрестных реакций при про", буфера (pH 7), суспендируют в 1 мл верке с гетерологичными штаммами (см. этого буфера, к смеси добавляют при таблицу). перемешивании 1 мл 5W-ного раствора

Однако предлагаемый способ получе" бисульфитного аддукта полиакролеина, 30 ния препарата более прост, процесс перемешивают 0,5 ч, центрифугируют и приготовления препарата содержит ме."., отмывают 10 мл 0,2 .)1 фосфатного 6уфенее трудоемкие операции (исключает pa c рп 7. Осадок суспендируют в 2мл обработку альбумином и процесс его де- этого же буфера и добавляют к взвеси натурирования на носителе), продолжи". 3> 5."10 кг чумного Иммуноглобулина в тельность его приготовления на 18 ч 0,2-0,1 мл Физиологического раствора. меньше. Суспензию перемешивают при комнатной

Кроме того, дополнительным преиму" температуре 0,5 ч, выдерживают 18 ч ществом получаемого продукта является при 4.С,затем отмывают трижды 10 мл то, что он окрашен и образует конт- 4© Физиологического Раствора центрифугирастную картину в серологических реак- рованием. Осадок суспендируют в 5 мл циях в отличие от препарата, получе ", физиологического раствора и эту взвесь ного по прототипу. Таким образом, по используют для серологических реакций. вышается демонстративность иммунологи

4% ческой реакции, что. облегчает учет и 4Ю . Il р и м е р 2. методика приготовРегистРацию ее РезУльтатоВ пРИ и и ль : ленив препарата, как в примере 1. но зовании данного диагнос™кума. используют 0,2 и ф ф и б ф

Пример 1. Частицы катионитв- (РН 7,5), в окрашенный носитель о

kPK-8П размером 2-5 мкм в количестве рабатывают 7,5g-ным раствором сернис-.

100 мг суспендируют в 10 мл Ою) " раст того адвукта полиакролеина в течение ора едкого натра в течение 2 ч, затем:, 40 мин, ц .нтриФугируют, осадок отмывают центМ рифугироввнием 10 мл дитиллированнои ления препарата, как в примере 1 но испОльзуют О 2)1 фоофатный буфер (РИ Я) . окрашенный носитель ОбрабатыВают

103 ным раствором сернистого пОлиакролеина в теч н 1

5 1085041 6

Методика постановки реакции.. на дне лунки .в вире компактного осад В лунках .полистироловых пластнн . ка или колечка ярко-красного цвета. готовят последовательные двухкратные . Лиагностикум позволяет выявлять с, разведения исследуемого материала на высокой чувствительностью как типичФивиологическом растворе. Контролb ные штаммы возбудителя чумы; выращен5 ные: лунки не содержат антигена. В. ные. при 28 и 37 С, так:и дефектные

o каждую лунку добавляют по 1,каплеi .. по одному и более антигенам. /гиагноссенсибилизированной полимерной суспен- тикум специфичен, перекрестных реакзии, пластинку тщательно встряхивают,, 10 ций с гетерологичными щтаммами (возоставляют. на 1,5-.2.ч, после чего про- - буритель. псевдотуберкулеза и .кишечно- -. изводят учет реакции:. При положитель:- . тифозное семейство бактерий) не лает ной реакции образуются агглютинаты:у результаты исследования препаратов равномерно выстилающие дно лунки. . : получаемых описываемым:и известным

При отрицательной реакции иммуносор- 15 способами приведены в таблице. бент, как.и.в контроле, собирается

"Активность диагностических препаратов (микробные клетки/мл)

»» 4 »»»»»ъ!

Штаммы возбу.-дителя чумы

Препарат, полученнйй по

Температу-: ра выращивания штаммов, С . о: способу-прототипу .; предла гаемому способу

»»»»»»»» »»»т»» э б

3 106 3-10t

6 10 6 .10

3 10 3 10 . 3.10 3; 1Î>

Ю

Корректор И. Зрдейи

Техред И.Иоргентал

»,Редактор

»

Заказ 2810 Тираж Подписное ааюИЙ государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101. ЕУ ..129-0

1300

5209

5190

5193

5195

5196

154

К-"1

1:7

1 290

1300

5209

5190

5193

5195

5196 154 К-1

556 0tten

5194 F((-) m (-) ЕУ1290 F((-) 556 Atten. 5194 F< (=) vW, E81290 F) f-) 1

Т, карганова

37

37

37

37

37

37

37

37: .37

37

28

28

28

28

28

28

28

37

37

37 .37 . 28 (-) 28

2,5 10

2,5 10 .5 .1 0

5 ° 10

5 10

5 104

5 ° l0

5 ° 10

2 ° 10

2 10

2 ° 10

4 10

2 105

8, 105

8 10 1,5 10

2 105

),5110

6 10

3 10 . 5 ° l0

5 10

104

5 10

5,105

5 --104

5 -10

5 10

5.10

5 105

5 105

5 ° 10

5 ° 105

4 105

2 -10

1,5 ° 104

1,5 10

3 10

2 ° 10

1,5-10

6.10

3 ° 10