Микрорефрактометрический способ определения числа живых и мертвых клеток
,1ф 11?04.=..
Класс ЗО11, 6
СССР с
I (1
Т
Бс!.: .си дт, „, ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Б. А. Фихман
МИКРОРЕФРАКТОМЕТРИЧЕСКИЙ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ЧИСЛА ЖИВЫХ И МЕРТВЫХ КЛЕТОК
Заявлено 18 апреля 1958 г. за 1Хе 597782/31 в Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Изобретением является способ подсчета живых и мертвых микробных клеток, основанный на применении аноптральной (усовершенствованной фазово-контрастной) микроскопии при исследовании материала при производстве бактерийных препаратов.
Для этого исследуемый материал погружается в иммерсионную среду, которой является очищенный гель желатины Показатель преломления среды должен быть равным показателю преломления протоплазмы живых клеток, при этом мертвые микробные клетки видны в виде сплошных ярко светящихся тел, а живые — в виде темных тел, окаймленных ярко светящимся ободком.
Способ осуществляется следующим образом.
Сухая очищенная желатина погружается в слабощелочную дистиллированную воду на несколько часов до полного набухания желатины.
Затем, осторожно подогревая, желатину растворяют, а для просветления ее к раствору добавляют яичный белок, и кипятят массу 10 мин.; образовавшиеся хлопья удаляют фильтрациеи или центрофугированисм расплавленной массы.
После установления нейтральной реакции просветленную и очищенную расплавленную желатину разливают по пробиркам и стерилизуют дробно текучим паром.
Для приготовления препарата расплавленную желатиновую массу наносят слоем в 0,2 ни на предметное стекло. Сразу же после застывания желатины на ее еще влажную поверхность наносят капельку исследуемой микробной взвеси и сверху, избегая образования пузырьков воздуха, накладывают покровное стекло.
Капиллярное присасывание покровного стекла к поверхности желатины способствует равномерному распределению материала по ее поверхности.
1! с045
Предмет изобретения
Микрорефрактометрический способ определения числа живых и мертвых клеток, отличающийся тем, что, с целью точного определения числа живых и мертвых клеток при исследовании живых вакцин, сухих бактериальных культур и при изучении влияния различных аген""-.и с; особность микроорганизмо —. исследуемый материал подГ:: г;",c:";ñïèè с использованием в качестве иммерс,.ь,... l; среды желытинсвогс Геля, приготовленного В такой- концентрации, чтобы его показатель преломления был равен показателю преломления протоплазмы живых клеток.
Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Редактор Н. С. Кауфман
14пформацнонно-издательский отдел.
Объем 0,17 п. л. Лак. 4877
Поди. к пен. 12.XI-58 г, Тираж б25 .. Цена 25 коп.
Типография Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, Петровка, 14.
Каждому виду микробов соотв IcTB) åò своя концентрация геля желатины. Кроме того, различные сорта желатины могут дать небольшое отклонение концентрации, что требует коррекции, устанавливаемой опытным путем.
При рассматривании в аноптральном микроскопе препаратов, приготовленных.по данному способу и содержащих живые и мертвые клетки, иммергированные в келатиновом голе соответствующей концентрации, на светлокоричневом фоне препарата видны ярко светящиеся мертвые клетки н живые клетки в виде «пустот», окаймленнь.х яркосветящимся тонким ободком.
