Способ получения средства,обладающего антидиуретическим действием

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО АНТИДИУРЕТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ , включающий обезжиривание задних долей гипофиза, экстракцию сырья, последующее осаждение балластных веществ с помощью раствора коллоидного железа и выделение целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, после лиофилизации экстракцию сырья осуществляют смесью этилового спирта и 4 М ацетатного буфера при их соотношении 3:1 и рИ 5,3, а при осаждении в экстракт дополнительно вводят раствор аммиака, полученную жидкую фазу отделяют фильтрованием, а осадок заливают раствором соляной кислоты, нагревают и поспе охлаждения в суспензию вновь добавляют раствор аммиака, выпавший осадок отделяют, а надосадочную жидё кость присоединяют к первоначальному фильтрату. (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

„„Я0„„111 126

А 61 К 35/30

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPb!TMA (21) 3525057/28-13 (») 17.12.82 (46) 15.09.84. Бюл. N - 34 (72) A.M.Áàðåíáîéì, С.Г.Гасанов, P.M.Êëèìàñ, А.А.Гендролис и Г.К.Коротаев (53) 615.361.814.3(088.8) (56) 1. Гуров В.А. и др. Справочник по производству органопрепаратов.

M., 1970, с. 64. (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО АНТИДИУРЕТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, включающий обезжиривание задних долей гипофиза, экстракцию сырья, последующее осаждение балластных веществ с помощью раствора коллоидного железа и выделение целевого продукта, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, после лиофилизации экстракцию сырья осуществляют смесью этилового спирта и 4 М ацетатного буфера при их соотношении 3:1 и рН 5,3, а при осаждении в экстракт дополнительно вводят раствор аммиака, полученную жидкую фазу отделяют фильтрованием, а осадок заливают раствором соляной кислоты, нагревают и посче охлаждения в суспензию вновь добав.ляют раствор аммиака, выпавший осадок отделяют, а надосадочную жидкость присоединяют к первоначальному фильтрату.

1113126

Изобретение относится к технологии производства медицинских препаратов, обладающих антидиуретическим свойством и может быть использовано на предприятиях медицинской и мясомолочной промышленности при производстве лекарственных средств из животного сырья, а получаемое в результате применения изобретения лекарственное средство может быть использовано в лечебно-профилактических учреждениях.

Известен способ получения средства, обладающего антидиуретическим действием, включающий обезвоживание ацетоном замороженных задf них долей гипофиза, экстракцию р створом уксусной кислоты, депротеинизирование экстракта обработкой раствором коллоидного железа и двууглекислого натрия, отстаивание экстракта, фильтрование и установление рН 3,5 добавлением 2н. раствора соляной кислоты, после чего экстракт упаривают с установлением в нем рН 6,5 с помощью 10 -ного раствора едкого натра °

Биологическая активность полученного средства 0,25 МЕД + О,! в

1 юг (1).

К недостаткам известного способа получения препарата адиурекрина относятся плохая растворимость порошка адиурекрина наличие в порошке большого количества балластных веществ, трудность дозирования и применения препарата в медицинской практике. г

Кроме того, при использовании порошка адиурекрина имеют место раздражение слизистой носа и другие нежелательные реакции. Выход конечного продукта адиурекрина сопровождается низкой биологической активностью.

Цель изобретения — повышение выхода целевого продукта.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения средства, обладающего антидиуретическим действием, включающему обезжиривание задних долей гипофиза, экстракцию сырья, последующее осаждение балластных веществ с помощью раствора коллоидного железа и выделение целевого продукта, после лиофилизации экстракцию сырья осуществляют смесью этилового спирта и 4 И ацетатного буфера при их соотношении 3:1 и

10 t5

55 рН 5,3, а при осаждении в экстракт дополнительно вводят раствор аммиака, полученную жидкую фазу отделяют фильтрованием, а осадок заливают раствором соляной кислоты, нагревают и после охлаждения в суспенэию вновь добавляют раствор аммиака, выпавший осадок отделяют, а надосадочную жидкость присоединяют к первоначальному фильтрату.

Пример. 1 Kl лиофильно высушенных задних долей гипофиза заливают смесью этилового спирта (2,4 л) и 4 М раствором ацетатного буфера рН 5,3 (0,8 л). Соотношение спирта и ацетатного буфера 3:1. Полученную массу пропускают через волчок, В реактор предварительно вносят

15 л этилового спирта и 5 л 4 M ацетатного буфера. Смесь перемешивают в течение 3 ч при 25ОС. Полученную суспензию обрабатывают на сепараторе, отделяя жмых от прозрачного экстракта.

Осаждение. К 2 л полученного экстракта при перемешивании добавляют

40 л этилового спирта. Перемешивание продолжают 15 мин и оставляют на

2 ч при 0 С. Прозрачную надосадочную жидкость декантируют, а нижний слой центрифугируют либо пропускают че рез сепаратор. Полученный осадок .промывают на нуч-фильтре, а затем сушат ацетоном и спиртом.

Последующая сушка осуществляется в вакуум-сушильном шкафу при 40 С

P в течение 30 мин. Выход сырца составляет 500 r из 1 кг сублимированных гипофизов с биологической активностью 12 МЕ/мг.

0,5 кг сырца с биологической активностью 12 ИЕ растворяют в 12 л

0,1 .-ного растворе уксусной кислоты, перемешивая его при подогревании о до 80 С. Такую температуру поддерживают в течение 1 ч. Далее температуру снижают до 20 С. Для освобождения экстракта от белка к охлажденному раствору добавляют 37 л воды и 15 л 1О -ного раствора коллоидного железа и доводят рН раствора до . б,б 12 -ным раствором аммиака. Выпавший осадок отделяют с помощью бумажного фильтра, а раствор собирают в емкость. Отделенный осадок коллоидного железа вместе с фильтратом переносят в экстракторный аппарат и заливают 30 л 0,1 н. з 1113 раствора соляной кислоты при одновременном подогреванин до 80 С в течение 16 мин, а. затем охлаждают до 30 С (15 мин), В суспензии устаЬ навливают РН 6,5 путем добавления

12Х-ного раствора аммиака.. После установления нужного РН в суспензии осадок отделяют, а надосадочную жидкость присоединяют к первоначальному фильтрату. Полученный осадок ip повторно помещают в емкость и дважды обрабатывают, как описано (2,5 ч), после чего образуется высококонцентрированный раствор. Фильтраты объединяют и доводят РН до 3,5. Биологическая активность такого концентрированного раствора составляет

60+10 МЕ/мл. Данный раствор разбавляют дистиллированной водой, консервируют нипагином, фильтруют и разливают в полиэтиленовые флаконы емкостью 1,5 мл с биологической активностью 20 и 40 МЕ/мл.

Биологическую активность конечного продукта определяют двумя мето- 25 дами: методом определения биологической активности по вазопрессорному эффекту на белых беспородных крысах массой 250-300 г. основанным на способности вазопрессина, содержащегося в препарате, повышать уровень артериального давления (испытания приведены в сопоставлении с Международным стандартом B03); методом определения биологической активности

35 по способности препарата задерживать диурез у белых крыс с водной нагрузкой по сравнению с контрольной группой животных, которым не вводился испытуемый препарат.

Результаты исследований антидиуретической активности средств, полученных известным и предлагаемым способами. проведенных через 5 ч после водной 4 нагрузки (10 мл физиологического раствора в/бр.) представлены в таб126 лице (в 1 мл 20 Ед, животным вводят по 0,02 Ед/100 r массы тела).

Предлагаемый способ получения антидиуретического препарата дает возможность использовать конечный продукт в более удобной лекарственной форме, в виде носовых капель, а не в виде "понюшек".

Примером практической Реализации предлагаемого способа является новая технология получения лекарственного препарата, которая предусматривает экстрагирование биологически активных веществ (нейропептндов) в раствор, который стандартизируется и может использоваться в,медицинской практике в виде носовых капель по следующей прописи: концентрированный раствор стандартизованного целевого продукта 35 мл (2000 МЕ); нипагин (консервант) 100 мг; дистиллированная вода до 100 мл.

Полученный раствор разливают во флаконы до 1 мл с 20 ME или 40 МЕ/мп.

При приготовлении раствора с

4С МЕ/мл целевой продукт в данной прописи удваивается. Предлагаемый способ обеспечивает получение антидиуретического средства с большим выходом

Практическое внедрение предлагаемого способа в производство способствует получению эффективного лекарственного средства для медицинской практики. Эффективность предлагаемой технологии выражается в удешевлении технологического процесса получения препарата за счет увеличения выпуска готового лекар» ственного средства более чем в

1,5 раза по сравнению .с адиурекрином. Удешевление технблогического процесса составляет 607. от прототипа и исключает необходимость в выпуске трудноиспользуемого и малоэффективного лекарственного препарата адиурекрина в порошке.

1113126

Количество выделенной мочи

Характер воздействия

Количество животных мл ддиурекрин

7,5

Контроль

6,8

Опытная

Контроль

6,3

Опытная

8,3

Контроль

6,5

Опытная

Средство, полученное предлагаемым способом

Контроль

Опытная

Контроль

Опытная

8,1

Контроль

4,5

Опытная

Составитель В.Брусиловская

Редактор Т.Колб Техред М.Надь

Корректор Ю.Макаренко

Подписное

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Заказ 6488/6 Тираж 687

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5