Способ получения ферментного препарата нигедазы

 

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА НИГЕДАЗЫ из семян /7ff /Sff/30А 1 ffO, {{ 90il 70. 50чернушки дамасской (NigeE a damasceena L.) путем измельчения сырья,обработки его ацетоном и экстракции фермента из полученного ацетонового порошка водным раствором аммиака с по. следующей лиофилизацией целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью увеличения активности препарата, семена предварительно выдерживают при 35-39 С в воде при соотношении 1:

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

ИАИР

РЕСПУБЛИК

sag С 12 N 9/18

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬГГИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ЯВОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Уфв

i (21) 3526693/28-13

{22) 03.12.82 (46) 15.10.84.Бюл. Ф 38. (72) В.Ф.Рудюк, Л.Н..Корчагина и В.Т.Чернобай (71) Харьковский научно-исследовательский химико-фармацевтический институт (53) 577.15.07(088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР

М 271472 кл. С 12 Н 9/20, 1968.

2. Авторское. свидетельство СССР

h» 440406, кл. С 12 С 7/026, 1972. (54)(57) 1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРИЕНТНОГО ПРЕПАРАТА НИГЕДАЗЪ| из семян

/70

CFJ79$P

Елавасть

1Ю IN ЯО 250 ХЮ Ng

За5иеиисииь липааипичесяй акаибносаи ат еемпературы акаи5ации (а) и длщкиасаа(а/

Фиг.1 ф 150 г ф Q0

%ю

«О î 4,50,SU„„4 А чернушки цамасской (Nige22a damasceena L.) путем измельчения сырья,обработки его ацетоном и экстракции фермента из полученного ацетонового порошка водным раствором аммиака с по следующей лиофилизацией целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью увеличения активности препарата, семена предварительно выдерживают при 35-39 С в воде при соотношении 1:(2-3) в течение суток..

2. Способ по п.1, о т л и ч а юшийся тем, что при. зкстракции используют водный раствор аммиака с рН 9,5-11,5.

f 111867

Изобретение относится,к ферментной промышпенности, технологии получения растительных ферментных препаратов, в частности к получению из семян чернушки дамасской ((Nigeria da5

mascena I .) растительного ферментного препарата липолитического действия (нигедаза), и может найти применение как в медицине, так и в других отраслях (пищевая, фармацевтическая промышленность, сельское хозяйство, научно-исследовательские работы по биохимии) .

Известны способы получения фермен» тов липолитического действия из сырья 15 животного происхождения (1).

Наиболее близким к предлагаемому . является способ получения ферментов препарата нигедазы из семян чернушки дамасской (Nigelka damascena L), согласно которому сухие семена измельчают, обрабатывают ацетоном, экстрагируют водным раствором аммиака (с рН 9-10), изменяют рН от щелочного до кислого значения и наоборот, удаляют баластные белки центрифугированием, осаждают липазу сульфатом аммония, растворяют осадок, диализируют и лиофилизируют. Выход препара- . та липолитического действия, получен«

ЗО ного этим методом, составляет 7%, липолитическая активность - 55 000 ед/г (по оливковому маслу) Е23.

Однако укаэанный способ характеризуется недостаточно высокой активностью препарата.

3S

Целью изобретения является увеличение активности препарата.

Укаэанная цель достигается тем, что согласно способу получения ферментного препарата нигедазы из семян чернушки дамасской (Nigella damaseena L) путем измельчения сырья, обработки его ацетоном и экстракции фермента из полученного ацетонового порошка водным раствором аммиака с посНедующей лиофилизацией целевого продукта, семена предварительно выдерживают при 35-39 С в воде при соотношении 1:(2-3) в течение суток.

При экстракции используют водный раствор аммиака с рН 9,5-11,5.

На фиг.1 приведена зависимость липолитической активности .от температуры активации и влажности; на фиг.2то же, от величины рН экстрагента.

Липолитическая активность конечного продукта значительно возрастает при введении в технологическую

3 З схему стадии активации, заключающейся в создании оптимальных условий температуры и влажности. Результаты исследований показали, что таковыми являются температура 35-39 С и влажность 200-300Х (фиг.1). Применение экстрагирующего агента с рН 9,5-11,5, дистиллированной воды, подщелоченной аммиаком, способствует повышению липолитической активности (фиг.2).

Предложенный способ позволяет увеличить липолитическую активность препарата в 2-3 раза.

Нигедаза представляет .собой порошок темно-бурого цвета, растворимый в воде, обладает выраженным липолитическим действием, которое характеризуется способностью расщеплять природные жиры и масла (кукурузное, подсолнечное, хлопковое, абрикосовое, льняное, оливковое масло и свиной жир).

При 200Х влажности липолитическая активность составляет (фиг.1)

110 тыс.ед./г, что соответствует требованиям нормативно-технической документации. Повышение влажности свыше 300 нецелесообразно, так как далее липолитическая активность находится на одном уровне с липолитической активностью при влажности

300 .

Экстракцию ферментного препарата можно проводить экстрагентом с рН 9,511,5,так как в интервале этих величин липолитическая активность нигедазы составляет 115-110 тыс.ед/г, с оптимумом при рН 10-11 (140-150 тыс.ед/г).

Пример 1. 100 r воздушно-сухих семян чернушки дамасской заливают водой 35 С в соотношении 1:2,0 (200 влаги) и оставляют на сутки в термостате при той же температуре для активизации. По истечении суток избыточную влагу удаляют, а активированные семена измельчают на вальцах.

Измельченные семена обрабатывают охлажденным ацетоном в соотношении

1:3 (по объему) в течение 30 мин.

Ацетон удаляют.

Из измельченных семян экстрагируют нигедазу дистиллированной водой, подщелоченной аммиаком до рН 9,5 (по весу). Продолжительность активации 30 мин.

Полученное извлечение, содержащее нигедазу, отделяют от шрота центрифугированием, стабилизируют сахарозой (О, 1 г сахарозы на t.ë воды) и высушивают лиофильно.

Липолитическая активность нигедазы 110 000 ед/г.

Выход препарата нагедазы 8,2 r.

Пример 2. 100 r воздушно"сухих семян чернушки дамасской заливают водой 37 С в соотношении 1:2,5 (250X влаги) и оставляют на сутки в термостате при той же температуре 10 для активации. По истечении суток избыточную влагу удаляют, а активизированные семена измельчают на вальцах.

Измельченные семена обрабатывают 15 . охлажденным ацетоном в соотношении

1:3 по объему в течение 30.мин. Ацетон удаляют . Из измельченных семян экстрагируют нигедазу дистиллирован, ной водой, подщелоченной аммиаком до 20 рН 10,5 (по весу). Продолжительность экстракции 30 мин..

Полученное извлечение, содержащее нигедаэу, отделяют от шрота центрифу- 25 гированием, стабилизируют сахарозой (О, 1 г сахарозы на 1 л воды) и высушивают лиофильно.

1118673 4

Липолитическая активность нигедазы 150 000 ед/г.

Выход препарата нигедазы 8,7 r.

Пример 3. 100 г воздушно-сухих семян чернушки дамасской залива» ют водой 39 C в соотношении 1:3 (ЗООХ влаги) и оставляют на сутки в. термостате при той же температуре для активизации. По истечении суток избыточную влагу удаляют, а активированные семена измельчают на вальцах.

Измельченные семена обрабатывают охлажденным ацетоном в соотношении

1:3 (по объему) в течение 30 мин.

Ацетон удаляют..

Из измельченных семян экстрагиру- . ют нигедазу дистиллированной водой подщелоченной до рН 11,5 (по весу).

Продолжительность экстракции 30 мин.

Полученное извлечение, содержащее ! нигедазу, отделяют от шрота центрифугированием, стабилизируют сахарозой (О, 1 r сахарозы на 1 л воды) и высушивают лиофильно.

Липолитическая активность нигедазы 130 000 ед/г.

Выход препарата нигедазы 8,5 г. 150

ЛО л Ж

Уд

Ю

Ю ъ ь 50 ь рН

8 У N 1 I2

Зобисимосмь .ли м лиг ижсмюй отр и8ности рт Велцюиивг рФ эясР7Р)0 43еен ФтРсй