Способ получения гаммаглобулина

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГАММА-ГЛОБУЖНА путем выделения его из крови человека, отличающийся тем, что, с целью повышения специфической активности иммуноглобулина, к вирусу гепатита А, целевой продукт получают из сыворотки доноров, переболевших гепатитом А, не содержащий НВз-антиген, при этом забор крови осуществляют через 4-5 мес после выздоровления. (П

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (19) (11) А

-3151) А 61 В 10/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТЙРЫТИЙ

grp,,ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3561611/28-13 (22) 12.01.83 (46) 1>5.12.84. Бюл. М 46 (72) А.Ф.Фролов, В.А.Степанчук, Л.Ф.Шевченко, С.В.Горошников, Л.Г.Опанасюк, В.M.Ñòàêàíoâà и К.А.Лобунец (71) Киевский научно-исследовательский институт эпидемиологии и инфекционных болезней им.Л.В.Громашевского (53) 615.373(088.8) (56) 1. Ныгисте А.К., Мяртин Я.К .

Итоги профилактики вирусного гепатита гамма-глобулином в Эстонской

ССР. — В кн. Вирусные гепатиты. Рига, РИИ, 1981, 42-46. (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГА 1ИА-ГЛОБУЛИНА путем выделения его из крови человека, отличающийся тем, что, с целью повышения специфической активности иммуноглобулина. к вирусу гепатита А, целевой продукт получают из сыворотки доноров, переболевших гепатитом А, не содержащий

НВ>-антиген, при этом забор крови осуществляют через 4-5 мес после выздоровления.

11289

Изобретвние относится к медицине, а именно к методам профилактики гепатита А.

Известен способ получения гаммаглобулина путем выделения его из крови человека (1) .

Однако этот способ не позволяет получить достаточно специфический иммуноглобулин к вирусу гепатита А.

Целью изобретения является повыше- 10 ние специфической активности иммуноглобулина к вирусу гепатита А.

Указанная цель достигается тем, что в способе получения гамма-глобулина путем выделения его из крови l5 человека, целевой продукт получают из сыворотки доноров, переболевших гепатитом А, не содержащий ИВ -антиген, при этом забор крови .осуществляют через 4-5 мес. после выздоровле- 20 ния.

Способ выполняется следующим образом.

Гамма-глобулиновая фракция выделяется методом Кона из крови специ- 25 ально отобранных доноров — лиц, переболевших гепатитом А (данное сырье ранее не использовалось) и не имеющих НВ :.антигена по данным высокочувствительных методов (РИА, 30

РОПГА) .

Гипериммунный человеческий специфический иммуноглобулин с высоким титром антител против вируса гепатита А получен из веновной крови доноров, ранее переболевших этой инфекцией, но не.ранее, чем через

180-200 дней с момента клинического проявления болезни. Сыворотка была свободна от НВ -антигена. Уровень 40 специфических антител против вируса гепатита А 1:1 500, определяемых

; радиоиммунным методом

Поинципиальная схема получения препарата: подбор доноров, переболев-45 ших гепатитом А, и лаббраторное обследование их на наличие НВ -антигена (РОПГА, РИА); заготовка плазмы крови для получения препарата и его производство (метод Кона); контроль физи- 50 ко-химических свойств препарата и определение его специфической активности; определение реактогенности и безвредности препарата на добровольцах. 55

Каждый донор, у которого проводился забор крови для получения высокоиммунного препарата против вируса

13 2 гепатита А, прохопил тщательное клинико-лабораторное обслепование пля определения его состояния зпоровья и установления пригодности его сыворотки пля конструирования специфического человеческого иммуноглобулина, Причем сыворотки крови не должны содержать

НВ -антиген (маркер гепатита В), а наличие прямого билирубина должно быть нормальным.

Остальные биохимические показатели, при которых функция печени считается восстановленной, не должны превышать верхней границы нормы: содержание сахара в крови не более

120 MIX, уровень общего билирубина

1,1 мгХ, тимоловая проба — 2-3 ед, бета-липопротеидов — 10 ед, активность аланинтрансферазы — 0,7 мкмоль с учетом нормальных показателей -крови и мочи. Только такого донора сыворотка крови пригодна для получения иммуноглобулина против вируса гепатита А.

В полуфабрикате до розлива препарата проверяли: рН вЂ” потенциометрически, содержание белка — рефрактометрически. В готовом препарате определяли: физические свойства, стерильность, безвредность, пирогенность, наличие белка и НВ -антигена и специфическую активность, -которые проводили общепринятыми методами исследования (паспорт на препарат).

Пример 1. Специфический гамма-глобулин с высоким титром антител против вируса гепатита А был получен следующим образом: Больной С., 18 лет находился в инфекционном стационаре по поводу гепатита А. Диагноз был поставлен на основании клинико-эпидемиологических и специфических лабораторных исследований. Через 5 мес. после выписки из стационара у него была получена кровь в количестве

250 мл для конструирования специфического гамма-глобулина против гепатита А. Специально проведенные лабораторные исследования показали, что в исходном сырье (плазма крови) отсутствовал поверхностный антиген вируса гепатита  — НВ -антиген (РОПГА,РИА),а титр антител к вирусу ге.патита А был равен 1:1 600 (РИА),.

Из данной плазмы крови с помощью стандартного метода Кона при низких температурах была получена гаммаглобулиновая фракция (2 фракция) 1128913 б

10 -ного раство- Полученный гамма-глобулин. в опытах против вируса на добровольцах показал себя как (РИА). ареактогенный и безвредный препарат.

3 в количестве 4,5. мл ра с титром антител гепатита А 1:16 000

Аналитический паспорт на гипериммунный человеческий специальный иммуноглобулин против вируса гепатита А:

Показатели

Прозрачный, бесцветный

Физические свойства (прозначность, цвет) Величина рН

7,26

Электрофоретическая чистота

97,8Х

Стерильность

Стерильный

Апирогенен

Пирогенность

Стабильность

Стабилен

Безвредность

Безвреден

Не .токсичен

Токсичность

10Х

Количество, содержание белка

1. 16 000

Титр специфических антител против вируса гепатита А, определяемых радиоиммунным методом

Не содержит

Наличие НВ - антигена

Таким образом, полученный вперные гипериммунный человеческий специфический иммуноглобулин против вируса гепатита А согласно проведенным исследованиям отвечает требованиям

ХРТУ-42..

Убедившись в том, что полученный иммуноглобулин отвечает требованиям

ИРТУ»42 и свободен от НВ>-антигена, изучили впервые его реактогенность и безвредность на добровольцах сог- ласно приказу,МЗ СССР И 616 от

27 августа 1971 г. (20 человек). у

Контролем служили 50 лиц, которым по единой методике был введен коммерческий нормальный гамма-глобулин.

По возрасту и полу обе группы были идентичны (мужчины, 18-22 лет) .

Техника введения гипериммунного человеческого иммуноглобулина и контрольного препарата была следующей.

Перед введением препарата каждую ампулу тщательно просматривали. При наличии трещин, посторонних включений„ неразбивающихся хлопьев, сильной мутности препарат не применялся.

Препараты после хранения в холодильнике в течение 120 мин .выдерживались при комнатной температуре. Затеи ампулы вскрывались, предварительно

1128913

Релактор М. Товтин Техред — 3. Палий

Корректор А. Тяско

Заказ 9268/4 Тираж 687 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий .

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5.."пал ППП "Патент", г. Ужгород, уп. Проектная, 4

Ф протирали их стерильной ватой, смоченной спиртом.

Перед основным опытом предварительно у всех прививаемых была изучена чувствительность к вводимому 5 препарату путем введения 0,1 мл

1Х-ного водного раствора гипериммунного человеческого иммуноглобулина против вируса гепатита А внутрикожно в область нижней 1/3 внутренней 1О поверхности предплечья.

Результаты этих испытаний пдказали, что у лиц опытной и контрольной группы через 30 мин наблюдения были обнаружены папулы от 0,5 см без нали- 15 чия разлитой гиперемии кожи вокруг места введения препарата и повышения температуры, что свидетельствовало о том, что все добровольцы не обладали повышенной чувствительностью на введение препарата.

После этих испытаний через 30 мин внутримышечно в верхний наружный квадрант ягодины с соблюдением строжайших мер асептики шприцами одноразового пользования производства Ленинградского завода медицинских полимеров типа "Рекорд", вводили

1 мл испытуемого препарата, а лицам контрольной группы — нормальный . ЗО человеческий гамма-глобулин Киевского предприятия бакнрепаратрв N3. СССР.

На каждого наблюдаемого заводился специально раЗработанный "Дневник наблюдения". Учет реакций среди имму-3g низированных и контрольных лиц начинали через 0,5,1,2,3,4 часа, а затем ежедневно на протяжении 151 дня.

Данные испытаний обобщались путем сопоставления результатов клиниче- 40 ского осмотра, опроса и биохимическоно исследования как среди иммунизированных специфическим препаратом, так и нормальным гамма-глобулином.

Для оценки безвредности препарата 4 перед испытанием у всех добровольцев, а затем через каждые 20 дней наблюдения в динамике проводился общий анализ крови и мочи. Кроме того, параллельно проводились биохимические исследования, используемые для определения функционального состоянйя печени: активность аланинаминотрансферазы, наличие билирубина в сыворотке крови и тимоловая проба. В испытаниях принимали участие только здоровые лица, не имеющие никаких противопоказаний к применению гипериммунного человеческого специфического иммуноглобулина против вируса гепатита А.

В результате проведенных исследований установлено, что новый препарат с высоким титром специфических антител (1: 1 6 .000) к .вирусу гепатитаА не обладает реактогенными свойствами, Наблюдениями, проведенными в первые 4 ч после введения данного препарата, а затем ежедневно на протяжении 151 дня не выявлено каких-либо патологических явлений у иммунизированных лиц.

Безвредность и реактогенность полученного гипернммуного человеческого специфического иммуноглобулина изучена впервые и документирована как специфическими лабораторными исследованиями на НВ>-антиген, так и различными биохимическими тестами (активность аланинаминотрасфе" разы, наличие билирубина в сыворотке крови, положительная тимоловая проба) у всех наблюдаемых лиц.

Следовательно, полученные результаты характеризуют отечественный гипериммунный человеческий иммуноглобулин против вируса гепатита.А. с содержанием антител 1:16 000 как ареатогенный, безвредный и высокоиммунный препарат, который может быть использован для профилактики ч лечения. данной инфекции.