Штамм @ @ @ @ 1148/69/7/,используемый в качестве тест- объекта для индикации бактериофагов

 

Штамм Bacillus thuringiensis var.galleriae 1148/69/7/,ЦЙПМВ-2605 (Центральный музей промышленных мик-/ роорганизмов института ВНИИгенетика ), используемый в качестве тестобъекта для индикации бактериофагов.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

РЕСГ1УБ ЛИК

09) (11) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТЮ (21) 3605514/30-13 (22) 18.04.83 (46) 07.02.85. Бюл. В 5 (72) А.А. Иихайлов, С.Г. Бесаева, Е.В. Быстрова, A.È. Кузин и Е.Л. Жиленков (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии (53) 576.8.094(088.8) 4(51 С 12 N 1/00 // С 12 Н 7/00 (54) ШТАМИ BACILLUS THURINGIKNSIS UAR. GALLERIAE 1148/69/7/, ИСПОЛЬЗУЕИЬФ В КАЧЕСТВЕ ТЕСТ-ОБЪЕКТА ДЛЯ

ИНДИКАЦИИ БАКТЕРИОФАГОВ. . (57) Штамм Bacillus thuringiensis

var. gal1eriae .1148/69/7/, Ц)й1ИВ-2605 (Центральный музей промышленных мик-l . роорганизмов института "ВНИИгенети.ка"), используемый в качестве тестобъекта для индикации бактериофагов.

1138409

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и касается индикаторного штамма Bacillus

thuringiensis, используемого для. обнаружения умеренных бактериофагов, вьделяемых-лизогенными культурами того же вида — продуцентами инсектицидных препаратов.

Аналогов в патентной и научноисследовательской литературе не обна- 10 ружено.

Цель изобретения — штамм Bacillus

thuringiensis, который может быть использован в качестве тест-объекта для индикации .бактериофагов произ- 15 водственных штаммов вида Bacillus

thuringiensis.

Эта цель достигается с помощью штамма Bacillus thuringiensis var.

galleriae 1148/69/7/. 20

Штамм получен из культуры Bacillus thuringiensis var. galleriae

69/6 путем последовательной обработки вегетативной культуры нитроэогуанидинбм и бромистым зтидием и 25 отбора аспорогенного клона, устойчивого к антибиотикам, рифампицину и стрептомицину.

Штамм Bacillus thuringiensis

var. galleriae 1148/69/7/ хранится в 30

Центральном музее промьппленных микроорганизмов института "ВНИИгенетика" под номером ЦМПМ В-2605 и характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические приз-З наки. На среде MIIA образует плоские колонии светло-серого цвета, с ровным или слабо изрезанным краем, 3 — 5 мм в диаметре, легко снимающиеся с агара. 40

На среде ДПС (дрожжи 30 г, кукурузная мука 15 г, агар 20 г, вода.1 л) образует плоские колонии, серые, матовые, 3 — 5 мм в диаметре.

На среде Р В3, содержащей 8 г/л питательной среды, 3 г/л дрожжевого экстракта, 20 г/л агара (все компоненты фирмы "Дифко"), с рН 7,3 колонии плоские, полупрозрачные, 5 мм в диаметре, мягкой консистенции.

На полусинтетических средах, содержащих, г/л: MgSO 0,2; СаС12 0,05; агар 20; Н О 1 л и в качестве органического компонента пептон 20 г/л или триптон 20 г/л или каэеин 20 г/л, с рН 7,4 колонии плоские, матовые, округлые 1 — 5 мм в диаметре °

На жидких полусинтетических средах и на мясопептонном бульоне рост культуры равномерный по всему объему среды, сплошной без планки или хлопьев.

Оптимальные параметры роста при рН 7,2 - 7,4 и t = 28 С. Форма -клеток палочковидная, клетки одиночные или в цепочках, окраска по Граму положительная, по Н-антигену культура относится к М сероварианту. Спор и кристаллов не образует.

Физиолого-биологические признаки. Молоко пептонизирует без коагуляции, на агаре с крахмалом зона гидролиза

8,5 мм, пигмент не образует — обладает лецитиназной активностью. Усваивает глюкозу, маннозу, мальтозу, целлобиозу. Активен по отношению к салицину и эскулину. Нитраты не восстанавливает.

Штамм чувствителен к вирулентным бактериофагам Bacillus thuringiensis (26 бактериофагов) и к умеренным бактериофагам штаммов,Bacillus thuringiensis 1, 111, 1У и У серовариантов.

Использование штамма для индикации бактериофагов,спонтанно выделяемых производственными культурами Ba,cillus thuringiensis, показано на примерах 1 — 3.

Пример 1. Исследуемую и.индикаторную культуры пересеевают с чашки Петри в.мясопептонный бульон и инкубируют на качалке 220 об/мин при 28 С в течение 4 — 6 ч.

В чашки Петри разливают по 25 мл среды МПА (2Ж агара), содержащей

50 мкг/мл рифампицина, после застывания агара чашки подсушивают 3 — 4 ч .

В пробирки разливают по 3 мл среды

МПА (0,77 агара), выдерживают на водяной бане при 45 С, вносят по

0,2 мл 4 — 6-ти часовых культур исследуемого и индикаторного штаммов, содержимое пробирок выливают в чашки ,Петри на поверхность среды МПА с антибиотиком. Опыт проводят с двумя контролями: в пробирку с расплавленным и охлажденным до 45 С мягким агаром вносят 0,2 мл 4 вЂ, 6-часовой индикаторной культуры, содержимое выливают в чашку Петри на поверхность среды МПА с рифампицином; в пробирку с расплавленным и охлажденным до

45 С мягким агаром вносят 0,2 мл 4—

3 1138409 4

6-часовой исследуемой культуры, со- тика рифампицина на стрептомицин держимое выливают в чашку Петри на . (250 ед/мл). поверхность среды ИПА с рифампици- Пример 3.. Опыт проводят ана ном. логично примеру 1, но без использоОпытную и контрольные чаши инкуби- вания антибиотика. Культуру исследуеруют при 28 С 16 ч. В контрольной мого штамма центрифугируют при чашке с индикаторной культурой обра- 8000 об/мин в течение 15 мин и титзуется бактериальный газон. В конт- руют супернатант. Учет результатов рольной чашке с посевом исследуемого проводят аналогично примеру 1. штамма среда остается прозрачной. На io опытной чашке на фоне газона индика- Использование штамма позволит весторной культуры видны негативные ко- ти контроль титра фаговых частиц в лонии бактериофага. различных условиях выращивания, опреПример 2. Опыт проводят ана- делить стабильность лизогенного сослогично примеру 1 с заменой антибио- g тояния штаммов.

Составитель Г. Смирнова

Редактор И. Дербак Техред М.Надь Корректор А. Обручар

Заказ 10634/18 Тираж 525 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, ?москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,,4